המחברים מבקשים להודות לאנני לי ומורין בירן על עזרתם בהקמת פרוטוקול העדפת המקום המותנה הממושך.

כל ההליכים מתבצעים בהתאם לטיפול Weill Cornell Medical College בבעלי החיים המוסדי וכללי ועדת שימוש. 1. הכנה והתקנה עבור משלוח Stereotaxic של וקטורים ויראליים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם מכשיר, ספוגית סטרילית, או יד לובשת כפפה סטרילית מזוהם באים במגע עם משטח שאינו סטריליים, לבטל או לעקר מחדש את המכשיר באמצעות מעקר חרוז חם, לבטל או לשנות את ספוגית לכפפות סטריליות חדשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצב כלוב עכבר עם מצעים על גוש חום כדי לחמם להחלמה שלאחר ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את מכונת גילוח חשמלית לגילוח הראש ואתנול ויוד לחיטוי הקרקפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את סורגי אוזן ולהחזיק את הפה של stereotax עם 70% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מזרק המילטון 5 μl, לצייר עד 5 μl של וקטור ויראלי (1 x 10 6 / μl חלקיקים נגיפיים) ולהקים בבעל מזרק בstereotax. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כרית חימום במיקרוגל או להפוך כרית חשמלית עלמקום שני בstereotax. לכסות עם כרית סופגת נקיות כדי להפחית את הסיכון לכוויות. צג טמפרטורת גוף עכבר (שבין 97-99.5 מעלות פרנהייט) בתדירות גבוהה לאורך כל הליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק עכבר (במשקל של בין 22-35 g) בתערובת של קטמין (100 מ&quot;ג / ק&quot;ג) וxylazine (20 מ&quot;ג / ק&quot;ג). ברגע שעכבר הוא מורדם, קצה זנב קמצוץ כדי לבדוק את הרפלקסים של העכבר ושים לב כל תנועה או תגובה על מנת להבטיח שהעכבר הוא מורדם כראוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הראש בין אוזניים ועיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לנקות את הראש מגולח עם לסירוגין applicators כותנה סטריליים אתנול ויוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את העכבר למשטח מחומם בstereotax. </li></ol> 2. Microinjection Stereotaxic של וקטורים ויראליים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללבוש כפפות סטריליות במהלך הניתוח. אם כפפות מזוהמות בכל נקודה על ידי נגיעה משטחים שאינם סטריליים, לשנות את הכפפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בר שן אפס קשקשים ואוזן בר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר שיניים בבר שן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בורג בפרצופו. אם נענוע או מהלך זיףment יצוין, בכל עת, לנהל חיסון דחף IP (~ 0.05 סמ&quot;ק) מתערובת של קטמין (100 מ&quot;ג / ק&quot;ג) וxylazine (20 מ&quot;ג / ק&quot;ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בורג בברים אוזניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמן את העיניים עם PuraLube. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את הקרקפת פתוחה לממש מאחורי אוזניים עם אזמל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קליפים בולדוג מקום בפינות של הקרקפת כדי לקלף את העור מהגולגולת. גבחת ומבדה צריכה להיות גלויה לעין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך תפר בטוח מגבחת למבדה מיושרת ישר. אם התפר הוא מיצוב להסתגל עקום של הראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו כדי לוודא שכל ההגדרות בstereotax הם התביית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים מחט קצה במקום בגבחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את כל הקואורדינטות עבור שניהם גבחת ולמבדה. זה כולל קואורדינטות גב / הגחון, המדיאלי / לרוחב וקדמית / אחורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את הראש עד שקואורדינטות הגחון לגבחת ומבדה נמצאות ב0.02 מ&quot;מ של כל אחד אחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שמיושר, מגבחת הולכים מדיאלית החוצה לקואורדינטות המדיאלי / רוחב (מ &#39;/ ל&#39;). לוודאהצדדים ימני והשמאליים מיושרים בתוך 0.02 מ&quot;מ של כל אחד אחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קצה מחט מחדש מרכז בגבחת ומשם לנוע בכיוון הקדמי / אחורי (/ P) כדי לתאם הקדמי / אחורי הרצויים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם מחט צורך, זווית בכיוון אחד ולוודא stereotax נעול. לצאת לM / L לתאם השמאלי (+ / - 1.52) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את עמדת הגחון של החלק העליון של הגולגולת להשתמש כהפניה לאחר הקידוח הוא קדח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדוח קידוח באמצעות מקדח סטרילי בקואורדינטות הרצויה. בדקו שהמחט יכולה להיכנס ללא הפרעה דרך הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנמיכים את המחט לקואורדינטות הגחון הרצויה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהוא הגיע לתאם, לטבול 0.015 מ&quot;מ מתחת ל~ 10 שניות כדי ליצור כיס קטן לוקטור ויראלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק את הנפח הרצוי של וקטור ויראלי בשיעור של 0.1 ~ μl / דקה. לחכות 3 דקות לוקטור ויראלי לנטרל לחלוטין. הרם את קצה מחט מ&quot;מ 0.015 ולחכות 2 דקות נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">טובלים את המחט (אם עושה זריקות זווית) בכיוון ההפוך. שוב, להקליט את מיקום הגחון כהתייחסות לחלק העליון של הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על אותם השלבים כמו בצד הראשון להזריק וקטור ויראלי בצד השני (אם עושה זריקות דו צדדיות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל שעוות עצם לשני החורים כדי לאטום אותם באמצעות סוף העץ של קצה מוליך כותנה סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר את הקרקפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל בלוק עצבי לאזור הפגוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את העכבר מstereotax ומקום בכלוב בחום לחסום חימם להתאושש במשך 45 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקוב אחר סימנים של כאב, כולל: ירידה בפעילות כללית או חוסר מנוחה, ירידה בצריכת מזון ומים או ניקוד מוגבר. יכולות להינתן פעמיים ביום במשך שבוע במידת צורך לכאב - עצירות (0.2 מ&quot;ג / ק&quot;ג 0.05). חלופות מקובלות כוללות: meperidine (20-60 מ&quot;ג / ק&quot;ג), סחרחורת (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג), nalbuphine (4-8 מ&quot;ג / ק&quot;ג). </li></ol> 3. העדפות מקום אוויר: Acquisition, הכחדה, והחזרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברי מקום לחדר המרכזי של מנגנון העדפת מקום השלוש קאמרי (מד Associates Inc, סנט אלבנס, ורמונט, ארה&quot;ב) לתקופה של 60 שניות הרגלה עם דלתות סגורות הגיליוטינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר התרגלות, דלתות הגיליוטינה פתוחות ולאפשר חיפושי עכברים ללא כל 3 התאים ל1,200 שניות, עם זמן מושקע בכל תא שהוקלט באמצעות התוכנה הרביעית MedPC (מד Associates, Inc). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת עכברים לתאי מיזוג המבוססים על הביצועים שלהם במהלך המבחן מראש. באמצעות עיצוב, תרופות צמד מוטות במהלך 3 ימים שלאחר מכן עם התא שהיה הכי פחות מועדף במבחן מראש תחילת המחקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בימי מיזוג 3 הבאים, להזריק עכברים עם קוקאין (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג; IP) במהלך ישיבת הבוקר ולהגביל אותם בחדר שהוקצה להם ל1,200 שניות מייד לאחר ההזרקה. להחזיר עכברים לכלובים בביתם לאחר הפגישה. לאחר 4 שעות, להזריק עכברים עם מי מלח (0.01 מ&quot;ל / גרםמשקל גוף) ולהגביל אותם לתא ההפוך למושב 1,200 שניות אחר הצהריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבדוק לרכישה, עכברי מקום בתא המרכזי עם דלתות הגיליוטינה נסגרו לתקופה התרגלות שנייה 60. הגיליוטינה דלתות פתוחות ולאפשר חקירה ללא תשלום עבור 1,200 שניות, עם זמן מושקע בכל התאים שתועדו על ידי התוכנה הרביעית MedPC (מד Associates, Inc). חישוב העדפה על ידי הפחתת כמות הזמן שבילתה בתא מלוחים לזווג מכמות הזמן שבילתה בתא קוק לזווג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לכבות את העדפת המקום, תחשוף עכברים לשני מפגשי 20 דקות של חיפושים חופשיים יומי באותו המנגנון, מופרדים על ידי לפחות 2 שעות, 24 שעות לאחר תחילת המבחן לרכישה. שוב המשך זמן בכל התאים צריך להיות מוקלט וסדר הגודל של CPP הראשוני צריך להיות בהשוואה לזה של כל מושב הכחדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע אם עכברים כיבו את העדפת תוצאת משימוש בסמים על ידי בחינת האם העדפת נקובקאמרי ticular על פני יומיים רצופים הכחדה הוא נמוך באופן משמעותי בהשוואה לציון העדפת הרכישה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר עכברים עם מנה תחול בקוקאין (5 או 10 מ&quot;ג / ק&quot;ג; IP) ולחשוף מחדש למנגנון המאפשר חקירה החופשית ולהקליט את משך זמן בכל תא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל פתרון המתת חסד Euthasol (150 מ&quot;ג / ק&quot;ג). Transcardially perfuse עכברים עם paraformaldehyde 4% (PFA) ולבצע בדיקה היסטולוגית כדי לאמת את מיקום microinjection נכון. </li></ol>

