בתמיכת המכון הלאומי לבריאות (NIDCD, P30-DC010754, T32-DC009401).

1. Pre / Post-אימון הקלטות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין ניטור אולטרא עם Avisoft מקליט באמצעות תצורת שמוצג באיור 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קולות Ultrasonic יכול להיות פיקוח או חזותית על ידי צופה ספקטרוגרמה בזמן אמת, או aurally עם אוזניות פקוק לתוך ממשק הקלטה אולטרה סאונד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום פתוח מינית (מיוחמות) חולדה נקבה לכלוב הבית של חולדה זכר לנושא. סימנים של ייחום כוללים, לורדוסה האוזן נענוע, ומהיר מתרוצצות. נקבות מיוחמות להפיק קולות יותר גברים מאשר נשים שאינן מינית פתוחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי הזכר הראתה עניין הנשי (למשל, מרחרח, לרדוף, ו / או הרכבה), להסיר את הנקבה ולהקליט קולות של הזכר למשך 1-2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הזכר אינו להשמיע מיד, בקצרה להחזיר את הנקבה לכלוב של הזכר הביתה כדי לעורר הניקוד. </li></ol> 2. הדרכה קולית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין ניטור אולטרא עם Avisoft מקליט באמצעות תצורה זהה שמוצג באיור 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את חולדה זכר בכלוב בביתו תחת המיקרופון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים חולדה נקבה לכלוב בבית של הזכר. כאמור, את העכברוש הנשי צריך להיות מיוחמות כדי למקסם את התגובה הניקוד מן הזכר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הזכר הראתה עניין הנשי להסיר את הנקבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד לאחר הזכר מייצר את הניקוד היעד, פרס בו זמנית עם לחץ עט מצגת קצרה של בקבוק מים או אוכל לטפל. בתחילה, 50-kHz כל מאופנן תדר (איור 5 ב) שיחה מתוגמל. כפי הכשרה מתקדמת מחרוזות רק יותר ויותר מורכבים של שיחות, כגון מחרוזות של 5 עד 10 שיחות ברצף מהיר, מתחזקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך אימון עד נתת 30 תגבורת. זה לוקח בדרך כלל בין 5 - 10 דקות. </li></ol> 3. הכנות לקראת ניתוח אקוסטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמיד בארכיון קבצי הצליל המקורי וערוך מדידות על עותק עבודה, כמו ניתוח ידרוש סינון הרעש מחיקת כל קובץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במצב אצווה של Avisoft SASLab Pro, לעבור גבוה לסנן את כל קבצי הצליל להיות מנותח בבית kHz 25 להסיר רעשים לא רצויים מתחת קולות קולי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להשתמש בתכונת זיהוי אוטומטי של SASLab Pro, סף רעש צריך קודם כל להיות נחוש. כדי לעשות זאת, לפתוח קובץ קול וליצור ספקטרוגרמה באמצעות ההגדרות שמוצג באיור 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התצוגה מדידות אוטומטי פרמטר צריך להיות ההתקנה בהתאם להגדרות שמוצג באיור 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצא שטח של ספקטרוגרמה שבו אין שיחות או רעשים, זהו רעש רקע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות &quot;אוטומטי (סף יחיד)&quot; אפשרות, להגדיר את סף בסעיף אלמנט ההפרדה של תיבת מדידות אוטומטי פרמטר ההתקנה שיח רק מעל רעש הרקע על ידי התאמת קו שחור בחלון כוח קשת מעל ספקטרוגרמה. באיור 4, סף הוגדר dB -55. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחלק התחתון של תיבת הדו שיח, בחר את &quot;דחה אם משרעת השיא הוא פחות&quot; ערך dB 1 מתחת לסף נמצא בשלב הקודם. שני אלה הערכים עכשיו צריך לשמש עבור כל קבצי קול ניתחו, בהנחה כל הגדרות ההקלטה היו זהים. </li></ol> 4. ניקודו זיהוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי התווית קולות באמצעות מערכת אוטומטית סף לעיל, קודם ליצור ספקטרוגרמה עם ההגדרות לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ידנית למחוק כל הרעש הזה עונה על הקריטריונים הבאים: 1) זוהה בטעות הניקוד, 2) משפיע על אפליה של תחילת ו / או סוף הניקוד, ו / או 3) זוהה בטעות הגבוהה ביותר או התדר הנמוך ביותר הניקוד (מסומן על ידי קווים אדומים העליון והתחתון, בהתאמה). לחלופין, להתחיל / להפסיק את הזמנים של תוויות הניקוד ניתן להתאימם באופן ידני לאחר יצירת תוויות קבע בשלב 4.5 להלן. המשפיעים על מדידות רעש בתדר גבוה או נמוך, עם זאת, צריך להימחק באופן ידני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקרים מסוימים הניקוד לא יוכלו להפריד את הרעשים שמסביב, כמו קול של מצעים במהלך תנועה. במקרים אלה, השיחה לא ניתן לנתח במדויק צריך להימחק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל קולות זוהו, למחוק לצמיתות את הסעיפים שנמחקו של ספקטרוגרמה מתוך קובץ הצליל על ידי בחירת &quot;הסר סעיפים ספקטרוגרמה נמחק waveform ...