<ol style="list-style-type:upper-alpha;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת הנגע רפאים (פנטום להכין כ -38 עד 48 שעות לפני הפגישה תרגול בפועל של מיומנות FNA (איור 1) או לנצל מוכן לשימוש &quot;AV פנטום&quot; מהמקור FNA, ארה&quot;ב. הנגע רפאים (מאוחסן תחת קירור ללא הקפאה) עשוי להיות כל הזמן מוכן אפילו 3 עד 4 ימים לפני הפגישה בפועל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרגול מיומנות FNA: למרות שאנחנו הוכיחו את ההליך באמצעות THFV Shidham של (רקמה המורכבת עם Valve פונקציונלית) (מקור FNA, ארה&quot;ב), מערכת אחרת FNA עשוי לשמש לתרגול (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפצת ועיבוד לשאוב בשקופיות זכוכית (איור 3). </li></ol> חומר נדרש <ol style="list-style-type:lower-alpha;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה גומי סיליקון קולק, זמין ב בנייה / home חנויות רבות לשיפור. מותגים רבים זמינים כולל DAP GETM, השד האדום, הברק הלבן, המותגים ואת שרשרת המקומית. השתמשנו גומי סיליקון שקוף, מוצרים הברק הלבן, קליבלנד, אוהיו, ארה&quot;ב, <a href="http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html">http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html</a> ) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איטום אקדח </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתיכת סדין בניילון נצמד (השתמשנו בפלסטיק תיאחז פלוס לעטוף, SC Johnson &amp; Son Inc, רסין, וויסקונסין, ארה&quot;ב <a href="http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp">http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp</a> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כפפות לאטקס </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בננה קוטר רחב או נקניק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשרד ושטוח צלחת הבסיס (כ 6 ס&quot;מ X 6 אינץ&#39;) עשוי לעלות כרטיס עבה, הצלחת אקריליק, או אחרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע FNA ציוד <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 25 המזרק מד מחטים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Shidham של THFV (או רכיבים אחרים לביצוע FNA) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקופיות הזכוכית </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכתים ערכות </li></ul></li></ol> שלב אחר שלב הפרטים א הכנת הנגע רפאים (פנטום להכין 1-2 ימים לפני תרגול מיומנות FNA (איור 2) או לנצל מוכן לשימוש &quot;AV פנטום&quot; מהמקור FNA, ארה&quot;ב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזור 6 X 6 אינץ&#39; גודל לתמוך הלוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזור קטע ארוך של 2.5 אינטש &#39;הליבה רפאים הנגע &quot;(בננה או נקניק). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרש 0.5 שכבה בעובי של סנטימטר של קולק על צלחת הבסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחצו על &quot;פנטום הליבה הנגע&quot; קלות לשכבה זו של קולק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף קולק יותר על &quot;הליבה הנגע רפאים&quot;, כך שהוא מוטבע לחלוטין התל של קולק, ללא השמנה בועות אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם ולעצב את קולק על &quot;הליבה רפאים הנגע&quot; עם יד בכפפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קחו 6 X 6 חתיכה בגודל סנטימטר בניילון לכסות את התל קולק ולהתאים את פני השטח של התל לתוך תצורה קמורה חלקה ביד, נקי בכפפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תנו לרפא התל קולק במשך 6-8 שעות יותר מהזמן ריפוי מוזכר תחת ההוראות של המוצר, (בדרך כלל 24 שעות), במקום חמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ריפוי, קולק צריך להיות תקיף, ואת בניילון נצמד ניתן התקלף בקלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנגע רפאים FNA הוא מוכן לשמש לתרגל את ההליך FNA לאחר כ 8 שעות, כאשר התל שלם של קולק ריפא לחלוטין למרכז המכיל את &quot;הליבה רפאים הנגע&quot; (בננה או נקניק). </li></ol> ב FNA תרגול מיומנות על הנגע פנטום AV. כל גישה בהשגת באיכות גבוהה, מתאים aspirates FNA טוב עם מריחות איכות ישיר ציטולוגיה צריך הכתובת הבאה קריטי נקודות <ol style="list-style-type:upper-roman;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מד, כמו מחט משתמעת בכותרת של ההליך, המחטים עדינה (מספר מד גבוה) תשואה aspirates טוב יותר עם דילול דם מזערית. עבור איזון קריטי הטבות מגבלות, 22-25 מחטים מד עדיפים על יציבות מכנית אופטימלי של המחט מבלי לפגוע באיכות לשאוב FNA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רצפי בקרה מתאימים ביישום ואקום לשחרר במהלך ההליך-FNA זה קריטי על מנת לקדם את התאים שנדגמו עם כל חבטה של ​​המחט, כלפי רכזת את המחט. עם זאת, החומר aspirated אסור להגיע לאזור של האסיפה מחט מזרק עם השאיפה. אם זה לא מנע, החומר עלול להיות קשה כדי לאחזר להכנת מריחות (חומר זה עשוי, עם זאת, לשמש להכנת לחסום את התא או שיטות הריכוז כגון Cytospin, שיטות לסנן או ההכנות האחרונות ציטולוגיה נוזלית מבוסס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיתוח מיומנות המתאים לעיבוד של הדגימה aspirated, כולל הכנה למרוח ישירות באתר הערכה הלימות עם triaging המתאים בדיקות עזר כגון הכנת התא לחסום עבור immunocytochemistry אלקטיבי, cytometry זרימה בחירה עבור immunophenotyping של נגעים lymphoproliferative, עובר להגשת סטרילי עבור מיקרוביולוגיה מחקרים, וגם בן הזוגריאל לבדיקות מולקולריות (cytogenetics וכו &#39;). </li></ol> Ba ביצוע הליך FNA (מוצג עם THFV Shidham של [1] (מקור FNA, ארה&quot;ב), אולם לכל מערכת FNA עשויה לשמש לתרגול). (איור 3,4,5). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הרכבה FNA עם השסתום נסגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את הנגע והכנס את קצה מחט הנגע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את השסתום כדי לחבר את הריק, דרך המחט אל קצהו, כדי לשאוב מרכיבים תאיים נציג של הנגע עם כל אחד ושבץ הלוך ושוב לתוך הנגע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמירה על ואקום מדגם באזורים שונים של הנגע על ידי החדרת מחט לתוך הנגע לכיוונים שונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שסתום לנתק את ואקום לומן את המחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשוות את הלחץ עם תנאי הסביבה (למשל על ידי ניתוק מזרק שסתום מן המחט לרגע קט &amp; מחדש. אם התקן מיוחד עם צעדים מובנה, כגון &#39;THFV &quot;משמש, זה וצעדים אחרים Ba1 דרך Ba6 הם מתואמים באופן אוטומטי על ידי ביצוע צעדים שונים במערכת שסתום) [1]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המחט מן הנגע עם שסתום סגור, כדי למנוע אובדן של הדגימה ידי פעולה נימי לתוך הנגע, אלא אם יש לחץ שלילי מעט בסוף הרכזת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקור את התוכן aspirated לשקופית זכוכית להכין למרוח ישירות (ראו להלן) (איור 6). </li></ol> Bb. עיבוד של הדגימה aspirated עם הקבלה מתאימה הפצת לשאוב בשקופיות זכוכית והכנת מריחות ישירה באיכות טובה (איור 6) ואחריו מכתים הקבלה נאותה (איור 7,8). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ירידה של לשאוב וחילצה בשקופית זכוכית משתרע על ידי מגוון של גישות כפי שמוצג (איור 6) [2]. הגישה המקובלת היא &#39;a&#39;. עם זאת, אם הדגימה היא דם מדולל microfragments מסוימים, עודף הדם מתנקז על ידי הטיית שקופית, ואת microfragments אז מפוזרים בין שקופיות זה והחלק הכוס השנייה דומה &#39;&quot;. אם לשאוב היא בעיקר השעיה ללא microfragments, כגון מן הנגעים lymphoproliferative, היא התפשטות דומה &quot;ב&quot; או &quot;ג&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מריחות יכול להיות מעובד קבוע במגוון של דרכים ושיטות צביעה שונות במהלך הערכה באתר הלימות. עם זאת, הגישה הטובה ביותר היא אוויר יבש כל מריחות. אוויר יבש מריחות יכול להיות מוכתם בכתמי Romanowski (כגון Difff-במרכול כתם, כתם רייט) לאחר קיבוע או מתנול עם כתם פאפ לאחר התייבשות מלוחים ואחרי קיבוע (באתנול 95% או רצוי באתנול 95% עם 5 חומצה אצטית%) [3]. ביטול הפרעה בשל הדם טשטוש הוא יתרון משמעותי [3]. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם לממצאים cytomorphologic הראשוני במהלך הערכה באתר הלימות, מיון נוספים (כגון בלוק תא אלקטיבי, מיקרוסקופ אלקטרונים, תרבויות מיקרוביולוגיה, cytometry זרימה, בדיקות מולקולריות, cytogenetics וכו &#39;) מומלץ כמצוין. </li></ol> נציג תוצאות: <img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig1tmb.jpg" alt="דמות 1" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig1.jpg">אנא לחץ כאן כדי לראות גרסה גדולה יותר של דמות 1</a> . באיור 1. חומר הנדרש להכנת AV פנטום לתרגול מיומנות FNA (* אנחנו משתמשים הפלסטיק פלסטיק אשר לא דבק קולק בסוף, תוך הסרת לאחר ריפוי מוחלט של קולק.) <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig2tmb.jpg" alt="דמות 2" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig2.jpg">אנא לחץ כאן כדי לראות גרסה גדולה יותר של הדמות 2.</a> איור 2. הכנת הנגע AV פנטום <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig3tmb.jpg" alt="דמות 3" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig3.jpg">אנא לחץ כאן כדי לראות גרסה גדולה יותר של הדמות 3.</a> איור 3. צעדים קריטי בהליך FNA. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig4tmb.jpg" alt="דמות 4" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig4.jpg">אנא לחץ כאן כדי לראות גרסה גדולה יותר של הדמות 4.</a> איור 4. EUS-FNA-סיכום של צעדים קריטיים * (ראה איור 3) <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig5tmb.jpg" alt="דמות 5" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig5.jpg">אנא לחץ כאן כדי לראות גרסה גדולה יותר של דמות 5.</a> איור 5. החסרונות הקשורים בשלבים קריטיים FNA procedure. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig6tmb.jpg" alt="דמות 6" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig6.jpg">אנא לחץ כאן כדי לראות גרסה גדולה יותר של דמות 6.</a> איור 6. הכנת מריחות ישירה של הדגימה FNA בין שתי שקופיות. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig7tmb.jpg" alt="דמות 7" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig7.jpg">אנא לחץ כאן כדי לראות גרסה גדולה יותר של הדמות 7.</a> איור 7. מריחות קבוע לעומת האוויר יבש רטוב. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;;text-align:right;direction:rtl" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig8tmb.jpg" alt="דמות 8" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig8.jpg">אנא לחץ כאן כדי לראות גרסה גדולה יותר של דמות 8.</a> איור 8. מריחות קבוע לעומת האוויר יבש רטוב.

