עבודה זו נתמכה על ידי מימון מקרן אליסון הרפואי (SDP, <a href="http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp" target="_blank">http://www.ellisonfoundation.org/index.jsp),</a> NIH K01AG031917 (NJL, <a href="http://www.nih.gov" target="_blank">http://www.nih.gov/),</a> NIH 5T32GM007315-35 (JR) וNIH R01AG030593 (SDP). עבודה זו מנוצלת משאבים של דרוזופילה הזדקנות Core (DAC) של מרכז ההלם נתן למצוינות בביולוגיה של ההזדקנות מומן על ידי המכון הלאומי להזדקנות P30-AG-013283 <a href="http://www.nih.gov" target="_blank">(http://www.nih.gov/).</a> המחברים מבקשים להודות למעבדת Pletcher לדיונים מועילים ובעיקר בריאן Chung לקריאה ביקורתית של כתב היד. ברצוננו להודות ניק אשר וקתרין Borowicz לסיוע באיסוף נתונים.

אנו ממליצים אחסון מזונות ניסיוניים, רסק שמרים, וצלחות אגרו ענבים המופיעים בפרוטוקול ב 4 ° C ושימוש בם תוך 1-2 חודשים, כל עוד עובש ויובש לא להגדיר פנימה תנאים סביבתיים רגילים לזחל והן למבוגרים לביים כרוך תחזוקה של זבובים בחממה ב 25 ° C עם מחזור 12:12 שעתי אור חושך ולחות יחסית 60%. 1. הכנת מזון ניסויי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתפתחות רימות, אנו משתמשים modified קלטק בינוני 5, וזה מצוין בפרוטוקול זה כCT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנו ממליצים על תזונה למבוגרת דרוזופילה (ש&quot;י) שמורכבת מסוכר (סוכרוז) ושמרים (שמרים שלם שיכר lyophilized) בשיעור של 2% בסיס אגר, כי כבר רתח, בתוספת אנטיביוטיקה ותרופות אנטי פטרייתי, והופצנו (10 מ&quot;ל לבקבוקון) 6. מזון צריך להיות מותר כדי לגבש ומתאדה ל12-24 שעות לפני האחסון. משום שהסביבה התזונתית יכולה substantially אריכות השפעה, עקביות בתהליכי בישול היא חיונית גם בתוך ניסוי ולהשוואה בין ניסויים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם תרופתי הוא שיש להוסיף למזון למבוגר, תרופה זו יכולה להיות מעורבת לתוך יצווה קטנה של מזון ושכבתי (2 מ&quot;ל) על פני האוכל, עם צלוחיות בקרה המקבלים שכבות המכילות רכב לבדו. </li></ol> 2. הכנת דבק שמרים חי שלב 5-6 מיליליטר מים עם 3 גרם של שמרים יבשים פעילים ומערבב היטב. העקביות של רסק השמרים צריכה להיות זה של חמאת בוטנים חלקה. 3. הכנת צלחת אגרה ענבים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף חבילת premix אגר בענבי 500 מ&quot;ל של מים מזוקקים בבקבוק 1000 מ&quot;ל ובצע את ההוראות שעל השקית לפזר את התערובת אגרה ענבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהירות לשפוך שכבה עבה של התערובת לתוך צלחות פטרי 100 מ&quot;מימ תוך הימנעות היווצרות בועה. מנה אחת premix מייצרת כ 14 graצלחות אגר PE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו התקשורת להתקרר ולהתמצק בטמפרטורת חדר עם מכסים למשך 15 דקות. צלחות יכולות להיות כל זמן ב 4 ° C, עטוף בניילון נצמד, או בשימוש באופן מיידי. </li></ol> 4. אוסף של ביצים מסונכרנות כל כלי התקשורת בשימוש בפרוטוקול זה, שמרים כלומר, צלחות אגרו ענבים, CT ו 10% מזון ש&quot;י, צריכה להיות בטמפרטורת חדר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורחי שכבת 2-3 סנטימטר קוטר של שמרים להדביק על צלחת אגרה ענבים ומניחים בצד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצב כלוב אוסף ביצה גדולה על משטח CO 2 עם הרשת בצד למטה כדי להרדים את הזבובים. הרדמת חנקן מבוסס היא חלופה לCO 2, בשימוש על ידי מעבדות מסוימות, שיכול להפיק תוצאות באיכות גבוהה 7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במשפך, להעביר 150-200 זוגות של זבובים לכלוב איסוף הביצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הצלחת אגרה ענבים כדי לכסות את הקצה הפתוח של הכלוב ולאבטח עם כובע סוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הכלוב בצד הדרך עד זבובים מתעוררים.