המחברים מבקשים להודות לאליזבת Blanchard לקבלת הסיוע הטכני שלה. הממצאים והמסקנות בדו&quot;ח זה הם של הכותבים ואינם מייצגים בהכרח את הדעות של המרכז לבקרת מחלות ומניעתן.

<ol>
	<li>Zhu, Y., Chidekel, A., Shaffer, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultured+human+airway+epithelial+cells+(calu-3):+a+model+of+human+respiratory+function,+structure,+and+inflammatory+responses.">Cultured human airway epithelial cells (calu-3): a model of human respiratory function, structure, and inflammatory responses.</a> Critical care research and practice. 2010, (2010).</li><li>Mukherjee, M., Pritchard, D. I., Bosquillon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+air-interfaced+Calu-3+cell+layers+for+investigation+of+inhaled+drug+interactions+with+organic+cation+transporters+in+vitro.">Evaluation of air-interfaced Calu-3 cell layers for investigation of inhaled drug interactions with organic cation transporters in vitro.</a> International journal of pharmaceutics. 426, 7-14 (2012).</li><li>Baginski, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigations+into+the+fate+of+inhaled+salmon+calcitonin+at+the+respiratory+epithelial+barrier.">Investigations into the fate of inhaled salmon calcitonin at the respiratory epithelial barrier.</a> Pharmaceutical research. 29, 332-341 (2012).</li><li>Vllasaliu, D., Alexander, C., Garnett, M., Eaton, M., Stolnik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fc-mediated+transport+of+nanoparticles+across+airway+epithelial+cell+layers.">Fc-mediated transport of nanoparticles across airway epithelial cell layers.</a> Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. , (2011).</li><li>Vinhas, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pollen+proteases+compromise+the+airway+epithelial+barrier+through+degradation+of+transmembrane+adhesion+proteins+and+lung+bioactive+peptides.">Pollen proteases compromise the airway epithelial barrier through degradation of transmembrane adhesion proteins and lung bioactive peptides.</a> Allergy. 66, 1088-1098 (2011).</li><li>Hein, S., Bur, M., Schaefer, U. F., Lehr, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+Pharmaceutical+Aerosol+Deposition+Device+on+Cell+Cultures+(PADDOCC)+to+evaluate+pulmonary+drug+absorption+for+metered+dose+dry+powder+formulations.">A new Pharmaceutical Aerosol Deposition Device on Cell Cultures (PADDOCC) to evaluate pulmonary drug absorption for metered dose dry powder formulations.</a> European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics : official journal of Arbeitsgemeinschaft fur Pharmazeutische Verfahrenstechnik e. 77, 132-138 (2011).</li><li>Huttunen, S., Toivanen, M., Arkko, S., Ruponen, M., Tikkanen-Kaukanen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+activity+of+wild+berry+juice+fractions+against+Streptococcus+pneumoniae+binding+to+human+bronchial+cells.">Inhibition activity of wild berry juice fractions against Streptococcus pneumoniae binding to human bronchial cells.</a> Phytotherapy research: PTR. 25, 122-127 (2011).</li><li>Elm, C., Rohde, M., Vaerman, J. P., Chhatwal, G. S., Hammerschmidt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+interaction+of+the+pneumococcal+surface+protein+SpsA+with+the+human+polymeric+immunoglobulin+receptor+(hpIgR).">Characterization of the interaction of the pneumococcal surface protein SpsA with the human polymeric immunoglobulin receptor (hpIgR).</a> The Indian journal of medical research. 119, 61-65 (2004).</li><li>Sutherland, T. C., Quattroni, P., Exley, R. M., Tang, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcellular+passage+of+Neisseria+meningitidis+across+a+polarized+respiratory+epithelium.">Transcellular passage of Neisseria meningitidis across a polarized respiratory epithelium.</a> Infection and immunity. 78, 3832-3847 (2010).</li><li>Grantham, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoylation+of+the+influenza+A+virus+M2+protein+is+not+required+for+virus+replication+in+vitro+but+contributes+to+virus+virulence.">Palmitoylation of the influenza A virus M2 protein is not required for virus replication in vitro but contributes to virus virulence.</a> Journal of. 83, 8655-8661 (2009).</li><li>Saedisomeolia, A., Wood, L. G., Garg, M. L., Gibson, P. G., Wark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lycopene+enrichment+of+cultured+airway+epithelial+cells+decreases+the+inflammation+induced+by+rhinovirus+infection+and+lipopolysaccharide.">Lycopene enrichment of cultured airway epithelial cells decreases the inflammation induced by rhinovirus infection and lipopolysaccharide.</a> The Journal of nutritional biochemistry. 20, 577-585 (2009).</li><li>Yoshikawa, T., Hill, T., Li, K., Peters, C. J., Tseng, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+acute+respiratory+syndrome+(SARS)+coronavirus-induced+lung+epithelial+cytokines+exacerbate+SARS+pathogenesis+by+modulating+intrinsic+functions+of+monocyte-derived+macrophages+and+dendritic+cells.">Severe acute respiratory syndrome (SARS) coronavirus-induced lung epithelial cytokines exacerbate SARS pathogenesis by modulating intrinsic functions of monocyte-derived macrophages and dendritic cells.</a> Journal of virology. 83, 3039-3048 (2009).</li><li>Yoshikawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+innate+immune+responses+of+human+bronchial+epithelial+cells+to+severe+acute+respiratory+syndrome-associated+coronavirus+infection.">Dynamic innate immune responses of human bronchial epithelial cells to severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus infection.</a> PloS one. 5, e8729 (2010).</li><li>Hsu, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+constitutive+type+I+interferon+response+in+bronchial+epithelial+cell+to+influenza+infection.">Critical role of constitutive type I interferon response in bronchial epithelial cell to influenza infection.</a> PloS one. 7, e32947 (2012).</li><li>Harcourt, J. L., Caidi, H., Anderson, L. J., Haynes, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Calu-3+cell+line+as+a+model+of+in+vitro+respiratory+syncytial+virus+infection.">Evaluation of the Calu-3 cell line as a model of in vitro respiratory syncytial virus infection.</a> Journal of virological methods. 174, 144-149 (2011).</li><li>Zhang, L., Peeples, M. E., Boucher, R. C., Collins, P. L., Pickles, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+syncytial+virus+infection+of+human+airway+epithelial+cells+is+polarized,+specific+to+ciliated+cells,+and+without+obvious+cytopathology.">Respiratory syncytial virus infection of human airway epithelial cells is polarized, specific to ciliated cells, and without obvious cytopathology.</a> Journal of virology. 76, 5654-5666 (2002).</li><li>Geys, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+study+of+the+pulmonary+translocation+of+nanoparticles:+a+preliminary+study.">In vitro study of the pulmonary translocation of nanoparticles: a preliminary study.</a> Toxicology letters. 160, 218-226 (2006).</li><li>Geys, J., Nemery, B., Hoet, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimisation+of+culture+conditions+to+develop+an+in+vitro+pulmonary+permeability+model.">Optimisation of culture conditions to develop an in vitro pulmonary permeability model.</a> Toxicology in vitro : an international journal published in association with BIBRA. 21, 1215-1219 (2007).</li><li>Grainger, C. I., Greenwell, L. L., Lockley, D. J., Martin, G. P., Forbes, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Calu-3+cells+at+the+air+interface+provides+a+representative+model+of+the+airway+epithelial+barrier.">Culture of Calu-3 cells at the air interface provides a representative model of the airway epithelial barrier.</a> Pharmaceutical research. 23, 1482-1490 (2006).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

