עבודה זו מומנה על ידי משאב הליבה של NIH P30 אובריאן המרכז (DK 079337).

1. הכנת Presurgical <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליכים כירורגיים, לא משנה כמה נעשה בזהירות, מביא ללחץ משמעותי. כדי למזער את ההשפעות של לחץ כזה ולמקסם מילואים, בעלי חיים צריכים להישמר בביבר ללפחות 72 שעות לפני השימוש 10,11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כלים כירורגיים, גזה, ומטליות חייבים להיות סטרילי. אין צורך להשתמש בכפפות סטריליות המספקות רק את קצות תפר מגע או מכשירי התחום האופרטיבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לhemostasis, זוהי החובה של לחצי clamping הם המינימום הכרחי. ניזק לכלי השיט עקב לחץ מוגזם או התרשלות בטיפול יגרום לפקקת, וכתוצאה מכך לשיתוק ברגל האחורית, איסכמיה מעי, ומוות תוך 24 שעות. מצאנו כי שימוש במהדק, עם לחץ של לא יותר מ 2 גרם / 2 סנטימטר מבטל את הבעיה. מלחציים אלה ציינו בטבלת 1. לחצי קלאמפ הם מצוינים במפרט הטכני למהדק שנעשה על ידי instrumen כירורגית באיכות הגבוההיצרנים לא. אנחנו גילינו שמלחציים זולים או חד פעמיים מלחציים אוניברסליים יפעילו יותר מדי לחץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המיקום של כלי טחונות כמו גם את המיקומים היחסיים של אב העורקים בבטן והנחותה וריד הנבוב (IVC) הוא זן תלוי. תוכל גם למצוא וריאציות קטנות בין עכברים בודדים, במיוחד במיקום של כלי ביטחונות. </li></ol> 2. מבצע תורם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים יכולים להיות מורדמים עם (אינדוקצית 1.5-2.5%, תחזוקה 1.0% באוויר) או עם isoflurane פנטוברביטל (55-65 מ&quot;ג / ק&quot;ג). Pentobarbital מטיל מגבלת זמן (עד 1.5 שעות), אבל מספק למנתח עם האפשרות לסובב את בעלי החיים לגישה טובה יותר, אם תרצה בכך. זמן הרדמה ניתן להרחיב עד 2 שעות על ידי צבת 2-3 טיפי ההרדמה בעת צורך על המעי או בכבד במהלך הניתוח. קטמין / xylazine (משקל 100 מ&quot;ג / קילו משקל גוף ולקטמין 7 מ&quot;ג / ק&quot;ג לXylazine, IP) יכול לשמש גם על ידי מנתחים מאומנים היטב שcan לסיים את ההליך בתוך 1-1.5 שעות, אבל יש לו טווח מינונים בטוח צר יותר. בארה&quot;ב, השימוש בפנטוברביטל הפך בעייתי יותר בשנים האחרונות, בשל אספקה ​​קצרה. זה הכרחי כי את עומק ההרדמה להיות פיקוח על מנת להיות בטוח שזה מספיק. רפלקס בוהן הקמצוץ הוא המדד הטוב ביותר לעומק מתאים אבל כדאי גם לציין את קצב נשימה ותנועות אחרות גם כן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר אינדוקצית הרדמה, להשתמש בג&#39;ל הסרת שיער או גילוח להסרת שיער בבטן הגחון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר החיה על לוח ההפעלה באמצעות קלטת מעבדה כדי להחזיק אותו בעמדה פשוט איברים. לוח הפעלה מתכתית מתיר את השימוש בכרית חימום מתחתיו כדי לספק תמיכת טמפרטורה במהלך הניתוח. אנחנו באופן ידני לשלוט על הטמפרטורה של כרית החימום, שהיא יחידת צרכן כיתה לשימוש ביתי. הטמפרטורה נשמרת בין 35-38 מעלות. לוח ההפעלה המתכתי הוא גם קל לעקר בין הליכים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">לחטא את האזור באמצעות חומרי חיטוי כמו כלורהקסידין, ואחריו לשטוף אתנול. חזור על תהליך זה שלוש פעמים, כדי להבטיח חיטוי הולם. זה יהיה גם להסיר את כל חתיכות חתוכות תכשירי שיער, אם קיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מספריים לעשות חתך דרך קיר הגוף על מנת לחשוף את הקרביים של הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במטלית כותנה, לדחוף את הקרביים בצד לחשוף את הכולים הגדולים של הבטן. הקרביים מונחים על פיסת הגזה שהורטבה בתמיסת מלח חמימה כדי לשמור אותו הלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות נתיחה בוטה, לנתח את אב העורקים בבטן בזהירות רבה מרקמה הסובבת. היזהר מאוד בניתוח הכלי מהווריד הנבוב הנחותה. יהיו סניפים אחד או יותר, כגון עורקים המותני, שיש להסירו בזהירות וצרבו. הקטע של אב עורקים מבותרים צריך להיות מתחת כלי הכליות ומעל ההסתעפות של אב עורקים בעורקי הירך. סעיף זה יכול לשמש כחומר תורם לרביםשני נמעני s, תלוי כמה הסתעפות כולים קיימים וגודל חית תורם הזרע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקשור את תפר ממש מתחת לעורקי הכליה ואחרת, ממש מעל ההסתעפות. בעזרת מספריים מחלקים את אב העורקים, יש לשטוף את השתל באופן מלא עם המלח המכיל 200 U / הפרין מ&quot;ל. להחזיק בזהירות קצה אחד של כלי השיט ולטפטף תמיסת המלח, כך שהוא עובר על הספינה על ידי כוח הכביד. אל תנתנו לבועות אוויר להפעיל באמצעות הכלי. לטפל בקצוות של הכלי קטן ככל האפשר אחרת אינטימה יכולה להיפגע וכתוצאה מפקקה מאוחר יותר. הסר אותו מהשטח ולמקם אותו באופן מיידי במכל של מי מלח קר כקרח. לאפשר חית התורם ללגרום לדימום מחודשת. </li></ol> 3. מבצע נמען <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדם את החיה כאמורה לעיל ולהחיל ג&#39;ל הסרת שיער או להשתמש במכונת גילוח