1. Animaux procédures d&#39;hébergement et d&#39;acclimatation <ol><li> Homme rats Long Evans, pesant 300-325 g au moment de l&#39;arrivée dans le vivarium, sont logés individuellement dans des cages standard de plastique contenant du papier recyclé granulés literie, avec des couvercles de grille de fil pour accueillir des bouteilles d&#39;eau et de nourriture. </li><li> Les rats sont maintenus sur un revers de lumière-obscurité calendrier (lumières allumées 19:00-07:00), dans une température et humidité contrôlées vivarium. </li><li> L&#39;alimentation et l&#39;eau sont disponibles ad libitum dans les cages de la maison durant l&#39;expérience. </li><li> Les rats sont autorisés à s&#39;acclimater à la vivarium et les conditions de logement pour une semaine avant la chirurgie. Pendant ce temps les rats sont laissés au repos à l&#39;exception du nettoyage de routine, l&#39;alimentation, et la surveillance du poids. </li></ol> 2. Chirurgie cathétérisme intraveineux <ol><li> Sous anesthésie de gaz isoflurane, et en utilisant des techniques chirurgicales aseptiques standards, les rats sont préparés avec des cathéters en silastic dans la veine jugulaire droite. Les sorties cathéter dans une canule modifiés (Plastics One) à la surface du crâne, et la canule est monté sur le crâne avec des bijoutiers vis et ciment dentaire. Pour plus de détails sur les procédures chirurgicales, voir 7, 8. </li><li> A la fin de la chirurgie, les cathéters sont rincés avec environ 0,2 ml d&#39;une solution contenant de l&#39;héparine de 50% (1000 UI) et de dextrose à 50% (25 g/50 ml). Un bloqueur de plastique est placé sur l&#39;ouverture de la canule afin de protéger le cathéter par des débris externes, et pour maintenir la perméabilité du cathéter. </li><li> Au moment de la chirurgie, et de nouveau le jour après la chirurgie, les rats sont administrés 5 mg / kg, SC, du kétoprofène analgésique. </li><li> Les rats sont autorisés au moins sept jours pour se remettre de la chirurgie avant l&#39;expérimentation. Pendant ce temps, les rats sont laissés au repos dans les cages de la maison, à l&#39;exception de la routine de nettoyage et d&#39;alimentation, et un suivi quotidien de poids et la santé générale. Le dernier jour de la période de récupération, les cathéters sont rincés avec la solution d&#39;héparine / dextrose (section 2.2) afin de vérifier la perméabilité du cathéter. </li></ol> 3. Procédures comportementales Toutes les procédures comportementales sont réalisées en utilisant l&#39;équipement fourni par Associates Inc Med (St Albans, VT). L&#39;équipement, installé dans une salle dédiée, comprend un ensemble de standards chambres opérant, chacun contenu dans une enceinte acoustique atténuantes. Chaque chambre est équipée opérant deux leviers escamotables, deux 6,5 cm élevées au dessus d&#39;un rez-tige en acier inoxydable. Une lumière blanche est situé relance juste au-dessus un levier, et les réponses sur ce levier (le soi-disant «actifs» de levier) résulte de l&#39;éclairage simultané de la lumière de relance et l&#39;activation d&#39;une pompe à perfusion (Razel Scientific Instruments, St. Albans, VT). La pompe est située sur une étagère juste à l&#39;extérieur de la chambre de conditionnement opérant, mais dans l&#39;enceinte atténuation sonore. L&#39;autre levier (le soi-disant &quot;inactif&quot; levier) est laissé étendu dans la chambre à travers toutes les procédures expérimentales; de répondre sur ce levier est sans conséquence. Enfin, chaque chambre est équipée pour offrir à courant constant, par intermittence, incontournable, choc électrique électrique à travers un brouilleur à l&#39;étage tige d&#39;acier. Toutes les conditions expérimentales (par exemple, des présentations de relance, les perfusions de médicaments, la délivrance du choc), ainsi que l&#39;enregistrement des données et de consolidation, sont réalisés via des interfaces entre les chambres d&#39;essai et un centre d&#39;exploitation informatique Associés Med logiciels (MED-IV). L&#39;expérience est réalisée en 5 phases: 1) L&#39;habituation; 2) La cocaïne SA; 3) sans drogue période; 4) l&#39;extinction, et 5) Essai de réintégration. Dans toutes les phases (sauf pour la période sans médicament), les rats sont transférés pour des séances quotidiennes de la salle de logement pour les chambres d&#39;essai opérant. Les animaux sont transférées individuellement, en petits contenants de plastique. L&#39;alimentation et l&#39;eau ne sont pas disponibles dans les chambres opérant. <ol><li> Accoutumance <ol><li> Vingt-quatre heures précédant la première session de la cocaïne SA (. Voir section 3.2), les rats sont autorisés à s&#39;habituer aux chambres opérant durant une seule séance de 2 h; au cours de cette session, le levier actif est rétracté. </li></ol></li><li> Cocaïne SA de formation <ol><li> Avant chaque séance d&#39;entraînement quotidienne, les rats sont pesés dans la salle de l&#39;habitation. Par la suite, ils sont transférés dans les chambres opérant. </li><li> Après avoir été placés dans les chambres opérant, un printemps et un tube de montage (qui s&#39;étend de la pompe à perfusion de médicaments) est relié à la canule du crâne monté. </li><li> Les rats sont autorisés à s&#39;auto-administrer de la cocaïne chlorhydrate cours quotidiens de 3 heures des séances, pour un total de 8-10 jours (soit consécutivement ou avec deux intervenants «jours de repos&quot; entre les