עבודה זו נתמכה על ידי Cluster-DFG של אקסלנס &quot;דלקת ממשקים&quot; (RA-אם, RA-D). אנו אסירי תודה על הסיוע הטכני מצוין של קריסטין Wischnat.

1. הכנת מאגר כלמידיה Serovar trachomatis D <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדביק confluent 175 ס&quot;מ 2 תאים התרבות בקבוק המכיל הלה-229 תאים עם 4 מ&quot;ל ג trachomatis פ SPG המאגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה למשך שעה אחת ב 37 מעלות צלזיוס במהלך הרעידות קבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 20 מ&quot;ל DMEM עם FCS 10% ו 240 Cycloheximide μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה של חממה humidified עבור H 48 על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מ&quot;ל חרוזי זכוכית סטריליות, לוחצים חזק לנתק ולהרוס ג trachomatis מחסה הלה-229 תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף supernatant ולהוסיף עוד 5 מ&quot;ל של חרוזי זכוכית סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוק שלוש פעמים דקות 1 להשמיד את כל-229 הלה תאים ושחרור ג trachomatis. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה 5 דקות ב 1000 rpmi ו 4 ° C כדי לסלק פסולת תאית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף supernatant לזיהום של 8 עד 10 175 התרבות 2 ס&quot;מ תא צלוחיות גרם confluentrown עם הלה 229 תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה כל בקבוק עם חיץ 4 מ&quot;ל SPG ו 4 supernatant מ&quot;ל מזיהום הקודם למשך שעה אחת ב 37 מעלות צלזיוס עם הרעידות קבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי שעה מוסיפים 15 מ&quot;ל DMEM עם FCS 10% ו 230 cycloheximide μl ואחריו הדגירה 48 שעות ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מ&quot;ל חרוזי זכוכית מעוקרים, ללחוץ לנתק ולהרוס ג trachomatis מחסה הלה-229 תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף supernatant ולהוסיף עוד 5 מ&quot;ל של חרוזי זכוכית סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוק שלוש פעמים דקות 1 להשמיד את כל-229 הלה תאים ושחרור ג trachomatis. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה 5 דקות ב 1000 rpmi ב 4 ° C כדי לסלק פסולת תאית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף supernatant. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מילוי 40 מ&quot;ל של supernatant ב -50 צינורות מ&quot;ל פלקון, צנטריפוגות דקות 99 עם 11000 rpmi. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר צנטריפוגה לבטל supernatant ולשטוף גלולה עם 1 מ&quot;ל SPG המאגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Homogenizeגלולה ב SPG 1 מ&quot;ל ו - 20 μl aliquot ב 1, 5 מ&quot;ל חנות Eppendorf צינור, ב -70 ° C עד השימוש. הפעילות הביולוגית של מלאי מוכן אושר מודל הוקמה הלה-229 זיהום התא. </li></ol> 2. הכנת החצוצרות האדם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החנות אדם צינורות השחלה (HFT) של נשים שעברו כריתת רחם מיד לאחר הניתוח RPMI FCS המכיל 5% ללא אנטיביוטיקה ב 4 ° C עד הכנה. פרוטוקול שאושר על ידי ועדת אתיקה של אוניברסיטת ליבק (09-153). הנשים שנכללו במחקר (גיל 34 עד 53) ללא היסטוריה של ג לפני trachomatis זיהום. רקמות של החצוצרות נאסף על עיקור peripartum על פי בקשה של האם במהלך חלקים קיסרי או במהלך כריתת רחם עקב שרירנים ברחם סימפטומטיים בשלב הלוטאלי. HFT הכל נבדקו שלילי ג trachomatis ידי PCR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח HFT בצלחת פטרי שמכילה RPMI עם5% FCS ללא אנטיביוטיקה. במהלך עיבוד כל רקמה יש שקוע התקשורת כדי למנוע התייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנותקים וזורקים רקמות רקמת חיבור והרסו במהלך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דיסקציה לפתוח את HFT בזהירות עם אזמל קטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להמשך הניסויים להכין חתיכות של רקמות בגודל של 0.5 ס&quot;מ X 0.5 ס&quot;מ עד 1 ס&quot;מ x 1 ס&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הדגימה חנות זיהום HFT ב 1 מ&quot;ל RPMI המכיל FCS 5% ללא אנטיביוטיקה. דגימות HFT נדבקו 5.5x10 5 IFU (הכללה יוצרי יחידות) של C. trachomatis. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הדגימה HFT ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ו - 21% מ 2, כמו גם 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ו - 2% O 2 במשך 24 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר זמן דגירה לאסוף הדגימה חנות מקבע של מונטי לפחות שלושה ימים ב 4 ° C עד הכנה SEM / TEM. </li></ol> 3. אופן ההכנה של הדגימה HFT עבור TEM <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבורTEM להסיר דגימה מן מקבע של מונטי וחותכים 2 X 2 מ&quot;מ עד 4 x 5 מ&quot;מ חתיכות. רקמת הנותרים יכולים לשמש עבור SEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את חתיכות עם חיץ נתרן cacodylate, pH 7.35 עבור H 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה של% 1 (W / V) tetroxide אוסמיום ב אקווה dest. בן לילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר tetroxide אוסמיום עודף ידי שטיפה דקות 6x5 במאגר נתרן cacodylate, pH 7.35. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרה של מים על ידי דוגרים בריכוזים הולכים וגדלים של אתנול במים (V / V) (30% עבור 2 שעות, 40% עבור 2 שעות, 50% עבור 2 שעות, 60% עבור 2 שעות, 70% בין לילה, 80% עבור 2 ח, 90% עבור H 1, 95% עבור H 1, 100% עבור H 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את אתנול דקות 2 15 x ב פרופילן אוקסיד ולאחר מכן להעביר תערובת של 50% (V / V) araldite מוכן טרי (כולל כל הרכיבים) על פרופילן דגירה בן לילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה araldite מוכן טרי (כולל כל הרכיבים) עבור שעות לפחות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר תבניות הטבעת שטוחים וממלאים araldite. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו araldite להקשות עללפחות 48 שעות ב 60 ° C </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר חיתוך של מדגם מוטבע לחתוך חלקים דקים חצי (700 ננומטר) על ultramicrotome באמצעות סכינים זכוכית או סכין יהלום histo ואת כתם עם כתם של ריצ&#39;רדסון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזור דקים חלקים (כ -70 ננומטר) באמצעות סכין יהלום והעברה רשתות נחושת (למשל 150 רשת הריבוע). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם דקים חלקים עם אצטט uranyl 0.5% (W / V) של אקווה dest. עקבו ב -3% (w / v) ציטראט להוביל אקווה dest. ב שטיינר בסעיף אוטומטי. לחלופין, ניתן לזהות קטעים מוכתמת באופן ידני על ידי השארת רשתות 15 דק &#39;על פתרון centrifuged רווי של אצטט uranyl ב אקווה dest. ואחריו ציטראט עופרת 0.3% (W / V) של אקווה dest. </li></ol> 4. הכנת הדגימה HFT עבור SEM <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור SEM להסיר דגימה מן מקבע של מונטי, המזרח עם אפיתל כלפי מעלה על 1.5 x גיליון 1 הפקק ס&quot;מ ולתקן המיקום באמצעות מחטים חרקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את הדגימה על הפקק כדי סלי מתכת מתאימיםלשטוף למשך 30 דקות במאגר נתרן cacodylate, pH 7.35. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרה של מים על ידי דוגרים הדגימה ריכוז גדל והולך של אצטון / מים תערובות (V / V) 30% עבור 6 שעות, 40% עבור 6 שעות, 60% עבור 8 שעות, 70% בין לילה, 80% עבור 2 שעות, 90% עבור 2 שעות ו - 100% על הלילה (להיות זהירים מאוד כדי לשמור על הדגימה שקוע ברציפות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה אצטון 100% טרי הדגימה יבש על ידי ייבוש נקודה קריטית (טמפרטורה 40 ° C, לחץ 80 בר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מחטים, הפקק הדגימה דבק עם האפיתל כלפי מעלה בהר הדגימה SEM מצוידים הכרטיסייה פחמן מוליך באמצעות מלט פחמן מוליך. השתמש כסף מוליך נוזלי כדי לשפר את המוליכות בין הר ואת הכרטיסייה פחמן מוליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין ציפוי מוליך, זהב או פלטינה ופלדיום של הדגימה באמצעות גמגום coater. </li></ol> 5. מכתים סעיפים דקים דו עם הכתם של ריצ&#39;רדסון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו חלקים דקים חצי יבש בשקופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם חלקים עם מכתים פתרון על 60 מעלות צלזיוס במשך 1-2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתרחץ אקווה dest. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קטעים יבשים coverslip. </li></ol> 6. נציג תוצאות בתוך המודל הדבקת בני אדם השחלה צינור הצלחנו לדמיין הבדלים מורפולוגיה אפיתל בין שאינם נגועים שולטת (איור 1) ו ג trachomatis - שפופרות נגועות (איור 2) בתנאי normoxic. ההבדלים המורפולוגיים האופייניים משתמעת הפתוגן הנגרמת הנפיחות תמוגה של תאים החצוצרה אפיתל כי לא ניתן היה לזהות שאינם נגועים שולטת. באמצעות סעיפים דקים חצי אלקטרונים מיקרוסקופית הילוכים הצלחנו להוכיח ג תאיים הכללת trachomatis היווצרות in vivo לשעבר נגוע צינור האדם רקמות השחלה (איור 3, 5), אך לא בלתי נגועים שולטת (איור 4). כמו ריכוז החמצןtions בדרכי המין הנשי כבר נמוכה בתנאים פיסיולוגיים 11, ולהפחית עוד יותר בתהליך דלקתי כמו כן, אנו לחקור המודל שלנו בתנאי חוסר חמצן. תוצאות ראשוניות מצביעות מודל שימושי לנתח גידול הצאצאים כלמידיה ותחת חמצן בריכוזים שונים. כלמידיה הנגרמת נזק לתאים אפיתל יש להיפרד חפצים מתווכים דרך הכנת טיפול זהיר של החצוצרות לפני הזיהום (איור 6). <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. סריקה במיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM) של השחלה הלא נגוע האדם לאחר הדגירה יום אחד בינוני הביקורת (החץ הירוק מראה תא ריסי, החץ הכחול מראה שאינו ריסי התא). <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. סריקת אלקטרונים MICROS<html> עותק (SEM) של trachomatis vivo ג לשעבר נגוע החצוצרה האדם 1 הודעה ביום זיהום (הכללה לבן החץ סימן מקרע). <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig3.jpg" alt="איור 3" /> באיור 3. סעיפים דקים דו להראות תכלילים תאיים אופיינית (חיצים לבנים) 1D לאחר ההדבקה של חצוצרת הרחם האנושי עם ג לשעבר trachomatis vivo. <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4. הילוכים במיקרוסקופ אלקטרונים (TEM) של צינור שאינו נגוע השחלה אדם לאחר הדגירה יום אחד במדיום שליטה. <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig5.jpg" alt="איור 5" /> איור 5. הילוכים במיקרוסקופ אלקטרונים (TEM) של vivo לשעבר ג trachomatis נגוע החצוצרה האדם 1 הודעה ביום זיהום (חיצים לבנים מסמנים תכלילים כלמידיה). ve_content &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig6.jpg" alt="איור 6" /> איור 6. סריקה במיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM) של האפיתל החצוצרה נזק תוך הכנת טיפול זהיר של הדגימה (לבן חיצים סימן יחסל את רקמת אפיתל).

