המחברים מודים ביל מתמודדת (האריס החברה מורן זרע, דייויס) לאספקת פירות מלון בניתוח זה. פרויקט זה נתמך על ידי גידולים מיוחדים תוכנית המחקר היוזמה להעניק מענקים תחרותי לא. 2009-51181-05783 מן הלאומי USDA המכון המזון והחקלאות.

1. לדוגמא הכנת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קציר פירות בשלב הבגרות הרצויה. יש לשטוף במי ברז על מנת להסיר לכלוך ואבק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר פירות לניתוח על בסיס היעדר פגמים חיצוניים ופנימיים, והומוגניות גודל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים פירות longitudinally לתוך פלחי כדי לשמש הדגימה תנודתי. במידת הצורך, להסיר את העור, זרעים, חלל רקמת זרע, או בור. רקמת מבחר פירות חייב להיות עקבי לאורך כל הניסוי ולקחת בחשבון את השונות בתוך פירות אחת (כלומר, להשיג מדגם לא פחות מ לפרוח, המשוונית ולסיים חלקי גזע). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את רקמת הפרי הנבחר, לערבב את זה כדי באקראי, ואז לשקול את 200 גרם לתוך בלנדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 200 מ&quot;ל של תמיסת CaCl 2 רווי (372.5 גרם ב 20 ° C, 500 מ&quot;ל מים deionized) ו 50 μL של פתרון של 100 מ&quot;מ 2-methylbutyl isovalerate של מתנול. 2 CaCl נועד לשמש מעכב של AC האנזימטיתtivity, שעלולה להתרחש לאחר חיתוך שמאחד את בשר הפרי. 2-Methylbutyl isovalerate נוסף כסטנדרט פנימי לפקח על כל ההפסדים האפשריים של חומרים נדיפים בתהליך homogenization. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Homogenize התערובת בבלנדר במעבדה (וארינג, ארה&quot;ב), למשך 30 שניות ב -18,000 סל&quot;ד, ומיד שופכים לתוך בקבוק זכוכית חותם עם מכסה טפלון. שמור homogenate בבקבוק בטמפרטורת החדר עד שכל דגימות מוכנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שמזג homogenate לתוך הבקבוק, להמתין 10 דקות כדי לאפשר הפרדה בין הקצף מנוזל, אז פיפטה 5 מ&quot;ל של נוזל aliquots, ללא קצף, תוך 20 מ&quot;ל צלוחיות זכוכית ענבר ולאטום את צלוחיות עם ראשי ברגים פלדה מצויד טפלון / סיליקון septa. הליך זה מתאים מלון והכנת homogenate אגס. אם פירות אחרים משמשים לניתוח, צעד צנטריפוגה, ייתכן שיהיה צורך. לכן, להסיר את הקצף ואז בצנטריפוגה נוזל החלקיקים גלולה כי אולילחסום פיפטה. הכינו לפחות שלוש צלוחיות לפי המדגם לשמש טכנית משכפל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, דגימות יכול להיות מנותח באופן מיידי או פלאש קפואים בחנקן נוזלי ומאוחסנים בטמפרטורה נמוכה במיוחד (-80 ° C) לצורך ניתוח מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור דגימות קפואות, ביום הניתוח להסיר את הדגימות מהמקפיא ולאפשר להם להפשיר במשך שעה בטמפרטורת החדר. לאחר ההפשרה, ולפני הניתוח, להחליף את מכסה בקבוקון עם אחד חדש שיש לו מחצה נקייה ויבשה. אם מחצה אינו מוחלף, המים מתעבים על מחצה במהלך ההפשרה יכול להימשך אל המכשיר ולפגוע בו. </li></ol> 2. כרומטוגרפיה משטח גז גל אקוסטי (GC-SAW) הקמה רכישת נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את שיטת הניתוח המתאים zNose. לצורך ניתוח של פרופיל, אסתר עשיר נדיף של מלון, הפרמטרים שלנו בגירסה MicroSense 5.44.22 תוכנה (ניוברי פארק, קליפורניה, ארה&quot;ב) הם כדלקמן: שאיבה אמיץ אלכניסת למשך 20 שניות בכל 30 מ&quot;ל דקות -1 באמצעות משאבה; טמפרטורת כניסת ב 200 מעלות צלזיוס, טמפרטורה Tenax מלכודת ב 225 מעלות צלזיוס; ספיקת הגז המוביל (טוהר הליום 99.999%) של 2.9 מ&quot;ל דקות-1, עמודה (DB-5 הטור, 1 מ &#39;× 0.25 × 0.25mm מזהה הסרט עובי מיקרומטר) תוכנית הטמפרטורה מ 45 ° C עד 180 ° C בקצב של 10 ° C sec -1; חיישן הטמפרטורה על 40 מעלות צלזיוס; שסתום ב 165 ° C. זמן הניתוח הכולל הוא 1 דקה לדגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר מחט נירוסטה עם קצה שאינם מגלענת כדי כניסת zNose ולטהר את המערכת כמה פעמים עם אוויר הסביבה, עד לקו הבסיס הוא יציב ולא שיאים גדולים יותר מ -200 ספירות (CT) מזוהים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכוון את המכשיר באמצעות פתרון של אלקאנים שרשרת ישר (C6-C14). בעקבות המנגינה משמש את תוכנת המכשיר כדי להמיר את זמן השמירה של פסגות eluted בין יחידות הזמן לתוך Kovats אינדקס (KI) יחידות. כתוצאה מכך, לאחר מערכת מכוון, זמני השמירה מדווחים יחידות קי. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ניתוח, מאפשרים המדגם כדי לאזן במשך 30 דקות. לנתח אחד צלוחיות לדוגמה, להכניס מחט מחצה את הבקבוקון כדי לשחרר את הלחץ. לאחר מכן, הכנס את המחט מחוברת כניסת מכשיר לתוך מחצה את הבקבוקון וליזום הדגימה אמיץ. ניתוח טכני לפחות 3 משכפל לדגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן ידני להפעיל את המכשיר על ידי לחיצה על כפתור &quot;הפעל&quot;, מפעיל משאבת ומסלקת את אדי מציגים מעל המדגם. בסופו של הניתוח, הכרומתוגרמה מופיע על המסך, חיישן מחומם באופן אוטומטי עד 150 מעלות צלזיוס למשך 10 שניות לנקות את זה. כאשר מצב המערכת כפתור תיבת הופך ירוק שוב, המכשיר מוכן לנתח דוגמה נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להבטיח בסיס יציב ניקוי מערכת נכונה, הפעל לפחות אחד ריק אוויר בין מדגם זה. כדי לפקח על זיהום אפשרי תנודתי מבקבוקון וכובע, לנתח שני בקבוקון למוצרי החסר (בקבוקון ריק עם מכסה), בתחילת ובסוף היום. &lt;/ Li&gt; </ol> 3. ייצוא נתונים וניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייצא את הנתונים לתוך קובץ של Microsoft Excel לאחר הרכישה באמצעות &quot;רישום שיא&quot; פונקציה בתוכנה MicroSense. לאחר הנתונים מיוצאים, להוסיף עמודות המכילים תוויות של משתנים משכפל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשנות את תבנית נתונים למניפולציה קלה באמצעות Python (גרסה 2.6, זמין בחינם מקוון) התסריט שפיתחנו, בשם &quot;reform_data.py&quot; (ראה איור 1 למשל של לעצב את הנתונים לפני ואחרי השימוש סקריפט &quot;reform_data. py &quot;). שמו של קובץ המקור (בפורמט xls) ואת שם הגיליון עבור נתוני הקלט, כמו גם את שם הקובץ הרצוי עבור פלט (בפורמט xls), הם עריכה ישירה לתוך התסריט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל &quot;kim_interface.py&quot; (שנכתב גם Python 2.6, ראה איור 2), ולייבא את הנתונים מקובץ שנוצר בשלב הקודם. באופן ספציפי, הניתוח מבוסס על צפייה וניתוח כמה פעמים כל ערך KI היה שזוהו(&quot;להיטים קי&quot;). לכן התוכנית מציגה גרף עמודות של להיטים קי עבור כל ערך KI. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את הלהיטים קי של תת קבוצות ספציפיות של דגימות, ניתוח טכני של כל קבוצה משכפל יחד. לשם כך, לנתח כל טיפול או משתנה בנפרד על ידי סימון / ביטול הסימון בתיבות המתאימות. ראה איור 2 הכיתוב על תיאור מפורט של ממשק המשתמש (GUI) תכונות גרפי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר זיהוי רוחב של חלון אחד KI משתמש GUI, בחר באופן אקראי חלק chromatograms המתאימים תוכנה Microsense ולהעריך חפיפה בין פסגות טכנית משכפל. ראה איור 3 לדוגמה של chromatograms כיסו של 2 הטכני משכפל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר חלון KI הוא individuated, השתמש בתכונת זמין &quot;מיזוג&quot; ב GUI למזג את כיס שנופלים בחלון, אל KI המאוכלס ביותר. באמצעות תכונה זו, פסגות שכותרתו עם מגוון של ערכים קי מאוחדים תחת המותג KI אחד, allowing בטיפול פסגות כגון משתנה אחד. לשם כך, תחילה לחץ על הכפתור &quot;מיזוג&quot; כדי להפעיל את התכונה ובחר KI המאוכלס ביותר כמרכז של החלון על ידי לחיצה על השמאלי בשורת המקביל. לאחר שסרגל נבחר, הוא משנה צבע לירוק. כדי למזג את כיס שנופלים בתוך החלון לתוך KI שנבחר, לחץ לחיצה ימנית על הסורגים המקביל; זה גורם הסורגים להאדים, בעוד בר כחול באורך המתאים מתווסף על גבי KI המרכזית (ראה איור 4 ). לאחר כל כיס נבחרים מוזגו לתוך KI המרכזי המתאים, לחץ על הכפתור &quot;מיזוג&quot; שוב כדי לקבל את השינויים, זה גורם כפתור &quot;מיזוג&quot; להפוך את הצהוב. במקרה של טעויות, לחצן &quot;ביטול מיזוג&quot; הוא גם זמין. כדי ביטול מיזוג, לחץ על כפתור &quot;ביטול מיזוג&quot; ב-GUI, ולאחר מכן לחץ לחיצה ימנית על סרגל אדום אתה רוצה ביטול מיזוג. מאדום, בר הופך לכחול. לחץ על &quot;ביטול מיזוג&quot; שוב על הלחצן כדי לקבל את השינויים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם אחד ניסיונות אניncorrectly למזג שתי פסגות במדגם אחד לתוך ערך KI אחת, הודעת שגיאה מודפס. בנסיבות כאלה, לבדוק מקרוב הכרומתוגרמה ולהגדיר מחדש את החלון KI באזור זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שכל פעולות המתמזגות בוצעו, לשמור את הקובץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני שתמשיך ניתוחים סטטיסטיים, chromatograms האוויר ואת החסר הבקבוקון מנותחים לפקח על זיהומים אפשריים. לאחר KI של פסגות את החסר זוהו, לחסר שטח של שיא זוהה אוויר ו / או בקבוקון אפס מאזור הנוכחי לשיא במדגם. להמשיך כך עם ניתוחים סטטיסטיים. </li></ol> 4. נציג תוצאות האף האלקטרוני היה מסוגל לזהות הבדלים פרופילים נדיפים בקרב פירות שנקטפו מלון בשלבים שונים לפדיון (איור 5). עשרים KI חלונות זוהו לאורך כל הדגימות. ניתוח שונות הראה כי 14 פסגות detected על ידי האף האלקטרוני הבדל משמעותי בין שלבי הבגרות. באיור 6, יומן האזורים שיא ממוצע של 14 רכיבים אלה נרשמות להראות הבדלים שכיחותם שיא בין שני שלבים בשלות, בוגרות מוקדם פרי בשל לחלוטין. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3821/3821fig1.jpg" /> באיור 1. דוגמאות של תבנית נתונים לייצא מתוך התוכנה במכשיר () ואחרי השינוי, שבוצעה באמצעות סקריפט &quot;reform_data.py&quot; (ב &#39;). כדי להקל על נתונים מניפולציה וניתוח, כל כיס ייחודיים מזוהים בכל הדגימות, אז הנתונים הם מחדש בצורה מידע מדגם בשורות ושטח השיא בעמודות, המתאימים כיס ייחודיות. אם השיא לא זוהה על הערך KI במדגם, התא המתאים נשאר ריק. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3821/3821fig2.jpg" /> 2. איור לכידת מסך מ שטרלא קובץ &quot;kim_interface.py&quot;. במרכז העלילה מציגה מספר כניסות לכל KI מול קי. &quot;הכה לכל KI&quot; הוא מספר דוגמאות שבהן שיא עם KI ספציפי זה היה שזוהו. בצד שמאל, יש שלוש קופסאות צהובות השליטה הנתונים שנבחרו. הם מציגים פרמטרים לחלק את ערכת נתונים (טיפולים, משכפל, משתנים איכותיים, וכו &#39;). בנתון זה, הם (מלמעלה למטה):, וראייטי תאריך נטיעה הבמה לפדיון על הקציר. בתחתית: על ידי לחיצה על 3 ברים והעברה בר כחול שמאלה או ימינה, אפשר לבחור את מינימום הערך המרבי של הטווח קי, וחבל שיא המינימום (&quot;סף&quot;). מימין: כפתור &quot;מיזוג&quot; מאפשר מיזוג כיס נבחרים באופן ידני על ידי לחיצה על הסורגים בעלילה. כפתור &quot;ביטול מיזוג&quot; מאפשר להפוך את התהליך במקרים נבחרים. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3821/3821fig3.jpg" /> 3. איור כיסו על chromatograms (ב<html> שחור ואדום) של 2 הטכני משכפל מ אמיץ את מלון תנודתי כדי להמחיש שינוי זמן השמירה. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/3821/3821fig4.jpg" /> איור 4. דוגמה KI מיזוג ההליך. בעלילה המרכזית, בר ירוק (מרכז KI) מייצג את KI המאוכלס ביותר, אשר נבחרה כמרכז של החלון קי. KI X ו-Y הם KI כיס נופלים בחלון עניין והם צריכים ימוזגו לתוך KI המרכזי. על ידי לחיצה ימנית בשורת KI של X, מסתבר אדום, בעת ובעונה אחת, בר כחול באורך זהה של בר KI של X, מופיע על גבי אחד ירוק. על ידי חזרה על אותו תהליך של KI-Y, את אורך הבר הכחול (KIS התמזגו) יגדל באורך המתאים. לאחר כל כיס נוספו, על ידי לחיצה על הכפתור הירוק &quot;מיזוג&quot;, מסתיים תהליך מיזוג, השינויים יישמרו, וגם את צבע הכפתור הופך צהוב. / Files/ftp_upload/3821/3821fig5.jpg &quot;/&gt; איור 5. שני chromatograms של דגימות מלון שנקטפו בשלבים שונים לפדיון, בוגרת מוקדם (למעלה) ובשלים לחלוטין (למטה), כדי להמחיש את היכולת של האף האלקטרוני כדי לאתר הבדלים שכיחותם נדיפים. <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/3821/3821fig6.jpg" /> איור 6. העלילה רדאר מראה את אזור השיא של 14 רכיבים הנמצאים שתי דגימות מלון בשני שלבים שונים לפדיון מוקדם, בוגרים בשלים לגמרי. אזורי שיא מדווחים בהיקף יומן לעזור לדמיין השוואה. המספרים בסוף כל קרן מייצג את מדדי Kovats המתאימים.

