עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לבריאות מעניק F32 NS078958 (DTB) וR01 AG033620 (BG).

1. להרכיב טיסת Tester <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גליל טיסה מאובטח לטבעת Stand 1 באמצעות מלחציים שרשרת. (יש להשאיר סנטימטר כ 3 מתחת לגליל למשקל מנה.) (הערה: גליל הטיסה אנו משתמשים הוא ארוך 90 סנטימטר בקוטר של 13.5 סנטימטר.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס שוקל צלחת בשכבה דקה של שמן מינרלים מתחת לצילינדר הטיסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משפך מאובטח לטבעת Stand 2 באמצעות מהדק טבעת ומהדק טופר. התאם את הגובה של המשפך, כך שהחלק התחתון של המשפך הוא מיושר עם החלק העליון של גליל הטיסה. (הערה: קוטר הקצה של המשפך חייב להיות פחות מ הקוטר החיצוני של בקבוקונים להציב לתוך צינורות הירידה, כך שהמבחנות לא ייפלו דרכו.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס צינור טיפה לתוך החלק העליון של המשפך ומאובטח באמצעות מהדק טופר. (הערה: אנו משתמשים בצינור ירידה שהוא ארוך 25 סנטימטר השמטת בקבוקונים מהגובה הזה מאפשר פליטה של ​​כל הזבובים בכוח אחיד עקבית המכיל לטוס הקוטר הפנימי של צינור הירידה צריך להיות sligh..tly גדול יותר מהקוטר החיצוני של הבקבוקון על מנת לאפשר לבקבוקון לרדת באופן חופשי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים גיליון polyacrylamide (ים) לגודל המתאים. (הערה: כדי לסייע בהחדרת והוצאת הגיליון, הרוחב צריך להיות מעט קטן יותר מההיקף הפנימי של גליל הטיסה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרוח שכבה דקה של סבך-מלכודת לגיליון. אפשר לשבת במשך שעה 1 לפני השימוש. (הערה: יש להשאיר מספיק מקום בחלק העליון והתחתון של הגיליון (כ 3 ס&quot;מ) ללא ציפוי לתפוס את הגיליון להכנסה / הוצאה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את גיליון polyacrylamide בצילינדר הטיסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב את מסלול המצלמה באמצעות סוגריים תמיכת אורן. (הערה: לוודא שהחלק התחתון של המסלול יכול לתמוך את המצלמה מבלי לחסום את העדשה עיין באיור 1 ב.). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת פקקים ובורג למקומו. (הערה: מקום פקקים במקומות שיאפשר את המצלמה כדי להציג את הגיליון כולו פלסטיק במצב פנורמי.) </li></ol> 2. הפעל ניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"> &lt;li&gt; איסוף בקבוקונים של זבובים להיבדק. לקבלת התוצאות הטובות ביותר, השתמש לא יותר מ 20 זבובים / בקבוקון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטפוח בעדינות זבובים לתחתית בקבוקון, ניתק, ולאחר מכן להכניס לתוך צינור ירידה ולשחרר את הבקבוקון. (הערה: הבקבוקון נופל במורד צינור הטיפה עד שהוא מגיע לפתיחת המשפך הצרה כאשר הבקבוקון פוגע במשפך, הזבובים הם נפלטו לתוך צילינדר הטיסה..) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את שפופרת הטיפה כדי להסיר את הבקבוקון הריק. (הערה: בקבוקונים מרובים של זבובים מאותה קבוצת הבדיקה ניתן assayed על גיליון polyacrylamide אחת אנו מוצאים כי עד 200 זבובים (10 בקבוקונים של 20 זבובים כל אחד), ניתן לבדוק וצלמו בקלות על גיליון אחד.. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את יריעת הפלסטיק ומניח אותו על משטח לבן שטוח. (הערה: לוח הפוסטר לבן עשוי לשמש אם צמרות ספסל הן בצבע כהות.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב את מסלול המצלמה מעל יריעת הפלסטיק. המצלמה צריכה להיות גבוהה מספיק מעל לסדין כדי לקבל את שניהם העליונים ותחתון של הגיליון בשדה הראייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלק את המצלמה יחד המסלול דואר תוך כדי לחיצה על הכפתור &quot;ללכוד&quot; לרכוש תמונה פנורמית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספר הזבובים שנחתו בנפט עשוי ייספר באופן ידני עבור כל ניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על השלבים 2.2-2.7 לכל התנאים בניסוי נתון. הזבובים ניתן להסיר מגיליון בין כל ניסוי. לחלופין, ניתן להשתמש בכמה גיליונות, עם גיליון חדש עבור כל משפט. </li></ol> 3. איסוף נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבצי תמונה להרחיב באמצעות תוכנת ImageJ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיתוך תמונות במידת צורך כדי לכלול רק את פני שטח הנחיתה. (זהו האזור שמצופה בסבך-מלכודת.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המרת תמונות לגוונים אפור 8 סיביות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יצירה &quot;סף&quot; לסנן את הרקע הלבן. (תמונה → התאם סף →). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את הפרמטרים לזיהוי כל זבוב באמצעות התפריט &quot;לנתח חלקיקים&quot;. (לנתח → לנתח חלקיקים) הגדר את הפרמטרים המשמשים לזיהוי חלקיקים. עם שלנו להגדיר, אנו מוצאים כי באמצעותאזור של 5-90 פיקסלים 2 ומעגלי של 0.4-1.0 במדויק יהיה לזהות את כל הדגימות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את מיקומו של כל זבוב באמצעות הרשימה שנוצרה של קואורדינטות עבור כל חלקיק. קואורדינטת x בפיקסלים ניתן להמיר סנטימטרים כדי לחשב את גובה הנחיתה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייבא טבלה לגיליון אלקטרוני (כגון Microsoft Excel). </li></ol>