להסרת שיער בבטן. רק לפני החתך שניתן לו מנה של עצירות תת עורי ברמה של 0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג להקמת שיכוך כאבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Mount בעלי החיים בתחום ההפעלה באמצעות קלטת מעבדה. בעלי החיים חייבים להיות מותקנים על שלב הפעלה חמה שיעזרו לשמור על טמפרטורת גוף בזמן הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה העינים gentamycin לעיניים כדי למנוע מהם להתייבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את הבטן, ואחריו לשטוף אתנול. חזור על תהליך זה שלוש פעמים, כדי להבטיח חיטוי הולם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את נאותות הרדמה שוב לפני שתמשיך לשלב הבא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קו אמצע דרך העור וקיר הגוף בשני שלבים, נזהר שלא לפגוע ברקמות שמתחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מפזר להחזיק החתך בבטן פתוחה. כוון את הרכבת הבורג לקראת הסוף האחורי כדי לשמור את חלק הארי של מהדק מהדרך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרטב את הכיכר של גזה סטרילית עם מלח ומניח אותה על המעיים. עם האצבע שלך בעדינות על הגזה, הכניסו מקלון צמר גפן תחת המעיים ועדינות משקף על המעיים שלIDE ולכן הם יושבים על גבי הגזה. קח עוד פיסת גזה, מקם אותו במעיים והרטבת אותו עם מי מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כל רקמה שומנית המכסה את אב עורקים ווריד הנבוב הנח (IVC). להיות עדין. IVC הוא מאוד שביר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להשתמש במלקחיים כדי לנתח את אב עורקי infrarenal מחברת מחקר IVC. נקה את שטח גדול מספיק כדי לספק מקום לשני חבקים עם מספיק כלי ביניהם כך שכאשר יחולקו, יהיה מספיק לכלי שניתן נתפר השתל. מתי לנתח, לחפש ענפי כולים. אם יש צורך לצרוב אותם עם cauterizer טמפרטורה נמוכה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מהדק כלי דם מתחת לעורק כליה ועוד אחד בדיוק מעל ההסתעפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את אב העורקים. את הקצוות של אב העורקים בדרך כלל לחזור בו, והשאירו שטח של כ 5 מ&quot;מ. בדקו hemostasis. אם המהדק עובד בצורה נכונה, רק כמות קטנה של דם צריכה להימלט לאחר הקיצוץ. אם הדימום ממשיך, בדוק את המהדק להיות דבר בטוח הוא interfering איתם. שים לב שאף אחד מאב העורקים הוסר. הוא מחולק רק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את הקצוות לחתוך עם מי מלח heparinized (200 U / ml) ולאחר מכן להסיר את הפתרון הנוסף עם ספוגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Tack השתל למקומו באמצעות שלושה תפרים שאינם רציפים בכל קצה. רק לתפור צד אחד של השקה בכל קצה, ולאחר מכן למלא את שאר עם תפר רציף ריצה או תפרים רציפים יותר. שבעה עד שמונה תפרים שאינם רציפים מספיק. אם אתה משתמש בתפר פועל, כדי להיות בטוח שאת דפנות הכולים תישארנה רגועות ושאינך גורם להיצרות בהשקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציא בזהירות את המהדק בסוף הגולגולת ולחפש דליפות בקווי התפר. כמות קטנה של חלחול אישור הוא מתן הוא מפסיק בתוך כדקה. אם יש יותר מזה, אפשר להשתמש בתפר אחד כדי לעצור את הדימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ בעדינות על באב העורקים מעל אתר ההשקה עם מוליך כותנת הרטובות, ולאחר מכן להסיר את המהדק השני. לחץ בעדינות על ולשחרר כמה פעמים ולבדוק שאב העורקים מופיע פטנט. השתל יהיה perfused מייד ודופק צריך להיות גלוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הגזה מכסה את המעיים ולהעביר אותם בחזרה למקומו. הימנע פיתול של המעי ולשמור על אורינטציה אנטומית רגילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את שכבת השריר באמצעות 5-0 Vicryl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את העור באמצעות 5-0 או 6-0 prolene. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנק את העכבר מתחת לעור עם carprophen ב5 מ&quot;ג / ק&quot;ג כדי להגדיל אלחוש לפני סיום הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן מלוח מיליליטר עכבר 0.5-0.8 מתחת לעור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר בכלוב מחומם כדי להתאושש. לנטר אותה בזהירות במהלך התאוששות כדי להיות בטוח שהוא מחלים באופן נורמלי. 2-3 שעות לאחר ניתוח, העכבר צריך להיות מתנהגות יחסית באופן רגיל. ב12 שעות אחרי ניתוח, טיפול בבעלי החיים עם עצירות תת עורי בשעת 2 ​​מ&quot;ג / ק&quot;ג לשיכוך כאבים. אם, בכל זמן, החיה קמרה, עושה רעש או מציג טווח מוגבל של תנועה, לחקור את העניין. אםסיבה סופית לא ניתן לקבוע וקבוע, בעלי החיים צריכים להיות מורדמים לפרוטוקולים מוסדיים. בגיל 24 שעתי בעלי החיים צריכים לקבל עוד מנה של carprophen תת עורית במינון 5 מ&quot;ג / ק&quot;ג. שיתוק רגל אחורי מציין השקה נכשלה או פקיק. במצב זה, בעל החיים צריך להיות מורדם. </li></ol>