כאשר הקמת Calu-3 LCC במוסיף Transwell, תאים לא יכולים לקטב בכלל, או לא יכולים לקטב באופן מלא, כפי שהוגדרו על ידי TEER ≥ Ω 1000 × 2 סנטימטר ו≤ 1% איזון צבע נתרן fluorescein בין תאי apical וbasolateral. בנוסף, Calu 3 תאים בLCC יכולים לקטב באופן מלא, אך עשויה להיות לא עקבי TEER בין מדידות. למרות תנודות במדידות TEER של Calu-3 LCC הן נורמליות מיום ליום, נדנדות פעם מקוטבות באופן מלא, דרמטיות בTEER לא צפויות עד שהתרבות באופן טבעי יורדת עם גיל, שיכול להיות קטן כמו 5 שבועות או כל עוד 12 שבועות לאחר זריעה. היכולת של Calu-3 LCC לקטב תלויה בחלקו על אופן בו תאים נשמרים וsubcultured לפני השימוש במערכת Transwell. תאים שצמחו מעבר למפגש 90% כmonolayer במהלך subculturing, כי כבר subcultured יותר מ 10 פעמים מהמניות קפוא, או שלא תהיהen מסופק עם מדיום טרי על לוח זמנים קבוע נוטה פחות לקטב באופן מלא, וכל קיטוב צפוי לרדת במהירות. חוסר חלקי או מלאה של קיטוב גם ניתן לייחס לשינויים בחומר והגודל נקבובי של Transwells משמש לCalu-3 LCC, ושונות הרבה להרבה בTranswells של הרכב דומה וגודל נקבובי עשויות להשפיע גם על קיטוב. נקבוביים בגדלים גדולים יותר יכולים לאפשר Calu-3 לצמוח דרך קרום Transwell לתוך תא basolateral, מניעת התרבות מקיטוב. העדר הקיטוב יכול להיות גם בשל התפתחות חיידקים, שצוין על ידי תרבות בינונית מעורפלת, מה שמוביל להתמוטטות הבאה של צומת ההדוקים בין 3 Calu תאים. מדידות TEER משתנות של Calu-3 LCC עלולות להיגרם על ידי הפרעות מכאניות של monolayers Calu -3 LCC התא, מוסיף, או את הצלחות בעצמם. שינויים בינוניים ומדידות TEER צריכים להתבצע בלי עצות פיפטה או אלקטרודה מובילה לגעת בתאים. בעת ביצוע פעולות אלה, יש להקפיד להימנע מהחדרת בועות אוויר אל תאי apical וbasolateral, אשר משבשים את היכולת של voltohmmeter לזהות התנגדות. היכולת של voltohmmeter לזהות התנגדות בתרבות שהיא למעשה מקוטב יכולה גם מוגבלת על ידי הצטברות חלבון על מוביל אלקטרודות. למעלה לבנות זה עשוי להסיר עם משייף עדין, או ניתן לתקן על ידי החלפת אלקטרודה. ברגע Calu-3 LCC לקטב לחלוטין וTEER כבר לא עולה, Calu-3 LCC מוכן לשימוש כמודל במבחנה לאפיון תגובות תא אפיתל ריאה מארחת לזיהום בדרך נשימה. מערכת זו מאפשרת אפיון טוב יותר של תגובות כיוונית לפתוגנים השוואה לשורות תאי ריאת monolayer-תרבית משמשות באופן מסורתי כדי ללמוד פתוגנים בדרכי נשימה, כגון A549-2 והפ תאים, עם יתרונות הנוספים של Calu-3 LCC being מהיר יותר לפיתוח, המתקבל בקלות רבה יותר, ופחות יקר להפקה מאשר NHBE הראשוני, מקוטב, מובחן. בדומה לNHBE, מקוטב Calu-3 להפגין היווצרות צומת הדוקה, ולייצר mucins. עם זאת, בניגוד לNHBE, Calu-3 תאים מקוטבים אינם מבחין לתוך שכבות של תאי בסיס ותאי אפיתל ריסי columnar, וCalu-3 כמה תאים מקוטבים לפתח תחזיות ריסים כמו 19. כך, למרות ששימושי לבחינת תגובות מקוטבות של תאי האפיתל בדרכי אוויר לנשימת עלבון, Calu-3 המקוטבים LCC הוא לא מודל אידיאלי לבדיקת פיתוח דרכי נשימה או שיפוץ בתגובה לעלבון או פגיעה בדרכי נשימה. ייצור ריר על ידי תאים בתרבית במבחנה עשוי להשפיע infectivity סלולרי, כמו גם שחרורו של וירוס מדבק והתפשטות וירוס במודל מקוטב, והשוואה ישירה בין ייצור הריר Calu-3 המקוטבים LCC וNHBE מקוטב, בדיל לא דווח . A549 ו- 2 תאים HEPמחדש קל יותר לתרבות מאשר-3 Calu תאים, עם זאת, שלא כמו Calu-3 LCC, הם לא יוצרים תרבויות מקוטבות כאשר גדלו במוסיף Transwell, ובכך מהווים מודל אידיאלי לבדיקה לא במבחנה את התגובות של תאי האפיתל מקוטבים לזיהום וירוס בדרך נשימה .

