עבודה זו נתמכה על ידי מענק NIH (HL 098,256), הפרס לאומי והנחייתם מחקר מדע פיתוח (K01 AR052840) ועצמאי פרס מדען (K02 HL105799) מ-NIH על ידי העניק לJP Konhilas וגרנט הבינתחומי ההדרכה במדעי לב וכלי דם (HL007249 ). תמיכה התקבלה ממרכז לב הסרבר באוניברסיטת אריזונה ומסטיוון Gootter הקרן.

כל הניסויים, הדיור, והטיפול בבעלי החיים בוצעו באמצעות פרוטוקולים שדבקו בהנחיות ובאושרו על ידי הוועדה המוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטת אריזונה, ועד 2011 הנחיות NIH לטיפול ושימוש בבעלי החיים במעבדה. 1. טיפול עם 4-Vinylcyclohexene Diepoxide <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרוטוקול VCD מינון: במנדף הכימי, להוסיף .587 מיליליטר של VCD לבקבוק נקי, להביא את הנפח הסופי ל10 מיליליטר עם שמן שומשום, ולאחר מכן מערבב על ידי היפוך בעדינות, מכסים ולאטום עם Parafilm. מעביר את הפתרון לבקבוקון מינון, לאטום אותו עם Parafilm, ולאחסן ב 4 מעלות צלזיוס למשך עד 7 ימים. ודא שכל חומרים כימיים הם סטרילי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשמן שומשום כשליטה ברכב כVCD הוא מומס בשמן שומשום. VCD חנות (MW = 140.2 g / mol, צפיפות = 1.09 גר &#39;/ מיליליטר) ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרוטוקול הזרקת VCD: ב2 חודשים של גיל, משקל ולנהל זריקות intraperitoneal יומיות של מזג חדרVCD שבמקום במינון של 160 מ&quot;ג / קילוגרם ל20 ימים רצופים. הזרק עכברי שליטה באופן דומה עם פתרון הרכב, שמן שומשום, בהיקף של 2.5 מיליליטר / קילוגרם. שים לב: במהלך תקופת ההזרקה, נסה להחליף את האתרים של הזרקה כדי להפחית את הסיכויים לזיהום מקומי. השתמש במשוואה הבאה כדי לחשב את הנפח הדרוש להזרקה: משקל גוף (g) x קילוגרם / 1,000 GX 2.5 מיליליטר / קילוגרם = נפח (מיליליטר) של פתרון להזריק וכתוצאה מכך כ 50 מיליליטר / הזרקה באמצעות מחט G 27. בשל גודלו של מחט הרדמה מקומית ולא נחוצות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניטור מחזור ייחום: לאחר תקופת ההזרקה היא מוחלטת, לפקח על מחזורי הייחום מדי יום על ידי קבלת מריחות נרתיק. לרסן את העכברים בשיטת עורף dorsum. הכנס הטפטפת עם 0.2 מיליליטר של תמיסת מלח סטרילית לתוך פתח הנרתיק עד לעומק של 0.5 סנטימטר. Triturate מלוח (3x) ומקום 1 טיפה לשקופית ריקה. מייד להעריך דגימות מיקרוסקופיות באמצעות microsc אור סטנדרטיאופ בגודל 100X. הערה:. הציטולוגיה נרתיק היא נחושה בדעתה להבטיח אובדן של רכיבה על אופניים, ולכן לאמת את הכשל שחלה איור 2A ממחיש ציטולוגיה טיפוסית בנרתיק על פני שלבים שונים של מחזור הייחום בעכברים, כלומר proestrus, ייחום, metestrus, diestrus 17-19. במהלך proestrus, תאים כוללים תאי אפיתל בעלי גרעין (איור 2 א, חיצים מצביעים על תאי בעלי גרעין); במהלך ייחום, תאים בעיקר cornified תאי אפיתל קשקש; Metestrus מאופיין בתמהיל של סוגי תאים, עם דומיננטיות של לויקוציטים; Diestrus נשלט על ידי כדוריות דם לבנות. התאמה של מטוס המוקד עשויה להידרש לדמיין תאים וגרעינים ברחבי המדגם. כפי שמודגמים באיור 2, מחזור ייחום עכברי טיפוסי הוא 4-5 ימים. עכברים נחשבים אציקליות לאחר 15 ימים רצופים בdiestrus המתמשך. ברציפות לפקח מחזורי ייחום לאורך כל תקופת הלימוד בiod כדי לאשר עדר של מחזורי ייחום בעכברים שטופל VCD. </li></ol></li></ol> 2. תרגיל קייג&#39; גלגל מרצון C57BL / 6 וB6C3F1 עכברים טהורים נשיים, 7 חודשים בגיל, נחשפים לריצת גלגל כלוב מרצון. חיות בית בנפרד בכלוב (47 סנטימטר x 26 סנטימטר x 14.5 סנטימטר) עם גישה חופשית לגלגל בכלוב ל28 ימים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקנת ציוד: מנגנון גלגל כלוב מורכב מגלגל בקוטר 11.5 סנטימטר עם 5.0 סנטימטר רחב ריצת השטח מצויד בדלפק מגנטי דיגיטלי המופעל על ידי סיבוב גלגל. לפני כל מבחן ריצה גלגל, לכייל את הגלגל בכלוב על פי ההנחיות של היצרן. מדוד את הקוטר הפנימי של גלגל הריצה, לחשב את ההיקף והזן את הערך הזה לדלפק הדיגיטלי כגודל גלגל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את חלק המחשב של הדלפק המגנטי הדיגיטלי לדוכן הגלגל באמצעות קלטת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את יציאת המחשביון של הדלפק המגנטי הדיגיטלי לדוכן הגלגל באמצעות קלטת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את המגנט החופשי של הדלפק המגנטי הדיגיטלי לבר המרכזי באותו הצד כמו המגנט הבריק למחשב, שוב מקליט מספיק כדי להגן על המגנט מלעיסת נזק. צריכים להיות ממוקמים המגנטים, כך שכל סיבוב של ההגה שתועד על ידי המחשב ללא כל הפרעה או התנגדות כדי להשלים סיבוב הגה. הערה: סרט דביק כבר השתמש בהצלחה כדי לצרף את הרכיבים של הדלפק המגנטי הדיגיטלי לגלגל הריצה. מקליטה צריכה להיות מספיק כדי לכסות לחלוטין את המגנט ולמנוע נזק מהלעיסה על ידי בעלי החיים. המגנט צריך להיות ממוקם קרוב ככל האפשר לגלגל בלי להפריע את תנועתו. עם זאת, ההגדרה צריכה להיות במעקב היומיומי ללעיסת נזק ולתקן במידת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר את הגלגל לכלוב על ידי הזזה של הגלגל לעמוד דרך החיווט העליון של כלוב בעלי החיים. אבטח את עמדת הגלגל כדי לאהוא כלוב חיווט עם קליפים קלסר. הערה: הסרטון צריך להיות בחלק העליון של החיווט, הרחק מבעלי החיים. להאכיל את חלק מחשב וכל כבל נוסף באמצעות החיווט של הכלוב. מקם את המחשב והכבל עודף מהישג ידם של בעלי החיים. ניתן לעשות זאת על ידי הצבת פלסטיק בגודל בינוני שוקל צלחת על גבי החיווט של הכלוב כדי להחזיק את המחשב וכבל עודף. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פעילות גופנית: להמלטה נתון, באופן אקראי להקצות לעכברים או השליטה בישיבה או משטר התעמלות. תן את כל חיות מים וכרצונך מודעת צ&#39;או מכרסמים קשיחים רגיל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן ידני להקליט ערכים יומיים לרץ למרחקים (קילומטר / יום) וסה&quot;כ זמן ריצה (שעה / יום), שניתן על ידי הדלפק המגנטי. ערכי שיא מרחק וזמן בתוך אותה מסגרת זמן 1 שעות בכל יום לערכים מדויקים ועקביים לכל האורך 28 היום של תקופת המימוש. ברור (אפס) הדלפק המגנטי לאחר ההקלטה של ​​כל יום כדי להבטיח קריאה מדויקת המעקבing יום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את הערכים הממוצע של מרחק ומהירות עבור כל קבוצה. לחשב את המהירות המבוססת על ערכים המסוימים של מרחק וזמן בכל יום לכל עכבר. ניתן להציג נתונים כמו יומי או שבועי ממוצע עבור כל פרמטר נמדד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קציר רקמות: בתום תקופת המימוש הספציפי, להרדים ימומש ובעלי חיים שליטה בישיבה