Bu yazıda ve video üretimi, Ulusal Sağlık hibe R15 Uyuşturucu / National Institutes DA016285-02, Nörobilim Girişimi Western Washington Üniversitesi Biyomedikal Araştırma Faaliyetleri Enstitüsü ve Batı Washington Üniversitesi tarafından desteklenmiştir.

1. Hayvan Başlık <ol><li> Erkek Long-Evans sıçan bir çalışmanın başında 3 aylık. Sıçanlar (Gilroy, California, ABD), Western Washington Üniversitesi vivaryum yetiştirilen Simonsen türevli ve Purina Mills Inc. Mazuri Kemirgen Peletler (Gri Zirvesi ile 12 saat ters gündüz / gece döngüsü (0700 azından ışıklar sönük) ayrı ayrı yerleştirilmiştir , MO, USA) ve su ad libitum. </li><li> Tüm eğitim ve test her zaman eğitimli ve aynı zamanda günlük test sıçanların kohortlarında ile 0900-1300 arasında yer alır. </li><li> Sıçanlar çalışma süresi boyunca her Pazartesi, Çarşamba ve Cuma tartılır. </li><li> Eğitim aşamasının hemen öncesinde, sıçan, eğitimin ilk gününde sakaroz öz-yönetim teşvik etmek yaklaşık 20 saat süreyle su yoksun kalırlar. </li></ol> 2. Davranış Usulleri Tüm edimsel davranış prosedürler standart edimsel koşullama odaları (Med Associates Inc, St Albans, Her edimsel koşullama odasının üstünde bulunan bir infüzyon pompası (RAZEL Scientific Instruments, St Albans, VT, USA) ile VT, ABD). Edimsel Koşullanma odaları içine ses azaltıcı havalandırma fanları dolapları (Western Washington University, USA). Tüm deneysel koşullar ve veri toplama Med PC IV yazılımı (Med Associates Inc, St Albans, VT, ABD) tarafından kontrol edilir. Edimsel Koşullanma odaları (30 x 20 x 24 cm), iki kolları (sabit ve geri çekilebilir), bir ses üreteci, geri çekilebilir kolu üzerinde beyaz bir uyaran ışık, karşı duvara kırmızı bir evde ışık içerir. Infüzyon pompası aktif kolu sağa bir ödül yuvasına sakaroz sağlar. Kollarını ızgara yerden 10 cm. Dört kızılötesi photobeams her odasına süsler. Ön kirişler yan duvarlar her 10,5 cm ve yan yan duvarları her 6 cm kirişler. Her ışın, paslanmaz çelik çubuk zemin üzerinde 4.5 cm. Kirişler birtam sonlarının sayısını ayarlayabilirsiniz yeniden. Işın sonlarının toplam sayısı özlem Eğitim ve Test sırasında kaydedilir. Ilk Eğitim oturumu öncesinde su kısıtlaması hariç, fareler, ev kafeslerde ve edimsel koşullanma odaları, yiyecek ve su ad libitum verilmektedir. Odalar vivaryum olduğu gibi, bir ters ışık döngüsü, özel bir test odası vardır. Sıçanlar ışık engelleme kumaş ile kaplı bir arabası odalar arasında ev kafeslerde taşınan. Her oturumun sonunda, fareler, ev kafeslere iade edilir. : Eğitim, Zorunlu Yoksunluk, ve Test tipik deney üç aşaması vardır. Test oturumu neyin özlem değerlendirilir. Biz, çalışmaya bağlı olarak, iki genel test prosedürleri özlem değerlendirmek. Bu iki prosedür bölüm 2.3.1 ve 2.3.2 &#39;de açıklanmıştır. <ol><li> Eğitim <ol><li> Tipik bir deneyde, fareler için saat / gün 2 harcamak10 gün üst üste sağ kolu yuvasına% 10 sakaroz çözeltisini 0.2 ml teslimat için geri çekilebilir (aktif) bir kolu basın izin edimsel koşullama odalarında. </li><li> Bu yanıt aynı zamanda bir sesi (2 kHz, ortam