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> ריאגנטים </td></tr><tr><td> Calu-3 </td><td> ATCC </td><td> HTB-55 </td><td></td></tr><tr><td> טריפסין 0.05% - 0.02% EDTA </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 25300 </td><td></td></tr><tr><td> הבינוני החיוני המינימאלי של הנשר (EMEM) </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 07-00100DK </td><td></td></tr><tr><td> סרום שור עוברי (FBS) </td><td> HyClone </td><td> SH30070.03 </td><td> חום להשבית, 56 ° C, 30 דקות </td></tr><tr><td> חומצות אמינו לא חיוניות 100x (10 מ&quot;מ) </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 11140 </td><td> חנות ב 4 ° C בחושך </td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 15630 </td><td></td></tr><tr><td> EMEM-10% FBS (EMEM-10%) </td><td></td><td></td><td> תוספת EMEM עם FBS חום מומת עד 10% בסרום, עקר מסנן </td></tr><tr><td> EMEM-20% FBS + תוספים (EMEM-20% + S) </td><td></td><td></td><td> תוספת EMEM לריכוזים סופיים: FBS חום מומת, 20%; 1X חומצות אמינו; 2 L-גלוטמין מ&quot;מ; 10 HEPES מ&quot;מ; עקר מסנן </td></tr><tr><td> צלחות Transwell 24 גם </td><td> קורנינג שחקן משנה </td><td> 3472 </td><td> 3 גודל נקבובי מיקרומטר, פוליאסטר </td></tr><tr><td> Trypan כחול </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 15250 </td><td></td></tr><tr><td> אתנול </td><td> סיגמא </td><td> E7023 </td><td> הכן ל 70% באמצעות DH 2 O סטרילי </td></tr><tr><td> PBS של Dulbecco (D-PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 14040 </td><td></td></tr><tr><td> חיץ ללא ניאון </td><td></td><td></td><td> 118 mM NaCl;4.75 mM KCl; 2.53 mM CaCl 2 × H 2 O; 2.44 mM MgSO 4; 1.19 mM KH 2 PO 4, 25 מ&quot;מ 3 NaHCO במים סטריליים; עקר מסנן </td></tr><tr><td> fluorescein נתרן </td><td> סיגמא </td><td> 6377 </td><td> 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​בחיץ סטרילי שאינו ניאון; עקר מסנן, להגן מפני אור; חנות ב 4 ° C עד 6 חודשים </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> ציוד </td></tr><tr><td> Voltohmmeter </td><td> מכשירי Precision העולם </td><td></td><td></td></tr><tr><td> STX2 האלקטרודה </td><td> מכשירי Precision העולם </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ELISA צלחת קורא </td><td></td><td></td><td> מסוגל למדוד 486 או 490 </td></tr></tbody></table>

establishing a liquid-covered culture of polarized human airway epithelial calu-3 cells to study host cell response to respiratory pathogens in vitro