בתוך 30 דקות של ההסרה מכלובים על ידי נקע בצוואר הרחם בהרדמה בשאיפה. שוקל מסת גוף ואת לבם במהירות בלו, שרירי שלד, והשחלות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעת קצירת רקמות, הר ולהכתים את השחלות שנאספו עם hemotoxylin ו eosin (H &amp;E; איור 2C). תחת הגדלה, לספור ולסווג את הזקיקים כ,,, או antral המשניים העיקריים בראשיתי עבור כל חיה ולשלוט טופלו VCD 20. זקיק קדמוני מכיל ביצית קטנה ראשונית, שכבה אחת של תאי granulosa שטוחים או קשקש התנגדו באופן הדוק לביצית, והבזלייםlamina. זקיק ראשוני מוגדר על ידי הנוכחות של תאי granulosa cuboidal אחד או יותר שמסודרות בשכבה אחת המקיפה את הביצית. זקיק משניים מכיל תאי granulosa שיוצרים שכבות מרובות סביב הביצית, וtheca. זקיק antral מאופיין בחלל או &quot;antrum&quot; המכיל נוזל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שתחתוך את הלב, לעשות חתך המדיאלי בצד הגחון ולדמיין את הלב לאחר שפתח את הסרעפת. מהירות בלו הלב בבסיס והמקום בופר פוספט הקר מספיק לשטוף החוצה דם חדרית שיורית. חתוך את הלב של רקמה עודפת, לשקול את כל הלב וSnap-הקפאה בחנקן נוזלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את כל הרקמות נכרתה אחרות עם פתרון הותאם קר כקרח פוספט שנאגרו מלוח (PBS), ולהצמיד הקפאה בisopentane מקוררת בחנקן נוזלי. </li></ol></li></ol> 3. תרגיל הליכון כפייה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר מעסיק לא הפרדיגמה תרגיל נאלץo למדוד את היכולת הגופנית, להשתמש הליכון ולהגדיר באופן הבא: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים רשת התחשמלות בבסיס רמפת הליכון. ההלם הזה שנוצר משמש כגירוי לפעילות גופנית. עוצמת ותדירות הגירויים החשמליים נשלטות באופן ידני על ידי המשתמשים. ניתן להפעיל או להשבית רשתות בנפרד עבור כל מסלול. כל איסוף הנתונים נעשה באופן ידני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעת לעת, כייל את ההליכון על פי ההנחיות של היצרן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהמתג בלוח הקדמי הליכון בקר מוגדר &quot;עצור&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיישן מהירות במקום lane1 חגורת הליכון ומאובטח להדק עם אגוז בורג בעמדה שמוצגת להלן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בחיוג בלוח הקדמי הליכון Controller, להתאים את המהירות ל88.7 מ &#39;/ דקה לאחר מכן, קבע את תדירות הגירוי החשמלית ל2 הרץ בלוח קדמי הליכון Controller. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על כפתור &quot;RESET מד המרחק&quot; לאתחל הליך כיול. <strong&gt; הערה: קבוצות שליטה בישיבה או nonexercise חייבת להיכלל בתכנון הניסוי. הקבוצה פעילה היא הגיל מתאים לקבוצת ההתעמלות. הראינו בעבר דיור שהעכברים בישיבה בנפרד בכלובים בגודל שווה לעכברים למימוש לא השפיעו על הפרמטרים של עניין בהשוואה לעכברים בישיבה שוכנו עם אחים ואחיות. לכן, עכברי ישיבה הוחזקו עם אחים באותו החדר כמו העכברים מומשו. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסתגלות: להסתגל עכברים להליכון 3-7 ימים לפני הניסוי יומי. לשם כך, עכברי מקום בהליכון עם הרשתות ללא ניע והלם החגורה כבוי, אבל עם מנוע החגורה ב( רעש). השאר עכברים ללא הפרעה במשך לפחות 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתחמם: חימום צעדים כמו שימוש בפרוטוקול זה הם כדלקמן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כל עכבר על ההליכון. השבת את רשת ההלם ולהגדיל את מהירות החגורה עד 4 מ &#39;/ דקה ל15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר רשת ההלם ולשמור על מהירות חגורה ב4 מ &#39;/ דקת מהירות חגורה עבור נוספת 10 דקות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משטרי אימוני תרגיל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעקב חם, לשמור על רשתות הלם ובלהגדיל את מהירות החגורה עד 5 מ &#39;/ דקה ל15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגדיל את מהירות חגורה ל15 מ &#39;/ דקה ל15 דקות נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר אימון, להעביר עכברים חזרה לכלובים שלהם. שים לב: במחקר זה, אימון תרגיל בוצע ביום למשך השבוע 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משטר חריף תרגיל: משטר אימונים חריפים נועד כדי לקבוע את ההשפעות קצרה וארוך טווח של מתח גופני קיצוני. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעקב חם, להגביר את מהירות החגורה מ -5 מ &#39;/ דקה ל10, 15, 20, 25, ו30 מ&#39; / דקה ב10 מרווחי דקות. הערה: לסיים תרגיל אם עכברים הם לא יוכלו להמשיך סימני ריצה או מופע של תשישות או מצוקה. במחקר שלנו, רוב בעלי החיים נעצרו ב25 מ &#39;/ דקה, ולא בבעלי חיים עברו 30 מ&#39; / דקת במה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את כל עכבר שלוש פעמים, מה שמאפשר 2-3 ימים בין כל בדיקה. חישוב ערכים ממוצע על פני כל exerמפגשי CISE לכל עכבר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משטר אימוני סיבולת: פרוטוקול אימוני סיבולת נועד להכשיר עכברים לחשיפה ממושכת לגירוי הפעילות הגופנית על הליכון. סוג זה של פרוטוקול בדיקות את היכולת לסבול את ההשפעות ארוך הטווח של מתח פעילות גופני מתון. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תתחיל עם מהירות החגורה התוותה במהלך תקופת החימום, 4 מ &#39;/ דקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהדרגה להגדיל את מהירות חגורה ידי 1m/min עד מהירות סופית של 20 מ &#39;/ דקה הוא הגיע. משך זמן כולל של פרוטוקול מחקר טיפוסי הוא 50 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי משטר אימונים, להעביר עכברים חזרה לכלובים שלהם. שים לב: הפעלת עכברים לתשישות הוא התחמק. אם בשלב כלשהו במהלך ניסוי עכבר מראה סימנים של תשישות, לבטל את רשת ההלם ולאפשר העכבר כדי לנוח ולהתאושש. </li></ol></li></ol></li></ol> 4. נתונים וניתוח סטטיסטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוצאות הנוכחיות כממוצע ± SEM ולהשתמש 2-way ANOVA (קבוצת הטיפול וexercise כגורמים עיקריים) ואחריו שלאחר בדיקת הסטודנטים, ניומן Keuls הוק או מבחן t של סטודנט כדי להשוות הבדלים בין ערכים הממוצעים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את אחוז השינוי במסת לב עם פעילות גופנית על ידי השוואת המסה של כל חיה למימוש למסת הלב הממוצעת של הקבוצה בישיבה. ההבדל במסת לב לאחר מכן הביע כשינוי אחוזים מבעלי חיים כרוך בישיבה לכל חיה, בהתאמה. ערכי p של &lt;0.05 נחשבים משמעותיים מבחינה סטטיסטית. </li></ol>