&quot; מתוך התפריט הנפתח כלים. אם בפקודה זו לא מבוצע לפני ספקטרוגרמה סגור, כל העבודה מוחקים יאבדו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יצירת תוויות קבע קובץ הצליל על ידי לחיצה על &#39;ערוך&#39; כפתור בסעיף אלמנט ההפרדה של חלון מדידות פרמטר אוטומטי ההתקנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזותית aurally לבדוק כל הניקוד שכותרתו לקבוע בקטגוריה שלו: תדירות פשוטה, מווסתת (FM), או הרמונית. חמורIGN את התווית המתאימה באמצעות מוגדרים מראש טקסט מודולים. דוגמאות של כל קטגוריה הניקוד מוצגים באיור 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את ספקטרוגרמה, שמור את הקובץ קול, ולהמשיך עם קובץ הצליל הבא כדי להיות מנותח. </li></ol> 5. מדידות אקוסטיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר קולות בכל קבצי קול זוהו, להשתמש בכלי עיבוד אצווה (כלים: Batch Processing) באופן אוטומטי למדוד את הפרמטרים האקוסטיים של כל הקבצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתיבת עיבוד אצווה דיאלוג, בחר &quot;מדידות פרמטר אוטומטי&quot; מתוך התפריט הנפתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את &quot;תהליך כל הקבצים בתיקייה הנבחרת&quot; תיבת הסימון ולחץ על הלחצן &quot;תיקיה&quot; ובחר את התיקייה שבה נשמרים קבצי קול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ &quot;התחל&quot; של כל קובץ ינותחו באופן אוטומטי בהתאם להגדרות האחרון שהיה בשימוש בתיבה אוטומטית פרמטר מדידה ההתקנה דיאלוג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המדידות יישמרו בקובץ טקסט כי ניתן להגדיר באמצעות פרמטרים DDE / קובץ יומן הגדרת הפקודה. זהו קובץ טקסט אז יכול להיות מיובאים לתוך תוכנית לניתוח סטטיסטי. </li></ol> 6. נציג תוצאות: קולות Ultrasonic של חולדות מושפעים משינויים פיזיולוגיים הקשורים להזדקנות 6-OHDA מודלים מחלת פרקינסון 13 בדרך כלל, אנו רואים ירידה באיכות של קולות קולי המאופיינת על ידי ירידה של הפרמטרים הבאים אקוסטי כמותי:. ברוחב פס, בתדירות שיא, משך , ועוצמה. איור 6 מציג את קולות תדר מאופנן של עכברוש במודל פ&quot;ד בשלוש נקודות זמן שונות: בסיסית, לאחר גיוס של מחלת הפרקינסון, ואחרי אימון הניקוד. בתנאי פ&quot;ד, השיחה מראה ירידה, רוחב פס עוצמת משך,. בנוסף, אפנון תדר הפך סדיר. בנוסף השפלה של פרמטרים אקוסטיים ספציפיים, אנחנו גם רואים את המורכבות הכוללת פחות סוגי קולות המיוצר החולדות ומעלה פרקינסון. לדוגמה, לאחר גיוס של פ&quot;ד חולדה מייצר מספר גדול יותר של שיחות פשוטות שיחות תדירות פחות מווסתת. הכשרה הניקוד לאחר, פרמטרים אקוסטיים רבים, כגון משך ועוצמת, הבסיס רמות גישה ומספר גדל שיחות מורכבות (איור 6). חולדות בני המניפסט השפלה דומה של פרמטרים אקוסטיים קולות קולי שלהם. אנו בודקים את ההשפעות של אימון קולי בחולדות בגיל. <img src="/files/ftp_upload/2835/2835fig1.jpg" alt="איור 1"/> באיור 1. מספר קולות בכל הפעלה (יעד פגש חולדות כל כל שבוע) והמחיר הניקוד (שגיאה מתכוון תקן מוצג) הן להגדיל במשך 6 שבועות אימון בקבוצה של שני צעירים (9 מו) ומבוגרים (32 מו) פישר 344/Brown נורבגיה חולדות F1. <img src="/files/ftp_upload/2835/2835fig2.jpg" alt="איור 2"/> איור 2 קולות נציג של כל אחת משלוש הקטגוריות של 50 קולות kHz;. (א) פשוטה, (ב) תדר מאופנן, ו (ג) הרמוני. <img src="/files/ftp_upload/2835/2835fig3.jpg" alt="איור 3"/> איור 3. נציג תדר מאופנן קולות מן חולדה אחת בתחילת המחקר (א), (ב) שלאחר פ&quot;ד אינדוקציה, ו (ג) אימון לאחר הניקוד.