sessions 5 et 6). </li><li> Séances SA alterner entre le matin (9:00-12:00) et après-midi (13h00-16h00). Le calendrier des sessions SA est alterné parce que les procédures dans les phases ultérieures de l&#39;expérience (à savoir l&#39;extinction et de test) se produisent à la fois tLe moment de la journée pour tous les animaux (voir Sections 3.4 et 3.5); Ainsi, cet agencement empêche tous les effets confondants de l&#39;heure de la journée sur la suite de drogue comportement de recherche. </li><li> Chaque session de formation est précédée par une période d&#39;acclimatation de 5 min, pendant laquelle les animaux sont placés dans les chambres opérant avec le levier actif rétracté. </li><li> Au début de la session de formation, le levier actif est étendue dans la chambre et la lumière de relance (situé au-dessus du levier actif) est allumé pendant 30 s. En outre, la Light House est activé à ce moment, et reste allumé pendant toute la session. Ensemble, ces événements de signal de la disponibilité de la cocaïne. </li><li> Pendant la session, des réponses sur le levier actif sont renforcées par une perfusion de 3 s de la cocaïne (0,23 mg/65 uL, iv) sur un ratio fixe-1 horaire de renfort. Parallèlement à l&#39;activation de la pompe à perfusion et la livraison de drogue est une activation de 20 s de la lumière au-dessus du levier de relance active. Cette présentation de lumière de 20 s correspond à un «time-out&quot; période pendant laquelle les réponses supplémentaires levier actif sont enregistrées mais non armé. </li><li> Les animaux sont admis un maximum de 50 perfusions par 3-H session. Nous avons régulièrement d&#39;imposer ce critère dans notre travail et, dans notre expérience, ont constaté que cela réduit considérablement, voire élimine, les incidents de décès dus à une surdose. </li><li> A la fin de chaque séance quotidienne, les cathéters rats sont rincées avec 0,2 à 0,3 ml de solution de dextrose à l&#39;héparine (voir section 2.2) et les rats sont retournés dans leur cage. </li></ol></li><li> Drug période sans <ol><li> Après la séance de la cocaïne SA finale, les rats sont laissés au repos (à l&#39;exception du nettoyage de routine, l&#39;alimentation, et la surveillance du poids) dans leur cage pour une période minimale de sept jours. </li></ol></li><li> Extinction de la cocaïne formés comportements <ol><li> Les rats sont transférés aux chambres opérant entre 9:00-10:00 pour la formation d&#39;extinction. </li><li> Le printemps et l&#39;assemblage tube est relié à la canule du crâne monté. </li><li> Conformément aux conditions de formation SA, chaque jour de la formation d&#39;extinction est précédée par une période d&#39;acclimatation de 5 min, pendant laquelle les animaux sont placés dans les chambres opérant avec le levier actif rétracté. </li><li> Les rats sont ensuite donné quatre séances de 60 minutes d&#39;extinction, séparés par des intervalles de 30 min. Chaque session de 60 min est initiée par les mêmes événements qui se produisent au début des sessions de formation (par exemple, l&#39;éclairage de la maison de la lumière, l&#39;extension du levier actif, et de 30 secondes d&#39;illumination de la lumière au-dessus du levier de relance active). Tout au long des séances, toutes les conditions qui étaient présents lors de l&#39;entraînement SA sont maintenues (c&#39;est à dire, la réponse contingente-illumination de la lumière de relance pendant 20 sec et 3-s l&#39;activation de la pompe à perfusion), sauf que les réponses levier actif ne sont plus renforcées par des perfusions de la cocaïne . Pendant les intervalles de 30 min qui séparent chaque session d&#39;extinction de 60 min, le levier actif est rétracté et la lumière maison est éteinte. </li><li> A la fin de la dernière session de 60 minutes, les rats sont retournés dans leur cage. </li><li> Étapes 3.4.1. à 3.4.5. sont répétés pendant 3 jours consécutifs. </li></ol></li><li> Rétablissement de la cocaïne formés comportements par le stress choc électrique <ol><li> Les rats sont transférés aux chambres opérant entre 9:00-10:00 </li><li> Après avoir été placés dans les chambres opérant, au printemps et à l&#39;assemblage tube est relié à la canule du crâne monté. </li><li> Conformément aux conditions de formation et de l&#39;extinction, une période d&#39;acclimatation de 5 min est fourni, au cours de laquelle les rats sont placés dans les chambres opérant avec le levier actif rétracté. </li><li> Les rats sont ensuite donné deux séances de 60 min d&#39;extinction (voir 3.4.4.) Séparés par un intervalle de 30 min, identiques à ceux donnés lors de la phase d&#39;extinction. </li><li> Si après la deuxième session de 60 minutes le nombre total de réponses sur le levier précédemment actif est inférieur à 15, les animaux sont soumis à un test de rétablissement après une supplémentaire de 30 min d&#39;intervalle. Dans cet intervalle de 30 min, choc électrique ou fictive choc électrique (c&#39;est à dire, aucun choc électrique) est administré (voir 3.5.6.). Si un critère de 15 ou moins de réponses sur le levier actif n&#39;est pas atteint après la deuxième session, une session d&#39;extinction (s) supplémentaire est donné avant les essais de réintégration. </li><li> Dix minutes après la séance de l&#39;extinction de 60 secondes min (ou après une séance de 60 min d&#39;extinction (s) supplémentaire nécessaire pour établir le critère de l&#39;extinction de 15 ou moins de