gürültüsü üzerinde 15 dB) ve beyaz ışık oluşan bir bileşiktir uyaran harekete geçirir. Bileşik uyarıcı 5 saniye sürer ve aktif kolu üzerinde presler kaydedilmiş ama hiç programlanmış bir sonucu vardır ve bu süre zarfında 40-s zaman takip ediyor. </li><li> Inaktif (sabit) bir kolu üzerinde bir yanıt programlanmış bir sonucu vardır, ama presler kaydedilir. Eğitim ve Test sırasında ışın sonlarının numaraları kaydedilir. Tüm tepki ve lokomotor önlemleri zamanlı kurslar (2 dakika kutuları) olarak kaydedildi, ancak genellikle seans başına toplamları olarak bildirilmiştir. </li></ol></li><li> Zorla Yoksunluk. Sıçanlar zorla cinsel perhiz süresi için ev kafeslerde kalır. Kullandığımız zorla tipik yoksunluk dönemleri inci sıçanlarda testEğitimi (Gün 30 zorla yoksunluk) son gününü izleyen nihai Eğitim gün (zorla yoksunluk Gün 1) ya da 30 gün hemen aşağıdaki e gün. </li><li> Test <ol><li> Extinction ipuçları olmadan. Bu Test prosedüründe, fareler ilk yanıtı yoktur sonuçları ve oturum süresi hariç Eğitimi ile aynı koşullarda aktif kolunu basın izin verilir 1 saattir. Sıçanlar Test gününde bu nesli oturumların en az altı karşılaşabilirsiniz. Her nesli oturumuna 5 dakika süre ile aktif kolu geri çekilir ve evin ışığı söner ayrılır. &quot;Extinction&quot; yanıt aktif kolu az 20 presleri / h düşürülmüştür gösterilir Bazı fareler yedinci oturumda gerektirir. Sonraki oturumda başka bir 5 dakikalık gecikmeden sonra sıçanlar sonra sesini basın Test oturumu + başlangıçta her teslimat Eğitim sırasında sakkaroz ile eşleştirilmiş ışık işaret. </li><li> Ipuçları ile Extinction. Bu kısaltabilirsinizd Test prosedürü, sıçan, sakaroz teslim dışında eğitim aynı koşullarda aktif kolunu basın izin verilir. </li></ol></li><li> Basarak İnaktif kolu kolu ayrımcılığın bir önlem olarak kullanılır. Bu non-spesifik motor aktivasyon bir ölçüsü olarak kullanılan photobeam tatili ile birlikte, aynı zamanda. Motorik vs motivasyonel değişiklikler özlem davranış yorumu zorlaştırmaktadır. Yanıt inaktif kolu ve photobeam mola verileri (örneğin, 7, sakkaroz veya başka bir gıda için yüksek oranda yanıt sıçan, potansiyel bir özlem etkileyen bileşik meydan farmakolojik çalışmalarda karşılaştırma grupları olarak, özlem motor vs motivasyon katkıları açıklığa kavuşturulması yararlı , 8). </li></ol> 3. Zorla Yoksunluk Temsilcisi İşlemler Değişken Dönemleri sonra Sakkaroz Craving Etkiler Burada açıklanan genel yöntemi, davranışsal ve nörobiyolojik tayini soruşturma için bir yol sağlarzorla yoksunluk değişken bir süre sonra özlem NTS. 4. bölümde sağlanan Temsilcisi Sonuçlar ilgili yöntemleri burada nitelendirdi. <ol><li> Erken doyma. Bazı fareler hemen önce Test 8 ila 17 saat için evlerinde kafeslerde% 10 sakaroz şişe aldı. Bu çalışmada sıçanlara ipuçları işleme gerek kalmaksızın Extinction kullanılarak test edildi. </li><li> Çevre Zenginleştirme. Zorunlu yoksunluk döneminde, diğerleri büyük bir taşındı iken bazı sıçan bireysel konut (Kontroller) kaldı (36 &quot;genişlik x 20&quot; derinlik x 40 &quot;height; Kalite