Die Produktion dieses Manuskript und Video wurde von National Institute on Drug Abuse / National Institutes of Health gewähren R15 DA016285-02, der Western Washington University Biomedical Research Activities in Neuroscience Initiative und Western Washington University unterstützt.

1. Tierische Themen <ol><li> Männlich Long-Evans-Ratten sind 3 Monate alt bei Beginn der Studie. Ratten sind Simonsen-derived (Gilroy, Kalifornien, USA) gezüchtet in der Western Washington University Vivarium und werden einzeln auf einem 12-h rückwärts Tag / Nacht-Zyklus (Lichter aus in 0700) mit Purina Mills Inc. Mazuri Nager Pellets (Gray Summit untergebracht , MO, USA) und Wasser ad libitum zur Verfügung. </li><li> Alle Ausbildung und Prüfung findet zwischen 0900-1300 mit Kohorten von Ratten immer ausgebildet und geprüft gleichzeitig täglich. </li><li> Ratten sind gewogen jeden Montag, Mittwoch und Freitag für die Dauer der Studie. </li><li> Unmittelbar vor der Trainingsphase werden Ratten von Wasser für ca. 20 h beraubt zu Saccharose Selbstverwaltung am ersten Tag der Ausbildung zu fördern. </li></ol> 2. Behavioral Procedures Alle operante Verhaltenstherapie Verfahren verwenden Standard operante Konditionierung Kammern (Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA) mit einer Infusionspumpe (Razel Scientific Instruments, St. Albans, VT, USA) auf der jeweils operante Konditionierung Kammer. Operante Konditionierung Kammern sind in geschlossenen schallschwächende Schränke mit Ventilatoren (Western Washington University, USA). Alle experimentellen Bedingungen und die Datenerhebung durch Med PC IV-Software (Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA) kontrolliert. Operante Konditionierung Kammern (30 x 20 x 24 cm) enthalten zwei Hebel (einer stationären und einer versenkbaren), ein Klangerzeuger, ein weißer Stimulus Licht über dem einziehbaren Hebel, und ein rotes Haus Licht an der gegenüberliegenden Wand. Die Infusionspumpe liefert Saccharose in eine Belohnung Behälter auf der rechten Seite des aktiven Hebel. Hebel sind 10 cm aus dem Netz Boden. Vier Infrarot-photobeams kreuz und quer durch jede Kammer. Der vordere Balken sind jeweils 10,5 cm von den Seitenwänden und die Längsträger jeweils 6 cm von den Seitenwänden. Jeder Strahl ist 4,5 cm oberhalb des Edelstahl-bar Stock. Die Balken einere gesetzt, die Anzahl der vollständigen Pausen zählen. Die Gesamtzahl der Strahl Pausen während des Trainings und Verlangen Testing aufgenommen. Mit Ausnahme von Wasser Einschränkung vor der ersten Trainingseinheit werden Ratten Futter und Wasser ad libitum sowohl in Käfige und in die operante Konditionierung Kammern vorgesehen. Die Kammern sind in einem speziellen Prüfraum, dass, wie mit dem Vivarium, befindet sich auf einem Rückfahrscheinwerfer Zyklus. Ratten sind in Käfige zwischen den Zimmern auf einem Wagen, der mit lichtundurchlässigen Stoff bespannt transportiert wird. Am Ende jeder Sitzung werden Ratten zu Hause Käfige zurück. Es gibt drei Phasen, die typischen Experiment: Training, erzwungene Enthaltsamkeit und Testen. Testing wird die Sitzung, bei Verlangen beurteilt wird. Wir bewerten Begierde in zwei allgemeine Testverfahren, je nach Studie. Diese beiden Verfahren sind in den Abschnitten 2.3.1 und 2.3.2 beschrieben. <ol><li> Training <ol><li> In den typischen Experiment verbringen Ratten 2 h / Tag für10 aufeinander folgenden Tagen in operante Konditionierung Kammern, wo sie erlaubt, die versenkbare (aktiv) Hebel für eine 0,2 ml Lieferung von 10% Saccharose-Lösung in den Behälter auf der rechten Seite des Hebels drücken