לאחר מכן, לשמור את כלוב צד הצלחת, הענבים אגרו למטה, בחממה בן לילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום המחרת, להחליף את צלחת ענבים עם צלחת ענבים חדשים yeasted. לשים רק על 1 סנטימטר קוטר של רסק שמרים על פני השטח של הצלחת. השלך את צלחת ענבי יום 1 st. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר לאסוף עוברים על פני השטח של הצלחת אגרה ענבים ל16-22 שעות. פעם עשה, לאסוף את הצלחת אגרה ענבים ולהשליך את הזבובים ההוריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את פני השטח של הצלחות אגרו ענבים עם 1x נאגר מלוח פוספט (PBS). ביצים יכולות להיות מגויסות על ידי גירוד בעדינות עם צמר גפן. הקפידו לא שריטה, ניזק, או לגרד חתיכות דקות של אגר מעל פני השטח של הצלחת. בעזרת משפך, יוצק את הביצים נשטפו לצינור 15 מיליליטר חרוטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן את הביצים ליישב לתחתית של התחתית ויוצקות את supernatant, נזהר שלא לאבד את כל ביצים. הנפח שנותר צריך להיות בסביבות 2-3 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 8-10 מ&quot;ל של PBS לצינור וחזור מעל צעד 2-3 המורזמני דואר ללשטוף ביסודיות את הביצים עד supernatant הוא ברור. איך להיפטר של שמרי שיורים הוא המפתח בשלב זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר השטיפה, לנקז את כל supernatant עד נפח נותר הוא 2 מ&quot;ל. Aliquot 32 μl של ביצים לתוך בקבוקי CT באמצעות קצה פיפטה רחב משעמם. ביצים בקצה פיפטה צריכות להיות קומפקטיות, עם מעט נוזל aspirated. זו יכולה להיות מושגת על ידי הכנסת קצה פיפטה עמוקה לתוך יישוב הביצה ומשחרר את הבוכנה כדי לשאוב במהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום seeded CT בקבוקים מייד בחממה לאורך התפתחות זבוב. </li></ol> 5. אוסף של מבוגרי גיל מתאים זבובים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבוגרים בדרך כלל eclose מהיום 9 והלאה. השלך את הזבובים שעלו ביום הראשון ובקבוקים מכניסים ללילה החממה. בפועל זה ימנע את הבחירה שלא במתכוון לעולה וצומח מוקדמים ולאפשר לאוסף של מספר מרבי של זבובים מסונכרנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 16-22 שעות מאוחר יותר, להעביר את המבוגר בן יום עף into בקבוקי SY מזון 10%. במידת צורך, עוד סדרה ניתן לאסוף ביום למחרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור עף חזרה לחממה ולאפשר זבובים כדי להגיע לבגרות מינית ובן זוג לימים. הקלט את היום של העברה לבקבוקי 10% SY כמו ביום הראשון של בגרות. </li></ol> 6. מיון זבובים וביצוע ניסוי אריכות ימים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדם קבוצות קטנות של זבובים על משטח ההרדמה, אז זכרים ונקבות מיון לשתי קבוצות באמצעות מכחול. אם אתם משתמשים בCO 2, זה קריטי כדי לצמצם את החשיפה כדי למנוע בעיות ארוכות טווח בריאותי אפשריות שיכול לסכן את היושרה של ניסוי אריכות הימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח 30 זבובים מאותו המין לצלוחיות אישיות. בהנחה שאין כרומוזומים איזון באוכלוסייה והצאצאים בריאים, כל בקבוק צריך לייצר סביב 3-4 בקבוקונים של כל מין. Aliquoting זבובים לתוך צלוחיות בודדות צריכה לקחת לא יותר מ 3-4 דקות, כך ש, בסך הכל, זבובים נחשפים להרדמה רק לתקופה מקסימלית של9-10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 6.1-6.2 עד שיש 8-10 בקבוקון משכפל לכל מגדר וטיפול ניסיוני. </li></ol> 7. הגדרת הגיליון האלקטרוני של Excel כדי לעקוב אחר ניסוי אריכות הימים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנו ממליצים אקראיים עמדת בקבוקון במקום בקבוקוני קיבוץ בתנאי ניסוי כדי למנוע הטיה קשורה למיקום הבקבוקון בחממה ולטשטש את זהות הבקבוקון לנסיין. לשם כך, תקצה זיהוי מספרים אקראי לכל בקבוקון בתוכנת גיליונות אלקטרוניים ראשון, ואז לסדר את הבקבוקונים במגשים על ידי מספר תעודת זהות. אם אתה משתמש בתוכנת ניהול ניסוי dLife, בצע את ההדרכה על הגדרת ניסוי להפקת מספר זיהוי לכל בקבוקון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (אופציונלי) אם אתה משתמש בקורא RFID או קורא ברקוד בשיתוף עם dLife, לצרף