Cage, Portland, OR, ABD) üç kohortlarında kafes (Zenginleştirilmiş). Zenginleştirilmiş hayvanlar PVC borular da dahil olmak üzere, kendi ortamında çeşitli oyuncaklar vardı ve aynı zamanda romanın oyuncaklar her M, B, F 10 verildi. Bu çalışmada sıçanlara ipuçları işleme gerek kalmaksızın Extinction kullanılarak test edildi. </li><li> Farmakolojik meydan. Test gününde, sıçanlarda dopamin D1 antagonisti SCH 23390 bir doz ile ön tedavi edildi. Bu çalışmada wer sıçanlarae Extinction ipuçlarını prosedüre kullanarak test etti. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar: <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig1.jpg" /> Şekil Temsilcisi sakaroz özlem deney bir inkübasyon için 1 Eğitim ve Test verileri. Veri noktaları demektir ± SEM&#39;ler göstermektedir. Şekil 1a Grup büyüklüğü 77 sıçan ve Şekil 1b grubunda boyutları grup başına 11-12 arasında değişmektedir. * Gün 1 grubu, p &lt;0.05 anlamlı bir fark. Bu rakam, 8 veri Springer izni ile uyarlanmıştır . <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig2.jpg" /> 1 veya 30 gün sonra zorla cinsel perhiz, sukroz özlem, sakaroz doyma Etkisi Şekil 2. Grup boyutları 8-9 grup başına. * Gün 1 grup † Kontrol grubu, p &lt;0.05 anlamlı bir fark önemli bir farktır. Bu rakam adapteElsevier izni ile 9. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig3.jpg" /> Şekil 3. Bir ay çevresel zenginleştirme sakaroz özlem azalttı. Grup boyutları her 8 sıçan. * Gün 1, Kontrol grubu, p &lt;0.05 anlamlı fark † önemli bir fark. Bu rakam 10 Wolters Kluwer Sağlık izni ile uyarlanmıştır. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig4.jpg" /> Şekil zorlandı yoksunluk bir gün sonra daha etkili bir şekilde 4 Sistemik SCH 23390 azalmış sakaroz özlem. Grup boyutları 8-12 başına bir gruptur. * Gün 1 grup, † 0 doz grubunda p &lt;0.05 anlamlı bir fark önemli bir farktır. Bu rakam 8 Springer izni ile uyarlanmıştır. <ol><li> Şekil 1 sıçan kendi kendini yönetmek sakaroz için temsili Eğitim ve Test verileri (Şekil gösterir1 TOP) ve daha sonra sakkaroz eşleştirilmiş işaret (Şekil 1 DİP) Extinction yanıt. Gösterildiği gibi, sıçanlar Eğitim sırasında ve Test sırasında aktif bir kolu üzerinde seçici cevap. İlginç bir yanıt aktif kolu üzerinde etkisi en güçlü olmasına rağmen, inaktif yanıt ve lokomotor aktivite, bazı kuluçka göstermektedir. </li><li> Şekil 2 zorla yoksunluk 1 veya 30 gün sonra sakkaroz özlem sakaroz ile doyma etkisi gösterir. Erken doyma zorla yoksunluk iki dönem sonra yanıt ipuçları olmadan Extinction azalttı, ama yalnızca sınırlı zorla yoksunluk sadece bir gün vardı sıçanlarda tek başına sakaroz işaret yanıt. </li><li> Şekil 3&#39;te görüldüğü gibi, çevresel zenginleştirme işaret zorla yoksunluk sadece bir gün sonra bulundu seviyeleri davranışlar yanıt ve tek başına sakaroz işaret yanıt inkübe Extinction azalttı. </li><li> Şekil 4 SCH 23390 ipuçları yanıt Extinction bir yoksunluk bağımlı etkisi gösteriyor. SCH 23390 en efzorla yoksunluk sonra sakkaroz özlem 1 azaltarak etkinleştirilecek, vs 30 gün. </li></ol>