משטחי apical וbasolateral של תאי האפיתל של דרך נשימה להפגין תגובות כיוונית לחשיפת הפתוגן בגוף חי. לפיכך, אידיאלי במודלים חוץ גופייה לבחינת תגובות תאיות לפתוגנים נשימה לקטב, ויצר משטחי apical וbasolateral. מודל אחד כזה הוא מובחן תאים נורמלים אדם סימפונות אפיתל (NHBE). עם זאת, מערכת זו דורשת דגימות רקמת ריאה, מומחיות ובידוד תאי האפיתל culturing מרקמות, וזמן כדי ליצור תרבות ממשק אוויר נוזלית. -3 Calu תאים, הנגזרים מאדנוקרצינומה סימפונות אנושיות, הם מודל חלופי לבחינת התגובה של תאי האפיתל של דרך נשימה הפרוקסימלי לעלבון נשימה 1, תרכובות תרופתיות 2-6, ו7-9 חיידקים ופתוגנים נגיפיים, כוללים וירוס שפעת, rhinovirus ותסמונת חמורה נשימתית חריפה - המשויכת קורונה 10-14. לאחרונה, Wהדואר הוכיח ש- 3 Calu תאים רגישים לוירוס בדרך נשימת סינסיציאלי (RSV) זיהום באופן עקבי עם NHBE 15,16. הנה, אנחנו פירוט הקמת התרבות המקוטבת, נוזל מכוסה (LCC) של-3 Calu תאים, תוך התמקדות בפרטים הטכניים של גידול ו- 3 Calu תאי culturing, שמירה על תאים שתרבית לLCC, ואנו מציגים את שיטה לביצוע זיהום וירוס בדרך נשימה של-3 Calu תאים מקוטבים. עקביות להשיג Calu-3 מקוטב LCC, Calu-3 תאים יש subcultured בקפידה לפני culturing במוסיף Transwell. Calu 3-תרבויות monolayer צריכות להישאר מתחת למפגש 90%, יש subcultured פחות מ 10 פעמים ממניות קפוא, וצריכים להיות מסופקות באופן סדיר עם מדיום חדש. תרבית לאחר בTranswells, Calu-3 LCC חייב להיות מטופל בזהירות. שינויים בתקשורת לא סדירים והגבלה מכאנית או פיזית של שכבות תאים או צלחות להשפיע לרעה על קיטוב עבורכמה שעות או ימים. קיטוב הוא פיקוח על ידי הערכת התנגדות חשמלית טרנס אפיתל (TEER) ומאומת על ידי הערכת האיזון הפסיבי של fluorescein נתרן בין תאי apical וbasolateral 17,18. המישורים לאחר TEER או מעל 1000 Ω × 2 סנטימטר, Calu-3 LCC מוכנים להשתמש כדי לבחון תגובות תאיות לפתוגנים בדרכי נשימה.

