אנו מודים רבקה נישי, MS, טכנאים המתקן &amp; כריסטופר ודנה ריב קרן בעלי חיים Core באוניברסיטת קליפורניה על עזרתם בניתוח של בעלי חיים. אנו מודים גם גבריאלה פינס, אושה Nekanti ו Denisse מורנו להכנות, סיוע כתב היד ווידאו טכנית לירות ואנימציה. מחקר זה נתמך על ידי NINDS (RO1 NS43428-01 ל AJA), פרויקט שיתוק של אמריקה (PPA-32574 כדי HXN), ו קליפורניה המכון לרפואה הרגנרציה (CIRM) לתאי גזע הדרכה פרס T1-00008 כדי HXN. KDB נתמך על ידי תוכנית אימונים מולקולרית תאית המוח באוניברסיטת קליפורניה (T32 NS007444).

1. דיסוציאציה של רקמת חוט השדרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קטעי חוט השדרה T8-T10 שאינם פצועים או בחוט השדרה contusion נפצעו (פציעה ב T9) ספראג חולדות Dawley נותחו ו ניתק מכנית במספריים עדינים HBSS בטמפרטורת החדר, כפי שתואר לעיל 1. לפני רקמת הניתוק, כל העמודות בעמוד השדרה נשמרו על קרח יבש במשך 5 דקות לפני החילוץ של מגזרים כבל T8-T10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיסות רקמה נאספו על ידי צנטריפוגה (1 דקה, 1000 סל&quot;ד, בטמפרטורת החדר) ו ניתק enzymatically עם 2.5 מ&quot;ג טריפסין ו 5 collagenase מ&quot;ג 5 מ&quot;ל DME (Media השתנה Dulbecco של הנשר) במשך 20 דקות ב 37 מעלות צלזיוס לפני טחינה דקה (~ 10 פעמים בטמפרטורת החדר) עם פיפטה פסטר זכוכית (9-אינץ&#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10 מ&quot;ל של סרום + 10% DME שור העובר נוספה תאים כדי לבלום פעילות אנזימטית ואז היה מסונן דרך מסננת תא 40 מיקרומטר. אחרי סיבוב מהיר, התא גלולה היה resuspended ב 6 מ&quot;ל של HBSS ו overlayed על פתרונות OptiPrep שיפוע המתוארים להלן. </li></ol> 2. יצירת OptiPrep שיפוע פתרונות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> OptiPrep מדולל נבנה על ידי דילול OptiPrep 01:01 עם הצפת מגבים (0.15 M NaCl, מגבים 10 מ&quot;מ, ה-pH 7.4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ארבעה OptiPrep פתרונות הדרגתיים נעשו על ידי ערבוב 350, 250, 200, או 150 OptiPrep בדילול μl עם HBSS לנפח סופי של 1 מ&quot;ל (טבלה 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ארבעת הפתרונות הושמו לאט ובזהירות שכבות צינור חרוטי 15 מ&quot;ל עם לפחות לדלל בתחתית ואת לדלל ביותר על החלק העליון (איור 1A). </li></ol> 3. הפרדת השומנים / המיאלין פסולת מתאי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 6 מ&quot;ל של תאים השדרה ניתק ב HBSS היה בזהירות על גבי שכבות של פתרונות הדרגתיים OptiPrep. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים Tube המכיל פתרונות הדרגתיים היה centrifuged (15 דקות, 1900 סל&quot;ד או 726 RCF, 20 ° C) באמצעות 5810R צנטריפוגה Eppendorf עם הרוטור הנדנדה דלי (A-4-62), להפריד את פתרון התא לתוך שכבות נפרדות עם שומנים / פסולת המיאלין (7 מ&quot;ל העליון של הצינור), ואחריו 3 שכבות של נוירונים, עם תאים דלקתיים, גליה, ותאי דם אדומים בתוך גלולה. למרות תאים דלקתיים ביותר, כולל מונוציטים, מקרופאגים, גרנולוציטים PMN, לימפוציטים ו נמצאו גלולה, חלק גדול בגודל המופעל מקרופאגים ניתן למצוא שכבות מעל גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שכבת השומנים / המיאלין פסולת (למעלה 7 מ&quot;ל) היה aspirated בזהירות הוסרו. תאים נשטפו אז resuspended ב 2.5 HBSS מ&quot;ל המשמש immunolabeling להלן. </li></ol> 4. Immunolabeling של תאים חיסוניים ספציפיים עבור cytometry זרימה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים (500 μl) שנאספו ההכנות חוט השדרה היו pelleted ו resuspended ב אמוניום כלוריד 0.85% (מדולל במים מזוקקים) במשך 5 דקות עד lyse כדוריות דם אדומות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים נשטפו עם 500 HBSS μl וחסמו אז ארנב רגיל או בסרום עכבר בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים נשטפו וטופחו בטמפרטורת החדר למשך שעה 1 עם נוגדן (הארנב נגד PMN FITC, כימי מדויק ומדעי; עכבר אנטי עכברוש ED1 אלקסה 488, Serotec, או עכבר אנטי CD3 עכברוש אלקסה 488) או אלוטיפ פתרון IgG בדילול מלא HBSS (בבת דילול 1:100), כפי שתואר לעיל 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים נשטפו פעמיים לאחר כל שלב לעיל ולאחר מכן resuspended ב 300 HBSS μl אחרי לשלב הסופי. </li></ol> 5. תא הערכה כמותית על ידי זרימת cytometry <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דוגמאות נותחו על cytometer Calibur (בקטון דיקינסון-) תזרים FACS באמצעות תוכנה Quest Cell. 5000 אירועים לפי המדגם היו לקרוא כל הדגימות, ניתוח הנתונים הושלם עם Summit (DakoCytomation). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שערי תזרים cytometric נקבעו באמצעות שליטה IgG תאים אלוטיפ שכותרתו או תאים בחוט השדרה מחיות בקרה וללא כל פגע לקבוע ערכי בסיס לנורמליזציה בכל נקודות זמן כפי שתואר לעיל 1. הערכים הממוצעים של תאים שכותרתו חיובי באו לידי ביטוי כאחוז (± SEM) של המדגם. </li></ol> 6. נציג תוצאות: היכולת של שיפוע OptiPrep להסיר פסולת המיאלין ולשיפור יכולת הזיהוי של תא החיסון על ידי זרימת cytometry הוערכה על ידי לכימות PMNs השדרה של 1 dpi (איור 1B), השיא שדווח קודם לכן של חדירת PMN לאחר SCI 1-3. לחלופין, מיתרי השדרה גזור זהה היו ניתק enzymatically ללא הסרת-OptiPrep של פסולת המיאלין ואת הוערכו באופן דומה במקביל עבור חדירת PMN ידי cytometry הזרימה. כפי שכבר דווח בעבר 1, לא היה שינוי במצב של אירועים בדגימות מבודד עם שיפוע OptiPrep שיטת טיהור לעומת דיסוציאציה האנזימטית לבד, הוכחת אחוז PMNs זוהה בדגימות בפסולת המיאלין שלם היה רק חלק קטן (0.5%) של אחוז PMNs זוהה (5.1%) ב OptiPrep purifדגימות ied (איור 1B). נתונים אלה מראים כי שברים המיאלין בהכנות רקמות יכול לטשטש קריאות תזרים cytometric, ולהוכיח כי סילוק פסולת המיאלין משפר את הרגישות של זיהוי תא החיסון ברקמות חוט השדרה נפגע. לאחר שקבע את הרגישות של מערכת שיפוע OptiPrep לגילוי תאים בחוט השדרה נפגע, אנו מאופיין בשינויים חדירת הסלולר על פני תקופה שבין 2 שעות עד 180 dpi והקים בתגובה multiphasic הרומן של דלקת הסלולר לאחר SCI שכלל PMNs, מקרופאגים / microglia ו-T-תאים. כפי שאושרו על ידי מחקרים קודמים 1-3, PMNs נכנסה לראשונה טבורי 2 שעות שלאחר פציעה הגיע לשיא של 1 dpi (איור 2 ו 4). המקרופאגים / microglia מאידך 1,4,5, לא התגלו חוט השדרה נפגע עד 3 dpi, והגיעה לשיאה בתחילה 7 dpi (איור 3 &amp; 4). באופן מפתיע, אנו מציגים בפעם הראשונה כי מקרופאגים / microglia לשיא עבור השני 60 זמן dpi ונשארו גבוהות דרך 180 dpi (איור 3 &amp; 4). בדומה מקרופאגים / microglia, T-cell חדירה היה צפוי להגיע לשיא 05-07 יולי dpi, אולם זרימת cytometry לא לזהות כל שינוי במספר T-cell במחצית הראשונה 7 dpi, אם כי מספר גבוה של T-תאים זוהה בשעה 9 dpi (1.6%) (איור 4). בעוד T-cell מספר פחתה ב -10 dpi, תגובה מתמשכת T-cell נצפתה דרך 180 dpi, עת 4.4% של תאים תויגו עבור CD3 (איור 4). יחד, נתונים אלה מדגימים את זמן התגובה תלוי multiphasic של דלקת הסלולר לאחר SCI (איור 4), בשלבים הראשונים של דלקת הסלולר כללו לשיא מוקדם של PMNs 1 dpi ואחריו לשיא של ED1 + מקרופאגים / microglia 7 dpi ו-T תאים 9 dpi, ואילו בשלבים המאוחרים כללו את כל שלושת האוכלוסיות הסלולר עולה לאחר 14 dpi ולהתמיד דרך 180 dpi, עם שיא שנייה בולטת מקרופאגים / microglia ב 60 dpi. מחקר זה timecourse לבין נתונים כמותיים שנוצר על ידי זרימת cytometry אומתו בעבר, מראה תוצאות להשוות נתונים שנאספו stereology כמותי של immunolabeled סעיפים 1 חוט השדרה. <img src="/files/ftp_upload/2698/2698table1.jpg" alt="טבלה 1"/> טבלה 1. הכנת שיפוע OptiPrep לסילוק פסולת המיאלין. ארבעה פתרונות OptiPrep שיפוע מבוצעים באמצעות HBSS ו OptiPrep מדולל (1:1 דילול OptiPrep, מגבים). <img src="/files/ftp_upload/2698/2698fig1.jpg" alt="איור 1"/> באיור 1. צפיפויות OptiPrep שיפוע להפריד ביותר המיאלין / פסולת נפצעו ברקמות / תאים חוט השדרה ולשפר את ההערכה תא החיסון על ידי cytometry הזרימה. (א) המיאלין / פסולת הופרד תאים (נוירונים, גליה ותאי החיסון) לאחר צנטריפוגה של רקמת ניתק את חוט השדרה דרך שיפוע OptiPrep ואחריו השאיפה של שכבת המיאלין / פסולת. (ב) PMN מספר בחוט השדרה נפגע, מראה רגישות מוגברת בזיהוי PMNs לאחר הסרת פסולת (של סטודנטים מבחן t, p = 0.0001). כל השערים תזרים cytometric נקבעו באמצעות תאים מבעלי חיים שכותרתו וללא כל פגע, n = 5 לכל קבוצה, ממוצע ± SEM. 5000 אירועים לפי המדגם היו לקרוא עבור כל המדגמים ואת הערכים הממוצעים של תאים שכותרתו חיובי באו לידי ביטוי כאחוז (± SEM) של המדגם. <img src="/files/ftp_upload/2698/2698fig2.jpg" alt="איור 2"/> איור 2. גילוי חדירה PMN בחוט השדרה נפגע cytometry הזרימה. לאחר פציעה (200 KD) מתון contusion ב T9, PMNs במהירות נכנס חוט השדרה מתחיל 2 שעות (ב) לאחר פציעה peaking 1 dpi (C). כל השערים תזרים cytometric נקבעו באמצעות תאים מבעלי חיים שכותרתו ללא פגע (A). <img src="/files/ftp_upload/2698/2698fig3.jpg" alt="איור 3"/> איור 3. איתור של מקרופאגים / חדירה microglia בחוט השדרה נפגע cytometry הזרימה. לאחר פציעה (200 KD) מתון contusion ב T9, ED1 + macrophage / microglial מספר גדל בחוט השדרה נפגעים החל מהשעה 3 dpi (ד), הגיעה לשיאה בחריפות ב 7 dpi (E), ירד לרמות נמוכות ב 14 dpi (F) לפני עולה לשיא השני 60 dpi (G), ונשאר חוט השדרה נפגע עד 180 dpi (H). IgG תיוג אלוטיפ השליטה 7 תאים השדרה dpi (ב) הראו רקע מינימלי נוגדנים תיוג לא משנה התאים נוגדנים שכותרתו מ - 2 שעות לאחר נפצעו (C) או ללא פגע (א) בעלי חיים. כל השערים תזרים cytometric נקבעו באמצעות תאים מבעלי חיים שכותרתו וללא כל פגע. <img src="/files/ftp_upload/2698/2698table2.jpg" alt="טבלה 2"/> טבלה 2. דגימות בעלי חיים בניסויים timecourse. עבור כל נקודת זמן (0 שעות עד 180 dpi), חמש החיות קיבל פציעה בינונית (200 KD) contusion ב T9,ורקמות חוט השדרה הוערכו על ידי cytometry זרימה עבור מספרי PMNs, ED1 + מקרופאגים / microglia, ואת CD3 + T-תאים. עם זאת, לא כל הדגימות בעלי חיים שנמצאו בהצלחה PMN (4-5), ED1 (3-5), ואת CD3 (4-5) לזרום מנתח cytometric. <img src="/files/ftp_upload/2698/2698fig4.jpg" alt="איור 4"/> איור 4. Timecourse של דלקת הסלולר בחוט השדרה בעקבות פציעה (200 KD) מתון contusion ב T9. כפי שהוערכו על ידי cytometry זרימה, מספרי PMNs, ED1 + מקרופאגים / microglia, ואת CD3 + T-תאים לשיא בחריפות (1,7, ו 9 dpi, בהתאמה) התעקש כרונית בחוט השדרה הפגוע. N = 3 ל -5 הקבוצה, ממוצע ± SEM.

<ol>
	<li>Beck, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+cellular+inflammation+after+traumatic+spinal+cord+injury:+evidence+for+a+multiphasic+inflammatory+response+in+the+acute+to+chronic+environment.">Quantitative analysis of cellular inflammation after traumatic spinal cord injury: evidence for a multiphasic inflammatory response in the acute to chronic environment.</a> Brain. 133, 433-447 (2010).</li><li>Nguyen, H. X., Galvan, M. D., Anderson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+early+and+terminal+complement+proteins+associated+with+polymorphonuclear+leukocytes+in+vitro+and+in+vivo+after+spinal+cord+injury.">Characterization of early and terminal complement proteins associated with polymorphonuclear leukocytes in vitro and in vivo after spinal cord injury.</a> J Neuroinflammation. 5, 26-26 (2008).</li><li>Saville, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+monoclonal+antibody+to+CD11d+reduces+the+inflammatory+infiltrate+into+the+injured+spinal+cord:+a+potential+neuroprotective+treatment.">A monoclonal antibody to CD11d reduces the inflammatory infiltrate into the injured spinal cord: a potential neuroprotective treatment.</a> J Neuroimmunol. 156, 42-57 (2004).</li><li>Popovich, P. G., Wei, P., Stokes, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+inflammatory+response+after+spinal+cord+injury+in+Sprague-Dawley+and+Lewis+rats.">Cellular inflammatory response after spinal cord injury in Sprague-Dawley and Lewis rats.</a> J Comp Neurol. 377, 443-464 (1997).</li><li>Popovich, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+hematogenous+macrophages+promotes+partial+hindlimb+recovery+and+neuroanatomical+repair+after+experimental+spinal+cord+injury.">Depletion of hematogenous macrophages promotes partial hindlimb recovery and neuroanatomical repair after experimental spinal cord injury.</a> Exp Neurol. 158, 351-365 (1999).</li><li>Jones, T. B., Hart, R. P., Popovich, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+control+of+physiological+and+pathological+T-cell+recruitment+after+mouse+spinal+cord+injury.">Molecular control of physiological and pathological T-cell recruitment after mouse spinal cord injury.</a> J Neurosci. 25, 6576-6583 (2005).</li><li>Kigerl, K. A., McGaughy, V. M., Popovich, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+lesion+development+and+intraspinal+inflammation+in+four+strains+of+mice+following+spinal+contusion+injury.">Comparative analysis of lesion development and intraspinal inflammation in four strains of mice following spinal contusion injury.</a> J Comp Neurol. 494, 578-594 (2006).</li><li>Lipton, H. L., Kallio, P., Jelachich, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+quantitative+analysis+of+spinal+cord+cells+from+Theiler's+virus-infected+mice+without+the+requirement+for+myelin+debris+removal.">Simplified quantitative analysis of spinal cord cells from Theiler's virus-infected mice without the requirement for myelin debris removal.</a> J Immunol Methods. 299, 107-115 (2005).</li><li>Bagamery, K., Kvell, K., Landau, R., Graham, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+of+CD41-labeled+platelets+isolated+by+the+rapid,+one-step+OptiPrep+method+from+human+blood.">Flow cytometric analysis of CD41-labeled platelets isolated by the rapid, one-step OptiPrep method from human blood.</a> Cytometry A. 65, 84-87 (2005).</li><li>Majd, S., Zarifkar, A., Rastegar, K., Takhshid, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+adult+rat+hippocampal+neurons+with+long-interval+changing+media.">Culturing adult rat hippocampal neurons with long-interval changing media.</a> Iran Biomed J. 12, 101-107 (2008).</li><li>Tjoa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+flow+cytometry+to+assess+neutrophil+infiltration+in+the+injured+murine+spinal+cord.">The use of flow cytometry to assess neutrophil infiltration in the injured murine spinal cord.</a> J Neurosci Methods. 129, 49-59 (2003).</li><li>Gonzalez, R., Glaser, J., Liu, M. T., Lane, T. E., Keirstead, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reducing+inflammation+decreases+secondary+degeneration+and+functional+deficit+after+spinal+cord+injury.">Reducing inflammation decreases secondary degeneration and functional deficit after spinal cord injury.</a> Exp Neurol. 184, 456-463 (2003).</li><li>Stirling, D. P., Yong, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+inflammatory+response+after+murine+spinal+cord+injury+revealed+by+flow+cytometry.">Dynamics of the inflammatory response after murine spinal cord injury revealed by flow cytometry.</a> J Neurosci Res. 86, 1944-1958 (2008).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

השימוש cytometry זרימה לכמת תאים חיסוניים CNS מורכבת לפי תוכן שומנים / המיאלין ופסולת. בנוסף להפריע מחייב נוגדנים וספציפיות, פסולת המיאלין יכולה להיות בגודל דומה ומאפיינים פרור לתאי מערכת החיסון, הפחתת רגישות המדידה דיוק 8. התא הרומן הכנה השיטה המתוארת כאן הוא יעיל בהסרת פסולת המיאלין ובכך משפרת את הרגישות של זרימת cytometry לזהות שינויים דלקת הסלולר בחוט השדרה הפגוע. למשל, פינוי פסולת המיאלין על ידי זיהוי בשיטה זו משופר של תאים חיסוניים לעומת דיסוציאציה האנזימטית alone.Critically, השימוש הרומן של שיטה זו אפשרה את האפיון הראשון של דלקת הסלולר אקוטי וכרוני לאחר SCI לכלול קורס הזמן המלא ל PMNs, מקרופאגים / microglia, ו-T-תאים עד 180 dpi, וזיהה השלב השני של הרומן דלקת הסלולר. ממצאים אלה חשובים של רכיב multiphasic של neuroinflammation עשוי להיות קריטי עבור התכנון והיישום של רציונלי אסטרטגיות טיפול רפואי, כולל התערבויות שני תאים מבוססי תרופתי עבור SCI. המערכת שיפוע OptiPrep נעשה שימוש כדי להפריד פסולת מתאי דם 9, או נוירונים לטהר מהמוח לתרבות למטרות תא 10, אך יש לנו שונה ומתקדמת מערכת זו שיטה להפרדת פסולת מתאי המיאלין ניתק את חוט השדרה, ואיפשר כימות מהיר ומדויק יותר של דלקת הסלולר על ידי cytometry הזרימה. שיטה זו יחד עם cytometry זרימת צפוי לספק התקדמות משמעותית בחקר דלקת לאחר פציעות CNS או במצבים פתולוגיים, כמו רוב המחקרים הגדירו רק דלקת הסלולר של מערכת העצבים המרכזית באמצעות טכניקות מורפולוגיים היסטולוגית שאינם תאים מסוג מסוים או לא תמיד יכולים לספק נכון הערכה כמותית. יתר על כן, מחקרים שנעשו לאחרונה כמה ניסו לכמת תאים חיסוניים בחוט השדרה נפגע cytometry זרימה באמצעות חוט רקמה טרי ניתק 11,12 או תאים המופרדים באמצעות השיפוע Percoll מערכת 13, אולם מחקרים אלו הראו גם התשואות התא נמוכה או רגישות זיהוי של תאים חיסוניים. לעומת זאת, תא שיפוע OptiPrep שיטת הכנה סיפקה לראשונה, הערכה כמותית רגיש ואמין על ידי זרימת cytometry שינויים של דלקת הסלולר בתגובה חומרת הפגיעה מדורגת מעל timecourse מורחבת עד 180 dpi. הרגישות והאמינות של ניתוח תזרים cytometric תלוי גם הספציפיות של נוגדנים לשמש כדי לזהות סוגי תאים חיסוניים ספציפיים, כמו cytometry הזרימה אינה מתירה קריטריונים מורפולוגיים נוספת להבחין בין סוגי תאים. הספציפיות של נוגדנים PMNs, מקרופאגים / microglia או T-אומר נבדק ביסודיות על PMNs הצפק ומקרופגים מכתשיים בתרבות תאים 1,2 רקמת חוט השדרה נפגע ב cytometry הזרימה. יחד עם מערכת שיפוע OptiPrep, נוגדנים אלה המשמשים cytometry זרימה תרמו הדור ניתוח כמותי הזמני של דלקת הסלולר סיפקה תובנה חדשה על הדינמיקה של microenvironment SCI, וזיהו לראשונה מענה multiphasic המורחבת דלקת הסלולר. זו התגובה של תאים multiphasic לאחר SCI עשוי להיות חשוב לחקור את תפקידם של סוגי תאים מסוימים נוכח בזמנים מסוימים לאחר פציעה או ליצור התערבויות טיפוליות נגד סוגי תאים ספציפיים שיכולים להחמיר פציעות. יתר על כן, ממצאים אלה עשויים לסייע בפיתוח של הרציונל מתאים התערבויות סמים או מבוססי תאים אופטימלי SCI.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th></tr><tr><td> OptiPrep </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> NC9182490 </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> סיגמא </td><td> H1387 </td></tr><tr><td> הארנב נגד חולדה PMN (FITC) </td><td> כימי מדויק ומדעי </td><td> AIFAD51140 </td></tr><tr><td> עכבר אנטי עכברוש ED1 (אלקסה פלואוריד 488) </td><td> עבד Serotec </td><td> MCA341A488 </td></tr><tr><td> עכבר אנטי CD3 חולדה (FITC) </td><td> עבד Serotec </td><td> MCA772F </td></tr><tr><td> טריפסין </td><td> סיגמא </td><td> T9935 </td></tr><tr><td> Collagenase </td><td> סיגמא </td><td> C5138 </td></tr><tr><td> DME </td><td> סיגמא </td><td> D1152 </td></tr><tr><td> עכברים IgG1 (אלקסה פלואוריד 488) </td><td> עבד Serotec </td><td> MCA1209A488 </td></tr><tr><td> בסרום שור עוברית </td><td> Hyclone </td><td> SH30070.03 </td></tr><tr><td> הארנב בסרום </td><td> ג&#39;קסון ImmunoResearch </td><td> 011-000-120011-000-120 </td></tr><tr><td> עכבר בסרום </td><td> ג&#39;קסון ImmunoResearch </td><td> 015-000-120 </td></tr><tr><td> תא מסננת </td><td> BD פלקון </td><td> 352340 </td></tr></tbody></table>

quantitative assessment of immune cells in the injured spinal cord tissue by flow cytometry:  a novel use for a cell purification method

איתור של תאים חיסוניים במערכת נפצעו העצבים המרכזית (CNS) באמצעות טכניקות מורפולוגיים או היסטולוגית לא סיפקה תמיד ניתוח כמותי נכון של דלקת הסלולר. Cytometry זרימה היא שיטה חלופית מהירה לכמת תאים חיסוניים במוח פצוע או רקמת חוט השדרה. מבחינה היסטורית, cytometry זרימה שימש לכמת תאים חיסוניים שנאספו דם או הטחול מנותק או התימוס, ורק מספר מחקרים ניסו לכמת תאים חיסוניים בחוט השדרה נפגע cytometry זרימה באמצעות חוט רקמה טרי ניתק. עם זאת, הרקמה ניתק חוט השדרה מרוכזת בפסולת המיאלין אשר ניתן בטעות תאים ולהפחית אמינות לספור תא מתקבל על ידי cytometer את הזרימה. יש לנו הכנה מתקדמים תא שיטה באמצעות מערכת שיפוע OptiPrep כדי פסולת ביעילות שומנים / המיאלין נפרד מן התאים, מתן quantifications רגיש ואמין של דלקת הסלולר בחוט השדרה נפגע cytometry הזרימה. כפי שתואר מחקר שנערך לאחרונה שלנו (Beck &amp; נגוין ואח&#39;, המוח פבואר 2010; 133 (Pt 2):.. 433-47), הכנת תא OptiPrep עלה רגישות לזהות דלקת הסלולר בחוט השדרה נפגעים, עם סעיפים של תא סוגים ספציפיים correlating עם חומרת הפציעה. אנושות, השימוש הרומן של שיטה זו סיפקה את האפיון הראשון של דלקת הסלולר אקוטי וכרוני לאחר SCI לכלול קורס הזמן המלא ל leukocytes polymorphonuclear (PMNs, נויטרופילים), מקרופאגים / microglia, ו-T-תאים על פני תקופה שבין 2 שעות 180 ימים לאחר פציעה (dpi), זיהוי שלב הרומן המפתיע השני של דלקת הסלולר. אפיון יסודי של דלקת הסלולר באמצעות שיטה זו עשויה לספק הבנה טובה יותר של neuroinflammation ב CNS נפצעו, ולחשוף מרכיב חשוב של multiphasic neuroinflammation שעשויה להיות קריטית לעיצוב ויישום אסטרטגיות טיפול רציונלי טיפולית, כולל שני תאים מבוססי תרופתי התערבויות של SCI.

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Assessment of Immune Cells in the Injured Spinal Cord Tissue by Flow Cytometry:  a Novel Use for a Cell Purification Method at JoVE.com

Quantitative Assessment of Immune Cells in the Injured Spinal Cord Tissue by Flow Cytometry:  a Novel Use for a Cell Purification Method

כימות של דלקת הסלולר ב CNS פצועים / פתולוגי על ידי cytometry זרימה מסובך ידי פסולת שומנים / מיאלין כי יכול להיות בגודל פרור דומים לתאים, הפחתת הרגישות / דיוק. יש לנו הכנה מתקדמים תא שיטה להסרת פסולת המיאלין ולשפר זיהוי תאים על ידי זרימת cytometry בחוט השדרה הפגוע.

הערכה כמותית של תאים חיסוניים רקמות חוט השדרה נפגע על ידי זרימת cytometry: השתמש חדשנית שיטת טיהור Cell

Detection of immune cells in the injured central nervous system (CNS) using morphological or histological techniques has not always provided true ...

quantitative-assessment-immune-cells-injured-spinal-cord-tissue-flow

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

22.0K Views.  University of California. כימות של דלקת הסלולר ב CNS פצועים / פתולוגי על ידי cytometry זרימה מסובך ידי פסולת שומנים / מיאלין כי יכול להיות בגודל פרור דומים לתאים, הפחתת הרגישות / דיוק. יש לנו הכנה מתקדמים תא שיטה להסרת פסולת המיאלין ולשפר זיהוי תאים על ידי זרימת cytometry בחוט השדרה הפגוע.

Video: Quantitative Assessment of Immune Cells in the Injured Spinal Cord Tissue by Flow Cytometry:  a Novel Use for a Cell Purification Method

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, including signaling, cytoskeletal remodeling, regulation of gene expression, apoptosis and cell cycle progression 1. Calpains have been implicated in many pathologies including muscular dystrophies, cancer, diabetes, Alzheimer's disease and multiple sclerosis 1. Calpain regulation is complex and incompletely understood. mRNA and protein levels correlate poorly with activity, limiting the use of gene or protein expression techniques to measure calpain activity. This video protocol details a flow cytometric assay developed in our laboratory for measuring calpain activity in fixed and living cells. This method uses the fluorescent substrate BOC-LM-CMAC, which is cleaved specifically by calpain, to measure calpain activity. 2 In this video, calpain activity in fixed and living murine 32Dkit leukemia cells, alone or as part of a splenocyte population is measured using an LSRII (BD Bioscience). 32Dkit cells are shown to have elevated activity compared to normal splenocytes.

This article will detail the protocol for measuring calpain activity in fixed and living cells using flow cytometry.

מדידת פעילות Calpain בתוך תאים חיים קבוע על ידי זרימת cytometry

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients

Isolation of immune cells that infiltrate the central nervous system (CNS) during infection, trauma, autoimmunity or neurodegeneration, is often required to define their phenotype and effector functions. Histochemical approaches are instrumental to determine the location of the infiltrating cells and to analyze the associated CNS pathology. However, in-situ histochemistry and immunofluorescent staining techniques are limited by the number of antibodies that can be used at a single time to characterize immune cell subtypes in a particular tissue. Therefore, histological approaches in conjunction with immune-phenotyping by flow cytometry are critical to fully characterize the composition of local CNS infiltration. This protocol is based on the separation of CNS cellular suspensions over discontinous percoll gradients. The current article describes a rapid protocol to efficiently isolate mononuclear cells from brain and spinal cord tissues that can be effectively utilized for identification of various immune cell populations in a single sample by flow cytometry.

The current article describes a rapid protocol to efficiently isolate mononuclear cells from brain and spinal cord tissues that can be effectively utilized for flow cytometric analyses.

בידוד של המוח ותאי חוט השדרה mononuclear שימוש Percoll Gradients

Isolation of immune cells that infiltrate the central nervous system (CNS) during infection, trauma, autoimmunity or neurodegeneration, is often required ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam cells, immune cells, vascular endothelial and smooth muscle cells, platelets, extracellular matrix, and a lipid-rich core with extensive necrosis and fibrosis of surrounding tissues.1 The innate and adaptive arms of the immune response are involved in the initiation, development and persistence of atherosclerosis.2, 3 There is a significant body of evidence that different subsets of the immune cells, such as macrophages, dendritic cells, T and B lymphocytes, are present within the aortas of healthy and atherosclerosis-prone mice4. Additionally, immune cells are found in the surrounding aortic adventitia which suggests an important role of this tissue in atherogenesis.2
For some time, the quantitative detection of different types of immune cells, their activation status, and the cellular composition within the aortic wall was limited by RT-PCR and immunohistochemical methods for the study of atherosclerosis. Few attempts were made to perform flow cytometry using human aortas, and a number of problems, such as a high autofluorescence, have been reported5,6. Human atherosclerotic plaques were digested with collagenase 1, and free cells were collected and stained for CD14+/CD11c+ to highlight macrophage-derived foam cells. In this study, a "mock" channel was used to avoid false-positive staining.6 Necrotic materials accumulating during the digestion process give rise in a large amount of debris that generates a high autofluorescence in aortic samples. To resolve this problem, a panel of negative and positive controls has been proposed, but only double staining could be applied in these samples. We have developed a new flow cytometry-based method7 to analyze the immune cell composition and characterize the activation, proliferation, differentiation of immune cells in healthy and atherosclerosis-prone aorta. This method allows the investigation of the immune cell composition of the aortic wall and opens possibilities to use a broad spectrum of immunological methods for investigations of immune aspects of this disease.

This paper presents a flow cytometry-based method to investigate the immune composition of aortas. The paper also illustrates an additional technique that allows examining surrounding adventitia and vessel wall separately. This method opens possibilities to perform phenotypical analyses of aortic leukocytes and apply several immunological assays for atherosclerosis studies.

ניתוח תזרים cytometry של תאים חיסוניים בתוך Aortas Murine

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response following an infection. Despite efforts to identify unique surface marker on Tregs, the only unique feature is their ability to suppress the proliferation and function of effector T cells. While it is clear that only in vitro assays can be used in assessing human Treg function, this becomes problematic when assessing the results from cross-sectional studies where healthy cells and cells isolated from subjects with autoimmune diseases (like Type 1 Diabetes-T1D) need to be compared. There is a great variability among laboratories in the number and type of responder T cells, nature and strength of stimulation, Treg:responder ratios and the number and type of antigen-presenting cells (APC) used in human in vitro suppression assays. This variability makes comparison between studies measuring Treg function difficult. The Treg field needs a standardized suppression assay that will work well with both healthy subjects and those with autoimmune diseases. We have developed an in vitro suppression assay that shows very little intra-assay variability in the stimulation of T cells isolated from healthy volunteers compared to subjects with underlying autoimmune destruction of pancreatic &beta;-cells. The main goal of this piece is to describe an in vitro human suppression assay that allows comparison between different subject groups. Additionally, this assay has the potential to delineate a small loss in nTreg function and anticipate further loss in the future, thus identifying subjects who could benefit from preventive immunomodulatory therapy1. Below, we provide thorough description of the steps involved in this procedure. We hope to contribute to the standardization of the in vitro suppression assay used to measure Treg function. In addition, we offer this assay as a tool to recognize an early state of immune imbalance and a potential functional biomarker for T1D.

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Tregs are potent suppressors of the immune system. There is a lack of unique surface markers to define them, hence, definitions of Tregs are primarily functional. Here we describe an optimized in vitro assay capable of identifying immune imbalance in subjects at risk to develop T1D.

אנושי במבחנה דיכוי ככלי מיון עבור הכרה של מדינת מוקדם של חוסר איזון החיסון

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the T cell receptor (TCR) &alpha; and &beta; loci generates a T cell repertoire with vast diversity in antigen specificity, both to self and foreign. Selection of the repertoire during development in the thymus is critical for generating safe and useful T cells. Defects in thymic selection contribute to the development of autoimmune and immunodeficiency disorders1-4. 
T cell progenitors enter the thymus as double negative (DN) thymocytes that do not express CD4 or CD8 co-receptors. Expression of the &alpha;&beta;TCR and both co-receptors occurs at the double positive (DP) stage. Interaction of the &alpha;&beta;TCR with self-peptide-MHC (pMHC) presented by thymic cells determines the fate of the DP thymocyte. High affinity interactions lead to negative selection and elimination of self-reactive thymocytes. Low affinity interactions result in positive selection and development of CD4 or CD8 single positive (SP) T cells capable of recognizing foreign antigens presented by self-MHC5.
Positive selection can be studied in mice with a polyclonal (wildtype) TCR repertoire by observing the generation of mature T cells. However, they are not ideal for the study of negative selection, which involves deletion of small antigen-specific populations. Many model systems have been used to study negative selection but vary in their ability to recapitulate physiological events6. For example, in vitro stimulation of thymocytes lacks the thymic environment that is intimately involved in selection, while administration of exogenous antigen can lead to non-specific deletion of thymocytes7-9. Currently, the best tools for studying in vivo negative selection are mice that express a transgenic TCR specific for endogenous self-antigen. However, many classical TCR transgenic models are characterized by premature expression of the transgenic TCR&alpha; chain at the DN stage, resulting in premature negative selection. Our lab has developed the HYcd4 model, in which the transgenic HY TCR&alpha; is conditionally expressed at the DP stage, allowing negative selection to occur during the DP to SP transition as occurs in wildtype mice10.
Here, we describe a flow cytometry-based protocol to examine thymic positive and negative selection in the HYcd4 mouse model. While negative selection in HYcd4 mice is highly physiological, these methods can also be applied to other TCR transgenic models. We will also present general strategies for analyzing positive selection in a polyclonal repertoire applicable to any genetically manipulated mice.

We present a flow cytometry-based method to examine T cell development in vivo using genetically manipulated mice on a wildtype or T cell receptor transgenic background.

בחינה של בחירה חיובית ושלילית הרתי ידי זרימת cytometry

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

A complex interaction between the immune response and host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in particular, is known to occur as a response to infection in mammals 1 and has also recently been described in Drosophila melanogaster2. It is generally accepted that sleep is beneficial to the host during an infection and that it is important for the maintenance of a robust immune system3,4. However, experimental evidence that supports this hypothesis is limited4, and the function of excess sleep during an immune response remains unclear. We have used a multidisciplinary approach to address this complex problem, and have conducted studies in the simple genetic model system, the fruitfly Drosophila melanogaster. We use a standard assay for measuring locomotor behavior and sleep in flies, and demonstrate how this assay is used to measure behavior in flies infected with a pathogenic strain of bacteria. This assay is also useful for monitoring the duration of survival in individual flies during an infection. Additional measures of immune function include the ability of flies to clear an infection and the activation of NF&kappa;B, a key transcription factor that is central to the innate immune response in Drosophila. Both survival outcome and bacterial clearance during infection together are indicators of resistance and tolerance to infection. Resistance refers to the ability of flies to clear an infection, while tolerance is defined as the ability of the host to limit damage from an infection and thereby survive despite high levels of pathogen within the system5. Real-time monitoring of NF&kappa;B activity during infection provides insight into a molecular mechanism of survival during infection. The use of Drosophila in these straightforward assays facilitates the genetic and molecular analyses of sleep and the immune response and how these two complex systems are reciprocally influenced.

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

To understand a link between the immune response and behavior, we describe a method to measure locomotor behavior in Drosophila during bacterial infection as well as the ability of flies to mount an immune response by monitoring survival, bacterial load, and real-time activity of a key regulator of innate immunity, NF&kappa;B.

מדידת כמותית של התגובה החיסונית ובשינה<em&gt; דרוזופילה</em

A complex interaction between the immune response and  host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in  particular, is known ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable method of analysis by flow cytometry to study nanoparticle interaction with immune cells. Primary immune cells can be easily purified from human or mouse tissues by antibody-mediated magnetic isolation. In the first instance, the different cell populations running in a flow cytometer can be distinguished by the forward-scattered light (FSC), which is proportional to cell size, and the side-scattered light (SSC), related to cell internal complexity. Furthermore, fluorescently labeled antibodies against specific cell surface receptors permit the identification of several subpopulations within the same sample. Often, all these features vary when cells are boosted by external stimuli that change their physiological and morphological state. Here, 50 nm FITC-SiO2 nanoparticles are used as a model to identify the internalization of nanostructured materials in human blood immune cells. The cell fluorescence and side-scattered light increase after incubation with nanoparticles allowed us to define time and concentration dependence of nanoparticle-cell interaction. Moreover, such protocol can be extended to investigate Rhodamine-SiO2 nanoparticle interaction with primary microglia, the central nervous system resident immune cells, isolated from mutant mice that specifically express the Green Fluorescent Protein (GFP) in the monocyte/macrophage lineage. Finally, flow cytometry data related to nanoparticle internalization into the cells have been confirmed by confocal microscopy.

Analysis of nanoparticle interaction with defined subpopulations of immune cells by flow cytometry.

איתור של פלורסנט אינטראקציות Nanoparticle עם אוכלוסיות ראשוניות של תא חיסון על ידי זרימת cytometry

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

The Use of Flow Cytometry to Assess the State of Chromatin in T Cells

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to clonal proliferation of only those T cells that bear a receptor that recognizes the antigen. Chromatin decondensation is a hallmark of T cell activation and is required for T cells to acquire the ability to proliferate after antigen engagement. This change in chromatin condensation can be detected using antibodies raised against histone proteins. These antibodies cannot bind to their epitopes in na&#239;ve T cells as well as they can in activated T cells. We describe how to simultaneously stain T cell-specific surface markers, track viability with a fixable dead cell stain, and measure chromatin status via intracellular staining of Histone H3 proteins. Stained cells are analyzed by flow cytometry and chromatin condensation status is measured as the mean fluorescence intensity (MFI) of the Histone H3 stain. Chromatin decondensation during T cell activation is demonstrated as an increase in the MFI

Flow cytometry can be utilized to assess the state of chromatin within T cells. This protocol allows scientists to interpret evidence of chromatin decondensation during T cell activation demonstrated by an increase in the mean florescence intensity (MFI) of fluorescent Histone H3 antibodies

השימוש בcytometry הזרימה מנת להעריך את המצב של הכרומטין בתאי T

During a proper immune response, quiescent T cells become activated upon antigen presentation to their antigen-specific T cell receptor. This leads to ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method enables researchers to better understand the characteristics of a single cell population without the influence of other cells. Compared to other methods of cell enrichment, such as magnetic-activated cell sorting (MCS), FACS is more flexible and accurate for cell separation due to the ability of phenotype detection by flow cytometry. In addition, FACS is usually capable of separating multiple cell populations simultaneously, which improves the efficiency and diversity of experiments. Although FACS has some limitations, it has been broadly used to purify cells for functional studies in both in vitro and in vivo settings. Here we report a protocol using fluorescence-activated cell sorting to isolate a very rare population of immune cells, plasmacytoid dendritic cells (pDC), with high purity from the bone marrow of lupus-prone mice for in vitro functional studies of pDC.

We report a protocol using fluorescence-activated cell sorting to isolate plasmacytoid dendritic cells (pDC) with high purity from the bone marrow of lupus-prone mice for functional studies of pDC.

מיון תא מופעל קרינה עבור טיהור של תאי דנדריטים Plasmacytoid ממח עצם העכבר

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Qualitative and Quantitative Analysis of the Immune Synapse in the Human System Using Imaging Flow Cytometry

The immune synapse is the area of communication between T cells and antigen-presenting cells (APCs). T cells polarize surface receptors and proteins towards the immune synapse to assure a stable binding and signal exchange. Classical confocal, TIRF, or super-resolution microscopy have been used to study the immune synapse. Since these methods require manual image acquisition and time-consuming quantification, the imaging of rare events is challenging. Here, we describe a workflow that enables the morphological analysis of tens of thousands of cells. Immune synapses are induced between primary human T cells in pan-leukocyte preparations and Staphylococcus aureus enterotoxin B (SEB)-loaded Raji cells as APCs. Image acquisition is performed with imaging flow cytometry, also called In-Flow microscopy, which combines features of a flow cytometer and a fluorescence microscope. A complete gating strategy for identifying T cell/APC couples and analyzing the immune synapses is provided. As this workflow allows the analysis of immune synapses in unpurified pan-leukocyte preparations and hence requires only a small volume of blood (i.e., 1 mL), it can be applied to samples from patients. Importantly, several samples can be prepared, measured, and analyzed in parallel.

Here, we describe a complete workflow for the qualitative and quantitative analysis of immune synapses between primary human T cells and antigen-presenting cells. The method is based on imaging flow cytometry, which allows the acquisition and evaluation of several thousand cell images within a relatively short period of time.

ניתוחים כמותיים של הסינפסה המערכת החיסונית בגוף האדם באמצעות הדמיה Cytometry זרימה

The immune synapse is the area of communication between T cells and antigen-presenting cells (APCs). T cells polarize surface receptors and proteins ...