ברצוננו להודות Biofábrica Moscamed ברזיל, Fundação דה Amparo א פסקיסה דו אסטדו דה סאו פאולו (FAPESP) ו Conselho נאסיונאל דה Desenvolvimento Científico e Tecnologia (CNPq) לתמיכה כספית.  ברצוננו גם להודות לאנשים הבאים על עזרתם; מרים דוס סנטוס, גילדן סילבה, גסילאן דוס סנטוס, פאביו גונסאלבס, ג'ון פול אוליביירה, לואיזה גרזירה, חוסה קרלוס ולנצ'ה.

דרישות חרקים
1. סקירה כללית
<ol><li>לגידול המוני יש מספר שלבים, שכל אחד מהם מבוצע באזור נפרד של יחידת גידול המסה. איור 1 מציג את השלב העיקרי של גידול והיכן הם מתרחשים במתקן גידול ההמונים.</li>
</ol>2. שיקולי אבטחה ביולוגית לחרק
<ol><li>הפרויקט אושר על ידי הוועדה לאתיקה של בעלי חיים מאוניברסיטת סאו פאולו - ברזיל וכל האישורים הדרושים הושגו.</li>
	<li>מערכת RIDL משתמשת בקטלניות מותנית; תוסף תזונה (טטרציקלין) מונע את הביטוי של מערכת RIDL המאפשרת לגדל את החרקים במסה; ללא טטרציקלין היתושים מתים. טטרציקלין לא נמצא באתרי הרבייה של Ae. aegypti בטבע כך שכל צאצא המופק מהבורחים לא ישרוד.  זה מוסיף רמה נוספת של ביטחון על שימוש חרקים מסוג בר (WT) מעוקרים בשיטות אחרות(כלומר קרינה).</li>
	<li>השתמש בכניסה לדלת כפולה, שלטי "כוח אדם מורשה בלבד" ומסכי חרקים בחרק. כל החלונות צריכים להיות אטומים כדי למנוע זיהום של המושבה עם חרקים WT ולעזור למנוע בריחה מתוך החרקים.</li>
	<li>לתקנות ולרשויות המקומיות עשויות להיות דרישות ספציפיות נוספות או חלופיות. צרו קשר עם הרשויות הרלוונטיות לקבלת מידע/הדרכה בשלב מוקדם, ואבטחו את כל האישורים והאישורים הדרושים לפני הקמת זן RIDL בחרק.</li>
	<li>יש להשתמש בגידול המוני של חרקים רק לגידול RIDL. זנים או חרקים אחרים לא צריכים להיות נוכחים. זה כדי למנוע זיהום של זן RIDL וזיהום עם פתוגנים שעלולים להשפיע על כושר והישרדות, הפחתת הפרודוקטיביות והיעילות של גברים משוחררים.</li>
</ol>3. עיצוב חרקים
<ol><li>
איור 2 מציג תוכנית של חרקים המשמשים בביופאבריקה מוסקאם בברזיל.</li>
	<li>הטמפרטורה של כל החדרים הייתה 26 מעלות צלזיוס ± 2) עם לחות יחסית כ 70 - 80% ו 12: 12 שעות אור: מחזור כהה באמצעות רצועות אור פלואורסצנטי.</li>
	<li>ניתן לשנות תוכנית זו בהתאם לדרישות שטח ספציפיות, למשל קנה המידה של המהדורה יקבע את הגודל הכולל. עם זאת ייצור הביצים, גידול ומיון, בקרת איכות (QC) ושחרורים יש להפריד לארבעה תחומים נפרדים: מושבת ייצור ביצים, ייצור שחרור, QC, ואחסון למבוגרים לשחרור.</li>
	<li>חדר מושבת ייצור הביצים (כ-20מ')משמש לייצור ביצים לייצור ביצים.</li>
	<li>אזור בקרת האיכות הוא המקום בו נערכים ניסויים לבדיקת נהלים וכושר קו RIDL כולל מדידות של קצב הצוהר, מספרי גולם, גודל גולם ומדידת האפקטיביות של מיון והסרת נקבות. בדיקות נערכות גם עבור זיהום WT על ידי בדיקת נוכחות של סמן פלואורסצנטי ופנוטיפ באמצעות מבחני קיזוז מדידת קטלניות.</li>
	<li>חדר יצירת השחרור (כ 36 מ'2)דורש מקום הולם עבור מגשים מיון של זחלים וגולם. המגשים מוחזקים במדפי אלומיניום ייעודיים. אזור עבודה וכיור גדולים נדרשים לגידול ומיון וכיור גדול נוסף נדרש לשטיפת מגשים וכלובים. מלכודת תפיסת מסנן נכללה בשקע מי השפכים מהכיורים כדי למתן את הבריחה של יתושים חיים דרך הביוב.</li>
	<li>כל המים המשמשים את המגשים הוא השליך דרך ניקוז, אשר יש תא המכיל רשת המונעת בריחה של חרקים בכל שלב של התפתחות.</li>
	<li>אזור נדרש לאחסון מבוגרים לשחרור (אחסון למבוגרים לשחרור, איור 2)המכיל ארון תקשורת להחזקת התקני השחרור בזמן שהמבוגרים מתבגרים לפני השחרור.</li>
</ol>שיטות ייצור לגידול המוני RIDL:
מושבת ייצור הביצים מייצרת את הביצים המשמשות בדור השחרור (איור 1) לייצור מבוגרים. ישנם קווי דמיון רבים בשתי שיטות גידול אבל גם כמה הבדלים ברורים. תהליכי גידול זהים עבור שני ההליכים מתוארים בסעיף מושבת ייצור הביצים בלבד.
מושבת ייצור ביצים
4. ייצור זחל
מושבת ייצור הביצים מייצרת ביצי OX513A RIDL הומוזיגיות8 לדור השחרור. בקרת איכות גבוהה מבטיחה כדאיות, כושר ושלמות מאמץ של הביצים המסופקות.
<ol><li>הגירוי לבקיעה הוא שקיעה במים עם רמה נמוכה של חמצן מומס. כדי להפחית את רמת החמצן במים, מחממים מים עד שהם רותחים ומיד מניחים 400 מ"ל לתוך 500 מ"ל צנצנות זכוכית (74 מ"מ פתיחת היקף), להדק את המכסה בבטחה ולהשאיר בטמפרטורת החדר במשך כמה שעות כדי להתקרר.</li>
	<li>שים 1 גרם של ביצים לתוך צנצנת של מים רותחים, reseal ולחכות שעה. מעבירים את התכולה למגש עם 2 ליטר מים ומשאירים לילה בתנאים חרקים.</li>
	<li>מניחים את הזחלים שבקעו לתוך נפח ידוע של מים ומערבבים באמצעות stirrer מגנטי פרעושים מספיק זמן לקחת aliquots; ערבוב נמרץ או לזמן ממושך פוגע בזחלים ויש לשמור אותם למינימום. הנפח הסטנדרטי המשמש לבקוע זחלים הוא 1 L, אולם צפיפות של יותר מ 300 זחלים / מיליליטר קשה לספור ועלול להזיק. לכן לא בוקעים יותר מ 300,000 ביצים / ליטר מים.</li>
	<li>לקבוע את קצב הצוהר על ידי לקיחת שלושה 1 מיליליטר aliquots והנחת על גיליון של נייר סופג, עם רשת של 1 ס"מ ריבועים, על גבי ספוג סופג כדי לספוג את כל המים העודפים.  לספור את מספר הביצים בקעו ללא מים משלושה ריבועים על ידי מחפש את הכובע החסר של ביצה בקעה. צפוי שיעור צוהר סביב 80-90%.</li>
	<li>קח ארבעה aliquots של 1 מיליליטר כל מקום לתוך ארבע סירות שחורות לשקול (זחלים הם לבנים ולכן גלוי יותר על רקע שחור) ולספור את מספר הזחלים החיים נוכח בעין; מומלץ להשתמש במונה. המספר הממוצע של זחלים למ"ל משמש לאחר מכן כדי לחשב את נפח המים להוסיף על כל מגש כדי לקבל את המספר הרצוי של זחלים למגש.</li>
