עבודה זו נתמכה על ידי Forschungsgemeinschaft דויטשה (DFG; KL 1415/3-2 וKL 1415/4-2).

1. הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכין את מנות התרבות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשירו קולגן סוג IV O / N ב 4 ° C ולפזר אותו בחומצה אצטית 0.1% סטרילית. הנפח להשתמש תלוי בסוג ובמספר המנות שבתאים שנזרעו. השתמש 2 מיקרוגרם / 2 ס&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה מנות לפחות במשך שעה 1 ב RT ולשטוף פעמיים עם מים מזוקקים (א tridest). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר את הכלים לייבוש כמו שצריך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוספת של מדיום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדל את רמת הגלוקוז עד 4.5 גר &#39;/ ל&#39; על ידי הוספה גרם גלוקוז 1.75 עד בינונית 500 מ&quot;ל. כדי להתאים את המדיום ל600 mosmol, להוסיף 100 מ&quot;מ NaCl ואוריאת 100 מ&quot;מ, כדי להגדיל את osmolarity ב -200 mosmol ו100 mosmol, בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף חומצות 1% שאינם חיוני אמינו, 1% ultroser, DBcAMP 500 מיקרומטר, 20 nystatin U / מ&quot;ל ​​ו0.25 מיקרוגרם / מיליליטר גנטמיצין (1:200 דילול של פתרון מניות עם ריכוז של 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל) עד ​​600 מדיום DMEM mosmol טרי ביום ההכנה. </li></ol></p&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון אנזים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף מ&quot;ג / מיליליטר hyaluronidase 1 ו -2.2 collagenase מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​לDPBS המכיל 0.25 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​גנטמיצין וnystatin. להכין 1 מ&quot;ל של תמיסת אנזים זה לעיכול של medullae 2 הכליות פנימית. הפתרון חייב להיות מעוקר על ידי סינון ומאוחסן ב50 צינורות מ&quot;ל פלקון. </li></ol></li></ol> 2. טיפוח של Medullary פנימי עכברוש הראשוני איסוף צינור (IMCD) תאים כל נהלי הטיפול בבעלי החיים הם להתבצע בהתאם לחקיקה פדרלית והמקומית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטשטש בחולדות CO 2 (בתיבה רוויה עם CO 2) או isoflurane (U-400 אלחוש יחידה, Univentor בע&quot;מ, מלטה; זרימת אוויר 350-400 מ&quot;ל / דקה עם 2-2.5% isoflurane). לערוף את החיות לדימום המאפשר זיהוי של גבול שבין הפנימי לבנבן והלשד החיצוני הכהה יותר מדויק. בנוסף, הדימום ממזער את מספר אריתרוציטים בודדים. הסר כליות ולשטוף אותם בDPBS סטרילית השלים עם גנטמיצין וnystatin (ראה לעיל) על קרח. כל צעדים נוספים הם להתבצע בתנאים סטריליים ספסל נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הכליות מפתרון DPBS על לדחוס סטרילי כדי להסיר נוזל מוגזם. הסר את הקפסולה כליות שומן עם מלקחיים ומספריים סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהכליות עדיין קבועות ברטייה, לחתוך מעט ליד ציר האורך של הצד החיצוני (קליפת המוח). הקפד לא לחתוך לגמרי, אבל כדי להשאיר אותו בחתיכה אחת, מחובר באגן הכליה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם מספריים מעוגלים לנתח medullae הפנימי לבנבן, שמוקפים בלשד החיצוני נצנץ רוזה בזהירות. לאסוף אותם בDPBS, המכיל גנטמיצין וnystatin בצלחת תרבות 60 מ&quot;מ על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שכל medullae מבודד ונאסף על קרח, להפחית את עוצמת הקול של DPBS לרמה שבה הם פשוט מכוסים במאגר. השתמש בסכין גילוח סטרילית לחתוך לקוביות של medullae 5מ&quot;מ 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממסים ולעגל את הקצה החד של פסטר פיפטה סטרילית על ידי מחזיק אותו לזמן קצר לתוך להבה. ודא פיפטה היא מקוררת לפני שתמשיך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את ההשעיה הרקמות ל50 צינורות מ&quot;ל פלקון המכילים פתרון אנזים סטרילי מוכן טרי עם hyaluronidase וcollagenase (ראה 1.3.1) על ידי השימוש בפיפטה פסטר המעוגלת. סגור את המכסה בחוזקה ולדגור על 37 מעלות צלזיוס תחת תסיסה מתמשכת (220 סל&quot;ד) באמבטיה רגילה שולחן מים עבור 1.5 - 2 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטחינה דקה של ההשעיה, פיפטה את התערובת מעלה ומטה מספר פעמים עם סיבוב פיפטה פסטר (ראה לעיל) ועד להשעיה הופכת עכור הומוגנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ההשעיה למשך 5 דקות ב 300 XG ו16 ° C. בטל supernatant, resuspend את הכדור באופן יסודי בDPBS, המכיל גנטמיצין וnystatin ו צנטריפוגות שוב. חזור על שלב שטיפה זה פעם אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend התאים במדיום וזרעם לג בתוספת באופן מלאמנות ulture ו / או צלחות גם מיקרו כייל. הכנת 2 medullae (בעלי החיים 1) תניב תאים יספיקו לצלחת תרבות 60 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 24 שעות, לשטוף תאים פעמיים עם 600 mosmol DMEM ולהוסיף מדיום חדש. במהלך השבוע הבא יש לשטוף את התאים 2-3 פעמים (איור 1). 6-8 ימים לאחר זריעה, תאי IMCD יכולים לשמש לניסויים. זכור לדגירה אותם במדיום בלי DBcAMP וnystatin למשך 24 שעות לפני תחילת הניסוי. אחרת AQP2 יהיה ממוקם באופן בלעדי בקרום הפלזמה. </li></ol>