réponses), les animaux sont exposés à 20 min de stress choc électrique intermittente électrique (ou imposture choc électrique) dans la chambre de conditionnement opérant. Choc électrique est donnée à un moment où le levier actif est rentré et lumières de la maison et de relance sont éteints. Choc électrique est livré selon un calendrier variable à un intervalle moyen de 40 s (10-70 s large). Chaque choc est délivré à une intensité de 0,9 mA, et est de 0,5 s dans la durée. Ces paramètres du choc électrique sont basées sur des travaux pilotes vasteréalisées dans notre laboratoire pour établir la réintégration fiables de cocaïne cherchant, avec le minimum d&#39;intensité et la durée de l&#39;exposition choc électrique. Dans ces paramètres, les animaux présentent une réaction saut réflexif au choc 0,5 s et, occasionnellement, émettent une vocalisation brève. Bien que les animaux sont observés pendant la période de choc, l&#39;intensité du choc n&#39;est pas d&#39;une ampleur suffisante pour induire des signes plus marqués de détresse. </li><li> Immédiatement après la résiliation de la session choc électrique, le levier actif est étendue et les rats sont autorisés à levier de la presse dans des conditions d&#39;extinction (c&#39;est à dire, les réponses ne sont pas renforcés avec de la cocaïne, mais ne continuent d&#39;entraîner dans l&#39;illumination de la lumière de relance et l&#39;activation de la pompe à perfusion ). Cette période de temps est défini comme le test de réintégration et est typiquement 1-3 heures dans la durée. La plupart répondent survient dans la première partie de la session de test (30 premières min-1 h), et éteint par la suite au cours des périodes d&#39;essai plus étendu. Ainsi, un test de 1 h est suffisant pour saisir l&#39;effet de réintégration, avec des périodes d&#39;essai plus fournir un profil d&#39;extinction plus complète de l&#39;effet. </li><li> Quand une conception de mesures répétées est employé, chaque rat est testé dans des conditions choc électrique choc électrique et d&#39;imposture. Étapes 3.5.1. à 3.5.8 sont répétées sur une journée d&#39;essais ultérieurs, et le test alternatif de réintégration (choc électrique ou fictive choc électrique) est administré. </li></ol></li></ol> 4. Les résultats représentatifs: <img src="/files/ftp_upload/2265/2265fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1. Profils de réponse stylisé de l&#39;activité sur les leviers actifs et inactifs pendant l&#39;auto-administration de la formation, l&#39;extinction, et des essais de réintégration. La figure 1 présente stylisée profils de réponse opérant, typiques de ceux obtenus lors des différentes phases du protocole expérimental décrit aux présentes. 1. Réponses levier actif <ol><li> Cocaïne SA de formation. La figure 1 (gauche) montre une courbe typique de la cocaïne de formation SA qui comprend à la fois nombre de perfusions et le nombre total de presses levier actif. Les rats acquièrent généralement la cocaïne SA dans les sessions 1-3 et, lorsque le comportement est établie, de maintenir un taux stable de la consommation de drogue (généralement moins de 20% entre les sessions de variance) sur les sessions ultérieures. </li><li> Extinction de la cocaïne formés comportement. Il peut être vu dans la figure 1 (panneau du milieu) que le 1er jour de l&#39;extinction, quand les réponses ne sont pas renforcés pour la première fois, le nombre total de réponses sur le levier actif est initialement supérieur à la fin de la phase de formation (correspondant à une &quot;rafale d&#39;extinction&quot; soi-disant); progressivement, au cours des quatre séances d&#39;extinction, en réponse diminue. Sur Jours 2 et 3 de l&#39;extinction, une certaine reprise de répondre (par rapport à celle observée au cours de la dernière session de la journée précédente) peuvent être observées, mais les réponses sont généralement moins au début de la journée précédente de l&#39;extinction, et l&#39;extinction générale produit plus rapidement au cours des quatre séances de cette journée. </li><li> Rétablissement de la cocaïne cherchent. Il peut être vu dans la figure 1 (droite), 20 min d&#39;exposition à choc électrique intermittente induit une augmentation non armé de répondre sur le levier actif, par rapport à celle observée à la fin de la session d&#39;extinction précédente. Choc électrique induit également une augmentation de la réponse par rapport à celle observée dans des conditions où simulacre choc électrique est administré. Ainsi, la réintégration de la cocaïne cherchant par le stress choc électrique peut être exprimée soit en tant que: 1) l&#39;augmentation du nombre de non-réponses renforcée après l&#39;exposition au choc électrique, par rapport aux réponses à la session de l&#39;extinction avant choc électrique ou 2) l&#39;augmentation du nombre de non armé réponses après relatifs à choc électrique choc électrique imposture. </li></ol> 2. Réponses levier inactif Il peut être vu dans la figure 1 (ligne rouge) qui, durant toutes les phases d&#39;expérimentation, il ya des niveaux de réponse très faible associée avec le levier inactif. Cependant, une augmentation modeste de répondre sur ce levier est parfois observé après l&#39;exposition au stress choc électrique. Même dans les cas où une telle augmentation dans la réponse survient, l&#39;augmentation du levier actif répondant tend à être proportionnellement beaucoup plus élevé.