<ol>
	<li>Nestler, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+neurobiology+of+addiction.">Molecular neurobiology of addiction.</a> American Journal on Addictions. 10 (3), (2001).</li><li>Thomas, M. J., Kalivas, P. W., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroplasticity+in+the+mesolimbic+dopamine+system+and+cocaine+addiction.">Neuroplasticity in the mesolimbic dopamine system and cocaine addiction.</a> British Journal of Pharmacology. 154 (2), (2008).</li><li>Robinson, T. E., Browman, K. E., Crombag, H. S., Badiani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+the+induction+or+expression+of+psychostimulant+sensitization+by+the+circumstances+surrounding+drug+administration.">Modulation of the induction or expression of psychostimulant sensitization by the circumstances surrounding drug administration.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 22 (2), (1998).</li><li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+(CPP)+paradigm:+update+of+the+last+decade.">Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade.</a> Addiction Biology. 12 (3-4), (2007).</li><li>Mueller, D., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine-induced+conditioned+place+preference:+reinstatement+by+priming+injections+of+cocaine+after+extinction.">Cocaine-induced conditioned place preference: reinstatement by priming injections of cocaine after extinction.</a> Behavioural Brain Research. 115 (1), (2000).</li><li>Itzhak, Y., Martin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine-induced+conditioned+place+preference+in+mice:+Induction,+extinction+and+reinstatement+by+related+psychostimulants.">Cocaine-induced conditioned place preference in mice: Induction, extinction and reinstatement by related psychostimulants.</a> Neuropsychopharmacology. 26 (1), (2002).</li><li>Kreibich, A. S., Blendy, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cAMP+response+element-binding+protein+is+required+for+stress+but+not+cocaine-induced+reinstatement.">cAMP response element-binding protein is required for stress but not cocaine-induced reinstatement.</a> Journal of Neuroscience. 24 (30), (2004).</li><li>Obrien, C. P., Childress, A. R., McLellan, T., Ehrman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrating+systematic+cue+exposure+with+standard+treatment+in+recovering+drug+dependent+patients.">Integrating systematic cue exposure with standard treatment in recovering drug dependent patients.</a> Addictive Behaviors. 15 (4), (1990).</li><li>O'Brien, C. P., Childress, A. R., McLellan, A. T., Ehrman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+learning+model+of+addiction.">A learning model of addiction.</a> Research publications - Association for Research in Nervous and Mental Disease. 70, (1992).</li><li>Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychological+and+neural+mechanisms+of+relapse.">Psychological and neural mechanisms of relapse.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 363 (1507), (2008).</li><li>Bueler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno+associated+viral+vectors+for+gene+transfer+and+gene+therapy.">Adeno associated viral vectors for gene transfer and gene therapy.</a> Biological Chemistry. 380, (1999).</li><li>Xiao, X., Li, J., McCown, T. J., Samulski, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+by+adeno-associated+virus+vectors+into+the+central+nervous+system.">Gene transfer by adeno-associated virus vectors into the central nervous system.</a> Experimental Neurology. 144 (1), (1997).</li><li>Alexander, I. E., Russell, D. W., Spence, A. M., Miller, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+gamma+irradiation+on+the+transduction+of+dividing+and+nondividing+cells+in+brain+and+muscle+of+rats+by+adeno-associated+virus+vectors.">Effects of gamma irradiation on the transduction of dividing and nondividing cells in brain and muscle of rats by adeno-associated virus vectors.</a> Human Gene Therapy. 7 (7), (1996).</li><li>Schierberl, K., Hao, J., Tropea, T. F., Ra, S., Giordano, T. P., Xu, Q., Garraway, S. M., Hofmann, F., Moosmang, S., Striessnig, J., Inturrisi, C. E., Rajadhyaksha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca(v)1.2+L-Type+Ca2++Channels+Mediate+Cocaine-Induced+GluA1+Trafficking+in+the+Nucleus+Accumbens,+a+Long-Term+Adaptation+Dependent+on+Ventral+Tegmental+Area+Ca(v)1.3+Channels.">Ca(v)1.2 L-Type Ca2+ Channels Mediate Cocaine-Induced GluA1 Trafficking in the Nucleus Accumbens, a Long-Term Adaptation Dependent on Ventral Tegmental Area Ca(v)1.3 Channels.</a> Journal of Neuroscience. 31 (38), (2011).</li><li>Schierberl, K., Giordano, T., Satpute, S., Hao, J., Kaur, G., Hofmann, F., Moosmang, S., Striessnig, J., Rajadhyaksha, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca(v)1.3+L-type+Ca2++channels+mediate+long-term+adaptation+in+dopamine+D2L-mediated+GluA1+trafficking+in+the+dorsal+striatum+following+cocaine+exposure.">Ca(v)1.3 L-type Ca2+ channels mediate long-term adaptation in dopamine D2L-mediated GluA1 trafficking in the dorsal striatum following cocaine exposure.</a> Channels. 6 (1), 11-17 (2012).</li><li>Nestler, E. J., Bergson, C. M., Gultart, X., Hope, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+neural+gene+expression+in+opiate+and+cocaine+addiction.">Regulation of neural gene expression in opiate and cocaine addiction.</a> NIDA Research Monograph. 125, (1993).