	<li>יכולים להיות הבדלים גדולים בצפיפות שבה ניתן לגדל זחלים בין זנים ומינים. רצוי גם להשוות את גודל הזכר הבוגר RIDL לזכרים מסוג פראי; באופן אידיאלי אתה רוצה דומה זכרים RIDL בגודל גדול יותר שיכול להתחרות בהצלחה עם זכרים פראיים. לכן עבור כל זן RIDL הצפיפות האידיאלית של זחלים צריך להיקבע והוא פשרה נגד אילוצי שטח לגידול ואת קנה המידה של הייצור. צפיפויות הנעות בין 0.1-2.5 זחלים /מיליליטר מצאנו להיות שילוב טוב של תפוקת ייצור ואיכות; נדון גם על ידי מדיצ'י23.</li>
	<li>מוסיפים את הזחלים למגשים. במתקן שלנו אנו משתמשים במגשים בגודל של כ 53 ס"מ x 37 ס"מ x 8 ס"מ (L x W x H) ואת כמות המים הנדרשת כדי להשיג את צפיפות הזחלים לייצור.</li>
	<li>הוסף תמיסת מלאי של טטרציקלין (3 מ"ג / מ"ל במים) למגשים בדילול 1:100 כדי להשיג את הריכוז הסופי הנדרש של 30 מיקרוגרם / מיליליטר.</li>
	<li>להאכיל זחלים עם מזון דגים פתיתים<a href="http://www.sera.de">(www.sera.de)</a>מדי יום, אשר נמחץ אבקה דקה. טבלה 1 מציגה את משטר ההאכלה הטיפוסי במ"ג מזון לזחלים ליום. להאכיל זחלים עד היום המתאים של מיון בתנאים חרקים שתוארו לעיל.</li>
</ol>5. מיון זחלים מגפם וגלפות זכר/נקבה
<ol><li>מיין זחלים מגפם 8 ימים לאחר הבקיעה על ידי הפרדת הזחלים מהגלמים. ואז סקס ממיין את הגומי לזכרים. מכשיר המכונה מפריד לוחות24,25 יכול למיין זחלים מגול זכר ומן הגומי הנשי. איור 3 ממחיש את השימוש במפריד לוחות זה כדי להפריד זחלים מהזכר ומהגלמים הנשיים.</li>
	<li>באמצעות כף מדידה עם רשת בתחתית, לכייל אותו עם 500 גולמים או יותר ולהשתמש בו כדי להגדיר כלובים ולהעריך את הכמות הכוללת של זכרים ונקבות גולם המיוצר.</li>
	<li>ביום הראשון של המיון (יום 8) רוב הגומים הם זכרים, אז הניחו את הזחלים הממוינים בחזרה למגש ואחוריים עד למחרת כאשר רוב הגומים הם נקבות(איור 4).</li>
	<li>חזור על תהליך המיון בכל יום כמתואר בשלבים 2.1-2.3 עד שכל הזחלים יצוצו או עד סוף שבוע עבודה.</li>
	<li>מניחים 1,000 גולם זכר (באמצעות כף המדידה) בכלוב וביום 9 מוסיפים 3,000 גולם נקבה לאותו כלוב (אנו משתמשים בצינורות PVC בגובה 30 ס"מ ובקוטטר 30 ס"מ המותאמים עם חולצת רשת וחור גישה מרושת, אך כלובי פלסטיק בגודל 30 ס"מ x 30 ס"מ זמינים גם מ- BugDorm).</li>
	<li>אפשר למבוגרים להזדווג לפחות 2 ימים ולספק להם פתרון סוכרוז (10%) על ליביטום מודעת כותנה רטובה לפני האכלת דם. לאסוף ביצים במשך שבועיים (~ שני מחזורים gonotrophic) עם שתי הזנות דם בשבוע. זה מניב בממוצע 143,000 ביצים מכלוב של 3,000 נקבות (ממוצע של 48 ביצים / נקבה). לייצור 4 מיליון ביצים בשבוע יש להקים כ-28 כלובים מדי שבוע.</li>
</ol>6. האכלת דם
<ol><li>מערכת הזנת צלחת אלומיניום מספקת לכלובים דם פעמיים בשבוע. כיס דם נוצר בצד צלחת אלומיניום (10 ס"מ x 10 ס"מ x 3 מ"מ) עם Parafilm (איור 5). כדי לעודד האכלה, הדם מתחמם על ידי הנחת שקית שעועית מחוממת על גבי מאכיל צלחת. שקית שעועית כללה כ 250 גרם של גרגרי חיטה בשקית בד, אשר מחומם במשך כ 10 שניות במיקרוגל. הדם שאנו משתמשים בו להאכלה הוא מבית מטבחיים מקומי; כמו בעלי חיים אלה (בעיקר עזים וכבשים) הם לצריכה אנושית הם נבדקים כדי למנוע נוכחות של פתוגנים.</li>
	<li>שלושה ימים לאחר האכלת הדם, מסופק אתר הנחה לנקבות להטיל את ביציהן. אתר oviposition הוא מיכל פלסטיק עגול מלא בערך 1/4 עם מים ונייר סינון המכסה את החלק הפנימי. יומיים לאחר מכן האתר הוסר. לייצור ביצים מקסימלי, ודאו שנייר המסנן מכסה את כל המשטח הזמין בתוך המיכל ונשאר רטוב.</li>
	<li>מוציאים את נייר הביצה ומניחים על נייר סופג לייבוש בתנאים חרקים; ביצים דורשות תקופה של התניה בלחות גבוהה (מעל 70%) של לפחות 48 שעות לאחר שהונח. ביצים ניתן להשאיר חרקים עד 3 חודשים עם ירידה מינימלית בקצב הצוהר, כל עוד הלחות נשמרת גבוה25.</li>
	<li>מושבת ייצור הביצים צריכה להיות בגודל מספיק כדי לספק את מספר הביצים הנדרש על בסיס שבועי לתוכנית השחרור. המתקן המתואר לעיל יכול לייצר כ -4 מיליון ביצים עם 28 כלובים שהוקמו מדי שבוע. מומלץ לשמור מספיק ביצים מאוחסנות כדי להבטיח לפחות 4 שבועות של ביצים לייצור ייצור שחרור מושבה לייצור ביצים.</li>
</ol>הפקת מהדורה
7. ייצור זחלים
תהליכי הבקיעה, ההגדלה והמיון של דור השחרור זהים לשיטה שתוארה קודם לכן למושבת ייצור הביצים. עם זאת, היקף הייצור הוא הרבה יותר גדול וזה דורש יותר מגשים ומאמץ נוסף.
8. מיון זחלים, גולם זכר, ו נקבת גולם
<ol><li>המיון של זחלים, גולם זכר וגומה נקבית זהה לשיטה המתוארת לייצור ביצים.</li>
	<li>לאחר מיון הגומה הגברית חשוב לבדוק זיהום נשי לפני השחרור; לא צריך להיות יותר מ 1% נקבות נוכחים. קח שלושה aliquots של 500 גולם (שלוש כפות מדידה אקראיות גולם) ולספור את מספר הגומי הנשי הנוכחי. ניתן לזהות נקבות מכיוון שהן בדרך כלל גדולות יותר מהזכרים ומהבדלים בצורת האונה של איברי המין (איור 6)27. אם יש יותר מ 1% נקבות הם צריכים להזדקק ולבדוק שוב.</li>
	<li>השתמש רק הזכרים מהיום 8 ו 9 לשחרור; אוטוקלאב כל הזחלים והגלמי הנותרים. בברזיל, יש להתייחס לפסולת זו באותו אופן כמו פסולת רפואית, אך התקנות עשויות להיות שונות במדינות אחרות. אין להשתמש בגלפים ובזחלים נשיים מדור השחרור למושבת ייצור הביצים בשל הבדלים בבקרת האיכות, בגידול ובזיהום ממספרים גדולים יותר ובבקרת איכות נמוכה יותר.</li>
</ol>אחסון למבוגרים לשחרור: הכניסו גברים למכשירי שחרור כדי שיצצו ויתבגרו לפני השחרור. פרטי התקני ההפצה אינם מכוסים בשיטה זו. עם זאת, הקיבולת של מכשירי השחרור שאנו משתמשים בהם היא כ-1,000 זכרים. פרטי שיטת ההפצה (התקן הפצה ומערכת הפצה) אינם מכוסים בשיטה זו.