<ol>
	<li>Kader, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flavor+quality+of+fruits+and+vegetables.">Flavor quality of fruits and vegetables.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88, 1863-1868 (2008).</li><li>Persaud, K., Dodd, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+discriminant+mechanisms+in+the+mammalian+olfactory+system+using+a+model+nose.">Analysis of discriminant mechanisms in the mammalian olfactory system using a model nose.</a> Nature. 299, 352-355 (1982).</li><li>Gardner, J. W., Bartlett, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+brief-history+of+electronic+noses.">A brief-history of electronic noses.</a> Sensors and Actuators. 18, 211-220 (1994).</li><li>Rock, F., Barsan, N., Weimar, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electronic+nose:+Current+status+and+future+trends.">Electronic nose: Current status and future trends.</a> Chem. Rev. 108, 705-725 (2008).</li><li>Li, C., Heinemann, P. H., Irudayaraj, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+apple+deterioration+using+an+electronic+nose+and+zNose.">Detection of apple deterioration using an electronic nose and zNose.</a> Transactions of the Asabe. 50, 1417-1425 (2007).</li><li>Li, Z. F., Wang, N., Raghavan, G. S. V., Vigneault, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ripeness+and+rot+evaluation+of+'Tommy+Atkins'+mango+fruit+through+volatiles+detection.">Ripeness and rot evaluation of 'Tommy Atkins' mango fruit through volatiles detection.</a> J. Food Eng. 91, 319-324 (2009).</li><li>Oh, S. Y., Ko, J. W., Jeong, S. Y., Hong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+and+exploration+of+fast+gas+chromatography-surface+acoustic+wave+sensor+to+the+analysis+of+thymus+species.">Application and exploration of fast gas chromatography-surface acoustic wave sensor to the analysis of thymus species.</a> J. Chromatogr. A. 1205, 117-127 (2008).</li><li>Watkins, P., Wijesundera, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+zNose+for+the+analysis+of+selected+grape+aroma+compounds.">Application of zNose for the analysis of selected grape aroma compounds.</a> Talanta. 70, 595-601 (2006).</li><li>Gan, H. L., Man, Y. B. C., Tan, C. P., NorAini, I., Nazimah, S. A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+vegetable+oils+by+surface+acoustic+wave+sensing+electronic+nose.">Characterisation of vegetable oils by surface acoustic wave sensing electronic nose.</a> Food Chem. 89, 507-518 (2005).</li><li>Marina, A. M., Man, Y. B. C., Amin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+SAW+Sensor+Electronic+Nose+for+Detecting+the+Adulteration+of+Virgin+Coconut+Oil+with+RBD+Palm+Kernel+Olein.">Use of the SAW Sensor Electronic Nose for Detecting the Adulteration of Virgin Coconut Oil with RBD Palm Kernel Olein.</a> Journal of the American Oil Chemists Society. 87, 263-270 (2010).</li><li>Evans, M. B., Haken, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+in+the+gas-chromatographic+index+scheme.">Recent developments in the gas-chromatographic index scheme.</a> Journal of Chromatography. 472, 93-127 (1989).</li></ol>