</li><li>Hyman, S. E., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addiction+and+the+brain:+The+neurobiology+of+compulsion+and+its+persistence.">Addiction and the brain: The neurobiology of compulsion and its persistence.</a> Nature Reviews Neuroscience. 2 (10), (2001).</li><li>Lee, A. S., Ra, S., Rajadhyaksha, A. M., Britt, J. K., De Jesus-Cortes, H., Gonzales, K. L., Lee, A., Moosmang, S., Hofmann, F., Pieper, A. A., Rajadhyaksha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forebrain+elimination+of+cacna1c+mediates+anxiety-like+behavior+in+mice.">Forebrain elimination of cacna1c mediates anxiety-like behavior in mice.</a> Molecular Psychiatry. 17 (11), (2012).</li><li>Li, X., Wolf, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+virus-infected+brain+regions+using+a+GFP-illuminating+flashlight+enables+accurate+and+rapid+dissection+for+biochemical+analysis.">Visualization of virus-infected brain regions using a GFP-illuminating flashlight enables accurate and rapid dissection for biochemical analysis.</a> Journal of Neuroscience Methods. 201 (1), 177-179 (2011).</li><li>Ahmed, B. Y., Chakravarthy, S., Eggers, R., Hermens, W., Zhang, J. Y., Niclou, S. P., Levelt, C., Sablitzky, F., Anderson, P. N., Lieberman, A. R., Verhaagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+delivery+of+Cre-recombinase+to+neurons+in+vivo+and+stable+transduction+of+neurons+using+adeno-associated+and+lentiviral+vectors+-+art.+no.+5.">Efficient delivery of Cre-recombinase to neurons in vivo and stable transduction of neurons using adeno-associated and lentiviral vectors - art. no. 5.</a> BMC Neuroscience. 5, (2004).</li><li>Kaspar, B. K., Vissel, B., Bengoechea, T., Crone, S., Randolph-Moore, L., Muller, R., Brandon, E. P., Schaffer, D., Verma, I. M., Lee, K. F., Heinemann, S. F., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+virus+effectively+mediates+conditional+gene+modification+in+the+brain.">Adeno-associated virus effectively mediates conditional gene modification in the brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (4), 2320-2325 (2002).</li><li>Neve, R. L., Neve, K. A., Nestler, E. J., Carlezon, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+herpes+virus+amplicon+vectors+to+study+brain+disorders.">Use of herpes virus amplicon vectors to study brain disorders.</a> Biotechniques. 39 (3), 9 (2005).</li><li>Pohl, M., Braz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+of+pain:+emerging+strategies+and+future+directions.">Gene therapy of pain: emerging strategies and future directions.</a> European Journal of Pharmacology. 429 (1-3), (2001).</li><li>Rinaldi, A., Marshall, K. R., Preston, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-cytotoxic+herpes+simplex+virus+vector+which+expresses+Cre+recombinase+directs+efficient+site+specific+recombination.">A non-cytotoxic herpes simplex virus vector which expresses Cre recombinase directs efficient site specific recombination.</a> Virus Research. 65 (1), (1999).</li><li>Choi, V. W., McCarty, D. M., Samulski, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV+hybrid+serotypes:+Improved+vectors+for+gene+delivery.">AAV hybrid serotypes: Improved vectors for gene delivery.</a> Current Gene Therapy. 5 (3), (2005).</li><li>Passini, M. A., Dodge, J. C., Bu, J., Yang, W., Zhao, Q., Sondhi, D., Hackett, N. R., Kaminsky, S. M., Mao, Q. W., Shihabuddin, L. S., Cheng, S. H., Sleat, D. E., Stewart, G. R., Davidson, B. L., Lobel, P., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+delivery+of+CLN2+reduces+brain+pathology+in+a+mouse+model+of+classical+late+infantile+neuronal+ceroid+lipofuscinosis.">Intracranial delivery of CLN2 reduces brain pathology in a mouse model of classical late infantile neuronal ceroid lipofuscinosis.</a> Journal of Neuroscience. 26 (5), (2006).</li><li>Samulski, R. J., Chang, L. S., Shenk, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helper-free+stocks+of+recombinant+adeno-associated+viruses+-+normal+integration+does+not+require+viral+gene-expression.">Helper-free stocks of recombinant adeno-associated viruses - normal integration does not require viral gene-expression.</a> Journal of Virology. 63 (9), (1989).</li><li>Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., Omalley, K. L., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+gene-expression+and+phenotypic+correction+using+adenoassociated+virus+vectors+in+the+mammalian+brain.">Long-term gene-expression and phenotypic correction using adenoassociated virus vectors in the mammalian brain.</a> Nature Genetics. 8 (2), (1994).</li><li>Johansen, J. P., Hamanaka, H., Monfils, M. H., Behnia, R., Deisseroth, K., Blair, H. T., LeDoux, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+activation+of+lateral+amygdala+pyramidal+cells+instructs+associative+fear+learning.">Optical activation of lateral amygdala pyramidal cells instructs associative fear learning.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (28), (2010).</li><li>Zhang, F., Gradinaru, V., Adamantidis, A. R., Durand, R., Airan, R. D., de Lecea, L., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+interrogation+of+neural+circuits:+technology+for+probing+mammalian+brain+structures.">Optogenetic interrogation of neural circuits: technology for probing mammalian brain structures.</a> Nature Protocols. 5 (3), (2010).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

