המחברים רוצים להכיר אדיר (עוזרו במגורים aux Insuffisants Respiratoires) וFondation de l&#39;Avenir על תמיכה הכספית ולד&quot;ר פאני Barnabé-היידר לעריכת כתב היד.

1. תרבויות עיקריות של חוש הריח וחוש ריח רירית נורות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני לנתיחה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך בינוני, ל50 מיליליטר, על ידי הוספת 44 מיליליטר של סידן ללא השתנה Dulbecco של נשר / הבינוני של בשר חזיר F12 (DMEM/F12), בתוספת 5 מיליליטר של סרום שור העוברי (FBS) ו 1 מיליליטר של פניצילין / סטרפטומיצין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעיל 75 סנטימטר 2 צלוחיות עם פולי-L-ליזין (50 מיקרוגרם / מיליליטר, 1.5 מיקרוגרם / 2 סנטימטר), 1 שעות בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את צלוחיות עם PBS 1X. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את צלוחיות מצופים במקרר למשך שבוע עד 1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל שיטה של ​​המתת חסד חייבת להיות מאושרת מראש על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים ושימושו של המוסד ובוצעה על ידי טכנאי מוסמך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר חולדות מולדות כגון חולדות פישר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי העכברוש אושר לנכנס הרדמה עמוקה עם pentobarbital נתרן או צורות אחרות של זריקות הרדמה כגון קטמין / xylazine, לערוף אותו וrסר העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את הגולגולת מהקדמית לחלק האחורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את טיפול לקיחת OB, כדי למנוע את קרומי המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באותו החולדה, פתח sagittaly חלל האף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את OM לטפל כדי למנוע את הרירית של דרך הנשימה. שים לב שהאפיתל OM יכול להיות מזוהה בקלות על ידי הצבע הצהבהב שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרוטוקולים נוספים מפורטים על נתיחה של OM ניתן למצוא בקודם <a href="https://www.jove.com/video/2762/isolating-nasal-olfactory-stem-cells-from-rodents-or-humans">J. Vis. Exp.</a> פרסום 13. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח OB בפתרון של האנק שנאגרו מלח (HBSS) המכיל טריפסין 0.1% 45 דקות ב37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח OM בHBSS המכיל 0.05% collagenase 45 דקות ב37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפסיק עיכול אנזימטי על ידי הוספת 2 מיליליטר של מדיום חם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם מדיום וצנטריפוגות XG 300 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות Triturate של 2מיליליטר של מדיום באמצעות פיפטה P1000 עד השעיה תא הומוגנית מתקבלת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט התאים בצלוחיות Precoated (5-10 x 10 6 תאים / בקבוק) עם 25 מיליליטר של מדיום חם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה ותרבות התאים ב37 ° C עם 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שינוי מחצית בינונית כל 2 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי 6-8 ימים במבחנה, לבדוק את חלקם של p75 בתאים חיוביים על דגימות תאים קטנות, הניח להיות OECs במכרסמים, על ידי cytometry זרימה או על ידי immunocytochemistry. לניתוחים אלו, ניתן ללמוד סמנים אחרים כגון GFAP וS100β. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח תזרים cytometry <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את התאים כמתואר ב&quot; השתלה סלולרית &quot;(סעיף 2.2 בהמשך). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה אותם עם p75 נוגדן ראשוני (1:100) במהלך 15 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם 2 מיליליטר של PBS-EDTA ו צנטריפוגות XG 300 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים עם נוגדנים משני אנטי עכבר PE מצומדות במהלך 15דקות ב 4 ° C בחושך (1:200). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם 2 מיליליטר של PBS-EDTA ו צנטריפוגות XG 300 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend התאים 500 μl של PBS-EDTA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח 10-30 x 10 3 תאים עם זרימת cytometer. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח Immunocytochemistry <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט התאים ב6 צלחות היטב precoated ל48 שעות כפי שתואר ב&quot; תרבות &quot;(סעיף 1.1.2 להלן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את התאים עם PFA 4% ל15 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים עם PBS / טריטון X100 (0.1%) ל15 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים עם נוגדנים ראשוניים (1:200): p75, S100β וGFAP הלילה בשעה 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים עם הנוגדנים משני (1:500) בשעה 1 ב RT בחושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים עם Hoechst 10 דקות ב RT בחושך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתח את התאים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי תיוג GFP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חמישה ימים לפני ההשתלה, להדביק תרבויות OB וOM לילה עם וקטור lentiviral מחסה GFP המשופר (ריבוי של זיהום: 20). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני צ&#39;ק השתלה על מדגמים קטנים השיעור של תאי GFP חיוביים על ידי זרימת cytometry כפי שתואר לעיל ב&quot; תרבות &quot;(סעיף 1.1). </li></ol></li></ol> 2. כירורגיה והשתלות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השקה עצב חוזרת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל הניסויים עם בעלי חיים חייבים להיות מאושרים מראש על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים ושימושו של המוסד ובוצעו על ידי טכנאי מוסמך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני החיטוי ניתוח כל המכשירים ולשמור על סטריליות בכל הניתוחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברוש בזריקת intraperitoneal של קטמין הידרוכלוריד (12.5 מ&quot;ג / קילוגרם) וhydrochloride chlorpromazine (0.625 מ&quot;ג / קילוגרם). להעריך את הלימות של הרדמה על ידי קמצוץ הבוהן לפני הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה בפחסה הגבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע חתך 2 סנטימטר אנכי בינוני צוואר הרחם עורית עם אזמל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע חתך אנכי של שרירי infrahyoid הבאים הקו הלבן המדיאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את הגרון באמצעות מפשק autostatic בין שרירי infrahyoid. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את RLN. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת שליטה מיקרוסקופית, חתך את העצב באופן מלא עם microscissors ברמה של טבעת קנה הנשימה השביעית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבצע השקה באמצעות נקודה אחת של 11.0 תפר תחת שליטה מיקרוסקופית. ניתוח זה מוביל לdenervation מנוע ספציפית של הגרון. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתלה סלולרית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רגע לפני ההשתלה, להסיר את התאים מהמנות באמצעות 0.05% EDTA טריפסין למשך 5 דקות על 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפסיק עיכול אנזימטי על ידי הוספת 2 מיליליטר של מדיום חם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה XG 300 3 דקות. </li><li&gt; תחת מיקרוסקופ לספור את התאים באמצעות hemocytometer ולהתאים את הריכוז הסלולרי על פי פרוטוקול ספציפי. במודל זה, ריכוזים רצויים היו בין 1.2-6 x 10 6 תאים ב30 μl של DMEM/F12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות הכנה סלולרית עם 1:02 תמהיל (30 ו60 μl בניסוי זה) של ליטר DMEM/F12-Matrige ב1.5 צינור מיליליטר לפני השתלה ולמקם אותו על קרח. כדי למנוע תופעות לא ספציפיות, השתמש בגורם גדילה המופחת Matrigel. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רק לפני ההשתלה להחזיק את הצינור ביד שלך לכמה שניות כדי לחמם את תערובת Matrigel בינונית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדיח את התמהיל באתר ההשקה באמצעות פיפטה ולחכות עד עצמי מרכיב התערובת על העצב נפגע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את השרירים ועור עם תפר 4.0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בית החולדות בנפרד ולשמור תחת מנורת חימום ל24 שעות. </li></ol></li></ol> 3. הערכה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Laryngoscopy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי חולדות על ידי intraperitהזרקת אוניל של קטמין הידרוכלוריד (12.5 מ&quot;ג / קילוגרם) וhydrochloride chlorpromazine (0.625 מ&quot;ג / קילוגרם). חולדות אשר מורדמים עם קמצוץ הבוהן לפני שתמשיך עם פרוטוקול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה בפחסה הגבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס 30 ° videolaryngoscope מותאמים למספק את התצוגה הטובה ביותר של הגרון. לקבוע ציוני דרך אנטומיים לשחזר את אותה תצוגה עבור כל הקלטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקלט את תנועות מייתרי קול באמצעות videolaryngoscope (5-10 רצפים / בעלי החיים). לכל חיה לבחור שלושה רצפים של הסתמכות מקסימלי רצופה וחטיפה מקסימלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח פונקצית גרון באמצעות תוכנת ניתוח תמונה. לקבוע תנועה זוויתית מוחלטת על ידי מדידת ההבדל בין התנועה של חטיפה מקסימלי והסתמכות מקסימלי של מיתרי קול. לקבוע ציון דינמי על ידי מדידת משרעת התנועה. לקבוע ציון תפקודי על ידי מדידת synkinesis ותנועות paradoxal. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (EMG) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li&gt; מקם אלקטרודה על שרירי מיתר הברך של החולדה לבידוד חשמלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את הגרון ואת קנה הנשימה על ידי פתיחת עור ובשרירים כפי שתואר לעיל ב&quot; השקה חוזרת עצבים &quot;(סעיף 2.1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את סחוס cricothyroid. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את סחוס cricothyroid לחשוף cricoarytenoid האחורי שריר (PCA) באמצעות microscissors. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להציג את האלקטרודה monopolar מחט (38 x 0.45 מ&quot;מ) בשריר PCA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקליט את הפעילות השרירית החשמלית של השרירים PCA באמצעות מערכת רכישה במהלך אוורור ספונטני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתח את הפעילות השרירית במונחים של עושר וסנכרון עם הנשימה. כדי לנתח EMGs, להקצות ציון איכותי 0-3 באמצעות הסולם הבא: 0: מעקב לא מחורזות, ללא עלייה בהשראה, 1: בחרוזים התחקות עם שאיפה גוברת, אך התחקות עלובה (אב עצבים), 2: בחרוזים התחקות עם פעילות עשירה יותר, 3: בחרוזים מעקב, עשיר מאוד, המהווה iדפוס nterference, בדומה לפעילות מכוונת מקסימלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את העצב התועה למדידת משך השהיה ופוטנציאלי. העצב התועה נבחר כאתר של גירוי בגלל RLN יכול להינזק במהלך הגירוי בשל גודלו הקטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרות את העצב התועה עם אלקטרודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקליט אותות חשמליים בשריר PCA. למדוד Latency ומשך פוטנציאלי. אם אפשר להשתמש במודול רכישה להקליט פעילות שרירית, מיסות ומשך פוטנציאל כגון מערכת Powerlab. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היסטולוגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את בעלי החיים באמצעות מנת יתר pentobarbital. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הגדם הדיסטלי של RLN תחת שליטה מיקרוסקופית. החלק הדיסטלי של RLN מוגדר כחלק בין ההשקה וגרון. שים לב כי ניתן למצוא באתר ההשקה מספר שבועות לאחר הניתוח, כי התפר 11.0 הוא תפר nonabsorbable. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את החלק הדיסטלי של RLN בglutaraldehyde 2% עם פוספט 0.1 M(PH = 7.3) עבור 2 שעות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכוון בזהירות את הדגימות לממש סעיפי העטרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף דגימות במאגר פוספט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך במקטעים קטנים יותר (אורך מ&quot;מ 3-4) וpostfix ל60 דקות בטמפרטורת החדר בcacodylate 1% שנאגרו 4 oso ומיובש עם אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דוגמאות אוריינט בתבניות סיליקון ומשובץ ברפים מורכב ב812 POLYBED, DDSA וMNA, שאליה התווסף 2% מהמאיץ BDMA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך סעיפי חצי דקים רוחביים (1μm העובי) באמצעות מערכת Ultramicrotomy Pyramitome. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם עם 0.1% כחולים Toluidine ב1% tetraborate נתרן ל75 שניות ב70 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח דגימות RLN עם מערכת ניתוח ספירה. לספור את מספר הסיבים ולמדוד פרופילי סיבי עצב myelinated על ידי קביעת הגבול החיצוני ופנימי של מעטפת המיאלין. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתלה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את התאים להשתלה והשתלת התאים כפי שתוארו לעילב&quot; השתלה סלולרית &quot;(סעיף 2.2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנליזה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את בעלי החיים באמצעות מנת יתר pentobarbital. שים לב שהקיבעון של בעלי החיים יכול להתבצע באמצעות הזרקת intracardiac של PFA 4%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר סביב 2 סנטימטר של RLN. השתמש הפרוקסימלית וחלקים מרוחקים של RLN. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן מדגם RLN בחנקן נוזלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות חנות ב -80 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות Cut longitudinally באמצעות cryostat (10-20 מיקרומטר עבה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח דגימות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לזהות תאי GFP חיוביים. שים לב שהנוגדן אנטי-GFP ניתן להשתמש כדי להגדיל את פליטת הקרינה ולבצע costainings. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Barraud, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+origin+of+olfactory+ensheathing+glia.">Neural crest origin of olfactory ensheathing glia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21040-21045 (2010).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+gene+expression+profiling+of+olfactory+ensheathing+cells+from+olfactory+bulb+and+olfactory+mucosa.">Comparative gene expression profiling of olfactory ensheathing cells from olfactory bulb and olfactory mucosa.</a> Glia. 58, 1570-1580 (1002).</li><li>Honore, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+characterization,+and+genetic+profiling+of+subpopulations+of+olfactory+ensheathing+cells+from+the+olfactory+bulb.">Isolation, characterization, and genetic profiling of subpopulations of olfactory ensheathing cells from the olfactory bulb.</a> Glia. 60, 404-413 (2012).