כשגדל כתרבויות נוזליות מכוסות (LCC) במערכות תרבות Transwell, כפי שמודגם באיור 1,-3 Calu תאים לקטב, פיתוח משטחי apical וbasolateral מובחנים. בעקבות שיטה המתוארת כאן, התנגדות החוצה אפיתל החשמלית (TEER) של Calu-3 LCC מגיעה לרמה או מעל 1000 Ω × 2 סנטימטר תוך 3 שבועות לאחר זריעה, דוגמה שמוצגת באיור 2. צומת ההדוקים שנוצרו בין תאים מקוטבים למנוע איזון פסיבי של מולקולות קטנות בין תאי apical וbasolateral. לפיכך, בדיקת איזון fluorescein נתרן שונה משמשת כדי לאשר את הקיטוב של Calu-3 LCC 15,17,18. כTEER של Calu-3 monolayers הסלולרי בעליות LCC, כמות שfluorescein פסיבי equilibrates לתוך תא basolateral פוחתת. ברגע TEER הוא 1,000 Ω × 2 סנטימטר, כמות fluorescein שequilibrates ב<html> לתא basolateral הוא ≤ 1%, כפי שמוצגים באיור 3, ולכן Calu-3 LCC נחשבים למקוטב באופן מלא כאשר TEER הוא ≥ Ω 1000 × 2 סנטימטר. מדידת TEER השיא של Calu-3 LCC עשויה להשתנות מניסוי לניסוי. עם זאת, ברגע שרמת ערכי TEER לכל ניסוי נתון, מקוטב באופן מלא, אינו נגוע Calu-3 LCC עשוי להיות יציב במשך 5 עד 12 שבועות לאחר זריעה. העדר פיתוח התנגדות בTranswell-מתורבתים Calu-3 עשוי להיגרם על ידי מספר גורמים כמפורטים בטבלה 1. רגע TEER מישורי Calu-3 LCC או מעל 1000 Ω × 2 סנטימטר, המודל מוכן לשמש לבדיקה תגובות נשימת אפיתל תאים לפתוגנים בדרכי נשימה, כולל וירוס סינסיציאלי נשימה (RSV). חשיפה לתוצאות RSV בירידה מהירה יותר בשלמות התרבות מקוטבת בהשוואה לזיהום מדומה של תאים (איור 4). = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/50157/50157fig1.jpg" /> איור 1. ייצוג חתך של תאי Transwell-תרבית. תאים גדלים על משטח הפסגה של הקרום להוסיף. <img alt="איור 2" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50157/50157fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50157/50157fig2.jpg" /> איור 2. התפתחות של עמידות טרנס אפיתל החשמלי (TEER) וקיטוב של Calu-3 תאים לאחר זריעה במוסיפה Transwell. בכל נקודת זמן, TEER מוצגת כΩ x סנטימטר חציון 2 ± SEM של 32 בארות עצמאיות מניסוי נציג אחד. <img alt="איור 3" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50157/50157fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50157/50157fig3.jpg" /> איור 3. הפסיבי equili<html> bration של fluorescein נתרן לתוך תא basolateral של Calu-3 monolayers הסלולרי מעוכב כתאים הופכים מקוטבים. נתונים מצטברים מארבעה ניסויים העצמאיים הוא מוצג. כל נקודת נתונים מייצגים מדידה בודדה. <img alt="איור 4" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50157/50157fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50157/50157fig4.jpg" /> איור 4. זיהום RSV של Calu-3 LCC המקוטב מאיץ ירידה בשלמות monolayer. Calu-3 תאים מקוטבים היו נגוע בRSV-A2 במשרד פנים = 1 ביום 0, והקוטביות הייתה פיקוח במשך 8 שבועות לאחר הדבקה. ניסוי נציג אחד מוצג. נתונים מוצגים כהתנגדות ממוצעת של 8 בארות עצמאיות לזיהום ± SEM כל נקודת זמן. * P &lt;0.05 בין תרבויות חיקוי ו- A2 הנגועות-RSV, כפי שנקבעו על ידי מבחן t של סטודנט. דרכים &quot;&gt; <tbody><tr><td> גיליון </td><td> רזולוציה (ים) </td></tr><tr><td> התנגדות אינה מדידה </td><td><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כל בועות אוויר בבארות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש-3 Calu תאים שsubcultured ממניות קפוא פחות מ 10 פעמים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תאפשרו ל- 3 Calu תאים להגיע למפגש 100% בתת monolayer </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו שתאים אינם גדלו על הפלסטיק הרבה מתחת להוסיף (המציין כי תאים עשויים שגדלו דרך הנקבובי של ההוספה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כעבור 2-3 שבועות לאחר זריעה לפיתוח התנגדות מלא </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את הרכב והגודל נקבובי של מוסיף משמש, לשנות במידת צורך (מומלץ להוסיף פוליאסטר, גודל נקבובי 0.3 מיקרומטר, ללא ציפויים, ראה חומרים לפרטים נוספים) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את האיכות של האלקטרודה, שיוף עדין המסיר את החלבונים שהצטברו מהקצה, והחלפה במידת צורך </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו בינוני להתפתחות חיידקים </li></ul&gt; </td></tr><tr><td> התנגדות מתפתחת, אבל קיטוב מלא (≥ Ω × 1000 סנטימטר 2) לא הושג </td><td><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר זמן נוסף לקיטוב לפתח (אולי מדי פעם לקחת עד 4 שבועות) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש-3 Calu תאים שsubcultured ממניות קפוא פחות מ 10 פעמים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תאפשרו ל- 3 Calu תאים להגיע למפגש 100% בתת monolayer </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקביות להחליף בינוני בתרבויות Transwell, לסירוגין בין היום הרביעי 3 ואז אחרי ההאכלה הקודמת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי תרבות יחידים במוסיף כי ממוקמות את השורות החיצוניות של צלחות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש שונים בהרבה ממוסיף Transwell </li></ul></td></tr><tr><td> תאים לקטב באופן מלא, אבל התנגדות אינה עקבית מקריאה אחד למשנו </td><td><ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תפגעו או לערום צלחות בחממה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תגרום לרעידות בארון הבטיחות הביולוגי תוך Transwell plates מטופלות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כל בועות אוויר בבארות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נא לא להפריע את שכבת התא עם טיפי פיפטה כשמשתנית מדיה או ביצוע קריאות TEER </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בינוני μl 200 בתא האפיקלי; עוצמת קול נמוכה יותר עלולה לגרום לקריאות TEER יציבות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את האיכות של האלקטרודה, שיוף עדין המסיר את החלבונים שהצטברו מהקצה, ולהחליף במידת צורך </li></ul></td></tr></tbody></table> 1. בעיות טבלת פתרון בעיות, שעשוי להתעורר כאשר 3 Calu תאי culturing בTranswells. גורמים רבים תורמים לקיטוב מלא ב- 3 Calu תאים בתרבית נוזל מכוסה, הסבירה שרובם מסומנים בטבלה זו.

Watch this Scientific Journal Video about Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro at JoVE.

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

הממצאים והמסקנות בדו&quot;ח זה הם של הכותבים ואינם מייצגים בהכרח את הדעות של המרכז לבקרת מחלות ומניעתן.

הקמת תרבות הנוזלית מכוסית של Airway האנושי המקוטב-3 Calu תאי אפיתל ללמוד תגובת תא מארחת לפתוגנים נשימה<em&gt; במבחנה</em

The  apical and basolateral surfaces of airway epithelial cells demonstrate  directional responses to pathogen exposure in  vivo. Thus, ideal in vitro ...

establishing-liquid-covered-culture-polarized-human-airway-epithelial

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

22.3K Views.  Centers for Disease Control and Prevention (CDC). הממצאים והמסקנות בדו"ח זה הם של הכותבים ואינם מייצגים בהכרח את הדעות של המרכז לבקרת מחלות ומניעתן.