<ol>
	<li>Dyck, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterilizing+Insects+with+Ionizing+Radiation.">Sterilizing Insects with Ionizing Radiation.</a> Sterile Insect Technique. , 233-268 (2005).</li><li>Dyck, V., Hendrichs, J., Robinson, A. S., Klassen, W., Curtis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+the+Sterile+Insect+Technique..">History of the Sterile Insect Technique..</a> Sterile Insect Technique. , 3-36 (2005).</li><li>Alphey, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterile-insect+methods+for+control+of+mosquito-borne+diseases+&#8211;+an+analysis.">Sterile-insect methods for control of mosquito-borne diseases &#8211; an analysis.</a> Vector Borne Zoonotic Dis. 10, 295-311 (2010).</li><li>Thomas, D. D., Donnelly, C. A., Wood, R. J., Alphey, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+population+control+using+a+dominant,+repressible,+lethal+genetic+system.">Insect population control using a dominant, repressible, lethal genetic system.</a> Science. 287, 2474-2476 (2000).</li><li>Fu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female-specific+insect+lethality+engineered+using+alternative+splicing.">Female-specific insect lethality engineered using alternative splicing.</a> Nat. Biotechnol. 25, 353-357 (2007).</li><li>Fu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female-specific+flightless+phenotype+for+mosquito+control.">Female-specific flightless phenotype for mosquito control.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 4550-4554 (2010).</li><li>Gong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dominant+lethal+genetic+system+for+autocidal+control+of+the+Mediterranean+fruitfly.">A dominant lethal genetic system for autocidal control of the Mediterranean fruitfly.</a> Nat. Biotechnol. 23, 453-456 (2005).</li><li>Phuc, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late-acting+dominant+lethal+genetic+systems+and+mosquito+control.">Late-acting dominant lethal genetic systems and mosquito control.</a> BMC Biol. 5 (11), (2007).</li><li>Harris, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+suppression+of+a+field+mosquito+population+by+sustained+release+of+engineered+male+mosquitoes.">Successful suppression of a field mosquito population by sustained release of engineered male mosquitoes.</a> Nat. Biotechnol. 30, 828-830 (2012).</li><li>Harris, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+performance+of+engineered+male+mosquitoes.">Field performance of engineered male mosquitoes.</a> Nat. Biotechnol. 29, 1034-1037 (2011).</li><li>Bailey, D. L., Lowe, R. E., Dame, D. A., Seawright, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+rearing+the+genetically+altered+MACHO+strain+of+Anopheles+albimanus+Wiedemann.">Mass rearing the genetically altered MACHO strain of Anopheles albimanus Wiedemann.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 29, 141-149 (1980).</li><li>Benedict, M. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonisation+and+mass+rearing:+learning+from+others.">Colonisation and mass rearing: learning from others.</a> Malar. J.. 8 Suppl 2 (S4), (2009).</li><li>Alphey, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-engineering+the+sterile+insect+technique.">Re-engineering the sterile insect technique.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 32, 1243-1247 (2002).</li><li>Wise de Valdez, ., R, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+elimination+of+dengue+vector+mosquitoes.">Genetic elimination of dengue vector mosquitoes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 4772-4775 (2011).</li><li>Macoris Mde, ., L, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+of+Aedes+aegypti+from+the+state+of+Sao+Paulo,+Brazil,+to+organophosphates+insecticides..">Resistance of Aedes aegypti from the state of Sao Paulo, Brazil, to organophosphates insecticides..</a> Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 98, 703-708 (2003).</li><li>Campos, J., Andrade, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larval+susceptibility+of+Aedes+aegypti+and+Culex+quinquefasciatus+populations+to+chemical+insecticides.">Larval susceptibility of Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus populations to chemical insecticides.</a> Rev. Saude Publica. 37, 523-527 (2003).</li><li>Gubler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resurgent+vector-borne+diseases+as+a+global+health+problem.">Resurgent vector-borne diseases as a global health problem.</a> Emerg. Infect. Dis. 4, 442-450 (1998).</li><li>Harris, A. F., Rajatileka, S., Ranson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyrethroid+resistance+in+Aedes+aegypti+from+Grand+Cayman.">Pyrethroid resistance in Aedes aegypti from Grand Cayman.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 83, 277-284 (2010).</li><li>Lima, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+of+Aedes+aegypti+to+organophosphates+in+several+municipalities+in+the+State+of+Rio+de+Janeiro+and+Espirito+Santo.">Resistance of Aedes aegypti to organophosphates in several municipalities in the State of Rio de Janeiro and Espirito Santo.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 68, 329-333 (2003).</li><li>Paris, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+Bacillus+thuringiensis+israelensis+(Bti)+in+the+environment+induces+resistance+to+multiple+Bti+toxins+in+mosquitoes.">Persistence of Bacillus thuringiensis israelensis (Bti) in the environment induces resistance to multiple Bti toxins in mosquitoes.</a> Pest Manag. Sci. 67, 122-128 (2010).</li><li>Rendon, P., McInnis, D., Lance, D., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medfly+(Diptera:+Tephritidae)+genetic+sexing:+large-scale+field+comparison+of+males-only+and+bisexual+sterile+fly+releases+in+Guatemala.">Medfly (Diptera: Tephritidae) genetic sexing: large-scale field comparison of males-only and bisexual sterile fly releases in Guatemala.</a> J. Econ. Entomol. 97, 1547-1553 (2004).</li><li>Papathanos, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+separation+strategies:+past+experience+and+new+approaches.">Sex separation strategies: past experience and new approaches.</a> Malar. J.. 8 Suppl 2 (S5), (2009).</li><li>Medici, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Aedes+albopictus+larval+mass-rearing+optimization.">Studies on Aedes albopictus larval mass-rearing optimization.</a> J. Econ. Entomol. 104, 266-273 (2011).</li><li>Focks, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+separator+for+the+developmental+stages,+sexes+and+species+of+mosquito+(Diptera+Culicidae)..">An improved separator for the developmental stages, sexes and species of mosquito (Diptera Culicidae)..</a> J. Med. Entomol. 17, 567-568 (1980).</li><li>Fay, R. W., McCray, E. M., Kilpatrick, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+of+sterilized+male+Aedes+aegypti.">Mass production of sterilized male Aedes aegypti.</a> Mosquito News. 23, 210-214 (1963).</li><li>Christophers, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Aedes aegypti the yellow fever mosquito: Its life history, Bionomics and Structure. , (2009).</li><li>Jones, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+sexing+living+Anopheles+Larvae+(diptera,+culicidae).">A simple method for sexing living Anopheles Larvae (diptera, culicidae).</a> Ann. Entomol. Soc. Am. 50, 104-106 (1957).</li><li>Koenraadt, C. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pupal+Dimensions+as+Predictors+of+Adult+Size+in+Fitness+Studies+of+Aedes+aegypti+(Diptera+Culicidae)..">Pupal Dimensions as Predictors of Adult Size in Fitness Studies of Aedes aegypti (Diptera Culicidae)..</a> J. Med. Entomol. 45, 331-336 (2008).</li><li>Alphey, L., Nimmo, D., O'Connell, S., Alphey, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+population+suppression+using+engineered+insects.">Insect population suppression using engineered insects.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 627, 93-103 (2008).</li><li>Alphey, N., Bonsall, M. B., Alphey, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+resistance+to+genetic+control+of+insects.">Modeling resistance to genetic control of insects.</a> J. Theor. Biol. 270, 42-55 (2011).</li><li>Atkinson, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+the+control+of+mosquito-borne+diseases+by+a+dominant+lethal+genetic+system.">Analyzing the control of mosquito-borne diseases by a dominant lethal genetic system.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 9540-9545 (2007).</li><li>Bargielowski, I., Nimmo, D., Alphey, L., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+life+history+characteristics+of+the+genetically+modified+OX513A+line+and+a+wild+type+strain+of+Aedes+aegypti.">Comparison of life history characteristics of the genetically modified OX513A line and a wild type strain of Aedes aegypti.</a> PLoS One. 6 (e20699), (2011).</li><li>Bargielowski, I., Alphey, L., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cost+of+mating+and+insemination+capacity+of+a+genetically+modified+mosquito+Aedes+aegypti+OX513A+compared+to+its+wild+type+counterpart.">Cost of mating and insemination capacity of a genetically modified mosquito Aedes aegypti OX513A compared to its wild type counterpart.</a> PLoS One. 6 (26086), (2011).</li></ol>