</li><li>Franssen, E. H., de Bree, F. M., Verhaagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+glia:+their+contribution+to+primary+olfactory+nervous+system+regeneration+and+their+regenerative+potential+following+transplantation+into+the+injured+spinal+cord.">Olfactory ensheathing glia: their contribution to primary olfactory nervous system regeneration and their regenerative potential following transplantation into the injured spinal cord.</a> Brain Res. Rev. 56, 236-258 (2007).</li><li>Lakatos, A., Franklin, R. J., Barnett, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+cells+and+Schwann+cells+differ+in+their+in+vitro+interactions+with+astrocytes.">Olfactory ensheathing cells and Schwann cells differ in their in vitro interactions with astrocytes.</a> Glia. 32, 214-225 (2000).</li><li>Woodhall, E., West, A. K., Chuah, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultured+olfactory+ensheathing+cells+express+nerve+growth+factor,+brain-derived+neurotrophic+factor,+glia+cell+line-derived+neurotrophic+factor+and+their+receptors.">Cultured olfactory ensheathing cells express nerve growth factor, brain-derived neurotrophic factor, glia cell line-derived neurotrophic factor and their receptors.</a> Brain Res. Mol. Brain Res. 88, 203-213 (2001).</li><li>Dombrowski, M. A., Sasaki, M., Lankford, K. L., Kocsis, J. D., Radtke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelination+and+nodal+formation+of+regenerated+peripheral+nerve+fibers+following+transplantation+of+acutely+prepared+olfactory+ensheathing+cells.">Myelination and nodal formation of regenerated peripheral nerve fibers following transplantation of acutely prepared olfactory ensheathing cells.</a> Brain Res. 1125, 1-8 (2006).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+promotes+axonal+regeneration+and+functional+recovery+of+peripheral+nerve+lesion+in+rats.">Transplantation of olfactory ensheathing cells promotes axonal regeneration and functional recovery of peripheral nerve lesion in rats.</a> Muscle Nerve. 43, 543-551 (2011).</li><li>Guntinas-Lichius, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+stimulates+the+collateral+sprouting+from+axotomized+adult+rat+facial+motoneurons.">Transplantation of olfactory ensheathing cells stimulates the collateral sprouting from axotomized adult rat facial motoneurons.</a> Exp. Neurol. 172, 70-80 (2001).</li><li>Makoukji, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lithium+enhances+remyelination+of+peripheral+nerves.">Lithium enhances remyelination of peripheral nerves.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 109, 3973-3978 (2012).</li><li>Guerout, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-transplantation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+mucosa+and+bulb+origin+enhances+functional+recovery+after+peripheral+nerve+lesion.">Co-transplantation of olfactory ensheathing cells from mucosa and bulb origin enhances functional recovery after peripheral nerve lesion.</a> PloS one. 6, 22816 (2011).</li><li>Paviot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiency+of+laryngeal+motor+nerve+repair+is+greater+with+bulbar+than+with+mucosal+olfactory+ensheathing+cells.">Efficiency of laryngeal motor nerve repair is greater with bulbar than with mucosal olfactory ensheathing cells.</a> Neurobiol. Dis. 41, 688-694 (2011).</li><li>Girard, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+nasal+olfactory+stem+cells+from+rodents+or+humans.">Isolating nasal olfactory stem cells from rodents or humans.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li><li>Nash, H. H., Borke, R. C., Anders, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+method+of+purification+for+establishing+primary+cultures+of+ensheathing+cells+from+the+adult+olfactory+bulb.">New method of purification for establishing primary cultures of ensheathing cells from the adult olfactory bulb.</a> Glia. 34, 81-87 (2001).</li><li>Bianco, J. I., Perry, C., Harkin, D. G., Mackay-Sim, A., Feron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophin+3+promotes+purification+and+proliferation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+human+nose.">Neurotrophin 3 promotes purification and proliferation of olfactory ensheathing cells from human nose.</a> Glia. 45, 111-123 (2004).</li><li>Paviot, A., Bon-Mardion, N., Duclos, C., Marie, J. P., Guerout, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Although+olfactory+ensheathing+cells+have+remarkable+potential+to+sustain+nerve+regeneration,+they+cannot+be+applied+to+a+severe+vagus+nerve+section/resection+model.">Although olfactory ensheathing cells have remarkable potential to sustain nerve regeneration, they cannot be applied to a severe vagus nerve section/resection model.</a> Muscle Nerve. 43, 919-920 (2011).</li></ol>