<ol>
	<li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+behavior.">Genetic dissection of behavior.</a> Sci. Am. 229, 24-37 (1973).</li><li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assaying+locomotor,+learning,+and+memory+deficits+in+Drosophila+models+of+neurodegeneration.">Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration.</a> J. Vis. Exp. , e2504 (2011).</li><li>de Vries, S. E., Clandinin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+Stimulation+of+Escape+Behavior+in+Drosophila+melanogaster.">Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. , e50192 (2013).</li><li>Mundiyanapurath, S., Certel, S., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+aggression+in+Drosophila+(fruit+flies).">Studying aggression in Drosophila (fruit flies).</a> J. Vis. Exp. , e155 (2007).</li><li>Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+assay+Drosophila+behavior.">Methods to assay Drosophila behavior.</a> J. Vis. Exp. , e3795 (2012).</li><li>Shiraiwa, T., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proboscis+extension+response+(PER)+assay+in+Drosophila.">Proboscis extension response (PER) assay in Drosophila.</a> J. Vis. Exp. , e193 (2007).</li><li>Lloyd, T. E., Taylor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flightless+flies:+Drosophila+models+of+neuromuscular+disease.">Flightless flies: Drosophila models of neuromuscular disease.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 1184, e1-e20 (2010).</li><li>Atkinson, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+separation+of+two+behavioral+phenotypes+by+a+mutation+affecting+the+promoters+of+a+Ca-activated+K+channel.">Molecular separation of two behavioral phenotypes by a mutation affecting the promoters of a Ca-activated K channel.</a> J. Neurosci. 20, 2988-2993 (2000).</li><li>Atkinson, N. S., Robertson, G. A., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+component+of+calcium-activated+potassium+channels+encoded+by+the+Drosophila+slo+locus.">A component of calcium-activated potassium channels encoded by the Drosophila slo locus.</a> Science. 253, 551-555 (1991).</li><li>Elkins, T., Ganetzky, B., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+mutation+that+eliminates+a+calcium-dependent+potassium+current.">A Drosophila mutation that eliminates a calcium-dependent potassium current.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 8415-8419 (1986).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp. Gerontol. 40, 386-395 (2005).</li><li>Fry, S. N., Rohrseitz, N., Straw, A. D., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+control+of+flight+speed+in+Drosophila+melanogaster.">Visual control of flight speed in Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 212, 1120-1130 (2009).</li><li>Mronz, M., Lehmann, F. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+free-flight+response+of+Drosophila+to+motion+of+the+visual+environment.">The free-flight response of Drosophila to motion of the visual environment.</a> J. Exp. Biol. 211, 2026-2045 (2008).</li></ol>

יש המחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

שימוש בשיטות שתוארו כאן, היינו מסוגל להעריך במהירות את ביצועי טיסה של מספר רב של מוטציות דרוזופילה, מתן יעילות רבה יותר מאשר בעבר. בניסויים שלנו, אנו נפרדים באופן שגרתי זכרים ונקבות ולגדל אותם בצפיפות נמוכה (פחות מ 20 זבובים / בקבוקון) כדי להגביל את התוקפנות שעלולה...