<ol>
	<li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation.">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li><li>Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+aortic+transplantation+in+mice:+a+new+model+of+allograft+arteriosclerosis.">Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis.</a> J. Heart Lung Transpl. 18, 946-951 (1999).</li><li>Calise, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+aortic+transplantation+in+rodents+by+the+sleeve+technique:+a+model+system+for+the+study+of+graft+vascular+disease.">Orthotopic aortic transplantation in rodents by the sleeve technique: a model system for the study of graft vascular disease.</a> Transpl. Proc. 33, 2369-2370 (2001).</li><li>Thomsen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+aortic+graft+mouse+model+to+study+the+immunopathology+of+chronic+vascular+rejection.">An orthotopic aortic graft mouse model to study the immunopathology of chronic vascular rejection.</a> Transpl. Proc. 34, 2833-2835 (2002).</li><li>Benza, R. L., George, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aortic+graft+transplantation+in+mice.">Aortic graft transplantation in mice.</a> J. Heart Lung Transpl. 21, 1319-1321 (2002).</li><li>Chereshnev, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+heterotopic+aortic+arch+transplantation.">Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation.</a> The Journal of surgical research. 111, 171-176 (2003).</li><li>Cho, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+heterotopic+aortic+transplantation+in+mice.">Improved surgical technique for heterotopic aortic transplantation in mice.</a> J. Korean Med. Sci. 22, 12-15 (2007).</li><li>Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+transplantation+in+mice:+current+status+and+future+prospects.">Organ transplantation in mice: current status and future prospects.</a> Microsurgery. 19, 52-55 (1999).</li><li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease.">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transpl. 24, 2003-2014 (2005).</li><li>Gorska, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+in+laboratory+animal+research+for+experimental+purposes.">Principles in laboratory animal research for experimental purposes.</a> Med Sci Monit. 6, 171-180 (2000).</li><li>Landi, M. S., Kreider, J. W., Lang, C. M., Bullock, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+shipping+on+the+immune+function+in+mice.">Effects of shipping on the immune function in mice.</a> Am. J. Vet. Res. 43, 1654-1657 (1982).</li><li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation.">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li><li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+monoxide+rescues+heme+oxygenase-1-deficient+mice+from+arterial+thrombosis+in+allogeneic+aortic+transplantation.">Carbon monoxide rescues heme oxygenase-1-deficient mice from arterial thrombosis in allogeneic aortic transplantation.</a> Am. J. Pathol. 175, 422-429 (2009).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.+Transpl.">Heart transplantation in congenic strains of mice. Transpl.</a> Proc. 5, 733-735 (1973).</li><li>Chang, E. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+anastomosis+using+controlled+phase+transitions+in+poloxamer+gels.">Vascular anastomosis using controlled phase transitions in poloxamer gels.</a> Nature medicine. 17, 1147-1152 (2011).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