<ol>
	<li>Sobik, L., Hutchison, K., Craighead, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cue-elicited+craving+for+food:+a+fresh+approach+to+the+study+of+binge+eating.">Cue-elicited craving for food: a fresh approach to the study of binge eating.</a> Appetite. 44, 253-2561 (2005).</li><li>Geiger, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficits+of+mesolimbic+dopamine+neurotransmission+in+rat+dietary+obesity.">Deficits of mesolimbic dopamine neurotransmission in rat dietary obesity.</a> Neuroscience. 159, 1193-1199 (2009).</li><li>Grimm, J. W., Olmstead, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Craving In Animal Models of Drug Addiction. , 311-336 (2011).</li><li>Grimm, J. W., Kruzich, P. J., See, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contingent+access+to+stimuli+associated+with+cocaine+self-administration+is+required+for+reinstatement+of+drug-seeking+behavior.">Contingent access to stimuli associated with cocaine self-administration is required for reinstatement of drug-seeking behavior.</a> Psychobiology. 28, 383-386 (2000).</li><li>Bossert, J. M., Ghitza, U. E., Lu, L., Epstein, D. H., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobiology+of+relapse+to+heroin+and+cocaine+seeking:+an+update+and+clinical+implications.">Neurobiology of relapse to heroin and cocaine seeking: an update and clinical implications.</a> Eur. J. Pharmacol. 526, 36-50 (2005).</li><li>Bossert, J. M., Poles, G. C., Wihbey, K. A., Koya, E., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+blockade+of+dopamine+D1-family+receptors+in+nucleus+accumbens+core+or+shell+on+reinstatement+of+heroin+seeking+induced+by+contextual+and+discrete+cues.">Differential effects of blockade of dopamine D1-family receptors in nucleus accumbens core or shell on reinstatement of heroin seeking induced by contextual and discrete cues.</a> J. Neurosci. 27, 12655-12663 (2007).</li><li>Grimm, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+systemic+or+nucleus+accumbens-directed+dopamine+D1+receptor+antagonism+on+sucrose+seeking+in+rats.">Effects of systemic or nucleus accumbens-directed dopamine D1 receptor antagonism on sucrose seeking in rats.</a> Psychopharmacology (Berl). , (2011).</li><li>Grimm, J. W., Fyall, A. M., Osincup, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incubation+of+sucrose+craving:+effects+of+reduced+training+and+sucrose+pre-loading.">Incubation of sucrose craving: effects of reduced training and sucrose pre-loading.</a> Physiol Behav. 84, 73-79 (2005).</li><li>Grimm, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+enrichment+attenuates+cue-induced+reinstatement+of+sucrose+seeking+in+rats.">Environmental enrichment attenuates cue-induced reinstatement of sucrose seeking in rats.</a> Behav Pharmacol. 19, 777-785 (2008).</li><li>Shaham, Y., Shalev, U., Lu, L., De Wit, H., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reinstatement+model+of+drug+relapse:+history,+methodology+and+major+findings.">The reinstatement model of drug relapse: history, methodology and major findings.</a> Psychopharmacology (Berl). 168, 3-20 (2003).</li><li>Childress, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbic+activation+during+cue-induced+cocaine+craving.">Limbic activation during cue-induced cocaine craving.</a> Am J Psychiatry. 156, 11-18 (1999).</li><li>Gearhardt, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+Correlates+of+Food+Addiction.">Neural Correlates of Food Addiction.</a> Arch. Gen. Psychiatry. , (2011).</li><li>Markou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+drug+craving.">Animal models of drug craving.</a> Psychopharmacology (Berl). 112, 163-182 (1993).</li><li>Phillips, R. G., LeDoux, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+contribution+of+amygdala+and+hippocampus+to+cued+and+contextual+fear+conditioning.">Differential contribution of amygdala and hippocampus to cued and contextual fear conditioning.</a> Behav. Neurosci. 106, 274-285 (1992).</li><li>Holland, P. C., Bouton, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampus+and+context+in+classical+conditioning.">Hippocampus and context in classical conditioning.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 9, 195-202 (1999).</li><li>Epstein, D. H., Preston, K. L., Stewart, J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+model+of+drug+relapse:+an+assessment+of+the+validity+of+the+reinstatement+procedure.">Toward a model of drug relapse: an assessment of the validity of the reinstatement procedure.</a> Psychopharmacology (Berl). 189, 1-16 (2006).</li><li>Kupferschmidt, D. A., Brown, Z. J., Erb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Procedure+for+Studying+the+Footshock-Induced+Reinstatement+of+Cocaine+Seeking+in+Laboratory+Rats.">A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats.</a> J. Vis. Exp. (47), (2011).</li></ol>

Tüm işlemler &quot;Laboratuar Hayvan Bakımı İlkeleri&quot; (NIH yayın yok. 86-23) belirtilen yönergeleri takip ve Western Washington Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmıştır.

Bu işaret için baskı kolu önce özlem test oturumuna bitmedi teknik olarak yanlış olmasına rağmen, biz burada açıklamak işlemleri, iade prosedürleri olarak tanımlanabilir. Tipik bir iade prosedürü, ödül-eşleştirilmiş ipuçları yanıt söndürüldü ve ardından ödül (priming-kaynaklı iade) şarta bağlı olmayan bir sunum ya da böyle footshock gibi bir stres (stres kaynaklı iade) 11 idaresi ile &quot;yeniden&quot; . Işaret (madde 2.3.1) erişim tek başına basarak kolu yok, iade i?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Madde </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Zenginleştirme Cage </td><td> Kalite Kafes Şirketi </td><td> FH-36 ½ T-N </td></tr><tr><td> Edimsel Odası </td><td> Med Associates </td><td> MED-008-CT-B3 </td></tr><tr><td> SCH 23390 </td><td> Sigma </td><td> D054 </td></tr></tbody></table>

a general method for evaluating incubation of sucrose craving in rats

Gıda eşleştirilmiş uyaranlara yanıt olarak bir gıda kısıtlı bir diyet, gıda özlem birisi için, yoksunluk ve 1 alarak gıda için nüks davranış arasında önemli bir geçiş noktası olarak hizmet edebilir . Bu şekilde kavramsallaştırdığı Gıda özlem, ilaç-eşleştirilmiş ipuçları yanıt ilaç özlem benzer. Ilaç özlem davranışsal ve nörobiyolojik belirleyicileri anlayış etrafında gelişen zengin bir edebiyat olmuştur, biz ve diğerleri gıda 2-4 bağımlılığı gibi davranışlar daha iyi anlamak için temel bağımlılığı araştırma teknikleri tercüme yoğunlaştık. Ilaç özlem önceki çalışmalar yapılması gibi, nüks bir fare modeli kullanılarak sakaroz özlem davranışlarını incelemek. Bu modelde, fareler oturumlarda ya da ilaç veya gıda birkaç gün içinde kendi kendini yönetmek. Bir oturumda, kolu yanıt, bir zil sesi ile birlikte ödül + hafif uyaran sunuyor. Craving davranışı daha sonra operasyonel bir yanıt olarak tanımlanırsonraki oturumda ödül mevcut değildir. Sıçanlar tonu güvenilir bir şekilde cevap + ışık uyaran, olasılıkla onun edinilen klimalı güçlendirici özellikleri 5 yüzünden. Bu davranış, bazen sakaroz isteyen veya işaret reaktivite olarak adlandırılır. Bu tartışmada biz bu yapıları hem içermekten teriminin &quot;sakaroz özlem&quot; kullanabilirsiniz. Geçtiğimiz on yılda, biz süresini ödül öz-yönetim etkiler ödül özlem nasıl odaklanmıştır. İlginçtir, sıçan, zorunlu yoksunluk bir süre birkaç hafta boyunca ödül-eşleştirilmiş işaret yanıt artırmak. Bu &quot;özlem inkübasyon&quot; kötüye 4,6 öz-idare ya yiyecek ya da ilaç sıçanlarda görülmektedir. Hayvan modeli tespit özlem Bu zamana bağımlı bir artış, insan ilaç ve gıda bağımlılığı davranışları büyük bir potansiyel öneme sahip. Burada sucro, kuluçka değerlendirilmesi için bir protokol mevcutsıçanlarda se özlem. Prosedürü Türevleri özlem sakaroz, öz-yönetim bağlamında (kuyruksuz Extinction) içinde veya sakaroz eşleştirilmiş ipuçları yanıt olarak genel bir yok olma bağlamında basarak kolu yok ayrı bir sakaroz-eşleştirilmiş işaret yanıt olarak değerlendirildi olduğu belirtilecektir (ipuçları ile Extinction).

Watch this Scientific Journal Video about A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats at JoVE.com

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

, Yiyecek ya da ilaç-eşleştirilmiş ipuçları yanıt yoksunluk bir süre boyunca artar ve bu artan bir duyarlılık relaps davranışları ile ilgili olabilir. Burada, kendi kendine uygulanan sakaroz sıçanlarda, bu &quot;özlem inkübasyon&quot; değerlendirmek için ayrıntılı bir işlem.

Sıçanlarda Sakkaroz Craving Kuluçka değerlendirilmesi için Genel Bir Yöntem

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

a-general-method-for-evaluating-incubation-of-sucrose-craving-in-rats

Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.2K Görüntüleme.  Western Washington University. , Yiyecek ya da ilaç-eşleştirilmiş ipuçları yanıt yoksunluk bir süre boyunca artar ve bu artan bir duyarlılık relaps davranışları ile ilgili olabilir. Burada, kendi kendine uygulanan sakaroz sıçanlarda, bu "özlem inkübasyon" değerlendirmek için ayrıntılı bir işlem.

Video: A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

A Simple Composite Phenotype Scoring System for Evaluating Mouse Models of Cerebellar Ataxia

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebella ataxia. It is derived from previously published phenotype assessments in several disease models, including spinocerebellar ataxias, Huntington s disease and spinobulbar muscular atrophy. Measures include hind limb clasping, ledge test, gait and kyphosis. Each measure is recorded on a scale of 0-3, with a combined total of 0-12 for all four measures. The results effectively discriminate between affected and non-affected individuals, while also quantifying the temporal progression of neurodegenerative disease phenotypes. Measures may be analyzed individually or combined into a composite phenotype score for greater statistical power. The ideal combination of the four described measures will depend upon the disorder in question. We present an example of the protocol used to assess disease severity in a transgenic mouse model of spinocerebellar ataxia type 7 (SCA7).
Albert R. La Spada and Gwenn A. Garden contributed to this manuscript equally.

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebellar ataxia. Measures include hind limb clasping, ledge test, gait and kyphosis. This protocol effectively discriminates between affected and non-affected individuals, and detects the progression of affected individuals over time.

Serebellar Ataksi Fare Modelleri Değerlendirme Basit Kompozit Fenotip Puanlama Sistemi

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebella ataxia. It is derived from previously ...