אזורי ואבלציה גן temporally הספציפית באמצעות microinjection stereotaxic של וקטורים ויראליים בשילוב עם CPP הכולל הכחדה ושלבי כינון מאפשרת חקירה של התרומות הספציפיות של גנים לשלושה שלבים ברורים של התנהגות דמוית ממכרת. בעוד נוקאאוט המותנה שמושג תוך ניצול מערכת Cre-LoxP המסורתי מספק למרחב ב?...

קוקאין הוא psychostimulant מאוד מחזק. בעקבות חשיפה חוזרת ונשנית, כמה עיבודים מולקולריים ותאיים מתרחשים בפרס רלוונטי-מעגלי מוח שהם האמינו לגרום כפייתיים סמים התנהגות חיפוש, מה שגרם שיעור גבוה של הישנות אשר מהווה בעיה רצינית 1 קלינית. קוקאין מפעיל השפעות התנהגותיות ארוכת טווח אלה על ידי ויסות ביטוי גנים. כדי ללמוד את ההתאמות הנובעות משימוש בקוק כרוני, היו בשימוש נרחב במודלים של מכרסמים פרה. מודל אחד כזה הוא העדפת פרדיגמה המקום מותנה (CPP). מודל זה כולל את הפיתוח של עמותה למדה בין סביבה ניטראלית בעבר ואת המאפיינים המתגמלים של קוקאין. לאחר כמה זיווגים של קוקאין בחדר מסוים, בעלי חיים מותר לחקור בחופשיות את סביבת קוק לזווג ולא קוק לזווג ואם הם מעדיפים את תא סמים לזווג, הם אמרו שרכשו plac קוקאין-Inducedהעדפת דואר. יתר על כן, לאחר תקופת הכשרת הכחדה, יכולה לשמש פרדיגמה זו כדי ללמוד כינון הקשר ספציפי של שוחרת קוקאין התנהגות. בהשוואה לדגמים אחרים של התנהגות כמו התנהגות ממכרת, כגון רגישות פסיכומוטורי, המשמש למחקר ארוך טווח התנהגות מושרה קוקאין ופלסטיות מולקולרית 2,3 וממשל עצמי (SA), כי הוא חשב בצורה מדויקת יותר לחקות ממכר כמו התנהגות שנמצאה בבני אדם, את הפרדיגמה CPP היא הליך פשוט ללמוד קוקאין למידה קונטקסטואלית 4. פרוטוקולי CPP יכולים להתארך בנוחות ולכלול את הכחדת שלבי שבה, בדומה לSA, המאפשר חקירה של המנגנונים שבבסיס תשוקת סמים והישנות 5-7 ואשר האמינו לשחזר היבטים של מה שמתרחש באדם תרופה שוחרת התנהגות וסמים - וקיו-Induced הישנות 8-10. מנגנון אחד שעומד בבסיסקוקאין-induced פלסטיות התנהגותית שאופיינית לכל אחד מהשלבים שונים של CPP, כולל רכישה, הכחדה, ושבה, היא הפעלה של חתימות ייחודיות של ביטוי גנים באזורים שונים במוח. כדי לבחון ישירות אילו גנים בתוך אזורים במוח גמול רלוונטיים לתווך-Induced קוקאין שינויים התנהגותיים, הוא שימושי כדי להיות מסוגל לתפעל אותם באופן סלקטיבי באופן אזורי ספציפי. אחת דרכים להשגת מטרה זו היא microinject רקומביננטי adenoassociated וקטורים (rAAV) נגיפיים שהמפורש Cre recombinase באמצעות ניתוח stereotaxic, לאזורים במוח שונים של עכברים שיש להם גני המטרה מוקפים אתרי loxP (עכברי floxed). שיטה זו מאפשרת שליטה זמנית ואזורית מאוד מדויקת על מתי והיכן גנים ablated, בשני נוירונים מתחלקים ולא החלוקה, ללא גרימת תגובה חיסונית 11-13. רמה זו של שליטה מייצגת יתרון חשוב על פני טכנולוגיית Cre-LoxP המסורתי של רבייה עכברי floxed wעכברי ith מבטאים Cre recombinase תחת השליטה של ​​אמרגן גן אנדוגני, שבעיתוי וההפצה של מחיקת גן יכולים להיות מוסדרות יותר בחוזקה. בנוסף, נוקאאוט גן וקטור ויראלי עוקף בתיווך השפעות התפתחותיות פיצוי פוטנציאלי שעלולים להתרחש באמצעות אסטרטגיות נוקאאוט מסורתיות. בנוסף לקוקאין CPP, שתואר כאן, microinjection של rAAV-Cre לתוך המוח של עכברי floxed כדי להעריך את התפקיד של גנים ספציפיים יכול להיות מיושם בכל מקום בגוף לפרדיגמות התנהגות הכרוכים בשלבים נפרדים, ובכלל זה ניהול עצמי ורגישות פסיכומוטורי. לדוגמה, במעבדה שלנו ניצל את טכנולוגית rAAV-Cre כדי ללמוד את התפקיד של CA v 1.2 ליטר מסוג Ca 2 + ערוצים ברגישות פסיכומוטורי קוקאין 14. באופן ספציפי, rAAV-Cre היה microinjected לתוך גרעין האקומבנס (NAC) של עכברים עם גן קידוד Ca V 1.2 floxed, על מנת להוכיח כי Ca V </sub&gt; 1.2 הפועל באזור זה מתווך את שלב הביטוי של רגישות פסיכומוטורי 14,15. עם זאת, לא ניתן להשתמש באסטרטגיה rAAV-Cre אם עכברים עם גן floxed של עניין לא קיימים, כפי שהיה הניסיון שלנו בעת הערכת התפקיד של CA v 1.3 ליטר מסוג Ca 2 + ערוצים ברגישות פסיכומוטורי. לפיכך, מגבלה של שימוש rAAV-Cre מציגה את עצמו אם עכברים מותנים אינם קיימים לגן מסוים של עניין. עם זאת, rAAVs שsiRNA המפורש ניתן להשתמש בם למציאת גני המטרה, כפי שעשינו כדי לבחון את התפקיד של CA v 1.3 הערוצים 14,15. Microinjecting rAAV-Cre לאזורים נפרדים במוח של עכברי floxed ולאחר מכן בודק אותם בפרדיגמה CPP מאפשר לחקירה את הגנים הספציפיים המתווכים את השלבים השונים של התנהגות דמוית הממכר ושבו הם פועלים. השימוש בפרדיגמה זו סייעה בהבנתנו כיצד ממשל קוקאין החוזר ונשנה במהות חוטפת brמעגלי גמול ains גורמים לשינויים הסתגלותי במסלולי העברת אותות מולקולריים וביטוי גנים שיובילו למדינה המכורה 1,16,17.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditioned place preference activity chambers</td>
			<td>Med Associates, Inc., St. Albans, VT, USA</td>
			<td>MED-CPP-MS</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic alignment system for mouse</td>
			<td>David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA</td>
			<td>model 900</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringes</td>
			<td>Hamilton Company, Reno, Nevada, USA</td>
			<td>7634-01</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rAAV2-Cre-GFP</td>
			<td>Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA</td>
			<td>7016</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rAAV2-GFP</td>
			<td>Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA</td>
			<td>7004</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereotaxic microinjection of viral vectors expressing cre recombinase to study the role of target genes in cocaine conditioned place preference