אין לנו מה למסור.

אפים אלקטרוניים מייצגים שיטה מבטיחה להערכה, מהירה מטרת פרופילים ארומה של פירות או נדיפים עשירים ודוגמאות. עם זאת, עובר בזמן השמירה מהווים אתגר לזיהוי שיא עלול להוביל לפרשנות שגויה של הנתונים כאשר שני chromatograms לא מיושרים באופן מושלם. בדיקה ויזואלית של chromatograms עולה כי ההשתנות של הזמנים שמירה בין דגימות לעתים קרובות נגרמת השיא אותו להיות מתויג עם ערכים קי שונים מעט (כ ± 10). זה מתורגם למספר מוגזם של KIS ייחודיים שהתגלו. על מנת לנצל את העובדות כי (א) תרכובות שונות נמצאים בשלבים שונים לפדיון (ב) טכנית משכפל זהים בקירוב, שני תסריטים מבוססי מחשב (&quot;kim_merge.py&quot;, אשר מכיל את השגרה לטיפול בנתונים סט, ו &quot;kim_interface.py&quot;, אשר מספק ממשק המשתמש הגרפי (GUI)) פותחו באופן שיטתילהשוות דגימות באופן חצי אוטומטי, מאוד לצמצם את הזמן הדרוש לניתוח הכרומתוגרמה של ערכות נתונים גדולות. תוכניות אלה מאפשרות איחוד, מקום שמתאים, של פסגות שכותרתו עם מגוון של ערכים קי תחת המותג KI אחת. זו משרתת שתי מטרות חשובות: (א) היא מאפשרת ניתוח סטטיסטי לטיפול פסגות כגון משתנה אחד, ו (ב) מאפשר זיהוי שיא בהשוואה למערכות אחרות וערכים שפורסמו. התוצאות המוצגות כאן עולה כי דגימות מלון ניתן אפליה על בסיס בגרות פרופיל ארומה באמצעות מערכת zNose בשילוב עם זיהוי KI הולם. זה מייצג את הטכנולוגיה החדשה מבטיחה ניתוח של נדיפים שעלולים לשמש תוכניות בקרת איכות.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> סידן כלוריד </td><td> MP ביו רפואית </td><td> 195088 </td><td></td></tr><tr><td> 2-Methylbutyl isovalerate </td><td> SAFC עולמי </td><td> W350613 </td><td> ≥ 98%, טבעי, ה-FCC </td></tr><tr><td> מתנול </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> A411-4 </td><td></td></tr><tr><td> צלוחית </td><td> Sigma / Supelco </td><td> SU860098 </td><td></td></tr><tr><td> כובע </td><td> Sigma / Supelco </td><td> SU860101 </td><td></td></tr><tr><td> המעבדה בלנדר </td><td> וארינג מעבדה המדע </td><td> 7009G </td><td> 2 מהירות המערבל, 1 - מיכל זכוכית ליטר </td></tr><tr><td> בקבוק </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 06-414-1C </td><td> פיירקס, 500 מ&quot;ל, פוליפרופילן התוספת חותם </td></tr><tr><td> מחט </td><td> חיישן אלקטרונית טכנולוגיה </td><td> TLC101046 </td><td> חור בצד luer </td></tr><tr><td> אלקאנים פתרון </td><td> חיישן אלקטרונית טכנולוגיה </td><td></td><td> C6-C14 אלקאנים פתרון מתנול </td></tr><tr><td> zNose </td><td> חיישן אלקטרונית טכנולוגיה </td><td> דגם 4500 </td><td></td></tr><tr><td> DB-5-GC עמודה </td><td> חיישן אלקטרונית טכנולוגיה </td><td> SYS4500C5 </td><td></td></tr><tr><td> MicroSense </td><td> חיישן אלקטרונית טכנולוגיה </td><td> גרסה 5.44.22 </td><td></td></tr><tr><td> Python 2.6 </td><td></td><td></td><td> זמין בחינם מקוון </td></tr><tr><td> &quot;Reform_data.py&quot; ו &quot;kim_interface.py&quot; סקריפטים</td><td></td><td></td><td> הזמינות כחומר משלים על יופיטר סקריפטים </td></tr></tbody></table>