<ol>
	<li>Shidham, V. B., Pandit, A. W., Rao, R. N., Basir, Z., Shidham, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Harvester+with+Functional+Valve+(THFV):+Shidham's+device+for+reproducibly+higher+specimen+yield+by+fine+needle+aspiration+biopsy+with+easy+to+perform+steps.">Tissue Harvester with Functional Valve (THFV): Shidham's device for reproducibly higher specimen yield by fine needle aspiration biopsy with easy to perform steps.</a> BMC Clinical Pathology. 7 (2), (2007).</li><li>Shidham, V. B., Epple, J., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AppendiX+I:+Collection+and+processing+of+effusion+fluids+for+cytopathologic+evaluation.">AppendiX I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation.</a> , 207-235 (2007).</li><li>Shidham, V., Kampalath, B., England, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Routine+air+drying+of+all+the+smears+prepared+during+fine+needle+aspiration+and+intraoperative+cytology+studies:+An+opportunity+to+practice+a+unified+protocol,+offering+the+flexibility+of+choosing+variety+of+staining+methods.">Routine air drying of all the smears prepared during fine needle aspiration and intraoperative cytology studies: An opportunity to practice a unified protocol, offering the flexibility of choosing variety of staining methods.</a> Acta Cytologica. (45), 60-68 (2001).</li></ol>

