1. השיכון התאקלמות בעלי חיים נהלים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זכר חולדות לונג אוונס, במשקל 300-325 גרם בזמן ההגעה ביבר, הם שוכנו בנפרד בכלובים מפלסטיק ממוחזר רגיל המכיל מיטה גלולה נייר, עם מכסים רשת תיל כדי להכיל בקבוקי מים ומזון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולדות מתוחזקים על לוח זמנים אור כהה הפוך (אורות 19:00-07:00), בטמפרטורה, לחות ו שבשליטת ביבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזון ומים הם כרצונך המודעה הזמינים כלובי הביתה לאורך הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולדות מותר להתאקלם ביבר ותנאי דיור למשך שבוע לפני הניתוח. במהלך תקופה זו חולדות נותרים באין מפריע למעט ניקוי שגרתי, האכלה, ניטור של משקל. </li></ol> 2. צנתור תוך ורידי כירורגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת הרדמה גז isoflurane, ושימוש סטנדרטי טכניקות ניתוחיות aseptic, חולדות מוכנים עם צנתרים silastic בעורק הצוואר הימני. היציאות קטטר לתוך צינורית שונה (פלסטיק אחת) על פני השטח של הגולגולת, ואת הצינורית הוא רכוב על הגולגולת עם ברגים &quot;תכשיטנים מלט שיניים. לפרטים על ניתוחים, ראה 7, 8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתום הניתוח, צנתרים סמוקות עם כ 0.2 מ&quot;ל של תמיסה המכילה הפרין 50% (1,000 IU) דקסטרוז ו - 50% (25 g/50 מ&quot;ל). חוסם פלסטיק ממוקם על פתיחת צינורית כדי להגן על קטטר מן ההריסות חיצוניים, כדי לשמור patency קטטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזמן הניתוח, ושוב ביום לאחר הניתוח, חולדות ניתנות 5 מ&quot;ג / ק&quot;ג, SC, Ketoprofen של משכך כאבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולדות מותר לפחות שבעה ימים כדי להתאושש מהניתוח לפני ניסויים. במהלך תקופה זו, חולדות נותרים ללא הפרעה בכלובים הביתה, להוציא את שגרת ניקיון האכלה, ניטור יומיומי של משקל ובריאות כללית. ביום האחרון של תקופת ההחלמה, צנתרים סמוקות עם פתרון הפרין / דקסטרוז (סעיף 2.2) כדי לוודא patency קטטר. </li></ol> 3. נוהלי ההתנהגות הנהלים כל התנהגות מבוצעות באמצעות ציוד שסופק על ידי מד Associates Inc (St Albans, VT). הציוד, שוכנו בחדר ייעודי, כולל ערכה של חדרי אופרנטית רגילה, כל אחד בתוך המתחם קול הפחתת. כל תא אופרנטית מצויד בשני מנופים נשלף, הן גבוהות 6.5 ס&quot;מ מעל רצפת נירוסטה מוט. אור לבן גירוי ממוקם בדיוק מעל ידית אחת, ותגובות על המנוף (מה שנקרא מנוף &quot;פעיל&quot;) לגרום התאורה סימולטני של האור לגירוי והפעלה של משאבת אינפוזיה (רזאל מכשירים מדעיים, סנט אלבנס, VT). המשאבה נמצאת על המדף רק מחוץ לחדר אופרנטית, אך בתוך המתחם קול הפחתת. המנוף השני (מה שנקרא מנוף &quot;פעיל&quot;) נותר המורחבת בחדר לאורך כל הפרוצדורות, להגיב על מנוף זה ללא תוצאה. לבסוף, כל חדר מצויד כדי לספק זרם קבוע, לסירוגין, footshock שאין מנוס ממנו, חשמלי דרך השלגון לרצפה מוט פלדה. כל תנאי הניסוי (למשל, מצגות גירוי, חליטות בסמים, הלם הלידה), כמו גם נתונים הקלטה איחוד, נעשים דרך ממשקים בין לתאי בדיקה ותפעול של מרכזי המחשב מד Associates תוכנה (MED-IV). הניסוי מתבצע 5 שלבים: 1) הרגלה; 2) קוקאין SA: 3) ללא שימוש בסמים תקופה; 4) הכחדה, ו - 5) בדיקה לצורך החזרתו. בכל שלבי (למעט תקופה ללא שימוש בסמים), חולדות מועברים עבור הפעלות יום מחדר דיור לתאי מבחן אופרנטית. בעלי חיים מועברים בנפרד, בתוך מיכלי פלסטיק קטנים. מזון ומים אינם זמינים בתאי אופרנטית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התרגלות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עשרים וארבע שעות שקדמו קוקאין הראשון SA מושב (. ראה סעיף 3.2), החולדות מותר להרגיל לתאי אופרנטית במהלך הפעלת 2-h יחיד; במהלך הפעלה זו את הידית הפעילה חזר בו. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קוקאין SA אימונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני כל אימון יומי, חולדות הם שקלו בחדר הדיור. לאחר מכן הם מועברים לתאי אופרנטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שיוצבו בתאי אופרנטית, מעיין הרכבה צינורות (המשתרעת משאבת עירוי תרופות) מחובר הגולגולת רכוב צינורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולדות מותר עצמית לנהל קוקאין HCl במהלך יום 3-h הפעלות, עבור סכום כולל של 8-10 ימים (בין אם ברציפות או עם שני &quot;ימי חופש&quot; להתערב בין הפגישות 5 ו - 6). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> SA הפעלות לסירוגין בבוקר (9:00-00:00) ואחר הצהריים (13:00-16:00). העיתוי של SA הפעלות הוא לסירוגין כי הנהלים בשלבים הבאים של הניסוי (כלומר הכחדה ובדיקה) להתרחש בשני times של יום עבור כל בעלי החיים (ראה סעיפים 3.4 ו - 3.5), ולכן הסדר זה מונע תופעות של בלבול זמן של יום על התנהגות סמים המבקשים הבאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל אימון הוא קדמה תקופה של 5 דקות התאקלמות, שבמהלכה חיות ממוקמים בתאי אופרנטית עם מנוף הפעיל חזר בו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתחילת האימון, מנוף הפעיל המורחבת לתוך תא והאור גירוי (הממוקם מעל הידית פעיל) מואר במשך 30 s. בנוסף, לאור בית מופעלת בשלב זה, ונשאר מואר במהלך הפגישה. יחד, אירועים אלה אות הזמינות של קוקאין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הפגישה, התגובות על המנוף פעיל מחוזקים על ידי עירוי 3-s של קוקאין (0.23 mg/65 μL, ד) על לוח זמנים קבוע יחס של 1-חיזוק. בד בבד עם הפעלת המשאבה עירוי משלוח סמים היא הפעלה 20-s האור הגירוי מנוף מעל הפעיל. זו מצגת 20-s אור מקבילה תקופה &quot;פסק זמן&quot; במהלכו נוספים התגובות מנוף פעיל נרשמות אך לא מחוזק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים מותר מקסימום של 50 חליטות בכל הפעלה של 3 שעות. אנו שגרתי להטיל את הקריטריון הזה בעבודה שלנו, הניסיון שלנו, מצאו כי הוא מפחית בצורה ניכרת, אם לא מבטל, מקרים של מוות כתוצאה ממנת יתר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף כל מפגש יומי, צנתרים החולדות הן סמוקות עם 0.2-0.3 מ&quot;ל של תמיסת הפרין, דקסטרוז (ראה סעיף 2.2) לבין חולדות מוחזרים כלוב ביתם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרופות ללא תקופת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הפגישה האחרונה קוקאין SA, חולדות נותרים באין מפריע (למעט ניקוי שגרתי, האכלה, ניטור של משקל) בכלוב בביתם מינימום של שבעה ימים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכחדה של התנהגות קוקאין מאומן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולדות מועברים לתאי אופרנטית בין 9:00-10:00 לאימונים הכחדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באביב