<ol>
	<li>Lindheim, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+estimates+of+insulin+sensitivity+in+pre-+and+postmenopausal+women+using+the+insulin+tolerance+test+and+the+frequently+sampled+intravenous+glucose+tolerance+test.">Comparison of estimates of insulin sensitivity in pre- and postmenopausal women using the insulin tolerance test and the frequently sampled intravenous glucose tolerance test.</a> J. Soc. Gynecol. Invest. 1, 150-154 (1994).</li><li>Dubnov-Raz, G., Pines, A., Berry, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet+and+lifestyle+in+managing+postmenopausal+obesity.">Diet and lifestyle in managing postmenopausal obesity.</a> Climacteric. 10 Suppl 2, 38-41 (2007).</li><li>Grundy, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+syndrome:+connecting+and+reconciling+cardiovascular+and+diabetes+worlds.">Metabolic syndrome: connecting and reconciling cardiovascular and diabetes worlds.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 47, 1093-1100 (2006).</li><li>Sharma, S., Firoozi, S., McKenna, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Value+of+exercise+testing+in+assessing+clinical+state+and+prognosis+in+hypertrophic+cardiomyopathy.">Value of exercise testing in assessing clinical state and prognosis in hypertrophic cardiomyopathy.</a> Cardiol. Rev. 9, 70-76 (2001).</li><li>Guyatt, G. H., Devereaux, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+heart+failure+treatment.">A review of heart failure treatment.</a> Mt. Sinai. J. Med. 71, 47-54 (2004).</li><li>Mayer, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+effects+of+ovarian+follicular+depletion+in+rats+by+4-vinylcyclohexene+diepoxide.">Long-term effects of ovarian follicular depletion in rats by 4-vinylcyclohexene diepoxide.</a> Reprod. Toxicol. 16, 775-781 (2002).</li><li>Mayer, L. P., Devine, P. J., Dyer, C. A., Hoyer, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+follicle-deplete+mouse+ovary+produces+androgen.">The follicle-deplete mouse ovary produces androgen.</a> Biol. Reprod. 71, 130-138 (2004).</li><li>Lohff, J. C., Christian, P. J., Marion, S. L., Hoyer, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+duration+of+dosing+on+onset+of+ovarian+failure+in+a+chemical-induced+mouse+model+of+perimenopause.">Effect of duration of dosing on onset of ovarian failure in a chemical-induced mouse model of perimenopause.</a> Menopause. 13, 482-488 (2006).</li><li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+skeletal+effects+of+ovariectomy+versus+chemically+induced+ovarian+failure+in+mice.">Comparison of skeletal effects of ovariectomy versus chemically induced ovarian failure in mice.</a> J. Bone Miner Res. 23, 1296-1303 (2008).</li><li>Ogawa, S., Chan, J., Gustafsson, J. A., Korach, K. S., Pfaff, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+increases+locomotor+activity+in+mice+through+estrogen+receptor+alpha:+specificity+for+the+type+of+activity.">Estrogen increases locomotor activity in mice through estrogen receptor alpha: specificity for the type of activity.</a> Endocrinology. 144, 230-239 (2003).</li><li>Roy, E. J., Wade, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+estrogens+in+androgen-induced+spontaneous+activity+in+male+rats.">Role of estrogens in androgen-induced spontaneous activity in male rats.</a> J. Comp. Physiol. Psychol. 89, 573-579 (1975).</li><li>Fahrbach, S. E., Meisel, R. L., Pfaff, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preoptic+implants+of+estradiol+increase+wheel+running+but+not+the+open+field+activity+of+female+rats.">Preoptic implants of estradiol increase wheel running but not the open field activity of female rats.</a> Physiol. Behav. 35, 985-992 (1985).</li><li>Morgan, M. A., Pfaff, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+estrogen+on+activity+and+fear-related+behaviors+in+mice.">Effects of estrogen on activity and fear-related behaviors in mice.</a> Horm. Behav. 40, 472-482 (2001).</li><li>Gorzek, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+and+tamoxifen+reverse+ovariectomy-induced+physical+inactivity+in+mice.">Estradiol and tamoxifen reverse ovariectomy-induced physical inactivity in mice.</a> Med. Sci. Sports Exerc. 39, 248-256 (2007).</li><li>Kadi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+physical+activity+and+estrogen+treatment+on+rat+fast+and+slow+skeletal+muscles+following+ovariectomy.">The effects of physical activity and estrogen treatment on rat fast and slow skeletal muscles following ovariectomy.</a> J. Muscle Res. Cell Motil. 23, 335-339 (2002).</li><li>Konhilas, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+modifies+exercise+and+cardiac+adaptation+in+mice.">Sex modifies exercise and cardiac adaptation in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 287, 2768-2776 (2004).</li><li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+reproductive+status/stages+in+mice.">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. 4, (2009).</li><li>Goldman, J. M., Murr, A. S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rodent+estrous+cycle:+characterization+of+vaginal+cytology+and+its+utility+in+toxicological+studies.">The rodent estrous cycle: characterization of vaginal cytology and its utility in toxicological studies.</a> Birth Defects Res. B. Reprod. Toxicol. 80, 84-97 (2007).</li><li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+vaginal+lavage,+crystal+violet+staining,+and+vaginal+cytological+evaluation+for+mouse+estrous+cycle+staging+identification.">Performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification.</a> J. Vis. Exp. , (2012).</li><li>McKee, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexually+dimorphic+myofilament+function+and+cardiac+troponin+I+phosphospecies+distribution+in+hypertrophic+cardiomyopathy+mice.">Sexually dimorphic myofilament function and cardiac troponin I phosphospecies distribution in hypertrophic cardiomyopathy mice.</a> Arch. Biochem. Biophys. 535, 39-48 (2013).</li><li>Konhilas, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise+can+prevent+and+reverse+the+severity+of+hypertrophic+cardiomyopathy.">Exercise can prevent and reverse the severity of hypertrophic cardiomyopathy.</a> Circ. Res. 98, 540-548 (2006).</li><li>Perez, N. J., Chen, H., Regan, J. A., Emert, A., Constantopoulos, E., Lynn, M., Konhilas, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+chemically-induced+ovarian+failure+on+voluntary+cage+wheel+exercise+and+cardiac+adaptation+in+mice.">The impact of chemically-induced ovarian failure on voluntary cage wheel exercise and cardiac adaptation in mice.</a> Compar. Med. In press, (2013).</li></ol>

יש המחברים אין לחשוף.