מודלי עכבר של אב עורקי השתלה לספק מספר היתרונות, כי עכברים הם מאוד מוגדרים היטב immunogenetically 9,12,13, והם יכולים לטפל בקלות לשנות את הביטוי של גנים ספציפיים שלהם, אם תרצו בכך. כפי שצוין במבוא, כירורגיה של כלי דם בעכבר היא יותר קשה מאשר רוב הדגמים בגלל גודלו של כלי השיט. א...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> פריט </td><td> חברה </td><td> מספר </td></tr><tr><td> מהדקי כלי דם </td><td> כלי מדע פיין </td><td> 00396-01 (גודל B-1) </td></tr><tr><td> דומון מלקחיים </td><td> כלי מדע פיין </td><td> 11293-00 </td></tr><tr><td> 10-0 עקצו microsuture </td><td> AROSurgical </td><td> TK-107038 </td></tr><tr><td> מספריים ישרים </td><td> Roboz כירורגי Instrument ושות </td><td> RS-5620 </td></tr><tr><td> cauterizer טמפרטורה הנמוכה </td><td> ביבר-Visitec הבינלאומי </td><td> 8441000 </td></tr><tr><td> מפשק עצמי שמירה </td><td> מכשירי Precision העולם </td><td> 14240 </td></tr></tbody></table>