Video: Establishing a Liquid-covered Culture of Polarized Human Airway Epithelial Calu-3 Cells to Study Host Cell Response to Respiratory Pathogens In vitro

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living surfaces. In this paper, we describe protocols for forming Pseudomonas aeruginosa biofilms on human airway epithelial cells (CFBE cells) grown in culture. In the first method (termed the Static Co-culture Biofilm Model), P. aeruginosa is incubated with CFBE cells grown as confluent monolayers on standard tissue culture plates. Although the bacterium is quite toxic to epithelial cells, the addition of arginine delays the destruction of the monolayer long enough for biofilms to form on the CFBE cells. The second method (termed the Flow Cell Co-culture Biofilm Model), involves adaptation of a biofilm flow cell apparatus, which is often used in biofilm research, to accommodate a glass coverslip supporting a confluent monolayer of CFBE cells. This monolayer is inoculated with P. aeruginosa and a peristaltic pump then flows fresh medium across the cells. In both systems, bacterial biofilms form within 6-8 hours after inoculation. Visualization of the biofilm is enhanced by the use of P. aeruginosa strains constitutively expressing green fluorescent protein (GFP). The Static and Flow Cell Co-culture Biofilm assays are model systems for early P. aeruginosa infection of the Cystic Fibrosis (CF) lung, and these techniques allow different aspects of P. aeruginosa biofilm formation and virulence to be studied, including biofilm cytotoxicity, measurement of biofilm CFU, and staining and visualizing the biofilm.

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

This paper describes different methods of growing Pseudomonas aeruginosa biofilms on cultured human airway epithelial cells. These protocols can be adapted to study different aspects of biofilm formation, including visualization of the biofilm, staining of the biofilm, measuring the colony forming units (CFU) of the biofilm, and studying biofilm cytotoxicity.

Co-מודלים של תרבות Pseudomonas aeruginosa Biofilms גדל על תאים חיים Airway האדם

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed to them and occasionally to pathogens. The gut-associated lymphoid tissue (GALT) play a key role for induction of the mucosal immune response to these microbes1, 2. To initiate the mucosal immune response, the mucosal antigens must be transported from the gut lumen across the epithelial barrier into organized lymphoid follicles such as Peyer's patches. This antigen transcytosis is mediated by specialized epithelial M cells3, 4. M cells are atypical epithelial cells that actively phagocytose macromolecules and microbes. Unlike dendritic cells (DCs) and macrophages, which target antigens to lysosomes for degradation, M cells mainly transcytose the internalized antigens. This vigorous macromolecular transcytosis through M cells delivers antigen to the underlying organized lymphoid follicles and is believed to be essential for initiating antigen-specific mucosal immune responses. However, the molecular mechanisms promoting this antigen uptake by M cells are largely unknown. We have previously reported that glycoprotein 2 (Gp2), specifically expressed on the apical plasma membrane of M cells among enterocytes, serves as a transcytotic receptor for a subset of commensal and pathogenic enterobacteria, including Escherichia coli and Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium), by recognizing FimH, a component of type I pili on the bacterial outer membrane 5. Here, we present a method for the application of a mouse Peyer's patch intestinal loop assay to evaluate bacterial uptake by M cells. This method is an improved version of the mouse intestinal loop assay previously described 6, 7. The improved points are as follows: 1. Isoflurane was used as an anesthetic agent. 2. Approximately 1 cm ligated intestinal loop including Peyer's patch was set up. 3. Bacteria taken up by M cells were fluorescently labeled by fluorescence labeling reagent or by overexpressing fluorescent protein such as green fluorescent protein (GFP). 4. M cells in the follicle-associated epithelium covering Peyer's patch were detected by whole-mount immunostainig with anti Gp2 antibody. 5. Fluorescent bacterial transcytosis by M cells were observed by confocal microscopic analysis. The mouse Peyer's patch intestinal loop assay could supply the answer what kind of commensal or pathogenic bacteria transcytosed by M cells, and may lead us to understand the molecular mechanism of how to stimulate mucosal immune system through M cells.

Application of a Mouse Ligated Peyer&#8217;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

M cells in a specialized follicle-associated epithelium covering Peyer&#x2019;s patches play an important role for the mucosal immunosurveillance in gut-associated lymphoid tissue. Here we described the evaluation method for bacterial transcytosis by M cells in vivo. This method provides a method to understand M-cell function in the immune system.

יישום של עכבר Ligated מעיים תיקון של Peyer Assay Loop להערכת ספיגת חיידקים על ידי תאים M

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

Monocyte-derived macrophages represent an important cell type of the innate immune system. Mouse models studying macrophage biology suffer from the phenotypic and functional differences between murine and human monocyte-derived macrophages. Therefore, we here describe an in vitro model to generate and study primary human macrophages. Briefly, after density gradient centrifugation of peripheral blood drawn from a forearm vein, monocytes are isolated from peripheral blood mononuclear cells using negative magnetic bead isolation. These monocytes are then cultured for six days under specific conditions to induce different types of macrophage differentiation or polarization. The model is easy to use and circumvents the problems caused by species-specific differences between mouse and man. Furthermore, it is closer to the in vivo conditions than the use of immortalized cell lines. In conclusion, the model described here is suitable to study macrophage biology, identify disease mechanisms and novel therapeutic targets. Even though not fully replacing experiments with animals or human tissues obtained post mortem, the model described here allows identification and validation of disease mechanisms and therapeutic targets that may be highly relevant to various human diseases.

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

Monocyte-derived macrophages are important cells of the innate immune system. Here, we describe an easy to use in vitro model to generate these cells. Using gradient centrifugation, negative bead isolation and specific cell culture conditions, monocyte-derived macrophages can be generated for phenotypic and functional studies.