Microinjecting רקומביננטי adenoassociated וקטורים (rAAV) נגיפיים המבטאים Cre recombinase לאזורים במוח עכבר ברורים לסלקטיבי גני נוקאאוט של עניין מאפשר שליטה באופן זמני ואזורי ספציפית משופרת של מחיקת גן, בהשוואה לשיטות קיימות. אמנם גם יכולה להיות מושגת על ידי מחיקה מותנית הזדווגות עכברים שמבטאים Cre recombinase תחת שליטת יזמים גנים ספציפיים עם עכברים שנשאו גן floxed, microinjection stereotaxic מאפשר מיקוד של אזורי מוח בדידים בנקודות זמן שנקבעו הנסיין של עניין. בהקשר של העדפת קוקאין מותנית מקום, ופרדיגמות התנהגות אחרות כגון קוקאין מנהל עצמי או רגישות פסיכומוטורי שיכול להיות כרוך בנסיגה, הכחדה ו / או שלבי כינון, טכניקה זו שימושית במיוחד בחקר תרומתו הייחודית של גני המטרה ברורים לאלה שלבים של מודלים התנהגותיים של פלסטיות-Induced קוקאין. באופן ספציפי,טכניקה זו מאפשרת לאבלציה סלקטיבית של גני המטרה במהלך שלבים של התנהגות כדי לבחון את תרומתם להתנהגות על פני זמן בדידים. סופו של דבר, הבנה זו מאפשרת לתרופות ממוקדות יותר כי הם מסוגלים הטובים ביותר לטפל בגורמי הסיכון החזקים ביותר שמציגים את עצמם במהלך כל שלב של התנהגות ממכרת.