orthotopic aortic transplantation in mice for the study of vascular disease

נהלי כלי דם המעורבים anastomoses בעכבר נחשבים בדרך כלל להיות קשה ותלוי מאוד במיומנותו של מנתח הפרט. זה בעיקר נכון, אבל יש מספר העקרונות חשובים שיכול להפחית את הקושי של נהלים אלה ולשפר את השחזור. השתלת אב העורקים orthotopic היא הליך שבו מצוין ללמוד עקרונות אלה משום שהיא כוללת רק שני anastomoses מקצה לקצה, אבל דורשת טכניקה טובה תפירה וטיפול בכלי להצלחה בקנה אחד. הליך זה מתחיל ברכש של אורך של אב עורקים בבטן מחית תורם, ואחרי החלוקה של אב עורקי היליד בנמען. אז אב עורקי הרכש ממוקם בין הקצוות החצויים של אב עורקי הנמען ונתפר למקומו באמצעות anastomoses מקצה לקצה. כדי להשיג מטרה זו דורשת רמה גבוהה של ריכוז, כלים טובים, יד יציבה, והערכה להצלחה באיזו קלותמערכת כלי דם של עכבר יכולה להיות פגומה, וכתוצאה מפקקת. למידת העקרונות חשובים האלה היא מה שתופס את רוב הזמן של המתחילים כאשר למידת microsurgery במכרסמים קטנים. לאורך פרוטוקול זה, אנו מתייחסים לנקודות חשובות אלה. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור מחלת כלי דם במגוון רחב של מערכות ניסיוניות שונות 1-8. בהקשר שמוצג כאן, זה משמש לרוב לחקר מחלה לאחר השתלת כלי דם, סיבוכים ארוכי טווח שכיחים של השתלת איבר מוצקה שבי היפרפלזיה intimal מתרחשת בתוך השתל. היתרון העיקרי של המודל הוא שהוא מאפשר ניתוחי מורפומטריות כמותיים והכלי המושתל טמון רציף לכלי אנדוגני, שיכול לשמש כשליטה נוספת 9. הטכניקה המוצגת כאן משמשת לרוב לעכברים במשקל 18-25 גרם. צברנו את רוב הניסיון שלנו באמצעות C57BL/6J, BALB / CJ, וזני C3H/HeJ.

איור 1 מציג שתל של אב עורקים. החצים הלבנים יסמנו את קווי התפר. שתל פטנט יציג דופק גלוי. איור 2 מצביע על ניסוי טיפוסי בו הישרדות נמען הייתה במעקב במשך תקופה של 56 ימים. קבוצה אחת הורכבה מעכברי נמען פראי מסוג-(C57BL / 6 x FVB) הושתלו באב עורקי BALB / ג. קבוצה האחרת, ה?...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease at JoVE.com

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

אנו מתארים טכניקה שבה קטע של אב העורקים בבטן מעכבר הושתל orthotopically ממש מתחת לעורקי הכליה בנמען אלוגנאית או syngeneic. טכניקה זו יכולה להיות שימושית במחקרים בם השתלה של עורקים גדולים של גודל אחיד נחשבת יתרון.

השתלת אב עורקים בעכברי orthotopic לחקר מחלת כלי דם

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

orthotopic-aortic-transplantation-mice-for-study-vascular

Research

JoVE Journal

Medicine

10.8K Views.  The University of Alabama at Birmingham. אנו מתארים טכניקה שבה קטע של אב העורקים בבטן מעכבר הושתל orthotopically ממש מתחת לעורקי הכליה בנמען אלוגנאית או syngeneic. טכניקה זו יכולה להיות שימושית במחקרים בם השתלה של עורקים גדולים של גודל אחיד נחשבת יתרון.

