המחברים מודים ניקו Zantl, קלאוס פפר, ו ברנהרד הולצמן. מחקר זה נתמך על ידי Forschungsgemeinschaft דויטשה, בון-Bad Godesberg, גרמניה (GRK-840; וו 450/10-1).

1. הכנת עכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר באמצעות זריקה intraperitoneal של נוזל נרקוטיים (ראה טבלה של ריאגנטים) ולמקם אותו במצב שכיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרגליים של העכבר צריך להיות קבוע עם סרט על הצלחת כדי להבטיח עמדה יציבה של החיה במהלך המבצע. </li></ol> 2. מבצע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח צינורית iv, אשר נמצא בשימוש נפוץ אצל בני אדם עבור iv זריקות, ו לגלף צינור פלסטיק שלה מעגלית 2mm מקצהו. אנו משתמשים בשלושה גדלים שונים של cannulas לשלוט שיעורי התמותה (BD Venflon 18GA (1,2 x45mm, 80 mL / min); 16GA (1,7 x45mm, 180 mL / min) 14GA (2,0 x45mm, 270 mL / min)). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר חיטוי יסודי של עור הבטן, לחתוך אותה לאורך קו האמצע שלה על 15mm. פתח את המערה הצפק על ידי חריטה שרירי הבטן ואת הצפק לאורך linea alba. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את מוט cecal ולשלוף בזהירות cecum, מסוף מעי הגס עולה מתוך הבטן על ידי שימוש צמר גפן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15mm דיסטלי של השסתום ileocecal, צריך לחדור את החומה של המעי הגס עולה עם תפר 7 / 0. ובכך, נגעים של כלי הבטן צריך להימנע. תפר הוא קבוע על הקיר הגס בשני קשרים כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו לנקב את המעי הגס עולה עם 1-2 מ&quot;מ מוכן הצינורית הפרוקסימלית מ תפר 7 / 0. בזהירות להכניס את הצינורית לתוך המעי הגס עד תלם בצינור פלסטיק ברמה עם serosa. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את הקצוות ללא תפר 7 / 0 סביב צינורית והמקום קשר כפולה בדיוק לתוך התלם מוכן צינור פלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו, לקחת את המחט של תפר 7 / 0 ו לתפור אותו דרך הקיר antimesenteric של המעי הגס. ברציפות, שני קשרים כירורגית צריך להתבצע עד ובנוסף לתקן את צינור פלסטיק בקיר המעי הגס. חותכים את הקצוות לתפור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחזר את חלק הברזל של צינורית קטנה וחתך את צינור הפלסטיק קרוב (1 מ&quot;מ) כדי לתקן את 7 / 0 תפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו יש צורך בזהירות חלב שרפרף מ cecum כלפי סטנט המעי הגס על ידי שימוש ספוגיות כותנה עד קצה שרפרף קטן מופיע על גבי תומכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את המעיים בחזרה לתוך המערה הצפק ו החייאה performe נוזל ידי הממשל intraperitoneal של 0.5 מ&quot;ל של תמיסת מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הצפק עם תפר מתמשך (4 / 0). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את העור עם התפרים יחיד (4 / 0). </li></ol> 3. טיפול לאחר הניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את החיה בכלוב שלה, אשר אמור להכיל מזון, מים מספיק. עבור כאבים, הממשל intraperitoneal של חומר משכך כאבים חזק (אנחנו משתמשים עצירות) יש לבצע על בסיס קבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך היומיים הראשונים לאחר הניתוח, יש לשלוט על חיות כל 6 שעות. </li></ol> 4. שאם CASP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע צעדים 1.1-2.4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אין לנקב את המעי הגס. רק לבצע פעולות 2.6-2.8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע צעדים 2.10-3.2. </li></ol> 5. כספי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע CASP באמצעות בעקבות 14G צינורית צעדים 1.1-3.1 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5 שעות לאחר CASP, יש להפעיל את החיה שוב. הכן להרדים את העכבר שוב לפי שלבים 1.1-1.2 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את התפרים של דופן הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את המעי הגס עולה עם סטנט מוכנס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לחתוך את התפרים תיקון סטנט ולהסיר את הסטנט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הפגם במעי הגס עם התפרים היפוך יחיד (7 / 0). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את המעיים בחזרה לתוך חלל הבטן ואת הסומק האחרון פעמיים עם 10 מ&quot;ל של תמיסת מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הצפק עם תפר מתמשך (4 / 0). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את העור עם התפרים יחיד (4 / 0). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הפעולות 3.1-3.2 </li></ol> 6. נציג תוצאות תוך כמה שעות לאחר הניתוח, בעלי חיים מראים סימנים קליניים של ספסיס התחלה. סימפטומים אופייניים של המחלה מופחתים, ניידות מעיל horrent, הזעה, וירידה בצריכת המזון, אובדן משקל מופחת גם התנהגות מילוט. בעלי חיים לפתח דלקת הצפק חמורה עם זיהום מערכתי רצופים בדרך כלל מתים תוך 48h. בהתאם לגודל מוכנס הסטנט, שיעורי התמותה מובהק יכול להיות שנוצר. תוצאות סטנט 14G בתמותה 100%, 16G נותן התמותה 70%, ושיעורי תמותה של 50% ניתן להגיע באמצעות סטנט 18G (איור 1 א). תוצאות המבצע שאם שיעור הישרדות של 100%. בדרך כלל, כל בעלי החיים מתים inbetween הראשון 48 שעות אחרי CASP. לפיכך, כל בעלי החיים כי הם בחיים בשלב זה זמן יכול להיחשב הניצולים. עם זאת, אנו ממליצים על תקופת תצפית נוספת של לפחות 72 שעות כדי לזהות נדיר &quot;מוות מאוחר&quot; לאחר CASP. התוצאה של כספי תלוי פרק הזמן לאחר CASP כאשר סטנט מוסר. התערבות 3h לאחר תוצאות CASP בשיעור ההישרדות של 45%. אם סטנט מוסר 5h לאחר CASP, רק 10%החיות לשרוד את ההליך. הסרת סטנט לאחר תוצאות 9h בתמותה של 100% (איור 1b). שאם כספי מוביל הישרדות 100%. עבור הגדרות כספי, אנו ממליצים על תקופת תצפית של 10 ימים כי אין בדרך כלל הם בעלי חיים, אשר למות יאוחר מ 48 שעות לאחר CASP. בדיקה מקרוסקופית של הבטן מנח 24 שעות לאחר CASP מראה סימנים אופייניים של דלקת הצפק: בצקת, vasodilatation, קיר הבטן erythematic, תיחום חד של טלאים של Peyer, שיתוק מעיים, נוזל חופשי, הפרשת ספיגה (איור 2). זיהום מערכתי ניתן להראות על ידי ניתוח בקטריולוגית. 12 שעות לאחר CASP, כמויות חיידקים מסיבי ניתן להבחין שטיפה פריטוניאלית, דם, הכבד, הריאות, הטחול והכליות. ניתוח איכותני של חיידקים מגלה זיהום מערכתי על ידי חיידקים במעיים טיפוסי כמו E. coli, bacteroides מינים, מינים אנטרוקוקוס, וכו &#39;(איור 3). CASP-Induced אלח דם מתבטא שחרור המקומית מערכתית גם של ציטוקינים chemokines הפרו ואנטי דלקתיים. 12 השעות הבאות, CASP כמויות משמעותיות של TNF, IL-1β, IL-6, IL-10, MCP-1 ואחרים ניתן למדוד ELISA בדם, אלא גם supernatants של המתלים איברים, כגון הכבד, הריאות, טחול, כליות (איור 4). בעת הקמת CASP במעבדה שלך, שיעורי ההישרדות, בקטריולוגיה ושחרור ציטוקינים צריך לקחת שליטה על פרמטרים כמו ביצועים הנכון של CASP. מאוחר יותר, פרמטרים אלה ניתן לקחת כסטנדרט הקריא את כל הגדרות המערכת עבור הניסוי. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig1.jpg" alt="איור 1" /> איור 1a: הישרדות לאחר CASP. שיעורי ההישרדות לאחר הניתוח CASP תלוי בקוטר של סטנט מוכנס. 14G תוצאות CASP שיעור תמותה של 100%, התוצאות CASP 16G בתמותה 70%, ו CASP 18G מוביל לתמותה של 50%. שאם CASP קשורה הישרדות של 100%. . n = 20/group ב &#39;: שיעורי ההישרדות לאחר הניתוח כספי תלוי בזמן הסרת סטנט. הסרת סטנט ב 3h לאחר 14G CASP מוביל שיעור תמותה של 55%. הסרת סטנט ב 5 שעות לאחר 14G תוצאות CASP בשיעור התמותה של 90% ואילו הסרת סטנט ב 9h לאחר תוצאות CASP 14G ב 100% תמותה. שאם כספי (5 שעות) תוצאות ההישרדות של 100%. n = 10/group (שאם כספי; כספי 9h), n = 20/group (3h כספי; 5h כספי). <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2: 24 שעות מנח בטן לאחר CASP. דופן הבטן הוסר לאחר 24 שעות 16G CASP או אחיזת עיניים CASP, בהתאמה. מנח של העכבר מזויף פעלו נראה פיזיולוגיים. לעומת זאת, תוצאות CASP ב בצקת, hyperemia, המעיים dilatated, ועל תיחום טלאים של Peyer הוכחת חמורה דלקת הצפק. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3: בקטריולוגיה. CASP גורמת זיהום חמור של מספר תאים ואיברים ידי חיידקים במעיים בתוך 12 שעות לאחר הניתוח. מספרים חיידקית מקבלים כיחידות המושבה להרכיב (CFU) לכל מ&quot;ל, בהתאמה. תרביות חיידקים שנלקחו עכברים מזויף פעלו הם סטריליים לחלוטין (לא מוצג). 16G CASP, n = 5/group. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4: ציטוקינים. CASP מעורר תגובה חיסונית מערכתית כמו ציטוקינים מספר chemokines הם להבחין פלזמה וגם supernatants איברים. הדמות exemplarily מציגה את הפרו ציטוקינים דלקתיים גורם נמק הגידול (TNF) ו - interleukin-6 (IL-6), כמו גם את בעיקר אנטי דלקתיות IL-10. 12 שעות לאחר CASP, רמות מדהים ניתן לאתר בפלסמה, הכבד, הריאות, הטחול. עם זאת, IL-10 לא ניתן לאתר הריאות והטחול לאחר CASP. פעולה שאם אינה מובילה הפרשת ציטוקינים כלשהו (לא מוצג). 16G CASP, n = 5/group.