RFID או תג הברקוד לכל בקבוקון ולשייך את התג עם המזהה המספרי של הבקבוקון בdLife. התכנית תזהה כל בקבוקון כשסרק עם קוראומדריך אחד כדי להקליט את הנתונים במיקום הנכון בגיליון אלקטרוני. שימוש בקורא תג בשיתוף עם dLife מפחית באופן משמעותי זמן איסוף נתונים וטעות הקלטה. </li></ol> 8. שמירת ניסוי אריכות הימים הבקבוקונים המכילים מזון טרי צריכים להיות בטמפרטורת חדר במשך כל העברה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך תקופת הניסוי, זבובי העברה על גבי בקבוקונים חדשים המכילים מזון טרי כל 2 ימים (נקבות צעירות), או 3 פעמים בשבוע (זכרים או נקבות&gt; 3 שבועות של גיל). צעד זה יבטיח שסביבת ההאכלה לנקבות צעירות לא תופרע על ידי הנוכחות של זחלים. העברה זו אמורה להסתיים ללא הרדמה, שיכול לגרום לתמותה חריפה, במיוחד בזבובים בוגרים יותר (Pletcher, תצפיות אישיות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך כל העברת בקבוקון, להקליט גיל, לספור את הזבובים המתים בבקבוקון הישן, והזבובים המתים שמתבצעים לבקבוקון החדש. לתעד מידע זה בנפרד בשתי עמודות בגיליון אלקטרוני (או dLife או הגיליון האלקטרוני שלך). זה יבטיח כי בצע את הזבובים הם לא כפול נספרו-. המספר הכולל של מקרי מוות (מת + ממומן) צריך לפחות שווה במספר הזבובים שבוצעו מההעברה הקודמת. להפחית את מספר הזבובים שבוצעו בעבר מהמספר הכולל של מקרי מוות, כדי לקבוע את מספר מקרי המוות חדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זבוב נחשב ימני מצונזר אם הוא עזב את הניסוי לפני המוות טבעי באמצעות בריחה או מוות מתאונה. חיות יוצאות בניסוי באופן זה צריכה להיות נכנס לתוך עמודה נפרדת ביום שהזבוב יצא הניסוי. זבובים מצונזרים הם לא נרשמו כמתים (ראו להלן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמשיך לחזור על שלבים 8.1-8.2 עד הניצול האחרון מת. להיות מודע לכך שככל שגיל הזבובים, כמה זבובים יכולים לשכב על הגב ונראו כמת עקב inactiveness. לכן כאשר סופרים זבובים בצעו (מת), קש בצד של הבקבוקונים כדי לקבוע אם יש תנועות רגליים. אם כן, thesזבובים אלקטרוניים הם עדיין בחיים. במקרה שבו זבובים נדבקים למזון בבקבוקון הישן, אבל בחיים, הם לא צריכים להיחשב כמתים וצריכים להינצל על ידי קשה של בקבוקון נוסף כדי לסלק זבוב. זבובים כאלה לצנזר יש להשתמש בזהירות כפי שהוא עלול לגרום להטיה ניסיונית. </li></ol> 9. ניתוח נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקומת שאירים מציגה את ההסתברות שאדם ישרוד לגיל מסוים ובדרך כלל מחושב באמצעות גישת קפלן-מאייר (איור 1) 8. בהיעדר נתונים נכוני צנזורה, הנוסחא ניתן לפשט שאירים כך שהגיל ספציפי בגיל x (S x) נקבע על ידי חלוקת מספר אנשי חיים בתחילת זמן מפקד בגיל x (N x) במספר הכולל של זבובים בניסוי (N 0); S x = N X / N 0. 9.2) עקומות שארות הן הצורה הנפוצה ביותר של הצגת נתונים, והםניתן לבדוק את השוויון בין קבוצות באמצעות מבחן יומן משורה ראשונה. מסקנה הגיונית ניתן להסיק מכמה כמו 50-100 אנשים בקבוצה. אירי הוא מדד מצטבר, לעומת זאת, ולכן מוות שאינו הזדקנות קשורה, כגון אלה בשלב מוקדם בחיים, יהיה לדכא שאירים במהלך חיים ולכן קשה להשפעות ספציפיות להזדקנות לקבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיטת הדמית נתונים שנייה היא פונקצית תמותת גיל הספציפית, המציגה את הסיכון למוות בכל מרווח גיל ומציג תיאור מורכב יותר של נתוני הישרדות 9,10. מדדי תמותה הם עצמאיים מגיל אחד למשנו, והצורה של עקומת התמותה שימושית להיסק על הדינמיקה של הזדקנות, במיוחד כאשר טיפולים מותאמים במהלך חיים בוגרים. אומדני תמותת גיל ספציפי, לעומת זאת, חסרי דיוק וגם דיוק עם גודל מדגם קטן, ולעתים קרובות דורשים כמה למאות רבות של אנשים לקבוצה לes אמיןtimate 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיטות אחרות לאמידת הבדלי אריכות ימים כוללות מודלים למחצה פרמטריים (למשל קוקס רגרסיה) פרמטרית (למשל Gompertz) ו. מודלים אלה יכולים להיות חזקים, אבל צריכים להיות מיושמים בזהירות בגלל ההנחות שנעשו על הצורה של עקומות התמותה והאופי של שפעות טיפול, דבר שעלול להוביל למסקנה שגויה 11,12. </li></ol>