גם פעילות גופני גלגל בכלוב והליכון ריצת משטרי תרגיל נעשה שימוש במחקרים הקודמים שלנו 16,21,22. כל בעלי החיים נשמרים בחדרי כושר ייעודיים כדי למזער הפרעות אנושיות או סביבתיות. כל הפרעה של בעלי החיים &quot;קצב הביולוגי יכולה להשפיע באופן משמעותי בעלי החיים &#39;ביצועי פעילות גופני. לכן, יש לעשות כל משטרי הטיפול בבעלי החיים, ניטור ביצועים והקלטה, ופעילות גופנית בתוך אותה מסגרת זמן יומית. חוקרים צריכים לשאוף להימנע מלחצים מיותרים לבעלי החיים על ידי הפגנה באמצעי זהירות כגון הגבלת משך הזמן של חשיפה ללחץ ומכסה את הכלובים בעת הצורך. תרגיל גלגל קייג&#39; כאשר מכינים את מנגנון הגלגל בכלוב, הגלגל צריך להיות נגיש לעכבר להר ויציאה. לא צריכים מצעים מינימאליים בחלק התחתון של הכלוב כדי למנוע עכברים מהקינון סביב ההגה ופוגע freתנועת גלגל דואר. החיישן המגנטי הושם על החלק נייח של הגלגל והמגנט מאובטח לגלגל החופשי, כדי לספור כל סיבוב של ההגה כממש את העכבר. מכשיר ההקלטה המחובר לחיישן המגנטי צריך להיות ממוקם מעל המכסה התיל של הכלוב, וכל החוטים החשופים צריכים להיות או מוקלטים או נשמרו מחוץ להישג יד מהעכברים, כדי לספק מחסום נגד לעיסת נזק. חיישן המגנט והמגנטי גם היו מודבק למבנים המתאימים למניעת נזק וגם תנועה לא רצויה. במהלך איסוף הנתונים יומי, כל החוטים המודבקים חייבים להיבדק באופן הדוק על מנת להבטיח את החוטים נותרו על כנן וצריכה להיות retaped בהתאם לצורך. מאז זה עשוי לדרוש כמה ימים לעכברים להתאקלם לסביבה החדשה ולהתחיל בפעילות גופנית קבועה, הקלטת הנתונים צריכה להיות מותאמת לכל בעל חיים בודדים. למרות שבעלי חיים נוטים לבלות שעות רבות על ההגה, רוב הריצה מתרחש בלילה. לכן, חלק מבעלי החיים עשויים לחשוף גדולותפעילות ביצועי שעות גם אם הם נראים רדומים בשעתי יום. יתר על כן, אין זה נדיר שבעלי חיים מסוימים יפגינו ריצה גלגל כלוב מוגבלת. בדרך כלל, פעילות הגלגל בכלוב שמסתכמת לסך של 1 קילומטר / יום ממוצע או פחות מזה היא התוצאה של פעילות כלוב אקראית ואינה קשור לכל גירוי ריצה משמעותי. לכן, בעלי חיים פרמטרים ריצה שנמצאים במרחק 1 / יום או 1 שעות / יום או פחות צריכים להיות שליליים בnonrunners ניתוח הנתונים הסופי. בהתאם למטרות הספציפיות של מחקר וזנים של עכברים המעורבים אישיים, באורך של פעילות גופנית יכול להיות שונה. המחקר הקודם שלנו הראה כי עבור שני זני העכבר המעורבים, מהירות ריצה בגלגל בממוצע והמשך הזמן של פעילות גופנית על הגלגל בכלוב גדלו בהדרגה לאורך זמן והתייצבו ב -4 שבועות. ריצה גלגל קייג&#39; היא סוג של פעילות גופני מרצון במודלים של בעלי חיים, אשר בדרך כלל נלקח כמתבצע בתנאים פחות מלחיצים. Unlתרגיל הליכון אייק שבו ניתן מראש פרמטרים מסוימים, כל הריצה בכלוב המבחן היא בהתנדבות ובקלות מושפעת רמזים התנהגותיים או סביבתיים. לכן, ההשוואה בין הגדרות ניסויים השונות הן בדרך כלל להימנע, אלא אם כן מספרי קבוצות ניסוי גדולים נמצאים בשימוש. אזורים פוטנציאליים אחרים של מחקר שיכול להפיק תועלת מסוג זה של פעילות גופנית הם הפרדיגמה מחקרים המשלבים תגובות התנהגותיות עם השלכות פיסיולוגיות, כגון מדעי המוח הקוגניטיביים. ללימודי ניצול הפרדיגמה גלגל כלוב מרצון, השלבים הקריטיים ביותר הם כלוב שהוקם וניטור של הפעילות הגופנית. תרגיל הליכון צעדי הסתגלות נדרשים כדי להכין את בעלי חיים לפרוטוקול הפעילות הגופנית על הליכון. בהתאם לצורך הספציפי של המחקר הבודד, משך תקופת ההסתגלות יכול להשתנות. במחקר זה, לתקופה של שבוע אחד נבחרה כדי לאפשר לבעלי חיים לacclimאכלתי למנגנון הליכון ורעש מנוע בכלוב, תקופות להתחמם הן צעד חשוב במשטר האימונים של פעילות גופנית. בדומה לעמיתיהם אדם, העכברים חייבים להיות התחממו לפני שנכנס לכל משטרי פעילות גופני אינטנסיביים, כדי למנוע פגיעה וחפצי נתונים פוטנציאליים. במחקר זה, שהתחלנו את החגורה במהירות הנמוכה ביותר האפשרית (4 מ &#39;/ דקה) עם רשתות ההלם כבויה במשך 15 דקות. כל העכברים המעורבים התחילו לרוץ ולכבות את החגורה. רשתות ההלם ואז היו מופעלות ומתוחזק על מהירות חגורה ב 4 מ &#39;/ דקה. כדי להימנע מהעכברים והדגישו יתר על המידה, אנו קובעים את ההלם החשמלי ברמה קלה (1 הרץ). בתוך כמה ימים, כל העכברים מותאמים לחגורת הליכון. משך הריצה כמו גם האצה יכול גם להיות מותאמת לכל עיצוב ניסיוני. מומלץ שיעור ההאצה מתחיל הוא 1 מ &#39;/ דקה. נתיבי הליכון של עכברים מראים סימנים של תשישות חייבים להיות כבויים באופן מיידי. בדרך כלל סימנים של תשישות הוצגו על ידי מילce על ההליכון הם כדלקמן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשיפה ממושכת לרשת ההלם ל&gt; 5-10 שניות, </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אובדן של ריצה וכתוצאה מכך יכולת חשיפת רשת הלם&gt; 5x במהלך משטר אימונים בודדים, ו </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אובדן של ריצה וכתוצאה מכך יכולת חשיפת רשת הלם&gt; 2 שניות לפחות פי 3 במהלך משטר אימונים בודדים. </li></ol> הערכים המפורטים לעיל הוא לשמש בעיקר כקווים מנחים לניסוי ספציפי. פרמטרים אלה צריכים להיקבע עבור כל פרוטוקול פעילות גופני כפי שהוא משתנה מזן עכבר לזן עכבר, ניסוי לניסוי, וחוקר לחוקר. בניגוד לפעילות גופני גלגל בכלוב, מחקרי הליכון יש לחזור מספר פעמים על מנת לחסל את ההשפעות של גורמים סביבתיים וביולוגיים על ביצועים בריצה. אין זה נדיר לראות תנודות בביצועים בריצה בין בדיקות אפילו לאותה חיה. מאז כל משטר אימוני ריצה חושף עכברים לstress, מרווח מנוחה הולם בין הבדיקות הכרחי. מניסיוננו, 2-3 ימים מנוחה תקופה שבין כל בדיקה היו מספיק לעכברים כדי להתאושש. כמו תרגיל הליכון אנושי, את המהירות לתרגיל סיבולת נקבעת על ידי מיטב קצב הלב או רוויון חמצן בדם, הישג קשה מבחינה טכנית עם לימודי עכבר. השלב הקריטי ביותר של מחקרי הליכון הוא נחישות של תשישות, שלרוב נעה בין עכברים בודדים, ונקבע כ80% מהירות מקסימלי. בחוויה שלנו את ההקלטה של ​​תוצאות עשויות להיות שונה באופן משמעותי בין חוקרים בודדים, שכן הקריטריונים לתשישות הם בעיקר סובייקטיבי. לפיכך, היישום העקבי של אותם הקריטריונים במהלך ההקלטה הוא קריטי.