הרכבה צינורות מחובר הגולגולת רכוב צינורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם לתנאי לאימונים SA, כל יום של אימון הכחדה היא קדמה תקופה של 5 דקות התאקלמות, שבמהלכה חיות ממוקמים בתאי אופרנטית עם מנוף הפעיל חזר בו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולדות מקבלים מכן ארבעה 60 דקות הפעלות הכחדה, מופרדות 30 דקות במרווחים. כל מפגש 60 דקות הוא שיזם את האירועים באותו להתרחש בתחילת האימונים (כלומר, תאורה של אור את הבית, הרחבה של המנוף פעילה, 30 שניות תאורה של אור הגירוי מנוף מעל הפעיל). במהלך הפגישות, כל התנאים שהיו קיימים במהלך אימון SA נשמרים (כלומר, התגובה תלויות תאורה של אור גירוי במשך 20 שניות ו 3-s הפעלת המשאבה עירוי), חוץ מזה התגובות מנוף פעיל מתחזקים כבר לא עם חליטות קוקאין . במשך 30 דקות במרווחים המפרידים כל מושב 60 דקות הכחדה, מנוף הפעיל חזר והאור בבית כבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף הפגישה 60 דקות האחרונות, חולדות מוחזרים כלוב ביתם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צעדים 3.4.1. ל 3.4.5. חוזרים על עצמם במשך 3 ימים רצופים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזרה של התנהגות קוקאין מאומנים על ידי מתח footshock <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולדות מועברים לתאי אופרנטית בין 9:00-10:00 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שיוצבו בתאי אופרנטית, באביב הרכבה צינורות מחובר הגולגולת רכוב צינורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם לתנאי לאימונים הכחדה, לתקופה של 5 דקות התאקלמות מסופק, שבמהלכה חולדות ממוקמים בתאי אופרנטית עם מנוף הפעיל חזר בו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולדות מקבלים מכן שני מפגשים של 60 דקות הכחדה (ראה 3.4.4). מופרדים על ידי מרווח של 30 דקות, זהים לאלה שניתן בשלב הכחדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם לאחר הפגישה 60 דקות השני המספר הכולל של התשובות על מנוף הפעיל בעבר הוא פחות מ 15, בעלי חיים מקבלים מבחן השבה לאחר הפסקה של 30 דקות נוספות. בהפסקה של 30 דקות זו, footshock או אחיזת עיניים footshock (כלומר, לא footshock) מנוהלת (ראה 3.5.6).. אם הקריטריון של 15 או פחות תגובות על מנוף הפעיל אינה מושגת לאחר הפגישה השניה, מושב הכחדה נוסף (ים) ניתנת לפני בדיקות לצורך החזרתו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עשר דקות אחרי הפגישה 60 דקות second הכחדה (או לאחר כל מפגש 60 דקות נוספות הכחדה (ים) נדרש לקבוע את הקריטריון, הכחדה של 15 או פחות תגובות), בעלי חיים חשופים 20 דקות של מתח לסירוגין footshock חשמלי (או אחיזת עיניים footshock) בחדר אופרנטית. Footshock ניתנת בתקופה כאשר הפעיל את הידית חזר ואורות הבית גירוי הם כבויים. Footshock מועבר על פי לוח זמנים זמן משתנה במרווח ממוצע של 40 שניות (טווח של 1-70). הלם כל מועבר בעוצמה של 0.9 mA, והוא 0.5 של משך. פרמטרים אלה של footshock מבוססים על עבודה פיילוט נרחבבוצע במעבדה שלנו להקים השבה אמין של קוקאין המבקשים, בעוצמה משך מינימום של חשיפה footshock. על פי הפרמטרים האלה, חיות התערוכה תגובה רפלקסיבית קפיצה אל ההלם של 0.5, ומדי פעם לפלוט הניקוד קצר. למרות החיות הם נצפו לאורך תקופת ההלם, את עוצמת הזעזוע אינו בסדר גודל מספיק כדי לגרום סימנים בולטים יותר של מצוקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד לאחר סיום הפגישה footshock, הפעיל את הידית מוארך וחולדות מותר מנוף לחץ בתנאים הכחדה (כלומר, התגובות אינן חיזק עם קוקאין, אבל האם להמשיך לגרום תאורה של אור גירוי והפעלה של משאבת עירוי ). פרק זמן זה מוגדר לבדוק את להחזרת הוא בדרך כלל 1-3 שעות משך. רוב להגיב מתרחשת בחלקה הראשון של הפגישה המבחן (הראשון 30 דקות h-1), ולאחר מכן מכבה לאורך תקופות הבדיקה המורחבת יותר. לפיכך, מבחן 1 שעות מספיקה כדי ללכוד את האפקט השבה, עם תקופות מבחן ארוך מתן פרופיל הכחדה מלאה יותר של ההשפעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר העיצוב אמצעים חזר הוא מועסק, חולדה כל נבדק בתנאים footshock ואת דמה footshock. צעדים 3.5.1. ל 3.5.8 חוזרים ביום הבדיקה שלאחר מכן, ואת מבחן חלופי השבה (footshock או אחיזת עיניים footshock) מנוהל. </li></ol></li></ol> 4. נציג תוצאות: <img src="/files/ftp_upload/2265/2265fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. פרופילים מסוגנן בתגובה לפעילות על מנופים פעיל פעיל במהלך האימון מינהל עצמי, הכחדה, ובדיקה השבה. איור 1 מציג מסוגנן פרופילים תגובה אופרנטית, אופייני לאלה שהושגו במהלך השלבים השונים של פרוטוקול הניסוי המתואר להלן. 1. מנוף התגובות פעילים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קוקאין הכשרה SA. איור 1 (פאנל משמאל) מראה קוקאין טיפוסי SA הכשרה עקומת הכולל הן מספר חליטות והמספר הכולל של בתי מנוף פעיל. חולדות בדרך כלל לרכוש קוקאין SA בתוך 1-3 מפגשים, ופעם אחת את ההתנהגות היא הוקמה, לשמור על קצב יציב של צריכת סמים (בדרך כלל פחות מ -20% מהשונות בין-session) על ההפעלות שלאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכחדה של התנהגות קוקאין מאומן. ניתן לראות באיור 1 (פאנל באמצע), כי ביום 1 הכחדה, כאשר התגובות הן לא חיזק בפעם הראשונה, המספר הכולל של התשובות על הידית הפעילה בתחילה גבוה יותר מאשר ב סיום שלב ההכשרה (המקביל ל &quot;פרץ הכחדה&quot; מה שנקרא); בהדרגה, על פני ארבעה מפגשים הכחדה, להגיב פוחתת. בימים 2 ו -3 של הכחדה, התאוששות מסוימת של מגיבים (יחסית לזה שנצפה במהלך הפגישה האחרונה של היום הקודם) אפשר לראות, עם זאת, התגובות הן בדרך כלל פחות מאשר בתחילתו של היום הקודם הכחדה, ו הכחדה כלל ההכנסות בקצב מהיר יותר במהלך ארבעת הפגישות לאותו יום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזרה של קוקאין המבקשים. ניתן לראות באיור 1 (פאנל מימין) כי 20 דקות של חשיפה footshock לסירוגין גורם לעלייה שאינם מחוזקים להגיב על המנוף פעיל, יחסית לזה שנצפה בסוף הפגישה הקודמת הכחדה. Footshock גם גורם לעלייה להגיב יחסית לזה שנצפה בתנאים שבהם דמה footshock מנוהל. לפיכך, השבה של קוקאין על ידי המבקשים להדגיש footshock ניתן לבטא גם כ: 1) מספר גדל של אי מחוזק התגובות לאחר חשיפה footshock, יחסית לתגובות בפגישה לפני הכחדה footshock או 2) את מספר גדל של אי - חיזוק תגובות לאחר יחסי footshock כדי footshock דמה. </li></ol> 2. מנוף התגובות פעילה ניתן לראות באיור 1 (הקו האדום), כי לאורך כל שלבי הניסוי, יש רמות נמוכות מאוד בתגובה הקשורים המנוף פעיל. עם זאת, עלייה מתונה להגיב על המנוף הזה הוא ציין לפעמים חשיפה הבאים להדגיש footshock. גם במקרים בהם כגון עלייה להגיב מתרחשת, גידול המנוף פעיל להגיב נוטה להיות הרבה יותר באופן יחסי.