<ol>
	<li>Toivonen, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=No+influence+of+Indy+on+lifespan+in+Drosophila+after+correction+for+genetic+and+cytoplasmic+background+effects.">No influence of Indy on lifespan in Drosophila after correction for genetic and cytoplasmic background effects.</a> PLoS Genet. 3, e95 (2007).</li><li>Spencer, C. C., Howell, C. E., Wright, A. R., Promislow, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+an+'aging+gene'+in+long-lived+drosophila+strains:+increased+longevity+depends+on+sex+and+genetic+background.">Testing an 'aging gene' in long-lived drosophila strains: increased longevity depends on sex and genetic background.</a> Aging Cell. 2, 123-130 (2003).</li><li>Burnett, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+effects+of+Sir2+overexpression+on+lifespan+in+C.+elegans+and+Drosophila.">Absence of effects of Sir2 overexpression on lifespan in C. elegans and Drosophila.</a> Nature. 477, 482-485 (2011).</li><li>Bokov, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+reduced+IGF-1R+signaling+in+Igf1r+/-+mice+alter+aging?.">Does reduced IGF-1R signaling in Igf1r+/- mice alter aging?.</a> PLoS One. 6, e26891 (2011).</li><li>Lewis, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+standard+food+medium.">A new standard food medium.</a> Drosophila Information Service. 34, 117-118 (1960).</li><li>Skorupa, D. A., Dervisefendic, A., Zwiener, J., Pletcher, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+composition+specifies+consumption,+obesity,+and+lifespan+in+Drosophila+melanogaster.">Dietary composition specifies consumption, obesity, and lifespan in Drosophila melanogaster.</a> Aging Cell. 7, 478-490 (2008).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila PGC-1 homolog.</a> Cell Metab. 14, 623-634 (2011).</li><li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonparametric+Estimation+from+Incomplete+Observations.">Nonparametric Estimation from Incomplete Observations.</a> Journal of the American Statistical Association. 53, 457-481 (1958).</li><li>Pletcher, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitigating+the+Tithonus+Error:+Genetic+Analysis+of+Mortality+Phenotypes.">Mitigating the Tithonus Error: Genetic Analysis of Mortality Phenotypes.</a> Sci. Aging Knowl. Environ. 2002, pe14 (2002).</li><li>Pletcher, S. D., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+do+life+spans+differ?+Partitioning+mean+longevity+differences+in+terms+of+age-specific+mortality+parameters.">Why do life spans differ? Partitioning mean longevity differences in terms of age-specific mortality parameters.</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 55, 381-389 (2000).</li><li>Promislow, , Tatar, , Pletcher, , Carey, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Below-threshold+mortality:+implications+for+studies+in+evolution,+ecology+and+demography.">Below-threshold mortality: implications for studies in evolution, ecology and demography.</a> Journal of Evolutionary Biology. 12, 314-328 (1999).</li><li>Pletcher, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+fitting+and+hypothesis+testing+for+age-specific+mortality+data.">Model fitting and hypothesis testing for age-specific mortality data.</a> Journal of Evolutionary Biology. 12, 430-439 (1999).</li><li>Partridge, L., Gems, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benchmarks+for+ageing+studies.">Benchmarks for ageing studies.