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Expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et les règlements énoncés par le Conseil canadien de protection des animaux et de l&#39;Université de Toronto du comité de soins aux animaux. La production de cette vidéo a été parrainé par Associates Med, Inc qui produit l&#39;instrument utilisé dans cet article.

Au cours des dernières décennies, trois variantes de la procédure de réintégration SA ont été développées pour étudier le rétablissement de la recherche de drogue chez des rats de laboratoire et des singes. Les différences qui définissent les variations procédurales se rapportent principalement à savoir si le médicament SA, l&#39;extinction, et des sessions de test se produisent dans la même journée ou sur plusieurs jours 1. La procédure que nous avons décrites dans ce document est communément appelé le «sein entre« variation session, car la drogue SA se produit pendant les sessions par jour (soit, en quelque sorte entre-session) qui sont séparés de l&#39;extinction et des sessions de test, mais l&#39;extinction et les tests se produisent le jour même (à savoir, d&#39;une manière au sein de session) [par exemple, 7, 9]. Alternativement, dans ce qu&#39;on appelle &quot;entre deux sessions&quot; procédures, toutes les phases de l&#39;expérimentation se produisent séquentiellement, tels que la SA, l&#39;extinction, et des sessions de tests sont donnés à des jours différents (ie, toutes les phases sont entre les sessions) [par exemple, 8, 10, 11]. En revanche, dans les procédures de terminer &quot;dans les sessions&quot;, la formation SA, l&#39;extinction, et des séances de test se produisent tous dans la même journée [par exemple, 12]. Bien qu&#39;il existe des rapports publiés choc électrique induite par la réintégration de la recherche de drogue en utilisant différentes variantes de la procédure de réintégration, nous avons trouvé cela stressant (au moins chez les animaux avec une histoire de cocaïne SA) pour être plus efficace quand l&#39;extinction et les tests se produire sur les mêmes jour (c&#39;est à dire, dans un «entre-deux au sein de« manière séances). Sinon, nous avons eu du succès avec l&#39;obtention de choc électrique fiable induite par la réintégration de la cocaïne cherchant l&#39;aide d&#39;un complètement &quot;entre deux sessions&quot; procédure, mais seulement dans des conditions où les animaux sont logés dans les chambres SA long de l&#39;expérience 8, ou tout au moins pendant l&#39;extinction et le test 13. L&#39;inconvénient de cette approche entre les sessions, au cours de cette décrits dans le présent protocole, est qu&#39;elle limite le nombre de sujets qui peuvent être formés et testés en une seule fois et, par conséquent, diminue l&#39;efficacité de la collecte de données. Bien que dans les conditions du présent protocole un seul groupe d&#39;animaux peut être éteint et testé à un moment donné, un plus grand débit peut être réalisé en décalant d&#39;une semaine le temps de démarrage de la phase de formation SA pour deux groupes de rats. Dans ce scénario, un premier groupe de rats peuvent entrer dans la phase sans drogue que le deuxième groupe entre dans la semaine 2 de la formation SA, et, par la suite, l&#39;extinction et le test peut être effectué dans le premier groupe tandis que le deuxième groupe en est à ses médicaments sans phase. Cette approche permet une utilisation plus efficace des ressources et accélère le rythme d&#39;acquisition de données, tout en menant à très efficace et fiable choc électrique induite par la réintégration. Fait important, dans notre procédure, l&#39;extinction du comportement préalablement renforcé drogue et d&#39;essai pour la réintégration se fait en présence du médicament associé indices. Bien que nous ayons jamais réalisé de formation ou de l&#39;extinction des tests en l&#39;absence d&#39;indices de drogue associé, il est de notre compréhension, basée sur des communications personnelles, que le stress peut en effet être inefficaces dans l&#39;induction de la réintégration lors du test survient en l&#39;absence d&#39;indices éteinte ( au moins dans le cas des animaux ayant des antécédents de la cocaïne SA). Un examen systématique de cette variable, et les implications théoriques qu&#39;elle pose, est une question importante pour les recherches futures. Un dernier facteur de procédure qui garantit commentaires, c&#39;est que l&#39;effet du stress choc électrique sur la réintégration semble être très sensible aux manipulations du contexte. Par exemple, le stress choc électrique n&#39;est efficace que dans l&#39;induction de la réintégration de recherche de drogue, si elle est administrée dans l&#39;environnement dans lequel la drogue SA et l&#39;extinction se produit, c&#39;est-à choc électrique ne rétablit pas la drogue cherchent si l&#39;exposition à l&#39;agent stressant survient dans un contexte nouveau, suggérant une interaction importante entre le stress et l&#39;environnement de drogue dans ses effets sur la réintégration 14. En conclusion, les procédures de réintégration choc électrique, comme ceux décrits dans ce document, ont été utilisés avec succès considérable pour élucider les mécanismes de base du comportement et neurobiologiques qui régissent la relation entre le stress et la rechute de drogue. En effet, ces procédures, lorsqu&#39;ils sont modifiés pour accueillir des prétraitements ou des manipulations pharmacologiques neurochimique ciblage spécifique des substrats neuronaux, peuvent servir d&#39;outils puissants pour la caractérisation de la neurobiologie de la réintégration à la recherche de drogue par le stress.