<ol>
	<li>Dean, D., Suchland, R. J., Stamm, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+long-term+cervical+persistence+of+Chlamydia+trachomatis+by+omp1+genotyping.">Evidence for long-term cervical persistence of Chlamydia trachomatis by omp1 genotyping.</a> J. Infect. Dis. 182, 909-916 (2000).</li><li>Campbell, L. A., Patton, D. L., Moore, D. E., Cappuccio, A. L., Mueller, B. A., Wang, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Chlamydia+trachomatis+deoxyribonucleic+acid+in+women+with+tubal+infertility.">Detection of Chlamydia trachomatis deoxyribonucleic acid in women with tubal infertility.</a> Fertil. Steril. 59, 45-50 (1993).</li><li>Peipert, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice.+Genital+chlamydial+infections.">Clinical practice. Genital chlamydial infections.</a> N. Engl. J. Med. 349, 2424-2430 (2003).</li><li>Mardh, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubal+factor+infertility,+with+special+regard+to+chlamydial+salpingitis.">Tubal factor infertility, with special regard to chlamydial salpingitis.</a> Curr. Opin. Infect. Dis. 17, 49-52 (2004).</li><li>Ertel, A., Verghese, A., Byers, S. W., Ochs, M., Tozeren, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathway-specific+differences+between+tumor+cell+lines+and+normal+and+tumor+tissue+cells.">Pathway-specific differences between tumor cell lines and normal and tumor tissue cells.</a> Mol. Cancer. 5, 55 (2006).</li><li>Roshick, C., Wood, H., Caldwell, H. D., McClarty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+gamma+interferon-mediated+antichlamydial+defense+mechanisms+in+human+and+mouse+cells.">Comparison of gamma interferon-mediated antichlamydial defense mechanisms in human and mouse cells.</a> Infect. Immun. 74, 225-238 (2006).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> J. Immunol. 172, 2731-2738 (2004).</li><li>Hvid, M., Baczynska, A., Deleuran, B., Fedder, J., Knudsen, H. J., Christiansen, G., Birkelund, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1+is+the+initiator+of+Fallopian+tube+destruction+during+Chlamydia+trachomatis+infection.">Interleukin-1 is the initiator of Fallopian tube destruction during Chlamydia trachomatis infection.</a> Cell Microbiol. 9, 2795-2803 (2007).</li><li>Roth, A., Konig, P., van, Z. G., Klinger, M., Hellwig-Burgel, T., Daubener, W., Bohlmann, M. K., Rupp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+abrogates+antichlamydial+properties+of+IFN-gamma+in+human+fallopian+tube+cells+in+vitro+and+ex+vivo.">Hypoxia abrogates antichlamydial properties of IFN-gamma in human fallopian tube cells in vitro and ex vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 19502-19507 (2010).</li><li>Wyrick, P. B., Knight, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-exposure+of+infected+human+endometrial+epithelial+cells+to+penicillin+in+vitro+renders+Chlamydia+trachomatis+refractory+to+azithromycin.">Pre-exposure of infected human endometrial epithelial cells to penicillin in vitro renders Chlamydia trachomatis refractory to azithromycin.</a> J. Antimicrob. Chemother. 54, 79-85 (2004).</li><li>Van Voorhis, W. C., Barrett, L. K., Sweeney, Y. T., Kuo, C. C., Patton, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+Chlamydia+trachomatis+infection+of+Macaca+nemestrina+fallopian+tubes+produces+a+Th1-like+cytokine+response+associated+with+fibrosis+and+scarring.">Repeated Chlamydia trachomatis infection of Macaca nemestrina fallopian tubes produces a Th1-like cytokine response associated with fibrosis and scarring.</a> Infect. Immun. 65, 2175-2182 (1997).</li></ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

ויזואליזציה של פגיעה הפתוגן הנגרמת לרקמה הנגועה הוא קשה ומוגבל קרובות להליכים ניסויים בעכברים. הקמנו מודל לשעבר זיהום vivo של החצוצרות האדם לנתח ג trachomatis זיהומים של דרכי המין הנשי העליון. על ידי שימוש בשיטה זו, הצלחנו לדמיין ג trachomatis - הנזק הנגרם על אפיתל האדם החצוצרה תוך זיהום פוסט אחד ביום. נפיחות תמוגה הסלולר היו שינויים מורפולוגיים אופייניים שנצפו ב C. trachomatis - החצוצרות נגועים אך לא בלתי נגועים שולטת. ניתוחים TEM גילה כי chlamydiae ליישם מחזור טיפוסי התפתחותי תאיים בתוך רקמות נגועות, מראה גדולה עם תכלילים מחדש הבדיל הגופים היסודיים, אלא גם תכלילים קטנים עם גופים reticulate מוגדלים שעשוי להצביע על ההתמדה. עם זאת, את התמונה המורפולוגית לבדו אינו מספיק כדי להבחין בין replזיהומים icating ומתמשך, המאופיינים חילוף החומרים מופחת גדל התנגדות antimicrobials 10. הרס של רקמת האפיתל של החצוצרות הוא נגוע או בשל שיבוש ג trachomatis - לתאי האפיתל נגוע לאחר השלמת מחזור ההתפתחות תאיים ושחרור של הגוף יסודיים זיהומיות או שחרור של ציטוקינים דלקתיים Pro-8. מחולל המחלה הנגרמת לרקמה נזק המארח המושרה תגובות חיסוניות נגד ג trachomatis אמורים להיות הגורמים העיקריים שהובילו אובדן תפקוד תא אפיתל, שיפוץ פיברובלסטים ועקרות תובל בסופו של דבר in vivo 8,11. אחת המגבלות העיקריות של מודל זה הוא העדר תאים דלקתיים אשר מעכבת את ניתוח של השפעות משניות על ג הראשונית trachomatis זיהום של האפיתל החצוצרה. עם זאת, המודל הוא APpropriate לחקור תנאים סביבתיים שונים (לדוגמא: תכולת החמצן) ואת התגובה הראשונית מארח חיסונית חריפה ג trachomatis זיהומים 8,9. תוכניות נוספות הן לבסס מודל לבדיקה של antimicrobials נגד ג trachomatis על שלמות החצוצרות אדם לאפיין את חילוף החומרים של מדינות בשלבי התפתחות שונים שנצפו האפיתל תובל על ידי מיקרוסקופ 2-פוטון סריקת לייזר.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> PAA </td><td> E15-843 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> PAA </td><td> R15-802 </td><td></td></tr><tr><td> FCS </td><td> PAA </td><td> ת 15-101 </td><td></td></tr><tr><td> Cycloheximide </td><td> סיגמא - אולדריץ&#39; </td><td></td><td></td></tr><tr><td> SPG מאגר </td><td> שונים </td><td></td><td> ראו מתכון בהמשך </td></tr><tr><td> מונטי של מקבע </td><td> שונים </td><td></td><td> ראו מתכון בהמשך </td></tr><tr><td> cacodylate נתרן חיץ </td><td> שונים </td><td></td><td> ראו מתכון בהמשך </td></tr><tr><td> Rשל כתם ichardson </td><td> שונים </td><td></td><td> ראו מתכון בהמשך </td></tr></tbody></table> מתכונים: 1. SPG מאגר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 75 גרם סוכרוז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2.47 גר &#39;הרכב: פוספט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 0.36 גר &#39;מונוסודיום פוספט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 0.72 גרם חומצה גלוטמית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מילוי 1 ליטר עם אקווה dest. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את ה-pH 7.3. </li></ol> 2. 0.1 cacodylate M חיץ נתרן, pH 7.35. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 42.80 גרם נתרן dimethylarsenic מלח חומצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 68.46 גרם סוכרוז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מילוי 1 ליטר עם אקווה dest. כדי לקבל 0.2 נתרן M חיץ cacodylate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני השימוש פתרון לדלל עם אקווה dest. כדי הרצויה ריכוז ולהתאים את ה-pH 7.35 במידת הצורך. </li></ol> 3. מונטי של מקבע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 156 מ&quot;ל 0.12 cacodylate M חיץ נתרן. 3.2 הוסף 25 מ&quot;ל glutardialdehyde 25% אקווה dest. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 19 מ&quot;לParaformaldehyde 10% אקווה dest. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 3 מ&quot;ל 3 CaCl 2% בשנת אקווה dest. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את ה-pH 7.35 וממלאים אקווה dest. לפתרון 312 מ&quot;ל הסופי. </li></ol> 4. כתם של ריצ&#39;רדסון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים חלקים שווים של כחול מתילן 1% 1% בתמיסה מימית בורקס ו 1% Azur השנייה אקווה dest. </li></ol>