מחברים הקשורים Oxitec יש תעסוקה ו / או הון עצמי עניין Oxitec בע"מ. Oxitec בע"מ ואוניברסיטת אוקספורד להחזיק קניין רוחני הקשורים לנושא של מאמר זה.

RIDL היא שיטה יעילה ובטוחה לסביבה של שליטה יתושים3,29-31. הטכניקה חלה על תוכנית משולבת לניהול מזיקים ורוב שיטות הבקרה הנוכחיות, כולל קוטלי זחלים, הפחתת אתרי רבייה וקוטלי מבוגרים תואמות לטכנולוגיה זו. שיטה זו מתארת כיצד לייצר עד 570,000 גדיים זכר RIDL בשבוע לשימוש בשליטה של Ae. Aegypti ולידיעה שלנו זהו התיאור הראשון של הייצור של יתושים מהונדסים בקנה מידה זה. כמה מערכות ייצור דומות פותחו עבור סוג פראי Ae. aegypti בשנות ה -60 וה-70 25, אולם לא היה ייצור דומה בקנה מידה זה מאז. בברזיל כ-11 מיליון גברים שוחררו מפברואר 2011 עד פברואר 2012. מספר הזכרים הנדרשים לשליטה באזור נתון תלוי במספר גורמים, כולל גודל אוכלוסיית הבר, פיזור זכרים משוחררים, הישרדות ותחרותיות הזדווגות של זכרים לאחר השחרור, ותנאים סביבתיים.  מחקרים קודמים הראו כי RIDL יכול להפחית את האוכלוסייה של יתושים על ידי לפחות 80%9.
יש צורך באיזון בין אופטימיזציה של גידול המוני להיקף הייצור והעלות לעומת איכות הזכרים. לדוגמה, הגדלת צפיפות הזחל יכולה להגדיל את כושר הייצור על ידי צמצום השטח הנדרש, העבודה והזמן לגור32. עם זאת, צפיפויות גבוהות מדי של זחלים יכול לגרום זכרים חיים קטנים וקצרים יותר עם קיבולת הזדווגות מופחתת32,33. איכות הזכרים ביחס לתוכנית SIT תוערך בסופו של דבר על ידי היכולת של זכרים משוחררים להזדווג עם נקבות בשדה. הערכת שדה נרחבת נדרשת כדי להעריך את התחרותיות בהזדווגות ביחס לעמיתיהם הפראיים9,10. זה לעתים קרובות עושה את זה לא מעשי להעריך בדיוק אילו גורמים להפוך יתוש זכר "באיכות גבוהה". עם זאת, שמירה על ייצור ואיכות עקביים (במידה שניתן להעריך באופן שגרתי) בגידול מסה בקנה מידה גדול היא בעלת חשיבות עליונה. זה דורש רמה גבוהה של ערנות ותקינה של כל התהליך עם תנודות קטנות שעלולות להיות בעלות השפעה משמעותית. aliquoting של זחלי L1 הוא צעד קריטי וממחיש נקודה זו. Aliquoting את המספר הנכון של זחלים לתוך מגשים חיוני לייצור באיכות טובה. משטר ההזנה מותאם בדיוק למספר מסוים של זחלים. זחלים מעטים מדי / רבים יגרמו מעל / תחת האכלה, אשר משפיע על הישרדות הזחל, גודל של גולם וזמן גור. אם יש סוד לאמנות גידול ההמונים זה כדי להבטיח את הצעדים הקטנים הרבים במחזור הייצור מתנהלים באופן עקבי, בדיוק עם רמה גבוהה של בקרת איכות, כמתואר במאמר זה.

יתושים להעביר פתוגנים רבים שיכולים לגרום למגוון של מחלות בבני אדם ושליטה יתושים אלה כבר קרב מתמשך במשך מאות שנים. אסטרטגיות לשלוט חרקים המבוססים על שיטות כימיות וביולוגיות היו כמה הצלחות בולטות, אבל במקרים רבים השליטה לא היה בר קיימא בטווח הארוך. לדוגמה, ברזיל השיגה חיסול של Ae. aegypti בשנות ה -50 אבל היתוש התחדש במהלך 40-50 השנים האחרונות. זה יכול להיות מיוחס לגורמים רבים, כולל עמידות קוטלי חרקים, נזק סביבתי, יישום תוכנית בקרהלקויה 15-20, ואת reinvasion מהיר ללא ניטור הולם או תגובה.
טכניקות ושיטות חדשות מבוקשות כדי לנסות לנצח בקרב הזה נגד יתושים.  ההתקדמות האחרונה בטכניקות מולקולריות הובילה לפיתוח שיטות חדשות וחדשניות לבקרת יתושים המבוססות על טכניקת החרקים הסטריליים (SIT)1-3. שיטת בקרה המכונה RIDL (שחרור חרקים הנושאים קטלני דומיננטי)4 מבוססת סביב SIT, אך משתמשת בשיטות גנטיות כדי להסיר את הצורך בחיטוי קרינה. זני RIDL נבנו עבור מספר מינים מזיקים כולל Ae. aegypti 5-8, זן RIDL של Ae. aegypti נבדק בהצלחה בשדה בגרנד קיימן9,10; שימוש נוסף בשדה מתוכנן או מתבצע במדינות אחרות ברחבי העולם.  דיכוי אוכלוסיות יתושים באמצעות RIDL ידרוש מספר רב של מבוגרים גברים באיכות גבוהה להיות גדל3,14.
עבור תוכנית SIT זה נחשב רצוי לשחרר רק גברים; נקבות יתושים נושכות ומעבירות מחלות. בנוסף, הזכרים סטריליים שוחרר יכול להיות "מוסח" על ידי הנקבות ששוחררו הפחתת יעילות התוכנית. שחרור לגברים בלבד הוכח כיעיל פי 3-5 משחרור מעורב-מין בניסויי שדה גדולים עם זבובי פירות ים תיכוניים מוקרנים21.
בתוכנית גידול המוני RIDL, ישנם מספר שלבים לייצור הזכרים לשחרור.  הראשון הוא לייצר את הביצים הנדרשות לייצור המהדורה (איור 1). השלב הבא הוא לגדל את הביצים דרך גולם או מבוגרים, הפרדת זחלים מגולם ואת הגומי הגברי מן הגומה הנשית. הפרדה בקנה מידה גדול של זכרים מן הנקבות דורש הבדל בין המינים בשלב חיים מסוים מתאים מיון המוני22. ב Ae. aegypti (ומינים יתושים אחרים) יש הבדל גודל משמעותי בין גולם זכר ונקבה אשר ניתן לנצל עבור טכניקות הפרדת מין. הזכרים RIDL ממוינים לאחר מכן משוחררים בתוכנית בקרה כמו גם גולם או כמבוגרים11,12.
להלן תיאור השיטות לגידול המוני של OX513A, זן RIDL של Ae. אגיפטי, לשחרור. השיטות המתוארות מכסות את הטכניקות הנדרשות לייצור ביצים וזכרי RIDL עבור תוכנית בקרה.

<table align="left" border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" width="100%">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Vipan Premium
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			Sera GmbH
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			190
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://www.sera.de/uk/pages/products/product/sera-vipan-3.html">http://www.sera.de/uk/pages/products/product/sera-vipan-3.html</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Required for rearing RIDL larvae
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:58px;">
			Tetracycline
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:58px;">
			Sigma Aldrich
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:58px;">
			T7660
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:58px;">
			<a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&amp;N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&amp;N4=T7660|SIGMA&amp;N25=0&amp;QS=ON&amp;F=SPEC">http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&#38;N5=SEARCH_CONCAT_PNO|BRAND_KEY&#38;N4=T7660|SIGMA&#38;N25=0&#38;QS=ON&#38;F=SPEC</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:58px;">
			Required for rearing RIDL larvae
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Plate separator
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			J.W. Hock
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			5412
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://www.johnwhock.com/download/manuals/instr_5412_separator.pdf">http://www.johnwhock.com/download/manuals/instr_5412_separator.pdf</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Separating larvae and pupae
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Parafilm M
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			Pechiney Plastic packing
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			PM-996
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://www.parafilm.com">www.parafilm.com</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Cover plate for blood feeding system
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Rearing pans for Release generation (53 cm x 38 cm x 8 cm)
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			Pleion
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			0757
			</td>
			<td nowrap="nowrap" style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://pleion.actcenter.com.br/produtos.asp?opcao=1">http://pleion.actcenter.com.br/produtos.asp?opcao=1</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Larval rearing Release generation
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:19px;">
			Fluorescent scope
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:19px;">
			Leica&#160;Microsystems
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:19px;">
			MZ FLIII
			
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:19px;">
			<a href="http://www.leica-microsystems.com/fileadmin/downloads/Leica%20MZ%20FLIII/Brochures/M1-160-0de.pdf">http://www.leica-microsystems.com/fileadmin/downloads/Leica%20MZ%20FLIII/Brochures/M1-160-0de.pdf</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:19px;">
			Viewing fluorescent RIDL larvae
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Adult cages
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			BugDorm
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			DP1000
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html">http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Cages for Egg production&#160; colony
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:15.92%;height:38px;">
			Filter paper
			</td>
			<td style="width:15.06%;height:38px;">
			CELAB
			</td>
			<td style="width:12.64%;height:38px;">
			
			</td>
			<td style="width:40.2%;height:38px;">
			<a href="http://www.casadolaboratorio.com.br/subpage118.html">http://www.casadolaboratorio.com.br/subpage118.html</a>
			</td>
			<td style="width:16.16%;height:38px;">
			Filter paper for egg laying
			</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mass production of genetically modified aedes aegypti for field releases in brazil

טכניקות ושיטות חדשות מבוקשות כדי לנסות לנצח בקרב נגד יתושים. ההתקדמות האחרונה בטכניקות מולקולריות הובילה לפיתוח שיטות חדשות וחדשניות לבקרת יתושים המבוססות על טכניקת החרקים הסטריליים (SIT)1-3. שיטת בקרה המכונה RIDL (שחרור חרקים הנושאים קטלני דומיננטי)4, מבוסס סביב SIT, אבל משתמש בשיטות גנטיות כדי להסיר את הצורך קרינה-עיקור5-8. זן RIDL של Ae. aegypti נבדק בהצלחה בתחום גרנד קיימן9,10; שימוש נוסף בשדה מתוכנן או מתבצע במדינות אחרות ברחבי העולם.
גידול המוני של חרקים הוקם במספר מיני חרקים וברמות של מיליארדים בשבוע. עם זאת, אצל יתושים, גידול בוצע בדרך כלל בקנה מידה קטן בהרבה, עם גידול בקנה מידה גדול ביותר שבוצע בשנות השבעים והשנות ה -80. עבור תוכנית RIDL רצוי לשחרר כמה שפחות נקבות ככל האפשר כפי שהם נושכים ולהעביר מחלות. בתוכנית גידול המונית ישנם מספר שלבים כדי לייצר את הזכרים להשתחרר: ייצור ביצים, גידול ביצים עד גור, ולאחר מכן מיון זכרים מנקבות לפני השחרור. זכרים אלה משמשים לאחר מכן עבור תוכנית בקרת RIDL, שוחרר כמו גולם או מבוגרים11,12.
כדי לדכא אוכלוסיית יתושים באמצעות RIDL מספר גדול של מבוגרים גברים באיכות גבוהה צריך להיות גדל13,14. להלן מתאר את השיטות לגידול המוני של OX513A, זן RIDL של Ae. aegypti 8, לשחרור ומכסה את הטכניקות הדרושות לייצור ביצים וגידול המוני זכרים RIDL עבור תוכנית בקרה.

תוצאות הגור הצפויות לייצור מוצגות באיור 4. הזכרים גורים ראשונים, מגיעים לשיאם ביום השמיני והנקבות מגיעות לשיא ביום ה-9 לאחר הבקיעה. חשוב למדוד עקומת גור זו כדי לדעת את הזמן הטוב ביותר למיין זכרים מנקבות.
תוצאות מלמעלה מ-6 חודשים של מיון גולם זכר ונקבה מראות כי הזיהום הנשי עומד בממוצע על 0.02% (איור 5; SEM = 0.004%). שיעור זיהום זה מייצג רק 400 נקבות שפורסמו במשך חודש של שחרורים (כשני מיליון זכרים). ייצור הביצים הנוכחי בשבוע הוא 4 מיליון. מתוכם, 3.5 מיליון בוקעים למושבת ביצים וייצור כאשר השאר מאוחסנים לגיבוי. כ-11% מהביצים משמשות לייצור ביצים ושאריות לייצור ביצים. קצב בקעת הביצים הממוצע 87.3% (SEM = 0.5%) ותשואה של גולם זכר מזחלי L1 ממוצעים 29.5% (SEM = 1.2). שני מיליון זחלים גדלים מדי שבוע עבור מושבת דור השחרור המייצרת כ-571,000 גולמים זכריים (SEM = 14,000). גולם ותמותה למבוגרים במהלך הופעת ושחרור ממוצעים 5%, וכתוצאה מכך כ 543,000 (SEM = 13,000) שוחרר יתושים זכר בוגר בשבוע. זה צפוי הייצור הנוכחי של 4 מיליון ביצים בשבוע יכול להיות מופחת ~ 3 מיליון בשבוע עם אופטימיזציה נוספת כדי להפחית את ההפסד מבזבוז ואחסון. בסך הכל דרושים 6 עובדים להפקה המתוארת; ארבעה עובדים על ייצור שחרור והשניים הנותרים במושבת הביצים.

בקרת איכות

בקרת איכות חיונית לשמירה על איכות המבוגרים, יעילות גידול, עבודה ועלויות. 

בקרת פנוטיפ טרנסג'ין
על מנת לאמת ביטוי גנים RIDL שני פקדים מבוצעים, ראשית כדי לבדוק את הביטוי של סמן פלואורסצנטי ושנית כדי לבדוק את הביטוי של תכונת הקטלניות RIDL בהיעדר טטרציקלין. כל הזחלים צריכים לבטא את סמן הפלואורסצנט. כדי לבדוק אם סמן הפלואורסצנט מבוטא כצפוי, 2,000 זחלי instar הראשון נבדקים תחת סטריאומיקרוסקופ לייקה MZFLIII עם מסנן DsRed2 (טקסס אדום) כדי לקבוע אם כל אנשים שאינם פלואורסצנטיים קיימים. ללא טטרציקלין הגן RIDL מתבטא ואנו מצפים 3-4% הישרדות למבוגרים8. כדי לבדוק זאת, מגש נוסף מוגדר עבור כל אצוות שחרור ללא טטרציקלין. ההבדל היחיד לגידול רגיל הוא שהמזון מצטמצם ב -2/3 מהיום השישי מכיוון שהצטברות של מזון עודף עקב זחלים מתים עלולה לגרום לצמיחה חיידקית עודפת.

