פרוטוקול זה הוא מודל חזק וניתן לשחזור של אנדוטוקסמיה שבו ניתן להעריך פרמטרים פיזיולוגיים ומולקולריים שוב ושוב. גישה זו עשויה לסייע במענה על שאלות בחקר אלח דם. בעוד שהמודל שלנו אינו מחליף ניסויים בבעלי חיים, הוא משכלל מודלים של אלח דם באמצעות הרגעה מתמשכת ומפחית את מספר בעלי החיים באמצעות דגימות חוזרות ונשנות.
מתחילים עשויים להתקשות בהחדרת צנתרים עורקיים וורידים, אך נדרש רק אימון מוגבל כדי לשלוט בטכניקות אלה. הדמיה של כל מערך הניסויים מאפשרת לחוקרים להגדיר, או להתאים, את המודלים שלהם כדי לחקות בצורה הדוקה יותר מצב של טיפול נמרץ. התחילו בהעברת החיה המורדמת לשטיחון חימום.
שמירה על טמפרטורת הגוף בין 36.5 ל -37 מעלות צלזיוס. וודאו כי החיה נושמת באופן ספונטני על ידי אספקת חמצן עם חרוט אף. אשר את רמת ההרדמה על ידי היעדר רפלקס צביטה בבוהן לפני התקנת טרכאוסטומיה וצנתרים עורקיים וורידיים.
השתמש במשחה כדי להגן על העיניים. הכינו כלי ניתוח וצנתרים סטריליים יחד עם ניטור לחץ וריווי חמצן לחמצון מספיק. יש למרוח חוסם עורקים על הזנב הפרוקסימלי של החולדה כדי להקל על הגישה הוורידית ולחטא את הזנב שלוש פעמים באלכוהול.
הכניסו קטטר תוך ורידי בעל 26 מדים לאחד משני ורידי הזנב הצדדיים הנמנעים מהזרקת אוויר. להתיר את חוסם העורקים לאחר הנחת הצנתר התוך ורידי ולתקן את הצנתר התוך ורידי במקום עם סרט דבק. חברו משאבות מזרקים עם סטופקוקים תלת-כיווניים לגישה תוך ורידית ליישום רציף של נוזלים ותרופות.
מתחילים את הטרכאוסטומיה על ידי גילוח אזור הצוואר הקדמי של החיה, ולאחר מכן מחטאים את העור המגולח שלוש פעמים בתמיסת יוד פובידון. בצע חתך אורכי של שני סנטימטרים באמצעות להב אזמל מספר 10. לסגת את העור עם 2-0 תפרים משי.
לאחר מכן הכין בבוטות את הגרון ואת קנה הנשימה שייפתחו עם מספריים כירורגיים. החדר צינורית קנה הנשימה הסטרילית לקנה הנשימה, נזהר לא לחדור עמוק מדי כדי למנוע אוורור חד צדדי. תקן את הצינורית במקומה על ידי שימוש בתפר משי 2-O ולאחר מכן חבר את הצינורית למכונת הנשמה ללחץ או אוורור מבוקר נפח.
הגדר פרוטוקולים להחלפת נוזלים, פרוטוקולי יישום vasoconstrictor וקריטריונים להפלה לפני הגדרת הניסוי. יש לחטא את זנב החולדה שלוש פעמים בתמיסת יוד פובידון ולאחר מכן לחתוך את מעגל העור סנטימטר אחד באורך בצד הגחון באמצעות אזמל, תוך הקפדה שלא לחתוך עמוק מדי כדי למנוע פגיעה בעורק הזנב. השתמש במיקרוסקופ כירורגי כדי לחשוף את העורק בזהירות.
חותכים את החיתולית המקיפה את העורק עם מיקרו מספריים כירורגיים. לאחר מכן ליטפו את החלק הדיסטלי של העורק על ידי ביצוע תפר משי פרוקסימלי 6-0, אך אל תהדקו את המשי. הכניסו צנתר בעל 26 מדים לעורק שבין תפר המשי הדיסטלי לפרוקסימלי, ולאחר מכן הדקו את תפר המשי הפרוקסימלי כדי לקבע את הצנתר במקומו.
חברו את הצנתר למתמר לחץ כדי לספק מדידת לחץ עורקית רציפה. בנוסף, מניחים תחנה תלת-כיוונית בין הצנתר המחובר למתמר הלחץ לבין הקטטר בעל 26 המדים לדגימת דם עורקי. לאחר שהחיה הגיעה למצב יציב, הושרה אלח דם על ידי הזרקת LPS ואיסוף דגימות דם.
החלף את אובדן הנוזלים מדגימות הדם על ידי תמיסת רינגר ביחס של אחד לארבעה, תוך הימנעות מהזרקת אוויר בכל עת על מנת למנוע תסחיף אוויר. הלחץ העורקי הממוצע נשאר יציב אצל בעלי חיים עם ובלי גירוי LPS. בעלי חיים המטופלים ב- LPS מפתחים מאפיינים של אלח דם, כגון עודף בסיס שלילי.
בעלי חיים שטופלו ב-LPS פיתחו גם תגובה דלקתית חזקה, שנמדדה על ידי ציטוקינים בפלזמה, כגון חלבון כימואטראקטנטי-1, חלבון כימותרפי-1 מונוציטים ואינטרלוקין-6. כאשר מנסים פרוטוקול זה, זכור להגדיר מראש משטרי נוזלים וווזופרסורים וכן להגדיר קריטריוני סיום על מנת לקבל נתוני מחקר מוצקים וניתנים לשחזור. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם למודלים אחרים של אלח דם.
אז שאלת מחקר נענית בגישה המתאימה ביותר ובהתאם לעקרונות של צמצום, עידון, החלפה של רווחת בעלי חיים.