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		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
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		<tbody>
		
<tr>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package</td>
<td>&nbsp;</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>MED-008-CT-B1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Deep extra tall MDF sound attenuating cubicle</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-018MD</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Standard modular test chamber with drug infusion top and waste pan</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-008CT</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless steel grid floor</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-005</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>House light, hooded, 28V</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-215M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stimulus light 1&#x201D; white lens</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-221M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Low profile retractable response lever</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-112CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SmartCtrl 8 Input/16 output package</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>DIG-716P2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Single speed syringe pump, 3.33 RPM</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>PHM-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rat self infusion package</td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>PHM-119B-23-D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Drug Delivery, Arm assembly </td>
<td>Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>PHM-110-SAI</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Square wave aversive stimulator</td>
<td>Footshock Stress Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-414S</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Patented quick disconnect harness for stainless steel grid floor</td>
<td>Footshock Stress Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>ENV-005-QD</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Shock output cable</td>
<td>Footshock Stress Component</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>SG-219G-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MED-PC IV Software</td>
<td>Software</td>
<td><a href="http://www.med-associates.com/">Med Associates, Inc</a></td>
<td>SOF-735</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

a procedure for studying the footshock-induced reinstatement of cocaine seeking in laboratory rats

L&#39;aspect le plus insidieux de la toxicomanie est la forte propension à la rechute. Les modèles animaux de la rechute, connu sous le nom des procédures de réintégration, ont été largement utilisées pour étudier la neurobiologie et phénoménologie de rechute à l&#39;usage de drogues. Bien que les écarts de procédure ont émergé au cours des dernières décennies, les procédures de rétablissement les plus conventionnels sont basés sur l&#39;auto-administration de médicaments (SA) modèle. Dans ce modèle, un animal est formé pour effectuer une réaction opérant pour obtenir des médicaments. Par la suite, le comportement est éteinte par la retenue de réponse contingente renfort. Rétablissement de la recherche de médicaments est alors déclenché par un événement distinct, comme une injection de la drogue de formation, ré-exposition à la drogue associée indices, ou l&#39;exposition à un facteur de stress 1. Rétablissement des procédures ont été initialement développés pour étudier la capacité des aigus non contingent exposition à la drogue de formation pour rétablir la drogue cherchent des rats et des singes 1, 2. Rétablissement des procédures ont depuis été modifiées pour étudier le rôle des stimuli environnementaux, y compris les médicaments associés des indices et l&#39;exposition à différentes formes de stress, en rechute de recherche de drogue 1, 3, 4. Au cours des 15 dernières années, un axe majeur de la littérature sur la réintégration a été le rôle du stress dans la rechute de drogue. Une des formes les plus couramment utilisés de stress pour étudier cette relation est une exposition aiguë à la légère, intermittente, footshocks électrique. La capacité du stress choc électrique pour induire le rétablissement de la recherche de drogue a été démontré par Shaham et ses collègues (1995) chez des rats présentant une histoire de l&#39;héroïne par voie intraveineuse SA 5. Par la suite, l&#39;effet a été généralisé à des rats avec des histoires de cocaïne par voie intraveineuse, la méthamphétamine, et la nicotine SA, ainsi que de l&#39;éthanol par voie orale SA 3, 6. Bien choc électrique induite par le rétablissement de la recherche de drogue peut être réalisé de manière fiable et robuste, il est un effet qui tend à être sensible à certaines variables paramétriques. Il s&#39;agit notamment de l&#39;agencement des séances d&#39;essais d&#39;extinction et de réintégration, l&#39;intensité et la durée du stress choc électrique, et la présence de drogue associé indices lors de l&#39;extinction et l&#39;essai de réintégration. Nous présentons ici un protocole de choc électrique induite par la réintégration de la cocaïne cherchant que nous avons utilisé avec succès constant pour étudier la relation entre le stress et la cocaïne cherchent.

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A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

Les modèles animaux de la rechute, connu sous le nom des procédures de réintégration, ont été largement utilisées pour étudier le rôle du stress dans la rechute à la recherche de drogue. Ici, nous présentons une méthode pour induire le rétablissement de la cocaïne cherchant des rats de laboratoire par l&#39;intermédiaire d&#39;expositions aiguës à légère, choc électrique électriques intermittents.