Nörobilim

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended upon this work to develop a simple quantitative measure of forepaw dexterity that is sensitive to lateralized impairments and age-dependent changes. Rodents learn skillful forepaw and digit movements to manage thin pasta pieces, which they eagerly consume. We have previously described methods for quantifying vermicelli handling in rats and showed that the measures are very sensitive to forelimb impairments resulting from unilateral ischemic lesions, middle cerebral artery occlusions and unilateral striatal dopamine depletion [Allred, R.P., Adkins, D.L., Woodlee, M.T., Husbands, L.C., Maldonado M.A., Kane, J.R., Schallert, T. &amp; Jones, T.A. The Vermicelli Handling Test: a simple quantitative measure of dexterous forepaw function in rats. J. Neurosci. Methods 170, 229-244 (2008)]. Here we present a more detailed protocol for this test in rats and compare it with a newly developed version for mice, the Capellini Handling Test. Rats and mice are videotaped while handling short lengths of uncooked vermicelli or capellini pasta, respectively, with a camera positioned to optimize the view of paw movements. Slow motion video playback allows for the identification of forepaw adjustments, defined as any distinct removal and replacement of the paw, or of any number of digits, on the pasta piece after eating commences. Forepaw adjustments per piece are averaged over trials per each testing session. Repeated testing permits sensitive quantitative analysis of changes in forepaw dexterity over time. Protocols for pre-testing habituation and handling practice, as well as procedures for characterizing atypical handling patterns, are described. Because rats and mice perform the pasta handling tests slightly differently, species-specific differences in administration and scoring of these tests are highlighted. All animal use was in accordance with protocols approved by the University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

The Vermicelli and Capellini Handling Tests of forepaw dexterity take advantage of the natural inclination of rodents to manipulate food items using skillful forepaw and digit movements. Animals are videotaped while handling short strands of uncooked dry pasta. Slow motion video playback allows for the quantification of forepaw adjustments.

Şehriye ve Capellini İşleme Testleri: sıçan ve fareler hünerli forepaw fonksiyonu Basit kantitatif tedbirler

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse. Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the neurobiology and phenomenology of relapse to drug use. Although procedural variations have emerged over the past several decades, the most conventional reinstatement procedures are based on the drug self-administration (SA) model. In this model, an animal is trained to perform an operant response to obtain drug. Subsequently, the behavior is extinguished by withholding response-contingent reinforcement. Reinstatement of drug seeking is then triggered by a discrete event, such as an injection of the training drug, re-exposure to drug-associated cues, or exposure to a stressor 1.
Reinstatement procedures were originally developed to study the ability of acute non-contingent exposure to the training drug to reinstate drug seeking in rats and monkeys 1, 2. Reinstatement procedures have since been modified to study the role of environmental stimuli, including drug-associated cues and exposure to various forms of stress, in relapse to drug seeking 1, 3, 4.
Over the past 15 years, a major focus of the reinstatement literature has been on the role of stress in drug relapse. One of the most commonly used forms of stress for studying this relationship is acute exposures to mild, intermittent, electric footshocks. The ability of footshock stress to induce reinstatement of drug seeking was originally demonstrated by Shaham and colleagues (1995) in rats with a history of intravenous heroin SA5. Subsequently, the effect was generalized to rats with histories of intravenous cocaine, methamphetamine, and nicotine SA, as well as oral ethanol SA 3, 6.
Although footshock-induced reinstatement of drug seeking can be achieved reliably and robustly, it is an effect that tends to be sensitive to certain parametrical variables. These include the arrangement of extinction and reinstatement test sessions, the intensity and duration of footshock stress, and the presence of drug-associated cues during extinction and testing for reinstatement. Here we present a protocol for footshock-induced reinstatement of cocaine seeking that we have used with consistent success to study the relationship between stress and cocaine seeking.

Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the role of stress in relapse to drug seeking. Here, we report on a method for inducing the reinstatement of cocaine seeking in laboratory rats via acute exposures to mild, intermittent electric footshock.

Laboratuar Farelerinde Aradığınız Kokain Footshock Bağlı Yürürlüğe Girmesi incelenmesi için Usulü

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Preparation of Synaptoneurosomes from Mouse Cortex using a Discontinuous Percoll-Sucrose Density Gradient

Synaptoneurosomes (SNs) are obtained after homogenization and fractionation of mouse brain cortex. They are resealed vesicles or isolated terminals that break away from axon terminals when the cortical tissue is homogenized. The SNs retain pre- and postsynaptic characteristics, which makes them useful in the study of synaptic transmission. They retain the molecular machinery used in neuronal signaling and are capable of uptake, storage, and release of neurotransmitters.
The production and isolation of active SNs can be problematic using medias like Ficoll, which can be cytotoxic and require extended centrifugation due to high density, and filtration and centrifugation methods, which can result in low activity due to mechanical damage of the SNs. However, the use of discontinuous Percoll-sucrose density gradients to isolate SNs provides a rapid method to produce good yields of translationally active SNs. The Percoll-sucrose gradient method is quick and gentle as it employs isotonic conditions, has fewer and shorter centrifugation spins and avoids centrifugation steps that pellet SNs and cause mechanical damage.

A method to prepare translationally active, intact synaptoneurosomes (SNs) from mouse brain cortex is described. The method uses a discontinuous Percoll-sucrose density gradient allowing for the quick preparation of active SNs.

Süreksiz Percoll Sakkaroz Yoğunluk Gradient kullanarak Fare Cortex Synaptoneurosomes hazırlanması

Synaptoneurosomes (SNs) are obtained after homogenization and fractionation of mouse brain cortex. They are resealed vesicles or isolated terminals that ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the use of IUE for investigating behavior or neuropathology in the adult brain has been limited by insufficient methods for monitoring of IUE transfection success by non-invasive techniques in postnatal animals. 
 For the present study, E16 rats were used for IUE. After intraventricular injection of the nucleic acids into the embryos, positioning of the tweezer electrodes was critical for targeting either the developing cortex or the hippocampus. 
 Ventricular co-injection and electroporation of a luciferase gene allowed monitoring of the transfected cells postnatally after intraperitoneal luciferin injection in the anesthetized live P7 pup by in vivo bioluminescence, using an IVIS Spectrum device with 3D quantification software. 
 Area definition by bioluminescence could clearly differentiate between cortical and hippocampal electroporations and detect a signal longitudinally over time up to 5 weeks after birth. This imaging technique allowed us to select pups with a sufficient number of transfected cells assumed necessary for triggering biological effects and, subsequently, to perform behavioral investigations at 3 month of age. As an example, this study demonstrates that IUE with the human full length DISC1 gene into the rat cortex led to amphetamine hypersensitivity. Co-transfected GFP could be detected in neurons by post mortem fluorescence microscopy in cryosections indicating gene expression present at &ge;6 months after birth.
 We conclude that postnatal bioluminescence imaging allows evaluating the success of transient transfections with IUE in rats. Investigations on the influence of topical gene manipulations during neurodevelopment on the adult brain and its connectivity are greatly facilitated. For many scientific questions, this technique can supplement or even replace the use of transgenic rats and provide a novel technology for behavioral neuroscience.

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Genes can be manipulated during development of the cortex or the hippocampus of the rat via in utero electroporation (IUE) at E16, to enable fast and targeted modifications in neuronal connectivity for later studies of behavior or neuropathology in adult animals. Postnatal in vivo imaging for control of IUE success is performed by bioluminescence of activating co-transfected luciferase.

Topikal Transgenik Rats nesil tarafından<em&gt; Utero</em&gt; Elektroporasyon ve<em&gt; In vivo</em&gt; Biyoparlaklık Eleme

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Preparation of Synaptic Plasma Membrane and Postsynaptic Density Proteins Using a Discontinuous Sucrose Gradient

Neuronal subcellular fractionation techniques allow the quantification of proteins that are trafficked to and from the synapse. As originally described in the late 1960&#8217;s, proteins associated with the synaptic plasma membrane can be isolated by ultracentrifugation on a sucrose density gradient. Once synaptic membranes are isolated, the macromolecular complex known as the post-synaptic density can be subsequently isolated due to its detergent insolubility. The techniques used to isolate synaptic plasma membranes and post-synaptic density proteins remain essentially the same after 40 years, and are widely used in current neuroscience research. This article details the fractionation of proteins associated with the synaptic plasma membrane and post-synaptic density using a discontinuous sucrose gradient. Resulting protein preparations are suitable for western blotting or 2D DIGE analysis.

This article details the enrichment of proteins associated with the synaptic plasma membrane by ultracentrifugation on a discontinuous sucrose gradient. The subsequent preparation of post-synaptic density proteins is also described. Protein preparations are suitable for western blotting or 2D DIGE analysis.

Süreksiz Sukroz Degrade&#39;yi kullanma Sinaptik Plazma Membran ve postsinaptik Yoğunluk Proteinlerin Hazırlanması

Neuronal subcellular fractionation techniques allow the quantification of proteins that are trafficked to and from the synapse. As originally described in ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life. The cold plantar assay allows the objective and inexpensive assessment of cold sensitivity in mice, and can quantify both analgesia and hypersensitivity. Mice are acclimated on a glass plate, and a compressed dry ice pellet is held against the glass surface underneath the hindpaw. The latency to withdrawal from the cooling glass is used as a measure of cold sensitivity.
Cold sensation is also important for survival in regions with seasonal temperature shifts, and in order to maintain sensitivity animals must be able to adjust their thermal response thresholds to match the ambient temperature. The Cold Plantar Assay (CPA) also allows the study of adaptation to changes in ambient temperature by testing the cold sensitivity of mice at temperatures ranging from 30 &#176;C to 5 &#176;C. Mice are acclimated as described above, but the glass plate is cooled to the desired starting temperature using aluminum boxes (or aluminum foil packets) filled with hot water, wet ice, or dry ice. The temperature of the plate is measured at the center using a filament T-type thermocouple probe. Once the plate has reached the desired starting temperature, the animals are tested as described above.
This assay allows testing of mice at temperatures ranging from innocuous to noxious. The CPA yields unambiguous and consistent behavioral responses in uninjured mice and can be used to quantify both hypersensitivity and analgesia. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 &#176;C and 5 &#176;C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