עדין ביופסיות מחט שאיפה (FNAB) מבוצעים נרחב כמו טכניקה, חסכוני פולשנית בטוח, מהיר לאבחון רקמות של גידולים נגעים שונים. בהליך זה מחט 18-27 מד מוכנס לתוך הנגע, נעו קדימה ואחורה מספר פעמים באזורים שונים של הנגע תחת ואקום מבוקר (יניקה) בעוצמה משתנה החל מינימלי בצורה של פעולה רק נימי 10 מ&quot;ל על ואקום מזרק כדי לאחזר חומר רקמות אבחון. מד מחט עדינה עם מספר גבוה יותר הוא העדיף לאחזר חומר ציטולוגיה טוב להכין מריחות ישיר. מחט מד המורחבת של 18G מאחזר יותר מדגם מתאים לחסום התא, cytometry זרימה, מיקרוסקופ אלקטרונים, cytogenetics, מיקרוביולוגיה תרבויות וכו &#39;למרות ההליך הוא פשוט, שליטה השלבים השונים עם יישום נאות שחרורו של ואקום על צעדים מתאימים בצורה מתואמת חיונית מאוד לתוצאות מיטביות. בשל אי זמינות גבוהה תשואה מחטים במיוחד, מזרקים רגילים או שינויים שלהם משמשים כדי לבצע הליך זה. עם זאת, מזרקים יש מגבלות רבות המובילות בתשואה נמוכה של הדגימה אם משתמשים באופן רגיל. הדרישה להתמודד מזרק מיוחד בדרך כלל מוסיף למורכבות ההליך. לפיכך, בשל היעדר של התקן זמינים מסחרית FNAB מתאים מחט, הליך זה תכליתי מאוד סובלת בעיה תכופים של שליפה הדגימה מספקת. לאחרונה, מכשיר הגדלת התשואה עם reproducibility דווחה [1]. בנוסף, כיום קיים מחסור של מודל מתאים לתרגל מיומנות בביצוע FNAB על ידי אנשי בריאות באימון כולל תושבים העמיתים. היה לנו מודל סטנדרטי עם חתיכת כבד בקר טרי ממולא כפפות גומי לתרגול FNAB מיומנות. עם זאת, מודל זה קשה לארגן בהתראה קצרה. רכש של כבד בקר טרי הוא בדרך כלל הקשה מגבילים. בנוסף, טיפול של הכבד עלול להציג הקשורות לזיהום גורמים כמו לצייר משמעותי בחזרה. הנטייה של עטויה בכפפת גומי לדלוף אחרי כמה דקירות המחט גורמת בלגן פוטנציאל במהלך התרגול. אנו מדווחים ומתארים רומן אך שיטה פשוטה הטבעה חתיכה קטנה של בננה (או נקניק) ב קולק זמינים מסחרית גומי סיליקון וחומרים זמינים בקלות אחרים. פנטום FNAB שומרת החותם ואקום ובכך לאפשר שאיפה של חומר מן הדגימה מוטבע, שווה ערך ל ההליך FNAB בפועל על נגע בסביבה קלינית. בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את ההליך של קבלת הנגע FNAB רפאים ותרגול הליך FNAB. הוא גם ממחיש בעיבוד קצר של הדגימה לאחזר כולל הכנה למרוח ו מכתים [2,3]. מכיוון קולק לוקח זמן כדי לרפא, הנגע רפאים צריכים להיות מוכנים מראש על 24 עד 48 שעות לפני הפגישה תרגול. להשוואה מוכן לשימוש הנגע רפאים ניתן להשיג ממקור מסחרי (מקור FNA, ארה&quot;ב). הנגע פנטום לתרגול FNAB מיומנות עשוי לשמש לאימונים התושבים העמיתים לפני תחילת המופע FNAB על חולים בסביבה קלינית.