Une procédure pour l&#39;étude de l&#39;Rétablissement choc électrique induite par la cocaïne d&#39;Cherchant des rats de laboratoire

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

a-procedure-for-studying-footshock-induced-reinstatement-cocaine

Research

JoVE Journal

Neuroscience

20.7K vues.  University of Toronto Scarborough. Les modèles animaux de la rechute, connu sous le nom des procédures de réintégration, ont été largement utilisées pour étudier le rôle du stress dans la rechute à la recherche de drogue. Ici, nous présentons une méthode pour induire le rétablissement de la cocaïne cherchant des rats de laboratoire par l'intermédiaire d'expositions aiguës à légère, choc électrique électriques intermittents.

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Operant Sensation Seeking in the Mouse

Operant methods are powerful behavioral tools for the study of motivated behavior. These 'self-administration' methods have been used extensively in drug addiction research due to their high construct validity. Operant studies provide researchers a tool for preclinical investigation of several aspects of the addiction process. For example, mechanisms of acute reinforcement (both drug and non-drug) can be tested using pharmacological or genetic tools to determine the ability of a molecular target to influence self-administration behavior1-6. Additionally, drug or food seeking behaviors can be studied in the absence of the primary reinforcer, and the ability of pharmacological compounds to disrupt this process is a preclinical model for discovery of molecular targets and compounds that may be useful for the treatment of addiction3,7-9. One problem with performing intravenous drug self-administration studies in the mouse is the technical difficulty of maintaining catheter patency. Attrition rates in these experiments are high and can reach 40% or higher10-15. Another general problem with drug self-administration is discerning which pharmacologically-induced effects of the reinforcer produce specific behaviors. For example, measurement of the reinforcing and neurological effects of psychostimulants can be confounded by their psychomotor effects. Operant methods using food reinforcement can avoid these pitfalls, although their utility in studying drug addiction is limited by the fact that some manipulations that alter drug self-administration have a minimal impact on food self-administration. For example, mesolimbic dopamine lesion or knockout of the D1 dopamine receptor reduce cocaine self-administration without having a significant impact on food self-administration 12,16. 
Sensory stimuli have been described for their ability to support operant responding as primary reinforcers (i.e. not conditioned reinforcers)17-22. Auditory and visual stimuli are self-administered by several species18,21,23, although surprisingly little is known about the neural mechanisms underlying this reinforcement. The operant sensation seeking (OSS) model is a robust model for obtaining sensory self-administration in the mouse, allowing the study of neural mechanisms important in sensory reinforcement24. An additional advantage of OSS is the ability to screen mutant mice for differences in operant behavior that may be relevant to addiction. We have reported that dopamine D1 receptor knockout mice, previously shown to be deficient in psychostimulant self-administration, also fail to acquire OSS24. This is a unique finding in that these mice are capable of learning an operant task when food is used as a reinforcer. While operant studies using food reinforcement can be useful in the study of general motivated behavior and the mechanisms underlying food reinforcement, as mentioned above, these studies are limited in their application to studying molecular mechanisms of drug addiction. Thus, there may be similar neural substrates mediating sensory and psychostimulant reinforcement that are distinct from food reinforcement, which would make OSS a particularly attractive model for the study of drug addiction processes. The degree of overlap between other molecular targets of OSS and drug reinforcers is unclear, but is a topic that we are currently pursuing. While some aspects of addiction such as resistance to extinction may be observed with OSS, we have found that escalation 25 is not observed in this model24. Interestingly, escalation of intake and some other aspects of addiction are observed with self-administration of sucrose26. Thus, when non-drug operant procedures are desired to study addiction-related processes, food or sensory reinforcers can be chosen to best fit the particular question being asked. 
In conclusion, both food self-administration and OSS in the mouse have the advantage of not requiring an intravenous catheter, which allows a higher throughput means to study the effects of pharmacological or genetic manipulation of neural targets involved in motivation. While operant testing using food as a reinforcer is particularly useful in the study of the regulation of food intake, OSS is particularly apt for studying reinforcement mechanisms of sensory stimuli and may have broad applicability to novelty seeking and addiction.

In this protocol we describe a method of operant learning using sensory stimuli as a reinforcer in the mouse. It requires no prior training or food restriction, and it allows the study of motivated behavior without the use of a pharmacological or natural reinforcer such as food.

Sensation opérant dans la recherche de souris

Operant methods are powerful behavioral tools for the study of motivated behavior.  These 'self-administration' methods have been used extensively in drug ...

Recherche

Neurosciences

Muscle Receptor Organs in the Crayfish Abdomen: A Student Laboratory Exercise in Proprioception

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this experiment is to learn anatomy of the preparation by staining, dissection and viewing of neurons and sensory structures under a dissecting microscope. This is performed by using basic neurophysiological equipment to record the electrical activity from a joint receptor organ and staining techniques. The muscle receptor organ (MRO) system in the crayfish is analogous to the intrafusal muscle spindle in mammals, which aids in serving as a comparative model that is more readily accessible for electrophysiological recordings. In addition, these are identifiable sensory neurons among preparations. The preparation is viable in a minimal saline for hours which is amenable for student laboratory exercises. The MRO is also susceptible to neuromodulation which encourages intriguing questions in the sites of modulatory action and integration of dynamic signals of movements and static position along with a gain that can be changed in the system.