Video: Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Small bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with short gut syndrome and failure of parenteral nutrition (irreversible intestinal failure). In specialized centers improved operative and managing strategies have led to excellent short- and intermediate term patient and graft survival while providing high quality of life 1,3. Unlike in the more common transplantation of other solid organs (i.e. heart, liver) many underlying mechanisms of graft function and immunologic alterations induced by intestinal transplantation are not entirely known6,7. Episodes of acute rejection, sepsis and chronic graft failure are the main obstacles still contributing to less favorable long term outcome and hindering a more widespread employment of the procedure despite a growing number of patients on home parenteral nutrition who would potentially benefit from such a transplant. The small intestine contains a large number of passenger leucocytes commonly referred to as part of the gut associated lymphoid system (GALT) this being part of the reason for the high immunogenity of the intestinal graft. The presence and close proximity of many commensals and pathogens in the gut explains the severity of sepsis episodes once graft mucosal integrity is compromised (for example by rejection). To advance the field of intestinal- and multiorgan transplantation more data generated from reliable and feasible animal models is needed. The model provided herein combines both reliability and feasibility once established in a standardized manner and can provide valuable insight in the underlying complex molecular, cellular and functional mechanisms that are triggered by intestinal transplantation. We have successfully used and refined the described procedure over more than 5 years in our laboratory 8-11. The JoVE video-based format is especially useful to demonstrate the complex procedure and avoid initial pitfalls for groups planning to establish an orthotopic rodent model investigating intestinal transplantation.

Small bowel transplantation has become an accepted treatment option for patients with irreversible intestinal failure. Our experimental model of orthotopic small bowel transplantation in rats serves as a reliable tool to address underlying immunologic and inflammatory processes that complicate intestinal transplantation.

השתלות מעי דק orthotopic בחולדות

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Orthotopic Liver Transplantation in Rats

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat liver transplantation in 1979 by Kamada et al.3, this model has remained the gold standard despite various proposed alternative techniques4. Nevertheless, its broader use is limited by its steep learning curve5.
In this video paper, we show a simple and easy-to-establish revision of Kamada's two-cuff technique. The suprahepatic vena cava anastomosis is performed manually with a running suture, and the vena porta and infrahepatic vena cava anastomoses are performed utilizing a quick-linker cuff system6. Manufacturing the quick-linker kit is shown in a separate video paper.

We present an easy-to-establish revision of the classical two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat.

השתלת כבד Orthotopic בחולדות

Clinical progress in the field of liver transplantation has been largely supported by animal models1,2. Since the publication of the first orthotopic rat ...

Ascending Aortic Constriction in Rats for Creation of Pressure Overload Cardiac Hypertrophy Model

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart failure. Here, we describe a detailed surgical procedure for creating pressure overload and cardiac hypertrophy in rats by constriction of the ascending aorta using a small metallic clip. After anesthesia, the trachea is intubated by inserting a cannula through a half way incision made between two cartilage rings of trachea. Then a skin incision is made at the level of the second intercostal space on the left chest wall and muscle layers are cleared to locate the ascending portion of aorta. The ascending aorta is constricted to 50&#8211;60% of its original diameter by application of a small sized titanium clip. Following aortic constriction, the second and third ribs are approximated with prolene sutures. The tracheal cannula is removed once spontaneous breathing was re-established. The animal is allowed to recover on the heating pad by gradually lowering anesthesia. The intensity of pressure overload created by constriction of the ascending aorta is determined by recording the pressure gradient using trans-thoracic two dimensional Doppler-echocardiography. Overall this protocol is useful to study the remodeling events and contractile properties of the heart during the gradual onset and progression from compensated cardiac hypertrophy to heart failure stage.

We describe a stepwise procedure for creating pressure overload and left ventricular hypertrophy in Wistar rats by constriction of the ascending aorta using a small metallic clip. This model is extensively used for studying remodeling changes during cardiac hypertrophy and for identifying and evaluating strategies for regression of such changes.