<ol>
	<li>Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reinstatement+model+of+drug+relapse:+history,+methodology+and+major+findings.">The reinstatement model of drug relapse: history, methodology and major findings.</a> Psychopharmacology. 168 (1-2), 3-20 (2003).</li><li>de Wit, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Priming+effects+with+drugs+and+other+reinforcers.">Priming effects with drugs and other reinforcers.</a> Experimental and Clinical Psychopharmacology. 4, 5-10 (1996).</li><li>Bossert, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobiology+of+relapse+to+heroin+and+cocaine+seeking:+An+update+and+clinical+implications.">Neurobiology of relapse to heroin and cocaine seeking: An update and clinical implications.</a> Eur J Pharmacol. 526 (1-3), 36-50 (2005).</li><li>Shalev, U., Grimm, J. W., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobiology+of+relapse+to+heroin+and+cocaine+seeking:+a+review.">Neurobiology of relapse to heroin and cocaine seeking: a review.</a> Pharmacol Rev. 54 (1), 1-42 (2002).</li><li>Shaham, Y., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+reinstates+heroin-seeking+in+drug-free+animals:+an+effect+mimicking+heroin,+not+withdrawal.">Stress reinstates heroin-seeking in drug-free animals: an effect mimicking heroin, not withdrawal.</a> Psychopharmacology. 119, 334-341 (1995).</li><li>Shaham, Y., Erb, S., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress-induced+relapse+to+heroin+and+cocaine+seeking+in+rats:+a+review.">Stress-induced relapse to heroin and cocaine seeking in rats: a review.</a> Brain Res Brain Res Rev. 33 (1), 13-33 (2000).</li><li>Erb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+injections+of+CRF+reinstate+cocaine+seeking+in+rats+after+postinjection+delays+of+up+to+3+h:+an+influence+of+time+and+environmental+context.">Central injections of CRF reinstate cocaine seeking in rats after postinjection delays of up to 3 h: an influence of time and environmental context.</a> Psychopharmacology (Berl). 187 (1), 112-120 (2006).</li><li>Erb, S., Shaham, Y., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+reinstates+cocaine-seeking+behavior+after+prolonged+extinction+and+a+drug-free+period.">Stress reinstates cocaine-seeking behavior after prolonged extinction and a drug-free period.</a> Psychopharmacology. 128, 408-412 (1996).</li><li>Tran-Nguyen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-dependent+changes+in+cocaine-seeking+behavior+and+extracellular+dopamine+levels+in+the+amygdala+during+cocaine+withdrawal.">Time-dependent changes in cocaine-seeking behavior and extracellular dopamine levels in the amygdala during cocaine withdrawal.</a> Neuropsychopharmacology. 19, 48-59 (1998).</li><li>Stretch, R., Gerber, G. J., Wood, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+behavior+maintained+by+response-contingent+intravenous+infusions+of+amphetamine+in+squirrel+monkeys.">Factors affecting behavior maintained by response-contingent intravenous infusions of amphetamine in squirrel monkeys.</a> Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 49, 581-589 (1971).</li><li>Shaham, Y., Rodaros, D., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reinstatement+of+heroin-reinforced+behavior+following+long-term+extinction+Implications+for+the+treatment+of+relapse+to+drug-taking.">Reinstatement of heroin-reinforced behavior following long-term extinction Implications for the treatment of relapse to drug-taking.</a> Behavioural Pharmacology. 5, 360-364 (1994).</li><li>Wit, H. d. e., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reinstatement+of+cocaine-reinforced+responding+in+the+rat.">Reinstatement of cocaine-reinforced responding in the rat.</a> Psychopharmacology. 75, 134-143 (1981).</li><li>Erb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-2+adrenergic+receptor+agonists+block+stress-induced+reinstatement+of+cocaine+seeking.">Alpha-2 adrenergic receptor agonists block stress-induced reinstatement of cocaine seeking.</a> Neuropsychopharmacology. 23 (2), 138-150 (2000).</li><li>Shalev, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+relapse+to+drug+seeking+in+rats:+studies+on+the+generality+of+the+effect.">Stress and relapse to drug seeking in rats: studies on the generality of the effect.</a> Psychopharmacology (Berl). 150, 337-346 (2000).</li></ol>