</a> Nature. 450, 165-167 (2007).</li><li>Roman, G., Endo, K., Zong, L., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P[Switch],+a+system+for+spatial+and+temporal+control+of+gene+expression+in+Drosophila+melanogaster.">P[Switch], a system for spatial and temporal control of gene expression in Drosophila melanogaster.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98, 12602-12607 (2001).</li><li>Ford, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+Drosophila+life+span+using+conditional,+tissue-specific+expression+of+transgenes+triggered+by+doxycyline+or+RU486/Mifepristone.">Alteration of Drosophila life span using conditional, tissue-specific expression of transgenes triggered by doxycyline or RU486/Mifepristone.</a> Exp. Gerontol. 42, 483-497 (2007).</li><li>Priest, N. K., Mackowiak, B., Promislow, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+parental+age+effects+on+the+evolution+of+aging.">The role of parental age effects on the evolution of aging.</a> Evolution. 56, 927-935 (2002).</li><li>Smith, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+Drosophila+a+biotin-deficient+diet+for+multiple+generations+increases+stress+resistance+and+lifespan+and+alters+gene+expression+and+histone+biotinylation+patterns.">Feeding Drosophila a biotin-deficient diet for multiple generations increases stress resistance and lifespan and alters gene expression and histone biotinylation patterns.</a> J. Nutr. 137, 2006-2012 (2007).</li><li>Sorensen, J. G., Loeschcke, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larval+crowding+in+Drosophila+melanogaster+induces+Hsp70+expression,+and+leads+to+increased+adult+longevity+and+adult+thermal+stress+resistance.">Larval crowding in Drosophila melanogaster induces Hsp70 expression, and leads to increased adult longevity and adult thermal stress resistance.</a> J. Insect Physiol. 47, 1301-1307 (2001).</li><li>Bass, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+dietary+restriction+protocols+in+Drosophila.">Optimization of dietary restriction protocols in Drosophila.</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 62, 1071-1081 (2007).</li><li>Miquel, J., Lundgren, P. R., Bensch, K. G., Atlan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+temperature+on+the+life+span,+vitality+and+fine+structure+of+Drosophila+melanogaster.">Effects of temperature on the life span, vitality and fine structure of Drosophila melanogaster.</a> Mechanisms of Ageing and Development. 5, 347-370 (1976).</li><li>Pittendrigh, C. S., Minis, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+systems:+longevity+as+a+function+of+circadian+resonance+in+Drosophila+melanogaster.">Circadian systems: longevity as a function of circadian resonance in Drosophila melanogaster.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 1537-1539 (1972).</li><li>Joshi, A., Mueller, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+crowding+effects+on+longevity+in+Drosophila+melanogaster:+Increase+in+age-dependent+mortality.">Adult crowding effects on longevity in Drosophila melanogaster: Increase in age-dependent mortality.</a> Current Science. 72, 255-260 (1997).</li><li>Ja, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prandiology+of+Drosophila+and+the+CAFE+assay.">Prandiology of Drosophila and the CAFE assay.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 8253-8256 (2007).</li><li>Lee, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan+and+reproduction+in+Drosophila:+New+insights+from+nutritional+geometry.">Lifespan and reproduction in Drosophila: New insights from nutritional geometry.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 2498-2503 (2008).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Experimental gerontology. 40, 386-395 (2005).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