יש המחברים אין לחשוף.

הטכניקות שהוצגו כאן להפוך OECs מודל שימושי ללמוד השתלות סלולריות במודלים של פגיעה העצבית היקפיים. פרוטוקול תרבית התאים הוא פשוט יחסית ויכול להתבצע בקלות. מצד השני, פעולות כירורגיות, בסעיף / השקה מסוימת של RLN, דורשות ניסיון וחייבת להתבצע על ידי טכנאי מוסמך. <p class="jove_conten...

מערכת ההרחה העיקרית מורכבת משני חלקים נפרדים: רירית ההרחה (OM) במערכת עצבים היקפית ונורת חוש הריח (OB) במערכת העצבים המרכזית. מערכת ההרחה העיקרית מאופיינת בקיבולת של נוירונים העיקרי חוש הריח (PON) עצמי לחדש לאורך כל חיים במינים יונקים. יכולת זו מתאפשרת בשל נוכחותם של תאי גזע עצביים בOM. צמיחת PON וצמיחה המחודשת מOM לOB היא הקלו על ידי תאים מיוחדים הנקראים תאי גליה ensheathing חוש ריח (OECs). OECs הם תאי רכס עצביים שיוצרים microenvironment נוח לנוירוגנזה של PON מOM לOB 1. ובכך, ניתן למצוא בOECs OM ובOB מהווים אוכלוסיות שונות של תאי 2,3. יש מאפיינים השונים של OECs מדענים הראשיים להשתמש בם להשתלות סלולריות בכמה פרדיגמות נגע מערכת עצבים 4. ואכן, גורמי גדילת תוצרת OECs, להפחית מפחידים גליה, יחסי ציבורצמיחה מחודשת אקסון אומוטה, והוא יכול באופן חופשי להתערבב עם 5,6 האסטרוציטים. עם זאת, רובם המכריע של מחקרים אלה מבוססים על פגיעה בחוט השדרה (SCI); כמה מהם השתמשו OECs לאחר פגיעה היקפית עצב (PNI) 7,8. למרות שמערכת העצבים ההיקפית יש לו יכולת מצוינת להתחדש לאחר פגיעה עצבית, חלקים שלמים לגרום לצמיחה מחודשת אקסון סוטה. ואכן, לאחר transections של פנים או עצבים בגרון החוזרים ונשנים (RLN) מלא אקסונים misrouted לגרום cocontractions שרירים הנקרא synkinesis. לכן זה הוא בעל חשיבות העיקרית להציע מודל של PNI לכמת לא רק לצמיחה מחודשת באקסון, אלא גם כדי להעריך את היעילות של התכווצויות שרירים. בספרות המודל הנפוץ ביותר המתואר מבוסס על 9,10 נגע עצב פנים. במודל זה, הערכות תפקודיות מבוססות על ההתאוששות של תנועות זיף 10. עם זאת, הוא מסובך כדי להדגים את היעילות של movements ולהיפלות תופעות cocontractions שרירים. אנו מציעים כאן מודל המבוסס על נגע RLN. מודל זה מאפשר ההערכה של לא רק לצמיחה מחודשת באקסון ותנועות של מיתרי קול, אלא גם את היעילות ואת הפונקציונליות של תנועות אלה לאחר השתלות סלולריות 11,12. פרוטוקול זה מספק צעד אחר צעד הליך לתרבות וההשתלה OECs במודל סעיף RLN / השקה מOM וOB ולהעריך בעלי חיים לאחר ניתוח.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="591">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">DMEM/F12</td>
			<td style="width:155px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:197px;">E3521T</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FBS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>E3387M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicilin/streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1152-8876</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3467Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M3513P</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cacodylate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.03256.0100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DDSA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00563-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MNA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00886-450</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BDMA</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>00141-100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">POLYBED 812</td>
			<td>BIOVALLEY</td>
			<td>08791-500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PE anti-mouse&#160;</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>550589</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel GFR</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>356231</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase A</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10103586001</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse anti P75</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB 365</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">11.0 Wire</td>
			<td>Ethicon&#160;</td>
			<td>FG 2881</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Toluidine Blue&#160;</td>
			<td>RAL DIAGNOSTICS</td>
			<td>361590-0025</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>Sigma 2-16PK</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator&#160;</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminar flow hood</td>
			<td>Faster</td>
			<td style="width:197px;">BH-EN 2003 S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flow cytometer</td>
			<td>BD Bioscience&#160;</td>
			<td>FACSCalibur</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Videolaryngoscope</td>
			<td>Karl Storz Endoskope</td>
			<td>Telecam SL NLSC 20212120</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition system</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>Powerlab system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyramitome Ultramicrotomy System&#160;</td>
			<td style="width:155px;">Leica</td>
			<td>Ultracut S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Image analysis system</td>
			<td>Explora Nova</td>
			<td>Mercator</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transplantation of olfactory ensheathing cells to evaluate functional recovery after peripheral nerve injury

<html> תאי ensheathing חוש ריח (OECs) הם תאי רכס עצביים המאפשרים צמיחה וצמיחה מחודשת של תאי עצב ההרחה הראשוניים. ואכן, מערכת ההרחה העיקרית מאופיינת ביכולתה להצמיח נוירונים חדשים גם בבעלי חיים מבוגרים. יכולת מסוימת זה נובעת בחלקו את נוכחותו של OECs אשר ליצור microenvironment נוח לנוירוגנזה. מאפיין זה של OECs נוצל בעבר להשתלה סלולרית כגון במודלים של פגיעה בחוט השדרה. למרות שמערכת העצבים ההיקפית יש קיבולת גדולה יותר להתחדש לאחר פגיעה בעצב מאשר במערכת העצבים המרכזית, חלקים שלמים לגרום misrouting במהלך צמיחה מחודשת אקסון בפרט לאחר פנים של חיתוך רוחב עצב בגרון. באופן ספציפי, חתך מלא של העצב חוזר ונשנה בגרון (RLN) גורם לצמיחה מחודשת אקסון חריג וכתוצאה מכך synkinesis של מיתרי קול. בדגם הספציפי הזה, הראינו כי השתלת OECs יעילות מגבירה צמיחה מחודשת עצב. ve_content &quot;&gt; OECs הם היוו של כמה אוכלוסיות בהווה בשתי רירית ההרחה (OM-OECs) ונורות חוש הריח (OB-OECs). אנו מציגים כאן מודל של השתלה סלולרית המבוסס על השימוש באוכלוסיות שונות אלה של OECs ב מודל פציעת RLN. שימוש בפרדיגמה זו, תרבויות עיקריות של OB-OECs וOM-OECs הושתלו בMatrigel אחרי סעיף והשקה של RLN. חודשיים לאחר הניתוח, הערכנו בעלי חיים מושתלים בניתוחים משלימים הבוסס על videolaryngoscopy, (EMG) , ומחקרים היסטולוגית. ראשית, videolaryngoscopy אפשר לנו להעריך פונקציות בגרון, במיוחד תופעות cocontractions שרירים. לאחר מכן, EMG מנתח עושר וסנכרון של פעילות שרירית הפגין. לבסוף, מחקרים היסטולוגית מבוססים על כתמי כחולי toluidine אפשרו כימות של המספר והפרופיל של סיבי myelinated. בסך הכל, אנו מתארים כאן כיצד לבודד, התרבות, identify והשתלת OECs מOM וOB לאחר חתך השקה וכיצד להעריך ולנתח את היעילות של תאים מושתלים אלה על פונקציות לצמיחה מחודשת וגרון אקסון RLN.