preparation and using phantom lesions to practice fine needle aspiration biopsies

נכון לעכשיו, עובדי מערכת הבריאות, כולל תושבים בחורים שאין להם מודל מתאים פנטום לתרגול עדין מחט שאיפה ביופסיה (FNAB) ההליך. בעבר, אנו סטנדרטית מודל המורכב עטויה בכפפת גומי המכיל כבד בקר טרי לתרגול FNAB. עם זאת, מודל זה קשה לארגן להכין בהתראה קצרה, עם הרכש של כבד בקר טרי להיות ההיבט המאתגר ביותר. טיפול של הכבד עם בעיות זיהום הקשורים גם לצייר משמעותי בחזרה. בנוסף, חומר כפפה דליפות לאחר מחט כמה עובר, עם הבלגן שנוצר. הקמנו שיטה פשוטה הרומן של הטבעה חתיכה קטנה של נקניק או בננה קולק זמינים מסחרית גומי סיליקון. מודל זה מאפשר את השמירה על חותם ואקום שאיפה של חומר מן הדגימה מוטבע, הדומה הליך FNAB בפועל על נגעים מסה קליניים. החומר aspirated ב הרכזת מחט יכול להיות מעובד דומה דגימות שנרכשו במהלך ההליך FNAB בפועל, בהנחיית מיומנות נוספת הכנה למרוח ו מכתים.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies at JoVE.com

Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies

תרגול של קנס השאיפה ביופסיות מחט (FNAB) על ידי החניכים מאתגרת יחסית, בשל היעדר של הנגע, זמינים בקלות המתאים. הכנת הנגע רפאים AV לתרגל את נוהל FNAB ומיומנות מאסטרינג קל יחסית.

הכנה שימוש הפצעים פאנטום פיין שאיפה לעשייה ביופסיות מחט

Currently, health workers including residents and fellows do not have a suitable phantom model to practice the fine- needle aspiration biopsy (FNAB) ...

preparation-using-phantom-lesions-to-practice-fine-needle-aspiration

Research

JoVE Journal

Biology

17.7K Views.  University of Wisconsin - Milwaukee. תרגול של קנס השאיפה ביופסיות מחט (FNAB) על ידי החניכים מאתגרת יחסית, בשל היעדר של הנגע, זמינים בקלות המתאים. הכנת הנגע רפאים AV לתרגל את נוהל FNAB ומיומנות מאסטרינג קל יחסית.

Video: Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the cellular and molecular features of the epithelia, which are mainly composed of two types of cells: hair cells (HCs) and supporting cells (SCs). Here we choose to study the inner ear sensory epithelia in adult zebrafish not only because the epithelial structures are highly conserved in all vertebrates studied, but also because the adult zebrafish is able to regenerate HCs, an ability that mammals lose shortly after birth. We use the inner ear of adult zebrafish as a model system to study the mechanisms of inner ear HC regeneration in adult vertebrates that could be helpful for clinical therapy of hearing/balance deficits in human as a result of HC loss.
Here we demonstrate how to do gross and fine dissections of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish. The gross dissection removes the tissues surrounding the inner ear and is helpful for preparing tissue sections, which allows us to examine the detailed structure of the sensory epithelia. The fine dissection cleans up the non-sensory-epithelial tissues of each individual epithelium and enables us to examine the heterogeneity of the whole epithelium easily in whole-mount epithelial samples.

