תודה ג&#39;סיקה Ottmar הצעות פרוטוקול תרומות נציג את הנתונים. תודה מיוחדת סברינה Blackledge, לורן Kohoutek ו Kerisa Shelton עבור הוכחת את זה בפרוטוקול.

1. להקים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל מחקר צריך להיות מאושר על ידי הדירקטוריון סקירה המתאים ועדה מוסדית או בבני אדם לבדוק לפני איסוף הנתונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן אידיאלי, שני חדרים צריך להיות זמין לנהל את TSST. חדר המתנה נוח צריכים להיות זמינים למשתתפים לפני תחילת TSST ובתקופות ההחלמה. חדר בראיון נפרד אמור לשמש במהלך הכנת הנאום, ביצועי דיבור חלקים המתמטיקה של TSST כדי להציג את החידוש uncontrolability. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסדרים את חדר הראיון, כך המשתתף יהיה מול מראיינים קונפדרציה ווידאו בעמדה או ציוד אודיו הקלטה בשדה הראייה של המשתתף. חלוקי מעבדה צריכה להיות זמינה מראיינים ללבוש במהלך TSST כדי להגדיל את הלחץ במהלך TSST. הדריכו את המראיינים כדי לשמור על קשר עין עם המשתתפים ולהימנע מלעשות את הבעות רגשיות במהלך TSST. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לשקול הדואר שאלת המחקר (ים) בעת בחירת מדידות תלויות. הנחיות לניתוח ופרסום של מדידות שונות של תגובת הלחץ מסופקים על ידי מספר מקורות (הנחיות עבור פרסום וניתוח של אמצעים פסיכו מסופקים על ידי האגודה למחקר פסיכו: <a href="http://www.sprweb.org/journal/index.cfm#guidelines" target="_blank">http://www.sprweb.org/journal/index. CFM הנחיות #</a> ). 5 ייעוץ של משאבים אלה בשלבי התכנון של ניסויים מומלץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את כל הציוד הדרוש כדי להקליט פיזיולוגיות, תגובות פסיכולוגיות או אנדוקריניות כדי TSST. ציוד זה עשוי לכלול (אך לא מוגבל) אלקטרודות אלקטרוניים וציוד / או תוכנה כדי להקליט את קצב הלב, תגובתיות לב וכלי דם, מוליכות העור או תגובה, כהרף עין, התכווצות שרירים / צליל, קצב הנשימה, נייר ועיפרון או גרסאות אלקטרוניות של מכשירים פסיכולוגיים כמו חרדה מדינת Trait Inventory: 6 צינורות וחומרים אחרים עבור אוסף דגימות שתן, דם או רוק,. הקלטה או ציוד וידאו להדגמה הזה, אנחנו נהיה באמצעות שלושה להוביל רל (אק&quot;ג) אלקטרודות כדי למדוד את קצב הלב במהלך TSST, ואת הממשל חוזרות ונשנות של Trait מדינת מלאי חרדה למדוד תגובה פסיכולוגית לפני ואחרי גורם הדחק. אנו מנצלים מערכת הקלטה בסיסית תוכנן כדי למדוד התגובות הפיזיולוגיות (BioPac MP36 מערכת) כדי להקליט את קצב הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם דגימות דם (ולא הרוק) ייאספו במהלך הניסוי, המאמצים כדי למזער את הכאב והמצוקה במהלך איסוף צריך להיעשות. אוסף נהלים דם יכול להציג מתח פיזי או פסיכולוגי נוסף, בלבול בתגובה ל TSST. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר משתתף מגיע, מברכים אותם למעבדה. קבלת הסכמה מדעת לבין המושב משתתף בנוחות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף מידע דמוגרפי, מידע ההקרנה או additioההגעה NAL אמצעים הנדרשים על ידי הניסוי. ודא כי המשתתף לא צרכו מזון או שתייה (מלבד מים) בשעה האחרונה אם איסוף מדידות קורטיזול. תקופה קצרה של צום מומלץ אם יהיה איסוף דגימות רוק לניתוח. שינויים ב-pH הקשורים מזון או משקה חומצי או זיהום נראה לעין יכול להפריע מדידה מדויקת של סמנים הרוק. סינון הרעלים שתן עשויה להידרש אם הצעדים של עניין עשוי להיות מזוהמים על ידי תרופות או מטבוליטים אחרים. מידע על הגורמים שעשויים להשפיע על תגובת הלחץ (למשל תרופות, מחלות, שינה, אירועים מלחיצים האחרונות, פוביה חברתית) צריך להיות גם נחשב כאשר המשתתפים בהקרנה. </li></ol> 2. Pre-מדידות מתח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדריכו את המשתתף לחכות בנוחות במשך 45 דקות בחדר ההמתנה. אתה יכול לבחור כדי לספק את המשתתף עם חומר קריאה, כגון מגזינים המכיל emotionally נייטרלי תוכן, או פעילות אחרת נייטרלי מבחינה רגשית בתקופה זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תקופה של 45 דקות ההמתנה, לנהל את התכונה מדינת מלאי חרדה להעריך מראש מתח וחרדה. 6 לחלופין, מכשירים אחרים אשר נועדו להעריך את השינויים המדינה מתח וחרדה, או הרפיה יכולה להינתן (למשל סולמות אנלוגית ויזואלית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף &quot;טרום לחץ&quot; מדגם רוק. הדריכו את המשתתף כדי לשטוף את הפה עם מים. תן משתתף סעיף 50-10 ס&quot;מ של קש לשתייה נקייה, בקבוקון חד פעמי פוליפרופילן 2.0 מ&quot;ל. הדריכו את המשתתף להטות את הראש שלהם קדימה כדי לאפשר רוק לבריכה על הרצפה של הפה ואז להעביר את הרוק דרך הקש לתוך הבקבוקון. איסוף כ 1.5-2.0 מ&quot;ל של רוק של המשתתף. לחלופין, רוק ניתן לאסוף באמצעות פתילה שיניים סופג (או חומר דומה) ואת המורה משתתף ללעוס או להרוות את החומר עם הרוק. אם possible, לעזוב את החדר על מנת לספק את המשתתף עם הפרטיות. לייבל ולאחסן את כל דגימות רוק -20 ° C בהקדם האפשרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיא של 5 דקות מראש מתח מדידות פיזיולוגיות. </li></ol> 3. TSST <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם אתה תהיה באמצעות חדר בראיון נפרד (כדי להגביר את ההשפעות של הלחץ TSST), להביא את המשתתף מחדר ההמתנה לחדר הראיון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל בהכנת TSST תקופת דיבור, לקרוא את התסריט הבא למשתתף: &quot;זו הכנה נאום חלק במשימה, אתם אל נפש להכין נאום של חמש דקות המתאר מדוע היית להיות מועמד טוב לתפקיד האידיאלי שלך. הנאום שלך יהיה בווידיאו ו נבדקות על ידי פאנל של שופטים מיומנים מבחינה ציבורית. יש לך עשר דקות להכין את הזמן שלך מתחיל עכשיו &quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיא מדידות פיזיולוגיות במהלך התקופה של 10 דקות הכנה הדיבור. הגדרת טיימר דיגיטלי 10 דקות ולעזוב את החדר. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 10 דקות, לחזור לחדר לבוש בחלוק מעבדה. קרא את התסריט הבא למשתתף: &quot;זהו חלק הדיבור של המשימה אתה לשאת נאום המתאר מדוע היית להיות מועמד טוב לתפקיד האידיאלי שלך אתה צריך לדבר על כל התקופה של חמש דקות את הזמן... הזמן שלך מתחיל עכשיו &quot;. מצלמת וידאו אביזר צריך להיות מופעל עכשיו, כדי להגדיל את הערכה / ביצועים מתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיא מדידות פיזיולוגיות במהלך התקופה של 5 דקות ביצועי דיבור. אם המשתתף מפסיק לדבר במהלך הנאום, לאפשר לו או לה לשתוק במשך 20 שניות. אם הוא או היא לא להמשיך לדבר, להנחות את המשתתפים להמשיך לדבר על ידי המורה להם: &quot;עדיין יש לך הזמן שנותר&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתום התקופה של 5 דקות ביצועי דיבור, לקרוא את התסריט הבא למשתתף: &quot;במהלך החלק של חמש דקות הסופי במתמטיקה של משימה זו תתבקשו ברצף כדי להפחית את מספר 13 מתוך 1022 תוכלו מילולית.ly דו&quot;ח התשובות שלך בקול רם, וכן יתבקש להתחיל מחדש מ 1022 אם זו טעות הוא עשה. . זמנך מתחיל עכשיו, &quot;אם המשתתף עושה טעות, הפקודה להם:&quot; זה לא נכון, נא להתחיל מחדש מ 1022 &quot;הגדרת טיימר דיגיטלי במשך 5 דקות.. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיא מדידות פיזיולוגיות במהלך התקופה של 5 דקות הביצועים במתמטיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף התקופה מתמטיקה הביצועים של TSST, לאסוף &quot;פוסט הלחץ&quot; מדגם רוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניהול שלאחר הלחץ Trait מדינת מלאי חרדה. </li></ol> 4. פוסט הלחץ שחזור מדידות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור המשתתפים אל חדר ההמתנה המקורי. במהלך תקופת ההחלמה הראשונה, להנחות את המשתתפים לחכות בנוחות במשך 20 דקות. הגדרת טיימר דיגיטלי 20 דקות ולעזוב את החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור אל חדר ההמתנה, לאחר 20 דקות לאסוף &quot;1 התאוששות&quot; דגימת רוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך תקופת ההחלמה השני, להדריך את המשתתף שוב לחכות בנוחות במשך 20 דקות. הגדרת טיימר דיגיטלי 20 דקות ולעזוב את החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור אל חדר ההמתנה, לאחר 20 דקות לאסוף &quot;2 התאוששות&quot; מדגם רוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדריכו את המשתתף כדי להשלים את &quot;התאוששות&quot; מדינת Trait מלאי חרדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתחקר את המשתתפים באשר לטבעו האמיתי של הניסוי. ליידע את המשתתף כי הביצועים שלהם לא נרשם וכי אין ניתוח של הדיבור שלהם או ביצועים מתמטיקה יתנהל. הסבר למשתתף כי עם משימות אשר הוצגו היו קשים מנשוא ואינן משקפות על כשרון של המשתתף או היכולת. </li></ol> 5. ניתוח נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לנתח אמצעים פסיכולוגיים, ציון כל Trait מדינת מלאי חרדה מלחץ מראש, שלאחר הלחץ והזמן נקודות שחזור. 6 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לנתח אמצעים פיזיולוגיים, לחשב ממוצע קצב הלב ציון עבור כל אחד 5 דקות &quot;מתח קדם&quot;, &quot;הכנת נאום&quot;, &quot;ביצועים נאום&quot; ו &quot;מATH &quot;תקופות של TSST. לחילופין, לחשב ממוצע ציונים עבור כל דקה של TSST או למדוד את קצב הלב בנקודות זמן בדידות במהלך TSST. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לנתח אמצעים נוירואנדוקריניים, דגימות הרוק assay ריכוז ההורמון באמצעות ערכות EIA זמינים מסחרית. </li></ol> 6 אופציונלי:. Assay נוספים הרוק קורטיזול Information Protocol (מועתק מ Salimetrics assay הרוק להכניס ערכת קורטיזול) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תביאו את כל ערכת ריאגנטים הרוק assay לטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן לשטוף המאגר בהתאם להוראות ערכת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קביעת פריסת צלחת 25 פיפטה μL של סטנדרטים שולטת לתוך בארות המתאים כפולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות רוק ההפשרה, וורטקס ו צנטריפוגות XG ב 1500 (@ 3000 RPM) במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 25 μL של נוזל צלול ממדגמים centrifuged לתוך בארות המתאים צלחת (בשני עותקים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן המצומד ו פיפטה אנזים 200 μL לתוך בארות כלל. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים בצלחת במשך 5 דקות ב 500 סל&quot;ד ו דגירה של 55 דקות נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הצלחת ואת כתם 4 פעמים עם חיץ לשטוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 200 tetramethylbenzidine μL (TMB) פתרון זה גם בעזרת פיפטה רב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את הצלחת במשך 5 דקות על 500 סל&quot;ד ו דגירה בחושך במשך 25 דקות נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 50 פתרון להפסיק μL היטב כל ומערבבים במשך 3 דקות על 500 סל&quot;ד להפסיק את התגובות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את תחתית צלחת נקייה ולקרוא את הצלחת הקורא צלחת ב 450 ננומטר בתוך 10 דקות של הוספת פתרון להפסיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לחשב את ריכוז הקורטיזול, לחשב את צפיפות אופטית הממוצע של כל בארות כפולים. הפחת את צפיפות אופטית הממוצע של הלא ספציפית בארות מחייב מן הצפיפות הממוצעת של אופטי הבקרה אפס, תקן בארות המדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את אחוז כבול (B / בו) עבור כל פקד רגיל, לדוגמה על ידי חלוקת צפיפות אופטית הממוצע של אלה בארות (ב &#39;) על ידי טועניםגיל צפיפות אופטית של בארות אפס (בו). קבע את הריכוז של הבקרות דגימות ידי אינטרפולציה באמצעות תוכנה המסוגלת ולוגיסטיקה. </li></ol> 7. נציג תוצאות: הנתונים המוצגים כאן נציג נערך מתוך סקירת ספרות ועל שני מחקרים שנערכו במעבדה שלנו בשעות אחר הצהריים עם משתתפים בוגרים ובריאים זכרים. נתונים אלה נועדו לייצג בערך את התוצאות אפשר למצוא באמצעות פרוטוקול המוצגים במאמר זה. זה פרוטוקול TSST (איור 1) גורם לעלייה בחרדה דיווח עצמי (כפי שהיא נמדדת מלאי Trait מדינת חרדה; איור 2), קצב הלב (איור 3), ריכוזי קורטיזול הרוק (איור 4). פרוטוקול הניסוי באיור 1 נועד לספק דוגמה אחת כיצד מדידות שונות יכול להיעשות במהלך הפעלת איסוף הנתונים עם TSST. העיתוי של measuremen<html> ts והכללה של אמצעים שונים יהיה מוכתב על ידי שאלת מחקר ספציפי. אם באמצעות התערבות שנועדה להפחית את החרדה ו / או תגובת הלחץ, מגביר קהה או נחלש ב צעדים אלה הם חזו. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3238/3238fig1.jpg" /> באיור 1. פרוטוקול הערה ניסויית: מבחן טרייר מתח חברתי (TSST); Trait מדינת מלאי חרדה (STAI); 5 דקות תקופת מתח קדם (PS); 10 דקות תקופת מתח מקדימה (הכנת נאום) (AS); 5 דקות תקופת דיבור. (S); 5 דקות תקופה מתמטיקה (M). <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3238/3238fig2.jpg" /> באיור 2. נציג חרדה עשרות המדינה. הערה: חרדה ציון המדינה לחשב 20-iten למדוד מצב של חרדה המלאי Trait חרדה המדינה (STAI) עשרות נציג משקפים הנתונים שנאספו במעבדה שלנו שפורסמו בספרות.. התחת = &quot;jove_content&quot;&gt; <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3238/3238fig3.jpg" /> באיור 3. נציג נתונים בקצב הלב הערה:.. קצב לב פעימות בדקה (BPM) נציג ערכים משקפים הנתונים שנאספו במעבדה שלנו שפורסמו בספרות. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/3238/3238fig4.jpg" /> איור 4. נציג נתונים קורטיזול הרוק הערה:.. ריכוז הקורטיזול UL / ד&quot;ל ערכים נציג משקפים הנתונים שנאספו במעבדה שלנו שפורסמו בספרות.

<ol>
	<li>Kudielka, B. M., Hellhammer, D. H., Kirschbaum, C., Harmon-Jones, E., Winkielman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ten+years+of+research+with+the+Trier+Social+Stress+Test+-+Revisited.">Ten years of research with the Trier Social Stress Test - Revisited.</a> Social Neuroscience: Integrating Biological and Psychological Explanations. , (2007).</li><li>Dickerson, S. S., Kemeny, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+stressors+and+cortisol+responses:+A+theoretical+integration+and+synthesis+of+laboratory+research.">Acute stressors and cortisol responses: A theoretical integration and synthesis of laboratory research.</a> Psychol. Bull. 130, 355-391 (2004).</li><li>Kirschbaum, C., Pirke, K., Hellhammer, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+"Trier+social+stress+test"+-+a+tool+for+investigating+psychobiological+stress+response+in+a+laboratory+setting.">The "Trier social stress test" - a tool for investigating psychobiological stress response in a laboratory setting.</a> Neuropsychobiology. 28, 76-81 (1993).</li><li>Gruenewald, T. L., Kemeny, M. E., Aziz, N., Fahey, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+threat+to+the+social+self:+shame,+social+self-esteem,+and+cortisol+activity.">Acute threat to the social self: shame, social self-esteem, and cortisol activity.</a> Psychosom. Med. 66, 915-924 (2004).</li><li>Mendes, W. B., Harmon-Jones, E., Beer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+autonomic+nervous+system+activity.">Assessing autonomic nervous system activity.</a> Methods in Social Neuroscience. , 118-147 (2009).</li><li>Spielberger, C. D., Gorsuch, R. L., Lushene, P. R., Vagg, P. R., Jacobs, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual for the State-Trait Anxiety Inventory (Form Y). , (1983).</li><li>Dawans, B. v. o. n., Kirschbaum, C., Heinrichs, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Trier+Social+Stress+Test+for+groups+(TSST-G):+A+new+research+tool+for+controlled+simultaneous+social+stress+exposure+in+a+group+format.">The Trier Social Stress Test for groups (TSST-G): A new research tool for controlled simultaneous social stress exposure in a group format.</a> Psychoneuroendocrinology. 36, 514-522 (2011).</li><li>Pace, T. W. W., Negi, L. T., Adame, D. D., Cole, S. P., Sivilli, T. I., Brown, T. D., Issa, M. J., Raison, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+compassion+meditation+on+neuroendocrine,+innate+immune+and+behavioral+responses+to+psychosocial+stress.">Effect of compassion meditation on neuroendocrine, innate immune and behavioral responses to psychosocial stress.</a> Psychoneuroendocrinology. 34, 87-98 (2010).</li><li>Kirschbaum, C., W&#252;rst, S., Hellhammer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistent+sex+differences+in+cortisol+responses+to+psychological+stress.">Consistent sex differences in cortisol responses to psychological stress.</a> Psychosom. Med. 54, 648-657 (1992).</li><li>Therrien, F., Drapeau, V., Lalonde, J., Lupien, S. J., Beaulieu, S., Dore, J., Tremblay, A., Richard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortisol+response+to+the+Trier+Social+Stress+Test+in+obese+and+reduced+obese+individuals.">Cortisol response to the Trier Social Stress Test in obese and reduced obese individuals.</a> Biol. Psychol. 84, 325-329 (2010).</li><li>W&#252;st, S., Entringer, S., Federenko, I. S., Schlotz, W., Hellhammer, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+weight+is+associated+with+salivary+cortisol+responses+to+psychosocial+stress+in+adult+life.">Birth weight is associated with salivary cortisol responses to psychosocial stress in adult life.</a> Psychoneuroendocrinology. 30, 591-598 (2005).</li><li>Simeon, D., Yehuda, R., Cunill, R., Knutelska, M., Putnam, F. W., Smith, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+associated+with+resilience+in+healthy+adults.">Factors associated with resilience in healthy adults.</a> Psychoneuroendocrinology. 32, 1149-1152 (2007).</li><li>Quirin, M., Pruessner, J. C., Kuhl, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HPA+system+regulation+and+adult+attachment+anxiety:+Individual+differences+in+reactive+and+awakening+cortisol.">HPA system regulation and adult attachment anxiety: Individual differences in reactive and awakening cortisol.</a> Psychoneuroendocrinology. 33, 581-590 (2009).</li><li>Pierrehumbert, B., Torrisi, R., Glatz, N., Dimitrova, N., Heinrichs, M., Halfon, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+attachment+on+perceived+stress+and+cortisol+response+to+acute+stress+in+women+sexually+abused+in+childhood+or+adolescence.">The influence of attachment on perceived stress and cortisol response to acute stress in women sexually abused in childhood or adolescence.</a> Psychoneuroendocrinology. 34, 924-938 (2009).</li><li>Fiocco, A. J., Joober, R., Lupien, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Education+modulates+cortisol+reactivity+to+the+Trier+Social+Stress+Test+in+middle-aged+adults.">Education modulates cortisol reactivity to the Trier Social Stress Test in middle-aged adults.</a> Psychoneuroendocrinology. 32, 1158-1163 (2007).</li><li>Oswald, L. M., Zandi, P., Nestadt, G., Potash, J. B., Kalaydjian, A. E., Wand, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+cortisol+responses+to+stress+and+personality.">Relationship between cortisol responses to stress and personality.</a> Neuropsychopharmacology. 31, 1583-1591 (2006).</li><li>Fries, E., Hellhammer, D. H., Hellhammer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuation+of+the+hypothalamic-pituitary-adrenal+axis+responsivity+to+the+Trier+Social+Stress+Test+by+the+benzodiazepine+alprazolam.">Attenuation of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis responsivity to the Trier Social Stress Test by the benzodiazepine alprazolam.</a> Psychoneuroendocrinology. 31, 1278-1288 (2006).</li><li>Kudielka, B. M., Fischer, J. E., Metzenthin, P., Helfricht, S., Preckel, D., von K&#228;nel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=No+effect+of+5-day+treatment+with+acetylsalicylic+acid+(aspirin)+or+the+beta-blocker+propranolol+(Inderal)+on+free+cortisol+responses+to+acute+psychosocial+stress:+A+randomized+double-blind,+placebo-controlled+study.">No effect of 5-day treatment with acetylsalicylic acid (aspirin) or the beta-blocker propranolol (Inderal) on free cortisol responses to acute psychosocial stress: A randomized double-blind, placebo-controlled study.</a> Neuropsychobiology. 56, 159-166 (2007).</li><li>Gaab, J., Bl&#228;ttler, N., Menzl, T., Pabst, B., Stoyer, S., Ehlert, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+controlled+evaluation+of+the+effects+of+cognitive-behavioral+stress+management+on+cortisol+responses+to+acute+stress+in+healthy+subjects.">Randomized controlled evaluation of the effects of cognitive-behavioral stress management on cortisol responses to acute stress in healthy subjects.</a> Psychoneuroendocrinology. 28, 767-779 (2003).</li><li>Khalfa, S., Bella, S. D., Roy, M., Peretz, I., Lupien, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+relaxing+music+on+salivary+cortisol+level+after+psychological+stress.">Effects of relaxing music on salivary cortisol level after psychological stress.</a> Ann. NY Acad. Sci. 999, 374-376 (2003).</li><li>Balodis, I. M., Wynne-Edwards, K. E., Olmstead, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+other+side+of+the+curve:+Examining+the+relationship+between+pre-stressor+physiological+responses+and+stress+reactivity.">The other side of the curve: Examining the relationship between pre-stressor physiological responses and stress reactivity.</a> Psychoneuroendocrinology. 35, 1363-1373 (2010).</li><li>Shultheiss, O. C., Stanton, S. J., Harmon-Jones, E., Beer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+salivary+hormones.">Assessment of salivary hormones.</a> Methods in Social Neuroscience. , 17-44 (2009).</li><li>Kudielka, B. M., Hellhammer, D. H., W&#252;st, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+do+we+respond+so+differently?+Reviewing+determinants+of+human+salivary+cortisol+responses+to+challenge.">Why do we respond so differently? Reviewing determinants of human salivary cortisol responses to challenge.</a> Psychoneuroendocrinology. 34, 2-18 (2009).</li><li>Buske-Kirschbaum, A., Jobst, S., Wustmans, A., Kirschbaum, C., Rauh, W., Hellhammer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuated+free+cortisol+response+to+psychosocial+stress+in+children+with+atopic+dermatitis.">Attenuated free cortisol response to psychosocial stress in children with atopic dermatitis.</a> Psychosom. Med. 59, 419-426 (1997).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

במאמר זה, הראינו איך לנהל את מבחן חברתי טרייר מתח מתנדב בריא. TSST היא גורם לחץ במעבדה סטנדרטית חברתי שגורם מגביר חזק ואמין, אמצעים פסיכולוגיים פיזיולוגיים נוירואנדוקריניים. TSST היא אלטרנטיבה יעילה לחצים פיזיים כאלה במבחן הגהץ קר או הליכה על הליכון, ואת משחזרת את הלחץ ה?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם הציוד / אספקה </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th></tr><tr><td> מנהלת הליגה בפסיכו מערכת Mac OS כולל יחידת נתונים MP36 רכישת שלוש אלקטרודות א.ק. להוביל </td><td> BioPac מערכות בע&quot;מ </td><td> BSLPSY-M </td></tr><tr><td> Trait מדינת מלאי חרדה </td><td> Mind גן, Inc </td><td> מתון-B </td></tr><tr><td> קורטיזול הרוק אנזימים חיסונית ערכת Assay </td><td> Salimetrics </td><td> 1-3002 </td></tr><tr><td> 2.0 מ&quot;ל פוליפרופילן בקבוקונים </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 05 40B 146 </td></tr><tr><td> BioRad microplate Reader, דגם 680, עם תוכנת מנהל microplate </td><td> BioRad </td><td> פלייט Reader: 168 1000 תוכנה: 1706800 </td></tr></tbody></table>

the trier social stress test protocol for inducing psychological stress

מאמר זה מדגים פרוטוקול לחץ פסיכולוגי לשימוש במעבדה הגדרה. הפרוטוקולים המאפשרים לחוקרים ללמוד את מסלולים ביולוגיים של התגובה ללחץ בריאות ומחלה הם בסיסי להתקדמות המחקר מתח וחרדה. 1 למרות פרוטוקולים רבים קיימים גרימת תגובת הלחץ במעבדה, הזנחה רבות כדי לספק בהקשר נטורליסטי או לשלב היבטים של לחץ חברתי ופסיכולוגי. הפרוטוקולים לחץ פסיכולוגי, מטא אנליזה עולה כי מבחן הלחץ החברתי טרייר (TSST) הוא פרוטוקול סטנדרטי שימושי ביותר ומתאים למחקרים של תגובתיות הורמון הלחץ. 2 בתיאור המקורי של TSST, החוקרים ביקשו להעריך עיצוב הליך מסוגל גרימת תגובת הלחץ אמין ברוב המכריע של מתנדבים בריאים. 3 חוקרים אלה מצאו הגבהים בקצב הלב, לחץ דם ומתח האנדוקרינית מספר מ &#39;arkers בתגובה TSST (א מלחץ פסיכולוגי) לעומת הזרקת מי מלח (הלחץ הגופני). 3 למרות TSST שונתה כדי לענות על הצרכים של קבוצות מחקר שונות, זה בדרך כלל מורכב תקופת המתנה עם הגעתו, דיבור מקדימה , הכנת נאום ביצועים, ביצועים מילולית בחשבון תקופות, ואחריו אחד או יותר תקופות התאוששות. TSST מחייב את המשתתפים להכין נאום, ולאחר מילולית להגיב לבעיה חשבון מאתגר בנוכחות קהל הערכה חברתית. 3 הערכה uncontrollability חברתיות זוהו רכיבי מפתח של אינדוקציה הלחץ על ידי TSST. 4 בשימוש יותר מעשור, את היעד של TSST היא באופן שיטתי לגרום תגובת הלחץ כדי למדוד הבדלים חרדה תגובתיות, והפעלה של הציר (SAM) ההיפותלמוס, יותרת המוח, יותרת הכליה (HPA) או אוהד, יותרת הכליה, מדולרי במהלך המשימה 1. Researcשלה בדרך כלל להעריך את השינויים חרדה דיווח עצמי, מדדים פיזיולוגיים (כגון קצב הלב), ו / או מדדי נוירואנדוקריניים (למשל, את הקורטיזול, הורמון דחק) בתגובה TSST. חוקרים רבים אימצו דגימת הרוק עבור סמנים מתח כגון קורטיזול אלפא עמילאז (סמן של הפעלת מערכת העצבים האוטונומית) כחלופה דגימת דם כדי להפחית את הלחץ של בלבול דם אוסף טכניקות. בנוסף לשינויים העוברים על הפרט השלמת TSST, החוקרים יכולים להשוות את השינויים בין קבוצות הטיפול השונות (למשל קליני לעומת דגימות בקרה בריא) או את היעילות של התערבויות להפחתת הלחץ. 1

Watch this Scientific Journal Video about The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress at JoVE.com

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

מאמר זה מתאר את פרוטוקול עבור גרימת לחץ פסיכולוגי בקרב המשתתפים, אשר מאפשר לחוקרים למדוד פסיכולוגי, תגובות פיזיולוגיות נוירואנדוקריניים להדגיש בתוך משתתפים בודדים או בין קבוצות.

מבחן הלחץ החברתי טרייר פרוטוקול גרימת לחץ פסיכולוגי

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

the-trier-social-stress-test-protocol-for-inducing-psychological

Research

JoVE Journal

Medicine

55.6K Views.  Northern Arizona University. מאמר זה מתאר את פרוטוקול עבור גרימת לחץ פסיכולוגי בקרב המשתתפים, אשר מאפשר לחוקרים למדוד פסיכולוגי, תגובות פיזיולוגיות נוירואנדוקריניים להדגיש בתוך משתתפים בודדים או בין קבוצות.

Video: The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

Using Visual and Narrative Methods to Achieve Fair Process in Clinical Care

The Institute of Medicine has targeted patient-centeredness as an important area of quality improvement. A major dimension of patient-centeredness is respect for patient's values, preferences, and expressed needs. Yet specific approaches to gaining this understanding and translating it to quality care in the clinical setting are lacking. From a patient perspective quality is not a simple concept but is best understood in terms of five dimensions: technical outcomes; decision-making efficiency; amenities and convenience; information and emotional support; and overall patient satisfaction. Failure to consider quality from this five-pronged perspective results in a focus on medical outcomes, without considering the processes central to quality from the patient's perspective and vital to achieving good outcomes. In this paper, we argue for applying the concept of fair process in clinical settings. Fair process involves using a collaborative approach to exploring diagnostic issues and treatments with patients, explaining the rationale for decisions, setting expectations about roles and responsibilities, and implementing a core plan and ongoing evaluation. Fair process opens the door to bringing patient expertise into the clinical setting and the work of developing health care goals and strategies. This paper provides a step by step illustration of an innovative visual approach, called photovoice or photo-elicitation, to achieve fair process in clinical work with acquired brain injury survivors and others living with chronic health conditions. Applying this visual tool and methodology in the clinical setting will enhance patient-provider communication; engage patients as partners in identifying challenges, strengths, goals, and strategies; and support evaluation of progress over time. Asking patients to bring visuals of their lives into the clinical interaction can help to illuminate gaps in clinical knowledge, forge better therapeutic relationships with patients living with chronic conditions such as brain injury, and identify patient-centered goals and possibilities for healing. The process illustrated here can be used by clinicians, (primary care physicians, rehabilitation therapists, neurologists, neuropsychologists, psychologists, and others) working with people living with chronic conditions such as acquired brain injury, mental illness, physical disabilities, HIV/AIDS, substance abuse, or post-traumatic stress, and by leaders of support groups for the types of patients described above and their family members or caregivers.

This paper illustrates an innovative visual approach (photovoice or photo-elicitation) to achieve fair process in clinical care for patients living with chronic health conditions, illuminate gaps in clinical knowledge, forge better therapeutic relationships, and identify patient-centered goals and possibilities for healing.

באמצעות שיטות חזותית הנרטיב להשגת הליך הוגן בטיפול קליני

The Institute of Medicine has targeted patient-centeredness as an important area of quality improvement. A major dimension of patient-centeredness is ...

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our understanding of the mechanisms underlying parkinsonian symptoms, since it recapitulates the changes in basal ganglia circuitry and pharmacology observed in parkinsonian patients1-4. However, the precise cellular and molecular changes occurring at cortico-striatal synapses of the output pathways within the striatum, which is the major input region of the basal ganglia remain elusive, and this is believed to be site where pathological abnormalities underlying parkinsonian symptoms arise3,5.
In PD, understanding the mechanisms underlying changes in basal ganglia circuitry following degeneration of the nigro-striatal pathway has been greatly advanced by the development of bacterial artificial chromosome (BAC) mice over-expressing green fluorescent proteins driven by promoters specific for the two striatal output pathways (direct pathway: eGFP-D1; indirect pathway: eGFP-D2 and eGFP-A2a)8, allowing them to be studied in isolation. For example, recent studies have suggested that there are pathological changes in synaptic plasticity in parkinsonian mice9,10. However, these studies utilised juvenile mice and acute models of parkinsonism. It is unclear whether the changes described in adult rats with stable 6-OHDA lesions also occur in these models. Other groups have attempted to generate a stable unilaterally-lesioned 6-OHDA adult mouse model of PD by lesioning the medial forebrain bundle (MFB), unfortunately, the mortality rate in this study was extremely high, with only 14% surviving the surgery for 21 days or longer11. More recent studies have generated intra-nigral lesions with both a low mortality rate &gt;80% loss of dopaminergic neurons, however expression of L-DOPA induced dyskinesia11,12,13,14 was variable in these studies. Another well established mouse model of PD is the MPTP-lesioned mouse15. Whilst this model has proven useful in the assessment of potential neuroprotective agents16, it is less suitable for understanding mechanisms underlying symptoms of PD, as this model often fails to induce motor deficits, and shows a wide variability in the extent of lesion17, 18.
Here we have developed a stable unilateral 6-OHDA-lesioned mouse model of PD by direct administration of 6-OHDA into the MFB, which consistently causes &gt;95% loss of striatal dopamine (as measured by HPLC), as well as producing the behavioural imbalances observed in the well characterised unilateral 6-OHDA-lesioned rat model of PD. This newly developed mouse model of PD will prove a valuable tool in understanding the mechanisms underlying generation of parkinsonian symptoms.

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson&#039;s Disease

A protocol for performing unilateral 6-OHDA lesions of the medial forebrain bundle in mice is described. This method has a low mortality rate (13.3 %) with 89% of the surviving animals showing &#62;95% loss of striatal dopamine and 90.63&#177;-4.02 % ipsiversive rotational bias towards the side of the lesion.

פיתוח מודל חד צדדי, lesioned מאוס 6-OHDA של מחלת פרקינסון

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Implantation of a Carotid Cuff for Triggering Shear-stress Induced Atherosclerosis in Mice

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce atherosclerosis (reviewed in 1 and 2). The role of shear stress has been extensively studied in vitro investigating the influence of flow dynamics on cultured endothelial cells 1,3,4 and in vivo in larger animals and humans 1,5,6,7,8. However, highly reproducible small animal models allowing systematic investigation of the influence of shear stress on plaque development are rare. Recently, Nam et al. 9 introduced a mouse model in which the ligation of branches of the carotid artery creates a region of low and oscillatory flow. Although this model causes endothelial dysfunction and rapid formation of atherosclerotic lesions in hyperlipidemic mice, it cannot be excluded that the observed inflammatory response is, at least in part, a consequence of endothelial and/or vessel damage due to ligation.
In order to avoid such limitations, a shear stress modifying cuff has been developed based upon calculated fluid dynamics, whose cone shaped inner lumen was selected to create defined regions of low, high and oscillatory shear stress within the common carotid artery 10. By applying this model in Apolipoprotein E (ApoE) knockout mice fed a high cholesterol western type diet, vascular lesions develop upstream and downstream from the cuff. Their phenotype is correlated with the regional flow dynamics 11 as confirmed by in vivo Magnetic Resonance Imaging (MRI) 12: Low and laminar shear stress upstream of the cuff causes the formation of extensive plaques of a more vulnerable phenotype, whereas oscillatory shear stress downstream of the cuff induces stable atherosclerotic lesions 11. In those regions of high shear stress and high laminar flow within the cuff, typically no atherosclerotic plaques are observed.
 
In conclusion, the shear stress-modifying cuff procedure is a reliable surgical approach to produce phenotypically different atherosclerotic lesions in ApoE-deficient mice.

The constricting cuff presented in this article is designed to induce atherosclerosis in the murine common carotid artery. Due to the conical shape of its inner lumen the implanted cuff generates well-defined regions of low, high and oscillatory shear stress triggering the development of atherosclerotic lesions of different inflammatory phenotypes.

השרשה של קאף הראש מפעילה שאר מתח טרשת עורקים המושרה עכברים

It is widely accepted that alterations in vascular shear stress trigger the expression of inflammatory genes in endothelial cells and thereby induce ...

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

סמנים ביולוגיים במודל חיה לחשיפה קושרת עצבית, המטולוגית, והתנהגות של PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Cardiac Stress Test Induced by Dobutamine and Monitored by Cardiac Catheterization in Mice

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the arteries (&beta;2). When systemically administered, it increases cardiac demand. Thus, dobutamine unmasks abnormal rhythm or ischemic areas potentially at risk of infarction. 
Monitoring of heart function during a cardiac stress test can be performed by either ecocardiography or cardiac catheterization. The latter is an invasive but more accurate and informative technique that the former.
Cardiac stress test induced by dobutamine and monitored by cardiac catheterization accomplished as described here allows, in a single experiment, the measurement of the following hemodynamic parameters: heart rate (HR), systolic pressure, diastolic pressure, end-diastolic pressure, maximal positive pressure development (dP/dtmax) and maximal negative pressure development (dP/dtmin), at baseline conditions and under increasing doses of dobutamine.
As expected, in normal mice we observed a dobutamine dose-related increase in HR, dP/dtmax and dP/dtmin. Moreover, at the highest dose tested (12 ng/g/min) the cardiac decompensation of high fat diet-induced obese mice was unmasked.

We describe the protocol to perform a cardiac stress test induced by dobutamine and monitored by cardiac catheterization in normal mice. Also we show its application to unmask subclinical cardiac disease in high fat diet-induced obese mice.

בדיקת מאמץ לב הנגרמת על ידי Dobutamine ופיקוח על ידי צנתור בעכברים

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the ...

Reduction in Left Ventricular Wall Stress and Improvement in Function in Failing Hearts using Algisyl-LVR

Injection of Algisyl-LVR, a treatment under clinical development, is intended to treat patients with dilated cardiomyopathy. This treatment was recently used for the first time in patients who had symptomatic heart failure. In all patients, cardiac function of the left ventricle (LV) improved significantly, as manifested by consistent reduction of the LV volume and wall stress. Here we describe this novel treatment procedure and the methods used to quantify its effects on LV wall stress and function.
Algisyl-LVR is a biopolymer gel consisting of Na+-Alginate and Ca2+-Alginate. The treatment procedure was carried out by mixing these two components and then combining them into one syringe for intramyocardial injections. This mixture was injected at 10 to 19 locations mid-way between the base and apex of the LV free wall in patients.
Magnetic resonance imaging (MRI), together with mathematical modeling, was used to quantify the effects of this treatment in patients before treatment and at various time points during recovery. The epicardial and endocardial surfaces were first digitized from the MR images to reconstruct the LV geometry at end-systole and at end-diastole. Left ventricular cavity volumes were then measured from these reconstructed surfaces.
Mathematical models of the LV were created from these MRI-reconstructed surfaces to calculate regional myofiber stress. Each LV model was constructed so that 1) it deforms according to a previously validated stress-strain relationship of the myocardium, and 2) the predicted LV cavity volume from these models matches the corresponding MRI-measured volume at end-diastole and end-systole. Diastolic filling was simulated by loading the LV endocardial surface with a prescribed end-diastolic pressure. Systolic contraction was simulated by concurrently loading the endocardial surface with a prescribed end-systolic pressure and adding active contraction in the myofiber direction. Regional myofiber stress at end-diastole and end-systole was computed from the deformed LV based on the stress-strain relationship.

This article describes procedures for implanting a novel hydrogel in failing hearts and quantifying its effect on left ventricular wall stress and function. These procedures have been successfully applied in dogs and humans.

ירידה במתח וול חדר שמאלי ושיפור בתפקוד בכישלון לבבות באמצעות Algisyl-LVR

Injection of  Algisyl-LVR, a treatment under clinical development, is intended to treat  patients with dilated cardiomyopathy. This treatment was recently ...

A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies

Surgical resection is an essential treatment for most cancer patients, but surgery induces dysfunction in the immune system and this has been linked to the development of metastatic disease in animal models and in cancer patients. Preclinical work from our group and others has demonstrated a profound suppression of innate immune function, specifically NK cells in the postoperative period and this plays a major role in the enhanced development of metastases following surgery. Relatively few animal studies and clinical trials have focused on characterizing and reversing the detrimental effects of cancer surgery. Using a rigorous animal model of spontaneously metastasizing tumors and surgical stress, the enhancement of cancer surgery on the development of lung metastases was demonstrated. In this model, 4T1 breast cancer cells are implanted in the mouse mammary fat pad. At day 14 post tumor implantation, a complete resection of the primary mammary tumor is performed in all animals. A subset of animals receives additional surgical stress in the form of an abdominal nephrectomy. At day 28, lung tumor nodules are quantified. When immunotherapy was given immediately preoperatively, a profound activation of immune cells which prevented the development of metastases following surgery was detected. While the 4T1 breast tumor surgery model allows for the simulation of the effects of abdominal surgical stress on tumor metastases, its applicability to other tumor types needs to be tested. The current challenge is to identify safe and promising immunotherapies in preclinical mouse models and to translate them into viable perioperative therapies to be given to cancer surgery patients to prevent the recurrence of metastatic disease.

A mouse tumor model of surgical stress is used to explore how postoperative immune suppression promotes metastatic disease and to evaluate immunostimulatory perioperative therapies.

מודל גידול מאוס של מתח כירורגי כדי לחקור את המנגנונים של דיכוי מערכת חיסוני לאחר ניתוח והערכת immunotherapies Perioperative רומן

Surgical resection is an essential treatment for most cancer patients, but surgery induces dysfunction in the immune system and this has been linked to ...

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

Blood serum serves as a chemoattractant towards which cancer cells migrate and invade, facilitating their intravasation into microvessels. However, the actual molecules towards which the cells migrate remain elusive. This modified invasion assay has been developed to identify targets which drive cell migration and invasion. This technique compares the invasion index under three conditions to determine whether a specific hormone, growth factor, or cytokine plays a role in mediating the invasive potential of a cancer cell. These conditions include i) normal fetal bovine serum (FBS), ii) charcoal-stripped FBS (CS-FBS), which removes hormones, growth factors, and cytokines and iii) CS-FBS + molecule (denoted &#8220;X&#8221;). A significant change in cell invasion with CS-FBS as compared to FBS, indicates the involvement of hormones, cytokines or growth factors in mediating the change. Individual molecules can then be added back to CS-FBS to assay their ability to reverse or rescue the invasion phenotype. Furthermore, two or more factors can be combined to evaluate the additive or synergistic effects of multiple molecules in driving or inhibiting invasion. Overall, this method enables the investigator to determine whether hormones, cytokines, and/or growth factors play a role in cell invasion by serving as chemoattractants or inhibitors of invasion for a particular type of cancer cell or a specific mutant. By identifying specific chemoattractants and inhibitors, this modified invasion assay may help to elucidate signaling pathways that direct cancer cell invasion.

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

This video article describes a modified in vitro method to examine the role of hormones, cytokines and/or growth factors in driving cancer cell invasion.

השתנה<em&gt; במבחנה</em&gt; פלישת Assay כדי לקבוע את התפקיד הפוטנציאלי של הורמונים, ציטוקינים ו / או גורמי גדילה בפלישת תאי הסרטן המתווך

Blood serum serves as a chemoattractant towards which cancer cells migrate and invade, facilitating their intravasation into microvessels. However, the ...

Glutamate and Hypoxia as a Stress Model for the Isolated Perfused Vertebrate Retina

Neuroprotection has been a strong field of investigation in ophthalmological research in the past decades and affects diseases such as glaucoma, retinal vascular occlusion, retinal detachment, and diabetic retinopathy. It was the object of this study to introduce a standardized stress model for future preclinical therapeutic testing.
Bovine retinas were prepared and perfused with an oxygen saturated standard solution, and the ERG was recorded. After recording stable b-waves, hypoxia (pure N2) or glutamate stress (250 &#181;m glutamate) was exerted for 45 min. To investigate the effects on photoreceptor function alone, 1 mM aspartate was added to obtain a-waves. ERG-recovery was monitored for 75 min.
For hypoxia, a decrease in a-wave amplitude of 87.0% was noted (p &#60;0.01) after an exposition time of 45 min (decrease of 36.5% after the end of the washout p = 0.03). Additionally, an initial decrease in b-wave amplitudes of 87.23% was recorded, that reached statistical significance (p &#60;0.01, decrease of 25.5% at the end of the washout, p = 0.03).
For 250 &#181;m glutamate, an initial 7.8% reduction of a-wave amplitudes (p &#62;0.05) followed by a reduction of 1.9% (p &#62;0.05). A reduction of 83.7% of b-wave amplitudes (p &#60;0.01) was noted; after a washout of 75 min the reduction was 2.3% (p = 0.62). In this study, a standardized stress model is presented that may be useful to identify possible neuroprotective effects in the future.

With this study, we introduce a standardized stress model for the isolated superfused bovine retina for future preclinical therapeutic testing. The effect of either hypoxia (pure N2) or glutamate stress (250 &#181;M glutamate) on retinal function represented by a- and b-wave amplitudes was evaluated.

גלוטמט והיפוקסיה כמודל מתח לperfused חוליות הרשתית מבודדת

Neuroprotection has been a strong field of investigation in ophthalmological research in the past decades and affects diseases such as glaucoma, retinal ...

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Oxidative stress plays a critical role in several degenerative diseases, including age-related macular degeneration (AMD), a pathology that affects ~30 million patients worldwide. It leads to a decrease in retinal pigment epithelium (RPE)-synthesized neuroprotective factors, e.g., pigment epithelium-derived factor (PEDF) and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), followed by the loss of RPE cells, and eventually photoreceptor and retinal ganglion cell (RGC) death. We hypothesize that the reconstitution of the neuroprotective and neurogenic retinal environment by the subretinal transplantation of transfected RPE cells overexpressing PEDF and GM-CSF has the potential to prevent retinal degeneration by mitigating the effects of oxidative stress, inhibiting inflammation, and supporting cell survival. Using the Sleeping Beauty transposon system (SB100X) human RPE cells have been transfected with the PEDF and GM-CSF genes and shown stable gene integration, long-term gene expression, and protein secretion using qPCR, western blot, ELISA, and immunofluorescence. To confirm the functionality and the potency of the PEDF and GM-CSF secreted by the transfected RPE cells, we have developed an in vitro assay to quantify the reduction of H2O2-induced oxidative stress on RPE cells in culture. Cell protection was evaluated by analyzing cell morphology, density, intracellular level of glutathione, UCP2 gene expression, and cell viability. Both, transfected RPE cells overexpressing PEDF and/or GM-CSF and cells non-transfected but pretreated with PEDF and/or GM-CSF (commercially available or purified from transfected cells) showed significant antioxidant cell protection compared to non-treated controls. The present H2O2-model is a simple and effective approach to evaluate the antioxidant effect of factors that may be effective to treat AMD or similar neurodegenerative diseases.

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

We present a protocol for the development and use ofan oxidative stress-model by treating retinal pigment epithelial cells with H2O2, analyzing cell morphology, viability, density, glutathione, and UCP-2 level. It is a useful model to investigate the antioxidant effect of proteins secreted by transposon-transfected cells to treat neuroretinal degeneration.

אינדוקציה וניתוח של עקה חמצונית ב היפהפייה הנרדמת טרנספוסון-transposon-transfected תאי אפיתל פיגמנט רשתית אנושית

Oxidative stress plays a critical role in several degenerative diseases, including age-related macular degeneration (AMD), a pathology that affects ~30 ...