הפקה של כתב היד הזה וידאו נתמך על ידי המכון הלאומי לשימוש בסמים המכונים / הלאומי לבריאות מענק DA016285 R15-02, אוניברסיטת וושינגטון המערבי פעילויות Biomedical Research ב Neuroscience יוזמת, ומערב אוניברסיטת וושינגטון.

1. בעלי חיים נושאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זכר ארוך אוונס חולדות הן 3 חודשים בתחילת המחקר. חולדות הן סימונסן הנגזרות (גילרוי, קליפורניה, ארה&quot;ב) וגדל בוושינגטון המערבי אוניברסיטת ביבר והם שוכנו בנפרד על מחזור של 12 שעות להפוך יום / לילה (האורות ב 0700) עם פורינה מילס פתיתי בע&quot;מ Mazuri מכרסמים (Summit גריי , מיזורי, ארה&quot;ב) ו כרצונך זמין מים המודעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל הדרכה ובחינות מתרחש בין 0900-1300 עם קבוצות של חולדות שאומנו תמיד ונבדקו באותו זמן יומי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולדות הם שקלו כל יום שני, רביעי ושישי למשך של המחקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסמוך לפני שלב האימונים, חולדות מקופחים מים כ -20 שעות על מנת לעודד סוכרוז מינהל עצמי ביום הראשון של האימונים. </li></ol> 2. נוהלי ההתנהגות כל נוהלי התנהגות אופרנטית להשתמש בתאי התניה אופרנטית רגילה (מד Associates Inc, סנט אלבנס, VT, ארה&quot;ב) עם משאבת אינפוזיה (רזאל מכשירים מדעיים, סנט אלבנס, VT, ארה&quot;ב), הממוקמים על גבי תא כל התניה אופרנטית. התניה אופרנטית לתאי מוקפים קול הפחתת ארונות עם אוהדים אוורור (מערב אוניברסיטת וושינגטון, ארה&quot;ב). כל התנאים ניסיוניים איסוף הנתונים נשלטים על ידי מד IV PC תוכנה (מד Associates Inc, סנט אלבנס, VT, ארה&quot;ב). התניה אופרנטית לתאי (30 x 20 x 24 ס&quot;מ) מכילים שני מנופים (אחד נייח ואחד נשלף), מחולל צליל, אור גירוי לבן מעל ידית נשלפת, ואור הבית האדום על הקיר ממול. משאבת עירוי מספק סוכרוז לתוך כלי קיבול פרס מימין מנוף הפעיל. מנופים הם 10 ס&quot;מ מהרצפה את הרשת. ארבעה photobeams אינפרא אדום שחוצים כל תא. הקורות מול כל אחד מהם 10.5 ס&quot;מ מהקירות בצד בצד קורות כל 6 ס&quot;מ מן הקירות הצדדיים. קרן כל 4.5 ס&quot;מ מעל הרצפה נירוסטה הבר. הקורותלהגדיר מחדש לספור את מספר הפסקות מוחלטת. המספר הכולל של הקרן נרשמות הפסקות במהלך בדיקה הדרכה השתוקקות. למעט מגבלה מים לפני האימון הראשון, חולדות ניתנים מזון ומים כרצונך מודעות הן בכלובים הביתה בתאי התניה אופרנטית. צ&#39;יימברס נמצאים בחדר מבחן ייעודי, כמו ביבר, הוא על מחזור אור הפוכה. חולדות מועברים בתוך כלובים בבית בין החדרים על עגלה כי הוא מכוסה בד חוסם אור. בסוף כל פגישה, חולדות הם חזרו הביתה בכלובים. ישנם שלושה שלבים בניסוי טיפוסי: הדרכה, התנזרות כפויה, ובדיקות. בדיקה היא ההשתוקקות שבו ישיבה מוערך. אנו מעריכים השתוקקות בשני הליכי בדיקה כללית, תלוי במחקר. שני אלה הליכים המתוארים בסעיפים 2.3.1 ו - 2.3.2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכשרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניסוי טיפוסי, חולדות לבלות 2 שעה / יום10 ימים רצופים בתאי התניה אופרנטית שבו הם רשאים ללחוץ על הדוושה נשלף (פעיל) לאספקת 0.2 מ&quot;ל