The primary purpose of this experiment is to understand how primary sensory neurons convey information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this report is present the anatomy of the preparation by dissection and viewing of neurons under a dissecting microscope.

Organes récepteurs musculaires à l&#39;abdomen des écrevisses: un exercice de laboratoire étudiant de la proprioception

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive ...

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

Une méthode générale pour l&#39;évaluation d&#39;incubation du désir saccharose chez les rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity to normally innocuous stimuli1. Hyperalgesia and allodynia have been studied in many different rodent models of diabetes mellitus2. However, as stated by B&ouml;lcskei et al, determination of "pain" in animal models is challenging due to its subjective nature3. Moreover, the traditional methods used to determine behavioral responses to noxious thermal stimuli usually lack reproducibility and pharmacological sensitivity3. For instance, by using the hot-plate method of Ankier4, flinch, withdrawal and/or licking of either hind- and/or fore-paws is quantified as reflex latencies at constant high thermal stimuli (52-55 &deg;C). However, animals that are hyperalgesic to thermal stimulus do not reproducibly show differences in reflex latencies using those supra-threshold temperatures3,5. As the recently described method of B&ouml;lcskei et al.6, the procedures described here allows for the rapid, sensitive and reproducible determination of thermal nociceptive thresholds (TNTs) in mice and rats. The method uses slowly increasing thermal stimulus applied mostly to the skin of mouse/rat plantar surface. The method is particularly sensitive to study anti-nociception during hyperalgesic states such as PDN. The procedures described bellow are based on the ones published in detail by Alm&aacute;si et al 5 and B&ouml;lcskei et al 3. The procedures described here have been approved the Laboratory Animal Care and Use Committee (LACUC), Wright State University.

Here, we describe a rapid reliable and simple procedure to determine the lowest temperature at which rats or mice show nocifensive behavior, i.e. the thermal nociceptive threshold (TNT). This method applies a slowly increasing thermal stimulus allowing precise and reproducible estimation of TNTs with minimum, if any, stress to the animals.

Détermination rapide du seuil thermique nociceptive chez les rats diabétiques

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity ...

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C. elegans genome includes potential antipsychotic drug (APD) targets conserved in humans, including genes encoding proteins required for neurotransmitter synthesis and for synaptic structure and function. APD exposure produces developmental delay and/or lethality in nematodes in a concentration-dependent manner. These phenotypes are caused, in part, by APD-induced inhibition of pharyngeal pumping1,2. Thus, the developmental phenotype has a neuromuscular basis, making it useful for pharmacogenetic studies of neuroleptics. Here we demonstrate detailed procedures for testing APD effects on nematode development and pharyngeal pumping. For the developmental assay, synchronized embryos are placed on nematode growth medium (NGM) plates containing APDs, and the stages of developing animals are then scored daily. For the pharyngeal pumping rate assay, staged young adult animals are tested on NGM plates containing APDs. The number of pharyngeal pumps per unit time is recorded, and the pumping rate is calculated. These assays can be used for studying many other types of small molecules or even large molecules.

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Approaches for testing the effects of antipsychotic drugs (APDs) in Caenorhabditis elegans are demonstrated. Assays are described for testing drug effects on development and viability and on pharyngeal pumping rate. These methods are also applicable for pharmacogenetic experiments with drug classes other than APDs.

Méthodes pour étudier les mécanismes d&#39;action des antipsychotiques dans<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to  large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C.  ...

A Procedure for Implanting Organized Arrays of Microwires for Single-unit Recordings in Awake, Behaving Animals

In vivo electrophysiological recordings in the awake, behaving animal provide a powerful method for understanding neural signaling at the single-cell level. The technique allows experimenters to examine temporally and regionally specific firing patterns in order to correlate recorded action potentials with ongoing behavior. Moreover, single-unit recordings can be combined with a plethora of other techniques in order to produce comprehensive explanations of neural function. In this article, we describe the anesthesia and preparation for microwire implantation. Subsequently, we enumerate the necessary equipment and surgical steps to accurately insert a microwire array into a target structure. Lastly, we briefly describe the equipment used to record from each individual electrode in the array. The fixed microwire arrays described are well-suited for chronic implantation and allow for longitudinal recordings of neural data in almost any behavioral preparation. We discuss tracing electrode tracks to triangulate microwire positions as well as ways to combine microwire implantation with immunohistochemical techniques in order to increase the anatomical specificity of recorded results.

Implanting organized arrays of microwires for use in single-unit electrophysiological recordings presents a number of technical challenges.&#160;Methods for performing this technique and the equipment necessary are described.&#160;Also, the beneficial use of organized microwire arrays to record from distinct neural subregions with high spatial selectivity is discussed.