התפרצות הטבעית של גיל המעבר מאופיין בדלדול של זקיקים בשחלות באמצעות קדמוניים atresia, סופו של דבר וכתוצאה מהזדקנות השחלות. בארצות הברית, מעל 30% מהחיים של נשים יוקדש בגיל הבלות. בתגובה לירידה בתפקוד השחלות, כמה השלכות פיסיולוגיות ופסיכולוגיות עלולות להתרחש, כוללים השמנה מוגברת, חוסר יציבות של כלי דם, ומצב רוח או הפרעות בשינה. בגלל עליה בהשמנת יתר / השמנה בהשוואה לעמיתיהם לפני גיל המעבר 1,2, נשים לאחר גיל המעבר הן במיוחד רגישות יותר לתסמונת מטבולית ומחלות הרקע נלווה, כולל מחלות לב וכלי דם (CVD) 3. יתר על כן, זה הופך ברור יותר ויותר כי שיקום לב מוצלח בחולים עם CVD כולל פעילות גופנית אירובית על בסיס קבועה, וכי הפעילות הגופנית מפחיתה את התחלואה לב וכלי דם ותמותה בנושאים אלה 4,5. ובכל זאת, איך צ&#39;ה היכולת הגופניתnges במהלך המעבר מראש כדי שלאחר גיל המעבר לא נחקר היטב. חשוב מכך, תפקידה של פעילות גופנית כאמצעי מניעה לסיכון CVD בנשים בגיל הבלות נשאר להפליא understudied. המודל מושרה הנפוץ ביותר לחיקוי גיל המעבר אצל נשים הוא מכרסם ovariectomized (OVX). לאחרונה, diepoxide התעסוקתי הכימי 4 vinylcyclohexene-(VCD) הוכח במיוחד למטרת זקיקים בשחלות ראשוניות וקמאיים קטנים על ידי האצת התהליך הטבעי של אטרזיה, סופו של דבר וכתוצאה מכך כשל שחלה ללא רעילות ברורה שנמצאה ברקמות אחרות 6. מחזור הייחום של עכברים שטופלו VCD, שהוא מקביל למחזור אדם, מפסיק בתוך 2-3 חודשים לאחר השלמת זריקות VCD, שבתורה גוררת בנסיגה הדרגתית של אסטרוגן, מחקה את פרי שלאחר גיל המעבר מעבר. לפיכך, זקיק-ימוצה, בעלי חיים השחלה-פגע קירוב אנושי הטבעי מקרובהתקדמות דרך מראש לפרי למעבר בגיל ההבלות 7-9. יתר על כן, הוא מספק אלטרנטיבה לא ניתוחית למודל OVX צמצום סיבוכים מניתוח, כגון זיהום. במחקר זה, אנו מועסקים עכברים בגיל המעבר מושרה VCD כדי לחקור את ההשפעה של פעילות גופנית על אימוצו של הלב בעכברים בגיל המעבר. ישנם כמה מקרים שמצביעים על הקשר בין אסטרוגן ופעילות גופני גלגל כלוב במכרסמים משני המינים 10-13. דלדול אסטרוגן על ידי OVX כירורגית מקטין פעילות גופנית מרצון בעכברים וחולדות 14,15. שתי שיטות של פעילות גופנית ששימשו במחקר זה על מנת לבחון את היכולת הגופנית של עכברים בגיל המעבר מושרה VCD. ריצה גלגל קייג&#39; נחשב בדרך כלל כסוג של פעילות גופני מרצון במודלים של בעלי חיים ושבוצעה, ככל הנראה, בתנאים פחות מלחיצים. עם זאת, הריצה גלגל כלוב אינה מעידה על היכולת ביחס המימוש של בעלי חיים, אשר דורשת בעלי חיים לexercise ברמות הרבה יותר גבוהה. תרגיל הליכון כפייה שימש כדי לקבוע את היכולת הגופנית, שנמדדה כסובלנות לעצימות אימון וסיבולת. בנוסף, יש לנו הראינו בעבר כי תרגיל גלגל כלוב מספק גירוי להיפרטרופיה לבבית וצמיחת hypertrophic הזה היא מין תלוי 16. לכן, אנחנו גם נמדדו הסתגלות לב לגלגל בכלוב תרגיל בעכברים בגיל המעבר מושרה VCD.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="682">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-vinylcyclohexene diepoxide (VCD)</td>
			<td>Sigma, cat# V-3630</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11.5-cm-diameter wheel with a 5.0-cm-wide running surface</td>
			<td>Petsmart,model 6208</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital magnetic counter</td>
			<td>Sigma Sport,model BC 600</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Treadmill exercise</td>
			<td>Columbus Instruments , model 1055SDRM</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method to study the impact of chemically-induced ovarian failure on exercise capacity and cardiac adaptation in mice

הסיכון למחל לב וכלי דם (CVD) מגביר בנשים בגיל הבלות, ובכל זאת, את התפקיד של פעילות גופנית, כאמצעי מניעה לסיכון CVD בנשים בגיל הבלות לא נחקר כראוי. בהתאם לכך, אנחנו בדקנו את ההשפעה של פעילות גופני כלוב גלגל מרצון ופעילות גופני הליכון נכפתה על הסתגלות לב בעכברים בגיל המעבר. המודל מושרה הנפוץ ביותר לחיקוי גיל המעבר אצל נשים הוא מכרסם ovariectomized (OVX). עם זאת, יש במודל OVX כמה שוני מגיל המעבר בבני אדם. במחקר זה, אנו מנוהלים diepoxide 4 vinylcyclohexene-(VCD) לנקבות עכברים, אשר מאיץ את הכשל שחלה כמודל גיל המעבר חלופי לחקור את ההשפעה של פעילות גופנית בעכברים בגיל המעבר. VCD סלקטיבי מאיץ את האובדן של זקיקים ראשוניים וקמאיים וכתוצאה מכך מדינה האנדוקרינית המחקה מקרוב את ההתקדמות הטבעית ממראש לפרי שלאחר גיל המעבר בבני אדם. כדי לקבוע את ההשפעה של פעילות גופנית על פעילות גופניתקיבולת והסתגלות לב בנקבות עכברים שטופלו VCD, שתי שיטות היו בשימוש. ראשית, אנו חשופים קבוצה של עכברים שטופלו VCD ואינו מטופלים לגלגל בכלוב מרצון. שנית, השתמשנו בתרגיל הליכון נאלץ לקבוע את היכולת הגופנית בעכברים ואינם מטופלים שטופלו VCD נפרדים קבוצה נמדדים כסובלנות לעצימות אימון וסיבולת.