fruit volatile analysis using an electronic nose

שינויים פיזיולוגיים רבים ומגוונים להתרחש במהלך הבשלת הפרי, כולל פיתוח של תערובת תנודתי ספציפי המאפיין את ניחוח הפרי. לפדיון על הקציר הוא אחד הגורמים המרכזיים המשפיעים על איכות הטעם של פירות וירקות 1. אימות של שיטות חזקים כי במהירות להעריך בגרות פירות איכות ארומה תאפשר ניהול משופר של תוכניות רבייה מתקדמות, שיטות ייצור וטיפול postharvest. בשלושת העשורים האחרונים, מחקר רב נערך לפתח מה שנקרא אפים אלקטרוניים, שהם מכשירים המסוגלים לזהות במהירות ריחות וטעמים 2-4. כרגע יש כמה אפים אלקטרוניים מסחריים מסוגל לבצע ניתוח נדיף, המבוססים על טכנולוגיות שונות. האף האלקטרוני המשמשים את העבודה שלנו (zNose, EST, ניוברי פארק, קליפורניה, ארה&quot;ב), כולל כרומטוגרפיה אולטרה מהיר הגז יחד עם חיישן אקוסטי פני גל (UFGC-וירא). טכנולוגיה זו כבר נוסתה על יכולתה לפקח על איכות של סחורות שונות, כולל זיהוי של הידרדרות אפל 5, בשלות והערכה של ריקבון מנגו 6; פרופיל ארומה של מינים התימוס 7: C 6 תרכובות נדיפות של גרגרי הענבים 8; אפיון שמן צמחי 9 וזיהוי של adulterants בשמן קוקוס בתולה 10. מערכת זו ניתן לבצע את שלושת השלבים העיקריים של ניתוח ארומה: אמיץ את הדגימה, הפרדת חומרים נדיפים, וזיהוי. אחרי דקה אחת, פלט, הכרומתוגרמה, מופק, לאחר מחזור הקאה, המכשיר מוכן לניתוח נוסף. התוצאות שהושגו עם zNose אפשר להשוות לאלה של גז chromatographic מערכות אחרות של חישוב מדדי Kovats (KI). פעם אחת המכשיר כבר מכוון את הפתרון הסטנדרטי בספירה הכללית, זמני השמירה הם הופכים אוטומטיתכיס. עם זאת, שינויים קלים הטמפרטורה וקצב הזרימה צפויים להתרחש לאורך זמן, גורמת פעמים שמירה להיסחף. כמו כן, בהתאם הקוטביות של שלב עמודה נייח, שחזור של חישובים קי יכול להשתנות על ידי יחידות ראשי מספר 11. סדרה של תוכניות וממשקים גרפיים פותחו ולכן להשוות בין דגימות כיס מחושבים באופן אוטומטי למחצה. תוכניות אלה להפחית את הזמן הנדרש לניתוח הכרומתוגרמה של ערכות נתונים גדולות לצמצם את הסיכון מוטעה של הנתונים כאשר chromatograms לא מיושרים באופן מושלם. אנו מציגים שיטה לניתוח מהיר מתחם נדיפים בפרי. , הכנת נתונים רכישה וטיפול נהלים לדוגמה הם דנו גם.

Watch this Scientific Journal Video about Fruit Volatile Analysis Using an Electronic Nose at JoVE.com

Fruit Volatile Analysis Using an Electronic Nose

השיטה המהירה לניתוח מתחם נדיפים בפרי מתואר. התרכובות נדיפים הנמצאים אמיץ של homogenate המדגם מופרדות במהירות זוהה עם כרומטוגרפיה אולטרה מהיר גז (GC) יחד עם גל משטח אקוסטי (SAW) חיישן. נוהל לטיפול נתונים וניתוח נדון גם.

פרי ניתוח נדיפים באמצעות האף האלקטרוני

Numerous and diverse physiological changes occur during fruit ripening, including the development of a specific volatile blend that characterizes fruit ...

fruit-volatile-analysis-using-an-electronic-nose

Research

JoVE Journal

Biology

21.2K Views.  University of California, Davis. השיטה המהירה לניתוח מתחם נדיפים בפרי מתואר. התרכובות נדיפים הנמצאים אמיץ של homogenate המדגם מופרדות במהירות זוהה עם כרומטוגרפיה אולטרה מהיר גז (GC) יחד עם גל משטח אקוסטי (SAW) חיישן. נוהל לטיפול נתונים וניתוח נדון גם.