של תמיסת סוכרוז 10% לתוך כלי קיבול מצד ימין של הידית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תגובה זו גם מפעיל גירוי מתחם המורכב של בטון (2 kHz, 15 dB מעל רעש הסביבה) לבין אור לבן. גירוי המתחם נמשך 5 s ואחריו זמן 40-s החוצה, שבמהלכה לחיצות על דוושה הפעיל נרשמות אבל אין תוצאה מתוכנת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תגובה על הידית (נייח) פעיל אין תוצאה מתוכנת, אבל בתי נרשמות. המספרים של קרן נרשמות הפסקות במהלך הדרכה ובדיקה. כל אמצעי התגובה של תנועה נרשמות לקורסים זמן (2 פחי דקות), אך מדווחות בדרך כלל הסיכומים בכל הפעלה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התנזרות כפויה. החולדות נשארות בכלובים בבית למשך התנזרות כפויה. תקופות טיפוסי התנזרות נאלצים אנו משתמשים הן כי חולדות נבדק הדואר היום מיד לאחר היום האחרון של ההדרכה (יום 1 של התנזרות בכפייה), או 30 ימים לאחר היום האחרון של ההדרכה (30 יום של התנזרות בכפייה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Extinction בלי רמזים. בהליך זה בדיקה, חולדות מותר הראשון ללחוץ על הדוושה פעיל בתנאים זהים הדרכה למעט בתגובה כי אין כל ההשלכות ואת משך הפגישה הוא 1 ח חולדות ניסיון לפחות שישה מפגשים אלה הכחדה ביום מבחן. כל מפגש הוא הכחדה מופרדות תקופה 5 דקות שבו הפעיל מנוף חזר והאור בבית כבוי. &quot;הכחדה&quot; מצוין אם ידית פעיל להגיב צומצם לפחות מ 20 בתי / h. חולדות מסוימות דורשות הפעלה השביעי. בפגישה הבאה (לאחר עיכוב נוסף 5 דקות) הוא מושב בדיקה שבה חולדות יכול מכן הקש לצליל + אות אור זה היה זיווג בתחילה עם כל משלוח של סוכרוז במהלך אימון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Extinction עם רמזים. בכך לקצרהליך בדיקת ד, חולדות מותר ללחוץ על הדוושה פעיל בתנאים זהים הדרכה אלא סוכרוז לא מועבר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחיצה על המנוף לא פעיל משמש כמדד של אפליה מנוף. זה גם, יחד עם הפסקות photobeam, המשמש כאמצעי של הפעלת הלא ספציפית המנוע. שינויים המוטורית לעומת מוטיבציה לסבך את הפרשנות של התנהגות השתוקקות. מנוף פעיל להגיב נתונים לשבור photobeam מועילים לבירור תרומות המנוע לעומת המוטיבציה תשוקה, כמו גם קבוצות השוואה במחקרים פרמקולוגיים שם חולדות להגיב בקצב גבוה עבור סוכרוז או אחר מזון מאותגרים עם תרכובת תשוקה העשויים להשפיע (למשל 7 , 8). </li></ol> 3. מניפולציות נציג להשפיע השתוקקות סוכרוז לאחר תקופות משתנות של התנזרות כפויה השיטה הכללית המתוארת כאן מספק דרך לחקור את determina התנהגותיות הנוירוביולוגילילות של השתוקקות לאחר תקופות משתנות של התנזרות כפויה. המתוארות כאן הן שיטות הקשורות תוצאות נציג כאמור בסעיף 4. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שובע. חולדות שקיבלו כמה בקבוקים של סוכרוז 10% בכלובים בביתם 17 שעות מיד לפני בדיקה 8. החולדות במחקר זה נבדקו באמצעות הכחדה ללא הליך רמזים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העשרה סביבתית. במהלך תקופת התנזרות בכפייה, החולדות כמה נשאר דיור בודדות (Controls), בעוד אחרים הועברו גדול (&quot;רוחב x 20&quot; x 36 עומק 40 &quot;גובה; קייג&#39; איכות מוצרים, פורטלנד, אורגון, ארה&quot;ב) כלוב עם שלוש קבוצות (מועשר). החיות מועשר היו כמה צעצועים בסביבתם כולל צינורות PVC, ניתנו גם צעצועים רומן כל M, W, F 10. החולדות במחקר זה נבדקו באמצעות הכחדה ללא הליך רמזים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתגר תרופתי. ביום הבדיקה, החולדות היו pretreated עם מינון של אנטגוניסט לדופמין D1 SCH 23390. חולדות wer את המחקר הזהדואר נבדק באמצעות הכחדה עם הליך רמזים. </li></ol> 4. נציג תוצאות: <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig1.jpg" /> איור 1 אימון נציג נתונים בדיקת הדגירה של הניסוי השתוקקות סוכרוז. נקודות הנתונים מצביעים על אמצעי ± ומשווקי מנועי חיפוש. גודל הקבוצה עבור איור 1a הוא 77 חולדות עבור הקבוצה איור 1b גדלים נע בין 11-12 לכל קבוצה. * הבדל משמעותי מהקבוצה יום 1, p &lt;0.05. דמות זו היא עיבוד נתונים 8 באישור שפרינגר. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig2.jpg" /> איור 2 אפקט השובע סוכרוז על השתוקקות סוכרוז אחרי 1 או 30 ימים של התנזרות כפויה. גודל הקבוצה 8-9 לכל קבוצה. * הבדל משמעותי מקבוצה 1 יום, הבדל † משמעותי שליטה בקבוצה, p &lt;0.05. נתון זה מותאםמתוך 9 באישור Elsevier. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig3.jpg" /> איור 3 חודש של העשרה סביבתית מופחתת השתוקקות סוכרוז. גודל הקבוצה כל 8 חולדות. * הבדל משמעותי בין 1 יום, הבדל † משמעותי שליטה בקבוצה, p &lt;0.05. דמות זו היא עיבוד 10 עם רשות הבריאות Kluwer וולטרס. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig4.jpg" /> איור 4 מערכתית SCH 23390 השתוקקות סוכרוז ירד בצורה יעילה יותר אחרי יום אחד של התנזרות כפויה. גודל הקבוצה 8-12 לכל קבוצה. * הבדל משמעותי מקבוצה 1 יום, הבדל † משמעותי מהקבוצה 0 מנה, p &lt;0.05. דמות זו היא עיבוד 8 באישור שפרינגר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איור 1 מציין נציג הדרכה ובדיקה נתונים עבור סוכרוז עצמית ניהול חולדות (איור1 TOP) ולאחר מכן להגיב ב Extinction עם קיו סוכרוז-לזווג הזמין (איור 1 למטה). כפי שניתן לראות, חולדות להגיב באופן סלקטיבי על המנוף פעיל במהלך הדרכה במהלך הבדיקה. מעניין, להגיב פעיל ופעילות של תנועה להראות כמה הדגירה, אם כי ההשפעה היא החזקה ביותר על מנוף פעיל להגיב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איור 2 מראה את ההשפעה של שובע עם סוכרוז על השתוקקות סוכרוז אחרי 1 או 30 ימים של התנזרות כפויה. השובע מופחת Extinction בלי רמזים להגיב לאחר תקופה או של התנזרות כפויה, אבל להגיב מופחת רק המקל סוכרוז לבד חולדות אשר רק יום אחד של התנזרות כפויה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כפי שניתן לראות בתרשים 3, העשרה סביבתית מופחתת הכחדה מודגרות ללא אות להגיב להגיב על המקל סוכרוז לבד התנהגויות לרמות מצאו אחרי יום אחד בלבד של התנזרות כפויה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איור 4 מתאר את ההשפעה של התנזרות תלויי SCH 23390 על הכחדה עם רמזים להגיב. SCH 23390 היה EF ביותרfective להפחית את הכמיהה סוכרוז לאחר 1, לעומת 30 ימים של התנזרות כפויה. </li></ol>