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי המועצה הקנדית של טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת טורונטו ועדה לטיפול בבעלי חיים. ההפקה של הוידאו הזה מומן על ידי מד Associates, Inc המייצרת את המכשיר משמש במאמר זה.

במהלך העשורים האחרונים, שלוש וריאציות של ההליך השבה SA פותחו ללמוד מחדש של סמים המבקשים בחולדות מעבדה וקופים. ההבדלים המגדירים את וריאציות פרוצדורליים מתייחסים בעיקר להתרחש אם התרופה SA, הכחדה, הפעלות בדיקות בתוך באותו יום או בימים שונים 1. ההליך שתיארנו במאמר זה הוא נפוץ המכונה &quot;בתוך בין&quot; וריאציה הפגישה, כי התרופה SA מתרחשת במהלך מפגשי יום (כלומר, בדרך בין-session) כי הם נפרדים מהכחדה הפעלות מבחן, אבל הכחדה בדיקות להתרחש באותו יום (כלומר, באופן בתוך-session) [למשל, 7, 9]. לחלופין, מה שנקרא &quot;בין המפגשים&quot; הנהלים, כל שלבי הניסוי להתרחש ברצף, כך SA, הכחדה, הפעלות בדיקות מקבלים בימים שונים (כלומר, כל השלבים הם בין הפגישות) [למשל, 8, 10, 11]. לעומת זאת, הליכי להשלים &quot;במסגרת מפגשי&quot;, הכשרה SA, הכחדה, הפעלות לבדוק את כל מתרחשים באותו יום [לדוגמה, 12]. למרות שיש מתפרסמים דיווחים על השבה footshock-Induced של התרופה המבקשים באמצעות וריאציות שונות של ההליך השבה, מצאנו זו מלחץ (לפחות אצל בעלי חיים עם היסטוריה של קוקאין SA) כדי להיות יעילים ביותר כאשר הכחדה ובדיקה להתרחש באותו יום (כלומר, בצורה &quot;בתוך בין&quot; מפגשים). לחלופין, יש לנו הצלחה עם קבלת השבה אמין footshock-Induced של קוקאין המבקשים באמצעות לחלוטין &quot;בין המפגשים&quot; נוהל, אבל רק בתנאים שבהם בעלי חיים הם שוכנו בתאי SA לאורך הניסוי 8, או לפחות במהלך הכחדה ובדיקה 13. החיסרון הזה בין מפגשים הגישה, על כי המתואר בפרוטוקול הנוכחי, הוא שהוא מגביל את מספר נושאים אשר ניתן לאמן ונבדק בבת אחת, ובכך מקטין את היעילות של איסוף הנתונים. אמנם בתנאים של הפרוטוקול הנוכחי רק קבוצה אחת של בעלי חיים ניתן לכבות ונבדק בזמן נתון, תפוקה גדולה יותר ניתן להשיג על ידי מדהים של שבוע את מועד ההתחלה של שלב ההכשרה SA עבור שתי קבוצות של חולדות. בתרחיש זה, קבוצה ראשונה של עכברים יכולים להזין את השלב ללא שימוש בסמים כמו הקבוצה השנייה נכנס השבוע 2 אימונים SA, ו, לאחר מכן, הכחדה ובדיקה יכול להתבצע בקבוצה הראשונה, ואילו הקבוצה השנייה היא התרופה שלה ללא שלב. גישה זו מאפשרת שימוש יעיל יותר של משאבים מאיצה את קצב רכישת נתונים, בעוד המוביל השבה footshock-Induced מאוד יעיל ואמין. חשוב לציין, בהליך שלנו, הכחדה של התנהגות בעבר סמים חיזוק ובדיקה להחזרת מתרחשת בנוכחות של התרופה הקשורים רמזים. למרות שאנו לא ביצעו אימונים הכחדה או בדיקה בהיעדר רמזים הקשורים לסמים, היא ההבנה שלנו, המבוסס על תקשורת אישית, כי הלחץ עשוי למעשה להיות יעיל וגורם השבה כאשר בדיקות מתרחשת בהיעדר רמזים כבוי ( לפחות במקרה של בעלי חיים עם היסטוריה של קוקאין SA). בחינה שיטתית של משתנה זה, ואת ההשלכות התיאורטיות שהוא מציב, היא שאלה חשובה למחקר עתידי. גורם פרוצדורליים הסופי תגובה צווי היא כי ההשפעה של הלחץ footshock על השבה כנראה רגישה מאוד מניפולציות של ההקשר. לדוגמה, מתח footshock יעיל רק גרימת מחדש של סמים המבקשים אם הוא מנוהל על הסביבה שבה התרופה SA ו הכחדה להתרחש, כלומר, footshock לא להחזיר סמים המבקשים אם החשיפה הלחץ מתרחשת בהקשר רומן, דבר המצביע על אינטראקציה חשוב בין גורם הדחק והסביבה התרופה השפעותיו על השבה 14. ב, המסקנה נהלים footshock השבה, כמו אלה שתוארו במאמר זה, שימשו בהצלחה ניכרת על מנת להבהיר את המנגנונים ההתנהגותיים הנוירוביולוגי בסיסיים המסדירים את היחסים בין מתח הישנות סמים. אכן, הליכים אלה, כאשר שהותאמה pretreatments תרופתי או מניפולציות neurochemical מיקוד מצעים עצבי ספציפי, יכולים לשמש כלים רבי עוצמה באפיון לנוירוביולוגיה של החזרת התרופה המבקשים על ידי מתח.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>MED-008-CT-B1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Deep extra tall MDF sound attenuating cubicle</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-018MD</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Standard modular test chamber with drug infusion top and waste pan</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-008CT</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless steel grid floor</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-005</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>House light, hooded, 28V</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-215M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stimulus light 1&#x201D; white lens</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-221M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Low profile retractable response lever</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-112CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SmartCtrl 8 Input/16 output package</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>DIG-716P2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Single speed syringe pump, 3.33 RPM</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>PHM-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rat self infusion package</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>PHM-119B-23-D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Drug Delivery, Arm assembly </td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>PHM-110-SAI</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Square wave aversive stimulator</td>
<td>Footshock Stress Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-414S</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Patented quick disconnect harness for stainless steel grid floor</td>
<td>Footshock Stress Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-005-QD</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Shock output cable</td>
<td>Footshock Stress Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>SG-219G-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MED-PC IV Software</td>
<td>Software</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>SOF-735</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