<ol>
	<li>Maier, S., Traeger, T., Entleutner, M., Westerholt, A., Kleist, B., Huser, N., Holzmann, B., Stier, A., Pfeffer, K., Heidecke, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cecal+ligation+and+puncture+versus+colon+ascendens+stent+peritonitis:+two+distinct+animal+models+for+polymicrobial+sepsis.">Cecal ligation and puncture versus colon ascendens stent peritonitis: two distinct animal models for polymicrobial sepsis.</a> Shock. 21, 505-511 (2004).</li><li>Bougaki, M., Searles, R. J., Kida, K., Yu, J. D. e., Buys, E. S., Ichinose, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOS3+protects+against+systemic+inflammation+and+myocardial+dysfunction+in+murine+polymicrobial+sepsis.">NOS3 protects against systemic inflammation and myocardial dysfunction in murine polymicrobial sepsis.</a> Shock. , (2009).</li><li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis:+setting+the+stage.">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li><li>Busse, M., Traeger, T., Potschke, C., Billing, A., Dummer, A., Friebe, E., Kiank, C., Grunwald, U., Jack, R. S., Schutt, C., Heidecke, C. D., Maier, S., Broker, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+role+for+CD4++T+lymphocytes+in+murine+diffuse+peritonitis+due+to+inhibition+of+local+bacterial+elimination.">Detrimental role for CD4+ T lymphocytes in murine diffuse peritonitis due to inhibition of local bacterial elimination.</a> Gut. 57, 188-195 (2008).</li><li>Daubeuf, B., Mathison, J., Spiller, S., Hugues, S., Herren, S., Ferlin, W., Kosco-Vilbois, M., Wagner, H., Kirschning, C. J., Ulevitch, R., Elson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TLR4/MD-2+monoclonal+antibody+therapy+affords+protection+in+experimental+models+of+septic+shock.">TLR4/MD-2 monoclonal antibody therapy affords protection in experimental models of septic shock.</a> J Immunol. 179, 6107-6114 (2007).</li><li>Entleutner, M., Traeger, T., Westerholt, A., Holzmann, B., Stier, A., Pfeffer, K., Maier, S., Heidecke, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+interleukin-12,+oxidative+burst,+and+iNOS+on+the+survival+of+murine+fecal+peritonitis.">Impact of interleukin-12, oxidative burst, and iNOS on the survival of murine fecal peritonitis.</a> Int J Colorectal Dis. 21, 64-70 (2006).</li><li>Kerschen, E. J., Fernandez, J. A., Cooley, B. C., Yang, X. V., Sood, R., Mosnier, L. O., Castellino, F. J., Mackman, N., Griffin, J. H., Weiler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxemia+and+sepsis+mortality+reduction+by+non-anticoagulant+activated+protein.">Endotoxemia and sepsis mortality reduction by non-anticoagulant activated protein.</a> C. J Exp Med. 204, 2439-2448 (2007).</li><li>Kiank, C., Koerner, P., Kessler, W., Traeger, T., Maier, S., Heidecke, C. D., Schuett, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seasonal+variations+in+inflammatory+responses+to+sepsis+and+stress+in+mice.">Seasonal variations in inflammatory responses to sepsis and stress in mice.</a> Crit Care Med. 35, 2352-2358 (2007).</li><li>Lustig, M. K., Bac, V. H., Pavlovic, D., Maier, S., Grundling, M., Grisk, O., Wendt, M., Heidecke, C. D., Lehmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+ascendens+stent+peritonitis--a+model+of+sepsis+adopted+to+the+rat:+physiological,+microcirculatory+and+laboratory+changes.">Colon ascendens stent peritonitis--a model of sepsis adopted to the rat: physiological, microcirculatory and laboratory changes.</a> Shock. 28, 59-64 (2007).</li><li>Traeger, T., Kessler, W., Assfalg, V., Cziupka, K., Koerner, P., Dassow, C., Breitbach, K., Mikulcak, M., Steinmetz, I., Pfeffer, K., Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+role+of+CC+chemokine+receptor+4+in+murine+polymicrobial+sepsis.">Detrimental role of CC chemokine receptor 4 in murine polymicrobial sepsis.</a> Infect Immun. 76, 5285-5293 (2008).</li><li>Traeger, T., Kessler, W., Hilpert, A., Mikulcak, M., Entleutner, M., Koerner, P., Westerholt, A., Cziupka, K., Rooijen, N. v. a. n., Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+depletion+of+alveolar+macrophages+in+polymicrobial+sepsis+increases+lung+injury,+bacterial+load+and+mortality+but+does+not+affect+cytokine+release.">Selective depletion of alveolar macrophages in polymicrobial sepsis increases lung injury, bacterial load and mortality but does not affect cytokine release.</a> Respiration. 77, 203-213 (2009).</li><li>Traeger, T., Mikulcak, M., Eipel, C., Abshagen, K., Diedrich, S., Heidecke, C. D., Maier, S., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kupffer+cell+depletion+reduces+hepatic+inflammation+and+apoptosis+but+decreases+survival+in+abdominal+sepsis.">Kupffer cell depletion reduces hepatic inflammation and apoptosis but decreases survival in abdominal sepsis.</a> Eur J Gastroenterol Hepatol. , (2010).</li><li>Weighardt, H., Kaiser-Moore, S., Schlautkotter, S., Rossmann-Bloeck, T., Schleicher, U., Bogdan, C., Holzmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+I+IFN+modulates+host+defense+and+late+hyperinflammation+in+septic+peritonitis.">Type I IFN modulates host defense and late hyperinflammation in septic peritonitis.</a> J Immunol. 177, 5623-5630 (2006).</li><li>Zantl, N., Uebe, A., Neumann, B., Wagner, H., Siewert, J. R., Holzmann, B., Heidecke, C. D., Pfeffer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+gamma+interferon+in+survival+of+colon+ascendens+stent+peritonitis,+a+novel+murine+model+of+abdominal+sepsis.">Essential role of gamma interferon in survival of colon ascendens stent peritonitis, a novel murine model of abdominal sepsis.</a> Infect Immun. 66, 2300-2309 (1998).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