עולה אבי העורקים תעוקה בחולדות ליצירת עומס יתר לחץ לב היפרטרופיה הדגם

Ascending aortic constriction is the most common and successful surgical model for creating pressure overload induced cardiac hypertrophy and heart ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

Orthotopic הינד לימב השתלה בבית העכבר

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world. Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and calcification, develop in the coronary arteries, aortic valve, aorta, and peripheral conduit arteries and are the hallmark of cardiovascular disease. In humans, imaging with computed tomography allows for the quantification of vascular calcification; the presence of vascular calcification is a strong predictor of future cardiovascular events. Development of novel therapies in cardiovascular disease relies critically on improving our understanding of the underlying molecular mechanisms of atherosclerosis. Advancing our knowledge of atherosclerotic mechanisms relies on murine and cell-based models. Here, a method for imaging aortic calcification and macrophage infiltration using two spectrally distinct near-infrared fluorescent imaging probes is detailed. Near-infrared fluorescent imaging allows for the ex vivo quantification of calcification and macrophage accumulation in the entire aorta and can be used to further our understanding of the mechanistic relationship between inflammation and calcification in atherosclerosis. Additionally, a method for isolating and culturing animal aortic vascular smooth muscle cells and a protocol for inducing calcification in cultured smooth muscle cells from either murine aortas or from human coronary arteries is described. This in vitro method of modeling vascular calcification can be used to identify and characterize the signaling pathways likely important for the development of vascular disease, in the hopes of discovering novel targets for therapy.

Vascular calcification is an important predictor of and contributor to human cardiovascular disease. This protocol describes methods for inducing calcification of cultured primary vascular smooth muscle cells and for quantifying calcification and macrophage burden in animal aortas using near-infrared fluorescence imaging.

הסתיידות של לתאי השריר החלק בכלי הדם והדמיה של אבי העורקים הסתיידות ודלקת

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

בטכניקה שרוול במודל של עכברים של אבי העורקים השתלת - סרט הדרכה

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard open-chest transverse aortic constriction (TAC). Although transverse aortic constriction is a highly functional method for the induction of high pressure in the left ventricle, it is a more difficult and lengthy procedure due to its use of artificial ventilation with tracheal intubation. TAC is oftentimes also less survivable, as the newer method, MTAC, neither requires the cutting of the ribs and intercostal muscles nor tracheal intubation with a ventilation setup. In MTAC, as opposed to a thoracotomy to access to the chest cavity, the aortic arch is reached through a midline incision in the anterior neck. The thyroid is pulled back to reveal the sternal notch. The sternum is subsequently cut down to the second rib level, and the aortic arch is reached simply by separating the connective tissues and thymus. From there, a suture can be wrapped around the arch and tied with a spacer, and then the sternal cut and skin can be closed. MTAC is a much faster and less invasive way to induce left ventricular hypertension and enables the possibility for high-throughput studies. The success of the constriction can be verified using high-frequency trans-thoracic echocardiography, particularly color Doppler and pulsed-wave Doppler, to determine the flow velocities of the aortic arch and left and right carotid arteries, the dimension of the blood vessels, and the left ventricular function and morphology. A successful constriction will also trigger significant histopathological changes, such as cardiac muscle cell hypertrophy with interstitial and perivascular fibrosis. Here, the procedure of MTAC is described, demonstrating how the resulting flow changes in the carotid arteries can be examined with echocardiography, gross morphology, and histopathological changes in the heart.

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) conserves the essentials of regular transverse aortic constriction (TAC) while eliminating the use of a ventilator with tracheal intubation. It proves to be a highly desirable method for high-throughput studies on left ventricular overload, particularly in translational studies.