a procedure for studying the footshock-induced reinstatement of cocaine seeking in laboratory rats

ההיבט הערמומי ביותר של התמכרות לסמים היא נטייה גבוהה להישנות. מודלים בבעלי חיים של נסיגה, המכונה הליכי השבה, נעשה שימוש נרחב כדי ללמוד את לנוירוביולוגיה ואת הפנומנולוגיה של הישנות להשתמש בסמים. למרות שינויים פרוצדורליים התפתחו במהלך העשורים האחרונים, הנהלים השבה קונבנציונלי ביותר מבוססים על מודל הניהול העצמי (SA) סמים. במודל זה, חיה מאומן לבצע תגובה אופרנטית כדי להשיג סמים. כתוצאה מכך, התנהגות היא כבויה על ידי חיזוק הלנת בתגובה תלויות. החזרה של המחפשים תרופה מופעלת מכן על ידי אירוע בדיד, כגון זריקה של התרופה הכשרה חשיפה מחדש, לתרופה הקשורים רמזים, או חשיפה 1 מלחץ. הליכי החזרה פותחו במקור כדי לחקור את היכולת של חשיפה בלתי מותנית חריפה לתרופה הכשרה להחזיר סמים המבקשים אצל חולדות וקופים 1, 2. הליכי החזרה מאז שונה כדי ללמוד את התפקיד של גירויים סביבתיים, כולל סמים הקשורים רמזים וחשיפה צורות שונות של מתח, של נסיגה לתרופה המבקשים 1, 3, 4. במשך 15 השנים האחרונות, אחד מעמודי התווך של הספרות השבה כבר על עצמו את התפקיד של מתח הישנות סמים. אחת הצורות הנפוצות ביותר של מתח לחקר הקשר הזה הוא חשיפה אקוטית כדי קלה, footshocks לסירוגין חשמלי. היכולת של מתח footshock לעורר מחדש של סמים המבקשים הודגם במקור בחולדות עם היסטוריה של הרואין לווריד SA 5 על ידי שחם ועמיתיו (1995). כתוצאה מכך, ההשפעה היתה להכליל חולדות עם היסטוריה של קוקאין תוך ורידי, מתאמפטמין, ו SA ניקוטין, כמו גם אתנול אוראלי SA 3, 6. למרות footshock-Induced השבה של המבקשים התרופה יכולה להיות מושגת אמינה וחסונה, זה אפקט נוטה להיות רגיש מצדי משתנים מסוימים. אלה כוללים את הסדר של הפעלות הכחדה השבה הבדיקה, את עוצמת ומשך הלחץ footshock, ואת הנוכחות של סמים הקשורים רמזים במהלך הכחדה בדיקות לצורך החזרתו. כאן אנו מציגים פרוטוקול להחזרת footshock-Induced של קוקאין המבקשים כי השתמשנו בהצלחה עקבי לחקור את הקשר בין מתח קוקאין המבקשים.