CASP הוא מודל polymicrobial של אלח דם בטן שעונה לקריטריונים הניחו ביותר עבור מודל אלח דם יקר: CASP ניתן לבצע חיות קטנות, הוא לשעתקו מאוד, לפקח בקלות על ידי פרמטרים סטנדרטיים, מספק טוב לקרוא את האפשרויות, וכן מקרוב מחקה במסגרות קליניות של בטן אלח דם. במחקר השוואתי יכולנו להראות כי CASP מוביל מפוזר עם דלקת הצפק מוקדם מערכתית בהתמדה ודלקת (תגובה מערכתית תסמונת דלקת), ואילו קשירת לנקב cecal ו (CLP) חושפת מודל של היווצרות מורסה התוך בטני ממושך עם ומשניות סימנים של דלקת מערכתית (1). הטכניקה של כספי מציג אפשרות לדמות את המסלול הקליני של הצפק עם תברואה ברציפות להתמקד כירורגית, המהווה את העיקרון הטיפולי החשוב ביותר אצל בני אדם. CASP יכול להיות מיושם על כל השאלות סביב אלח דם או דלקת הצפק ולכן הוא שימושי עבור כל התחומים העוסקים במחקר אלח דם, למשל אימונולוגיה, פרמקולוגיה, ניתוחים, תרופות לטיפול נמרץ ועוד מבחר של פרסומים הנוגעים בנושאים שונים של אלח דם באמצעות מודל CASP היא כדלקמן (14/01). כאשר החל CASP, אחד צריך להיות מודע לכך בפועל כמה הוא הכרחי כדי לבצע את הפעולה בדיוק ובמהירות. ניסיון כירורגי עשוי להיות מועיל, אך לא נדרש. אנו ממליצים זיהוי של letality כפרמטר לביצוע נכון של CASP. אחד צריך להתחיל עם CASP 14G כמו סטנט גדול יותר קל לטפל מאשר רזה אחד. מנתח CASP מאומן הוא מסוגל לפעול אחד העכבר תוך 10 דקות. לפני תחילת כל ניסוי, אתה צריך לוודא שאתה ליד תקופה. כאשר אתה צבר קצת ניסיון עם ההליך הכירורגי, אתה צריך לנהל הקינטית הישרדות כדי לבדוק את היכולות שלך. 14G CASP צריך לגרום הקטלניות של 100%. למתחילים במעבדה שלנו יש להוכיח כי הם מסוגלים להפיק הקטלניות 100% עם CASP 14G לפני שהם מתחילים עם הניסויים. בנוסף, בקטריולוגיה ומדידות ציטוקינים יש לבצע כדי לוודא אלח דם. אם יש לך בעיות בהתחלה עם הצעדים microsurgical של CASP, השימוש בזכוכית מגדלת או מיקרוסקופ כירורגי עשוי להיות מועיל. אבל המנהלת, CASP יכול להתבצע גם בלי הכלים הללו. עבור שעתוק של שיעורי ההישרדות שלנו, זה הכרחי כי אותם חומרים, בעיקר סטנטים (BD Venflon, ראה להלן), משמשים. אחרת, וריאציות משמעותי של התוצאות אפשרי. בנוסף, אנו מציעים כי ייתכנו שינויים של התוצאות בהתאם, למשל, את האינדיבידואליות של המנתח. עם זאת, ההשפעה של גורמים כאלה צריך להיות קטן. לסיכום, CASP הוא מודל מעשי, אלח דם פשוטה, לשחזור ובעל ערך המחקה מקרוב את המצב הקליני של אלח דם הבטן. לכן זה מתאים בכל תחומי המחקר אלח דם.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Narcotic fluid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mix 0.5 mL Rompun with 4.0 mL Ketanest, and add 5.5 mL of saline solution (0.9%). 
For complete anesthesia, inject intraperitoneally 10 &mu;L/g body weight</td>
</tr>
<tr>
<td>Rompun (20 mg/ml Xylazine)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bayer AG 51368 Leverkusen, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketanest (25mg/ml Esketamine)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pfizer Pharma GmbH, 10785 Berlin, Germany</td>
<td>647028001E</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 18GA (1,2x45mm, 80ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391457</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 16GA (1,7x45mm, 180ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391455</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 14GA (2,0x45mm, 270ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391456</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Catgut Polyester 4/0 white, non absorbable</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Catgut GmbH, 08258 Markneukirchen, Germany</td>
<td>17218113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mariderm black 7/0, non absorbable</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Catgut GmbH, 08258 Markneukirchen, Germany</td>
<td>18104900</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

colon ascendens stent peritonitis (casp) - a standardized model for polymicrobial abdominal sepsis

אלח דם נותרה בעיה מתמשכת על ביחידות לטיפול נמרץ בכל רחבי העולם. הבנת המנגנונים המורכבים של אלח דם היא תנאי מוקדם להקמת גישות טיפוליות חדשות בתחום זה. לכן, במודלים של בעלי חיים נדרשים כי הם מסוגלים לחקות את המחלה מקרוב האדם גם מספיק להתמודד עם שאלות מדעיות. קולון Ascendens סטנט דלקת הצפק (CASP) הוא מודל סטנדרטי ביותר עבור אלח דם בטן polymicrobial במכרסמים. במודל זה, סטנט קטן מוכנס בניתוח לתוך המעי הגס עולה של עכברים או חולדות המוביל דליפה מתמדת של חיידקים במעיים לתוך חלל הצפק. ההליך תוצאות bacteraemia, דלקת הצפק מערכתית, זיהום על ידי חיידקים במעיים איבר, ולשחרר מערכתי אלא גם מקומית של ציטוקינים תומכי ואנטי דלקתיים שונים. הקטלניות של CASP יכול להיות נשלט על ידי בקוטר של סטנט מוכנס. גרסה של מודל זה, CASP שנקרא עם התערבות (כספי), מעלה את האפשרות להסיר את הפוקוס ספיגה על ידי פעולה נוספת על פי נהלים משותפים הקלינית. CASP הוא מודל learnable בקלות לשחזור מאוד כי מקרוב מחקה את המסלול הקליני של אלח דם הבטן. הוא מוביל דרך ללמוד על שאלות מדעיות בתחומים שונים כגון: אימונולוגיה, infectiology, או ניתוח.

Watch this Scientific Journal Video about Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis at JoVE.com

Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

קולון Ascendens סטנט דלקת הצפק (CASP) הוא מודל סטנדרטי ביותר עבור אלח דם בטן polymicrobial במכרסמים. מאמר זה מתאר את הליך כירורגי של CASP. המודל CASP גירסאותיה, לאפשר חקירה שיטתית של בעיות שונות לגבי הנושא של אלח דם.

קולון Ascendens סטנט דלקת הצפק (CASP) - מודל סטנדרטי עבור אלח דם בטן Polymicrobial

Sepsis remains a persistent problem on intensive care units all over the world. Understanding the complex mechanisms of sepsis is the precondition for ...

colon-ascendens-stent-peritonitis-casp-standardized-model-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colon Ascendens Stent Peritonitis (CASP) - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

19.3K Views.  University of Greifswald. קולון Ascendens סטנט דלקת הצפק (CASP) הוא מודל סטנדרטי ביותר עבור אלח דם בטן polymicrobial במכרסמים. מאמר זה מתאר את הליך כירורגי של CASP. המודל CASP גירסאותיה, לאפשר חקירה שיטתית של בעיות שונות לגבי הנושא של אלח דם.

Video: Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Cecal Ligation and Puncture-induced Sepsis as a Model To Study Autophagy in Mice

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is provided to induce sepsis of varying severity in mice using the CLP technique. Autophagy is a fundamental tissue response to stress and pathogen invasion. Two current protocols to assess autophagy in vivo in the context of experimental sepsis are also presented here. (I) Transgenic mice expressing green fluorescence protein (GFP)-LC3 fusion protein are subjected to CLP. Localized enhancement of GFP signal (puncta), as assayed either by immunohistochemical or confocal assays, can be used to detect enhanced autophagosome formation and, thus, altered activation of the autophagy pathway. (II) Enhanced autophagic vacuole (autophagosome) formation per unit tissue area (as a marker of autophagy stimulation) can be quantified using electron microscopy. The study of autophagic responses to sepsis is a critical component of understanding the mechanisms by which tissues respond to infection. Research findings in this area may ultimately contribute towards understanding the pathogenesis of sepsis, which represents a major problem in critical care medicine.