Video: Fruit Volatile Analysis Using an Electronic Nose

Studying Aggression in Drosophila (fruit flies)

Aggression is an innate behavior that evolved in the framework of defending or obtaining resources. This complex social behavior is influenced by genetic, hormonal and environmental factors. In many organisms, aggression is critical to survival but controlling and suppressing aggression in distinct contexts also has become increasingly important. In recent years, invertebrates have become increasingly useful as model systems for investigating the genetic and systems biological basis of complex social behavior. This is in part due to the diverse repertoire of behaviors exhibited by these organisms. In the accompanying video, we outline a method for analyzing aggression in Drosophila whose design encompasses important eco-ethological constraints. Details include steps for: making a fighting chamber; isolating and painting flies; adding flies to the fight chamber; and video taping fights. This approach is currently being used to identify candidate genes important in aggression and in elaborating the neuronal circuitry that underlies the output of aggression and other social behaviors.

Studying Aggression in Drosophila fruit flies

לימוד תוקפנות תסיסנית (זבובי פירות)

Aggression is an innate behavior that evolved in the framework of defending or obtaining resources.  This complex social behavior is influenced by ...

Bacterial Gene Expression Analysis Using Microarrays

Gene Expression חיידקית ניתוח שימוש microarrays

Homemade Site Directed Mutagenesis of Whole Plasmids

Site directed mutagenesis of whole plasmids is a simple way to create slightly different variations of an original plasmid. With this method the cloned target gene can be altered by substitution, deletion or insertion of a few bases directly into a plasmid. It works by simply amplifying the whole plasmid, in a non PCR-based thermocycling reaction. During the reaction mutagenic primers, carrying the desired mutation, are integrated into the newly synthesized plasmid. In this video tutorial we demonstrate an easy and cost effective way to introduce base substitutions into a plasmid. The protocol works with standard reagents and is independent from commercial kits, which often are very expensive. Applying this protocol can reduce the total cost of a reaction to an eighth of what it costs using some of the commercial kits. In this video we also comment on critical steps during the process and give detailed instructions on how to design the mutagenic primers.

Site directed mutagenesis of whole plasmids is a simple way to create slightly different variations of an original plasmid. Here we demonstrate an easy and cost effective way to introduce base substitutions into a plasmid using standard reagents.

Mutagenesis האתר ביתי בימוי של פלסמידים שלמים

Site directed mutagenesis of whole plasmids is a simple way to create slightly different variations of an original plasmid. With this method the cloned ...

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing measurement of multiple cellular phenotypes within a single assay. In this study, we utilized HCA to develop a novel assay for neurotoxicity. Neurotoxicity assessment represents an important part of drug safety evaluation, as well as being a significant focus of environmental protection efforts. Additionally, neurotoxicity is also a well-accepted in vitro marker of the development of neurodegenerative diseases such as Alzheimer's and Parkinson's diseases. Recently, the application of HCA to neuronal screening has been reported. By labeling neuronal cells with &beta;III-tubulin, HCA assays can provide high-throughput, non-subjective, quantitative measurements of parameters such as neuronal number, neurite count and neurite length, all of which can indicate neurotoxic effects. However, the role of astrocytes remains unexplored in these models. Astrocytes have an integral role in the maintenance of central nervous system (CNS) homeostasis, and are associated with both neuroprotection and neurodegradation when they are activated in response to toxic substances or disease states. GFAP is an intermediate filament protein expressed predominantly in the astrocytes of the CNS. Astrocytic activation (gliosis) leads to the upregulation of GFAP, commonly accompanied by astrocyte proliferation and hypertrophy. This process of reactive gliosis has been proposed as an early marker of damage to the nervous system. The traditional method for GFAP quantitation is by immunoassay. This approach is limited by an inability to provide information on cellular localization, morphology and cell number. We determined that HCA could be used to overcome these limitations and to simultaneously measure multiple features associated with gliosis - changes in GFAP expression, astrocyte hypertrophy, and astrocyte proliferation - within a single assay. In co-culture studies, astrocytes have been shown to protect neurons against several types of toxic insult and to critically influence neuronal survival. Recent studies have suggested that the use of astrocytes in an in vitro neurotoxicity test system may prove more relevant to human CNS structure and function than neuronal cells alone. Accordingly, we have developed an HCA assay for co-culture of neurons and astrocytes, comprised of protocols and validated, target-specific detection reagents for profiling &beta;III-tubulin and glial fibrillary acidic protein (GFAP). This assay enables simultaneous analysis of neurotoxicity, neurite outgrowth, gliosis, neuronal and astrocytic morphology and neuronal and astrocytic development in a wide variety of cellular models, representing a novel, non-subjective, high-throughput assay for neurotoxicity assessment. The assay holds great potential for enhanced detection of neurotoxicity and improved productivity in neuroscience research and drug discovery.

This article describes a novel protocol and reagent set designed for sensitive measurement of neurotoxic effects of compounds and treatments on co-cultures of neurons and astrocytes using high content analysis. Results demonstrate that high content analysis represents an exciting novel technology for neurotoxicity assessment.

עצב Astrocyte שותף תרבות Assay לניתוח תכולה גבוהה של neurotoxicity

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

Fopius arisanus (Sonan) is an important parasitoid of Tephritid fruit flies for at least two reasons. First, it is the one of only three opiine parasitoids known to infect the host during the egg stage1. Second, it has a wide range of potential fruit fly hosts. Perhaps due to its life history, F. arisanus has been a successfully used for biological control of fruit flies in multiple tropical regions2-4. One impediment to the wide use of F. arisanus for fruit fly control is that it is difficult to establish a stable laboratory colony5-9. Despite this difficulty, in the 1990s USDA researchers developed a reliable method to maintain laboratory populations of F. arisanus10-12. There is significant interest in F. arisanus biology13,14, especially regarding its ability to colonize a wide variety of Tephritid hosts14-17; interest is especially driven by the alarming spread of Bactrocera fruit fly pests to new continents in the last decade18. Further research on F. arisanus and additional deployments of this species as a biological control agent will benefit from optimizations and improvements of rearing methods. In this protocol and associated video article we describe an optimized method for rearing F. arisanus based on a previously described approach12. The method we describe here allows rearing of F. arisanus in a small scale without the use of fruit, using materials available in tropical regions around the world and with relatively low manual labor requirements.