<ol>
	<li>Sobik, L., Hutchison, K., Craighead, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cue-elicited+craving+for+food:+a+fresh+approach+to+the+study+of+binge+eating.">Cue-elicited craving for food: a fresh approach to the study of binge eating.</a> Appetite. 44, 253-2561 (2005).</li><li>Geiger, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficits+of+mesolimbic+dopamine+neurotransmission+in+rat+dietary+obesity.">Deficits of mesolimbic dopamine neurotransmission in rat dietary obesity.</a> Neuroscience. 159, 1193-1199 (2009).</li><li>Grimm, J. W., Olmstead, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Craving In Animal Models of Drug Addiction. , 311-336 (2011).</li><li>Grimm, J. W., Kruzich, P. J., See, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contingent+access+to+stimuli+associated+with+cocaine+self-administration+is+required+for+reinstatement+of+drug-seeking+behavior.">Contingent access to stimuli associated with cocaine self-administration is required for reinstatement of drug-seeking behavior.</a> Psychobiology. 28, 383-386 (2000).</li><li>Bossert, J. M., Ghitza, U. E., Lu, L., Epstein, D. H., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobiology+of+relapse+to+heroin+and+cocaine+seeking:+an+update+and+clinical+implications.">Neurobiology of relapse to heroin and cocaine seeking: an update and clinical implications.</a> Eur. J. Pharmacol. 526, 36-50 (2005).</li><li>Bossert, J. M., Poles, G. C., Wihbey, K. A., Koya, E., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+blockade+of+dopamine+D1-family+receptors+in+nucleus+accumbens+core+or+shell+on+reinstatement+of+heroin+seeking+induced+by+contextual+and+discrete+cues.">Differential effects of blockade of dopamine D1-family receptors in nucleus accumbens core or shell on reinstatement of heroin seeking induced by contextual and discrete cues.</a> J. Neurosci. 27, 12655-12663 (2007).</li><li>Grimm, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+systemic+or+nucleus+accumbens-directed+dopamine+D1+receptor+antagonism+on+sucrose+seeking+in+rats.">Effects of systemic or nucleus accumbens-directed dopamine D1 receptor antagonism on sucrose seeking in rats.</a> Psychopharmacology (Berl). , (2011).</li><li>Grimm, J. W., Fyall, A. M., Osincup, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incubation+of+sucrose+craving:+effects+of+reduced+training+and+sucrose+pre-loading.">Incubation of sucrose craving: effects of reduced training and sucrose pre-loading.</a> Physiol Behav. 84, 73-79 (2005).</li><li>Grimm, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+enrichment+attenuates+cue-induced+reinstatement+of+sucrose+seeking+in+rats.">Environmental enrichment attenuates cue-induced reinstatement of sucrose seeking in rats.</a> Behav Pharmacol. 19, 777-785 (2008).</li><li>Shaham, Y., Shalev, U., Lu, L., De Wit, H., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reinstatement+model+of+drug+relapse:+history,+methodology+and+major+findings.">The reinstatement model of drug relapse: history, methodology and major findings.</a> Psychopharmacology (Berl). 168, 3-20 (2003).</li><li>Childress, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbic+activation+during+cue-induced+cocaine+craving.">Limbic activation during cue-induced cocaine craving.</a> Am J Psychiatry. 156, 11-18 (1999).</li><li>Gearhardt, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+Correlates+of+Food+Addiction.">Neural Correlates of Food Addiction.</a> Arch. Gen. Psychiatry. , (2011).</li><li>Markou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+drug+craving.">Animal models of drug craving.</a> Psychopharmacology (Berl). 112, 163-182 (1993).</li><li>Phillips, R. G., LeDoux, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+contribution+of+amygdala+and+hippocampus+to+cued+and+contextual+fear+conditioning.">Differential contribution of amygdala and hippocampus to cued and contextual fear conditioning.</a> Behav. Neurosci. 106, 274-285 (1992).</li><li>Holland, P. C., Bouton, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampus+and+context+in+classical+conditioning.">Hippocampus and context in classical conditioning.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 9, 195-202 (1999).</li><li>Epstein, D. H., Preston, K. L., Stewart, J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+model+of+drug+relapse:+an+assessment+of+the+validity+of+the+reinstatement+procedure.">Toward a model of drug relapse: an assessment of the validity of the reinstatement procedure.</a> Psychopharmacology (Berl). 189, 1-16 (2006).</li><li>Kupferschmidt, D. A., Brown, Z. J., Erb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Procedure+for+Studying+the+Footshock-Induced+Reinstatement+of+Cocaine+Seeking+in+Laboratory+Rats.">A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats.</a> J. Vis. Exp. (47), (2011).</li></ol>