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method. Current protocols to assess autophagy in vivo in the context of CLP-induced sepsis are presented here: A protocol for measuring autophagy using (GFP)-LC3 mice, and a protocol for measuring autophagosome formation by electron microscopy.

Cecal קשירת ונקר-Induced אלח דם כמודל ללמוד Autophagy בעכברים

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is ...

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse polymicrobial sepsis can be induced by injecting cecal slurry intraperitoneally into day of life 7 mice and monitoring them for the following week. Presented here are the detailed steps necessary for the implementation of this neonatal sepsis model. This includes making a homogeneous cecal slurry stock, diluting it to a weight- and litter-adjusted dose, an outline of the monitoring schedule, and a definition of observed health categories used to define humane endpoints. The generation of a homogeneous cecal slurry stock from pooled donors allows for the administration into many litters over time, reducing the variation between donors, and preventing the use of potentially toxic glycerol. The monitoring strategy used allows for the anticipation of survival outcome and the identification of mice that would later progress to death, allowing for an earlier identification of the humane endpoint. Two main behavioral features are used to define the health scores, namely, the ability of the neonatal mice to right themselves when placed on their back and their level of mobility. These criteria could potentially be applied to address humane endpoints in other studies of neonatal disease in mice, as long as a pilot study is performed to confirm accuracy. In conclusion, this approach provides a standardized method to model newborn sepsis in mice, while providing resources to assess animal welfare used to define early humane endpoints for challenged animals.

This protocol provides the necessary steps to establish and evaluate neonatal sepsis in 7-day-old mice.

דגם עכבר מבוקר Neonatal אלח דם Polymicrobial

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple organs. With the development of therapies, most patients survive the hyperinflammatory phase but progress to an immunosuppressive phase, which increases the emergence of secondary infections. Therefore, improved understanding of the pathogenesis underlying secondary hospital-acquired infections in the immunosuppressive phase during sepsis is of tremendous importance. Reported here is a model to test infectious outcomes by creating double-hit infections in mice. A standard surgical procedure is used to induce polymicrobial peritonitis by cecal ligation and puncture (CLP) and followed by intranasal infection of Staphylococcus aureus to simulate pneumonia occurring in immune suppression that is frequently seen in septic patients. This dual model can reflect the immunosuppressive state occurring in patients with protracted sepsis and susceptibility to secondary infection from nosocomial pneumonia. Hence, this model provides a simple experimental approach to investigate the pathophysiology of sepsis-induced secondary bacterial pneumonia, which may be used for discovering novel treatments for sepsis and its complications.

This protocol describes techniques to measure infectious outcomes underlying secondary hospital-acquired infections in the immunosuppressive condition, first by establishing cecal ligation/puncture mice then challenging them with intranasal infection to create a clinically relevant model of immunosuppression sepsis.

עיצוב של הIntranasal וניקוב, מודל כפול של דיכוי חיסוני מושרה באלח דם

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

Measurement of Pulse Propagation Velocity, Distensibility and Strain in an Abdominal Aortic Aneurysm Mouse Model

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 times of its original size. Clinical and experimental studies have shown that small aneurysms may rupture, while a subpopulation of large aneurysms may remain stable. Thus, in addition to the measurement of intraluminal diameter of the aorta, knowledge of structural traits of the vessel wall may provide important information to assess the stability of the AAA. Aortic stiffening has recently emerged as a reliable tool to determine early changes in the vascular wall. Pulse propagation velocity (PPV) along with the distensibility and radial strain are highly useful ultrasound-based methods relevant for assessing aortic stiffness. The primary purpose of this protocol is to provide a comprehensive technique for the use of ultrasound imaging system to acquire images and analyze the structural and functional properties of the aorta as determined by MILD, PPV, distensibility and radial strain.

This manuscript describes a detailed protocol for using high frequency ultrasound imaging to measure luminal diameter, pulse propagation velocity, distensibility and radial strain on a mouse model of abdominal aortic aneurysm.

מדידה של מהירות הפצת הדופק, Distensibility והזן במודל מפרצת של אבי העורקים הבטני

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a protocol for studying the pathogenesis of E. coli O1:K1:H7, a serotype responsible for high mortality rates in neonates. Our method utilizes intravital imaging of neonatal pups at different time points during the progression of infection. This imaging, paralleled by measurement of bacteria in the blood, inflammatory profiling, and tissue histopathology, signifies a rigorous approach to understanding infection dynamics during sepsis. In the current report, we model two infectious inoculums for comparison of bacterial burdens and severity of disease. We find that subscapular infection leads to disseminated infection by 10 h post-infection. By 24 h, infection of luminescent E. coli was abundant in the blood, lungs, and other peripheral tissues. Expression of inflammatory cytokines in the lungs is significant at 24 h, and this is followed by cellular infiltration and evidence of tissue damage that increases with infectious dose. Intravital imaging does have some limitations. This includes a luminescent signal threshold and some complications that can arise with neonates during anesthesia. Despite some limitations, we find that our infection model offers an insight for understanding longitudinal infection dynamics during neonatal murine sepsis, that has not been thoroughly examined to date. We expect this model can also be adapted to study other critical bacterial infections during early life.

Infection of neonatal mice with bioluminescent E. coli O1:K1:H7 results in a septic infection with significant pulmonary inflammation and lung pathology. Here, we describe procedures to model and further study neonatal sepsis using longitudinal intravital imaging in parallel with enumeration of systemic bacterial burdens, inflammatory profiling, and lung histopathology.

מודל הדמיה יילודים של אלח דם חיידקי גרם שלילי

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...

A Contemporary Warming/Restraining Device for Efficient Tail Vein Injections in a Murine Fungal Sepsis Model

In rodent models, tail vein injections are important methods for intravenous administration of experimental agents. Tail vein injections typically involve warming of the animal to promote vasodilation, which aids in both the identification of the blood vessels and positioning of the needle into the vessel lumen while securely restraining the animal. Although tail vein injections are common procedures in many protocols and are not considered highly technical if performed correctly, accurate and consistent injections are crucial to obtain reproducible results and minimize variability. Conventional methods for inducing vasodilation prior to tail vein injections generally depend on the use of a heat source such as a heat lamp, electrical/rechargeable heat pads, or pre-heated water at 37 &#176;C. Despite being readily accessible in a standard laboratory setting, these tools evidently suffer from poor/limited thermo-regulatory capacity. Similarly, although various forms of restraining devices are commercially available, they must be used carefully to avoid trauma to the animals. These limitations of the current methods create unnecessary variables in experiments or result in varying outcomes between experiments and/or laboratories.
In this article, we demonstrate an improved protocol using an innovative device that combines an independent, thermally regulated, warming device with an adjustable restraining unit into one system for efficient streamlined tail vein injection. The example we use is an intravenous model of fungal bloodstream infection that results in sepsis. The warming apparatus consists of a heat-reflective acrylic box installed with an adjustable automatic thermostat to maintain the internal temperature at a pre-set threshold. Likewise, the width and height of the cone restraining apparatus can be adjusted to safely accommodate various rodent sizes. With the advanced and versatile features of the device, the technique shown here could become a useful tool across a range of research areas involving rodent models that employ tail vein injections.

Here, we present an effective and efficient method for rodent tail vein injections using a uniquely designed warming/restraining device. By streamlining the initiation of vasodilation and restraining processes, this protocol allows accurate and timely intravenous injections of large groups of animals with minimal distress.

מכשיר התחממות/ריסון עכשווי להזרקות יעילות של וריד זנב במודל אלח דם פטרייתי מורין

In rodent models, tail vein injections are important methods for intravenous administration of experimental agents. Tail vein injections typically involve ...

Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water while preventing passage of luminal bacteria and exogenous substances. A breach of this layer results in increased permeability to luminal contents and recruitment of immune cells, both of which are hallmarks of pathologic states in the gut including inflammatory bowel disease (IBD). 
Mechanisms regulating epithelial barrier function and transepithelial migration (TEpM) of polymorphonuclear neutrophils (PMN) are incompletely understood due to the lack of experimental in vivo methods allowing quantitative analyses. Here, we describe a robust murine experimental model that employs an exteriorized intestinal segment of either ileum or proximal colon. The exteriorized intestinal loop (iLoop) is fully vascularized and offers physiological advantages over ex vivo chamber-based approaches commonly used to study permeability and PMN migration across epithelial cell monolayers.
We demonstrate two applications of this model in detail: (1) quantitative measurement of intestinal permeability through detection of fluorescence-labeled dextrans in serum after intraluminal injection, (2) quantitative assessment of migrated PMN across the intestinal epithelium into the gut lumen after intraluminal introduction of chemoattractants. We demonstrate feasibility of this model and provide results utilizing the iLoop in mice lacking the epithelial tight junction-associated protein JAM-A compared to controls. JAM-A has been shown to regulate epithelial barrier function as well as PMN TEpM during inflammatory responses. Our results using the iLoop confirm previous studies and highlight the importance of JAM-A in regulation of intestinal permeability and PMN TEpM in vivo during homeostasis and disease. 
The iLoop model provides a highly standardized method for reproducible in vivo studies of intestinal homeostasis and inflammation and will significantly enhance understanding of intestinal barrier function and mucosal inflammation in diseases such as IBD.

Dysregulated intestinal epithelial barrier function and immune responses are hallmarks of inflammatory bowel disease that remain poorly investigated due to a lack of physiological models. Here, we describe a mouse intestinal loop model that employs a well-vascularized and exteriorized bowel segment to study mucosal permeability and leukocyte recruitment in vivo.

הערכה תפקודית של חלחיליות מעיים ונדידה טרנס-אפיתלית נויטרופילית בעכברים באמצעות מודל לולאת מעיים מתוקננת

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...

Characterizing Salmonella Typhimurium-induced Septic Peritonitis in Mice

Sepsis is a dysregulated host immune response to microbial invasion or tissue damage, leading to organ injury at a site distant from that of the infection or damage. Currently, the widely used mice models of sepsis include lipopolysaccharide (LPS)-induced endotoxemia, cecal ligation and puncture (CLP), and monobacterial infection model systems. This protocol describes a method to study the host responses during Salmonella Typhimurium infection-induced septic peritonitis in mice. S. Typhimurium, a Gram-negative intracellular pathogen, causes typhoid-like disease in mice.
This protocol elaborates the culture preparation, induction of septic peritonitis in mice through intraperitoneal injection, and methods to study systemic host responses. Furthermore, the assessment of bacterial burden in different organs and the flow cytometric analysis of increased neutrophil numbers in the peritoneal lavage is presented. Salmonella Typhimurium-induced sepsis in mice leads to an increase in proinflammatory cytokines and rapid infiltration of neutrophils in the peritoneal cavity, leading to lower survival.
Every step in this protocol has been optimized, resulting in high reproducibility of the pathogenesis of septic peritonitis. This model is useful for studying immunological responses during bacterial sepsis, the roles of different genes in disease progression, and the effects of drugs to attenuate sepsis.

Characterizing Salmonella Typhimurium-induced Septic Peritonitis in Mice

This protocol describes the induction of Gram-negative monobacterial sepsis in a mouse model system. The model is useful in investigating the inflammatory and lethal host responses during sepsis.

אפיון סלמונלה טיפימוריום המושרה על ידי דלקת צפק ספטית בעכברים

Sepsis is a dysregulated host immune response to microbial invasion or tissue damage, leading to organ injury at a site distant from that of the infection ...

Evaluation of a Reliable Biomarker in a Cecal Ligation and Puncture-Induced Mouse Model of Sepsis

Sepsis is a severe life-threatening and rapidly developing disease that causes millions of deaths annually worldwide. Researchers have made tremendous efforts to elucidate the pathophysiology of sepsis using various animal models; the mouse model of sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP) is widely used in laboratories. The three technical aspects that affect the severity and replicability of the CLP model are the percentage of cecum ligated, the size of the needle used for cecal puncture, and the volume of feces squeezed into the abdominal cavity. The rapid and specific diagnosis of sepsis is a crucial factor that affects the outcome. The gold standard for sepsis diagnosis is microbial culture; however, this process is time-consuming and sometimes inaccurate. The detection of sepsis-specific biomarkers is fast, but the existing biomarkers are unsatisfactory due to a short half-life, non-specificity, and insufficient sensitivity. Therefore, there is an urgent need for a reliable biomarker of sepsis in the early stages. Previous publications suggest that excessive neutrophil extracellular traps (NETs) occur in sepsis. Citrullinated histone H3 (CitH3), as a NET component, is elevated both in septic animals and patients, and the presence of CitH3 is a reliable diagnostic biomarker of sepsis. The present study aimed to describe a standardized mouse model of CLP-induced sepsis and establish a reliable blood biomarker of sepsis. Our work may contribute to the early and accurate diagnosis of sepsis in the future.

This protocol presents the operative details of cecal ligation and puncture (CLP) in a mouse model of sepsis. CLP is one of the most widely used techniques to create an animal model of sepsis. Therefore, a standardized CLP protocol is required for the attainment of reliable research results.

הערכה של סמן ביולוגי אמין במודל של אלח דם של אלח דם של אלח דם הנגרם על-ידי נקב

Sepsis is a severe life-threatening and rapidly developing disease that causes millions of deaths annually worldwide. Researchers have made tremendous ...

פלטפורמה משופרת של מעי על שבב לתובנות אימונולוגיות

Immunocompetent Intestine-on-Chip Model for Analyzing Gut Mucosal Immune Responses

An advanced intestine-on-chip model recreating epithelial 3D organotypic villus-like and crypt-like structures has been developed. The immunocompetent model includes Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC), Caco-2 intestinal epithelial cells, tissue-resident macrophages, and dendritic cells, which self-organize within the tissue, mirroring characteristics of the human intestinal mucosa. A unique aspect of this platform is its capacity to integrate circulating human primary immune cells, enhancing physiological relevance. The model is designed to investigate the intestinal immune system&#39;s response to bacterial and fungal colonization and infection. Due to its enlarged cavity size, the model offers diverse functional readouts such as permeation assays, cytokine release, and immune cell infiltration, and is compatible with immunofluorescence measurement of 3D structures formed by the epithelial cell layer. It hereby provides comprehensive insights into cell differentiation and function. The intestine-on-chip platform has demonstrated its potential in elucidating complex interactions between surrogates of a living microbiota and human host tissue within a microphysiological perfused biochip platform.

מחבר זרקור: פיתוח מודלים של איברים-על-שבב חיסוניים לחקר מחלות זיהומיות

Our detailed protocol outlines the creation and use of the advanced intestine-on-chip model, which simulates human intestinal mucosa with 3D structures and various cell types, enabling in-depth analysis of immune responses and cellular functions in response to microbial colonization.

מודל מעי-על-שבב חיסוני לניתוח תגובות חיסוניות של רירית המעי

An advanced intestine-on-chip model recreating epithelial 3D organotypic villus-like and crypt-like structures has been developed. The immunocompetent ...