a human fallopian tube model for investigation of c. trachomatis infections

זיהומים בדרכי המין עם trachomatis כלמידיה (trachomatis ג) הם השכיח ביותר למחלות המועברות במגע מיני בקרב נשים ברחבי העולם. אישור התמדה בלתי יעיל או של פתוגנים עלולים להוביל עולה דלקות בדרכי המין העליון אמורים לגרום לנזק דלקתית כרונית 1,2 רקמות נגועים. כתוצאה מכך, sequelae קליני קשה כמו מחלה דלקתית של אגן הירכיים (PID), חסימת חצוצרות ו פוריות עלולה להתרחש 3,4. רוב המחקר עם ג trachomatis נערך על שורות תאים אפיתל (למשל הממולחים, 2 תאים והלה-229) או בעכברים. עם זאת, כמו התרבות תאים מבוססי מודלים, הם עושים לא משקפים את הפיזיולוגיה של רקמת יליד ולא פתופיזיולוגיה של C. המין trachomatis זיהומים בדרכי in vivo 5. מגבלות נוספות ניתנות על ידי העובדה כי איתות מפלי מרכזיים (למשל IFN-γ mediatאד Jak / מסלול איתות STAT) כי הצמיחה לשלוט כלמידיה תאיים שונים באופן בסיסי בין עכברים ובני אדם 6,7. אנחנו ואחרים הקימו ולכן האיבר כולו השחלה מודל צינור לחקור אינטראקציות ישירות בין ג trachomatis האדם תאים צינור השחלה לשעבר vivo 8,9. לשם כך, החצוצרות אדם מן הנשים שעברו כריתת רחם נאספו נגוע ג trachomatis serovar ד זיהום בתוך 24 שעות הודעה, הדגימה שבו ניתח באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM) ו במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים (TEM) כדי לזהות trachomatis כלמידיה בתיווך נזק אפיתל, כמו גם ג הכללת trachomatis היווצרות של רקמת השחלה.

Watch this Scientific Journal Video about A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections at JoVE.com

A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

אנו מתארים<em&gt; לשעבר vivo זיהום</em&gt; מודל הדמיה של אינטראקציות ישירות עם חיידקים פתוגנים אנושיים לתאי החצוצרה. דגם כל רקמות איבר הוקמה כדי לחקור<em&gt; ג trachomatis</em&gt; המושרה הפתולוגיה כדי חצוצרת הרחם הנשי תחת &quot;כמו החיים&quot; התנאים.

דגם האדם החצוצרה לחקירות<em&gt; ג trachomatis</em&gt; זיהומים

Genital tract infections with Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) are the most frequent transmitted sexually disease in women worldwide. Inefficient ...

a-human-fallopian-tube-model-for-investigation-c-trachomatis

Research

JoVE Journal

Medicine

A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

12.8K Views.  University of Lübeck. אנו מתארים לשעבר vivo זיהום מודל הדמיה של אינטראקציות ישירות עם חיידקים פתוגנים אנושיים לתאי החצוצרה. דגם כל רקמות איבר הוקמה כדי לחקור ג trachomatis המושרה הפתולוגיה כדי חצוצרת הרחם הנשי תחת "כמו החיים" התנאים.