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

The inner ear sensory epithelium of adult zebrafish is a good model system for understanding the mechanisms of hair cell regeneration in adult vertebrates. This protocol demonstrates the fine dissection of the epithelia, through which we can get tissue samples for studying the regenerative events at cellular and subcellular levels.

Dissection גרוס פיין epithelia של האוזן הפנימית חושית למבוגרים דג הזברה ( Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel electrophoresis to separate native or denatured proteins by the length of the polypeptide (denaturing conditions) or by the 3-D structure of the protein (native/ non-denaturing conditions). The proteins are then transferred to a membrane (typically nitrocellulose or PVDF), where they are probed (detected) using antibodies specific to the target protein.

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract.

המערבי סופג: הכנת המדגם איתור

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Advanced Confocal Microscopy Techniques to Study Protein-protein Interactions and Kinetics at DNA Lesions

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological approach to analyzing protein kinetics at DNA lesions over time or protein-protein interactions on locally microirradiated chromatin. We also show how to recognize individual phases of the cell cycle using the Fucci cellular system to study cell-cycle-dependent protein kinetics at DNA lesions. A methodological description of the use of two UV lasers (355 nm and 405 nm) to induce different types of DNA damage is also presented. Only the cells microirradiated by the 405-nm diode laser proceeded through mitosis normally and were devoid of cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs). We also show how microirradiated cells can be fixed at a given time point to perform immunodetection of the endogenous proteins of interest. For the DNA repair studies, we additionally describe the use of biophysical methods including FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) and FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy) in cells with spontaneously occurring DNA damage foci. We also show an application of FLIM-FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) in experimental studies of protein-protein interactions.

Laser microirradiation is a useful tool for studies of DNA repair in living cells. A methodological approach for the use of UVA lasers to induce various DNA lesions is shown. We have optimized a method for local microirradiation that maintains the normal cell cycle; thus, irradiated cells proceed through mitosis.

מיקרוסקופיה קונפוקלית טכניקות ללמוד אינטראקציות חלבון-חלבון וקינטיקה ב DNA נגעים מתקדמות

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological ...

Immunolabelling Myofiber Degeneration in Muscle Biopsies

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. Therapeutic options addressing the causes of muscular dystrophy pathogenesis are expected to alleviate muscle degeneration. Therefore, a method to assay and quantify the extent of cell death in muscle biopsies is needed. Conventional methods to observe myofiber degeneration in situ are either poorly quantitative or rely on the injection of vital dyes. In this article, an immunofluorescence protocol is described that stains necrotic myofibers by targeting immunoglobulin G (IgG) uptake by myofibers. The IgG uptake method is based on cell features characterizing the necrotic demise, including 1) the loss of plasma membrane integrity with the release of damage-associated molecular patterns and 2) the uptake of plasmatic proteins. In murine cross-sections, the co-immunolabelling of myofibers, extracellular matrix proteins, and mouse IgG allows clean and straightforward identification of myofibers with necrotic fate. This simple method is suitable for quantitative analysis and applicable to all species, including human samples, and does not require the injection of vital dye. The staining of necrotic myofibers by IgG uptake can also be paired with other co-immunolabelling.

Described here is a protocol for direct immunolabelling of necrotic myofibers in muscle cryosections. Necrotic cells are permeable to serum proteins, including immunoglobulin G (IgG). Revealing the uptake of IgG by myofibers allows the identification and quantification of myofibers that undergo necrosis regardless of muscle condition.

אימונוולבלינג מיוכי ניוון שרירים ביופסיות

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. ...