CPP לאחר ביצוע CPP על עכברי microinjected, צריך לוודא שהקבוצה של שליטה המוזרקת (rAAV-GFP) העכברים בדרך כלל רכשה העדפה הקאמרית סמים לזווג (איור 1 א, 1 ב). עכברים נחשבים לרכשו העדפה לחדר מסוים, כאשר העדפת קוקאין (משך זמן בחדר קוק לזווג מינוס ה...

Watch this Scientific Journal Video about Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference at JoVE.com

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

מאמר זה מתאר כיצד microinject וקטורים ויראליים למוח עכבר ולאחר מכן לבדוק בפרדיגמה העדפת מקום ממוזגת הכוללת שלב רכישה, הכחדה והחזרה.

Microinjection Stereotaxic של וקטורים ויראליים הבעת Cre recombinase כדי ללמוד את התפקיד של גני מטרה בהעדפות מקום אוויר קוקאין

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

stereotaxic-microinjection-viral-vectors-expressing-cre-recombinase

Research

JoVE Journal

Behavior

18.5K Views.  Weill Cornell Graduate School of Biomedical Sciences. מאמר זה מתאר כיצד microinject וקטורים ויראליים למוח עכבר ולאחר מכן לבדוק בפרדיגמה העדפת מקום ממוזגת הכוללת שלב רכישה, הכחדה והחזרה.

Video: Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Stereotactic Injection of MicroRNA-expressing Lentiviruses to the Mouse Hippocampus CA1 Region and Assessment of the Behavioral Outcome

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory single-stranded RNA molecules around 22 nucleotides long that may each target numerous mRNA transcripts and dim an entire gene expression pathway by inducing destruction and/or inhibiting translation of these targets. Several miRNAs play key roles in maintaining neuronal structure and function and in higher-level brain functions, and methods are sought for manipulating their levels for exploring these functions. Here, we present a direct in vivo method for examining the cognitive consequences of enforced miRNAs excess in mice by stereotactic injection of miRNA-encoding virus particles. Specifically, the current protocol involves injection into the hippocampal CA1 region, which contributes to mammalian memory consolidation, learning, and stress responses, and offers a convenient injection site. The coordinates are measured according to the mouse bregma and virus perfusion is digitally controlled and kept very slow. After injection, the surgery wound is sealed and the animals recover. Lentiviruses encoding silencers of the corresponding mRNA targets serve to implicate the specific miRNA/target interaction responsible for the observed effect, with na&iuml;ve mice, mice injected with saline and mice injected with "empty" lentivirus vectors as controls. One month post-injection, the animals are examined in the Morris Water Maze (MWM) for assessing their navigation learning and memory abilities. The MWM is a round tank filled with colored water with a small platform submerged 1 cm below the water surface. Steady visual cues around the tank allow for spatial navigation (sound and the earth's magnetic field may also assist the animals in navigating). Video camera monitoring enables measuring the route of swim and the time to find and amount the platform. The mouse is first taught that mounting the hidden platform offers an escape from the enforced swimming; it is then tested for using this escape and finally, the platform is removed and probe tests examine if the mouse remembers its previous location. Repeated tests over several consecutive days highlight improved performance of tested mice at shorter latencies to find and mount the platform, and as more direct routes to reach the platform or its location. Failure to show such improvement represents impaired learning and memory and/or anxiety, which may then be tested specifically (e.g. in the elevated plus maze). This approach enables validation of specific miRNAs and target transcripts in the studied cognitive and/or stress-related processes.