דרוזופילה משמשת כבר זמן רב כדי ללמוד את הבסיס הגנטי של התנהגות 1, וחוקרים פיתחו מספר דרכים לנתח סוגים שונים של התנהגות 2-6. זבובים היו שימושיים במיוחד במתן מודלים שימושיים של הפרעות התוקפת 7. Assay נפוץ המשמש ללמוד התנהגות של תנועה הוא ביצועי טיסה. בוחן הטיסה המקורי הוא שימושי לזיהוי מוטציות פגומות טיסה ולהערכה כמותית של יכולת הטיסה 1, אבל יש לו כמה חסרונות המגבילים את היישום שלה למסכי תפוקה גבוהה: השימוש בצילינדרים מצופה שמן הוא מבולגן ומסורבל, תכונות מסוימות, כגון האורך של הגליל והכנסה של זבובים לתוך הצינור בעוצמה משתנה להפחית דיוק הכמותי; וקשה להתאושש זבובים חיים מהבוחן. כדי להתגבר על המגבלות האלה, יש לנו שונה בוחן הטיסה לכולל מספר השיפורים. הוספנו &quot;טיפת tuלהיות &quot;להציג את הזבובים לחסל את השונות בין ניסויים ומשתמשים. אנו משתמשים בגיליונות אקריליק נשלפים מצופים בדבק המאפשר ניקוי ושחזור של זבובים בודדים קלים יותר. הגדלנו את אורכו של צינור הטיסה כדי לשפר את הדיוק ואמינות כמותית. לבסוף , אנו משתמשים במצלמה דיגיטלית ותוכנת הדמיה כדי לחשב את הגבהים הנחיתה של זבובים. אנו מאמינים שיפורים אלו יהיו שימושיים לכל מעבדה מעוניינת לנהל מסכי גנטיים בקנה מידה גדולה לליקויים בביצועי טיסה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="704">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">Putty knife</td>
			<td style="width:171px;">Home Depot</td>
			<td style="width:132px;">630147</td>
			<td style="width:185px;"><a href="http://www.homedepot.com">www.homedepot.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">Pine back band moulding ( x2 )</td>
			<td style="width:171px;">Home Depot</td>
			<td style="width:132px;">156469</td>
			<td><a href="http://www.homedepot.com">www.homedepot.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">Furring Strip Board</td>
			<td style="width:171px;">Home Depot</td>
			<td style="width:132px;">164704</td>
			<td><a href="http://www.homedepot.com">www.homedepot.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">Tangle Trap Insect Trap Coating</td>
			<td style="width:171px;">BioControl Network</td>
			<td style="width:132px;">268941</td>
			<td><a href="http://www.biconet.com">www.biconet.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">Laptop Computer </td>
			<td style="width:171px;">Apple</td>
			<td style="width:132px;">_</td>
			<td><a href="http://www.apple.com/mac/">www.apple.com/mac/</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">mineral oil</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">BP26291</td>
			<td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">white poster board</td>
			<td style="width:171px;">Staples</td>
			<td style="width:132px;">247403</td>
			<td><a href="http://www.staples.com">www.staples.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">polystyrene weighing dish</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">S67091A</td>
			<td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">ImageJ Software</td>
			<td style="width:171px;">National Institutes of Health</td>
			<td style="width:132px;">_</td>
			<td>http://rsb.info.nih.gov/ij/</td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">digital camera</td>
			<td style="width:171px;">Sony</td>
			<td style="width:132px;">DSC-TX7</td>
			<td style="width:185px;"><a href="http://www.store.sony.com">www.store.sony.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">fine forceps</td>
			<td style="width:171px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:132px;">_</td>
			<td><a href="http://www.finescience.com">www.finescience.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">polycarbonate cylinder (drop tube)</td>
			<td style="width:171px;">mcMaster-Carr</td>
			<td style="width:132px;">8585K62</td>
			<td><a href="http://www.mcmaster.com">www.mcmaster.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">flight cylinder (acrylic)</td>
			<td style="width:171px;">mcMaster-Carr</td>
			<td style="width:132px;">8486K943</td>
			<td><a href="http://www.mcmaster.com">www.mcmaster.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">polycarbonate sheets</td>
			<td style="width:171px;">mcMaster-Carr</td>
			<td style="width:132px;">85585K25</td>
			<td><a href="http://www.mcmaster.com">www.mcmaster.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">ring stand (x2)</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">S47808</td>
			<td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">ring support</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">S47791</td>
			<td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">Three-prong extension clamps (x2)</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">05-769-7Q</td>
			<td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">funnel</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:132px;">10-500-3</td>
			<td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">chain clamps (x2)</td>
			<td style="width:171px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">21573-275</td>
			<td><a href="http://www.vwr.com">www.vwr.com</a></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;width:216px;">glass vials</td>
			<td style="width:171px;">VWR</td>
			<td style="width:132px;">66020-198</td>
			<td><a href="http://www.vwr.com/">www.vwr.com</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved method for accurate and rapid measurement of flight performance in drosophila