בקרת גידול
ארבעה מגשים מדור ההפצה נבחרים באופן אקראי למיון ולספר בנפרד. מספר הגומיים הזכריים והנקביים נרשם בכל מגש מדי יום (איור 4). כל סטייה מהמספר הצפוי של זכרים ונקבות מצביעה על בעיה פוטנציאלית שעלולה להשפיע על הייצור ו/או הכושר וניתן להשוות אותה למושבת הביצים כדי לקבוע את מקור הבעיות.

מדידות גולם
גודל גולם הוכח להיות בקורלציה עם גודל מבוגר28. כבקרת איכות לגודל מבוגר רוחב cephalothorax נמדד של לפחות 30 גולם זכר עבור כל יום מיון מדור השחרור; עבור מושבת ייצור הביצים נמדדים גם גולמים נקבה. רוחב cephalothorax הממוצע היה 1.05 מ"מ (SEM 0.005) עבור זכרים משוחררים ו 1.04 מ"מ (SEM = 0.006) ו 1.29 מ"מ (SEM = 0.006) עבור זכרים ונקבות בהתאמה ייצור ביצים, מושבה; תוצאות דומות התקבלו עבור Ae. albopictus מסה גידול24.
<img alt="Figure 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig1.jpg"> איור 1. שלבים של גידול המוני יתושים לשימוש בתוכנית RIDL / SIT. למושבת ייצור הביצים יש רמה גבוהה של בקרת איכות כדי להבטיח את איכות הביצים המסופקות לדור השחרור.  ביצים גדלות דרך גולם במושבת השחרור, שם הזכרים ממוינים מהנקבות.  המבוגרים הזכרים משמשים לאחר מכן עבור תוכנית הבקרה RIDL.
<img alt="Figure 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig2.jpg"> איור 2. סכמטי של מתקן גידול לייצור זכרים RIDL עבור תוכנית שחרור. ביצים איכותיות מיוצרות ללא הרף בחדר מושבת ייצור הביצים ולאחר מכן גדלות דרך גולם בחדר דור השחרור. הזחלים והגלמים מופרדים לאחר מכן והגלמים ממוינים למין עבור גברים. הזכרים מוצבים לאחר מכן במכשירי שחרור ומורשים להבשיל למבוגרים לשחרור בחדר האחסון והשחרור למבוגרים. 
<img alt="Figure 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig3.jpg"> איור 3. הפרדת זחלים, גולם זכר, וגומה נקבה באמצעות מפריד צלחת26.  מפריד הלוחות משתמש בהבדל הגודל בין זחלים, גולמים זכריים וגול נקבי כדי למיין את שלושת שלבי החיים השונים האלה; זחלים נוטים להיות קטנים יותר מאשר גולם זכר אשר בתורו קטן יותר מאשר גולם נקבה.  המכשיר כולל שתי צלחות זכוכית; אחד קבוע למסגרת מתכת מלוכסנת והשני יושב על גבי הלוח הראשון וניתן להזיזו יחסית לראשון באמצעות ארבעה ברגים לכוונון(A).  ארבעת בורגי ההתאמה מאפשרים להגדיר את הלוח החיצוני בזווית ללוח האחורי כך שנוצר חלל בצורת טריז בין הלוחות, המתחדד כלפי מטה.  זחלים וגולים נשפכים בין צלחות הזכוכית(B)ונשטפים בעדינות באמצעות צינור מים(C).  על ידי התאמת הזווית של הצלחת, זחלים, גולם זכר וגומה נקבה ניתן להפריד (D).  עם שטיפה רציפה והגדלת זווית הצלחת ניתן לשטוף את הזחלים דרך הראשון (לתוך מסננת), ואחריו את הגלם הגברי ולבסוף את הגלם הנשי. 
<img alt="Figure 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig4.jpg"> איור 4. עקומות גור עבור מסה גדל RIDL Ae. aegypti.  גרף זה מראה את האחוז הממוצע גור עבור המוני גדל RIDL זכר ונקבה גולם במהלך 23 שבועות תצפית עם ~ 135,000 גולם התאושש בשבוע.  קווי שגיאה = שגיאת תקן של ממוצע, n = 23. באוסף הראשון (יום 8) התאוששנו בממוצע 59% זכר ו 30% גולם נקבה מן הגומי הכולל התאושש מגשים מעל 5 ימים. 
<img alt="Figure 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig5.jpg"> איור 5. זיהום נשי ממוצע של גולם זכר ממוין. גרף זה מציג את האחוז החודשי של זיהום נשי במהלך מיון גברים ביום 8 לאחר הבקיעה במשך תקופה של שישה חודשים. 
<img alt="Figure 6" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig6.jpg"> איור 6. מערכת מאכיל דם צלחת אלומיניום. הצלחת(B)מכוסה בפרפילם(A)ודם צנרת לתוך כיס ולאחר מכן אטום(D). הצלחת מונחת על כלוב ומחוממת על ידי הנחת שקית שעועית מחוממת(C)על גבי(E). 
<img alt="Figure 7" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579fig7highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579fig7.jpg"> איור 7. הבחנה בין זכר לנקבה Ae. גולם aegypti. Ae. גולם aegypti יכול להיות מין אמין על ידי ההבדלים בצורת האונה המין (בסוף קטעי הבטן pupal ממש מתחת משוטים). בנוסף, זכרים נוטים גם להיות קטנים יותר מאשר נקבות.   
<img alt="Table 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/3579/3579table1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/3579/3579table1.jpg"> שולחן 1. משטר האכלה כללי לזחלי Ae. aegypti RIDL (מ"ג מזון לזחל ליום). כדי לחשב את כמות המזון הנדרשת בפועל, הכפל את המספר הכולל של הזחלים למגש.

Watch this Scientific Journal Video about Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil at JoVE.com

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

כדי להשיג דיכוי האוכלוסייה של Aedes aegypti באמצעות® RIDL (שחרור של חרקים הנושאים קטלני דומיננטי) מערכת, מספר גדול של יתושים זכר צריך להשתחרר. זה דורש שימוש בטכניקות גידול המוני וטכנולוגיה כדי לספק מערכות אמינות כדי להשיג את המספר המרבי של יתושים זכר באיכות גבוהה.

ייצור המוני של Aedes aegypti מהונדסים גנטית עבור מהדורות שדה בברזיל

New techniques and methods are being sought to try to win the battle against mosquitoes. Recent advances in molecular techniques have led to the ...

mass-production-genetically-modified-aedes-aegypti-for-field-releases

Research

JoVE Journal

Environment

Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

22.8K Views.  Oxitec Ltd. כדי להשיג דיכוי האוכלוסייה של Aedes aegypti באמצעות® RIDL (שחרור של חרקים הנושאים קטלני דומיננטי) מערכת, מספר גדול של יתושים זכר צריך להשתחרר. זה דורש שימוש בטכניקות גידול המוני וטכנולוגיה כדי לספק מערכות אמינות כדי להשיג את המספר המרבי של יתושים זכר באיכות ג?...