MicroRNAs have significant roles in brain structure and function. Here we describe a method to enforce hippocampal miRNA over-expression using stereotactic injection of an engineered miRNA-expressing lentivirus. This approach can serve as a relatively rapid way to assess the in vivo effects of over-expressed miRNAs in specific brain regions.

Lentiviruses הזרקת Stereotactic של microRNA-לבטא באזור CA1 היפוקמפוס העכבר והערכה של תוצאות ההתנהגות

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory single-stranded RNA molecules around 22 nucleotides long that may each target numerous mRNA transcripts and dim an ...

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

פרוצדורה כדי לחקור את ההשפעה של הגבלת מזון ממושכת בהרואין מחפש אצל חולדות מתנזרות

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Fat Preference: A Novel Model of Eating Behavior in Rats

Obesity is a growing problem in the United States of America, with more than a third of the population classified as obese. One factor contributing to this multifactorial disorder is the consumption of a high fat diet, a behavior that has been shown to increase both caloric intake and body fat content. However, the elements regulating preference for high fat food over other foods remain understudied.
To overcome this deficit, a model to quickly and easily test changes in the preference for dietary fat was developed. The Fat Preference model presents rats with a series of choices between foods with differing fat content. Like humans, rats have a natural bias toward consuming high fat food, making the rat model ideal for translational studies. Changes in preference can be ascribed to the effect of either genetic differences or pharmacological interventions. This model allows for the exploration of determinates of fat preference and screening pharmacotherapeutic agents that influence acquisition of obesity.

Dietary fat content influences both energy intake and body fat composition in mammals. By examining rats&#8217; preference for high fat food in a series of choice experiments, it is possible to test genetic differences and pharmacological interventions on their preference for high fat food.

העדפות שומן: דגם רומן של התנהגות אכילה בחולדות

Obesity is a growing problem in the United States of America, with more than a third of the population classified as obese. One factor contributing to ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate drug-seeking behavior and prompt relapse in abstinent drug users. We have developed a procedure to study the behavioral and neural processes that mediate the impact of context on alcohol-seeking behavior in rats. Following acclimation to the taste and pharmacological effects of 15% ethanol in the home cage, male Long-Evans rats receive Pavlovian discrimination training (PDT) in conditioning chambers. In each daily (Mon-Fri) PDT session, 16 trials each of two different 10 sec auditory conditioned stimuli occur. During one stimulus, the CS+, 0.2 ml of 15% ethanol is delivered into a fluid port for oral consumption. The second stimulus, the CS-, is not paired with ethanol. Across sessions, entries into the fluid port during the CS+ increase, whereas entries during the CS- stabilize at a lower level, indicating that a predictive association between the CS+ and ethanol is acquired. During PDT each chamber is equipped with a specific configuration of visual, olfactory and tactile contextual stimuli. Following PDT, extinction training is conducted in the same chamber that is now equipped with a different configuration of contextual stimuli. The CS+ and CS- are presented as before, but ethanol is withheld, which causes a gradual decline in port entries during the CS+. At test, rats are placed back into the PDT context and presented with the CS+ and CS- as before, but without ethanol. This manipulation triggers a robust and selective increase in the number of port entries made during the alcohol predictive CS+, with no change in responding during the CS-. This effect, referred to as context-induced renewal, illustrates the powerful capacity of contexts associated with alcohol consumption to stimulate alcohol-seeking behavior in response to Pavlovian alcohol cues.

A procedure to study the capacity of an alcohol associated environmental context to trigger the renewal of alcohol-seeking behavior in rats is described.

נוהל ללב התחדשות מושרה הקשר של התנהגות אלכוהול מחפשי מיזוג הפבלובית בחולדות

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Rodent Brain Microinjection to Study Molecular Substrates of Motivated Behavior

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as appropriate models, partly because the response to behaviorally relevant stimuli and the circuitry parsing stimulus-action outcomes is astonishingly similar between humans and rodents. In studying molecular substrates of complex behaviors, the microinjection of reagents that modify, augment, or silence specific systems is an invaluable technique. However, it is crucial that the microinjection site is precisely targeted in order to aid interpretation of the results. We present a method for the manufacture of surgical implements and microinjection needles that enables accurate microinjection and unlimited customizability with minimal cost. Importantly, this technique can be successfully completed in awake rodents if conducted in conjunction with other JoVE articles that covered requisite surgical procedures. Additionally, there are many behavioral paradigms that are well suited for measuring motivation. The progressive ratio is a commonly used method that quantifies the efficacy of a reinforcer to maintain responding despite an (often exponentially) increasing work requirement. This assay is sensitive to reinforcer magnitude and pharmacological manipulations, which allows reinforcing efficacy and/ or motivation to be determined. We also present a straightforward approach to program operant software to accommodate a progressive ratio reinforcement schedule.

Rodents are an appropriate model to investigate the molecular substrates of behavior and complex psychiatric disorders. Brain microinjection in awake rodents can be used to elucidate disease substrates. An efficient and customizable brain microinjection method as well as the execution of an operant paradigm that quantifies motivation is presented.