פרוטוקול ניסוי טיפוסי, כמו זה המשמש במחקר זה, בא לידי ביטוי באיור 1. בעקבות 20 ימים רצופים של טיפול VCD, ציטולוגיה נרתיק הייתה בשימוש כדי לקבוע את קיומו או היעדריו של מחזוריות בעכברים מוזרק VCD; עכברים שהוזרק רכב גם היו במעקב. השלב במחזור הייחום נקבע על ידי חלקם של תאי אפיתל, תאי האפיתל cornified, וכדוריות דם לבנות במריחה בנרתיק (איור 2 א). הנוכחות של תאי אפיתל רק cornified הצביעה בעכבר היה בייחום, ולכן עדיין היה רכיבה על אופניים. מחזור הייחום בעכברים בדרך כלל נמשך 4 ימים, ולכן VCD הזריק חיות נחשבו אציקליות לאחר 15 ימי diestrus המתמשך, שבו ציטולוגיה נרתיק מתגלה ברוב של לויקוציטים (איור 2 א). מחזור הייחום של עכברים שטופלו VCD הפך לא סדיר, ולאחר מכן חדל בתוך 2-3 חודשים לאחר תחילת זריקות VCD (איור 2) </strong&gt;. רקמת השחלה VCD הראתה ניוון משמעותי, בהשוואה לקבוצת ביקורת. בהגדלה גבוהה, אנו רואים דלדול של זקיקים ראשוניים וקמאיים (איור 2C) מלא. כדי לבדוק את ההשפעה של כשל שחלה מושרה VCD על ביצועי פעילות גופני, אנו אקראיים 7 בן חודש VCD ועכברים שטופלו רכב (שני זנים, C57BL / 6 וB6C3F1) לשתי קבוצות תרגיל גלגל בישיבה או בכלוב 4-6 שבועות הבאים הפסקה של רכיבה על אופניים (איור 1). ערכי פעילות גופני מדי יום נרשמו לזמן ומרחק לכל בעל חיים למימוש בכל תקופת מימוש 4 שבועות. ממוצעים שבועי של ערכי ריצה יומיים למרחק, זמן ומהירות מוצגים באיור 3 לC57BL / 6 עכברים שטופלו עם רכב או VCD. לא ראו הבדלים משמעותיים בביצועי פעילות גופני נמדדו על ידי זמן יומי ממוצע, מרחק ומהירות על הגלגל בכלוב בין VCD ו-קבוצות רכב שטופלה בשני C57BL / 6 או עכבר B6C3F1זן (איור 4 א). מהירות ריצה בגלגל המחושבת גדלה בהדרגה לאורך תקופת ההרצה של 4 השבועות כפי שמוצג 16 בעבר, אך לא היו שונים משמעותי בין קבוצות ניסוי. מחקרים אלו מצביעים על ההשפעה של כשל שחלה מושרה VCD על תרגיל גלגל כלוב מרצון מתעלה לפחות 2 זני עכבר. בעקבות משך פרוטוקול פעילות גופני גלגל כלוב מרצון, morphometrics הגוף הוקלטו והלבבות היו נכרת במהירות ומשקלו. הראינו בעבר כי פעילות גופנית גלגל כלוב מרצון גורמת לעלייה במסת לב 16. כאן, אנו מראים גם היפרטרופיה לבבית בתגובה לפעילות גופנית גלגל כלוב נמדדה לפי משקל מוחלט לב (HW) וHW המנורמל לאורך השוקה (TL) (טבלה 1). מסת הלב המוחלטת ויחס HW / TL היו גדולים יותר באופן משמעותי וברכב שטופלו עכברי VCD בהשוואה לעמיתיהם בישיבה. עם זאת, לא היו צפחותהבדלי rable בהיפרטרופיה לבבית בין שליטה ועכברי כשל שחלה מושרה VCD הבא תרגיל גלגל כלוב מרצון. בשלב הבא, שנהגנו שלא מרצון (כפייה) הליכון ריצה כדי לקבוע את היכולת הגופנית. אנו חשופים ראשון עכברים לפרוטוקול בעוצמה גבוהה שעלה בשלבים מהירות ממוצע כל 10 דקות עד אפיסת כוחות. בממוצע, המהירות המקסימלי של עכברים שטופלו רכב הייתה 26.7 ± 0.95 מ &#39;/ דקה והמהירות המקסימלי של עכברים שטופלו היו VCD 28 ± 1.4 מ&#39; / דקה לפני שהוא מותש. אנחנו השתמשנו בעצימות נמוכות פועלות ב20 מ &#39;/ דקה (כ -80% ממשקל מקסימאלי) לassay לכושר סיבולת. כפי שניתן לראות באיור 4 ב &#39;, לא נמצא הבדל משמעותי ביכולת פעילות גופנית בעצימות גבוהה או נמוכה נמצא בין רכב וקבוצה שטופל VCD, המציין כי היה כשל שחלה מושרה VCD אין כל השפעה על יכולת הגופנית עכבר. לסיכום, יש גיל המעבר הנגרם על ידי טיפול VCD אין כל השפעה על r מרצון או בכפייה<html> קיבולת unning, כמו גם את התגובה המסתגלת לב לפעילות גופנית. <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51083/51083fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51083/51083fig1.jpg" /> איור 1. VCD-ממשל ופרוטוקול ניסוי. עכברים ניתנו VCD שמן שומשום (160 מ&quot;ג / קילוגרם) או (שליטה ברכב) החל מהשעה 2 חודשים של גיל ל20 ימים רצופים. בעקבות זריקות VCD או כלי רכב, מחזורי ייחום היו במעקב וcyclicities נקבעו כמתואר בסעיף השיטות. אובדן תפקוד השחלות התרחש בתוך 60-90 ימים ואושר על ידי ציטולוגיה נרתיק. בגיל 7 חודשים, עכברים שנחשפו לפעילות גופני גלגל כלוב מרצון במשך 4 שבועות או נתון לפרוטוקול הפעילות הגופנית על הליכון. &quot;Src =&quot; oad/51083/51083fig2highres.jpg / files/ftp_upload/51083/51083fig2.jpg &quot;/&gt; . איור 2 כשל שחלה מושרה VCD בעכברים:. ציטולוגיה של מריחה בנרתיק בלא כתם מעכבר רכב מוזרק הוכחת ארבעה שלבים של מחזור הייחום: 1) proestrous, בעיקר מורכב מתאי אפיתל גרעיניים 2) ייחום, המתאפיין באו&quot;ם nucleated-תאי cornified; 3) metestrus, בהיקף של תאי בעלי הגרעין אפיתל (חיצים), תאי האפיתל cornified בלתי גרעיניים (חיצים), וכדוריות דם לבנות; 4) diestrus, המורכב בעיקר מכדוריות הדם לבנות; ו-B:. אורך ממוצע (ימים) של מחזור הייחום של רכב וקבוצות מוזרקים VCD. מחזור אחד נמדד מהיום הראשון בייחום ליום הראשון של המחזור הבא בייחום. ציטולוגיה נרתיק החלה כ 6 שבועות לאחר תחילתה של זריקות. מחזורי הייחום של בעלי החיים, הזריק VCD להיות לא סדירים, בהשוואה לבעלי חיים שהוחדר רכבים, ולאחר מחזורי ייחום 12, ציטולוגיה של כל VCD הזריק חיות כבר לא הצביעה על האופניים C:. צביעת H &amp; E של רקמת השחלה בגיל 8 חודשים. חתכים נעשים בעובי 5μm להגדלת רכב שטופלה (משמאל פנל) ועכברים שטופלו VCD (פנל מימין) ב20X (פנל עליון) ו200X (פנל תחתון). רקמת השחלה בהגדלה 200X מציגה מספר הזקיקים בעכברים שטופלו VCD-לעומת רכב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51083/51083fig2highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51083/51083fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51083/51083fig3.jpg" /> איור 3. ביצועי גלגל בכלוב מרצון ברכב או נקבות עכברים שטופלו VCD C57BL/6J. לוח שמאלי: ריצה למרחקים ממוצע (קילומטר /יום) לכל תקופת 1 שבוע לאורך תקופת המחקר 4 שבועות פנל התיכון:. זמן ממוצע ריצה (שעה / יום) עבור כל תקופת 1 שבוע לאורך תקופת המחקר 4 שבועות ימני פנל:. מהירות ריצה ממוצעת (קילומטר / שעה) עבור כל תקופה 1 שבוע לאורך תקופת המחקר 4 שבועות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51083/51083fig3highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51083/51083fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51083/51083fig4.jpg" /> איור 4 גלגלים. רצון כלוב וביצועי הליכון ברכב ועכברים שטופלו VCD. : (למעלה לוח) C57BL / 6 מרחק ריצה ממוצעת (קילומטר / יום) ואת משך זמן על ההגה (שעות / יום) עבור כל 24 שעות לאורך תקופת המחקר 4 שבועות. (פנל תחתון) &amp; #160; מרחק B6C3F1 ממוצע ריצה (קילומטר / יום) ואת המשך זמן על ההגה (שעה / יום) עבור כל 24 שעות מעל 4 שבועות תקופת מחקר ב &#39;: C57BL / 6 פרמטרים הליכון ריצה.. זמן מרבי (למעלה לוח) ומהירות המרבית (Botoom לוח) תוך שימוש בפרוטוקולים מפורטים בסעיף השיטות.