כל ההליכים בעקבות ההנחיות המתוארות בסעיף &quot;עקרונות טיפול בבעלי חיים במעבדה&quot; (NIH פרסום לא. 86-23) וכן אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת וושינגטון המערבית מוסדיים ועדת שימוש.

הנהלים המתואר כאן יכול להיות מזוהה הליכי השבה, אם כי זה לא מדויק מבחינה טכנית כמנוף לחיצה על האות אינו כבה לפני הפגישה מבחן השתוקקות. בהליך כינון טיפוסית, להגיב עם גמול-לזווג רמזים הוא כיבה ולאחר מכן &quot;מחדש&quot; עם הממשל של המצגת הלא מותנה של הפרס (תחול-Induced השבה) או מלח?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> פריט </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוג </td></tr><tr><td> העשרה קייג&#39; </td><td> קייג&#39; איכות החברה </td><td> FH-36 ½ T-N </td></tr><tr><td> לשכת אופרנטית </td><td> מד Associates </td><td> MED-008-CT-B3 </td></tr><tr><td> SCH 23390 </td><td> סיגמא </td><td> D054 </td></tr></tbody></table>

a general method for evaluating incubation of sucrose craving in rats

עבור מישהו על תשוקה מזון מוגבלת, אוכל דיאטטי בתגובה מזון לזווג רמזים עשויה לשמש כנקודת מעבר מפתח התנהגותית בין התנזרות הישנות למזון לוקח 1. השתוקקות מזון conceptualized בדרך זו משול תשוקה סמים בתגובה סמים לזווג רמזים. ספרות עשירה פותחה סביב הבנת הגורמים ההתנהגותיים הנוירוביולוגי של השתוקקות לסמים, אנחנו ואחרים היו מתמקדים לאחרונה על תרגום טכניקות מחקר התמכרות בסיסית כדי להבין טוב יותר התמכרות כמו התנהגויות הקשורות לאוכל 2-4. נעשה כמו במחקרים קודמים של השתוקקות לסמים, אנו בוחנים התנהגות השתוקקות סוכרוז על ידי שימוש במודל עכברים של נסיגה. במודל זה, חולדות עצמית לנהל או סמים או מזון בהפעלות על פני כמה ימים. בפגישה, מנוף להגיב מספק את הפרס יחד עם בטון + גירוי האור. התנהגות השתוקקות אז הוא מוגדר תפעולית להגיב בתוךבפגישה שלאחר מכן שבו הגמול אינו זמין. חולדות יהיה אמין להגיב לצליל + גירוי האור, סביר בשל המאפיינים שלה רכשה חיזוק מותנה 5. התנהגות זו מכונה לעיתים מחפשים סוכרוז או תגובתיות קיו. בדיון הנוכחי נשתמש &quot;השתוקקות סוכרוז&quot; המונח לכבוש את שני המושגים הללו. בעשור האחרון, יש לנו התמקדו איך את משך הזמן הבאים עצמית הממשל לתגמל השפעות השתוקקות גמול. מעניין לציין, כי חולדות להגדיל להגיב על אות גמול-לזווג במהלך כמה שבועות של תקופה של התנזרות-בכפייה. &quot;דגירה של השתוקקות&quot; זו נצפתה אצל חולדות אשר למילוי עצמי או מזון או תרופות של התעללות 4,6. גידול זה תלוי זמן על השתוקקות שזיהינו במודל חיה יכול להיות רלוונטיות פוטנציאל גדול התרופה האדם התמכרות התנהגויות מזון. כאן אנו מציגים פרוטוקול הדגירה של הערכת sucrose השתוקקות אצל חולדות. גרסאות של ההליך תסומן שבו הכמיהה נבחנת כפי להגיב על רמז, סוכרוז לזווג בדידים הבאים הכחדה של מנוף לחיצה בתוך סוכרוז העצמי הממשל בהקשר (Extinction בלי רמזים) או להגיב על סוכרוז, לזווג רמזים בהקשר הכחדה כללית (Extinction עם רמזים).

Watch this Scientific Journal Video about A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats at JoVE.com

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

בתגובה לאותות מזון או תרופות לזווג עליות במהלך תקופה של התנזרות זה עשוי להתייחס רגישות מוגברת להתנהגויות הישנות. כאן אנו פרט בהליך להערכת זה &quot;דגירה של השתוקקות&quot; אצל חולדות אשר למילוי עצמי סוכרוז.

שיטה כללית להערכת דגירה של השתוקקות סוכרוז בחולדות

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

a-general-method-for-evaluating-incubation-of-sucrose-craving-in-rats

Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.2K Views.  Western Washington University. בתגובה לאותות מזון או תרופות לזווג עליות במהלך תקופה של התנזרות זה עשוי להתייחס רגישות מוגברת להתנהגויות הישנות. כאן אנו פרט בהליך להערכת זה "דגירה של השתוקקות" אצל חולדות אשר למילוי עצמי סוכרוז.

Video: A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

A Simple Composite Phenotype Scoring System for Evaluating Mouse Models of Cerebellar Ataxia

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebella ataxia. It is derived from previously published phenotype assessments in several disease models, including spinocerebellar ataxias, Huntington s disease and spinobulbar muscular atrophy. Measures include hind limb clasping, ledge test, gait and kyphosis. Each measure is recorded on a scale of 0-3, with a combined total of 0-12 for all four measures. The results effectively discriminate between affected and non-affected individuals, while also quantifying the temporal progression of neurodegenerative disease phenotypes. Measures may be analyzed individually or combined into a composite phenotype score for greater statistical power. The ideal combination of the four described measures will depend upon the disorder in question. We present an example of the protocol used to assess disease severity in a transgenic mouse model of spinocerebellar ataxia type 7 (SCA7).
Albert R. La Spada and Gwenn A. Garden contributed to this manuscript equally.

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebellar ataxia. Measures include hind limb clasping, ledge test, gait and kyphosis. This protocol effectively discriminates between affected and non-affected individuals, and detects the progression of affected individuals over time.

ניקוד פשוט Composite הפנוטיפ מערכת להערכת מודלים של עכבר אטקסיה cerebellar

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebella ataxia. It is derived from previously ...

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended upon this work to develop a simple quantitative measure of forepaw dexterity that is sensitive to lateralized impairments and age-dependent changes. Rodents learn skillful forepaw and digit movements to manage thin pasta pieces, which they eagerly consume. We have previously described methods for quantifying vermicelli handling in rats and showed that the measures are very sensitive to forelimb impairments resulting from unilateral ischemic lesions, middle cerebral artery occlusions and unilateral striatal dopamine depletion [Allred, R.P., Adkins, D.L., Woodlee, M.T., Husbands, L.C., Maldonado M.A., Kane, J.R., Schallert, T. &amp; Jones, T.A. The Vermicelli Handling Test: a simple quantitative measure of dexterous forepaw function in rats. J. Neurosci. Methods 170, 229-244 (2008)]. Here we present a more detailed protocol for this test in rats and compare it with a newly developed version for mice, the Capellini Handling Test. Rats and mice are videotaped while handling short lengths of uncooked vermicelli or capellini pasta, respectively, with a camera positioned to optimize the view of paw movements. Slow motion video playback allows for the identification of forepaw adjustments, defined as any distinct removal and replacement of the paw, or of any number of digits, on the pasta piece after eating commences. Forepaw adjustments per piece are averaged over trials per each testing session. Repeated testing permits sensitive quantitative analysis of changes in forepaw dexterity over time. Protocols for pre-testing habituation and handling practice, as well as procedures for characterizing atypical handling patterns, are described. Because rats and mice perform the pasta handling tests slightly differently, species-specific differences in administration and scoring of these tests are highlighted. All animal use was in accordance with protocols approved by the University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

The Vermicelli and Capellini Handling Tests of forepaw dexterity take advantage of the natural inclination of rodents to manipulate food items using skillful forepaw and digit movements. Animals are videotaped while handling short strands of uncooked dry pasta. Slow motion video playback allows for the quantification of forepaw adjustments.

אטריה ו בדיקות Capellini טיפול: מדדים כמותיים פשוט פונקציה של מיומנות בכפו אצל חולדות ועכברים

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse. Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the neurobiology and phenomenology of relapse to drug use. Although procedural variations have emerged over the past several decades, the most conventional reinstatement procedures are based on the drug self-administration (SA) model. In this model, an animal is trained to perform an operant response to obtain drug. Subsequently, the behavior is extinguished by withholding response-contingent reinforcement. Reinstatement of drug seeking is then triggered by a discrete event, such as an injection of the training drug, re-exposure to drug-associated cues, or exposure to a stressor 1.
Reinstatement procedures were originally developed to study the ability of acute non-contingent exposure to the training drug to reinstate drug seeking in rats and monkeys 1, 2. Reinstatement procedures have since been modified to study the role of environmental stimuli, including drug-associated cues and exposure to various forms of stress, in relapse to drug seeking 1, 3, 4.
Over the past 15 years, a major focus of the reinstatement literature has been on the role of stress in drug relapse. One of the most commonly used forms of stress for studying this relationship is acute exposures to mild, intermittent, electric footshocks. The ability of footshock stress to induce reinstatement of drug seeking was originally demonstrated by Shaham and colleagues (1995) in rats with a history of intravenous heroin SA5. Subsequently, the effect was generalized to rats with histories of intravenous cocaine, methamphetamine, and nicotine SA, as well as oral ethanol SA 3, 6.
Although footshock-induced reinstatement of drug seeking can be achieved reliably and robustly, it is an effect that tends to be sensitive to certain parametrical variables. These include the arrangement of extinction and reinstatement test sessions, the intensity and duration of footshock stress, and the presence of drug-associated cues during extinction and testing for reinstatement. Here we present a protocol for footshock-induced reinstatement of cocaine seeking that we have used with consistent success to study the relationship between stress and cocaine seeking.

Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the role of stress in relapse to drug seeking. Here, we report on a method for inducing the reinstatement of cocaine seeking in laboratory rats via acute exposures to mild, intermittent electric footshock.

נוהל לימוד החזרה Footshock-induced של קוקאין מחפשים אצל חולדות מעבדה

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Preparation of Synaptoneurosomes from Mouse Cortex using a Discontinuous Percoll-Sucrose Density Gradient

Synaptoneurosomes (SNs) are obtained after homogenization and fractionation of mouse brain cortex. They are resealed vesicles or isolated terminals that break away from axon terminals when the cortical tissue is homogenized. The SNs retain pre- and postsynaptic characteristics, which makes them useful in the study of synaptic transmission. They retain the molecular machinery used in neuronal signaling and are capable of uptake, storage, and release of neurotransmitters.
The production and isolation of active SNs can be problematic using medias like Ficoll, which can be cytotoxic and require extended centrifugation due to high density, and filtration and centrifugation methods, which can result in low activity due to mechanical damage of the SNs. However, the use of discontinuous Percoll-sucrose density gradients to isolate SNs provides a rapid method to produce good yields of translationally active SNs. The Percoll-sucrose gradient method is quick and gentle as it employs isotonic conditions, has fewer and shorter centrifugation spins and avoids centrifugation steps that pellet SNs and cause mechanical damage.

A method to prepare translationally active, intact synaptoneurosomes (SNs) from mouse brain cortex is described. The method uses a discontinuous Percoll-sucrose density gradient allowing for the quick preparation of active SNs.

הכנת Synaptoneurosomes מ - עכבר Cortex באמצעות צבע רציפה Percoll-סוכרוז צפיפות

Synaptoneurosomes (SNs) are obtained after homogenization and fractionation of mouse brain cortex. They are resealed vesicles or isolated terminals that ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the use of IUE for investigating behavior or neuropathology in the adult brain has been limited by insufficient methods for monitoring of IUE transfection success by non-invasive techniques in postnatal animals. 
 For the present study, E16 rats were used for IUE. After intraventricular injection of the nucleic acids into the embryos, positioning of the tweezer electrodes was critical for targeting either the developing cortex or the hippocampus. 
 Ventricular co-injection and electroporation of a luciferase gene allowed monitoring of the transfected cells postnatally after intraperitoneal luciferin injection in the anesthetized live P7 pup by in vivo bioluminescence, using an IVIS Spectrum device with 3D quantification software. 
 Area definition by bioluminescence could clearly differentiate between cortical and hippocampal electroporations and detect a signal longitudinally over time up to 5 weeks after birth. This imaging technique allowed us to select pups with a sufficient number of transfected cells assumed necessary for triggering biological effects and, subsequently, to perform behavioral investigations at 3 month of age. As an example, this study demonstrates that IUE with the human full length DISC1 gene into the rat cortex led to amphetamine hypersensitivity. Co-transfected GFP could be detected in neurons by post mortem fluorescence microscopy in cryosections indicating gene expression present at &ge;6 months after birth.
 We conclude that postnatal bioluminescence imaging allows evaluating the success of transient transfections with IUE in rats. Investigations on the influence of topical gene manipulations during neurodevelopment on the adult brain and its connectivity are greatly facilitated. For many scientific questions, this technique can supplement or even replace the use of transgenic rats and provide a novel technology for behavioral neuroscience.

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Genes can be manipulated during development of the cortex or the hippocampus of the rat via in utero electroporation (IUE) at E16, to enable fast and targeted modifications in neuronal connectivity for later studies of behavior or neuropathology in adult animals. Postnatal in vivo imaging for control of IUE success is performed by bioluminescence of activating co-transfected luciferase.

דור של חולדות למריחה מהונדסים על ידי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation ו<em&gt; בvivo</em&gt; הקרנת פליטת אור

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Preparation of Synaptic Plasma Membrane and Postsynaptic Density Proteins Using a Discontinuous Sucrose Gradient

Neuronal subcellular fractionation techniques allow the quantification of proteins that are trafficked to and from the synapse. As originally described in the late 1960&#8217;s, proteins associated with the synaptic plasma membrane can be isolated by ultracentrifugation on a sucrose density gradient. Once synaptic membranes are isolated, the macromolecular complex known as the post-synaptic density can be subsequently isolated due to its detergent insolubility. The techniques used to isolate synaptic plasma membranes and post-synaptic density proteins remain essentially the same after 40 years, and are widely used in current neuroscience research. This article details the fractionation of proteins associated with the synaptic plasma membrane and post-synaptic density using a discontinuous sucrose gradient. Resulting protein preparations are suitable for western blotting or 2D DIGE analysis.

This article details the enrichment of proteins associated with the synaptic plasma membrane by ultracentrifugation on a discontinuous sucrose gradient. The subsequent preparation of post-synaptic density proteins is also described. Protein preparations are suitable for western blotting or 2D DIGE analysis.

הכנת Synaptic פלזמה ממברנה וחלבוני צפיפות Postsynaptic באמצעות שיפוע סוכרוז רציף

Neuronal subcellular fractionation techniques allow the quantification of proteins that are trafficked to and from the synapse. As originally described in ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life. The cold plantar assay allows the objective and inexpensive assessment of cold sensitivity in mice, and can quantify both analgesia and hypersensitivity. Mice are acclimated on a glass plate, and a compressed dry ice pellet is held against the glass surface underneath the hindpaw. The latency to withdrawal from the cooling glass is used as a measure of cold sensitivity.
Cold sensation is also important for survival in regions with seasonal temperature shifts, and in order to maintain sensitivity animals must be able to adjust their thermal response thresholds to match the ambient temperature. The Cold Plantar Assay (CPA) also allows the study of adaptation to changes in ambient temperature by testing the cold sensitivity of mice at temperatures ranging from 30 &#176;C to 5 &#176;C. Mice are acclimated as described above, but the glass plate is cooled to the desired starting temperature using aluminum boxes (or aluminum foil packets) filled with hot water, wet ice, or dry ice. The temperature of the plate is measured at the center using a filament T-type thermocouple probe. Once the plate has reached the desired starting temperature, the animals are tested as described above.
This assay allows testing of mice at temperatures ranging from innocuous to noxious. The CPA yields unambiguous and consistent behavioral responses in uninjured mice and can be used to quantify both hypersensitivity and analgesia. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 &#176;C and 5 &#176;C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