Watch this Scientific Journal Video about A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats at JoVE.com

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

מודלים בבעלי חיים של נסיגה, המכונה הליכי השבה, נעשה שימוש נרחב כדי ללמוד את התפקיד של הלחץ הישנות כדי לחפש סמים. כאן אנו מדווחים על שיטה של ​​גרימת מחדש של קוקאין המחפשים בחולדות מעבדה באמצעות חשיפות חריפה על footshock, קלה חשמלי לסירוגין.

נוהל לימוד החזרה Footshock-induced של קוקאין מחפשים אצל חולדות מעבדה

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

a-procedure-for-studying-footshock-induced-reinstatement-cocaine

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Neuroscience

20.8K Views.  University of Toronto Scarborough. מודלים בבעלי חיים של נסיגה, המכונה הליכי השבה, נעשה שימוש נרחב כדי ללמוד את התפקיד של הלחץ הישנות כדי לחפש סמים. כאן אנו מדווחים על שיטה של ​​גרימת מחדש של קוקאין המחפשים בחולדות מעבדה באמצעות חשיפות חריפה על footshock, קלה חשמלי לסירוגין.

Video: A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended upon this work to develop a simple quantitative measure of forepaw dexterity that is sensitive to lateralized impairments and age-dependent changes. Rodents learn skillful forepaw and digit movements to manage thin pasta pieces, which they eagerly consume. We have previously described methods for quantifying vermicelli handling in rats and showed that the measures are very sensitive to forelimb impairments resulting from unilateral ischemic lesions, middle cerebral artery occlusions and unilateral striatal dopamine depletion [Allred, R.P., Adkins, D.L., Woodlee, M.T., Husbands, L.C., Maldonado M.A., Kane, J.R., Schallert, T. &amp; Jones, T.A. The Vermicelli Handling Test: a simple quantitative measure of dexterous forepaw function in rats. J. Neurosci. Methods 170, 229-244 (2008)]. Here we present a more detailed protocol for this test in rats and compare it with a newly developed version for mice, the Capellini Handling Test. Rats and mice are videotaped while handling short lengths of uncooked vermicelli or capellini pasta, respectively, with a camera positioned to optimize the view of paw movements. Slow motion video playback allows for the identification of forepaw adjustments, defined as any distinct removal and replacement of the paw, or of any number of digits, on the pasta piece after eating commences. Forepaw adjustments per piece are averaged over trials per each testing session. Repeated testing permits sensitive quantitative analysis of changes in forepaw dexterity over time. Protocols for pre-testing habituation and handling practice, as well as procedures for characterizing atypical handling patterns, are described. Because rats and mice perform the pasta handling tests slightly differently, species-specific differences in administration and scoring of these tests are highlighted. All animal use was in accordance with protocols approved by the University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

The Vermicelli and Capellini Handling Tests of forepaw dexterity take advantage of the natural inclination of rodents to manipulate food items using skillful forepaw and digit movements. Animals are videotaped while handling short strands of uncooked dry pasta. Slow motion video playback allows for the quantification of forepaw adjustments.

אטריה ו בדיקות Capellini טיפול: מדדים כמותיים פשוט פונקציה של מיומנות בכפו אצל חולדות ועכברים

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

Operant Sensation Seeking in the Mouse

Operant methods are powerful behavioral tools for the study of motivated behavior. These 'self-administration' methods have been used extensively in drug addiction research due to their high construct validity. Operant studies provide researchers a tool for preclinical investigation of several aspects of the addiction process. For example, mechanisms of acute reinforcement (both drug and non-drug) can be tested using pharmacological or genetic tools to determine the ability of a molecular target to influence self-administration behavior1-6. Additionally, drug or food seeking behaviors can be studied in the absence of the primary reinforcer, and the ability of pharmacological compounds to disrupt this process is a preclinical model for discovery of molecular targets and compounds that may be useful for the treatment of addiction3,7-9. One problem with performing intravenous drug self-administration studies in the mouse is the technical difficulty of maintaining catheter patency. Attrition rates in these experiments are high and can reach 40% or higher10-15. Another general problem with drug self-administration is discerning which pharmacologically-induced effects of the reinforcer produce specific behaviors. For example, measurement of the reinforcing and neurological effects of psychostimulants can be confounded by their psychomotor effects. Operant methods using food reinforcement can avoid these pitfalls, although their utility in studying drug addiction is limited by the fact that some manipulations that alter drug self-administration have a minimal impact on food self-administration. For example, mesolimbic dopamine lesion or knockout of the D1 dopamine receptor reduce cocaine self-administration without having a significant impact on food self-administration 12,16. 
Sensory stimuli have been described for their ability to support operant responding as primary reinforcers (i.e. not conditioned reinforcers)17-22. Auditory and visual stimuli are self-administered by several species18,21,23, although surprisingly little is known about the neural mechanisms underlying this reinforcement. The operant sensation seeking (OSS) model is a robust model for obtaining sensory self-administration in the mouse, allowing the study of neural mechanisms important in sensory reinforcement24. An additional advantage of OSS is the ability to screen mutant mice for differences in operant behavior that may be relevant to addiction. We have reported that dopamine D1 receptor knockout mice, previously shown to be deficient in psychostimulant self-administration, also fail to acquire OSS24. This is a unique finding in that these mice are capable of learning an operant task when food is used as a reinforcer. While operant studies using food reinforcement can be useful in the study of general motivated behavior and the mechanisms underlying food reinforcement, as mentioned above, these studies are limited in their application to studying molecular mechanisms of drug addiction. Thus, there may be similar neural substrates mediating sensory and psychostimulant reinforcement that are distinct from food reinforcement, which would make OSS a particularly attractive model for the study of drug addiction processes. The degree of overlap between other molecular targets of OSS and drug reinforcers is unclear, but is a topic that we are currently pursuing. While some aspects of addiction such as resistance to extinction may be observed with OSS, we have found that escalation 25 is not observed in this model24. Interestingly, escalation of intake and some other aspects of addiction are observed with self-administration of sucrose26. Thus, when non-drug operant procedures are desired to study addiction-related processes, food or sensory reinforcers can be chosen to best fit the particular question being asked. 
In conclusion, both food self-administration and OSS in the mouse have the advantage of not requiring an intravenous catheter, which allows a higher throughput means to study the effects of pharmacological or genetic manipulation of neural targets involved in motivation. While operant testing using food as a reinforcer is particularly useful in the study of the regulation of food intake, OSS is particularly apt for studying reinforcement mechanisms of sensory stimuli and may have broad applicability to novelty seeking and addiction.