<ol>
	<li>Fox, C. M., Morrison, C. E., Ramig, L. O., Sapir, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+perspectives+on+the+Lee+Silverman+Voice+Treatment+(LSVT)+for+individuals+with+idiopathic+Parkinson+disease.">Current perspectives on the Lee Silverman Voice Treatment (LSVT) for individuals with idiopathic Parkinson disease.</a> Am J Speech Lang Pathol. 11, 111-123 (2002).</li><li>Roy, N., Stemple, J., Merrill, R. M., Thomas, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+voice+disorders+in+the+elderly:+preliminary+findings.">Epidemiology of voice disorders in the elderly: preliminary findings.</a> Laryngoscope. 117, 628-633 (2007).</li><li>Ramig, L. O., Sapir, S., Fox, C., Countryman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+vocal+loudness+following+intensive+voice+treatment+(LSVT)+in+individuals+with+Parkinson's+disease:+a+comparison+with+untreated+patients+and+normal+age-matched+controls.">Changes in vocal loudness following intensive voice treatment (LSVT) in individuals with Parkinson's disease: a comparison with untreated patients and normal age-matched controls.</a> Mov. Disord. 16, 79-83 (2001).</li><li>Sapir, S., Ramig, L. O., Fox, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Lee+Silverman+Voice+Treatment®+for+voice,+speech+and+other+orofacial+disorders+in+patients+with+Parkinson's+disease.">The Lee Silverman Voice Treatment® for voice, speech and other orofacial disorders in patients with Parkinson's disease.</a> Future Neurology. 1, 563-570 (2006).</li><li>Panksepp, J., Burgdorf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=50-kHz+chirping+(laughter?)+in+response+to+conditioned+and+unconditioned+tickle-induced+reward+in+rats:+effects+of+social+housing+and+genetic+variables.">50-kHz chirping (laughter?) in response to conditioned and unconditioned tickle-induced reward in rats: effects of social housing and genetic variables.</a> Behav. Brain Res. 115, 25-38 (2000).</li><li>Scattoni, M. L., Gandhy, S. U., Ricceri, L., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unusual+repertoire+of+vocalizations+in+the+BTBR+T+tf/J+mouse+model+of+autism.">Unusual repertoire of vocalizations in the BTBR T+tf/J mouse model of autism.</a> PLoS One. 3, e3067-e3067 (2008).</li><li>Wohr, M., Houx, B., Schwarting, R. K., Spruijt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+experience+and+context+on+50-kHz+vocalizations+in+rats.">Effects of experience and context on 50-kHz vocalizations in rats.</a> Physiol. Behav. 93, 766-776 (2008).</li><li>Lahvis, G. P., Alleva, E., Scattoni, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+mouse+vocalizations:+prosody+and+frequency+modulation.">Translating mouse vocalizations: prosody and frequency modulation.</a> Genes Brain Behav. 10, 4-16 (2011).</li><li>Brudzynski, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Communication+of+adult+rats+by+ultrasonic+vocalization:+biological,+sociobiological,+and+neuroscience+approaches.">Communication of adult rats by ultrasonic vocalization: biological, sociobiological, and neuroscience approaches.</a> ILAR J. 50, 43-50 (2009).</li><li>Johnson, A. M., Ciucci, M. R., Russell, J. A., Hammer, M. J., Connor, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonic+output+from+the+excised+rat+larynx.">Ultrasonic output from the excised rat larynx.</a> J. Acoust. Soc. Am. 128, EL75-EL79 (2010).</li><li>Fulceri, F., Biagioni, F., Lenzi, P., Falleni, A., Gesi, M., Ruggieri, S., Fornai, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nigrostriatal+damage+with+6-OHDA:+validation+of+routinely+applied+procedures.">Nigrostriatal damage with 6-OHDA: validation of routinely applied procedures.</a> Ann N Y Acad Sci. 1074, 344-348 (2006).</li><li>Ciucci, M. R., Vinney, L., Wahoske, E. J., Connor, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+translational+approach+to+vocalization+deficits+and+neural+recovery+after+behavioral+treatment+in+Parkinson+disease.">A translational approach to vocalization deficits and neural recovery after behavioral treatment in Parkinson disease.</a> J. Commun. Disord. 43, 319-326 (2010).</li><li>Ciucci, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+dopamine+synaptic+activity:+degradation+of+50-kHz+ultrasonic+vocalization+in+rats.">Reduction of dopamine synaptic activity: degradation of 50-kHz ultrasonic vocalization in rats.</a> Behav. Neurosci. 123, 328-336 (2009).</li><li>Wright, J. M., Gourdon, J. C., Clarke, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+multiple+call+categories+within+the+rich+repertoire+of+adult+rat+50-kHz+ultrasonic+vocalizations:+effects+of+amphetamine+and+social+context.">Identification of multiple call categories within the rich repertoire of adult rat 50-kHz ultrasonic vocalizations: effects of amphetamine and social context.</a> Psychopharmacology (Berl). 211, 1-13 (2010).</li><li>Burgdorf, J., Kroes, R. A., Beinfeld, M. C., Panksepp, J., Moskal, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncovering+the+molecular+basis+of+positive+affect+using+rough-and-tumble+play+in+rats:+a+role+for+insulin-like+growth+factor+I.">Uncovering the molecular basis of positive affect using rough-and-tumble play in rats: a role for insulin-like growth factor I.</a> Neuroscience. 168, 769-777 (2010).</li><li>W&#246;hr, M., Schwarting, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonic+communication+in+rats:+effects+of+morphine+and+naloxone+on+vocal+and+behavioral+responses+to+playback+of+50-kHz+vocalizations.">Ultrasonic communication in rats: effects of morphine and naloxone on vocal and behavioral responses to playback of 50-kHz vocalizations.</a> Pharmacol Biochem Behav. 94, 285-295 (2009).</li></ol>