דרוזופילה הוכיחה להיות מערכת שימושית מודל לניתוח של התנהגות, כוללים טיסה. ההטלה מעורבת בוחן טיסה הראשונית של זבובים לתוך מצופה נפט סיים גליל; גובה נחיתה סיפק מדד של ביצועי טיסה על ידי הערכה איך זבובים רחוקים ייפלו לפני מייצר מספיק דחף ליצור קשר עם הקיר של הגליל. כאן אנו מתארים גרסה מעודכנת של בוחן הטיסה עם ארבעה שיפורים משמעותיים. ראשית, הוספנו &quot;צינור ירידה&quot; כדי להבטיח שכל הזבובים נכנסים לצילינדר הטיסה במהירות דומה בין ניסויים, ביטול השוני בין המשתמשים. שנית, אנו החלפנו את ציפוי שמן ביריעות פלסטיק נשלפים מצופות בסבך-מלכודת, דבק נועד ללכוד חרקים חיים. שלישית, אנו משתמשים בצילינדר יותר כדי לאפשר אפליה מדויקת יותר של יכולת טיסה. הרביעית אנחנו משתמשים במצלמה דיגיטלית ותוכנת הדמיה כדי להפוך את הניקוד של ביצועי טיסה. שיפורים אלה מאפשרים לראפid, הערכה כמותית של טיסה התנהגות, שימושית עבור מערכי נתונים גדולים והמסכים גנטיים בקנה מידה גדולה.

<html> איור 1 א מציג סכמטי של ההרכבה בוחן טיסה המעודכנת. איור 1 מדגים את עיצוב המסלול לאפשר את המצלמה לצילום תמונה פנורמית ללא חסימת שדה הראייה. נציג תוצאות מוצגות באיור 2, שבו ביצועי הטיסה של זבובים מוטנטים זחילה, שיש לי טיסה ידועה פגם 8-10...

Watch this Scientific Journal Video about An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila at JoVE.com

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

כאן אנו מתארים שיטה למדידה מהירה ומדויקת של ביצועי טיסה בדרוזופילה, המאפשרים תפוקה גבוהה הקרנה.

שיטה משופרת למדידה מדויקת והמהירה של טיסה בביצועים<em&gt; דרוזופילה</em

Drosophila has proven to be a useful model system for analysis of behavior, including flight. The initial flight tester involved dropping flies into an ...

an-improved-method-for-accurate-rapid-measurement-flight-performance

Research

JoVE Journal

Biology

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

11.7K Views.  University of Wisconsin-Madison.  כאן אנו מתארים שיטה למדידה מהירה ומדויקת של ביצועי טיסה בדרוזופילה, המאפשרים תפוקה גבוהה הקרנה. 

Video: An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a tremendous amount of data available comes an explosion of genotyping methods. Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. It also has the ability to identify tri-allelic, indels, short-repeat polymorphisms, along with determining allele percentages for methylation or pooled sample assessment. In addition, there is a standardized control sequence that provides internal quality control. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.


Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.

Pyrosequencing: שיטה פשוטה genotyping מדויק

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. As such, visual stabilization of upwind tracking directly aids in odor tracking. But do olfactory signals directly influence visual tracking behavior independently from wind cues? Also, the recent deluge of research on the neurophysiology and neurobehavioral genetics of olfaction in Drosophila has motivated ever more technically sophisticated and quantitative behavioral assays. Here, we modified a magnetic tether system originally devised for vision experiments by equipping the arena with narrow laminar flow odor plumes. A fly is glued to a small steel pin and suspended in a magnetic field that enables it to yaw freely. Small diameter food odor plumes are directed downward over the fly s head, eliciting stable tracking by a hungry fly. Here we focus on the critical mechanics of tethering, aligning the magnets, devising the odor plume, and confirming stable odor tracking.

Here we describe how to tether a fly in an olfactory magnetic-tether (OMT) apparatus. We describe how to align the rare-earth magnets and odor ports, and how to set mass flow rates for both the stimulus delivery and vacuum suction to achieve optimal odor tracking.

מערכת מגנטית לקשור לחקור חזותית חוש הריח בקרת טיסה מתווך תסיסנית

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

Visually Mediated Odor Tracking During Flight in Drosophila

Flying insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals additionally track odors carried in the wind. As such, visual stabilization of upwind tracking directly aids in odor tracking. But do olfactory signals directly influence visual tracking behavior independently from wind cues? Additionally, recent advances in olfactory molecular genetics and neurophysiology have motivated novel quantitative behavioral analyses to assess the behavioral influence of (e.g.) genetically inactivating specific olfactory activation circuits. We modified a magnetic tether system originally devised for vision experiments by equipping the arena with narrow laminar flow odor plumes. Here we focus on experiments that can be performed after a fly is tethered and is able to navigate in the magnetic arena. We show how to acquire video images optimized for measuring body angle, how to judge stable odor tracking, and we illustrate two experiments to examine the influence of visual cues on odor tracking.

Here we describe how to optimize the acquired video image for an olfactory magnetic-tether (OMT) apparatus. We also describe two sample experimental protocols for studying visuo-olfactory fusion.

ראייה ריח מעקב מתווכת במהלך טיסה ב תסיסנית

Flying insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals additionally track odors carried in the wind. As such, visual ...

Endurance Training Protocol and Longitudinal Performance Assays for Drosophila melanogaster

One of the most pressing problems facing modern medical researchers is the surging levels of obesity, with the consequent increase in associated disorders such as diabetes and cardiovascular disease 1-3. An important topic of research into these associated health problems involves the role of endurance exercise as a beneficial intervention.
Exercise training is an inexpensive, non-invasive intervention with several beneficial results, including reduction in excess body fat 4, increased insulin sensitivity in skeletal muscle 5, increased anti-inflammatory and antioxidative responses 6, and improved contractile capacity in cardiomyocytes 7. Low intensity exercise is known to increase mitochondrial activity and biogenesis in humans 8 and mice, with the transcriptional coactivator PGC1-&alpha; as an important intermediate 9,10. 
Despite the importance of exercise as a tool for combating several important age-related diseases, extensive longitudinal genetic studies have been impeded by the lack of an endurance training protocol for a short-lived genetic model species. The variety of genetic tools available for use with Drosophila, together with its short lifespan and inexpensive maintenance, make it an appealing model for further study of these genetic mechanisms. With this in mind we have developed a novel apparatus, known as the Power Tower, for large scale exercise-training in Drosophila melanogaster 11. The Power Tower utilizes the flies' instinctive negative geotaxis behavior to repetitively induce rapid climbing. Each time the machine lifts, then drops, the platform of flies, the flies are induced to climb. Flies continue to respond as long as the machine is in operation or until they become too fatigued to respond. Thus, the researcher can use this machine to provide simultaneous training to large numbers of age-matched and genetically identical flies. Additionally, we describe associated assays useful to track longitudinal progress of fly cohorts during training.

Endurance Training Protocol and Longitudinal Performance Assays for Drosophila melanogaster

We describe the first endurance training protocol for an important genetic model species, Drosophila melanogaster, and outline several assays to chart improvements in mobility following training.

אימון סיבולת פרוטוקול מבחני ביצועים ארוכי טווח עבור תסיסנית melanogaster

One of the most pressing problems facing modern medical researchers is the surging levels of obesity, with the consequent increase in associated disorders ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced physical performance and increased risk of disease. Individual aging is manifest at the population level as an increase in age-dependent mortality, which is often measured in the laboratory by observing lifespan in large cohorts of age-matched individuals. Experiments that seek to quantify the extent to which genetic or environmental manipulations impact lifespan in simple model organisms have been remarkably successful for understanding the aspects of aging that are conserved across taxa and for inspiring new strategies for extending lifespan and preventing age-associated disease in mammals.
The vinegar fly, Drosophila melanogaster, is an attractive model organism for studying the mechanisms of aging due to its relatively short lifespan, convenient husbandry, and facile genetics. However, demographic measures of aging, including age-specific survival and mortality, are extraordinarily susceptible to even minor variations in experimental design and environment, and the maintenance of strict laboratory practices for the duration of aging experiments is required. These considerations, together with the need to practice careful control of genetic background, are essential for generating robust measurements. Indeed, there are many notable controversies surrounding inference from longevity experiments in yeast, worms, flies and mice that have been traced to environmental or genetic artifacts1-4. In this protocol, we describe a set of procedures that have been optimized over many years of measuring longevity in Drosophila using laboratory vials. We also describe the use of the dLife software, which was developed by our laboratory and is available for download (<a href="http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software">http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software</a>). dLife accelerates throughput and promotes good practices by incorporating optimal experimental design, simplifying fly handling and data collection, and standardizing data analysis. We will also discuss the many potential pitfalls in the design, collection, and interpretation of lifespan data, and we provide steps to avoid these dangers.

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is a powerful model organism for exploring the molecular basis of longevity regulation. This protocol will discuss the steps involved in generating a reproducible, population-based measurement of longevity as well as potential pitfalls and how to avoid them.

מדידה של תוחלת חיים ב<em&gt; דרוזופילה melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

An Innovative Method for Exosome Quantification and Size Measurement

Although the biological importance of exosomes has recently gained an increasing amount of scientific and clinical attention, much is still unknown about their complex pathways, their bioavailability and their diverse functions in health and disease. Current work focuses on the presence and the behavior of exosomes (in vitro as well as in vivo) in the context of different human disorders, especially in the fields of oncology, gynecology and cardiology.
Unfortunately, neither a consensus regarding a gold standard for exosome isolation exists, nor is there an agreement on such a method for their quantitative analysis. As there are many methods for the purification of exosomes and also many possibilities for their quantitative and qualitative analysis, it is difficult to determine a combination of methods for the ideal approach. 
Here, we demonstrate nanoparticle tracking analysis (NTA), a semi-automated method for the characterization of exosomes after isolation from human plasma by ultracentrifugation. The presented results show that this approach for isolation, as well as the determination of the average number and size of exosomes, delivers reproducible and valid data, as confirmed by other methods, such as scanning electron microscopy (SEM).

A method for isolation of exosomes from whole blood and further analysis by nanoparticle tracking using a semi-automatic instrument is presented in this article. The presented technology provides an extremely sensitive method for visualizing and analyzing particles in liquid suspension.

שיטה חדשנית לExosome כימות ומדידה גודל

Although the biological importance of exosomes has recently gained an increasing amount of scientific and clinical attention, much is still unknown about ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial scientific task. Many disease causing genes in humans have a fly homologue, making Drosophila a good model to study signaling pathways involved in the development of different disorders. Additionally, the tractability of Drosophila simplifies genetic screens to aid in identifying novel therapeutic targets that may regulate metabolism. In order to perform such a screen a simple and fast method to identify changes in the metabolic state of flies is necessary. In general, carbon dioxide production is a good indicator of substrate oxidation and energy expenditure providing information about metabolic state. In this protocol we introduce a simple method to measure CO2 output from flies. This technique can potentially aid in the identification of genetic perturbations affecting metabolic rate.