Fareler Soğuk Hassasiyeti ve Uyum belirlenmesi için Basit ve ucuz Yöntem

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the experimental time, and increases the number of animals that are utilized per study. This limitation specifically impacts protocols such as calcium imaging that require prolonged pre-incubation with bath-applied dyes. Exponential bacterial growth within 3 - 4 h after slicing is tightly correlated with a decrease in tissue health. This study describes a method for&#160;limiting the proliferation of bacteria in acute preparations to maintain viable neuronal tissue for prolonged periods of time (&#62;24 h) without the need for antibiotics, sterile procedures, or tissue culture media containing growth factors. By cycling the extracellular fluid through UV irradiation and keeping the tissue in a custom holding chamber at 15 - 16 &#176;C, the tissue shows no difference in electrophysiological properties, or calcium signaling through intracellular calcium dyes at &#62;24 h postdissection. These methods will not only extend experimental time for those using acute neuronal tissue, but will reduce the number of animals required to complete experimental goals, and will set a gold standard for acute neuronal tissue incubation.

Once removed from the body, neuronal tissue is greatly affected by environmental conditions, leading to eventual degradation of the tissue after 6 - 8 h. Using a unique incubation method, which closely monitors and regulates the extracellular environment of the tissue, tissue viability can be significantly extended for &#62;24 h.

Elektrofizyoloji ve Kalsiyum-görüntüleme için akut nöronal Doku Uzamış İnkübasyon

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such as epilepsy and neurodegenerative disorders. However, it is technically difficult to obtain EEG recordings in neonates as it requires specialized handling and great care. Here, we present a novel method to record EEG in neonatal rat pups (P8-P15). We designed a simple and reliable electrode using computer pin loci; it can be easily implanted into the skull of a rat pup to record high-quality EEG signals in the normal and epileptic brain. Pups were given an intraperitoneal (i.p.) injection of the neurotoxin kainic acid (KA) to induce epileptic seizures. The surgical implantation performed in this procedure is less expensive than other EEG procedures for neonates. This method allows one to record high-quality and stable EEG signals for more than 1 week. Furthermore, this procedure can also be applied to adult rats and mice to study epilepsy or other neurological disorders.

Here, we introduce a novel technique designed to record electroencephalography (EEG) in freely moving neonatal epileptic pups and describe its procedures, features, and applications. This method allows one to record EEG for more than 1 week.

Yeni Bir Yöntemi Kullanarak Serbest Dolaşan Yenidoğan Sıçanlarında EEG Kaydı

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Touchscreen Sustained Attention Task (SAT) for Rats

Sustained attention is the ability to monitor intermittent and unpredictable events over a prolonged period of time. This attentional process subserves other aspects of cognition and is disrupted in certain neurodevelopmental, neuropsychiatric, and neurodegenerative disorders. Thus, it is clinically important to identify mechanisms that impair and improve sustained attention. Such mechanisms are often first discovered using rodent models. Therefore, several behavior procedures for testing aspects of sustained attention have been developed for rodents. One, first described by McGaughy and Sarter (1995), called the sustained attention task (SAT), trains rats to distinguish between signal (i.e., brief light presentation) and non-signal trials. The signals are short and thus require careful attention to be perceived. Attentional demands can be increased further by introducing a distractor (e.g., flashing houselight). We have modified this task for touchscreen operant chambers, which are configured with a touchscreen on one wall that can present stimuli and record responses. Here we detail our protocol for SAT in touchscreen chambers. Additionally, we present standard measures of performance in male and female Sprague-Dawley rats. Comparable performance on this task in both sexes highlights its use for attention studies, especially as more researchers are including female rodents in their experimental design. Moreover, the easy implementation of SAT for the increasingly popular touchscreen chambers increases its utility.

Touchscreen Sustained Attention Task SAT for Rats

Sustained attention, or continuously monitoring situations for intermittent and unpredictable events, is a critical aspect of cognition. Here we detail how to test sustained attention in rats using touchscreen operant chambers. We demonstrate comparable performance in male and female rats, making this task useful for studying attention in both sexes.

Dokunmatik ekran sürekli dikkat görev (sıçanlara SAT)

Sustained attention is the ability to monitor intermittent and unpredictable events over a prolonged period of time. This attentional process subserves ...