sind. </li><li> Diese Reaktion aktiviert auch eine Verbindung Stimulus, bestehend aus einem Ton (2 kHz, 15 dB über Umgebungslärm) und das weiße Licht. Die Verbindung Reiz dauert 5 s und wird von einem 40-s time out, gefolgt, während der drückt auf den aktiven Hebel aufgezeichnet werden, haben aber keine programmierten Folge. </li><li> Eine Antwort auf die inaktiven (stationär) Hebel hat keine programmierte Folge, sondern drückt werden aufgezeichnet. Die Zahl der Balken bricht während Training und Testing aufgenommen. Alle Reaktions-und Bewegungsapparates Maßnahmen werden als Zeit-Verläufe (2 Minuten bins) erfasst, sind aber meist als Gesamtwerte pro Sitzung berichtet. </li></ol></li><li> Erzwungene Enthaltsamkeit. Rats bleiben in Käfige für die Dauer von Zwangs-Abstinenz. Die typische erzwungene Enthaltsamkeit Perioden wir benutzen, sind an Ratten th getestet habene Tag direkt nach dem letzten Tag der Ausbildung (Tag 1 von Zwangs-Abstinenz) oder 30 Tage nach dem letzten Tag der Ausbildung (Tag 30 der erzwungenen Abstinenz). </li><li> Testen <ol><li> Extinction ohne Cues. In diesem Prüfverfahren, Ratten zunächst erlaubt, die aktive Hebel in identischen Bedingungen Training mit der Ausnahme, dass die Antwort keine Konsequenzen und die Dauer der Sitzung hat Presse ist 1 h. Rats Erfahrung mindestens sechs dieser vom Aussterben Sitzungen auf dem Test-Tag. Jeder Aussterben Sitzung wird von einem Zeitraum von 5 Minuten, wo die aktive Hebel zurückgezogen und das Haus ist Licht ausgeschaltet wird getrennt. &quot;Extinction&quot; ist indiziert, wenn aktive Hebel reagiert auf weniger als 20 Pressen / h. wurde reduziert Einige Ratten benötigen eine siebte Sitzung. Die nächste Sitzung (nach weiteren 5 Minuten Verspätung) ist der Test-Session, wo Ratten dann kann der Ton drücken + Licht Fingerzeig, dass zunächst mit jeder Lieferung von Saccharose während des Trainings war gepaart. </li><li> Extinction mit Hinweisen. In diesem abkürzend Prüfverfahren, Ratten dürfen die aktiven Hebel in identischen Bedingungen zu Training, außer dass Saccharose nicht zugestellt drücken. </li></ol></li><li> Inaktive Hebel drücken wird als Maß der Hebel Diskriminierung eingesetzt. Es ist auch, zusammen mit photobeam Pausen, als Maß der unspezifischen motorischen Aktivierung. Motorische vs motivationalen Veränderungen erschweren die Interpretation der Begierde Verhalten. Die inaktiven Hebel reagiert und photobeam Pause Daten sind nützlich bei der Klärung Motors vs Motivation Beiträge zur Sucht, ebenso wie Vergleichsgruppen in pharmakologischen Studien, in denen Ratten reagieren mit einer hohen Rate für Saccharose oder anderen Lebensmitteln mit einem potenziellen Sucht beeinflussen Verbindung in Frage gestellt werden (zB 7 , 8). </li></ol> 3. Vertreter Manipulationen an Saccharose Craving nach Variable Zeiten der erzwungene Enthaltsamkeit Affect Die allgemeine hier beschriebene Methode bietet eine Möglichkeit, die Verhaltens-und Neurobiologie Bestimmung Sondents des Verlangens nach der variable Zeiträume erzwungene Enthaltsamkeit. Hier beschriebenen Methoden in Bezug auf repräsentative Ergebnisse in Abschnitt 4 zur Verfügung gestellt. <ol><li> Sättigung. Einige Ratten erhielten Flaschen 10% Saccharose in ihre Käfige für die 17 h unmittelbar vor der Prüfung 8. Ratten in dieser Studie wurden mit dem Extinction ohne Hinweise Verfahren. </li><li> Environmental Enrichment. Während der erzwungenen Abstinenz-Zeitraum blieb einige Ratten in individuelle Gehäuse (Controls), während andere in eine große verschoben wurden (36 &quot;Breite x 20&quot; Tiefe x 40 &quot;height; Qualität Cage Produkte, Portland, OR, USA) Käfig mit drei Kohorten (angereichert). Die Enriched Tiere hatten mehrere Spielzeuge in ihrer Umgebung, einschließlich PVC-Schlauch und waren auch da neue Spielzeuge jedes M, W, F 10. Ratten in dieser Studie getestet wurden, mit dem Extinction ohne Hinweise Verfahren. </li><li> Pharmakologische Herausforderung. Am Testtag wurden Ratten vorbehandelt mit einer Dosis des Dopamin-D1-Antagonisten SCH 23390. Ratten in dieser Studie were unter Verwendung des Extinction mit Hinweisen Verfahren. </li></ol> 4. Repräsentative Ergebnisse: <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig1.jpg" /> Abbildung 1 Representative Training und Testing für eine Inkubationszeit von Saccharose Verlangen zu experimentieren. Die Datenpunkte zeigen Mittelwerte ± SEM. Gruppengröße für Abbildung 1a ist 77 Ratten und Abbildung 1b Gruppe Größen reichten von 11 bis 12 pro Gruppe. * Signifikanter Unterschied von Tag 1 Gruppe, p &lt;0,05. Diese Zahl ist aus den Daten in 8 mit freundlicher Genehmigung des Springer angepasst. <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig2.jpg" /> Abbildung 2: Wirkung von Saccharose Sättigung auf Saccharose Verlangen nach 1 oder 30 Tagen erzwungene Enthaltsamkeit. Gruppe Größen sind 8-9 pro Gruppe. * Signifikanter Unterschied von Tag 1 Gruppe, † signifikanter Unterschied Kontrollgruppe, p &lt;0,05. Diese Zahl ist angepasstvon 9 mit freundlicher Genehmigung von Elsevier. <img alt="Abbildung 3" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig3.jpg" /> Abbildung 3 Ein Monat Anreicherung der Umwelt reduziert Saccharose Begierde. Gruppe Größen sind jeweils 8 Ratten. * Signifikanter Unterschied von Tag 1, † signifikanter Unterschied Kontrollgruppe, p &lt;0,05. Diese Zahl ist von 10 mit freundlicher Genehmigung von Wolters Kluwer Health angepasst. <img alt="Abbildung 4" src="/files/ftp_upload/3335/3335fig4.jpg" /> Abbildung 4 Systemische SCH 23390 zurückgegangen Saccharose Lust auf mehr effektiv nach einem Tag der erzwungenen Abstinenz. Gruppe Größen 8-12 Gruppe. * Signifikanter Unterschied von Tag 1 Gruppe, † signifikanter Unterschied zwischen 0 und Dosis-Gruppe, p &lt;0,05. Diese Zahl ist von 8 mit freundlicher Genehmigung von Springer angepasst. <ol><li> Abbildung 1 zeigt repräsentative Ausbildung und Prüfung von Daten für Ratten selbst verwalten Saccharose (Abbildung1 TOP) und dann reagiert in Extinction mit der Saccharose-gepaart Cue zur Verfügung (Abbildung 1 unten). Wie gezeigt, Ratten selektiv reagieren auf die aktive Hebel während des Trainings und während der Prüfung. Interessanterweise inaktiv reagiert und Bewegungsaktivität zeigen einige Inkubation, obwohl der Effekt ist robust im aktiven Hebel reagiert. </li><li> Abbildung 2 zeigt den Effekt der Sättigung mit Saccharose auf Saccharose Verlangen nach 1 oder 30 Tagen erzwungene Enthaltsamkeit. Sättigung reduziert Extinction ohne Hinweise reagiert, nachdem entweder Periode der erzwungenen Abstinenz, sondern nur reduziert reagiert für die Saccharose-Cue allein in Ratten, die nur einen Tag der erzwungenen Abstinenz hatte. </li><li> Wie in Abbildung 3 dargestellt, reduzierte Anreicherung der Umwelt inkubiert Extinction ohne cue reagiert und die Reaktion für die Saccharose-Cue-alone Verhaltensweisen auf ein Niveau nach nur einem Tag der erzwungenen Abstinenz gefunden. </li><li> Abbildung 4 zeigt eine Abstinenz-abhängige Wirkung von SCH 23390 auf Extinction mit Hinweisen reagiert. SCH 23390 wurde am effective zur Reduzierung Saccharose Verlangen nach 1, V. 30, Tage der erzwungenen Abstinenz. </li></ol>