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי מדיניות שירות בריאות הציבור על טיפול השתמש ההומאנית של חיות מעבדה, מדריך NIH לטיפול ולשימוש בחיות מעבדה, ואת מעשה רווחת בעלי החיים. פרוטוקול השימוש בבעלי חיים אושרה על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש (IACUC) מאוניברסיטת ויסקונסין במדיסון הספר לרפואה ובריאות הציבור.

קולות Ultrasonic בחולדות להיראות פגיע תהליכי הזדקנות ומחלות, כגון מחלת פרקינסון. אלה קולות קולי לספק מודל התנהגות של פונקציה קולית, כולל גירעונות המלווים שינויים פיזיולוגיים עקב מחלה והזדקנות. בנוסף, שינויים אקוסטיים קולות קולי נמדדים בקלות לכימות. יתר על כן, קולי קולות יכול להיות שונה באמצעות התערבויות התנהגותיות. לכן, קולי קולות עכברוש לספק מודל שימושי ללמוד את ההשפעה של המחלה, ההזדקנות, התערבויות טיפוליות על התנהגות שני מנגנוני הנוירוביולוגי הבסיסית. השיטה שלנו של אימון קולי משתמש גירוי מותנה (קליק) הקשורים חיזוק חיובי (גמול מים או אוכל לטפל). לחץ ואחריו פרס משמש כדי לחזק את קולות של מורכבות גדלה והולכת. אנו מגדירים קולות מורכבים כמו אלה המכילים &quot;סלסול&quot; (תדר מאופנן) רכיב (איור 5 ב) לעומת אלה &quot;שטוח&quot; ולשמור על תדר בודד (איור 5 א). רכיב זה תדר מאופנן מזוהה בקלות על ידי סינוסי המראה שלה. בעוד 50-kHz קולות ניתן סינוסי לחלוטין (איור 5 ב), מקובל המפגש המורכב יותר של 50 קילוהרץ קולות המורכבים בחלקו של רכיב זה תדר מאופנן, וכן גם קפיצות גדולות בתדירות או מרכיב שטוח קצר. אלה קולות מורכבים יותר יכול להיות הפסקות קצרות של פחות מ -10 אלפיות בין רכיבים אלא נחשבים ניקוד בודד. למרות נוסף מפורט תת סיווג של קולות אלה ניתן מקוון, 14 אנו מסווגים את כל 50-kHz קולות המכילות רכיב תדר מאופנן מורכב כדי להפחית את הצורך בסיווג סובייקטיבית באינטרנט ולצמצם את השתנות חיזוק. במעבדה שלך חשוב לבחור כיצד נתונים מסווג ונותחו על פי תכנון מחקר המתאימה לצורך המחקר. ישנם גורמים רבים שיש לקחת בחשבון בעת ​​שימוש בפרוטוקול זה. קודם כל, למרות ההומוגניות הגנטית ועקביות פרוצדורליים, חולדות יש תגובה משתנה לאימונים. חולדות חלק טבעי להשמיע יותר מאחרים, 5 או מונעים על ידי חשיפה יותר נשים מאשר על ידי גמול מזון או מים. אחת הדרכים שאנו אחראים השתנות זו היא על ידי בחינת השינוי פרמטרים אקוסטיים קולות מן ההתחלה חולדות &quot;הפרט הנגע הפוסט שלהם שלאחר האימון קולות. אמנם לא דנו בפרוטוקול זה, יש לנו גם מבחני התנהגות לכמת עניין הנקבה, כגון חביון לעלות. בנוסף, בהתאם לגיל ורמת הפעילות של עכברוש יחיד, גבי חוט עשוי להיות נחוץ על הכלוב הביתה במהלך האימון כדי למנוע בריחה. למרות ההשתנות בודדים, השתמשנו בהצלחה בפרוטוקול זה על מגוון רחב של זנים וגילאים כדי לשפר את קולות יחסית הבסיס לכל חולדה של הפרט. חולדות רגישים שינויים קטנים לכאורה בסביבה, כגון ריחות, טמפרטורה, וכוח אדם. המאמץ צריך להיעשות כדי למנוע ריחניים ומוצרי טיפוח אישי, כגון קרמים, מוצרי שיער, ובשמים. לפני שתנסה הדרכה, אדם חייב להיות נוח באינטראקציה עם וטיפול חולדות. יתר על כן, כל הסתירות אדם או הסביבה עלולים להשפיע על התגובה הניקוד של החולדות. כי חולדות הן לילית, הם צריכים להיות כל הזמן על מחזור אור הפוך, כדי לאפשר הכשרה להתקיים במהלך החלק האפל של מחזור שלהם כאשר הם הפעילים ביותר. אנו להאיר חדר ההדרכה שלנו עם אורות אדומים. בנוסף, אם פרס המים משמש במהלך האימון, חולדות צריך גישה מוגבלת למים. חולדות שלנו הם מים מוגבלת ל 21 שעות לפני האימון. שלוש שעות של חשיפה המים נקבע על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים שלנו השתמש ועדת להיות תקופה לפחות פעם מגבילים שאפשרו מים כדי להיות שימושי חיזוק במחקרים התנהגותיים שלנו מבלי להציג פשרה משמעותית על בריאות בעלי חיים או רווחתם. חולדות מקבלים גישה למים בזמנים אקראיים (10 דקות עד 30 דקות) לאחר האימון, ולאחר מכן יש גישה חופשית למים במשך שלוש שעות במהלך החלק האפל של מחזור אור שלהם. חולדות יש לבדוק כל יום סימנים של התייבשות שקל בכל יום אחר, כדי להבטיח שאין אובדן משמעותי (יותר מ 10%) משקל. מגבלה מזון אינו נחוץ אם באמצעות לטפל מזון כפרס. מטפלת ספציפית חולדות זמינים מסחרית, אבל מצאנו פיסה קטנה של דגני בוקר ממותקים להיות תגמול אפקטיבי. כאמור, חולדות נקבות מיוחמות לתגובה ניקוד גבוה יותר מן הזכרים מאשר אי - מינית נקבות פתוח. על ידי שמירה על מספר גדול של נשים במושבה, קיימת סבירות גבוהה כילפחות נקבה אחת יהיו מיוחמות בכל יום נתון. עם זאת, ייחום ניתן גם המושרה פרמקולוגית על ידי הזרקה תת עורית 10 מיקרוגרם של β-estradiol ב 0.1 סטרילי סמ&quot;ק שמן שומשום 48 שעות לפני האימון ואחריו 500 מיקרוגרם של פרוגסטרון 0.1 סמ&quot;ק שמן שומשום סטרילי 4 שעות לפני אימון חולדות נקבות. בנוסף, חולדות זכרים כי הם תמימים כדי חולדות נקבות חייב להיות מנוסה מינית לפני אימון ווקאלית. מטרה זו מושגת על ידי הצבת חולדה נקבה כי הוא מציג סימנים של פתיחות מינית (מתרוצצות, האוזן לורדוסה נענוע) לכלוב בבית של הזכר עד mounts ו פולט הגבר. זכרים לא יכול לעלות במהלך הפגישות הראשונות והנקבה ניתן להסיר לאחר עניין הזכר מראה לנקבה על ידי רחרוח ו / או לרדוף אחרי הנקבה סביב הכלוב. התנסות מינית נעשית פעם אחת ביום למשך שבועיים. זו תקופת זמן מספקת גם הזדמנות עבור חולדות להרגיל את הניסוי (ים) וחדר הקלטה. מגבלה אחת שיטה זו היא קביעה סובייקטיבית של סוג הניקוד. בנוסף, גורם זה מגביל את המהירות של איסוף נתונים, כמו כל שיחה יש לבחון באופן עצמאי מסווג באופן ידני. בהקשר זה את החשיבות של בעל מדרגים מנוסים אשר הוכשרו באופן עקבי בזיהוי הניקוד. אמינות שניהם התוך והבין rater יש לבחון בתוך המעבדה שלך. לסיכום, קולי קולות במכרסמים משמשים מודלים שונים ללמוד מוח והתנהגות יחסים, כולל מצבים רגשיים, תגמול והתמכרות, ומדינות המחלה, כגון אוטיזם. 6,14-16 זו שיטה חדשה היא דרך ללמוד את המנגנונים הדרכה קולית ממוקדות לטיפול בגירעונות קול הזדקנות מחלת פרקינסון. שיטה זו יש את הפוטנציאל להיות מיושם על מודלים מחלה אחרים המשפיעים תקשורת קול.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th></tr><tr><td> אולטרסאונד Condenser מיקרופון CM16/CMPA </td><td> Avisoft Bioacoustics </td><td> 40011 </td></tr><tr><td> UltraSoundGate 116Hb </td><td> Avisoft Bioacoustics </td><td> 41161 </td></tr><tr><td> Avisoft הקלטה </td><td> Avisoft Bioacoustics </td><td> 10201 </td></tr><tr><td> Avisoft SASLab-Pro </td><td> Avisoft Bioacoustics </td><td> 10101 </td></tr></tbody></table>

targeted training of ultrasonic vocalizations in aged and parkinsonian rats

גירעונות קוליות סיבוך נפוץ של מחלת פרקינסון הן (PD) והזדקנות: הם יכולים להפחית באופן משמעותי את איכות החיים על ידי השפעה יכולות תקשורת 1, 2 אימון ממוקד (דיבור / טיפול קול) יכול לשפר את הגירעונות קול ספציפי, 3, 4 אף. המנגנון הבסיסי של התערבויות התנהגותיות אינם מובנים היטב. חקירה שיטתית של גירעונות קול טיפול כדאי לשקול הרבה גורמים שקשה לשלוט בבני אדם, כגון גיל, סביבת הבית, בגיל שלאחר תחילת המחלה, חומרת המחלה, ותרופות. השיטה המוצגת כאן משתמשת במודל של בעלי חיים ניקוד המאפשר לימוד שיטתי של כמה הבסיסית הסנסורית מנגנוני השינוי עם הדרכה קולית ממוקדות. קולי הקלטה וניתוח להליכים המצוינים בפרוטוקול זה החלות על כל חקירה של קולות מכרסם קולי. קולי קולות של מכרסמים הם מתעוררים כמודל ערך לחקור את מצעים עצביים של התנהגות. 5-8 שני מכרסם קולות אנושיים לשאת ערך סמיוטי ומיוצרים על ידי שינוי זרימת האוויר egressive עם מועקה בגרון. 9, 10 לפיכך, קולות מכרסמים יכול להיות מודל שימושי ללמוד גירעונות קול בהקשר הסנסורית. בנוסף, מודלים חולדה לאפשר לנו ללמוד את הבסיס הנוירוביולוגי של ההתאוששות מן הגירעונות עם הדרכה ממוקדת. המודל פ&quot;ד אנו משתמשים ארוך אוונס חולדות (צ&#39;ארלס ריבר מעבדות International, Inc) ו להשרות פרקינסון על ידי עירוי חד צדדית של 7 מיקרוגרם של hydroxydopamine-6 ​​(6 OHDA) לתוך הצרור המוח הקדמי המדיאלי הגורמת בינונית עד קשה של ניוון presynaptic נוירונים striatal (לפרטים ראה Ciucci, 2010). 11, 12 עבור דגם ההזדקנות שלנו אנו משתמשים 344/Brown פישר נורבגיה F1 (המכון הלאומי להזדקנות). השיטה העיקרית שלנו קולות לעורר היא לחשוף חולדות זכרים בלתי מנוסים חולדות נקבות פתוח מבחינה מינית. כאשר הזכר הופך מעוניין הנקבה, הנקבה יוסר הזכר ממשיך להשמיע. על ידי קולות מורכבים מתגמל עם מזון או מים, הן את מספר קולות מורכבים שיעור קולות יכול להיות מוגברת (איור 1). מיקרופון קולי רכוב מעל הכלוב בית של הזכר הרשומות קולות. הקלטת מתחילה אחרי הנקבה מוסר לבודד את שיחות גברים. קולות ניתן לצפות בזמן אמת לאימונים או נרשמו ונותחו מקוון. על ידי הקלטה אקוסטית ניתוח קולות לפני ואחרי אימון ווקאלית, ההשפעות של המחלה ושיקום התיפקוד הרגיל עם אימונים ניתן להעריך. מודל זה גם מאפשר לנו להתייחס ציין התנהגותיות (ווקאלי) שיפורים לשינויים במוח ובמערכת neuromuscular.

Watch this Scientific Journal Video about Targeted Training of Ultrasonic Vocalizations in Aged and Parkinsonian Rats at JoVE.com

Targeted Training of Ultrasonic Vocalizations in Aged and Parkinsonian Rats

הפרעות קוליות מתיש הזדקנות מחלת פרקינסון. קולות קולי של חולדות, מושפע גם בתנאים אלו, יכול לשמש כדי ללמוד הפרעות אלה קול, מצעים העצבית שלהם, את האופי של התאוששות תפקודית עם התערבות התנהגותית.

אימון ממוקד של קולות Ultrasonic בחולדות ומעלה פרקינסון

Voice deficits are a common complication of both Parkinson disease (PD) and aging; they can significantly diminish quality of life by impacting ...

targeted-training-ultrasonic-vocalizations-aged-parkinsonian

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

19.7K Views.  University of Wisconsin. הפרעות קוליות מתיש הזדקנות מחלת פרקינסון. קולות קולי של חולדות, מושפע גם בתנאים אלו, יכול לשמש כדי ללמוד הפרעות אלה קול, מצעים העצבית שלהם, את האופי של התאוששות תפקודית עם התערבות התנהגותית.

Video: Targeted Training of Ultrasonic Vocalizations in Aged and Parkinsonian Rats

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and relapse. Various types of behavioral activity are commonly utilized as measures of drug motivation in animals. However, a crucial component of drug abuse relapse in abstinent cocaine users is "drug craving", which is difficult to model in animals, as it often occurs in the absence of overt behaviors. Yet, it is possible that a class of ultrasonic vocalizations (USVs) in rats may be a useful marker for affective responses to drug administration, drug anticipation and even drug craving. Rats vocalize in ultrasonic frequencies that serve as a communicatory function and express subjective emotional states. Several studies have shown that different call frequency ranges are associated with negative and positive emotional states. For instance, high frequency calls ("50-kHz") are associated with positive affect, whereas low frequency calls ("22-kHz") represent a negative emotional state. This article describes a procedure to assess rat USVs associated with daily cocaine self-administration. For this procedure, we utilized standard single-lever operant chambers housed within sound-attenuating boxes for cocaine self-administration sessions and utilized ultrasonic microphones, multi-channel recording hardware and specialized software programs to detect and analyze USVs. USVs measurements reflect emotionality of rats before, during and after drug availability and can be correlated with commonly assessed drug self-administration behavioral data such lever responses, inter-response intervals and locomotor activity. Since USVs can be assessed during intervals prior to drug availability (e.g., anticipatory USVs) and during drug extinction trials, changes in affect associated with drug anticipation and drug abstinence can also be determined. In addition, determining USV changes over the course of short- and long-term drug exposure can provide a more detailed interpretation of drug exposure effects on affective functioning.

Drug self-administration and ultrasonic vocalizations (USV) are used as behavioral assessments in animal research, but rarely in combination. The purpose of this article is to describe the advantages of recording USVs during drug self-administration procedures to assess affective responses to drug experience.

הערכת קולות Ultrasonic במהלך והתרופות עצמית הממשל חולדות

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and ...

Kinematics and Ground Reaction Force Determination: A Demonstration Quantifying Locomotor Abilities of Young Adult, Middle-aged, and Geriatric Rats

Behavior, in its broadest definition, can be defined as the motor manifestation of physiologic processes. As such, all behaviors manifest through the motor system. In the fields of neuroscience and orthopedics, locomotion is a commonly evaluated behavior for a variety of disease models. For example, locomotor recovery after traumatic injury to the nervous system is one of the most commonly evaluated behaviors 1-3. Though locomotion can be evaluated using a variety of endpoint measurements (e.g. time taken to complete a locomotor task, etc), semiquantitative kinematic measures (e.g. ordinal rating scales (e.g. Basso Beattie and Bresnahan locomotor (BBB) rating scale, etc)) and surrogate measures of behaviour (e.g. muscle force, nerve conduction velocity, etc), only kinetics (force measurements) and kinematics (measurements of body segments in space) provide a detailed description of the strategy by which an animal is able to locomote 1. Though not new, kinematic and kinetic measurements of locomoting rodents is now more readily accessible due to the availability of commercially available equipment designed for this purpose. Importantly, however, experimenters need to be very familiar with theory of biomechanical analyses and understand the benefits and limitations of these forms of analyses prior to embarking on what will become a relatively labor-intensive study. The present paper aims to describe a method for collecting kinematic and ground reaction force data using commercially available equipment. Details of equipment and apparatus set-up, pre-training of animals, inclusion and exclusion criteria of acceptable runs, and methods for collecting the data are described. We illustrate the utility of this behavioral analysis technique by describing the kinematics and kinetics of strain-matched young adult, middle-aged, and geriatric rats.

Locomotion is often examined as a behavioural outcome in various models of disease in fields such as neuroscience and orthopedics. This video paper intends to describe a method for collecting ground reaction forces and kinematics from rats during unrestrained locomotion.

קינמטיקה ואת תגובת קרקע חיל קביעת: הפגנה כימות של תנועה היכולות של מבוגרים צעירים, בגיל העמידה, ועל החולדות הגריאטרי

Behavior, in its broadest definition, can be defined as the motor manifestation of physiologic processes.  As such, all behaviors manifest through the ...

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

שיטה כללית להערכת דגירה של השתוקקות סוכרוז בחולדות

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from individual neurons are critical for understanding how neural circuits function under natural conditions. Traditionally, these recordings have been performed 'blind', meaning the identity of the recorded cell is unknown at the start of the recording. Cellular identity can be subsequently determined via intracellular1, juxtacellular2 or loose-patch3 iontophoresis of dye, but these recordings cannot be pre-targeted to specific neurons in regions with functionally heterogeneous cell types. Fluorescent proteins can be expressed in a cell-type specific manner permitting visually-guided single-cell electrophysiology4-6. However, there are many model systems for which these genetic tools are not available. Even in genetically accessible model systems, the desired promoter may be unknown or genetically homogenous neurons may have varying projection patterns. Similarly, viral vectors have been used to label specific subgroups of projection neurons7, but use of this method is limited by toxicity and lack of trans-synaptic specificity. Thus, additional techniques that offer specific pre-visualization to record from identified single neurons in vivo are needed. Pre-visualization of the target neuron is particularly useful for challenging recording conditions, for which classical single-cell recordings are often prohibitively difficult8-11. The novel technique described in this paper uses retrograde transport of a fluorescent dye applied using tungsten needles to rapidly and selectively label a specific subset of cells within a particular brain region based on their unique axonal projections, thereby providing a visual cue to obtain targeted electrophysiological recordings from identified neurons in an intact circuit within a vertebrate CNS.
The most significant novel advancement of our method is the use of fluorescent labeling to target specific cell types in a non-genetically accessible model system. Weakly electric fish are an excellent model system for studying neural circuits in awake, behaving animals12. We utilized this technique to study sensory processing by "small cells" in the anterior exterolateral nucleus (ELa) of weakly electric mormyrid fish. "Small cells" are hypothesized to be time comparator neurons important for detecting submillisecond differences in the arrival times of presynaptic spikes13. However, anatomical features such as dense myelin, engulfing synapses, and small cell bodies have made it extremely difficult to record from these cells using traditional methods11, 14. Here we demonstrate that our novel method selectively labels these cells in 28% of preparations, allowing for reliable, robust recordings and characterization of responses to electrosensory stimulation.