Single Cell Micro-aspiration as an Alternative Strategy to Fluorescence-activated Cell Sorting for Giant Virus Mixture Separation

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or fluorescence activated cell sorting (FACS) applied to the viral population. However, when the viruses in the mixture have similar morphologic properties and one of the viruses multiplies slowly, the presence of two viruses is discovered at the stage of genome assembly and the viruses cannot be separated for further characterization. To solve this problem, we developed a single cell micro-aspiration procedure that allows for separation and cloning of highly similar viruses. In the present work, we present how this alternative strategy allowed us to separate the small viral subpopulations of Clandestinovirus ST1 and Usurpativirus LCD7, giant viruses that grow slowly and do not lead to amoebal lysis compared to the lytic and fast-growing Faustovirus. Purity control was assessed by specific gene amplification and viruses were produced for further characterization.

Here, we describe a single cell micro-aspiration method for the separation of infected amoebae. In order to separate viral subpopulations in Vermamoeba vermiformis infected by Faustoviruses and unknown giant viruses, we developed the protocol detailed below and demonstrated its ability to separate two low-abundance novel giant viruses.

תא בודד מיקרו-שאיפה כאסטרטגיה חלופית מיון תאים פלואורסצנטית מופעל עבור הפרדה וירוס ענק תערובת

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or ...

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not accurately capture the effects of agrochemical exposure on honey bee queens. As the sole producer of fertilized eggs inside a honeybee colony, the queen is arguably the most important single member of a functioning colony unit. Therefore, understanding how agrochemicals affect queen health and productivity should be considered a critical aspect of pesticide risk assessment. Here, an adapted method is presented to expose honey bee queens and worker queen attendants to agrochemical stressors administered through a worker diet, followed by tracking egg production in the laboratory and assessing first instar eclosion using a specialized cage, referred to as a Queen Monitoring Cage. To illustrate the method&#39;s intended use, results of an experiment in which worker queen attendants were fed diet containing sublethal doses of imidacloprid and effects on queens were monitored are described.

This protocol was developed to enhance the understanding of how agrochemicals affect honey bee (Apis mellifera) reproduction by establishing methods to expose honey bee queens and their worker caretakers to agrochemicals in a controlled, laboratory setting and carefully monitoring their relevant responses.

הערכת הסיכון האגרוכימי למלכות דבורת הדבש המויזות

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

Profiling of H3K4me3 Modification in Plants using Cleavage under Targets and Tagmentation

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their recruited proteins, lead to temporal and spatial control of gene expression. Cleavage under targets and tagmentation (CUT&#38;Tag) is an enzyme-tethering method in which the specific chromatin protein is firstly recognized by its specific antibody, and then the antibody tethers a protein A-transposase (pA-Tn5) fusion protein, which cleaves the targeted chromatin in situ by the activation of magnesium ions. Here, we provide our previously published CUT&#38;Tag protocol using intact nuclei isolated from allortetraploid cotton leaves with modification. This step-by-step protocol can be used for epigenomic research in plants. In addition, substantial modifications for plant nuclei isolation are provided with critical comments.

Cleavage under targets and tagmentation (CUT&amp;Tag) is an efficient chromatin epigenomic profiling strategy. This protocol presents a refined CUT&amp;Tag strategy for the profiling of histone modifications in plants.

יצירת פרופיל של שינוי H3K4me3 בצמחים באמצעות מחשוף תחת מטרות ותגיות

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their ...