איורים עם שליטה וreinnervated (סעיף / anastomosed) בעלי חיים שנבחרו כתוצאות יכולות להשתנות בהתאם להשתלות הסלולריות שבוצעו (OM, OB או OM + OB). תרבית תאים התאים לדבוק במהירות למשטח הפלסטיק והפכו הפרדה לנתחים מקבילים של תאים הנמצאים מוארכים ?...

Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury at JoVE.com

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

תאי ensheathing חוש ריח (OECs) הם תאי רכס עצביים המאפשרים צמיחה של תאי עצב ההרחה הראשוניים. נכס ספציפי זה יכול לשמש להשתלת תאים. אנו מציגים כאן מודל של השתלה סלולרית המבוסס על השימוש בOECs במודל פציעת עצב בגרון.

השתלה של תאי ensheathing חוש ריח להערכת החלמה תפקודית לאחר פגיעה עצבית היקפית

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

transplantation-olfactory-ensheathing-cells-to-evaluate-functional

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.7K Views.  University of Rouen.  תאי ensheathing חוש ריח (OECs) הם תאי רכס עצביים המאפשרים צמיחה של תאי עצב ההרחה הראשוניים. נכס ספציפי זה יכול לשמש להשתלת תאים. אנו מציגים כאן מודל של השתלה סלולרית המבוסס על השימוש בOECs במודל פציעת עצב בגרון. 

Video: Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the study of nerve regeneration and myelination. The glial cells of the peripheral nervous system, Schwann cells (SC), are key facilitators of these processes; it is therefore crucial that the interactions of these cellular components are studied together. Direct contact between DRG neurons and glial cells provides additional stimuli sensed by specific membrane receptors, further improving the neuronal response. SC release growth factors and proteins in the culture medium, which enhance neuron survival and stimulate neurite sprouting and extension. However, SC require long proliferation time to be used for tissue engineering applications and the sacrifice of an healthy nerve for their sourcing. Adipose-derived stem cells (ASC) differentiated into SC phenotype are a valid alternative to SC for the set-up of a co-culture model with DRG neurons to study nerve regeneration. The present work presents a detailed and reproducible step-by-step protocol to harvest both DRG neurons and ASC from adult rats; to differentiate ASC towards a SC phenotype; and combines the two cell types in a direct co-culture system to investigate the interplay between neurons and SC in the peripheral nervous system. This tool has great potential in the optimization of tissue-engineered constructs for peripheral nerve repair.

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) are structures containing the sensory neurons of the peripheral nervous system. When dissociated, they can be co-cultured with SC-like adipose-derived stem cells (ASC), providing a valuable model to study in vitro nerve regeneration and myelination, mimicking the in vivo environment at the injury site.

גב שורש הגרעינים עצב ותאי גזע שמקורם בשומן Differentiated:<em&gt; במבחנה</em&gt; משותף תרבות דגם לחקר התחדשות של עצבים היקפיים

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the ...

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as accessibility to numerous imaging approaches, electrophysiological techniques and behavioral assays. The Xenopus tadpole olfactory system is particularly well suited to investigate the function of synapses established during normal development or reformed after injury. Here, we describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae. We outline a combination of in vivo measurements of presynaptic calcium responses in glomeruli of the olfactory bulb with olfactory-guided behavior assays. Methods can be combined with the transection of olfactory nerves to study the rewiring of synaptic connectivity. Experiments are presented using both wild-type and genetically modified animals expressing GFP reporters in central nervous system cells. Application of the approaches described to genetically modified tadpoles can be useful for unraveling the molecular bases that define vertebrate behavior.

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system in vivo. We describe methodologies to evaluate the processing of olfactory information in living Xenopus larvae in normal rearing conditions or after injury.

הערכה תפקודית של חוש הריח מסלולים ב ראשנים של צפרדע רפואית חי

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as ...

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) model in male Sprague-Dawley rats was chosen. By changing the rat&#39;s weight (260&#8722;330 g), the thread bolt type (2636/2838/3040/3043) and the brain infarct time (2-3 h), a higher Longa&#39;s score, a larger infarct volume and a greater model success ratio were screened using the Longa&#39;s score and TTC staining. The optimum model condition (300 g, 3040 thread bolt, 3 h brain infarct time) was acquired and used in a 1-90 day observation period after reperfusion via assessment of sensorimotor functions and infarct volume. At these conditions, the bilateral asymmetry test had a significant difference from 1 to 90 days, and the grid-walking test had a significant difference from 1 to 60 days; both differences could be a suitable sensorimotor functional test. Thus, the most appropriate condition of a novel rat model in the recovery and sequela stages of brain ischemia was found: 300 g rats that underwent MCAO with a 3040 thread bolt for a 3 h brain infarct and then reperfused. The appropriate sensorimotor functional tests were a bilateral asymmetry test and a grid-walking test.