In this protocol we describe a method of operant learning using sensory stimuli as a reinforcer in the mouse. It requires no prior training or food restriction, and it allows the study of motivated behavior without the use of a pharmacological or natural reinforcer such as food.

Sensation Seeking אופרנטית ב העכבר

Operant methods are powerful behavioral tools for the study of motivated behavior.  These 'self-administration' methods have been used extensively in drug ...

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

שיטה כללית להערכת דגירה של השתוקקות סוכרוז בחולדות

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity to normally innocuous stimuli1. Hyperalgesia and allodynia have been studied in many different rodent models of diabetes mellitus2. However, as stated by B&ouml;lcskei et al, determination of "pain" in animal models is challenging due to its subjective nature3. Moreover, the traditional methods used to determine behavioral responses to noxious thermal stimuli usually lack reproducibility and pharmacological sensitivity3. For instance, by using the hot-plate method of Ankier4, flinch, withdrawal and/or licking of either hind- and/or fore-paws is quantified as reflex latencies at constant high thermal stimuli (52-55 &deg;C). However, animals that are hyperalgesic to thermal stimulus do not reproducibly show differences in reflex latencies using those supra-threshold temperatures3,5. As the recently described method of B&ouml;lcskei et al.6, the procedures described here allows for the rapid, sensitive and reproducible determination of thermal nociceptive thresholds (TNTs) in mice and rats. The method uses slowly increasing thermal stimulus applied mostly to the skin of mouse/rat plantar surface. The method is particularly sensitive to study anti-nociception during hyperalgesic states such as PDN. The procedures described bellow are based on the ones published in detail by Alm&aacute;si et al 5 and B&ouml;lcskei et al 3. The procedures described here have been approved the Laboratory Animal Care and Use Committee (LACUC), Wright State University.

Here, we describe a rapid reliable and simple procedure to determine the lowest temperature at which rats or mice show nocifensive behavior, i.e. the thermal nociceptive threshold (TNT). This method applies a slowly increasing thermal stimulus allowing precise and reproducible estimation of TNTs with minimum, if any, stress to the animals.

קביעה מהירה של סף nociceptive תרמי בעכברים סוכרתיים

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity ...

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C. elegans genome includes potential antipsychotic drug (APD) targets conserved in humans, including genes encoding proteins required for neurotransmitter synthesis and for synaptic structure and function. APD exposure produces developmental delay and/or lethality in nematodes in a concentration-dependent manner. These phenotypes are caused, in part, by APD-induced inhibition of pharyngeal pumping1,2. Thus, the developmental phenotype has a neuromuscular basis, making it useful for pharmacogenetic studies of neuroleptics. Here we demonstrate detailed procedures for testing APD effects on nematode development and pharyngeal pumping. For the developmental assay, synchronized embryos are placed on nematode growth medium (NGM) plates containing APDs, and the stages of developing animals are then scored daily. For the pharyngeal pumping rate assay, staged young adult animals are tested on NGM plates containing APDs. The number of pharyngeal pumps per unit time is recorded, and the pumping rate is calculated. These assays can be used for studying many other types of small molecules or even large molecules.

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Approaches for testing the effects of antipsychotic drugs (APDs) in Caenorhabditis elegans are demonstrated. Assays are described for testing drug effects on development and viability and on pharyngeal pumping rate. These methods are also applicable for pharmacogenetic experiments with drug classes other than APDs.

שיטות לחקר מנגנוני פעולה של אנטי פסיכוטיות סמים ב<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to  large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C.  ...

A Procedure for Implanting Organized Arrays of Microwires for Single-unit Recordings in Awake, Behaving Animals

In vivo electrophysiological recordings in the awake, behaving animal provide a powerful method for understanding neural signaling at the single-cell level. The technique allows experimenters to examine temporally and regionally specific firing patterns in order to correlate recorded action potentials with ongoing behavior. Moreover, single-unit recordings can be combined with a plethora of other techniques in order to produce comprehensive explanations of neural function. In this article, we describe the anesthesia and preparation for microwire implantation. Subsequently, we enumerate the necessary equipment and surgical steps to accurately insert a microwire array into a target structure. Lastly, we briefly describe the equipment used to record from each individual electrode in the array. The fixed microwire arrays described are well-suited for chronic implantation and allow for longitudinal recordings of neural data in almost any behavioral preparation. We discuss tracing electrode tracks to triangulate microwire positions as well as ways to combine microwire implantation with immunohistochemical techniques in order to increase the anatomical specificity of recorded results.