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

Fopius arisanus is an egg-larval parasitoid of Tephritid fruit flies that is successfully used in biological control of these important tropical pests. We describe here an optimized protocol for rearing F. arisanus on a small scale using readily available materials.

פרוטוקול אופטימליים לגידול Fopius arisanus, טפיל של פירות Tephritid זבובים

Fopius arisanus (Sonan) is an important parasitoid of Tephritid fruit flies for at least two reasons. First, it is the one of only three opiine ...

Isolation and Biophysical Study of Fruit Cuticles

The cuticle, a hydrophobic protective layer on the aerial parts of terrestrial plants, functions as a versatile defensive barrier to various biotic and abiotic stresses and also regulates water flow from the external environment.1 A biopolyester (cutin) and long-chain fatty acids (waxes) form the principal structural framework of the cuticle; the functional integrity of the cuticular layer depends on the outer 'epicuticular' layer as well as the blend consisting of the cutin biopolymer and 'intracuticular' waxes.2 Herein, we describe a comprehensive protocol to extract waxes exhaustively from commercial tomato (Solanum lycopersicum) fruit cuticles or to remove epicuticular and intracuticular waxes sequentially and selectively from the cuticle composite. The method of Jetter and Sch&auml;ffer (2001) was adapted for the stepwise extraction of epicuticular and intracuticular waxes from the fruit cuticle.3,4 To monitor the process of sequential wax removal, solid-state cross-polarization magic-angle-spinning (CPMAS) 13C NMR spectroscopy was used in parallel with atomic force microscopy (AFM), providing molecular-level structural profiles of the bulk materials complemented by information on the microscale topography and roughness of the cuticular surfaces. To evaluate the cross-linking capabilities of dewaxed cuticles from cultivated wild-type and single-gene mutant tomato fruits, MAS 13C NMR was used to compare the relative proportions of oxygenated aliphatic (CHO and CH2O) chemical moieties.
Exhaustive dewaxing by stepwise Soxhlet extraction with a panel of solvents of varying polarity provides an effective means to isolate wax moieties based on the hydrophobic characteristics of their aliphatic and aromatic constituents, while preserving the chemical structure of the cutin biopolyester. The mechanical extraction of epicuticular waxes and selective removal of intracuticular waxes, when monitored by complementary physical methodologies, provides an unprecedented means to investigate the cuticle assembly: this approach reveals the supramolecular organization and structural integration of various types of waxes, the architecture of the cutin-wax matrix, and the chemical composition of each constituent. In addition, solid-state 13C NMR reveals differences in the relative numbers of CHO and CH2O chemical moieties for wild-type and mutant red ripe tomato fruits. The NMR techniques offer exceptional tools to fingerprint the molecular structure of cuticular materials that are insoluble, amorphous, and chemically heterogeneous. As a noninvasive surface-selective imaging technique, AFM furnishes an effective and direct means to probe the structural organization of the cuticular assembly on the nm-&mu;m length scale.

Aerial plant organs are protected by the cuticle, a supramolecular biopolyester-wax assembly. We present protocols to monitor selective removal of epi- and intracuticular waxes from tomato fruit cuticles on molecular and micro scales by solid-state NMR and atomic force microscopy, respectively, and to assess the cross-linking capacity of engineered cuticular biopolyesters.

בידוד מחקר Biophysical של cuticles פירות

The cuticle, a hydrophobic protective layer on the aerial parts of terrestrial plants, functions as a versatile defensive barrier to various biotic and ...

Analysis of SNARE-mediated Membrane Fusion Using an Enzymatic Cell Fusion Assay

The interactions of SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor) proteins on vesicles (v-SNAREs) and on target membranes (t-SNAREs) catalyze intracellular vesicle fusion1-4. Reconstitution assays are essential for dissecting the mechanism and regulation of SNARE-mediated membrane fusion5. In a cell fusion assay6,7, SNARE proteins are expressed ectopically at the cell surface. These "flipped" SNARE proteins drive cell-cell fusion, demonstrating that SNAREs are sufficient to fuse cellular membranes. Because the cell fusion assay is based on microscopic analysis, it is less efficient when used to analyze multiple v- and t-SNARE interactions quantitatively.
Here we describe a new assay8 that quantifies SNARE-mediated cell fusion events by activated expression of &beta;-galactosidase. Two components of the Tet-Off gene expression system9 are used as a readout system: the tetracycline-controlled transactivator (tTA) and a reporter plasmid that encodes the LacZ gene under control of the tetracycline-response element (TRE-LacZ). We transfect tTA into COS-7 cells that express flipped v-SNARE proteins at the cell surface (v-cells) and transfect TRE-LacZ into COS-7 cells that express flipped t-SNARE proteins at the cell surface (t-cells). SNARE-dependent fusion of the v- and t-cells results in the binding of tTA to TRE, the transcriptional activation of LacZ and expression of &beta;-galactosidase. The activity of &beta;-galactosidase is quantified using a colorimetric method by absorbance at 420 nm.
The vesicle-associated membrane proteins (VAMPs) are v-SNAREs that reside in various post-Golgi vesicular compartments10-15. By expressing VAMPs 1, 3, 4, 5, 7 and 8 at the same level, we compare their membrane fusion activities using the enzymatic cell fusion assay. Based on spectrometric measurement, this assay offers a quantitative approach for analyzing SNARE-mediated membrane fusion and for high-throughput studies.