The&#160;purpose of this study is to establish and validate an animal model for research in the recovery and sequela stages of brain ischemia by testing brain infarction and sensorimotor function after middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) after 1-90 days in rats.

מודל טרום קליני להעריך את ההתאוששות המוח לאחר שבץ חריף בחולדות

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of sciatic nerve injury rodent models. In this protocol, we describe a novel kinematic analysis method that uses a three-dimensional (3D) motion capture apparatus for functional evaluations using a rat sciatic nerve crush injury model. First, the rat is familiarized with treadmill walking. Markers are then attached to the designated bone landmarks and the rat is made to walk on the treadmill at the desired speed. Meanwhile, the posterior limb movements of the rat are recorded using four cameras. Depending on the software used, marker tracings are created using both automatic and manual modes and the desired data are produced after subtle adjustments. This method of kinematic analysis, which uses a 3D motion capture apparatus, offers numerous advantages, including superior precision and accuracy. Many more parameters can be investigated during the comprehensive functional evaluations. This method has several shortcomings that require consideration: The system is expensive, can be complicated to operate, and may produce data deviations due to skin shifting. Nevertheless, kinematic analysis using a 3D motion capture apparatus is useful for performing functional anterior and posterior limb evaluations. In the future, this method may become increasingly useful for generating accurate assessments of various traumas and diseases.

We introduce a kinematic analysis method that uses a three-dimensional motion capture apparatus containing four cameras and data processing software for performing functional evaluations during fundamental research involving rodent models.

3D ניתוח קימטי עבור הערכה פונקציונלית במודל חולדה של פציעה העצבים הגיד מעיכה

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and motor phenotypes involved in different patterns of neurotrophic factor gene expression and other biological processes, affecting nerve regeneration. The present study has established a protocol to obtain highly purified rat sensory and motor SCs and fibroblasts more rapidly. The ventral root (motor nerve) and the dorsal root (sensory nerve) of neonatal rats (7-days-old) were dissociated and the cells were cultured for 4-5 days, followed by isolation of sensory and motor fibroblasts and SCs by combining differential digestion and differential adherence methods sequentially. The results of immunocytochemistry and flow cytometry analyses showed that the purity of the sensory and motor SCs and fibroblasts were &#62;90%. This protocol can be used to obtain a large number of sensory and motor fibroblasts/SCs more rapidly, contributing to the exploration of sensory and motor nerve regeneration.

Here, we present a method to purify fibroblasts and Schwann cells from sensory and motor nerves in vitro.

טיהור של פיברותקיעות ותאי Schwann מפני חושים ומוטוריים עצבים בחוץ גופית

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to intracranial delivery, intra-arterial administration of NSCs is less invasive and produces a more diffuse distribution of NSCs within the brain parenchyma. Further, intra-arterial delivery allows the first-pass effect in the brain circulation, lessening the potential for trapping of cells in peripheral organs, such as liver and spleen, a complication associated with peripheral injections. Here, we detail the methodology, in both mice and rats, for delivery of NSCs through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) to the ipsilateral hemisphere after an ischemic stroke. Using GFP-labeled NSCs, we illustrate the widespread distribution achieved throughout the rodent ipsilateral hemisphere at 1 d, 1 week and 4 weeks after postischemic delivery, with a higher density in or near the ischemic injury site. In addition to long-term survival, we show evidence of differentiation of GFP-labeled cells at 4 weeks. The intra-arterial delivery approach described here for NSCs can also be used for administration of therapeutic compounds, and thus has broad applicability to varied CNS injury and disease models across multiple species.

A method for delivering neural stem cells, adaptable for injecting solutions or suspensions, through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) after ischemic stroke is reported. Injected cells are distributed broadly throughout the brain parenchyma and can be detected up to 30 d after delivery.

משלוח פנים-עורקי של תאי גזע עצביים למוח עכברוש ועכבר: יישום איסכמיה מוחין

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Automated Gait Analysis to Assess Functional Recovery in Rodents with Peripheral Nerve or Spinal Cord Contusion Injury

Peripheral and central nerve injuries are mostly studied in rodents, especially rats, given the fact that these animal models are both cost-effective and a lot of comparative data has been published in the literature. This includes a multitude of assessment methods to study functional recovery following nerve injury and repair. Besides evaluation of nerve regeneration by means of histology, electrophysiology, and other in vivo and in vitro assessment techniques, functional recovery is the most important criterion to determine the degree of neural regeneration. Automated gait analysis allows recording of a vast quantity of gait-related parameters such as Paw Print Area and Paw Swing Speed as well as measures of inter-limb coordination. Additionally, the method provides digital data of the rats&#8217; paws after neuronal damage and during nerve regeneration, adding to our understanding of how peripheral and central nervous injuries affect their locomotor behavior. Besides the predominantly used sciatic nerve injury model, other models of peripheral nerve injury such as the femoral nerve can be studied by means of this method. In addition to injuries of the peripheral nervous systems, lesions of the central nervous system, e.g., spinal cord contusion can be evaluated. Valid and reproducible data assessment is strongly dependent on meticulous adjustment of the hard- and software settings prior to data acquisition. Additionally, proper training of the experimental animals is of crucial importance. This work aims to illustrate the use of computerized automated gait analysis to assess functional recovery in different animal models of peripheral nerve injury as well as spinal cord contusion injury. It also emphasizes the method&#8217;s limitations, e.g., evaluation of nerve regeneration in rats with sciatic nerve neurotmesis due to limited functional recovery. Therefore, this protocol is thought to help researchers interested in peripheral and central nervous injuries to assess functional recovery in rodent models.