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	<li>Sobik, L., Hutchison, K., Craighead, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cue-elicited+craving+for+food:+a+fresh+approach+to+the+study+of+binge+eating.">Cue-elicited craving for food: a fresh approach to the study of binge eating.</a> Appetite. 44, 253-2561 (2005).</li><li>Geiger, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficits+of+mesolimbic+dopamine+neurotransmission+in+rat+dietary+obesity.">Deficits of mesolimbic dopamine neurotransmission in rat dietary obesity.</a> Neuroscience. 159, 1193-1199 (2009).</li><li>Grimm, J. W., Olmstead, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Craving In Animal Models of Drug Addiction. , 311-336 (2011).</li><li>Grimm, J. W., Kruzich, P. J., See, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contingent+access+to+stimuli+associated+with+cocaine+self-administration+is+required+for+reinstatement+of+drug-seeking+behavior.">Contingent access to stimuli associated with cocaine self-administration is required for reinstatement of drug-seeking behavior.</a> Psychobiology. 28, 383-386 (2000).</li><li>Bossert, J. M., Ghitza, U. E., Lu, L., Epstein, D. H., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobiology+of+relapse+to+heroin+and+cocaine+seeking:+an+update+and+clinical+implications.">Neurobiology of relapse to heroin and cocaine seeking: an update and clinical implications.</a> Eur. J. Pharmacol. 526, 36-50 (2005).</li><li>Bossert, J. M., Poles, G. C., Wihbey, K. A., Koya, E., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+blockade+of+dopamine+D1-family+receptors+in+nucleus+accumbens+core+or+shell+on+reinstatement+of+heroin+seeking+induced+by+contextual+and+discrete+cues.">Differential effects of blockade of dopamine D1-family receptors in nucleus accumbens core or shell on reinstatement of heroin seeking induced by contextual and discrete cues.</a> J. Neurosci. 27, 12655-12663 (2007).</li><li>Grimm, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+systemic+or+nucleus+accumbens-directed+dopamine+D1+receptor+antagonism+on+sucrose+seeking+in+rats.">Effects of systemic or nucleus accumbens-directed dopamine D1 receptor antagonism on sucrose seeking in rats.</a> Psychopharmacology (Berl). , (2011).</li><li>Grimm, J. W., Fyall, A. M., Osincup, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incubation+of+sucrose+craving:+effects+of+reduced+training+and+sucrose+pre-loading.">Incubation of sucrose craving: effects of reduced training and sucrose pre-loading.</a> Physiol Behav. 84, 73-79 (2005).</li><li>Grimm, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+enrichment+attenuates+cue-induced+reinstatement+of+sucrose+seeking+in+rats.">Environmental enrichment attenuates cue-induced reinstatement of sucrose seeking in rats.</a> Behav Pharmacol. 19, 777-785 (2008).</li><li>Shaham, Y., Shalev, U., Lu, L., De Wit, H., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reinstatement+model+of+drug+relapse:+history,+methodology+and+major+findings.">The reinstatement model of drug relapse: history, methodology and major findings.</a> Psychopharmacology (Berl). 168, 3-20 (2003).</li><li>Childress, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbic+activation+during+cue-induced+cocaine+craving.">Limbic activation during cue-induced cocaine craving.</a> Am J Psychiatry. 156, 11-18 (1999).</li><li>Gearhardt, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+Correlates+of+Food+Addiction.">Neural Correlates of Food Addiction.</a> Arch. Gen. Psychiatry. , (2011).</li><li>Markou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+drug+craving.">Animal models of drug craving.</a> Psychopharmacology (Berl). 112, 163-182 (1993).</li><li>Phillips, R. G., LeDoux, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+contribution+of+amygdala+and+hippocampus+to+cued+and+contextual+fear+conditioning.">Differential contribution of amygdala and hippocampus to cued and contextual fear conditioning.</a> Behav. Neurosci. 106, 274-285 (1992).</li><li>Holland, P. C., Bouton, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampus+and+context+in+classical+conditioning.">Hippocampus and context in classical conditioning.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 9, 195-202 (1999).</li><li>Epstein, D. H., Preston, K. L., Stewart, J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+model+of+drug+relapse:+an+assessment+of+the+validity+of+the+reinstatement+procedure.">Toward a model of drug relapse: an assessment of the validity of the reinstatement procedure.</a> Psychopharmacology (Berl). 189, 1-16 (2006).</li><li>Kupferschmidt, D. A., Brown, Z. J., Erb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Procedure+for+Studying+the+Footshock-Induced+Reinstatement+of+Cocaine+Seeking+in+Laboratory+Rats.">A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats.</a> J. Vis. Exp. (47), (2011).</li></ol>

Alle Verfahren die Richtlinien befolgt, in den &quot;Principles of Laboratory Animal Care&quot; (NIH Publikation Nr.. 86 bis 23) beschrieben und wurden von der Western Washington University Institutional Animal Care und Verwenden Committee genehmigt.

Die Verfahren, die wir hier beschreiben, könnte als Wiedereinsetzung Verfahren identifiziert werden, obwohl dies technisch ungenau als Hebel drücken für den Cue ist nicht ausgelöscht vor der Begierde Testfahrten. In einem typischen Wiedereinsetzung Verfahren, reagiert mit Belohnung gepaart Cues gelöscht und dann &quot;wieder&quot; mit der Verabreichung einer nicht-kontingent Präsentation der Belohnung (Priming-induzierte Wiedereinsetzung) oder einen Stressor wie Fußschock (Stress-induzierte Wiederherstellung) <su...

<table border="1"><tbody><tr><td> Artikel </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> Enrichment Cage </td><td> Qualität Cage Unternehmen </td><td> FH-36 ½ T-N </td></tr><tr><td> Operante Kammer </td><td> Med Associates </td><td> MED-008-CT-B3 </td></tr><tr><td> SCH 23390 </td><td> Sigma </td><td> D054 </td></tr></tbody></table>

a general method for evaluating incubation of sucrose craving in rats

Für jemanden, der auf einem Nahrungsmittel-Diät, Esssucht in Reaktion auf Lebensmittel-gekoppelten Signale können als Schlüssel Verhaltensstörungen Übergang zwischen Abstinenz und Rückfall in Essen unter 1 dienen. Lebensmittel Verlangen auf diese Weise konzipiert ist verwandt mit Drogenverlangen in Reaktion auf Drogen gepaart Cues. Eine reiche Literatur gibt es schon das Verständnis des Verhaltens-und neurobiologischen Determinanten der Gier nach Drogen entwickelt worden, wir und andere haben erst vor kurzem mit Schwerpunkt auf der Übersetzung Techniken von der Grundlagenforschung Suchtforschung besser zu verstehen, Sucht-ähnliche Verhalten in Bezug auf Nahrung 2-4. Wie in früheren Studien mit Craving getan, untersuchen wir Saccharose Verlangen Verhalten durch die Verwendung eines Ratten-Modell für einen Rückfall. In diesem Modell, Ratten selbst verabreichen entweder Drogen oder Essen in Sitzungen über mehrere Tage. In einer Sitzung, liefert Hebel reagiert die Belohnung mit einem Ton + Lichtreiz. Craving Verhalten wird dann operativ als Reaktion in einem definiertenanschließenden Sitzung, wo die Belohnung ist nicht verfügbar. Rats zuverlässig auf den Ton zu reagieren + Lichtreiz, wahrscheinlich aufgrund seiner erworbenen konditionierten verstärkenden Eigenschaften 5. Dieses Verhalten wird manchmal auch als Saccharose suchen oder Cue-Reaktivität bezeichnet. In der gegenwärtigen Diskussion werden wir verwenden den Begriff &quot;Saccharose Begierde&quot;, diese beiden Konstrukte zu subsumieren. In den letzten zehn Jahren haben wir, wie die Länge der Zeit nach der Belohnung Selbstverwaltung Einflüsse Belohnung Verlangen konzentriert. Interessanterweise erhöhen Ratten reagieren auf die Belohnung gepaart Cue im Laufe von mehreren Wochen für einen Zeitraum von Zwangs-Abstinenz. Diese &quot;Inkubationszeit des Verlangens&quot; ist in Ratten, die selbst verwalteten entweder in Lebensmitteln oder Drogen 4,6 beobachtet haben. Diese zeitabhängige Zunahme der Begierde wir im Tiermodell identifiziert haben können haben ein großes Potential für den Menschen, Drogen-und Esssucht Verhaltensweisen. Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Beurteilung der Inkubation von Sucrose Verlangen in Ratten. Varianten des Verfahrens wird angegeben, wo Sehnsucht als Reaktion auf eine diskrete Saccharose-gepaart Cue folgenden Aussterben der Hebel drücken innerhalb der Saccharose Selbstverwaltung Kontext (Extinction ohne Cues) oder als Reaktion auf Saccharose-gekoppelten Signale in eine allgemeine Aussterben Kontext beurteilt werden (Extinction mit Hinweisen).

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A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

Als Reaktion auf Lebensmittel oder Arzneimittel-gepaart Hinweise nimmt im Laufe einer Periode der Abstinenz und dies kann zu einer erhöhten Anfälligkeit für Rückfälle Verhaltensweisen beziehen. Hier haben wir detailliert ein Verfahren zur Bewertung dieser &quot;Inkubationszeit der Begierde&quot; in Ratten, die selbst verwalteten Saccharose haben.

Eine allgemeine Methode zur Bewertung der Inkubation von Saccharose Craving in Ratten

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.2K Aufrufe.  Western Washington University. Als Reaktion auf Lebensmittel oder Arzneimittel-gepaart Hinweise nimmt im Laufe einer Periode der Abstinenz und dies kann zu einer erhöhten Anfälligkeit für Rückfälle Verhaltensweisen beziehen. Hier haben wir detailliert ein Verfahren zur Bewertung dieser "Inkubationszeit der Begierde" in Ratten, die selbst verwalteten Saccharose haben.

Serie: A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

A Simple Composite Phenotype Scoring System for Evaluating Mouse Models of Cerebellar Ataxia

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebella ataxia. It is derived from previously published phenotype assessments in several disease models, including spinocerebellar ataxias, Huntington s disease and spinobulbar muscular atrophy. Measures include hind limb clasping, ledge test, gait and kyphosis. Each measure is recorded on a scale of 0-3, with a combined total of 0-12 for all four measures. The results effectively discriminate between affected and non-affected individuals, while also quantifying the temporal progression of neurodegenerative disease phenotypes. Measures may be analyzed individually or combined into a composite phenotype score for greater statistical power. The ideal combination of the four described measures will depend upon the disorder in question. We present an example of the protocol used to assess disease severity in a transgenic mouse model of spinocerebellar ataxia type 7 (SCA7).
Albert R. La Spada and Gwenn A. Garden contributed to this manuscript equally.

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebellar ataxia. Measures include hind limb clasping, ledge test, gait and kyphosis. This protocol effectively discriminates between affected and non-affected individuals, and detects the progression of affected individuals over time.

Eine einfache Composite-Phänotyp Scoring System für die Beurteilung von Mausmodellen zerebelläre Ataxie

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebella ataxia. It is derived from previously ...

Forschung

Neurowissenschaften

The Vermicelli and Capellini Handling Tests: Simple quantitative measures of dexterous forepaw function in rats and mice

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended upon this work to develop a simple quantitative measure of forepaw dexterity that is sensitive to lateralized impairments and age-dependent changes. Rodents learn skillful forepaw and digit movements to manage thin pasta pieces, which they eagerly consume. We have previously described methods for quantifying vermicelli handling in rats and showed that the measures are very sensitive to forelimb impairments resulting from unilateral ischemic lesions, middle cerebral artery occlusions and unilateral striatal dopamine depletion [Allred, R.P., Adkins, D.L., Woodlee, M.T., Husbands, L.C., Maldonado M.A., Kane, J.R., Schallert, T. &amp; Jones, T.A. The Vermicelli Handling Test: a simple quantitative measure of dexterous forepaw function in rats. J. Neurosci. Methods 170, 229-244 (2008)]. Here we present a more detailed protocol for this test in rats and compare it with a newly developed version for mice, the Capellini Handling Test. Rats and mice are videotaped while handling short lengths of uncooked vermicelli or capellini pasta, respectively, with a camera positioned to optimize the view of paw movements. Slow motion video playback allows for the identification of forepaw adjustments, defined as any distinct removal and replacement of the paw, or of any number of digits, on the pasta piece after eating commences. Forepaw adjustments per piece are averaged over trials per each testing session. Repeated testing permits sensitive quantitative analysis of changes in forepaw dexterity over time. Protocols for pre-testing habituation and handling practice, as well as procedures for characterizing atypical handling patterns, are described. Because rats and mice perform the pasta handling tests slightly differently, species-specific differences in administration and scoring of these tests are highlighted. All animal use was in accordance with protocols approved by the University of Texas at Austin Animal Care and Use Committee.

The Vermicelli and Capellini Handling Tests of forepaw dexterity take advantage of the natural inclination of rodents to manipulate food items using skillful forepaw and digit movements. Animals are videotaped while handling short strands of uncooked dry pasta. Slow motion video playback allows for the quantification of forepaw adjustments.

Die Vermicelli und Capellini Handhabung Tests: Einfache quantitative Maßnahmen der geschickten Vorderpfote Funktion bei Ratten und Mäusen

Previous characterizations of rodent eating behavior have revealed that they use coordinated forepaw movements to manipulate food pieces. We have extended ...

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse. Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the neurobiology and phenomenology of relapse to drug use. Although procedural variations have emerged over the past several decades, the most conventional reinstatement procedures are based on the drug self-administration (SA) model. In this model, an animal is trained to perform an operant response to obtain drug. Subsequently, the behavior is extinguished by withholding response-contingent reinforcement. Reinstatement of drug seeking is then triggered by a discrete event, such as an injection of the training drug, re-exposure to drug-associated cues, or exposure to a stressor 1.
Reinstatement procedures were originally developed to study the ability of acute non-contingent exposure to the training drug to reinstate drug seeking in rats and monkeys 1, 2. Reinstatement procedures have since been modified to study the role of environmental stimuli, including drug-associated cues and exposure to various forms of stress, in relapse to drug seeking 1, 3, 4.
Over the past 15 years, a major focus of the reinstatement literature has been on the role of stress in drug relapse. One of the most commonly used forms of stress for studying this relationship is acute exposures to mild, intermittent, electric footshocks. The ability of footshock stress to induce reinstatement of drug seeking was originally demonstrated by Shaham and colleagues (1995) in rats with a history of intravenous heroin SA5. Subsequently, the effect was generalized to rats with histories of intravenous cocaine, methamphetamine, and nicotine SA, as well as oral ethanol SA 3, 6.
Although footshock-induced reinstatement of drug seeking can be achieved reliably and robustly, it is an effect that tends to be sensitive to certain parametrical variables. These include the arrangement of extinction and reinstatement test sessions, the intensity and duration of footshock stress, and the presence of drug-associated cues during extinction and testing for reinstatement. Here we present a protocol for footshock-induced reinstatement of cocaine seeking that we have used with consistent success to study the relationship between stress and cocaine seeking.

Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the role of stress in relapse to drug seeking. Here, we report on a method for inducing the reinstatement of cocaine seeking in laboratory rats via acute exposures to mild, intermittent electric footshock.

Ein Verfahren zur Untersuchung der Fußschock-Induced Wiedereinsetzung von Kokain suche in Laborratten

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Preparation of Synaptoneurosomes from Mouse Cortex using a Discontinuous Percoll-Sucrose Density Gradient

Synaptoneurosomes (SNs) are obtained after homogenization and fractionation of mouse brain cortex. They are resealed vesicles or isolated terminals that break away from axon terminals when the cortical tissue is homogenized. The SNs retain pre- and postsynaptic characteristics, which makes them useful in the study of synaptic transmission. They retain the molecular machinery used in neuronal signaling and are capable of uptake, storage, and release of neurotransmitters.
The production and isolation of active SNs can be problematic using medias like Ficoll, which can be cytotoxic and require extended centrifugation due to high density, and filtration and centrifugation methods, which can result in low activity due to mechanical damage of the SNs. However, the use of discontinuous Percoll-sucrose density gradients to isolate SNs provides a rapid method to produce good yields of translationally active SNs. The Percoll-sucrose gradient method is quick and gentle as it employs isotonic conditions, has fewer and shorter centrifugation spins and avoids centrifugation steps that pellet SNs and cause mechanical damage.

A method to prepare translationally active, intact synaptoneurosomes (SNs) from mouse brain cortex is described. The method uses a discontinuous Percoll-sucrose density gradient allowing for the quick preparation of active SNs.

Vorbereitung der Synaptoneurosomen von Maus Cortex mit einem diskontinuierlichen Percoll-Saccharose-Dichtegradienten

Synaptoneurosomes (SNs) are obtained after homogenization and fractionation of mouse brain cortex. They are resealed vesicles or isolated terminals that ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the use of IUE for investigating behavior or neuropathology in the adult brain has been limited by insufficient methods for monitoring of IUE transfection success by non-invasive techniques in postnatal animals. 
 For the present study, E16 rats were used for IUE. After intraventricular injection of the nucleic acids into the embryos, positioning of the tweezer electrodes was critical for targeting either the developing cortex or the hippocampus. 
 Ventricular co-injection and electroporation of a luciferase gene allowed monitoring of the transfected cells postnatally after intraperitoneal luciferin injection in the anesthetized live P7 pup by in vivo bioluminescence, using an IVIS Spectrum device with 3D quantification software. 
 Area definition by bioluminescence could clearly differentiate between cortical and hippocampal electroporations and detect a signal longitudinally over time up to 5 weeks after birth. This imaging technique allowed us to select pups with a sufficient number of transfected cells assumed necessary for triggering biological effects and, subsequently, to perform behavioral investigations at 3 month of age. As an example, this study demonstrates that IUE with the human full length DISC1 gene into the rat cortex led to amphetamine hypersensitivity. Co-transfected GFP could be detected in neurons by post mortem fluorescence microscopy in cryosections indicating gene expression present at &ge;6 months after birth.
 We conclude that postnatal bioluminescence imaging allows evaluating the success of transient transfections with IUE in rats. Investigations on the influence of topical gene manipulations during neurodevelopment on the adult brain and its connectivity are greatly facilitated. For many scientific questions, this technique can supplement or even replace the use of transgenic rats and provide a novel technology for behavioral neuroscience.

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Genes can be manipulated during development of the cortex or the hippocampus of the rat via in utero electroporation (IUE) at E16, to enable fast and targeted modifications in neuronal connectivity for later studies of behavior or neuropathology in adult animals. Postnatal in vivo imaging for control of IUE success is performed by bioluminescence of activating co-transfected luciferase.

Erzeugung von Aktuell transgenen Ratten durch<em&gt; In utero</em&gt; Elektroporation und<em&gt; In-vivo-</em&gt; Biolumineszenz Screening

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Preparation of Synaptic Plasma Membrane and Postsynaptic Density Proteins Using a Discontinuous Sucrose Gradient

Neuronal subcellular fractionation techniques allow the quantification of proteins that are trafficked to and from the synapse. As originally described in the late 1960&#8217;s, proteins associated with the synaptic plasma membrane can be isolated by ultracentrifugation on a sucrose density gradient. Once synaptic membranes are isolated, the macromolecular complex known as the post-synaptic density can be subsequently isolated due to its detergent insolubility. The techniques used to isolate synaptic plasma membranes and post-synaptic density proteins remain essentially the same after 40 years, and are widely used in current neuroscience research. This article details the fractionation of proteins associated with the synaptic plasma membrane and post-synaptic density using a discontinuous sucrose gradient. Resulting protein preparations are suitable for western blotting or 2D DIGE analysis.

This article details the enrichment of proteins associated with the synaptic plasma membrane by ultracentrifugation on a discontinuous sucrose gradient. The subsequent preparation of post-synaptic density proteins is also described. Protein preparations are suitable for western blotting or 2D DIGE analysis.

Vorbereitung der synaptischen Plasmamembran und Postsynaptische Dichte Proteinen mit einer diskontinuierlichen Saccharosegradienten

Neuronal subcellular fractionation techniques allow the quantification of proteins that are trafficked to and from the synapse. As originally described in ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life. The cold plantar assay allows the objective and inexpensive assessment of cold sensitivity in mice, and can quantify both analgesia and hypersensitivity. Mice are acclimated on a glass plate, and a compressed dry ice pellet is held against the glass surface underneath the hindpaw. The latency to withdrawal from the cooling glass is used as a measure of cold sensitivity.
Cold sensation is also important for survival in regions with seasonal temperature shifts, and in order to maintain sensitivity animals must be able to adjust their thermal response thresholds to match the ambient temperature. The Cold Plantar Assay (CPA) also allows the study of adaptation to changes in ambient temperature by testing the cold sensitivity of mice at temperatures ranging from 30 &#176;C to 5 &#176;C. Mice are acclimated as described above, but the glass plate is cooled to the desired starting temperature using aluminum boxes (or aluminum foil packets) filled with hot water, wet ice, or dry ice. The temperature of the plate is measured at the center using a filament T-type thermocouple probe. Once the plate has reached the desired starting temperature, the animals are tested as described above.
This assay allows testing of mice at temperatures ranging from innocuous to noxious. The CPA yields unambiguous and consistent behavioral responses in uninjured mice and can be used to quantify both hypersensitivity and analgesia. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 &#176;C and 5 &#176;C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

Eine einfache und kostengünstige Methode zur Bestimmung der Überempfindlichkeit auf Kälte und Anpassung an der Maus

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the experimental time, and increases the number of animals that are utilized per study. This limitation specifically impacts protocols such as calcium imaging that require prolonged pre-incubation with bath-applied dyes. Exponential bacterial growth within 3 - 4 h after slicing is tightly correlated with a decrease in tissue health. This study describes a method for&#160;limiting the proliferation of bacteria in acute preparations to maintain viable neuronal tissue for prolonged periods of time (&#62;24 h) without the need for antibiotics, sterile procedures, or tissue culture media containing growth factors. By cycling the extracellular fluid through UV irradiation and keeping the tissue in a custom holding chamber at 15 - 16 &#176;C, the tissue shows no difference in electrophysiological properties, or calcium signaling through intracellular calcium dyes at &#62;24 h postdissection. These methods will not only extend experimental time for those using acute neuronal tissue, but will reduce the number of animals required to complete experimental goals, and will set a gold standard for acute neuronal tissue incubation.

Once removed from the body, neuronal tissue is greatly affected by environmental conditions, leading to eventual degradation of the tissue after 6 - 8 h. Using a unique incubation method, which closely monitors and regulates the extracellular environment of the tissue, tissue viability can be significantly extended for &#62;24 h.

Längerer Inkubation von Akute neuronales Gewebe für Elektrophysiologie und Calcium-Bildgebung

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such as epilepsy and neurodegenerative disorders. However, it is technically difficult to obtain EEG recordings in neonates as it requires specialized handling and great care. Here, we present a novel method to record EEG in neonatal rat pups (P8-P15). We designed a simple and reliable electrode using computer pin loci; it can be easily implanted into the skull of a rat pup to record high-quality EEG signals in the normal and epileptic brain. Pups were given an intraperitoneal (i.p.) injection of the neurotoxin kainic acid (KA) to induce epileptic seizures. The surgical implantation performed in this procedure is less expensive than other EEG procedures for neonates. This method allows one to record high-quality and stable EEG signals for more than 1 week. Furthermore, this procedure can also be applied to adult rats and mice to study epilepsy or other neurological disorders.

Here, we introduce a novel technique designed to record electroencephalography (EEG) in freely moving neonatal epileptic pups and describe its procedures, features, and applications. This method allows one to record EEG for more than 1 week.

Aufzeichnung von EEG in frei bewegten neonatalen Ratten mit einer neuartigen Methode

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Touchscreen Sustained Attention Task (SAT) for Rats

Sustained attention is the ability to monitor intermittent and unpredictable events over a prolonged period of time. This attentional process subserves other aspects of cognition and is disrupted in certain neurodevelopmental, neuropsychiatric, and neurodegenerative disorders. Thus, it is clinically important to identify mechanisms that impair and improve sustained attention. Such mechanisms are often first discovered using rodent models. Therefore, several behavior procedures for testing aspects of sustained attention have been developed for rodents. One, first described by McGaughy and Sarter (1995), called the sustained attention task (SAT), trains rats to distinguish between signal (i.e., brief light presentation) and non-signal trials. The signals are short and thus require careful attention to be perceived. Attentional demands can be increased further by introducing a distractor (e.g., flashing houselight). We have modified this task for touchscreen operant chambers, which are configured with a touchscreen on one wall that can present stimuli and record responses. Here we detail our protocol for SAT in touchscreen chambers. Additionally, we present standard measures of performance in male and female Sprague-Dawley rats. Comparable performance on this task in both sexes highlights its use for attention studies, especially as more researchers are including female rodents in their experimental design. Moreover, the easy implementation of SAT for the increasingly popular touchscreen chambers increases its utility.

Touchscreen Sustained Attention Task SAT for Rats

Sustained attention, or continuously monitoring situations for intermittent and unpredictable events, is a critical aspect of cognition. Here we detail how to test sustained attention in rats using touchscreen operant chambers. We demonstrate comparable performance in male and female rats, making this task useful for studying attention in both sexes.

Touchscreen nachhaltige Aufmerksamkeit Aufgabe (SA) für Ratten

Sustained attention is the ability to monitor intermittent and unpredictable events over a prolonged period of time. This attentional process subserves ...