Watch this Scientific Journal Video about A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice at JoVE.com

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

שתי פרדיגמות תרגיל נבדקו על חדש שפותח במודל עכבר בגיל המעבר כימי שגרם לבחון את ההשפעה של גיל המעבר על יכולת גופנית והסתגלות לב לפעילות גופנית.

שיטה לחקר ההשפעה של כשל שחל מושרה כימי ביכולת גופנית ולב הסתגלות בעכברים

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

a-method-to-study-impact-chemically-induced-ovarian-failure-on

Research

JoVE Journal

Medicine

15.2K Views.  University of Arizona.  שתי פרדיגמות תרגיל נבדקו על חדש שפותח במודל עכבר בגיל המעבר כימי שגרם לבחון את ההשפעה של גיל המעבר על יכולת גופנית והסתגלות לב לפעילות גופנית. 

Video: A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these strategies is to examine their effects on heart function. There are several techniques to measure in vivo cardiac mechanics (e.g., echocardiography, pressure/volume relations, etc.). Compared to echocardiography, real-time left ventricular (LV) pressure/volume analysis via catheterization is more precise and insightful in assessing LV function. Additionally, LV pressure/volume analysis provides the ability to instantaneously record changes during manipulations of contractility (e.g., &#946;-adrenergic stimulation) and pathological insults (e.g., ischemia/reperfusion injury). In addition to the maximum (+dP/dt) and minimum (-dP/dt) rate of pressure change in the LV, an accurate assessment of LV function via several load-independent indexes (e.g., end systolic pressure volume relationship and preload recruitable stroke work) can be attained. Heart rate has a significant effect on LV contractility such that an increase in the heart rate is the primary mechanism to increase cardiac output (i.e., Bowditch effect). Thus, when comparing hemodynamics between experimental groups, it is necessary to have similar heart rates. Furthermore, a hallmark of many cardiomyopathy models is a decrease in contractile reserve (i.e., decreased Bowditch effect). Consequently, vital information can be obtained by determining the effects of increasing heart rate on contractility. Our and others data has demonstrated that the neuronal nitric oxide synthase (NOS1) knockout mouse has decreased contractility. Here we describe the procedure of measuring LV pressure/volume with increasing heart rates using the NOS1 knockout mouse model.

This article describes the measurement of murine left ventricular function via pressure/volume analysis at different heart rates.

צנתור לב בעכברים כדי למדוד את יחסי נפח לחץ: חקירת אפקט Bowditch

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

זרחן-31 ספקטרוסקופיה תהודה מגנטית: כלי למדידת<em&gt; In vivo</em&gt; קיבולת זרחון חמצוני מיטוכונדריאלי של שריר שלד אדם

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Since its invention in the late 19th century, the Langendorff ex vivo heart perfusion system continues to be a relevant tool for studying a broad spectrum of physiological, biochemical, morphological, and pharmacological parameters in centrally denervated hearts. Here, we describe a setup for the modulation of the intracardiac autonomic nervous system and the assessment of its influence on basic electrophysiology, arrhythmogenesis, and cyclic adenosine monophosphate (cAMP) dynamics. The intracardiac autonomic nervous system is modulated by the mechanical dissection of atrial fat pads-in which murine ganglia are located mainly&#8212;or by the usage of global as well as targeted pharmacological interventions. An octapolar electrophysiological catheter is introduced into the right atrium and the right ventricle, and epicardial-placed multi-electrode arrays (MEA) for high-resolution mapping are used to determine cardiac electrophysiology and arrhythmogenesis. F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) imaging is performed for the real-time monitoring of cAMP levels in different cardiac regions. Neuromorphology is studied by means of antibody-based staining of whole hearts using neuronal markers to guide the identification and modulation of specific targets of the intracardiac autonomic nervous system in the performed studies. The ex vivo Langendorff setup allows for a high number of reproducible experiments in a short time. Nevertheless, the partly open nature of the setup (e.g., during MEA measurements) makes constant temperature control difficult and should be kept to a minimum. This described method makes it possible to analyze and modulate the intracardiac autonomic nervous system in decentralized hearts.

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Here, we present a protocol for the modulation of the intracardiac autonomic nervous system and the assessment of its influence on basic electrophysiology, arrhythmogenesis, and cAMP dynamics using an ex vivo Langendorff setup.

ההשפעה של נוירונים Intracardiac על הלב אלקטרופיזיולוגיה, Arrhythmogenesis במערכת Langendorff Vivo לשעבר

Since its invention in the late 19th century, the Langendorff ex vivo heart perfusion system continues to be a relevant tool for studying a broad spectrum ...

The Generation of Closed Femoral Fractures in Mice: A Model to Study Bone Healing

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies that promote efficient bone healing are non-existent and in high demand. Effective and reproducible animal models of fractures healing are needed to understand the complex biological processes associated with bone regeneration. Many animal models of fracture healing have been generated over the years; however, murine fracture models have recently emerged as powerful tools to study bone healing. A variety of open and closed models have been developed, but the closed femoral fracture model stands out as a simple method for generating rapid and reproducible results in a physiologically relevant manner. The goal of this surgical protocol is to generate unilateral closed femoral fractures in mice and facilitate a post-fracture stabilization of the femur by inserting an intramedullary steel rod. Although devices such as a nail or a screw offer greater axial and rotational stability, the use of an intramedullary rod provides a sufficient stabilization for consistent healing outcomes without producing new defects in the bone tissue or damaging nearby soft tissue. Radiographic imaging is used to monitor the progression of callus formation, bony union, and subsequent remodeling of the bony callus. Bone healing outcomes are typically associated with the strength of the healed bone and measured with torsional testing. Still, understanding the early cellular and molecular events associated with fracture repair is critical in the study of bone tissue regeneration. The closed femoral fracture model in mice with intramedullary fixation serves as an attractive platform to study bone fracture healing and evaluate therapeutic strategies to accelerate healing.

The murine closed femoral fracture model is a powerful platform to study fracture healing and novel therapeutic strategies to accelerate bone regeneration. The goal of this surgical protocol is to generate unilateral closed femoral fractures in mice using an intramedullary steel rod to stabilize the femur.

הדור של שברי הירך סגור בעכברים: מודל ללמוד ריפוי עצם

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies ...

Conducting Maximal and Submaximal Endurance Exercise Testing to Measure Physiological and Biological Responses to Acute Exercise in Humans

Regular physical activity has a positive effect on human health, but the mechanisms controlling these effects remain unclear. The physiologic and biologic responses to acute exercise are predominantly influenced by the duration and intensity of the exercise regimen. As exercise is increasingly thought of as a therapeutic treatment and/or diagnostic tool, it is important that standardizable methodologies be utilized to understand the variability and to increase the reproducibility of exercise outputs and measurements of responses to such regimens. To that end, we describe two different cycling exercise regimens that yield different physiologic outputs. In a maximal exercise test, exercise intensity is continually increased with a greater workload resulting in an increasing cardiopulmonary and metabolic response (heart rate, stroke volume, ventilation, oxygen consumption and carbon dioxide production). In contrast, during endurance exercise tests, the demand is increased from that at rest, but is raised to a fixed submaximal exercise intensity resulting in a cardiopulmonary and metabolic response that typically plateaus. Along with the protocols, we provide suggestions on measuring physiologic outputs that include, but are not limited to, heart rate, slow and forced vital capacity, gas exchange metrics, and blood pressure to enable the comparison of exercise outputs between studies. Biospecimens can then be sampled to assess cellular, protein, and/or gene expression responses. Overall, this approach can be easily adapted into both short- and long-term effects of two distinct exercise regimens.