Automated gait analysis is a feasible tool to evaluate functional recovery in rodent models of peripheral nerve injury and spinal cord contusion injury. While it requires only one setup to assess locomotor function in various experimental models, meticulous hard- and soft-ware adjustment and training of the animals is highly important.

ניתוח הליכה אוטומטי כדי להעריך התאוששות תפקודית מכרסמים עם פגיעה בעצב היקפי או חבלה בחוט השדרה

Peripheral and central nerve injuries are mostly studied in rodents, especially rats, given the fact that these animal models are both cost-effective and ...

Coculture of Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons with Olfactory Ensheathing Glia, as an In Vitro Model of Adult Axonal Regeneration

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory bulb. Throughout adult life, they are key for axonal growing of newly generated olfactory neurons, from the lamina propria to the ONL. Due to their pro-regenerative properties, these cells have been used to foster axonal regeneration in spinal cord or optic nerve injury models.
We present an in vitro model to assay and measure OEG neuroregenerative capacity after neural injury. In this model, reversibly immortalized human OEG (ihOEG) is cultured as a monolayer, retinas are extracted from adult rats and retinal ganglion neurons (RGN) are cocultured onto the OEG monolayer. After 96 h, axonal and somatodendritic markers in RGNs are analyzed by immunofluorescence and the number of RGNs with axon and the mean axonal length/neuron are quantified.
This protocol has the advantage over other in vitro assays that rely on embryonic or postnatal neurons, that it evaluates OEG neuroregenerative properties in adult tissue. Also, it is not only useful for assessing the neuroregenerative potential of ihOEG but can be extended to different sources of OEG or other glial cells.

We present an in vitro model to assess olfactory ensheathing glia (OEG) neuroregenerative capacity, after neural injury. It is based on a coculture of axotomized adult retinal ganglion neurons (RGN) on OEG monolayers and subsequent study of axonal regeneration, by analyzing RGN axonal and somatodendritic markers.

Coculture של נוירונים רשתית עכברוש אקסוטומי עם חוש הריח Ensheathing גליה, כמודל במבחנה של התחדשות אקסון למבוגרים

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory ...

Motor Dual-Tasks for Gait Analysis and Evaluation in Post-Stroke Patients

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask gait analysis consisted of a single walking task (Task 0), a simple motor dual-task (water-holding, Task 1), and a complex motor dual-task (crossing obstacles, Task 2). The task of crossing obstacles was considered to be equivalent to the combination of a simple walking task and a complex motor task as it involved more nervous system, skeletal movement, and cognitive resources. To eliminate heterogeneity in the results of the gait analysis of the stroke patients, the dual-task gait cost values were calculated for various kinematic parameters. The major differences were observed in the proximal joint angles, especially in the angles of the trunk, pelvis, and hip joints, which were significantly larger in the dual motor tasks than in the single walking task. This research protocol aims to provide a basis for the clinical diagnosis of gait function and an in-depth study of motor control in stroke patients with motor control deficits through the analyses of dual-motor walking tasks.

This paper presents a protocol specifically for dual motor task gait analysis in stroke patients with motor control deficits.

מטלות כפולות מוטוריות לניתוח והערכה של הליכה בחולים לאחר שבץ מוחי

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask ...

Multifactorial Assessment of Motor Behavior in Rats after Unilateral Sciatic Nerve Crush Injury

The induction of a peripheral nerve injury is a widely used method in neuroscience for the assessment of repair and pain mechanisms among others. In addition, in the research field of movement disorders, sciatic crush injury has been employed to trigger a dystonia-like phenotype in genetically predisposed DYT-TOR1A rodent models of dystonia. To achieve consistent, reproducible and comparable results after a sciatic nerve crush injury, a standardized method for inducing the nerve crush is essential, in addition to a standardized phenotypical characterization. Attention must be paid not only to the specific assortment of behavioral tests, but also to the technical requirements, the correct execution and consecutive data analysis. This protocol describes in detail how to perform a sciatic nerve crush injury and provides a behavioral test battery for the assessment of motor deficits in rats that includes the open field test, the CatWalk XT gait analysis, the beam walking task, and the ladder rung walking task.

We provide a protocol for the assessment of motor behavior via a behavioral test battery in rats after sciatic nerve crush injury.

הערכה רב-גורמית של התנהגות מוטורית בחולדות לאחר פציעת ריסוק עצבית סיאטית חד-צדדית

The induction of a peripheral nerve injury is a widely used method in neuroscience for the assessment of repair and pain mechanisms among others. In ...