Video: Mass Production of Genetically Modified Aedes aegypti for Field Releases in Brazil

Evaluation of Integrated Anaerobic Digestion and Hydrothermal Carbonization for Bioenergy Production

Lignocellulosic biomass is one of the most abundant yet underutilized renewable energy resources. Both anaerobic digestion (AD) and hydrothermal carbonization (HTC) are promising technologies for bioenergy production from biomass in terms of biogas and HTC biochar, respectively. In this study, the combination of AD and HTC is proposed to increase overall bioenergy production. Wheat straw was anaerobically digested in a novel upflow anaerobic solid state reactor (UASS) in both mesophilic (37 &#176;C) and thermophilic (55 &#176;C) conditions. Wet digested from thermophilic AD was hydrothermally carbonized at 230 &#176;C for 6 hr for HTC biochar production. At thermophilic temperature, the UASS system yields an average of 165 LCH4/kgVS&#160;(VS: volatile solids) and 121 L CH4/kgVS&#160;at mesophilic AD over the continuous operation of 200 days. Meanwhile, 43.4 g of HTC biochar with 29.6 MJ/kgdry_biochar was obtained from HTC of 1 kg digestate (dry basis) from mesophilic AD. The combination of AD and HTC, in this particular set of experiment yield 13.2 MJ of energy per 1 kg of dry wheat straw, which is at least 20% higher than HTC alone and 60.2% higher than AD only.

A novel Upflow Anaerobic Solid State (UASS) reactor was used for biogas production from fibrous feedstock. Digestate from UASS reactor was hydrothermally carbonized into HTC biochar in a pressurized batch reactor. The integration of the two bioenergy concepts was applied in this study to increase overall bioenergy production.

הערכה משולבת אנאירובי העיכול והידרותרמיים פחום ליואנרגיה הפקה

Lignocellulosic biomass is one of the most abundant yet underutilized renewable energy resources. Both anaerobic digestion (AD) and hydrothermal ...

Integrated Field Lysimetry and Porewater Sampling for Evaluation of Chemical Mobility in Soils and Established Vegetation

Potentially toxic chemicals are routinely applied to land to meet growing demands on waste management and food production, but the fate of these chemicals is often not well understood. Here we demonstrate an integrated field lysimetry and porewater sampling method for evaluating the mobility of chemicals applied to soils and established vegetation. Lysimeters, open columns made of metal or plastic, are driven into bareground or vegetated soils. Porewater samplers, which are commercially available and use vacuum to collect percolating soil water, are installed at predetermined depths within the lysimeters. At prearranged times following chemical application to experimental plots, porewater is collected, and lysimeters, containing soil and vegetation, are exhumed. By analyzing chemical concentrations in the lysimeter soil, vegetation, and porewater, downward leaching rates, soil retention capacities, and plant uptake for the chemical of interest may be quantified. Because field lysimetry and porewater sampling are conducted under natural environmental conditions and with minimal soil disturbance, derived results project real-case scenarios and provide valuable information for chemical management. As chemicals are increasingly applied to land worldwide, the described techniques may be utilized to determine whether applied chemicals pose adverse effects to human health or the environment.

Field lysimetry and porewater sampling allow researchers to evaluate the fate of chemicals applied to soils and established vegetation. The goal of this protocol is to demonstrate how to install required instrumentation and collect samples for chemical analysis during integrated field lysimetry and porewater sampling experiments.

משולב שדה Lysimetry וPorewater דגימה להערכת כימית ניידות בקרקעות וצמחייה הוקמה

Potentially toxic chemicals are routinely applied to land to meet growing demands on waste management and food production, but the fate of these chemicals ...

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about the overall structure of terrestrial microbial communities. PLFA profiling has been extensively used in a range of ecosystems as a biological index of overall soil quality, and as a quantitative indicator of soil response to land management and other environmental stressors.
The standard method presented here outlines four key steps: 1. lipid extraction from soil samples with a single-phase chloroform mixture, 2. fractionation using solid phase extraction columns to isolate phospholipids from other extracted lipids, 3. methanolysis of phospholipids to produce fatty acid methyl esters (FAMEs), and 4. FAME analysis by capillary gas chromatography using a flame ionization detector (GC-FID). Two standards are used, including 1,2-dinonadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (PC(19:0/19:0)) to assess the overall recovery of the extraction method, and methyl decanoate (MeC10:0) as an internal standard (ISTD) for the GC analysis.

Phospholipid fatty acids provide information about the structure of soil microbial communities. We present methods for extraction from soil samples with a single-phase chloroform mixture, fractionation of extracted lipids using solid phase extraction columns, and methanolysis to produce fatty acid methyl esters, which are analyzed by capillary gas chromatography.

הפקה וניתוח של פוספוליפידים מיקרוביאלית חומצות שומן בקרקעות

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about ...

A Gusseted Thermogradient Table to Control Soil Temperatures for Evaluating Plant Growth and Monitoring Soil Processes

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a series of incubators. A temperature gradient is passively established across the surface of the table between the heated and cooled ends and is lost quickly at distances above the surface. Since temperature is only controlled on the table surface, experiments are restricted to shallow containers, such as Petri dishes, placed on the table. Welding continuous aluminum vertical strips or gussets perpendicular to the surface of a table enables temperature control in depth via convective heat flow. Soil in the channels between gussets was maintained across a gradient of temperatures allowing a greater diversity of experimentation. The gusseted design was evaluated by germinating oat, lettuce, tomato, and melon seeds. Soil temperatures were monitored using individual, battery-powered dataloggers positioned across the table. LED lights installed in the lids or along the sides of the gradient table create a controlled temperature chamber where seedlings can be grown over a range of temperatures. The gusseted design enabled accurate determination of optimum temperatures for fastest germination rate and the highest percentage germination for each species. Germination information from gradient table experiments can help predict seed germination and seedling growth under the adverse soil conditions often encountered during field crop production. Temperature effects on seed germination, seedling growth, and soil ecology can be tested under controlled conditions in a laboratory using a gusseted thermogradient table.

Traditional thermogradient tables create a range of temperatures across the surface. Welding gussets perpendicular to the surface of a thermogradient table will control temperature in depth increasing possible research applications.

לוח א gusseted Thermogradient לשלוט טמפרטורות קרקע להערכת גדילת צמחי ניטור תהליכי אדמה

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a ...

Modification and Application of a Leaf Blower-vac for Field Sampling of Arthropods

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropod populations in rice. When used in combination with an enclosure, application of this sampling device provides absolute estimates of the populations of arthropods as numbers per standardized sampling area. The sampling efficiency depends critically on the sampling duration. In a mature rice crop, a two-minute sampling in an enclosure of 0.13 m2 yields more than 90% of the arthropod population. The device also allows sampling of arthropods dwelling on the water surface or the soil in rice paddies, but it is not suitable for sampling fast flying insects, such as predatory Odonata or larger hymenopterous parasitoids. The modified blower-vac is simple to construct, and cheaper and easier to handle than traditional suction sampling devices, such as D-vac. The low cost makes the modified blower-vac also accessible to researchers in developing countries.

Assessment of arthropod abundance in crops is critical for investigating population dynamics and species interactions. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropods in rice.

שינוי ויישום של VAC מפוח עלים עבור דגימת שדה של פרוקי רגליים

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current measures to combat such pathogens have proved too conservative and, thus, not sufficiently effective, and they can potentially pose environmental risks. Therefore, it is extremely necessary to identify host-resistance factors to assist in controlling plant diseases naturally through the identification of resistant germplasm, the isolation and characterization of resistance genes, and the molecular breeding of resistant cultivars. In this regard, there is need to establish an accurate, rapid, and large-scale inoculation method to breed and develop plant resistance genes. The rice blast fungal pathogen Magnaporthe grisea causes severe disease symptoms and yield losses. Recently, M. grisea has emerged as a model organism for studying the mechanisms of plant-fungal pathogen interactions. Hence, we report the development of a plant virulence test method that is specific for M. grisea. This method provides for both spray inoculation with a conidial suspension and wounding inoculation with mycelium cubes or droplets of conidial suspension. The key step of the wounding inoculation method for detached rice leaves is to make wounds on plant leaves, which avoids any interference caused by host penetration resistance. This spray/wounding protocol contributes to the rapid, accurate, and large-scale screening of the pathotypes of M. grisea isolates. This integrated and systematic plant infection method will serve as an excellent starting point for gaining a broad perspective of issues in plant pathology.