שיטה פשוטה וזולה לקביעה קרה רגישות והסתגלות בעכברים

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the experimental time, and increases the number of animals that are utilized per study. This limitation specifically impacts protocols such as calcium imaging that require prolonged pre-incubation with bath-applied dyes. Exponential bacterial growth within 3 - 4 h after slicing is tightly correlated with a decrease in tissue health. This study describes a method for&#160;limiting the proliferation of bacteria in acute preparations to maintain viable neuronal tissue for prolonged periods of time (&#62;24 h) without the need for antibiotics, sterile procedures, or tissue culture media containing growth factors. By cycling the extracellular fluid through UV irradiation and keeping the tissue in a custom holding chamber at 15 - 16 &#176;C, the tissue shows no difference in electrophysiological properties, or calcium signaling through intracellular calcium dyes at &#62;24 h postdissection. These methods will not only extend experimental time for those using acute neuronal tissue, but will reduce the number of animals required to complete experimental goals, and will set a gold standard for acute neuronal tissue incubation.

Once removed from the body, neuronal tissue is greatly affected by environmental conditions, leading to eventual degradation of the tissue after 6 - 8 h. Using a unique incubation method, which closely monitors and regulates the extracellular environment of the tissue, tissue viability can be significantly extended for &#62;24 h.

דגירה ממושכת של רקמות חריפות עצביות עבור Electrophysiology ו-הדמית סידן

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such as epilepsy and neurodegenerative disorders. However, it is technically difficult to obtain EEG recordings in neonates as it requires specialized handling and great care. Here, we present a novel method to record EEG in neonatal rat pups (P8-P15). We designed a simple and reliable electrode using computer pin loci; it can be easily implanted into the skull of a rat pup to record high-quality EEG signals in the normal and epileptic brain. Pups were given an intraperitoneal (i.p.) injection of the neurotoxin kainic acid (KA) to induce epileptic seizures. The surgical implantation performed in this procedure is less expensive than other EEG procedures for neonates. This method allows one to record high-quality and stable EEG signals for more than 1 week. Furthermore, this procedure can also be applied to adult rats and mice to study epilepsy or other neurological disorders.

Here, we introduce a novel technique designed to record electroencephalography (EEG) in freely moving neonatal epileptic pups and describe its procedures, features, and applications. This method allows one to record EEG for more than 1 week.

הקלטה EEG בחופשיות העברת חולדות neonatal בשיטת רומן

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Touchscreen Sustained Attention Task (SAT) for Rats

Sustained attention is the ability to monitor intermittent and unpredictable events over a prolonged period of time. This attentional process subserves other aspects of cognition and is disrupted in certain neurodevelopmental, neuropsychiatric, and neurodegenerative disorders. Thus, it is clinically important to identify mechanisms that impair and improve sustained attention. Such mechanisms are often first discovered using rodent models. Therefore, several behavior procedures for testing aspects of sustained attention have been developed for rodents. One, first described by McGaughy and Sarter (1995), called the sustained attention task (SAT), trains rats to distinguish between signal (i.e., brief light presentation) and non-signal trials. The signals are short and thus require careful attention to be perceived. Attentional demands can be increased further by introducing a distractor (e.g., flashing houselight). We have modified this task for touchscreen operant chambers, which are configured with a touchscreen on one wall that can present stimuli and record responses. Here we detail our protocol for SAT in touchscreen chambers. Additionally, we present standard measures of performance in male and female Sprague-Dawley rats. Comparable performance on this task in both sexes highlights its use for attention studies, especially as more researchers are including female rodents in their experimental design. Moreover, the easy implementation of SAT for the increasingly popular touchscreen chambers increases its utility.

Touchscreen Sustained Attention Task SAT for Rats

Sustained attention, or continuously monitoring situations for intermittent and unpredictable events, is a critical aspect of cognition. Here we detail how to test sustained attention in rats using touchscreen operant chambers. We demonstrate comparable performance in male and female rats, making this task useful for studying attention in both sexes.

מסך מגע מתקבלת תשומת לב הפעילות (SAT) עבור חולדות

Sustained attention is the ability to monitor intermittent and unpredictable events over a prolonged period of time. This attentional process subserves ...