To assess the influence of exercise intensity on physiologic and biologic responses, two different exercise testing protocols were utilized. Methods outlining exercise testing on a cycle ergometer as an incremental maximal oxygen consumption test and endurance, steady state submaximal endurance test are described.

ביצוע תרגיל סיבולת מקסימלית וללא Submaximal בדיקה למדידת תגובות פיזיולוגיים וביולוגיים תרגיל חריפה אצל בני אדם

Regular physical activity has a positive effect on human health, but the mechanisms controlling these effects remain unclear. The physiologic and biologic ...

Non-invasive Assessment of Dorsiflexor Muscle Function in Mice

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively affect skeletal muscle. This can result in a loss of muscle mass (atrophy) and/or loss of muscle quality (reduced force per unit of muscle mass), both of which are prevalent in chronic disease, muscle-specific disease, immobilization, and aging (sarcopenia). Skeletal muscle function in animals can be evaluated by a range of different tests. All tests have limitations related to the physiological testing environment, and the selection of a specific test often depends on the nature of the experiments. Here, we describe an in vivo, non-invasive technique involving a helpful and easy assessment of force frequency-curve (FFC) in mice that can be performed on the same animal over time. This permits monitoring of disease progression and/or efficacy&#160;of a potential therapeutic treatment.

Measurement of rodent skeletal muscle contractile function is a useful tool that can be used to track disease progression as well as efficacy of therapeutic intervention. We describe here the non-invasive, in vivo assessment of the dorsiflexor muscles that can be repeated over time in the same mouse.

הערכה בלתי פולשני של תפקוד השרירים Dorsiflexor בעכברים

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents responsible for the action potential can cause pro-arrhythmic substrates that underlie arrhythmias, such as atrial fibrillation, which are highly prevalent in many conditions and disease states. Isolating adult mouse atrial cardiomyocytes for use in patch-clamp experiments has greatly advanced our knowledge and understanding of the cellular electrophysiology in the healthy atrial myocardium and in the setting of atrial pathophysiology. In addition, studies using genetic mouse models have elucidated the role of a vast array of proteins in regulating atrial electrophysiology. Here we provide a detailed protocol for the isolation of cardiomyocytes from the atrial appendages of adult mice using a combination of enzymatic digestion and mechanical dissociation of these tissues. This approach consistently and reliably yields isolated atrial cardiomyocytes that can then be used to characterize cellular electrophysiology by measuring action potentials and ionic currents in patch-clamp experiments under a number of experimental conditions.

This protocol is used to isolate single atrial cardiomyocytes from the adult mouse heart using a chunk digestion approach. This approach is used to isolate right or left atrial myocytes that can be used to characterize atrial myocyte electrophysiology in patch-clamp studies.

בידוד של פרפור מיוציטים מעכברים למבוגרים

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

Implantation of an Isoproterenol Mini-Pump to Induce Heart Failure in Mice

Isoproterenol (ISO), is a non-selective beta-adrenergic agonist, that is used widely to induce cardiac injury in mice. While the acute model mimics stress-induced cardiomyopathy, the chronic model, administered through an osmotic pump, mimics advanced heart failure in humans. The purpose of the described protocol is to create the chronic ISO-induced heart failure model in mice using an implanted mini-pump. This protocol has been used to induce heart failure in 100+ strains of inbred mice. Techniques on surgical pump implantation are described in detail and may be relevant to anyone interested in creating a heart failure model in mice. In addition, the weekly cardiac remodeling changes based on echocardiographic parameters for each strain and expected time to model development are presented. In summary, the method is simple and reproducible. Continuous ISO administered via the implanted mini-pump over 3 to 4 weeks is sufficient to induce cardiac remodeling. Finally, the success for ISO model creation may be assessed in vivo by serial echocardiography demonstrating hypertrophy, ventricular dilation, and dysfunction.

The chronic administration of isoproterenol via an implanted osmotic pump has been used widely to mimic advanced heart failure in mice. Here, we describe detailed methods in surgical mini-pump implantation for the continuous isoproterenol administration over 3 weeks, as well as, echocardiographic assessment for the successful model creation.

השרשה של מיני משאבה איזופרופיל כדי לגרום לאי ספיקת לב בעכברים

Isoproterenol (ISO), is a non-selective beta-adrenergic agonist, that is used widely to induce cardiac injury in mice. While the acute model mimics ...

Integration of Brain Tissue Saturation Monitoring in Cardiopulmonary Exercise Testing in Patients with Heart Failure

Cerebral hypo-oxygenation during rest or exercise negatively impacts the exercise capacity of patients with heart failure with reduced ejection fraction (HF). However, in clinical cardiopulmonary exercise testing (CPET), cerebral hemodynamics is not assessed. NIRS is used to measure cerebral tissue oxygen saturation (SctO2) in the frontal lobe. This method is reliable and valid and has been utilized in several studies. SctO2 is lower during both rest and peak exercise in patients with HF than in healthy controls (66.3 &#177; 13.3% and 63.4 &#177; 13.8% vs. 73.1 &#177; 2.8% and 72 &#177; 3.2%). SctO2 at rest is significantly linearly correlated with peak VO2 (r = 0.602), oxygen uptake efficiency slope (r = 0.501), and brain natriuretic peptide (r = -0.492), all of which are recognized prognostic and disease severity markers, indicating its potential prognostic value. SctO2 is determined mainly by end-tidal CO2 pressure, mean arterial pressure, and hemoglobin in the HF population. This article demonstrates a protocol that integrates SctO2 using NIRS into incremental CPET on a calibrated bicycle ergometer.

This protocol integrated near-infrared spectroscopy into conventional cardiopulmonary exercise testing to identify the involvement of the cerebral hemodynamic response in exercise intolerance in patients with heart failure.

שילוב של רוויה רקמת המוח ניטור בדיקה גופנית קרדיולוגית בדיקות בחולים עם אי ספיקת לב

Cerebral hypo-oxygenation during rest or exercise negatively impacts the exercise capacity of patients with heart failure with reduced ejection fraction ...

Generation and Characterization of Right Ventricular Myocardial Infarction Induced by Permanent Ligation of the Right Coronary Artery in Mice

Right ventricular infarction (RVI) is a common presentation in clinical practice. Severe RVI can lead to fatal hemodynamic dysfunction and arrhythmia. In contrast to the extensively used mouse myocardial infarction (MI) model generated by left coronary artery ligation, the RVI mouse model is rarely employed due to the difficulty associated with model generation. Research on the mechanisms and treatment of RVI-induced RV remodeling and dysfunction requires animal models to mimic the pathophysiology of RVI in patients. This study introduces a feasible procedure for RVI model generation in C57BL/6J mice. Further, this model was characterized based on the following: infarct size evaluation at 24 h after MI, assessment of cardiac remodeling and function with echocardiography, RV hemodynamics assessment, and histology of the infarct zone at 4 weeks after RVI. In addition, a coronary vasculature cast was performed to observe the coronary arterial arrangement in RV. This mouse model of RVI would facilitate the research on mechanisms of right heart failure and seek new therapeutic targets of RV remodeling.

There are several differences between the right and left ventricles. However, the pathophysiology of right ventricular infarction (RVI) has not been clarified. In the present protocol, a reproducible method for RVI mouse model generation is introduced, which may provide a means to explain the mechanism of RVI.

יצירת ואפיון של אוטם שריר הלב בחדר הימני המושרה על ידי קשירת קבועה של העורק הכלילי הימני בעכברים

Right ventricular infarction (RVI) is a common presentation in clinical practice. Severe RVI can lead to fatal hemodynamic dysfunction and arrhythmia. In ...