Une procédure d&#39;implantation de tableaux organisés de microfils pour enregistrements unitaires dans Awake, se comportant Animaux

In vivo electrophysiological recordings in the awake, behaving animal provide a powerful method for understanding neural signaling at the single-cell ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Un moyen simple pour mesurer Transformations en récompense le comportement de recherche Utilisation<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

A Protocol for Measuring Cue Reactivity in a Rat Model of Cocaine Use Disorder

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue reactivity, the sensitivity to cues previously linked with the drug-taking experience, plays a prominent role in human craving during abstinence. Cue reactivity can be assessed as the attentional orientation toward drug-associated cues that is measurable as appetitive approach behavior in both preclinical and human studies. Herein describes an assessment of cue reactivity in rats trained to self-administer cocaine. Cocaine self-administration is paired with the presentation of discrete cues that act as conditioned reinforcers (i.e., house light, stimulus light, infusion pump sounds). Following a period of abstinence, lever presses in the cocaine self-administration context accompanied by the discrete cues previously paired with cocaine infusion are measured as cue reactivity. This model is useful to explore neurobiological mechanisms underlying cue reactivity processes as well as to assess pharmacotherapies to suppress cue reactivity and therefore, modify relapse vulnerability. Advantages of the model include its translational relevance, and its face and predictive validities.&#160;The primary limitation of the model is that the cue reactivity task can only be performed infrequently and must only be used in short duration (e.g., 1 hour), otherwise rats will begin to extinguish the pairing of the discrete cues with the cocaine stimulus. The model is extendable to any positively reinforcing stimulus paired with discrete cues; though particularly applicable to drugs of abuse, this model may hold future applications in fields such as obesity, where palatable food rewards can act as positively reinforcing stimuli.

Cue reactivity is conceptualized as sensitivity to cues linked with drug-taking experiences that contribute to craving and relapse in abstinent humans. Cue reactivity is modeled in rats by measuring attentional orientation toward drug-associated cues that results in appetitive approach behavior in a cue reactivity test following self-administration and forced abstinence.

Un protocole permettant de mesurer la réactivité de Cue dans un modèle de Rat de cocaïne trouble

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue ...

A Microbiomechanical System for Studying Varicosity Formation and Recovery in Central Neuron Axons

Axonal varicosities are enlarged structures along the shafts of axons with a high degree of heterogeneity. They are present not only in brains with neurodegenerative diseases or injuries, but also in the normal brain. Here, we describe a newly-established micromechanical system to rapidly, reliably, and reversibly induce axonal varicosities, allowing us to understand the mechanisms governing varicosity formation and heterogeneous protein composition. This system represents a novel means to evaluate the effects of compression and shear stress on different subcellular compartments of neurons, different from other in vitro systems that mainly focus on the effect of stretching. Importantly, owing to the unique features of our system, we recently made a novel discovery showing that the application of pressurized fluid can rapidly and reversibly induce axonal varicosities through the activation of a transient receptor potential channel. Our biomechanical system can be utilized conveniently in combination with drug perfusion, live cell imaging, calcium imaging, and patch clamp recording. Therefore, this method can be adopted for studying mechanosensitive ion channels, axonal transport regulation, axonal cytoskeleton dynamics, calcium signaling, and morphological changes related to traumatic brain injury.

This protocol describes a physiologically relevant, pressurized fluid approach for rapid and reversible induction of varicosities in neurons.

Un système de Microbiomechanical pour l’étude de la Formation de varicosité et récupération dans les axones des neurones centraux

Axonal varicosities are enlarged structures along the shafts of axons with a high degree of heterogeneity. They are present not only in brains with ...

Preparation of Peripheral Nerve Stimulation Electrodes for Chronic Implantation in Rats

Peripheral nerve cuff electrodes have long been used in the neurosciences and related fields for stimulation of, for example, vagus or sciatic nerves. Several recent studies have demonstrated the effectiveness of chronic VNS in enhancing central nervous system plasticity to improve motor rehabilitation, extinction learning, and sensory discrimination. Construction of chronically implantable devices for use in such studies is challenging due to rats&#8217; small size, and typical protocols require extensive training of personnel and time-consuming microfabrication methods. Alternatively, commercially available implantable cuff electrodes can be purchased at a significantly higher cost. In this protocol, we present a simple, low-cost method for construction of small, chronically implantable peripheral nerve cuff electrodes for use in rats. We validate the short and long-term reliability of our cuff electrodes by demonstrating that VNS in ketamine/xylazine anesthetized rats produces decreases in breathing rate consistent with activation of the Hering-Breuer reflex, both at the time of implantation and up to 10 weeks after device implantation. We further demonstrate the suitability of the cuff electrodes for use in chronic stimulation studies by pairing VNS with skilled lever press performance to induce motor cortical map plasticity.

Existing approaches for constructing chronically implantable peripheral nerve cuff electrodes for use in small rodents often require specialized equipment and/or highly trained personnel. In this protocol we demonstrate a simple, low-cost approach for fabricating chronically implantable cuff electrodes, and demonstrate their effectiveness for vagus nerve stimulation (VNS) in rats.

Préparation d’électrodes de stimulation nerveuse périphérique pour l’implantation chronique chez les rats

Peripheral nerve cuff electrodes have long been used in the neurosciences and related fields for stimulation of, for example, vagus or sciatic nerves. ...