Video: A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

עיבוד של הפחתה מאמופלסטית אדם ורקמות כריתה לתא תרבות

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

מודל עכברי של ריפוי פצע

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

מודל Murine orthotopic של אדם סרטן ערמונית גרורה

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

הפעלת יתר רעיל גירוי של המוח כMicroslices<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם של שבץ

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

זרחן-31 ספקטרוסקופיה תהודה מגנטית: כלי למדידת<em&gt; In vivo</em&gt; קיבולת זרחון חמצוני מיטוכונדריאלי של שריר שלד אדם

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to the lack of markers or tools for the ovarian cancer identification, the early detection of HGSC remains challenging. Direct sampling of the fallopian tube can enhance sensitivity for detection of neoplastic cells when the tumor is not grossly visible. We developed a procedure to collect fallopian tube cells directly from freshly received surgical specimens, which has shown excellent correlation with histological findings. This approach lays a foundation for the future utility of minimally invasive laparoscopic screening in high-risk patient populations.

We explored a tubal cytologic method by sampling the fallopian tube directly post-surgical excision as a tool of ovarian cancer early detection. Here, we present a protocol to collect fallopian tube cells from freshly received surgical specimens.

Tubal ציטולוגיה של שפופרת Tube ככלי מבטיח עבור סרטן השחלות איתור מוקדם

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a wide variety of disorders including metabolic diseases, premature aging syndromes, and neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD). Maintenance of mitochondrial health depends on mitochondrial biogenesis and the efficient clearance of dysfunctional mitochondria through mitophagy. Experimental methods to accurately detect autophagy/mitophagy, especially in animal models, have been challenging to develop. Recent progress towards the understanding of the molecular mechanisms of mitophagy has enabled the development of novel mitophagy detection techniques. Here, we introduce several versatile techniques to monitor mitophagy in human cells, Caenorhabditis elegans (e.g., Rosella and DCT-1/ LGG-1 strains), and mice (mt-Keima). A combination of these mitophagy detection techniques, including cross-species evaluation, will improve the accuracy of mitophagy measurements and lead to a better understanding of the role of mitophagy in health and disease.

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitophagy, the process of clearing damaged mitochondria, is necessary for mitochondrial homeostasis and health maintenance. This article presents some of the latest mitophagy detection methods in human cells, Caenorhabditis elegans, and mice.

במבחנה and In Vivo זיהוי של Mitophagy ב תאים אנושיים, C. Elegansועכברים

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely correlated with a history of articular cartilage damage and ligament avulsion. Surgical animal models of OA of the knee play an important role in understanding the onset and progression of post-traumatic OA and aid in the development of novel therapies for this disease. However, non-surgical models have been recently considered to avoid traumatic inflammation that could affect the evaluation of the intervention. 
In this study, an intra-articular cartilage lesion rat model induced by in vivo cyclic compressive loading was developed, which allowed researchers to (1) determine the optimal magnitude, speed, and duration of load that could cause focal cartilage damage; (2) assess post-traumatic spatiotemporal pathological changes in chondrocyte vitality; and (3) evaluate the histological expression of destructive or protective molecules that are involved in the adaptation and repair mechanisms against joint compressive loads. This report describes the experimental protocol for this novel cartilage lesion in a rat model.

Here, we present the cyclic loading-induced intra-articular cartilage lesion model of the rat knee, generated by 60 cyclic compressions over 20 N, resulting in damage to the femoral condylar cartilage in rats.

שיטה לא פולשנית ליצירת מודל סחוס תוך מפרקי הנגרם על ידי העמסה מחזורית של ברך החולדה

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...