<ol>
	<li>Stoos, B. A., Naray-Fejes-Toth, A., Carretero, O. A., Ito, S., Fejes-Toth, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+mouse+cortical+collecting+duct+cell+line.">Characterization of a mouse cortical collecting duct cell line.</a> Kidney International. 39, 1168-1175 (1991).</li><li>Graham, F. L., Smiley, J., Russell, W. C., Nairn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+a+human+cell+line+transformed+by+DNA+from+human+adenovirus+type+5.">Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5.</a> The Journal of general virology. 36, 59-74 (1977).</li><li>Gluzman, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SV40-transformed+simian+cells+support+the+replication+of+early+SV40+mutants.">SV40-transformed simian cells support the replication of early SV40 mutants.</a> Cell. 23, 175-182 (1981).</li><li>Ala, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+studies+of+twelve+mutant+V2+vasopressin+receptors+related+to+nephrogenic+diabetes+insipidus:+molecular+basis+of+a+mild+clinical+phenotype.">Functional studies of twelve mutant V2 vasopressin receptors related to nephrogenic diabetes insipidus: molecular basis of a mild clinical phenotype.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 9, 1861-1872 (1998).</li><li>Richardson, J. C., Scalera, V., Simmons, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+strains+of+MDCK+cells+which+resemble+separate+nephron+tubule+segments.">Identification of two strains of MDCK cells which resemble separate nephron tubule segments.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 673, 26-36 (1981).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin+2+Promotes+Cell+Migration+and+Epithelial+Morphogenesis.">Aquaporin 2 Promotes Cell Migration and Epithelial Morphogenesis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. , (2012).</li><li>Perantoni, A., Berman, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+Wilms'+tumor+line+(TuWi)+and+pig+kidney+line+(LLC-PK1)+typical+of+normal+kidney+tubular+epithelium.">Properties of Wilms' tumor line (TuWi) and pig kidney line (LLC-PK1) typical of normal kidney tubular epithelium.</a> In vitro. 15, 446-454 (1979).</li><li>Katsura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutive+and+regulated+membrane+expression+of+aquaporin+1+and+aquaporin+2+water+channels+in+stably+transfected+LLC-PK1+epithelial+cells.">Constitutive and regulated membrane expression of aquaporin 1 and aquaporin 2 water channels in stably transfected LLC-PK1 epithelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92, 7212-7216 (1995).</li><li>Hull, R. N., Cherry, W. R., Weaver, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+characteristics+of+a+pig+kidney+cell+strain,+LLC-PK.">The origin and characteristics of a pig kidney cell strain, LLC-PK.</a> In vitro. 12, 670-677 (1976).</li><li>Nedvetsky, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+regulation+of+aquaporin-2+abundance+and+degradation+by+protein+kinase+A+and+p38-MAP+kinase.">Reciprocal regulation of aquaporin-2 abundance and degradation by protein kinase A and p38-MAP kinase.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 21, 1645-1656 (2010).</li><li>Iolascon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Two+Novel+Missense+Mutations+in+the+AQP2+Gene+Causing+Nephrogenic+Diabetes+Insipidus.">Characterization of Two Novel Missense Mutations in the AQP2 Gene Causing Nephrogenic Diabetes Insipidus.</a> Nephron Physiology. 105, p33-p41 (2007).</li><li>Deen, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-2+transfection+of+Madin-Darby+canine+kidney+cells+reconstitutes+vasopressin-regulated+transcellular+osmotic+water+transport.">Aquaporin-2 transfection of Madin-Darby canine kidney cells reconstitutes vasopressin-regulated transcellular osmotic water transport.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 8, 1493-1501 (1997).</li><li>Valenti, G., Frigeri, A., Ronco, P. M., D'Ettorre, C., Svelto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+and+functional+analysis+of+water+channels+in+a+stably+AQP2-transfected+human+collecting+duct+cell+line.">Expression and functional analysis of water channels in a stably AQP2-transfected human collecting duct cell line.</a> The Journal of Biological Chemistry. 271, 24365-24370 (1996).</li><li>Steele, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomerase+immortalization+of+principal+cells+from+mouse+collecting+duct.">Telomerase immortalization of principal cells from mouse collecting duct.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 299, F1507-F1514 (2010).</li><li>Bens, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticosteroid-dependent+sodium+transport+in+a+novel+immortalized+mouse+collecting+duct+principal+cell+line.">Corticosteroid-dependent sodium transport in a novel immortalized mouse collecting duct principal cell line.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 10, 923-934 (1999).</li><li>Hasler, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+regulation+of+aquaporin-2+expression+in+vasopressin-responsive+renal+collecting+duct+principal+cells.">Long term regulation of aquaporin-2 expression in vasopressin-responsive renal collecting duct principal cells.