Implanting organized arrays of microwires for use in single-unit electrophysiological recordings presents a number of technical challenges.&#160;Methods for performing this technique and the equipment necessary are described.&#160;Also, the beneficial use of organized microwire arrays to record from distinct neural subregions with high spatial selectivity is discussed.

הליך השתלת מערכים מאורגנים של Microwires להקלטות יחידה אחת בAwake, מתנהגת בעלי חיים

In vivo electrophysiological recordings in the awake, behaving animal provide a powerful method for understanding neural signaling at the single-cell ...

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

Muscle sensory neurons innervating muscle spindles and Golgi tendon organs encode length and force changes essential to proprioception. Additional afferent fibers monitor other characteristics of the muscle environment, including metabolite buildup, temperature, and nociceptive stimuli. Overall, abnormal activation of sensory neurons can lead to movement disorders or chronic pain syndromes. We describe the isolation of the extensor digitorum longus (EDL) muscle and nerve for in vitro study of stretch-evoked afferent responses in the adult mouse. Sensory activity is recorded from the nerve with a suction electrode and individual afferents can be analyzed using spike sorting software. In vitro preparations allow for well controlled studies on sensory afferents without the potential confounds of anesthesia or altered muscle perfusion. Here we describe a protocol to identify and test the response of muscle spindle afferents to stretch. Importantly, this preparation also supports the study of other subtypes of muscle afferents, response properties following drug application and the incorporation of powerful genetic approaches and disease models in mice.

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

Muscle sensory neurons are involved in proprioceptor signaling and also report on metabolic state and injury related events. We describe an adult mouse in vitro muscle-nerve preparation for studies on stretch-activated muscle afferents.

<em&gt; במבחנה</emהכנת שרירים עצבים&gt; עכבר למבוגרים ללימוד מאפייני ירי afferents השריר

Muscle sensory neurons innervating muscle spindles and Golgi tendon organs encode length and force changes essential to proprioception. Additional ...

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This complex behavior is influenced by genetic, hormonal and environmental factors. As in many organisms, previous fighting experience influences the fighting strategy of flies and the outcome of later contests: losing a fight increases the probability of losing later contests, revealing &#34;loser&#34; effects that likely involve learning and memory 2-4. The learning and memory that accompanies expression of complex social behaviors like aggression, is sensitive to pre-test handling of animals 5,6. Many experimental procedures are used in different laboratories to study aggression 7-9, however, no routinely used protocol that excludes handling of flies is currently available. Here, we report a new behavioral apparatus that eliminates handling of flies, using instead their innate negative geotactic responses to move animals into or out of fighting chambers. In this protocol, small circular fight arenas containing a food cup are divided into two equal halves by a removable plastic slider prior to introduction of flies. Flies enter chambers from their home isolation vials via sliding chamber doors and geotaxis. Upon removal of plastic sliders, flies are free to interact. After specified time periods, flies are separated again by sliders for subsequent experimentation. All of this is done easily without handling of individual flies. This apparatus offers a novel approach to study aggression and the associated learning and memory, including the formation of &#34;loser&#34; effects in fly fights. In addition, this new general-purpose behavioral apparatus can be employed to study other social behaviors of flies and should, in general, be of interest for investigating experience-related changes in fundamental behavioral processes.

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

During fruit fly fights, the behavioral patterns observed, fight dynamics, and associated learning and memory are influenced by experimental conditions. The protocol presented here describes a novel procedure that entirely eliminates handling of flies during experiments. This improves fight dynamics and allows formation of strong &#34;loser&#34; effects.

גישה חדשה שמבטל טיפול לחקר תוקפנות והשפעת &quot;לוזר&quot; ב<em&gt; תסיסנית melanogaster</em

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

דרך פשוטה למדוד שינויים בהתנהגות שוחרת זכה שימוש<em&gt; תסיסנית</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

A Protocol for Measuring Cue Reactivity in a Rat Model of Cocaine Use Disorder

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue reactivity, the sensitivity to cues previously linked with the drug-taking experience, plays a prominent role in human craving during abstinence. Cue reactivity can be assessed as the attentional orientation toward drug-associated cues that is measurable as appetitive approach behavior in both preclinical and human studies. Herein describes an assessment of cue reactivity in rats trained to self-administer cocaine. Cocaine self-administration is paired with the presentation of discrete cues that act as conditioned reinforcers (i.e., house light, stimulus light, infusion pump sounds). Following a period of abstinence, lever presses in the cocaine self-administration context accompanied by the discrete cues previously paired with cocaine infusion are measured as cue reactivity. This model is useful to explore neurobiological mechanisms underlying cue reactivity processes as well as to assess pharmacotherapies to suppress cue reactivity and therefore, modify relapse vulnerability. Advantages of the model include its translational relevance, and its face and predictive validities.&#160;The primary limitation of the model is that the cue reactivity task can only be performed infrequently and must only be used in short duration (e.g., 1 hour), otherwise rats will begin to extinguish the pairing of the discrete cues with the cocaine stimulus. The model is extendable to any positively reinforcing stimulus paired with discrete cues; though particularly applicable to drugs of abuse, this model may hold future applications in fields such as obesity, where palatable food rewards can act as positively reinforcing stimuli.

Cue reactivity is conceptualized as sensitivity to cues linked with drug-taking experiences that contribute to craving and relapse in abstinent humans. Cue reactivity is modeled in rats by measuring attentional orientation toward drug-associated cues that results in appetitive approach behavior in a cue reactivity test following self-administration and forced abstinence.

פרוטוקול למדידת Cue תגובתיות במודל של עכברים של הפרעה לשימוש בקוקאין

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue ...