이 원고 및 비디오 제작은 보건 부여 R15의 약물 남용 / 국립 연구소 DA016285 - 02, 신경 과학 이니셔티브에있는 웨스턴 워싱턴 대학 바이오 메디컬 연구 활동에 국립 연구소, 그리고 웨스턴 워싱턴 대학에 의해 지원되었다.

1. 동물 과목 <ol><li> 남자 장기 에반스의 쥐이 연구의 시작 3 개월입니다. 쥐 웨스턴 워싱턴 대학 동식물 사육장에서 자란 (길로이, 캘리포니아, 미국) 시몬 슨 - 파생되며 Purina 밀 주식 Mazuri의 설치류 동반한 (회색 회담과 12 - H 역방향 주 / 야주기 (0700에서 꺼주)에 개별적으로 보관되어 아르 , MO, 미국)와 물 사용 가능한 광고 libitum. </li><li> 모든 교육 및 시험은 항상 훈련 매일 같은 시간에 테스트 쥐의 동료와 함께 0900-1300 사이에 일어난 일입니다. </li><li> 쥐은 연구 기간 동안 매주 월요일, 수요일, 그리고 금요일 무게입니다. </li><li> 훈련 단계 즉시 이전, 쥐가은 훈련의 첫날 자당 자기 관리를 장려하기 위해 약 20 H 물의 박탈됩니다. </li></ol> 2. 행동 절차 모든 operant 행동 절차는 표준 operant 조절 챔버 (클럽메드 어소 주식 회사, 세인트 Albans를 사용하여각 operant 조절 챔버 상단에있는 주입 펌프 (Razel 과학 인 스트 루먼트, 세인트 Albans, VT, 미국)과 VT, 미국). Operant 컨디셔닝 야근이로 묶어 사운드 attenuating 환기 팬과 캐비닛 (웨스턴 워싱턴 대학, 미국). 모든 실험 조건 및 데이터 수집은 클럽메드 PC IV 소프트웨어 (클럽메드 어소 주식 회사, 세인트 Albans, VT, 미국)에 의해 제어됩니다. Operant 컨디셔닝 챔버 스는 (30 X 20 X 24cm) 2 레버 (고정 하나는 개폐식 하나), 톤 발생기, 개폐식 레버 위에 하얀 자극 라이트 및 반대 벽면에 빨간 집 라이트가 포함되어 있습니다. 주입 펌프는 활성 레버의 오른쪽에 보상 콘센트로 자당을 제공합니다. 레버는 그리드 바닥에서 10cm입니다. 네 적외선 photobeams 각 챔버를 열십자. 전면 빔은 측면 벽에에서 각 10.5 cm이며, 측면은 측면 벽에에서 각 6cm를 빔. 각각의 빔은 스테인레스 스틸 바 층 이상 4.5 cm입니다. 빔완전한 휴식의 개수를 카운트로 설정 중입니다. 빔 휴식의 총수는 교육 및 갈망 테스트 중에 기록됩니다. 이전에 최초의 교육 세션에 물을 제한의 예외로, 쥐가는 홈 케이지와 operant 조절 실에서 모두 음식과 물을 광고 libitum를 제공하고 있습니다. 챔버 스는 동식물 사육장과 마찬가지로, 반대로 가벼운주기에, 전용 테스트 실에 있습니다. 쥐는 빛의 차단 섬유로 덮여있다 카트 방 사이 홈 케이지에 수송됩니다. 각 세션이 끝날 때, 쥐가 집에 연습장에 반환됩니다. 교육, 강제 금욕, 그리고 시험 : 전형적인 실험을 세 단계가 있습니다. 테스트 세션했었습니다의 갈망이 부과됩니다. 우리는 연구에 따라 두 개의 일반적인 시험 절차에 갈망을 평가합니다. 이 두 절차는 섹션 2.3.1과 2.3.2에 설명되어 있습니다. <ol><li> 훈련 <ol><li> 전형적인 실험에서는 쥐가를위한 H / 2 일 지출그들이 레버의 오른쪽에있는 소켓에 10 % 자당 솔루션의 0.2 ML 배달 개폐식 (활성) 레버를 눌러 허용하는 operant 조절 실에서 10 일 연속. </li><li> 이 응답은 또한 톤 (2 kHz에서, 주위 소음을 15dB 이상)과 흰색 빛으로 구성된 복합 자극을 활성화한다. 복합 자극은 5의 지속과 활성 레버에 프레스가 기록하지만 프로그램 결과가 없습니다되는 동안, 40의 시간에 의해 다음이다. </li><li> 비활성 (정지) 레버에 대한 답변은 프로그램 결과가 없습니다,하지만 프레스가 기록됩니다. 빔 휴식의 번호는 교육 및 테스트 중에 기록됩니다. 모든 반응과 전위의 측정은 시간 코스 (이분 방식)으로 기록하지만, 일반적으로 세션 당 합계로보고됩니다. </li></ol></li><li> 강제 금욕. 쥐 강제 금욕의 기간 동안 홈 케이지에 남아 있습니다. 우리가 사용하는 일반적인 강제 금욕 기간이 일을 쥐가 테스트를해야하는 건가요즉시 교육 (강제 금욕의 날 30)의 마지막 날 다음 마지막 연수 일 (강제 금욕의 1 일) 또는 30 일 전자 날. </li><li> 테스트 <ol><li> 단서없이 멸종. 이 테스트 절차에서 쥐가 먼저 반응 결과 및 세션 기간도없는 것을 제외하고 교육하기 위해 동일한 조건에서 활성 레버를 눌러 허용하는 것은 한 H. 있습니다 쥐 시험 당일에 이러한 멸종 세션 최소 6 경험을 할 수 있습니다. 각 멸종 세션은 활성 레버가 철회되고 집안 조명이 꺼져 5 분 시대로 구분됩니다. &quot;멸종&quot;는 반응 활성 레버가 20 명 미만 프레스 / H.로 축소되어있다면이 표시됩니다 일부 쥐들이은 7 번째 세션을 필요로합니다. 다음 세션 (다른 5 분 지연 후) 쥐 그러면 음색에 대한 언론 수있는 테스트 세션 + 초기 훈련 기간 동안 자당의 각 배달와 결합했습니다 밝은 신호이다. </li><li> 단서와 함께 멸종. 이 생략에D 테스트 절차, 쥐 그 자당이 전달되지 제외하고 교육하기 위해 동일한 조건에서 활성 레버를 눌러 사용할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 누르면 비활성 레버는 레버 차별의 측정으로 사용됩니다. 그것은 아닌 특정 모터 활성의 측정으로 사용, photobeam 나누기와 함께도있다. Motoric 대 동기 변화가 갈망하는 동작의 해석을 복잡. 응답 비활성 레버와 photobeam 휴식 데이터 (예 : 7 자당 또는 다른 음식에 대한 높은 비율로 응답 쥐가 잠재적인 갈망에 영향을 미치는 화합물과 도전 아르 약리 연구에 비교 그룹이 같이 갈망하는 모터 대 동기 기여를 명확히에 유용 8). </li></ol> 3. 대표 노는 강제 금욕의 가변 기간 이후 자당의 갈망에 영향을 여기에서 설명한 일반적인 방법은 행동과 신경 생물학 determina을 탐사하는 방법을 제공한다강제 금단의 변수 기간 이후에 갈망의 국세청. 섹션 4에서 제공하는 대표 결과에 관한 방법은 여기에 설명되어 있습니다. <ol><li> 포만. 일부 쥐들이 바로 전에 테스트 8 17 H 위해 홈 케이지의 10 % 자당 병을 받았습니다. 본 연구에서는 쥐는 단서 절차없이 소멸을 사용하여 테스트되었습니다. </li><li> 환경 강화. 기타가 대형으로 이동하는 동안 강제 금욕 기간 동안 일부 쥐들이 개별 주택 (컨트롤)에 남아 (36 &quot;폭 X 20&quot;깊이 X 40 &quot;높이; 품질 케이지 제품, 포틀랜드, OR, 미국) 3 동료와 케이지 (농축). 농축 동물 PVC 튜브를 포함하여 자신의 환경에서 여러 가지 장난감을했고 또한 새로운 장난감마다 M, W, F 10 제공되었습니다. 본 연구에서는 쥐가 단서 절차없이 소멸을 사용하여 테스트되었습니다. </li><li> 약리 도전한다. 시험 당일에 쥐가 도파민 D1 길항제 SCH 23390의 복용과 pretreated되었습니다. 이 연구의 WER 쥐E는 단서 절차와 멸종을 사용하여 테스트했습니다. </li></ol> 4. 대표 결과 : <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig1.jpg" /> 그림 자당의 갈망 실험의 부화 1 대표 교육 및 테스트 데이터입니다. 데이터 포인트 수단 ± 전문가, 대리인을 나타냅니다. 그림 1A에 대한 그룹 크기는 77 쥐가하고 그림에 대한 1B 그룹 크기는 그룹당 11-12에서였다. 1 일 그룹, P &lt;0.05에서 * 상당한 차이. 이 수치는 스프링어의 허가를 8 데이터에서 적응됩니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig2.jpg" /> 강제 금단의 1 개 또는 30 일 후에 자당의 갈망에 대한 자당의 포만 2 효과 그림. 그룹 크기는 8-9 당 그룹입니다. 1 일 그룹, 제어 그룹, P &lt;0.05에서 † 상당한 차이에서 * 상당한 차이. 이 수치는 적응됩니다Elsevier의 허가 9. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig3.jpg" /> 그림 3은 환경 농축 1 개월이 자당의 갈망을 감소. 그룹 크기는 각각 8 쥐 있습니다. 1 일, 제어 그룹, P &lt;0.05에서 † 상당한 차이에서 * 상당한 차이. 이 수치는 10 Wolters Kluwer 건강의 허가 적응이다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig4.jpg" /> 보다 효과적으로 강제 금욕의 하루 후 4 체계적 SCH 23,390 감소 자당의 갈망을 그림. 그룹 크기는 8-12 당 그룹입니다. 1 일 그룹, 0 복용 그룹, P는 &lt;0.05에서 † 상당한 차이에서 * 상당한 차이. 이 수치는 스프링어의 허가 8 적응됩니다. <ol><li> 그림 1은 쥐가 자기 관리 자당을위한 대표적인 교육 및 테스트 데이터 (그림을 나타냅니다한 TOP) 후 가능한 자당 - 이점 큐 (그림 1 아래)와 함께 종말을 응답. 그림과 같이, 쥐 훈련 기간 및 시험 기간 동안 활성 레버에 선택적으로 반응한다. 효과가 응답을 적극적으로 레버에 가장 강력한 있지만 흥미롭게도, 비활성, 응답 및 전위의 활동은 몇 가지 인큐베이션을 보여줍니다. </li><li> 그림 2는 강제 금욕의 1 개 또는 30 일 후에 자당의 갈망에 자당과 포만의 효과를 보여줍니다. 포만이 강제 금욕 중 기간이 지난 후 응답 단서도없이 소멸을 감소 있지만 감소 강제 금욕의 한 하루였다 쥐에서 혼자 자당의 신호에 대한 응답. </li><li> 그림 3과 같이, 환경 농축는 신호가 강제 금욕의 한 다음날 발견 수준으로 동작을 응답하고 혼자 자당의 신호에 대한 응답없이 incubated 멸종 감소. </li><li> 그림 4는 단서가 응답과 함께 소멸에 SCH 23390의 금욕 종속 효과를 묘사. SCH 23390 대부분의 EF되었습니다강제 금단의 1 일 이후 자당의 갈망을 줄이는 fective, 대 30, 일. </li></ol>

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W., Kruzich, P. J., See, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contingent+access+to+stimuli+associated+with+cocaine+self-administration+is+required+for+reinstatement+of+drug-seeking+behavior.">Contingent access to stimuli associated with cocaine self-administration is required for reinstatement of drug-seeking behavior.</a> Psychobiology. 28, 383-386 (2000).</li><li>Bossert, J. M., Ghitza, U. E., Lu, L., Epstein, D. H., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobiology+of+relapse+to+heroin+and+cocaine+seeking:+an+update+and+clinical+implications.">Neurobiology of relapse to heroin and cocaine seeking: an update and clinical implications.</a> Eur. J. Pharmacol. 526, 36-50 (2005).</li><li>Bossert, J. M., Poles, G. C., Wihbey, K. 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L., Stewart, J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+model+of+drug+relapse:+an+assessment+of+the+validity+of+the+reinstatement+procedure.">Toward a model of drug relapse: an assessment of the validity of the reinstatement procedure.</a> Psychopharmacology (Berl). 189, 1-16 (2006).</li><li>Kupferschmidt, D. A., Brown, Z. J., Erb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Procedure+for+Studying+the+Footshock-Induced+Reinstatement+of+Cocaine+Seeking+in+Laboratory+Rats.">A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats.</a> J. Vis. Exp. (47), (2011).</li></ol>

모든 절차는 &quot;실험실 동물 관리의 원칙&quot;(노 NIH 간행물. 86-23)에 명시된 지침을 따라하고 웨스턴 워싱턴 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.

이 대사에 대해 눌러 레버가 전에 갈망 테스트 세션에 소멸되지 않습니다 기술적으로 부정확하지만 우리가 여기서 설명하는 절차는 복직 절차로 식별 수 있습니다. 전형적인 복직 절차에서 보상 - 이점의 단서와 함께 응답하는 것은 소멸되고 다음 보상 (프라이밍 유도된 복귀)의 비 우발적인 프레 젠 테이션이나 footshock 같은 스트레스 (스트레스 유발 복직) 11 관리와 함께 &quot;복직&quot;. ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 항목 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 농축 케이지 </td><td> 품질 케이지 회사 </td><td> FH - 36 ½ T - N </td></tr><tr><td> Operant 상공 회의소 </td><td> 클럽메드 어소 시에이츠 </td><td> MED - 008 - CT - B3 </td></tr><tr><td> SCH 23390 </td><td> 시그마 </td><td> D054 </td></tr></tbody></table>

a general method for evaluating incubation of sucrose craving in rats

식품 이점 단서에 대한 응답으로 음식을 제한 다이어트, 음식 갈망에 누군가 금욕과 1로 데려가는 음식 재발 사이의 주요 행동 변화 포인트 역할을 수 있습니다. 이런 방식으로 개념 음식 갈망은 약물 이점의 단서에 대한 응답으로 마약 갈망하는 유사한 것입니다. 풍부한 문학 약물 갈망의 행동 및 신경 생물학 determinants을 이해 주위에 개발되었습니다, 우리와 다른 사람들은 더 나은 음식 2-4 관련된 중독 같은 행동을 이해하는 기본적인 중독 연구에서 기술을 번역에 대한 최근 주력하고 있습니다. 마찬가지로 약물 갈망의 이전 연구에서 한, 우리는 재발의 쥐 모델을 이용하여 자당의 갈망 동작을 확인합니다. 이 모델에서는 쥐들이 며칠 동안 세션에 약물이나 음식 중 하나를 자동 관리할 수 있습니다. 세션에서 레버 응답 음색과 함께 보상 + 빛의 자극을 제공합니다. 갈망의 동작은 다음 운영 체제는에 응답으로 정의됩니다보상이 제공되지 않습니다 후속 세션. 쥐 안정적으로 음색에 대해 답변해 드리겠습니다 + 빛의 자극을 가능성이 자사의 인수 시설 강화 특성으로 인해 5. 이 문제는 때로는 자당의 추구 또는 대사 반응이라고합니다. 현재의 논의에서는 이러한 구조를 모두 포함하다하는 용어 &quot;자당의 갈망&quot;을 사용합니다. 지난 10 년간, 우리는 시간의 길이가 보상을 자기 관리에 영향을의 보상 갈망을 따라하는 방법에 초점을 맞추고있다. 흥미롭게도, 쥐가 강제 금욕 기간의 몇 주간의 과정을 통해 보상 - 이점 큐에 대한 응답을 향상시킬 수 있습니다. 이 &quot;갈망의 부화는&quot;남용 4,6의 자기 관리 중 음식이나 약물이 쥐에서 관찰됩니다. 우리가 동물 모델에서 확인된이 갈망하는이 시간에 의존 증가는 인간의 약물 및 식품 중독 행동에 큰 가능성이 관련이있을 수 있습니다. 여기 sucro의 평가 부화를위한 프로토콜을 제시쥐의 SE의 갈망. 절차의 변종이 갈망은 일반적인 멸종 컨텍스트에서 자당 자기 관리 컨텍스트 (단서도없이 소멸) 내에서 또는 자당 - 이점의 단서에 대한 응답으로 눌러 레버의 멸종 다음과 같은 이산 자당 - 이점 큐에 대한 응답으로 평가 어디에 표시됩니다 (단서와 함께 소멸).

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A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

음식이나 약물 이점 단서에 대한 응답을하는 것은 금욕의 기간 동안 증가하고 이것은 재발 행동으로 증가 자화율과 관련 있습니다. 자기 관리 자당을 가지고 쥐이 &#39;갈망의 배양 &quot;을 평가하기위한 우리가 세부 절차를.

쥐에서 자당의 갈망의 보육을 평가하기위한 일반적인 방법

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.2K 조회수.  Western Washington University. 음식이나 약물 이점 단서에 대한 응답을하는 것은 금욕의 기간 동안 증가하고 이것은 재발 행동으로 증가 자화율과 관련 있습니다. 자기 관리 자당을 가지고 쥐이 '갈망의 배양 "을 평가하기위한 우리가 세부 절차를.

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A Simple Composite Phenotype Scoring System for Evaluating Mouse Models of Cerebellar Ataxia

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebella ataxia. It is derived from previously published phenotype assessments in several disease models, including spinocerebellar ataxias, Huntington s disease and spinobulbar muscular atrophy. Measures include hind limb clasping, ledge test, gait and kyphosis. Each measure is recorded on a scale of 0-3, with a combined total of 0-12 for all four measures. The results effectively discriminate between affected and non-affected individuals, while also quantifying the temporal progression of neurodegenerative disease phenotypes. Measures may be analyzed individually or combined into a composite phenotype score for greater statistical power. The ideal combination of the four described measures will depend upon the disorder in question. We present an example of the protocol used to assess disease severity in a transgenic mouse model of spinocerebellar ataxia type 7 (SCA7).
Albert R. La Spada and Gwenn A. Garden contributed to this manuscript equally.

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebellar ataxia. Measures include hind limb clasping, ledge test, gait and kyphosis. This protocol effectively discriminates between affected and non-affected individuals, and detects the progression of affected individuals over time.

소뇌 운동 실조증의 마우스 모델을 평가하기위한 간단한 복합 표현형 점수 시스템

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebella ataxia. It is derived from previously ...

연구

신경과학

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended upon this work to develop a simple quantitative measure of forepaw dexterity that is sensitive to lateralized impairments and age-dependent changes. Rodents learn skillful forepaw and digit movements to manage thin pasta pieces, which they eagerly consume. We have previously described methods for quantifying vermicelli handling in rats and showed that the measures are very sensitive to forelimb impairments resulting from unilateral ischemic lesions, middle cerebral artery occlusions and unilateral striatal dopamine depletion [Allred, R.P., Adkins, D.L., Woodlee, M.T., Husbands, L.C., Maldonado M.A., Kane, J.R., Schallert, T. &amp; Jones, T.A. The Vermicelli Handling Test: a simple quantitative measure of dexterous forepaw function in rats. J. Neurosci. Methods 170, 229-244 (2008)]. Here we present a more detailed protocol for this test in rats and compare it with a newly developed version for mice, the Capellini Handling Test. Rats and mice are videotaped while handling short lengths of uncooked vermicelli or capellini pasta, respectively, with a camera positioned to optimize the view of paw movements. Slow motion video playback allows for the identification of forepaw adjustments, defined as any distinct removal and replacement of the paw, or of any number of digits, on the pasta piece after eating commences. Forepaw adjustments per piece are averaged over trials per each testing session. Repeated testing permits sensitive quantitative analysis of changes in forepaw dexterity over time. Protocols for pre-testing habituation and handling practice, as well as procedures for characterizing atypical handling patterns, are described. Because rats and mice perform the pasta handling tests slightly differently, species-specific differences in administration and scoring of these tests are highlighted. All animal use was in accordance with protocols approved by the University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

The Vermicelli and Capellini Handling Tests of forepaw dexterity take advantage of the natural inclination of rodents to manipulate food items using skillful forepaw and digit movements. Animals are videotaped while handling short strands of uncooked dry pasta. Slow motion video playback allows for the quantification of forepaw adjustments.

베르 미 첼리와 Capellini 처리 시험 : 쥐 및 생쥐의 손재주가 앞발 기능의 단순 양적 측정

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse. Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the neurobiology and phenomenology of relapse to drug use. Although procedural variations have emerged over the past several decades, the most conventional reinstatement procedures are based on the drug self-administration (SA) model. In this model, an animal is trained to perform an operant response to obtain drug. Subsequently, the behavior is extinguished by withholding response-contingent reinforcement. Reinstatement of drug seeking is then triggered by a discrete event, such as an injection of the training drug, re-exposure to drug-associated cues, or exposure to a stressor 1.
Reinstatement procedures were originally developed to study the ability of acute non-contingent exposure to the training drug to reinstate drug seeking in rats and monkeys 1, 2. Reinstatement procedures have since been modified to study the role of environmental stimuli, including drug-associated cues and exposure to various forms of stress, in relapse to drug seeking 1, 3, 4.
Over the past 15 years, a major focus of the reinstatement literature has been on the role of stress in drug relapse. One of the most commonly used forms of stress for studying this relationship is acute exposures to mild, intermittent, electric footshocks. The ability of footshock stress to induce reinstatement of drug seeking was originally demonstrated by Shaham and colleagues (1995) in rats with a history of intravenous heroin SA5. Subsequently, the effect was generalized to rats with histories of intravenous cocaine, methamphetamine, and nicotine SA, as well as oral ethanol SA 3, 6.
Although footshock-induced reinstatement of drug seeking can be achieved reliably and robustly, it is an effect that tends to be sensitive to certain parametrical variables. These include the arrangement of extinction and reinstatement test sessions, the intensity and duration of footshock stress, and the presence of drug-associated cues during extinction and testing for reinstatement. Here we present a protocol for footshock-induced reinstatement of cocaine seeking that we have used with consistent success to study the relationship between stress and cocaine seeking.

Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the role of stress in relapse to drug seeking. Here, we report on a method for inducing the reinstatement of cocaine seeking in laboratory rats via acute exposures to mild, intermittent electric footshock.

실험실 쥐의 추구 코카인 Footshock 유발 복직을 유학을위한 절차

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Preparation of Synaptoneurosomes from Mouse Cortex using a Discontinuous Percoll-Sucrose Density Gradient

Synaptoneurosomes (SNs) are obtained after homogenization and fractionation of mouse brain cortex. They are resealed vesicles or isolated terminals that break away from axon terminals when the cortical tissue is homogenized. The SNs retain pre- and postsynaptic characteristics, which makes them useful in the study of synaptic transmission. They retain the molecular machinery used in neuronal signaling and are capable of uptake, storage, and release of neurotransmitters.
The production and isolation of active SNs can be problematic using medias like Ficoll, which can be cytotoxic and require extended centrifugation due to high density, and filtration and centrifugation methods, which can result in low activity due to mechanical damage of the SNs. However, the use of discontinuous Percoll-sucrose density gradients to isolate SNs provides a rapid method to produce good yields of translationally active SNs. The Percoll-sucrose gradient method is quick and gentle as it employs isotonic conditions, has fewer and shorter centrifugation spins and avoids centrifugation steps that pellet SNs and cause mechanical damage.

A method to prepare translationally active, intact synaptoneurosomes (SNs) from mouse brain cortex is described. The method uses a discontinuous Percoll-sucrose density gradient allowing for the quick preparation of active SNs.

불연속 Percoll - 자당 밀도 구배를 사용하여 마우스를 접속에서 Synaptoneurosomes의 준비

Synaptoneurosomes (SNs) are obtained after homogenization and fractionation of mouse brain cortex. They are resealed vesicles or isolated terminals that ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the use of IUE for investigating behavior or neuropathology in the adult brain has been limited by insufficient methods for monitoring of IUE transfection success by non-invasive techniques in postnatal animals. 
 For the present study, E16 rats were used for IUE. After intraventricular injection of the nucleic acids into the embryos, positioning of the tweezer electrodes was critical for targeting either the developing cortex or the hippocampus. 
 Ventricular co-injection and electroporation of a luciferase gene allowed monitoring of the transfected cells postnatally after intraperitoneal luciferin injection in the anesthetized live P7 pup by in vivo bioluminescence, using an IVIS Spectrum device with 3D quantification software. 
 Area definition by bioluminescence could clearly differentiate between cortical and hippocampal electroporations and detect a signal longitudinally over time up to 5 weeks after birth. This imaging technique allowed us to select pups with a sufficient number of transfected cells assumed necessary for triggering biological effects and, subsequently, to perform behavioral investigations at 3 month of age. As an example, this study demonstrates that IUE with the human full length DISC1 gene into the rat cortex led to amphetamine hypersensitivity. Co-transfected GFP could be detected in neurons by post mortem fluorescence microscopy in cryosections indicating gene expression present at &ge;6 months after birth.
 We conclude that postnatal bioluminescence imaging allows evaluating the success of transient transfections with IUE in rats. Investigations on the influence of topical gene manipulations during neurodevelopment on the adult brain and its connectivity are greatly facilitated. For many scientific questions, this technique can supplement or even replace the use of transgenic rats and provide a novel technology for behavioral neuroscience.

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Genes can be manipulated during development of the cortex or the hippocampus of the rat via in utero electroporation (IUE) at E16, to enable fast and targeted modifications in neuronal connectivity for later studies of behavior or neuropathology in adult animals. Postnatal in vivo imaging for control of IUE success is performed by bioluminescence of activating co-transfected luciferase.

몸에 붙이기 형질 전환 쥐의 발생에 의해<em&gt; 자궁 내</em&gt; 일렉트로 및<em&gt; 생체 내</em&gt; 생물 발광 상영

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Preparation of Synaptic Plasma Membrane and Postsynaptic Density Proteins Using a Discontinuous Sucrose Gradient

Neuronal subcellular fractionation techniques allow the quantification of proteins that are trafficked to and from the synapse. As originally described in the late 1960&#8217;s, proteins associated with the synaptic plasma membrane can be isolated by ultracentrifugation on a sucrose density gradient. Once synaptic membranes are isolated, the macromolecular complex known as the post-synaptic density can be subsequently isolated due to its detergent insolubility. The techniques used to isolate synaptic plasma membranes and post-synaptic density proteins remain essentially the same after 40 years, and are widely used in current neuroscience research. This article details the fractionation of proteins associated with the synaptic plasma membrane and post-synaptic density using a discontinuous sucrose gradient. Resulting protein preparations are suitable for western blotting or 2D DIGE analysis.

This article details the enrichment of proteins associated with the synaptic plasma membrane by ultracentrifugation on a discontinuous sucrose gradient. The subsequent preparation of post-synaptic density proteins is also described. Protein preparations are suitable for western blotting or 2D DIGE analysis.

불연속 자당 구배를 사용 시냅틱 세포막과 시냅스 밀도 단백질의 제조

Neuronal subcellular fractionation techniques allow the quantification of proteins that are trafficked to and from the synapse. As originally described in ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life. The cold plantar assay allows the objective and inexpensive assessment of cold sensitivity in mice, and can quantify both analgesia and hypersensitivity. Mice are acclimated on a glass plate, and a compressed dry ice pellet is held against the glass surface underneath the hindpaw. The latency to withdrawal from the cooling glass is used as a measure of cold sensitivity.
Cold sensation is also important for survival in regions with seasonal temperature shifts, and in order to maintain sensitivity animals must be able to adjust their thermal response thresholds to match the ambient temperature. The Cold Plantar Assay (CPA) also allows the study of adaptation to changes in ambient temperature by testing the cold sensitivity of mice at temperatures ranging from 30 &#176;C to 5 &#176;C. Mice are acclimated as described above, but the glass plate is cooled to the desired starting temperature using aluminum boxes (or aluminum foil packets) filled with hot water, wet ice, or dry ice. The temperature of the plate is measured at the center using a filament T-type thermocouple probe. Once the plate has reached the desired starting temperature, the animals are tested as described above.
This assay allows testing of mice at temperatures ranging from innocuous to noxious. The CPA yields unambiguous and consistent behavioral responses in uninjured mice and can be used to quantify both hypersensitivity and analgesia. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 &#176;C and 5 &#176;C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

마우스에 콜드 민감도 및 적응을 결정하기위한 간단하고 저렴한 방법

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the experimental time, and increases the number of animals that are utilized per study. This limitation specifically impacts protocols such as calcium imaging that require prolonged pre-incubation with bath-applied dyes. Exponential bacterial growth within 3 - 4 h after slicing is tightly correlated with a decrease in tissue health. This study describes a method for&#160;limiting the proliferation of bacteria in acute preparations to maintain viable neuronal tissue for prolonged periods of time (&#62;24 h) without the need for antibiotics, sterile procedures, or tissue culture media containing growth factors. By cycling the extracellular fluid through UV irradiation and keeping the tissue in a custom holding chamber at 15 - 16 &#176;C, the tissue shows no difference in electrophysiological properties, or calcium signaling through intracellular calcium dyes at &#62;24 h postdissection. These methods will not only extend experimental time for those using acute neuronal tissue, but will reduce the number of animals required to complete experimental goals, and will set a gold standard for acute neuronal tissue incubation.

Once removed from the body, neuronal tissue is greatly affected by environmental conditions, leading to eventual degradation of the tissue after 6 - 8 h. Using a unique incubation method, which closely monitors and regulates the extracellular environment of the tissue, tissue viability can be significantly extended for &#62;24 h.

전기 생리학 및 칼슘 이미징에 대한 급성 신경 조직의 장기간 배양

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such as epilepsy and neurodegenerative disorders. However, it is technically difficult to obtain EEG recordings in neonates as it requires specialized handling and great care. Here, we present a novel method to record EEG in neonatal rat pups (P8-P15). We designed a simple and reliable electrode using computer pin loci; it can be easily implanted into the skull of a rat pup to record high-quality EEG signals in the normal and epileptic brain. Pups were given an intraperitoneal (i.p.) injection of the neurotoxin kainic acid (KA) to induce epileptic seizures. The surgical implantation performed in this procedure is less expensive than other EEG procedures for neonates. This method allows one to record high-quality and stable EEG signals for more than 1 week. Furthermore, this procedure can also be applied to adult rats and mice to study epilepsy or other neurological disorders.

Here, we introduce a novel technique designed to record electroencephalography (EEG) in freely moving neonatal epileptic pups and describe its procedures, features, and applications. This method allows one to record EEG for more than 1 week.

새로운 방법으로 자유롭게 움직이는 신생아 쥐의 뇌파 기록

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Touchscreen Sustained Attention Task (SAT) for Rats

Sustained attention is the ability to monitor intermittent and unpredictable events over a prolonged period of time. This attentional process subserves other aspects of cognition and is disrupted in certain neurodevelopmental, neuropsychiatric, and neurodegenerative disorders. Thus, it is clinically important to identify mechanisms that impair and improve sustained attention. Such mechanisms are often first discovered using rodent models. Therefore, several behavior procedures for testing aspects of sustained attention have been developed for rodents. One, first described by McGaughy and Sarter (1995), called the sustained attention task (SAT), trains rats to distinguish between signal (i.e., brief light presentation) and non-signal trials. The signals are short and thus require careful attention to be perceived. Attentional demands can be increased further by introducing a distractor (e.g., flashing houselight). We have modified this task for touchscreen operant chambers, which are configured with a touchscreen on one wall that can present stimuli and record responses. Here we detail our protocol for SAT in touchscreen chambers. Additionally, we present standard measures of performance in male and female Sprague-Dawley rats. Comparable performance on this task in both sexes highlights its use for attention studies, especially as more researchers are including female rodents in their experimental design. Moreover, the easy implementation of SAT for the increasingly popular touchscreen chambers increases its utility.

Touchscreen Sustained Attention Task SAT for Rats

Sustained attention, or continuously monitoring situations for intermittent and unpredictable events, is a critical aspect of cognition. Here we detail how to test sustained attention in rats using touchscreen operant chambers. We demonstrate comparable performance in male and female rats, making this task useful for studying attention in both sexes.

터치 스크린 지속 주의 작업 (토) 쥐에 대 한

Sustained attention is the ability to monitor intermittent and unpredictable events over a prolonged period of time. This attentional process subserves ...