</a> The Journal of Biological Chemistry. 277, 10379-10386 (1074).</li><li>Miller, R. L., Sandoval, P. C., Pisitkun, T., Knepper, M. A., Hoffert, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin+inhibits+apoptosis+in+renal+collecting+duct+cells.">Vasopressin inhibits apoptosis in renal collecting duct cells.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. , (2012).</li><li>Kleinman, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+complexes+with+biological+activity.">Basement membrane complexes with biological activity.</a> Biochemistry. 25, 312-318 (1986).</li><li>Storm, R., Klussmann, E., Geelhaar, A., Rosenthal, W., Maric, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osmolality+and+solute+composition+are+strong+regulators+of+AQP2+expression+in+renal+principal+cells.">Osmolality and solute composition are strong regulators of AQP2 expression in renal principal cells.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 284, 189-198 (2003).</li><li>Maric, K., Oksche, A., Rosenthal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-2+expression+in+primary+cultured+rat+inner+medullary+collecting+duct+cells.">Aquaporin-2 expression in primary cultured rat inner medullary collecting duct cells.</a> Am. J. Physiol. 275, 796-801 (1998).</li><li>Liebenhoff, U., Rosenthal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Rab3-,+Rab5a-+and+synaptobrevin+II-like+proteins+in+a+preparation+of+rat+kidney+vesicles+containing+the+vasopressin-regulated+water+channel.">Identification of Rab3-, Rab5a- and synaptobrevin II-like proteins in a preparation of rat kidney vesicles containing the vasopressin-regulated water channel.</a> FEBS Lett. 365, 209-213 (1995).</li><li>Lorenz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP+is+sufficient+for+triggering+the+exocytic+recruitment+of+aquaporin-2+in+renal+epithelial+cells.">Cyclic AMP is sufficient for triggering the exocytic recruitment of aquaporin-2 in renal epithelial cells.</a> EMBO Rep. 4, 88-93 (2003).</li><li>Tamma, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prostaglandin+E2+analogue+sulprostone+antagonizes+vasopressin-induced+antidiuresis+through+activation+of+Rho.">The prostaglandin E2 analogue sulprostone antagonizes vasopressin-induced antidiuresis through activation of Rho.</a> J. Cell Sci. 116, 3285-3294 (2003).</li><li>Maric, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+volume+kinetics+of+adherent+epithelial+cells+measured+by+laser+scanning+reflection+microscopy:+determination+of+water+permeability+changes+of+renal+principal+cells.">Cell volume kinetics of adherent epithelial cells measured by laser scanning reflection microscopy: determination of water permeability changes of renal principal cells.</a> Biophys. J. 80, 1783-1790 (2001).</li><li>Gonzalez, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+stimulates+renin+in+inner+medullary+collecting+duct+cells+via+protein+kinase+C+and+independent+of+epithelial+sodium+channel+and+mineralocorticoid+receptor+activity.">Angiotensin II stimulates renin in inner medullary collecting duct cells via protein kinase C and independent of epithelial sodium channel and mineralocorticoid receptor activity.</a> Hypertension. 57, 594-599 (2011).</li><li>Chou, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+aquaporin-2+trafficking+by+vasopressin+in+the+renal+collecting+duct.+Roles+of+ryanodine-sensitive+Ca2++stores+and+calmodulin.">Regulation of aquaporin-2 trafficking by vasopressin in the renal collecting duct. Roles of ryanodine-sensitive Ca2+ stores and calmodulin.</a> The Journal of Biological Chemistry. 275, 36839-36846 (2000).</li><li>Uawithya, P., Pisitkun, T., Ruttenberg, B. E., Knepper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+profiling+of+native+inner+medullary+collecting+duct+cells+from+rat+kidney.">Transcriptional profiling of native inner medullary collecting duct cells from rat kidney.</a> Physiological Genomics. 32, 229-253 (2008).</li><li>Tchapyjnikov, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+profiling+of+nuclei+from+native+renal+inner+medullary+collecting+duct+cells+using+LC-MS/MS.">Proteomic profiling of nuclei from native renal inner medullary collecting duct cells using LC-MS/MS.</a> Physiological Genomics. 40, 167-183 (2010).</li><li>Stefan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalization+of+cAMP-dependent+signaling+by+phosphodiesterase-4D+is+involved+in+the+regulation+of+vasopressin-mediated+water+reabsorption+in+renal+principal+cells.">Compartmentalization of cAMP-dependent signaling by phosphodiesterase-4D is involved in the regulation of vasopressin-mediated water reabsorption in renal principal cells.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 18, 199-212 (2007).</li><li>Klussmann, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibitory+role+of+Rho+in+the+vasopressin-mediated+translocation+of+aquaporin-2+into+cell+membranes+of+renal+principal+cells.">An inhibitory role of Rho in the vasopressin-mediated translocation of aquaporin-2 into cell membranes of renal principal cells.</a> J. Biol. Chem. 276, 20451-20457 (2001).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

אנו מציגים פרוטוקול מפורט להכנה וculturing של תאי IMCD עכברוש ראשוניים. גישת תשואות של עד 21 ס&quot;מ 2 של תאים מחולדה אחת 20. הניסוי דורש ציוד תרבית תאים סטנדרטי ויכול להתבצע על ידי אדם אחד בתוך כ 6 שעות. לכן, גישה זו היא מתאימה כמו שיטת מעבדה סטנדרטית. <p class="jove_content" sty...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50366">Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells</a>. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to: Enno Klussmann instead of: Enno Klussman

A correction to author list has been made for article Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells.

Erratum: Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

בתאים עיקריים צינור איסוף כליות, ארגינין-וזופרסין (AVP) שולט במים על ידי גירוי ספיג חוזר של החדרת המים ערוץ aquaporin-2 (AQP2) לתוך קרום הפלזמה. AVP נקשר לרצפטור וזופרסין סוג 2 G-חלבון בשילוב (V2R) גירוי cyclase adenylyl ובכך היווצרות cAMP. תחילתו של מפל איתות זה מובילה להפעלה של החלבון קינאז (PKA). PKA phosphorylates AQP2 בסרין 256 (S256), המהווה את הגורם העיקרי לחלוקה מחדש שלה משלפוחית ​​תאיות לתוך קרום הפלזמה. הכניסה הקרום מאפשרת ספיגה חוזרת של מים לאורך שיפוע האוסמוטי ועדינות מנגינות הומאוסטזיס מים בגוף. Dysregulation של ספיגת מים AVP בתיווך, בשל סטיות של הפרשת AVP או גורמי איתות AVP-מופעלים או קשור למחלות קשות. ירידה נגרמה על ידי מוטציות של V2R או AQP2 ספיגת מים מובילה לסוכרת תפלה nephrogenic, בעוד שגובה מעל פני יםרמת AVP פלזמה דם ated קשורה לספיגת מים מוגזמת במחלות לב וכלי דם, כגון אי ספיקת לב כרונית ותסמונת של הפרשת הורמון antidiuretic הולמת (SIADH). המשמעות של ספיגת מים AVP בתיווך נובעת לא רק מההשלכות שלה במחלה. טרנסלוקציה-Induced AVP של שלפוחית ​​AQP2 נושאים ולאיחוי עם קרום הפלזמה מייצגת תהליך exocytic קפדנות מחנה תלוי, אשר כיום אינה מובנת היטב. דוגמאות אחרות לexocytosis מחנה תלוי הן הפרשת רנין בכליה וH + הפרשה בבטן. לכן, הבהרת מנגנונים מולקולריים השולטים AQP2-טרנסלוקציה בתאי הכליה עיקריות לא רק עוזרת להבנת תהליכים מולקולריים דומים בסוגי תאים אחרים, אלא גם עשויה לסלול את הדרך לטיפולים חדשים לטיפול במחלות הקשורות להפרעות בספיגת מים AVP בתיווך . Elucidating AQP2 שליטה מנגנונים דורש איסוף מודלים תא עיקריים דביק. לשם כך מספר שורות תאי כליות יונקים שונים זמין. עם זאת, המודלים האלה יש כמה חסרונות. במערכות סלולריים רבות את רמת החלבון של AQP2 היא נמוכה (טבלת 1; M1, HEK293, COS-7, MDCK, LLC-PK1) 1-10, אחרים ectopically overexpress אדם (MCD4, WT10) 11,12 או עכברוש (CD8) 13 AQP2. בMCD4 וCOS-7 תאים רצפטור V2 לא בא לידי ביטוי. למיטב ידיעתנו אין קו תא קבוע כמודל זמין, הנגזר מאיסוף הצינור הלשדי הפנימי כליות, את אותו חלק של הכליה בי AQP2 הביטוי הוא נפוץ ביותר, אבל מצינור 1,11,13-16 קליפת המוח האיסוף . מודלים תא כאלה הם למשל mpkCCD הונצח בשימוש נרחב (לדוגמה 17) או את 14 קווים שהוקמו לאחרונה mTERT-CCD הסלולרי. שתי שורות תאי endogenously המפורש AQP2 וV2R אבל מאז הם הנגזריםצינור איסוף קליפת המוח הקרוב לוודאי מכיל proteome שונה לעומת לשדי פנימי איסוף צינור (IMCD) תאים. הם חייבים להביע למשל Na שונה + מערכות תחבורה. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לתאי IMCD עיקריים תרבות המבטאים V2R וAQP2 endogenously. מודל זה, אם כן, מייצג באופן קרוב ביותר את המצב הפיזיולוגי בצינור איסוף הכליות. כביסוס התרבות דורש רק תקן מעבדות אחרות ציוד מעבדה יכולות בקלות לאמץ את הגישה הזו.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name </td>
			<td>Company Catalog</td>
			<td>Number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type IV Mouse</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356233</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>H6254</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type CLS-II</td>
			<td>Biochrom AG</td>
			<td>C2-22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM + GlutMAX</td>
			<td>Invitrogen GIBCO</td>
			<td>21885108</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>N4014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultroser G</td>
			<td>Cytogen</td>
			<td>15950-017</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non essential amino acids (NEA)</td>
			<td>Biochrom AG</td>
			<td>K0293</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Invitrogen GIBCO</td>
			<td>15710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DBcAMP</td>
			<td>BIOLOG</td>
			<td>D009</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

culturing primary rat inner medullary collecting duct cells

ארגינין-וזופרסין (AVP) מאפשר ספיג חוזר של מים על ידי כליות איסוף תאים עיקריים צינור ובכך עדינות מנגינות הומאוסטזיס מים בגוף. AVP נקשר לקולטנים V2 זופרסין (V2R) על פני השטח של התאים ובכך גורם לסינתזה של cAMP. זה מגרה תהליכי איתות תאיים מובילים לשינויים בזירחון של תעלת המים aquaporin-2 (AQP2). חלבון קינאז phoshorylates AQP2 ובכך מעורר את טרנסלוקציה של AQP2 משלפוחית ​​תאיות לתוך קרום הפלזמה להקל ספיגת מים משתן ראשוני. סטיות של שחרור מAVP איתות יותרת המוח או AVP המופעל בתאים עיקריים יכולות לגרום לסוכרת תפלה מרכזית או nephrogenic, בהתאמה; רמה גבוהה בדם פלזמה AVP קשורה למחלות לב וכלי דם, כגון אי ספיקת לב כרונית ותסמונת של הפרשת הורמון antidiuretic לא הולמת. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לcultivatiמלשד פנימי עכברוש העיקרי איסוף צינור (IMCD) תאים, שמבטא V2R וAQP2 endogenously. התאים מתאימים להבהרת מנגנונים מולקולריים שבבסיס הבקרה של AQP2 ובכך לגלות מטרות תרופה חדשות לטיפול במחלות הקשורות לחוסר ויסות של ספיגת מים AVP בתיווך. תאי IMCD מתקבלים מmedullae פנימי כליות חולדה ומשמשים לניסויים שישה עד שמונה ימים לאחר זריעה. יכולים להיות מתורבתים תאי IMCD במנות רגילות תרבית תאים, צלוחיות וצלחות מייקר כייל של פורמטים שונים, ההליך דורש רק כמה שעות, והוא מתאים למעבדות תרבית תאים סטנדרטיות.

הגידול המוצלח של תאי IMCD עכברוש עיקריים יביא בשכבת מחוברות 6-8 ימים לאחר הזריעה (איור 2). למנת תרבות 60 מ&quot;מ יש כ 6 x 10 6 תאים. התאים בחוזקה לדבוק במנות התרבות, שכן אלה היו מצופים בקולגן הסוג IV, מרכיב קרום במרתף 18. לכן, תאי IMCD לא לנתק גם במספר הליכי שטיפה י?...

Watch this Scientific Journal Video about Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells at JoVE.com

Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

ארגינין-וזופרסין (AVP) שולט בכוונון עדין של איזון מים בגוף דרך להקל על ספיגת מים על ידי תאי הכליה עיקריות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לגידול מדולרי פנימי עכברוש העיקרי איסוף תאי צינור המתאימים להבהרת מנגנונים מולקולריים שבבסיס ספיג חוזר של מים AVP בתיווך.

Medullary העכברוש הראשוני culturing הפנימי איסוף תאי Duct

Arginine-vasopressin (AVP) facilitates water reabsorption by renal collecting duct principal cells and thereby fine-tunes body water homeostasis. AVP ...

culturing-primary-rat-inner-medullary-collecting-duct-cells

Research

JoVE Journal

Biology

14.7K Views.  Max-Delbrück-Center for Molecular Medicine. ארגינין-וזופרסין (AVP) שולט בכוונון עדין של איזון מים בגוף דרך להקל על ספיגת מים על ידי תאי הכליה עיקריות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לגידול מדולרי פנימי עכברוש העיקרי איסוף תאי צינור המתאימים להבהרת מנגנונים מולקולריים שבבסיס ספיג חוזר של מים AVP בתיווך.

Video: Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

Collecting and Measuring Nociceptive and Inflammatory Mediators in Surgical Wounds 

We describe a methodology by which we are able to collect and measure inflammatory and nociceptive biochemical mediators at the surgical wound site. Collecting site-specific biochemical markers allows us to evaluate the relationship between surgical wound and serum levels; determine any associations between mediator release, pain and analgesic consumption; and evaluate the effect of systemic and peripheral drug administration on surgical wound biochemistry.
This methodology has been applied to healthy women undergoing elective cesarean delivery with spinal anesthesia. Wound exudate and serum mediators, in conjunction with pain scores and analgesics consumption were measured at 1, 6, 24, and 48 hours post-cesarean delivery. Biochemical mediators that were detected included IL-1&beta;, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, TNF&alpha;, INF&gamma;, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 and MIP-1&beta;, nerve growth factor (NGF), prostaglandin E2 (PG-E2) and substance P. We found no correlations between wound and serum cytokines concentrations or time-release profiles (J Pain. 2008 Jul 9(7):650-7). This article describes and demonstrates the feasibility of collecting and assaying nociceptive and inflammatory mediators in surgical wounds at specific time points. The lack of significant correlations between serum and wound levels shows the importance of determining site-specific release if surgical wounds and localized pathologies are to be studied.

Collecting and Measuring Nociceptive and Inflammatory Mediators in Surgical Wounds

A technique to collect and measure surgical wound biochemical mediators at specific time points.

איסוף מדידת מגשרים nociceptive ועל פצעים דלקתיים כירורגי

We describe a methodology by which we are able to collect and measure inflammatory and nociceptive biochemical mediators at the surgical wound site. ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide sympathetic innervations for the head and neck regions and they constitute a well-characterized and relatively homogeneous population (4).  Sympathetic neurons are dependent on nerve growth factor (NGF) for survival, differentiation and axonal growth and the wide-spread availability of NGF facilitates their culture and experimental manipulation (2, 3, 6).  For these reasons, cultured sympathetic neurons have been used in a wide variety of studies including neuronal development and differentiation, mechanisms of programmed and pathological cell death, and signal transduction (1, 2, 5, and 6).  Dissecting out the SCG from newborn rats and culturing sympathetic neurons is not very complicated and can be mastered fairly quickly.  In this article, we will describe in detail how to dissect out the SCG from newborn rat pups and to use them to establish cultures of sympathetic neurons.  The article will also describe the preparatory steps and the various reagents and equipment that are needed to achieve this.

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

This is a protocol describing how to isolate and culture primary sympathetic neurons from superior cervical ganglia (SCG) of newborn rat pups.

פרוטוקול נוירונים culturing הסימפתטית מן הגרעינים עכברוש צוואר הרחם מעולה (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research. Nevertheless, establishment of robust, viable cultured adult myocytes can be a technically challenging, rate-limiting step for many researchers. Here we described a protocol to obtain a high yield of adult rat heart myocytes that remain viable in culture for several days. The heart is isolated and perfused with collagenase and protease under low Ca2+ conditions to recover single myocytes. Ca2+-tolerant cells are obtained by stepwise increases in extracellular Ca2+ concentration in three subsequent wash steps. Cells are filtered, resuspended in culture medium, and plated on laminin coated slips. Cultured myocytes obtained using this protocol are viable for up to four days and are suitable for most experiments including electrophysiology, biochemistry, imaging and molecular biology.

In this paper, we described a typical way to isolate and culture adult rat heart myocytes. Collagenase and protease are used to digest and isolate single myocytes. Myocytes cultured follow this protocol meet most experiment requirements.

תרבות ראשונית של הלב Myocytes למבוגרים עכברוש

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Isolation of Basal Cells and Submucosal Gland Duct Cells from Mouse Trachea

The large airways are directly in contact with the environment and therefore susceptible to injury from toxins and infectious agents that we breath in 1. The large airways therefore require an efficient repair mechanism to protect our bodies. This repair process occurs from stem cells in the airways and isolating these stem cells from the airways is important for understanding the mechanisms of repair and regeneration. It is also important for understanding abnormal repair that can lead to airway diseases 2. The goal of this method is to isolate a novel stem cell population from the mouse tracheal submucosal gland ducts and to place these cells in in vitro and in vivo model systems to identify the mechanisms of repair and regeneration of the submucosal glands 3. This production shows methods that can be used to isolate and assay the duct and basal stem cells from the large airways 3.This will allow us to study diseases of the airway, such as cystic fibrosis, asthma and chronic obstructive pulmonary disease. Currently, there are no methods for isolation of submucosal gland duct cells and there are no in vivo models to study the regeneration of submucosal glands.

Here we demonstrate our protocol for isolation of basal and submucosal gland duct cells from mouse tracheas. We also demonstrate the method of injecting stem cells into the dorsal mouse fat pad to create an in vivo model of submucosal gland regeneration.

בידוד של תאי בסיס ותאי בלוטת Duct Submucosal מעכבר קנה נשימה

The large airways are directly in contact with the environment and therefore susceptible to injury from toxins and infectious agents that we breath in 1. ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology and other related subjects. The method based on two-step collagenase perfusion for isolation of intact hepatocytes was first introduced by Berry and Friend in 1969 1 and, since then, has undergone many modifications. The most commonly used technique was described by Seglenin 1976 2. Essentially, hepatocytes are dissociated from anesthetized adult rats by a non-recirculating collagenase perfusion through the portal vein. The isolated cells are then filtered through a 100 &mu;m pore size mesh nylon filter, and cultured onto plates. After 4-hour culture, the medium is replaced with serum-containing or serum-free medium, e.g. HepatoZYME-SFM, for additional time to culture. These procedures require surgical and sterile culture steps that can be better demonstrated by video than by text. Here, we document the detailed steps for these procedures by both video and written protocol, which allow consistently in the generation of viable hepatocytes in large numbers.

Primary hepatocytes provide a valuable tool to evaluate biochemical, molecular, and metabolic functions in a physiologically relevant experimental system. We describe a reliable protocol for rat in situ liver perfusion, which consistently generates viable hepatocytes up to 1.0 &times; 108 cells per preparation with cell viability between 88 ~ 96%.

בידוד תרבות ראשונית של תאים בכבד עכברוש

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various chemokines and growth factors 1,2. However, once in the TME, these cells lose the ability to promote anti-tumor immunity and begin to support tumor growth and down-regulate anti-tumor immune responses 3-4. Studies on tumor-associated leukocytes have mainly focused on cells isolated from tumor-draining lymph nodes or spleen due to the inherent difficulties in obtaining sufficient cell numbers and purity from the primary tumor. While identifying the mechanisms of cell activation and trafficking through the lymphatic system of tumor bearing mice is important and may give insight to the kinetics of immune responses to cancer, in our experience, many leukocytes, including dendritic cells (DCs), in tumor-draining lymph nodes have a different phenotype than those that infiltrate tumors 5,6 . Furthermore, we have previously demonstrated that adoptively-transferred T cells isolated from the tumor-draining lymph nodes are not tolerized and are capable of responding to secondary stimulation in vitro unlike T cells isolated from the TME, which are tolerized and incapable of proliferation or cytokine production 7,8. Interestingly, we have shown that changing the tumor microenvironment, such as providing CD4+ T helper cells via adoptive transfer, promotes CD8+ T cells to maintain pro-inflammatory effector functions 5. The results from each of the previously mentioned studies demonstrate the importance of measuring cellular responses from TME-infiltrating immune cells as opposed to cells that remain in the periphery. To study the function of immune cells which infiltrate tumors using the Miltenyi Biotech isolation system9, we have modified and optimized this antibody-based isolation procedure to obtain highly enriched populations of antigen presenting cells and tumor antigen-specific cytotoxic T lymphocytes. The protocol includes a detailed dissection of murine prostate tissue from a spontaneous prostate tumor model (TRansgenic Adenocarcinoma of the Mouse Prostate -TRAMP) 10 and a subcutaneous melanoma (B16) tumor model followed by subsequent purification of various leukocyte populations.

In this report, we describe a protocol for isolating highly purified populations of leukocytes that infiltrate tumors. This protocol is adapted from the Miltenyi Biotech protocol to enhance yield and purity for isolating cells from complex tumor tissue.

בידוד של תאים חיסוניים של גידולים ראשוניים

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Culturing of Human Nasal Epithelial Cells at the Air Liquid Interface

In vitro models using human primary epithelial cells are essential in understanding key functions of the respiratory epithelium in the context of microbial infections or inhaled agents. Direct comparisons of cells obtained from diseased populations allow us to characterize different phenotypes and dissect the underlying mechanisms mediating changes in epithelial cell function. Culturing epithelial cells from the human tracheobronchial region has been well documented, but is limited by the availability of human lung tissue or invasiveness associated with obtaining the bronchial brushes biopsies. Nasal epithelial cells are obtained through much less invasive superficial nasal scrape biopsies and subjects can be biopsied multiple times with no significant side effects. Additionally, the nose is the entry point to the respiratory system and therefore one of the first sites to be exposed to any kind of air-borne stressor, such as microbial agents, pollutants, or allergens. 
Briefly, nasal epithelial cells obtained from human volunteers are expanded on coated tissue culture plates, and then transferred onto cell culture inserts. Upon reaching confluency, cells continue to be cultured at the air-liquid interface (ALI), for several weeks, which creates more physiologically relevant conditions. The ALI culture condition uses defined media leading to a differentiated epithelium that exhibits morphological and functional characteristics similar to the human nasal epithelium, with both ciliated and mucus producing cells. Tissue culture inserts with differentiated nasal epithelial cells can be manipulated in a variety of ways depending on the research questions (treatment with pharmacological agents, transduction with lentiviral vectors, exposure to gases, or infection with microbial agents) and analyzed for numerous different endpoints ranging from cellular and molecular pathways, functional changes, morphology, etc. 
In vitro models of differentiated human nasal epithelial cells will enable investigators to address novel and important research questions by using organotypic experimental models that largely mimic the nasal epithelium in vivo.

Nasal epithelial cells, obtained through superficial scrape biopsy of human volunteers, are expanded and transferred onto tissue culture inserts. Upon reaching confluency, cells are grown at air liquid interface, yielding cultures of ciliated and non-ciliated cells. Differentiated nasal epithelial cell cultures provide viable experimental models for studying the respiratory mucosa.

Culturing של אדם תאי אפיתל באף בממשק האוויר הנוזלי

In vitro models using human primary  epithelial cells are essential in understanding key functions of the respiratory  epithelium in the context of ...

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require direct access to cells and isolation of specific cell types, could not be applied in C. elegans. This limitation was due to the fact that tissues are confined within a pressurized cuticle which is not easily digested by treatment with enzymes and/or detergents. Based on early pioneer work by Laird Bloom, Christensen and colleagues 1 developed a robust method for culturing C. elegans embryonic cells in large scale. Eggs are isolated from gravid adults by treatment with bleach/NaOH and subsequently treated with chitinase to remove the eggshells. Embryonic cells are then dissociated by manual pipetting and plated onto substrate-covered glass in serum-enriched media. Within 24 hr of isolation cells begin to differentiate by changing morphology and by expressing cell specific markers. C. elegans cells cultured using this method survive for up 2 weeks in vitro and have been used for electrophysiological, immunochemical, and imaging analyses as well as they have been sorted and used for microarray profiling.

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

We describe here a revised protocol for large-scale culture of embryonic C. elegans cells. Embryonic C. elegans cells cultured in vitro using this method, appear to differentiate and recapitulate the expression of genes in a cell specific manner. Techniques that require direct access to the cells or isolation of specific cell types from the other tissues can be applied on C. elegans cultured cells.

שיטה לCulturing עוברי<em&gt; ג elegans</em&gt; תאים

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require ...

Primary Culture of Rat Adrenocortical Cells and Assays of Steroidogenic Functions

The hormone which the adrenal cortex secretes is vital for animals against stress and diseases. The method described here is the procedure of primary cultured rat adrenal cells and related functional assays (immunofluorescence staining of lipid droplet surface protein, as well as corticosterone analysis). Unlike an in vivo model, the variation of interexperiments in adrenal monolayer cultures is less and the experimental condition is easy to control. Besides, the source of rats is also more stable than other animals, like bovine ones. There are also several human adrenal cell lines (NCI-H295, NCI-H295R, SW13, etc.) that can be used in adrenal studies. However, the steroid production of these lines will still be influenced by numerous factors, which include serum lot number, passage number, mutant/loss of distinct genes, etc. Except for lacking 17&#945;-hydroxylase, the primary culture of rat adrenocortical cells is a better and more convenient technique for studying adrenal physiology. In summary, primary rat adrenal cultures could be a good in vitro platform for researchers to investigate the mechanisms of the reagent of interest in the adrenal gland system.

The hormone secreted by the adrenal cortex is vital for animals against stress and diseases. Here, we present a protocol to culture the primary rat adrenal cells. It could be a good in vitro platform for investigating the mechanisms of the reagent of interest in adrenal steroidogenesis and lipid biosynthesis.

תרבות העיקרי של תאים Adrenocortical חולדה, מבחני של פונקציות שחלת בקר

The hormone which the adrenal cortex secretes is vital for animals against stress and diseases. The method described here is the procedure of primary ...

Isolation of Primary Rat Hepatocytes with Multiparameter Perfusion Control

Primary hepatocytes are widely used in basic research on liver diseases and for toxicity testing in vitro. The two-step collagenase perfusion procedure for primary hepatocyte isolation is technically challenging, especially in portal vein cannulation. The procedure is also prone to occasional contamination and variations in perfusion conditions due to difficulties in the assembly, optimization, or maintenance of the perfusion setup. Here, a detailed protocol for an improved two-step collagenase perfusion procedure with multiparameter perfusion control is presented. Primary rat hepatocytes were successfully and reliably isolated by taking the necessary technical precautions at critical steps of the procedure, and by reducing the operational difficulty and mitigating the variability of perfusion parameters through the adoption of a special intravenous catheter, standardized sterile disposable tubing, temperature control, and real-time monitoring and alarm system. The isolated primary rat hepatocytes consistently exhibit high cell viability (85%-95%), yield (2-5 x 108 cells per 200-300 g rat) and functionality (albumin, urea and CYP activity). The procedure was complemented by an integrated perfusion system, which is compact enough to be set up in the laminar flow hood to ensure aseptic operation.

This protocol details the use of a special intravenous catheter, standardized sterile disposable tubing, temperature control complemented by real-time monitoring, and an alarm system for two-step collagenase perfusion procedure to improve the consistency in the viability, yield, and functionality of isolated primary rat hepatocytes.

בידוד של הפטוציטים ראשוניים של חולדות עם בקרת זלוף רב-פרמטרית

Primary hepatocytes are widely used in basic research on liver diseases and for toxicity testing in vitro. The two-step collagenase perfusion procedure ...