An Improved Chemotaxis Assay for the Rapid Identification of Rhizobacterial Chemoattractants in Root Exudates

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward method to quickly identify the chemoattractants that could induce the chemotactic movement of rhizosphere growth-promoting bacteria on sterile glass slides via simple steps. Bacteria solution (OD600 = 0.5) and sterile chemoattractant aqueous solution were added dropwise on the glass slide at an interval of 1 cm. An inoculating loop was used to connect the chemoattractant aqueous solution to the bacterial solution. The slide was kept at room temperature for 20 min on the clean bench. Finally, the chemoattractant aqueous solution was collected for bacterial counting and microscopic observation. In this study, through multiple comparisons of experimental results, the method overcame multiple shortcomings of traditional bacterial chemotaxis methods. The method reduced the error of plate counting and shortened the experimental cycle. For the identification of chemoattractant substances, this new method can save 2-3 days compared to the traditional method. Additionally, this method allows any researcher to systematically complete a bacterial chemotaxis experiment within 1-2 days. The protocol can be considered a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

Here, we present an improved chemotaxis assay protocol. The goal of this protocol is to reduce the steps and costs of traditional bacterial chemotaxis methods and to serve as a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

בדיקת כימוטקסיס משופרת לזיהוי מהיר של כימותרפים ריזובקטריאליים באקסודות שורש

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward ...

Comprehensive Echocardiographic Assessment of Right Ventricle Function in a Rat Model of Pulmonary Arterial Hypertension

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This remodeling leads to increased pulmonary vascular resistance, worsened right ventricular function, and premature death. Currently approved therapies for PAH largely target pulmonary vasodilator pathways; however, recent emerging therapeutic modalities are focused on other novel pathways involved in the pathogenesis of the disease, including right ventricle (RV) remodeling. Imaging techniques that allow longitudinal assessment of novel therapeutics are very useful for determining the efficacy of new drugs in preclinical studies. Noninvasive trans-thoracic echocardiography remains the standard approach to evaluating heart function and is widely used in rodent models. However, echocardiographic evaluation of the RV can be challenging due to its anatomical position and structure. In addition, standardized guidelines are lacking for echocardiography&#160;in preclinical rodent models, making it difficult to carry out a uniform assessment of RV&#160;function across studies in different laboratories. In preclinical studies, the monocrotaline (MCT) injury model in rats is widely used to evaluate drug efficacy for treating PAH. This protocol describes the echocardiographic evaluation of the RV in na&#239;ve and MCT-induced PAH rats.

The present protocol describes the echocardiographic characterization of right ventricular morphology and function in a rat model of pulmonary arterial hypertension.

הערכה אקוקרדיוגרפית מקיפה של תפקוד החדר הימני במודל חולדה של יתר לחץ דם עורקי ריאתי

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This ...

שימוש בביופסיות עור ליצירת פודוציטים שמקורם במטופל

Generation of Patient-Derived Podocytes from Skin Biopsies

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the glomerulus. Mutations in podocyte-specific genes can cause focal segmental glomerulosclerosis (FSGS), and podocytes are also affected in many other primary and secondary nephropathies. Due to their differentiated nature, primary cell culture models are limited for podocytes.&#160;Therefore, commonly conditionally immortalized cells are used. However, these conditionally immortalized podocytes (ciPodocytes) have several limitations: the cells can dedifferentiate in culture, especially when they reach confluency, and several podocyte-specific markers are either only slightly or not expressed at all. This brings the use of ciPodocytes and their applicability for physiological, pathophysiological, and clinical reach into question. Here, we describe a protocol for the generation of human podocytes-including patient-specific podocytes-from a skin punch biopsy by episomal reprogramming of dermal fibroblasts into hiPSCs and subsequent differentiation into podocytes. These podocytes resemble in vivo podocytes much better in terms of morphological characteristics, like the development of foot processes and the expression of the podocyte-specific marker. Finally, yet importantly, these cells maintain patients&#39; mutations, resulting in an improved ex vivo model to study podocyte diseases and potential therapeutic substances in an individualized approach.

מחבר זרקור: יצירת פודוציטים שמקורם במטופל מביופסיות עור  

This manuscript describes a two-step protocol to generate patient-specific podocytes from dermal fibroblasts via episomal reprogramming into human-induced pluripotent stem cells (hiPSCs) and subsequent differentiation into podocytes.

יצירת פודוציטים שמקורם במטופל מביופסיות עור

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the ...