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde transport of fluorescent dye labels a sub-population of neurons based on anatomical projection. Labeled axons can be visually targeted in vivo, permitting extracellular recording from identified axons. This technique facilitates recording when neurons cannot be labeled through genetic manipulation or are difficult to isolate using 'blind' in vivo approaches.

תיוג של פלורסנט מדרדר מאפשר להקלטה ממוקדת חד תאית מיחידת נוירונים שזוהו<em&gt; בvivo</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains technically challenging. One approach, Activation-Induced Manganese-enhanced MRI (AIM MRI), has been used successfully to map neuronal activity in rodents 1-5. In AIM MRI, Mn2+ acts a calcium analog and accumulates in depolarized neurons 6,7. Because Mn2+ shortens the T1 tissue property, regions of elevated neuronal activity will enhance in MRI. Furthermore, Mn2+ clears slowly from the activated regions; therefore, stimulation can be performed outside the magnet prior to imaging, enabling greater experimental flexibility. However, because Mn2+ does not readily cross the blood-brain barrier (BBB), the need to open the BBB has limited the use of AIM MRI, especially in mice.
One tool for opening the BBB is ultrasound. Though potentially damaging, if ultrasound is administered in combination with gas-filled microbubbles (i.e., ultrasound contrast agents), the acoustic pressure required for BBB opening is considerably lower. This combination of ultrasound and microbubbles can be used to reliably open the BBB without causing tissue damage 8-11.
Here, a method is presented for performing AIM MRI by using microbubbles and ultrasound to open the BBB. After an intravenous injection of perflutren microbubbles, an unfocused pulsed ultrasound beam is applied to the shaved mouse head for 3 minutes. For simplicity, we refer to this technique of BBB Opening with Microbubbles and UltraSound as BOMUS 12. Using BOMUS to open the BBB throughout both cerebral hemispheres, manganese is administered to the whole mouse brain. After experimental stimulation of the lightly sedated mice, AIM MRI is used to map the neuronal response.
To demonstrate this approach, herein BOMUS and AIM MRI are used to map unilateral mechanical stimulation of the vibrissae in lightly sedated mice 13. Because BOMUS can open the BBB throughout both hemispheres, the unstimulated side of the brain is used to control for nonspecific background stimulation. The resultant 3D activation map agrees well with published representations of the vibrissae regions of the barrel field cortex 14. The ultrasonic opening of the BBB is fast, noninvasive, and reversible; and thus this approach is suitable for high-throughput and/or longitudinal studies in awake mice.

A technique is described for broadly opening the blood-brain barrier in the mouse using microbubbles and ultrasound. Using this technique, manganese can be administered to the mouse brain. Because manganese is an MRI contrast agent that accumulates in depolarized neurons, this approach enables imaging of neuronal activity.

הדמייה תפקודית באמצעות שיבוש Ultrasonic הדם למוח הגדר מנגן משופרת MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Susceptibility to neuron cell death associated to neurodegeneration and ischemia are exceedingly increased in the aged brain but mechanisms responsible are badly known. Excitotoxicity, a process believed to contribute to neuron damage induced by both insults, is mediated by activation of glutamate receptors that promotes Ca2+ influx and mitochondrial Ca2+ overload. A substantial change in intracellular Ca2+ homeostasis or remodeling of intracellular Ca2+ homeostasis may favor neuron damage in old neurons. For investigating Ca2+ remodeling in aging we have used live cell imaging in long-term cultures of rat hippocampal neurons that resemble in some aspects aged neurons in vivo. For this end, hippocampal cells are, in first place, freshly dispersed from new born rat hippocampi and plated on poli-D-lysine coated, glass coverslips. Then cultures are kept in controlled media for several days or several weeks for investigating young and old neurons, respectively. Second, cultured neurons are loaded with fura2 and subjected to measurements of cytosolic Ca2+ concentration using digital fluorescence ratio imaging. Third, cultured neurons are transfected with plasmids expressing a tandem of low-affinity aequorin and GFP targeted to mitochondria. After 24 hr, aequorin inside cells is reconstituted with coelenterazine and neurons are subjected to bioluminescence imaging for monitoring of mitochondrial Ca2+ concentration. This three-step procedure allows the monitoring of cytosolic and mitochondrial Ca2+ responses to relevant stimuli as for example the glutamate receptor agonist NMDA and compare whether these and other responses are influenced by aging. This procedure may yield new insights as to how aging influence cytosolic and mitochondrial Ca2+ responses to selected stimuli as well as the testing of selected drugs aimed at preventing neuron cell death in age-related diseases.

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Intracellular Ca2+ remodeling in aging may contribute to excitotoxicity and neuron damage, processes mediated by Ca2+ overload. We aimed at investigating Ca2+ remodeling in the aging brain using fluorescence and bioluminescence imaging of cytosolic and mitochondrial Ca2+ in long-term cultures of rat hippocampal neurons, a model of neuronal aging.

הקרינה ופליטת אור הדמיה של Ca subcellular<sup&gt; 2 +</sup&gt; בבני נוירונים בהיפוקמפוס

Susceptibility to neuron cell death associated to neurodegeneration and ischemia are exceedingly increased in the aged brain but mechanisms responsible ...