מכרסמים מוח Microinjection לחקר מולקולריים מצעים של התנהגות מוטיבציה

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to drugs of abuse make lasting alterations in the brain function of vulnerable individuals, and these persistent alterations likely serve to maintain the maladaptive drug seeking and taking behaviors characteristic of addiction/dependence2. In rodents, reward experience and contextual associations are frequently measured using the conditioned place preference assay, or CPP, wherein preference for a previously drug-paired context is measured. Behavioral sensitization, on the other hand, is an increase in a drug-induced behavior that develops progressively over repeated exposures. Since sensitized behaviors can often be measured after several months of drug abstinence, depending on the dose and length of initial exposure, they are considered observable correlates of lasting drug-induced plasticity. Researchers have found these assays useful in determining the neurobiological substrates mediating aspects of addiction as well as assessing the potential of different interventions in disrupting these behaviors. This manuscript describes basic, effective protocols for mouse CPP and locomotor behavioral sensitization to cocaine.

This protocol is intended to enable researchers to conduct experiments designed to test these aspects of addiction using the conditioned place preference and locomotor behavioral sensitization assays.

הערכת רגישות התנהגות נגרמת קוק העדפות מקום אלפו עכברים

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Place and Response Learning in the Open-field Tower Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for examining how rats learn to use a place- or response-learning to successfully navigate in an open-field arena. Additionally, this protocol describes how the OFTM differs from other behavioral maze paradigms that are commonly used to study spatial learning in rodents. The OFTM described in this article was adapted from the one previously described by Cole, Clipperton, and Walt (2007). Specifically, the OFTM was created to test spatial learning in rodents without the experimenter having to consider how &#8220;stress&#8221; might play a role as a confounding variable. Experiments have shown that stress-alone can significantly affect cognitive function1. The representative results section contains data from an experiment that used the OFTM to examine the effects of estradiol treatment on place- and response-learning in adult female Sprague Dawley rats2. Future studies will be designed to examine the role of the hippocampus and striatum in place- and response-learning in the OFTM.

The Open-field Tower Maze (OFTM) is a maze created to study the behavioral and neural mechanisms of spatial learning (e.g., place- or response-learning) in rats. This maze is especially useful for experimenters who want to use a non-stressful maze paradigm to investigate spatial learning in their research.

מקום ותגובה למידה בשטח הפתוח מגדל המבוך

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for ...

Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to acquire a conditioned place preference in a drug-paired compartment, and after the post-conditioning test, they perform several sessions to extinguish the established preference. The CPP permits the evaluation of the conditioned rewarding effects of drugs related to environmental cues. Then, the extinguished CPP can be robustly reinstated by the non-contingent administration of a priming dose of the drug, and by exposure to stressful stimuli. Both methods will be explained here. When the animal reinitiates the behavioral response, a reinstatement of the conditioned reward is considered to have taken place.
The main advantages of this protocol are that it is non-invasive, inexpensive, and simple with good validity criteria. In addition, it allows the study of different environmental manipulations, such as stress or diet, which can modulate relapse into drug seeking behaviors. However, one limitation is that if the researcher aims to explore the motivation and primary reinforcing effects of the drug, it should be complemented with self-administration procedures, as they involve operant responses of animals.

This protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse. This procedure permits the measurement of relapse in laboratory animals, considering the impact of drug-associated environmental cues as craving and relapse in abstaining addicts is currently the focus of drug-abuse treatment programs.

החזרה של שוחרת סמים בעכברים באמצעות הפרדיגמה העדפה המקום ממוזגים

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

פרוטוקול העדפה המקום ממוזגים למדידת דגירה של השתוקקות אצל חולדות

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Assessing the Coherence of Parents' Short Narratives Regarding their Child Using the Five-Minute Speech Sample Procedure

Valid and efficient measures for assessing the quality of parent-child relationships are needed to facilitate research and evidence-based practice with parents. This paper focuses on such a method, namely Five-Minute Speech Sample-Coherence (FMSS-Coherence). In this method, a parent is asked to speak for five uninterrupted minutes about her/his child and their relationship. The resulted narrative is coded for coherence, namely the extent to which the parent provides&#160;in the narrative&#160;a clear, consistent, multidimensional and well-supported portrayal of the child. FMSS-Coherence is based on attachment research that shows that the coherence of parents&#8217; narratives is indicative of the quality of the parent-child relationship and child adjustment. It overcomes the limitations of attachment narrative measures which are typically labor intensive. FMSS-Coherence is less nuanced than extant attachment narrative measures. Yet, studies of families from different cultural backgrounds, across different child ages and in the context of typically developing children as well as children with special needs suggest that coherence can be reliably evaluated using the FMSS procedure. Furthermore, parents&#8217; FMSS-Coherence is associated with parenting quality and children&#8217;s socio-emotional adjustment. Thus, it holds promise for researchers and practitioners who seek a relatively time- and cost-effective method for assessing the coherence of parents&#8217; narratives regarding their child.

Assessing the Coherence of Parents&#039; Short Narratives Regarding their Child Using the Five-Minute Speech Sample Procedure

This paper introduces a method for assessing the coherence of parents' short narratives regarding their child and their relationship using the five-minute speech sample procedure.

הערכת הנרטיבים הקצרים של ההורים בנוגע לילדם באמצעות שגרת דגימת הדיבור של חמש דקות

Valid and efficient measures for assessing the quality of parent-child relationships are needed to facilitate research and evidence-based practice with ...