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Here, we present a protocol to test plant virulence with the plant pathogen Magnaporthe grisea. This report will contribute to the large-scale screening of the pathotypes of fungi isolates and serve as an excellent starting point for understanding the resistant mechanisms of plants during molecular breeding.

הבדיקה זיהום צמח: ריסוס, בתיווך הפצע חיסון עם הפתוגן של צמח Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

Laboratory and Field Protocol for Estimating Sheet Erosion Rates from Dendrogeomorphology

Sheet erosion is among the crucial drivers of soil degradation. Erosion is controlled by environmental factors and human activities, which often lead to severe environmental impacts. The understanding of sheet erosion is, consequently, a worldwide issue with implications for both environment and economies. However, the knowledge on how erosion evolves in space and time is still limited, as well as its effects on the environment. Below, we explain a new dendrogeomorphological protocol for deriving eroded soil thickness (Ex) by acquiring accurate microtopographic data using both terrestrial laser scanning (TLS) and microtopographic profile gauges. Additionally, standard dendrogeomorphic procedures, dependent on anatomical variations in root rings, are utilized to establish the timing of exposure. Both TLS and microtopographic profile gauges are used to obtain ground surface pro&#64257;les, from which Ex is estimated after the threshold distance (TD) is determined, i.e., the distance between the root and the sediment knickpoint, which allows de&#64257;ning the lowering of the ground surface caused by sheet erosion. For each profile, we measured the height between the topside of the root and a virtual plane tangential to the ground surface. In this way, we intended to avoid small-scale impacts of soil deformation, which may be due to pressures exerted by the root system, or by the arrangement of exposed roots. This may provoke small amounts of soil sedimentation or erosion depending on how they physically affect the surface runoff. We demonstrate that an adequate microtopographic characterization of exposed roots and their associated ground surface is very valuable to obtain accurate erosion rates. This finding could be utilized to develop the best management practices designed to eventually halt or perhaps, at least, lessen soil erosion, so that more sustainable management policies can be put into practice.

Characterizing erosion from dendrogeomorphology has usually focused on accurately finding the starting time of root exposure, by examining macroscopic or cell level changes caused by exposure. Here, we offer a detailed description of different novel techniques to obtain more precise erosion rates from highly accurate microtopographic data.

מעבדה ופרוטוקול שדה עבור הערכת גיליון שחיקת המחירים מ- Dendrogeomorphology

Sheet erosion is among the crucial drivers of soil degradation. Erosion is controlled by environmental factors and human activities, which often lead to ...

Construction of a Compact Low-Cost Radiation Shield for Air-Temperature Sensors in Ecological Field Studies

Low cost temperature sensors are increasingly used by ecologists to assess climatic variation and change on ecologically relevant scales. Although cost-effective, if not deployed with proper solar radiation shielding, the observations recorded from these sensors will be biased and inaccurate. Manufactured radiation shields are effective at minimizing this bias, but are expensive compared to the cost of these sensors. Here, we provide a detailed methodology for constructing a compact version of a previously described custom fabricated radiation shield, which is more accurate than other published shielding methods that attempt to minimize shield size or construction costs. The method requires very little material: corrugated plastic sheets, aluminum foil duct tape, and cable ties. One 15 cm and two 10 cm squares of corrugated plastic are used for each shield. After cutting, scoring, taping and stapling of the sheets, the 10 cm squares form the bottom two layers of the solar radiation shield, while the 15 cm square forms the top layer. The three sheets are held together with cable ties. This compact solar radiation shield can be suspended, or placed against any flat surface. Care must be taken to ensure that the shield is completely parallel to the ground to prevent direct solar radiation from reaching the sensor, possibly causing increased warm biases in sun-exposed sites in the morning and afternoon relative to the original, larger design. Even so, differences in recorded temperatures between the smaller, compact shield design and the original design were small (mean daytime bias = 0.06 &#176;C). Construction costs are less than half of the original shield design, and the new design results in a less conspicuous instrument that may be advantageous in many field ecology settings.

With the advent of small, low-cost environmental sensors, it is now possible to deploy high-density networks of sensors to measure hyper localized temperature variation. Here, we provide a detailed methodology for constructing a compact version of a previously described custom-fabricated radiation shield for use with inexpensive thermochrons.

בניית מגן קרינה נמוכים קומפקטי לחיישני הטמפרטורה בלימודי שדה אקולוגי

Low cost temperature sensors are increasingly used by ecologists to assess climatic variation and change on ecologically relevant scales. Although ...

Visualizing Efficacy of Pesticides Against Disease Vector Mosquitoes in the Field

Efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects such as mosquitoes, sand flies, and filth-breeding flies is not uniform across ecological zones. To best protect public and veterinary health from these insects, the environmental limitations of pesticides need to be investigated to inform effective use of the most appropriate pesticide formulations and techniques. We have developed a research program to evaluate combinations of pesticides, pesticide application equipment, and application techniques in hot-arid desert, hot-humid tropical, warm and cool temperate, and urban locations to derive pesticide use guidelines specific to target insect and environment. To these ends we designed a system of protocols to support efficient, cost-effective, portable, and standardized evaluation of a diverse range of pesticides and equipment across multiple environments. At the core of these protocols is the use of an array of small cages with colony-reared sentinel mosquitoes (adults and immatures) and sand flies (adults), strategically arranged in natural habitats and exposed to pesticide spray. Spatial and temporal patterns of pesticide efficacy are derived from percent mortality in sentinel cages, then mapped and visualized in a geographic information system. Maps of sentinel mortality data may be statistically compared to evaluate relative efficacy of a pesticide across multiple environments, or to study multiple pesticides in a single environment. Protocols may be modified to accommodate a variety of scenarios, including, for example, the vertical orientation of sentinels in canopy habitats or simultaneous testing of ground and aerial application methods.

The efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects is not uniform across different ecological zones. Here we present a system of techniques using captive vector insects as sentinels for pesticide efficacy to derive electronic maps supporting the standard evaluation of pesticides across multiple environments.

להמחיש את היעילות של חומרי הדברה נגד יתושים וקטור מחלת בשטח

Efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects such as mosquitoes, sand flies, and filth-breeding flies is not uniform ...

Construction of a Low-cost Mobile Incubator for Field and Laboratory Use

Incubators are essential for a range of culture-based microbial methods, such as membrane filtration followed by cultivation for assessing drinking water quality. However, commercially available incubators are often costly, difficult to transport, not flexible in terms of volume, and/or poorly adapted to local field conditions where access to electricity is unreliable. The purpose of this study was to develop an adaptable, low-cost and transportable incubator that can be constructed using readily available components. The electronic core of the incubator was first developed. These components were then tested under a range of ambient temperature conditions (3.5 &#176;C - 39 &#176;C) using three types of incubator shells (polystyrene foam box, hard cooler box, and cardboard box covered with a survival blanket). The electronic core showed comparable performance to a standard laboratory incubator in terms of the time required to reach the set temperature, inner temperature stability and spatial dispersion, power consumption, and microbial growth. The incubator set-ups were also effective at moderate and low ambient temperatures (between 3.5 &#176;C and 27 &#176;C), and at high temperatures (39 &#176;C) when the incubator set temperature was higher. This incubator prototype is low-cost (&lt; 300 USD) and adaptable to a variety of materials and volumes. Its demountable structure makes it easy to transport. It can be used in both established laboratories with grid power or in remote settings powered by solar energy or a car battery. It is particularly useful as an equipment option for field laboratories in areas with limited access to resources for water quality monitoring.

This paper describes a method for building an adaptable, low-cost and transportable incubator for microbial testing of drinking water. Our design is based on widely available materials and can operate under a range of field conditions, while still offering the advantages of higher-end laboratory-based models.

הקמת חממה נייד בעלות נמוכה עבור שדה והשתמש מעבדה

Incubators are essential for a range of culture-based microbial methods, such as membrane filtration followed by cultivation for assessing drinking water ...