Sequential Extraction of Soluble and Insoluble Alpha-Synuclein from Parkinsonian Brains

Alpha-synuclein (&#945;-syn) protein is abundantly expressed mainly within neurons, and exists in a number of different forms - monomers, tetramers, oligomers and fibrils. During disease, &#945;-syn undergoes conformational changes to form oligomers and high molecular weight aggregates that tend to make the protein more insoluble. Abnormally aggregated &#945;-syn is a neuropathological feature of Parkinson&#39;s disease (PD), dementia with Lewy bodies (DLB) and multiple system atrophy (MSA). Biochemical characterization and analysis of insoluble &#945;-syn using buffers with increasing detergent strength and high-speed ultracentrifugation provides a powerful tool to determine the development of &#945;-syn pathology associated with disease progression. This protocol describes the isolation of increasingly insoluble/aggregated &#945;-syn from post-mortem human brain tissue. This methodology can be adapted with modifications to studies of normal and abnormal &#945;-syn biology in transgenic animal models harbouring different &#945;-syn mutations as well as in other neurodegenerative diseases that feature aberrant fibrillar deposits of proteins related to their respective pathologies.

Here, we present a protocol for the isolation of increasingly insoluble/aggregated alpha-synuclein (&#945;-syn) from post-mortem human brain tissue. Through the utilization of buffers with increasing detergent strength and high-speed ultracentrifugation techniques, the variable properties of &#945;-syn aggregation in diseased and non-diseased tissue can be examined.

הפקה רציפה של המסיס ובלתי מסיס אלפא-סינוקלאין ממוח פרקינסון

Alpha-synuclein (&#945;-syn) protein is abundantly expressed mainly within neurons, and exists in a number of different forms - monomers, tetramers, ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.

מבחן אובייקטיבי, לשחזור של למידה חוש הריח ואפליה בעכברים

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

In Vivo Targeted Expression of Optogenetic Proteins Using Silk/AAV Films

The quest to understand how neural circuits process information in order to drive behavioral output has been greatly aided by recently-developed optical methods for manipulating and monitoring the activity of neurons in vivo. These types of experiments rely on two main components: 1) implantable devices that provide optical access to the brain, and 2) light-sensitive proteins that change neuronal excitability or provide a readout of neuronal activity. There are a number of ways to express light-sensitive proteins, but stereotaxic injection of viral vectors is currently the most flexible approach because expression can be controlled with genetic, anatomical, and temporal precision. Despite the great utility of viral vectors, delivering the virus to the site of optical implants poses numerous challenges. Stereotaxic virus injections are demanding surgeries that increase surgical time, increase the cost of studies, and pose a risk to the animal's health. The surrounding tissue can be physically damaged by the injection syringe, and by immunogenic inflammation caused by the abrupt delivery of a bolus of high-titer virus. Aligning injections with optical implants is especially difficult when targeting small regions deep in the brain. To overcome these challenges, we describe a method for coating multiple types of optical implants with films composed of silk fibroin and Adeno-associated viral (AAV) vectors. Fibroin, a polymer derived from the cocoon of Bombyx mori, can encapsulate and protect biomolecules and can be processed into forms ranging from soluble films to ceramics. When implanted into the brain, silk/AAV coatings release virus at the interface between optical elements and the surrounding brain, driving expression precisely where it is needed. This method is easily implemented and promises to greatly facilitate in vivo studies of neural circuit function.

In Vivo Targeted Expression of Optogenetic Proteins Using Silk/AAV Films

Here, we present a method for delivering viral expression vectors into the brain using silk fibroin films. This method allows targeted delivery of expression vectors using silk/AAV coated optical fibers, tapered optical fibers, and cranial windows.

אין ויוו יישוב ביטוי של חלבונים Optogenetic באמצעות סרטי משי/AAV

The quest to understand how neural circuits process information in order to drive behavioral output has been greatly aided by recently-developed optical ...

Activity-based Training on a Treadmill with Spinal Cord Injured Wistar Rats

Spinal cord injury (SCI) results in lasting deficits that include both mobility and a multitude of autonomic-related dysfunctions. Locomotor training (LT) on a treadmill is widely used as a rehabilitation tool in the SCI population with many benefits and improvements to daily life. We utilize this method of activity-based task-specific training (ABT) in rodents after SCI to both elucidate the mechanisms behind such improvements and to enhance and improve upon existing clinical rehabilitation protocols. Our current goal is to determine the mechanisms underlying ABT-induced improvements in urinary, bowel, and sexual function in SCI rats after a moderate to severe level of contusion. After securing each individual animal in a custom-made adjustable vest, they are secured to a versatile body weight support mechanism, lowered to a modified three-lane treadmill and assisted in step-training for 58 minutes, once a day for 10 weeks. This setup allows for the training of both quadrupedal and forelimb-only animals, alongside two different non-trained groups. Quadrupedal-trained animals with body weight support are aided by a technician present to assist in stepping with proper hind limb placement as necessary, while forelimb-only trained animals are raised at the caudal end to ensure no hind limb contact with the treadmill and no weight-bearing. One non-trained SCI group of animals is placed in a harness and rests next to the treadmill, while the other control SCI group remains in its home cage in the training room nearby. This paradigm allows for the training of multiple SCI animals at once, thus making it more time-efficient in addition to ensuring that our pre-clinical animal model mimics the clinical representation as close as possible, particularly with respect to the body weight support with manual assistance.

This protocol demonstrates our model of activity-based locomotor treadmill training for rats with spinal cord injury (SCI). Included is both quadrupedal and forelimb-only groups, in addition to two distinct types of non-trained control groups. Investigators are able to assess training effects on SCI rats using this protocol.

ההדרכה מבוססי פעילות על הליכון עם חוט השדרה נפגע Wistar חולדות

Spinal cord injury (SCI) results in lasting deficits that include both mobility and a multitude of autonomic-related dysfunctions. Locomotor training (LT) ...

אימון ממוקד של קולות Ultrasonic בחולדות ומעלה פרקינסון

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video