We have developed a cell fusion assay that quantifies SNARE-mediated membrane fusion events by activated expression of &beta;-galactosidase.

ניתוח איחוי מלכודת בתיווך באמצעות Assay איחוי תאים אנזימתי

The interactions of SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor)  proteins on vesicles (v-SNAREs) and on target membranes ...

Laboratory Protocol for Genetic Gut Content Analyses of Aquatic Macroinvertebrates Using Group-specific rDNA Primers

Analyzing food webs is essential for a better understanding of ecosystems. For example, food web interactions can undergo severe changes caused by the invasion of non-indigenous species. However, an exact identification of field predator-prey interactions is difficult in many cases. These analyses are often based on a visual evaluation of gut content or the analysis of stable isotope ratios (&#948;15N and &#948;13C). Such methods require comprehensive knowledge about, respectively, morphologic diversity or isotopic signature from individual prey organisms, leading to obstacles in the exact identification of prey organisms. Visual gut content analyses especially underestimate soft bodied prey organisms, because maceration, ingestion and digestion of prey organisms make identification of specific species difficult. Hence, polymerase chain reaction (PCR) based strategies, for example the use of group-specific primer sets, provide a powerful tool for the investigation of food web interactions. Here, we describe detailed protocols to investigate the gut contents of macroinvertebrate consumers from the field using group-specific primer sets for nuclear ribosomal deoxyribonucleic acid (rDNA). DNA can be extracted either from whole specimens (in the case of small taxa) or out of gut contents of specimens collected in the field. Presence and functional efficiency of the DNA templates need to be confirmed directly from the tested individual using universal primer sets targeting the respective subunit of DNA. We also demonstrate that consumed prey can be determined further down to species level via PCR with unmodified group-specific primers combined with subsequent single strand conformation polymorphism (SSCP) analyses using polyacrylamide gels. Furthermore, we show that the use of different fluorescent dyes as labels enables parallel screening for DNA fragments of different prey groups from multiple gut content samples via automated fragment analysis.

Most common gut content analyses of macroinvertebrates are visual. Requiring intense knowledge about morphological diversity of prey organisms, they miss soft bodied prey and, due to strong comminution of prey, are nearly impossible for some organisms, including amphipods. We provide detailed, novel genetic approaches for macroinvertebrate prey identification in the diet of amphipods.

פרוטוקול המעבדה הגנטית ניתוחים תוכן הבטן של הימית Macroinvertebrates באמצעות קבוצה ספציפית rDNA תחל

Analyzing food webs is essential for a better understanding of ecosystems. For example, food web interactions can undergo severe changes caused by the ...

Visualization of 3D White Adipose Tissue Structure Using Whole-mount Staining

Adipose tissue is an important metabolic organ with high plasticity and is responsive to environmental stimuli and nutrient status. As such, various techniques have been developed to study the morphology and biology of adipose tissue. However, conventional visualization methods are limited to studying the tissue in 2D sections, failing to capture the 3D architecture of the whole organ. Here we present whole-mount staining, an immunohistochemistry method that preserves intact adipose tissue morphology with minimal processing steps. Hence, the structures of adipocytes and other cellular components are maintained without distortion, achieving the most representative 3D visualization of the tissue. In addition, whole-mount staining can be combined with lineage tracing methods to determine cell fate decisions. However, this technique has some limitations to providing accurate information regarding deeper parts of adipose tissue. To overcome this limitation, whole-mount staining can be further combined with tissue clearing techniques to remove the opaqueness of tissue and allow for complete visualization of entire adipose tissue anatomy using light-sheet fluorescent microscopy. Therefore, a higher resolution and more accurate representation of adipose tissue structures can be captured with the combination of these techniques.

The focus of the present study is to demonstrate the whole-mount immunostaining and visualization technique as an ideal method for 3D imaging of adipose tissue architecture and cellular component.

הדמיה של מבנה שומן לבן תלת-ממד באמצעות צביעת כולה-הר

Adipose tissue is an important metabolic organ with high plasticity and is responsive to environmental stimuli and nutrient status. As such, various ...

Simple Homemade Tools to Handle Fruit Flies&#8212;Drosophila melanogaster

The fruit fly, Drosophila melanogaster, is widely used both in biological research and biology education. Handling adult flies is common but difficult in practice, as adult flies fly. Demonstrated here is how to make some simple and cost-effective tools to address difficult issues in the handling of Drosophila. Holes in foam stoppers are made and pipette tips or funnels are inserted into the holes. Flies then move only in one direction into the pipette tip/funnel assemblage, allowing efficient control of the transfer of adult Drosophila into or out of a vial. Existing protocols have been modified for cool-anesthetizing flies by chilling in crushed ice and transferring them onto a cold, hard icepack surface. The icepack is covered with a piece of medical gauze that keeps immobilized flies from the condensed water when examined under a stereomicroscope. The flies are finally euthanized for counting and sorting or discarded by microwaving. A bottle-shaped cage has also been developed for collecting eggs, as well as a labor-saving device and accompanying protocol for cleaning glass culture vials.

Described here is the use of several homemade tools to transfer, chill, and kill adult Drosophila, as well as to clean glass culture vials and collect eggs. These tools are easy to make and are rather efficient in handling Drosophila.

כלים ביתיים פשוטים לטיפול בזבובי פירות-דרוסופילה מלאנוסטר

The fruit fly, Drosophila melanogaster, is widely used both in biological research and biology education. Handling adult flies is common but difficult in ...