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolic disorders are among one of the most common diseases in humans. The genetically tractable model organism D. melanogaster can be used to identify novel genes that regulate metabolism. This paper describes a relatively simple method which allows studying the metabolic rate in flies by measuring their CO2 production.

מדידה של קצב חילוף החומרים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; באמצעות Respirometry

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad to extract cellular DNA from whole blood in less than 2 min. The blood specimen is treated with detergent, mixed briefly and applied by pipet to the separation membrane. The lysate wicks into the blotting pad due to capillary action, capturing the genomic DNA on the surface of the separation membrane. The extracted DNA is retained on the membrane during a simple wash step wherein PCR inhibitors are wicked into the absorbent blotting pad. The membrane containing the entrapped DNA is then added to the PCR reaction without further purification. This simple method does not require laboratory equipment and can be easily implemented with inexpensive laboratory supplies. Here we describe a protocol for highly sensitive detection and quantitation of HIV-1 proviral DNA from 100 &#181;l whole blood as a model for early infant diagnosis of HIV that could readily be adapted to other genetic targets.

We describe here a simple and rapid paper-based DNA extraction method of HIV proviral DNA from whole blood detected by quantitative PCR. This protocol can be extended for use in detecting other genetic markers or using alternative amplification methods.

בידוד סינון של חומצות גרעין: שיטת הפקת DNA פשוטה ומהירה

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some plant cells have rigid cell walls, tough fibers and crystals (calcium oxalate, silica, etc.), and high water content that often disrupt tissue integrity during plant tissue sectioning.
This study establishes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method. This protocol modifies a paraffin-based sectioning technique and improves the integrity of tissue sections from different plants. Plant tissues were embedded in paraffin before sectioning in a cryostat at -16 &#176;C. Sectioning under low temperature hardened the paraffin blocks, reduced tearing and scratching, and improved tissue integrity significantly. This protocol was successfully applied to calcium oxalate-rich Phalaenopsis orchid tissues as well as recalcitrant tissues such as reproductive organs and leaves of rice, maize, and wheat. In addition, the high quality of tissue sections from Hybrid-Cut could be used in combination with in situ hybridization (ISH) to provide spatial expression patterns of genes of interest. In conclusion, this protocol is particularly useful for recalcitrant plant tissue containing high crystal or silica content. Good quality tissue sections enable morphological and other biological studies.

This protocol describes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method that is useful for recalcitrant plant tissues. Good quality tissue sections enable anatomical studies and other biological studies including in situ hybridization (ISH).

-Cut ההיברידי: שיטת חתך משופרת עבור דוגמאות רקמות צמח סרבן

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

Optical Cross-Sectional Muscle Area Determination of Drosophila Melanogaster Adult Indirect Flight Muscles

Muscle mass wasting, known as muscle atrophy, is a common phenotype in Drosophila models of neuromuscular diseases. We have used the indirect flight muscles (IFMs) of flies, specifically the dorso-longitudinal muscles (DLM), as the experimental subject to measure the atrophic phenotype brought about by different genetic causes. In this protocol, we describe how to embed fly thorax muscles for semi thin sectioning, how to obtain a good contrast between muscle and the surrounding tissue, and how to process optical microscope images for semiautomatic acquisition of quantifiable data and analysis. We describe three specific applications of the methodological pipeline. First, we show how the method can be applied to quantify muscle degeneration in a myotonic dystrophy fly model; second, measurement of muscle cross-sectional area can help to identify genes that either promote or prevent muscle atrophy and/or muscle degeneration; third, this protocol can be applied to determine whether a candidate compound is able to significantly modify a given atrophic phenotype induced by a disease-causing mutation or by an environmental trigger.

Optical Cross-Sectional Muscle Area Determination of Drosophila Melanogaster Adult Indirect Flight Muscles

We report a method to quantify muscle area, which is an indirect method to determine muscle mass in Drosophila adults. We demonstrate the application of our methodology by analyzing the indirect flight muscles in a Drosophila model of Myotonic Dystrophy disease.

קביעת אזור שרירים חתך הרוחב אופטי שרירי תעופה עקיף למבוגרים דרוזופילה Melanogaster

Muscle mass wasting, known as muscle atrophy, is a common phenotype in Drosophila models of neuromuscular diseases. We have used the indirect flight ...