<em&gt; במבחנה</em&gt; מודל ללמוד ההטרוגניות של בידול Macrophage אדם וקיטוב

Monocyte-derived macrophages represent an important cell type of the innate immune system. Mouse models studying macrophage biology suffer from the ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging from mild infections to life-threatening bronchiolitis. An important part of the pathogenesis of severe disease is an enhanced immune response leading to immunopathology.	Here, we describe a protocol used to investigate the immune response of human immune cells to an HRSV infection. First, we describe methods used for culturing, purification and quantification of HRSV. Subsequently, we describe a human in vitro model in which peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are stimulated with live HRSV. This model system can be used to study multiple parameters that may contribute to disease severity, including the innate and adaptive immune response. These responses can be measured at the transcriptional and translational level. Moreover, viral infection of cells can easily be measured using flow cytometry. Taken together, stimulation of PBMC with live HRSV provides a fast and reproducible model system to examine mechanisms involved in HRSV-induced disease.

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial virus (HRSV) can cause severe bronchiolitis in young infants. Part of the pathogenesis of severe HRSV disease is caused by the host immune response. Stimulation of primary human immune cells with HRSV provides a fast and reproducible model system to study activation of inflammatory pathways and infection.

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is imperative to design experiments using human cells and tissues. An advantage of organ culture is maintenance of three-dimensional (3D) structural organization and extracellular matrix. The goal of the method described here is successful establishment of ex vivo human gestational tissue organ cultures and their healthy culture maintenance for 72-96 hr. The protocol details the immediate processing of research-consented, placental and decidual specimens fresh from the operating suite. These are abundant specimens that would otherwise be discarded. Detailed instructions on the sterile collection of these samples, including morphologic details on how to select appropriate tissues to establish 3D organ cultures, is provided. Placental villous and decidual tissues are microdissected into 2-3 mm3 pieces and placed separately on matrix-lined transwell filters and cultured for several days. Villous and decidual organ cultures are well suited for the study of human host-pathogen interaction. As compared to other model organisms, these human cultures are particularly advantageous to examine mechanism of infection for pathogens that demonstrate variable patterns of host specificity. As an example, we demonstrate infection of placental and decidual organ cultures with the clinically relevant, facultative intracellular bacterial pathogen Listeria monocytogenes.

A simple method to establish primary human placental (villous) and decidual organ cultures is described. Villous and decidual organ cultures are invaluable tools for studying pathogenesis at the human maternal-fetal interface. Infection with the facultative intracellular bacterium Listeria monocytogenes is demonstrated.

שלית Decidual אדם תרבויות איברים ללמוד זיהומים בבית הממשק האם והעובר

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Developing a Salivary Antibody Multiplex Immunoassay to Measure Human Exposure to Environmental Pathogens

The etiology and impacts of human exposure to environmental pathogens are of major concern worldwide and, thus, the ability to assess exposure and infections using cost effective, high-throughput approaches would be indispensable. This manuscript describes the development and analysis of a bead-based multiplex immunoassay capable of measuring the presence of antibodies in human saliva to multiple pathogens simultaneously. Saliva is particularly attractive in this application because it is noninvasive, cheaper and easier to collect than serum. Antigens from environmental pathogens were coupled to carboxylated microspheres (beads) and used to measure antibodies in very small volumes of human saliva samples using a bead-based, solution-phase assay. Beads were coupled with antigens from Campylobacter jejuni, Helicobacter pylori, Toxoplasma gondii, noroviruses (G I.1 and G II.4) and hepatitis A virus. To ensure that the antigens were sufficiently coupled to the beads, coupling was confirmed using species-specific, animal-derived primary capture antibodies, followed by incubation with biotinylated anti-species secondary detection antibodies and streptavidin-R-phycoerythrin reporter (SAPE). As a control to measure non-specific binding, one bead set was treated identically to the others except it was not coupled to any antigen. The antigen-coupled and control beads were then incubated with prospectively-collected human saliva samples, measured on a high throughput analyzer based on the principles of flow cytometry, and the presence of antibodies to each antigen was measured in Median Fluorescence Intensity units (MFI). This multiplex immunoassay has a number of advantages, including more data with less sample; reduced costs and labor; and the ability to customize the assay to many targets of interest. Results indicate that the salivary multiplex immunoassay may be capable of identifying previous exposures and infections, which can be especially useful in surveillance studies involving large human populations.

In the current climate of scarce resources, new technologies are emerging that allow researchers to conduct studies cheaper, faster and with more precision. Here we describe the development of a bead-based salivary antibody multiplex immunoassay to measure human exposure to multiple environmental pathogens simultaneously.

פיתוח Immunoassay רוק נוגדן Multiplex כדי לאמוד את חשיפת אדם לפתוגנים הסביבה

The etiology and impacts of human exposure to environmental pathogens are of major concern worldwide and, thus, the ability to assess exposure and ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of combining reactions together. We designed and evaluated a panel based on this principle to rapidly identify the presence of common disease agents in dogs and horses with acute respiratory illness. This manuscript describes a nanoscale diagnostic PCR workflow for sample preparation, amplification, and analysis of target pathogen sequences, focusing on procedures that are different from microliter scale reactions. In the respiratory panel presented, 18 assays were each set up in triplicate, accommodating up to 48 samples per plate. A universal extraction and pre-amplification workflow was optimized for high-throughput sample preparation to accommodate multiple matrices and DNA and RNA based pathogens. Representative data are presented for one RNA target (influenza A matrix) and one DNA target (equine herpesvirus 1). The ability to quickly and accurately test for a comprehensive, syndrome-based group of pathogens is a valuable tool for improving efficiency and ergonomics of diagnostic testing and for acute respiratory disease diagnosis and management.

High-throughput testing of DNA and RNA based pathogens by nanoscale PCR is described using a syndromic canine and equine respiratory PCR panel.

איתור תפוקה גבוהה של פתוגנים הנשימה בדגימות בעלי חיים על ידי ננו PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple condensation reactions. DHDDS (dehydrodolichyl diphosphate synthase) is a eukaryotic long-chain cis-PT (forming cis double bonds from the condensation reaction) that catalyzes chain elongation of farnesyl diphosphate (FPP, an allylic diphosphate) via multiple condensations with isopentenyl diphosphate (IPP). DHDDS is of biomedical importance, as a non-conservative mutation (K42E) in the enzyme results in retinitis pigmentosa, ultimately leading to blindness. Therefore, the present protocol was developed in order to acquire large quantities of purified DHDDS, suitable for mechanistic studies. Here, the usage of protein fusion, optimized culture conditions and codon-optimization were used to allow the overexpression and purification of functionally active human DHDDS in E. coli. The described protocol is simple, cost-effective and time sparing. The homology of cis-PT among different species suggests that this protocol may be applied for other eukaryotic cis-PT as well, such as those involved in natural rubber synthesis.

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

A simple protocol for overexpression and purification of codon-optimized, human cis-prenyltransferase, under non-denaturing conditions, from Escherichia coli, is described, along with an enzymatic activity assay. This protocol can be generalized for production of other cis- prenyltransferase proteins in quantity and quality suitable for mechanistic studies.

Overexpression וטיהור האדם<em&gt; Cis</em&gt; פרנליטרונפרפרז ב<em&gt; Escherichia coli</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor microenvironment and the underlying mechanism is still largely unknown. The lack of a consistent and reliable source of NK cells limits the research progress of NK cell immunity. Here, we report an in vitro system that can provide high quality and quantity of bone marrow-derived murine NK cells under a feeder-free condition. More importantly, we also demonstrate that siRNA-mediated gene silencing successfully inhibits the E4bp4-dependent NK cell maturation by using this system. Thus, this novel in vitro NK cell differentiating system is a biomaterial solution for immunity research.

A Novel Feeder-free System for Mass Production of Murine Natural Killer Cells In Vitro

Here, we present a protocol to mass-produce gene-silencing murine NK cells by using a feeder-free differentiation system for mechanistic study in vitro and in vivo.

הרומן מזין ללא מערכת לייצור המוני של תאים רוצח טבעי מאתר במבחנה

Natural killer (NK) cells belong to the innate immune system and are a first-line anti-cancer immune defense; however, they are suppressed in the tumor ...

Mouse- and Human-derived Primary Gastric Epithelial Monolayer Culture for the Study of Regeneration

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and migration. One critical limitation of such assays, however, is their homogenous assortment of cellular types. Repair is a complex process which demands the interaction of several cell types. Therefore, to study a culture devoid of cellular subtypes, is a concern that must be overcome if we are to understand the repair process. The gastric organoid model may alleviate this issue whereby the heterogeneous collection of cell types closely reflects that of the gastric epithelium or other native tissues in vivo. Demonstrated here is a novel, in vitro scratch-wound assay derived from human or mouse 3-dimensional organoids which can then be transferred to a gastric epithelial monolayer as either intact organoids or as a single cell suspension of dissociated organoids. The goal of the protocol is to establish organoid-derived gastric epithelial monolayers that can be used in a novel scratch-wound assay system to study gastric regeneration.

Here we describe a protocol for establishing and culturing human- and mouse-derived 3-dimensional (3D) gastric organoids, and the method for the transfer of 3D organoids to a 2-dimensional monolayer. The use of the gastric epithelial monolayer as a novel scratch-wound assay for regeneration studies is also described.

העכבר ואת האדם-נגזר תרבות ראשי קיבה אפיתל חד שכבתי לצורך המחקר של התחדשות

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and ...

הקמת תרבות הנוזלית מכוסית של Airway האנושי המקוטב-3 Calu תאי אפיתל ללמוד תגובת תא מארחת לפתוגנים נשימה

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

Co-מודלים של תרבות Pseudomonas aeruginosa Biofilms גדל על תאים חיים Airway האדם

יישום של עכבר Ligated מעיים תיקון של Peyer Assay Loop להערכת ספיגת חיידקים על ידי תאים M

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

שלית Decidual אדם תרבויות איברים ללמוד זיהומים בבית הממשק האם והעובר

פיתוח Immunoassay רוק נוגדן Multiplex כדי לאמוד את חשיפת אדם לפתוגנים הסביבה

איתור תפוקה גבוהה של פתוגנים הנשימה בדגימות בעלי חיים על ידי ננו PCR

Overexpression וטיהור האדם

הרומן מזין ללא מערכת לייצור המוני של תאים רוצח טבעי מאתר במבחנה

העכבר ואת האדם-נגזר תרבות ראשי קיבה אפיתל חד שכבתי לצורך המחקר של התחדשות