פולשנית רוחבי אבי העורקים התכווצות עכברים

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

Induction of Nephrotic Syndrome in Mice by Retrobulbar Injection of Doxorubicin and Prevention of Volume Retention by Sustained Release Aprotinin

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due to sodium retention and hyperlipidemia. To study the pathophysiology of this syndrome, rodent models have been developed based on the injection of toxic substances such as doxorubicin causing podocyte damage. In mice, only few strains are susceptible to this model. In wildtype 129S1/SvImJ mice, the administration of doxorubicin by rapid intravenous injection to the retrobulbar sinus induces experimental nephrotic syndrome that features all the symptoms of human disease including sodium retention and edema. After the onset of proteinuria, mice exhibit increased urinary serine protease activity that leads to the activation of the epithelial sodium channel (ENaC) and sodium retention. Pharmacological inhibition of urinary serine proteases by the treatment with sustained release aprotinin abrogates ENaC activation and prevents sodium retention. This model is ideal to study the pathophysiology of proteasuria, i.e., the excretion of active serine proteases that cause ENaC activation by the proteolysis of its &#947;-subunit. This can be regarded as the primary mechanism of ENaC activation and sodium retention in proteinuric kidney disease.

Here, we describe the induction of experimental nephrotic syndrome in 129S1/SvImJ mice by rapid retrobulbar injection of doxorubicin. We also treat nephrotic mice with sustained release pellets containing aprotinin to inhibit urinary serine protease activity and prevent sodium retention.

אינדוקציה של תסמונת נפרוטית בעכברים על ידי הזרקת Retrobulbar של דוקסורוביצין ומניעה של שימור נפח על ידי שחרור מתמשכת Aprotinin

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due ...

A Model of Reverse Vascular Remodeling in Pulmonary Hypertension Due to Left Heart Disease by Aortic Debanding in Rats

Pulmonary hypertension due to left heart disease (PH-LHD) is the most common form of PH, yet its pathophysiology is poorly characterized than pulmonary arterial hypertension (PAH). As a result, approved therapeutic interventions for the treatment or prevention of PH-LHD are missing. Medications used to treat PH in PAH patients are not recommended for treatment of PH-LHD, as reduced pulmonary vascular resistance (PVR) and increased pulmonary blood flow in the presence of increased left-sided filling pressures may cause left heart decompensation and pulmonary edema. New strategies need to be developed to reverse PH in LHD patients. In contrast to PAH, PH-LHD develops due to increased mechanical load caused by congestion of blood into the lung circulation during left heart failure. Clinically, mechanical unloading of the left ventricle (LV) by aortic valve replacement in aortic stenosis patients or by implantation of LV assist devices in end-stage heart failure patients normalizes not only pulmonary arterial and right ventricular (RV) pressures but also PVR, thus providing indirect evidence for reverse remodeling in the pulmonary vasculature. Using an established rat model of PH-LHD due to left heart failure triggered by pressure overload with subsequent development of PH, a model is developed to study the molecular and cellular mechanisms of this physiological reverse remodeling process. Specifically, an aortic debanding surgery was performed, which resulted in reverse remodeling of the LV myocardium and its unloading. In parallel, complete normalization of RV systolic pressure and significant but incomplete reversal of RV hypertrophy was detectable. This model may present a valuable tool to study the mechanisms of physiological reverse remodeling in the pulmonary circulation and the RV, aiming to develop therapeutic strategies for treating PH-LHD and other forms of PH.

The present protocol describes a surgical procedure to remove ascending-aortic banding in a rat model of pulmonary hypertension due to left heart disease. This technique studies endogenous mechanisms of reverse remodeling in the pulmonary circulation and the right heart, thus informing strategies to reverse pulmonary hypertension and/or right ventricular dysfunction.

מודל של שיפוץ כלי דם הפוכים ביתר לחץ דם ריאתי עקב מחלת לב שמאלית על ידי התייבשות אבי העורקים בחולדות

Pulmonary hypertension due to left heart disease (PH-LHD) is the most common form of PH, yet its pathophysiology is poorly characterized than pulmonary ...