הפרוטוקול המובא כאן מתאר שיטה להפקת מדידות לשעתק לאריכות ימים בוגרות בדרוזופילה שניתן ליישם לצורך ההערכה של התערבויות גנטיות, תרופתיות וסביבתיות. היבטים חשובים של הפרוטוקול כוללים שליטה בזהירות את סביבת פיתוח הזחל, צמצום מתח למבוגרים, ומזעור הטיה על פני קבוצו?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> שמרים יבשים פעילים </td><td> השמרים של פליישמן </td><td> 2192 </td><td></td></tr><tr><td> Premix אבקה אגר ענבים </td><td> Genesee מדעי </td><td> 47-102 </td><td></td></tr><tr><td> כלובי איסוף Embryo גדולים </td><td> Genesee מדעי </td><td> 59-101 </td><td></td></tr><tr><td> Caps End החלפה הגדול </td><td> Genesee מדעי </td><td> 59-103 </td><td></td></tr><tr><td> 6 בקבוקי עוז כיכר תחתונה, פוליפרופילן </td><td> Genesee מדעי </td><td> 32-130 </td><td></td></tr><tr><td> סגרי Flugs לבקבוקי מניות </td><td> Genesee מדעי </td><td> 49-100 </td><td></td></tr><tr><td> דרוזופילהבקבוקונים, רחב, Polystrene </td><td> Genesee מדעי </td><td> 32-117 </td><td></td></tr><tr><td> סגרי Flugs לבקבוקוני Wide </td><td> Genesee מדעי </td><td> 49-101 </td><td></td></tr><tr><td> טיפי Wide Orifice Aardvark Pipet, 200 ul </td><td> Denville מדעי </td><td> P1105-CP </td><td></td></tr><tr><td> Flystuff Flypad, גודל אחיד </td><td> Genesee מדעי </td><td> 59-114 </td><td></td></tr><tr><td> פלקון 15 צינורות חרוטי BD צנטריפוגות מ&quot;ל </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 14-959-70C </td><td></td></tr><tr><td> צלחות פטרי Fisherbrand עם מכסים שקופים, העלה רכס; 100 OD x 15 המ&quot;מ H; </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 08-757-12 </td><td></td></tr><tr><td> Kimax * Colorware צלוחיות 1000 מ&quot;ל צהוב </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 10-200-47 </td><td></td></tr><tr><td> PBS pH 7.4 10x </td><td> בתוךvitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> אגר Gelidium </td><td> Mooragar </td><td> n / </td><td></td></tr><tr><td> שמרי הבירה </td><td> Biomedicals MP </td><td> 0290331280 </td><td></td></tr><tr><td> סוכר </td><td> קרוגר </td><td> n / </td><td></td></tr><tr><td> Tegosept </td><td> Genesee מדעי </td><td> 20-266 </td><td> טוס משמר מזון </td></tr><tr><td> חומצת Propionic, 99% </td><td> אורגניקס acros </td><td> 149300025 </td><td> טוס משמר מזון </td></tr><tr><td> סולפט Kanamycin </td><td> ISC BioExpress </td><td> 0408-10G </td><td></td></tr><tr><td> טטרציקלין HCl </td><td> VWR </td><td> 80058-724 </td><td></td></tr></tbody></table>

measurement of lifespan in drosophila melanogaster

הזדקנות היא תופעה שגורם להידרדרות פיזיולוגית מתמדת בכל כמעט אורגניזמים שבו זה כבר נבדק, מוביל לביצועים פיסיים מופחתים ועלייה בסיכון למחלה. הזדקנות אדם היא מניפסט ברמת האוכלוסייה כעלייה בתמותה תלויה גיל, אשר לעתים קרובות שנמדדה במעבדה על ידי התבוננות תוחלת חיים בקבוצות גדולות של אנשי גיל מתאים. ניסויים המבקשים לכמת את המידה שבה גנטית או סביבתית מניפולציות השפעת תוחלת החיים באורגניזמים מודל פשוטים הייתה מוצלחת להפליא להבנת ההיבטים של הזדקנות, הנשמרים על פני מינים ועל אסטרטגיות חדשות להארכת תוחלת חיים מעוררי השראה ומניעת גיל הקשורים למחלה ביונקים . זבוב החומץ, דרוזופילה melanogaster, הוא אורגניזם מודל אטרקטיבי לחקר מנגנוני הזדקנות, בשל אורך חיים הקצרים יחסית, גידול נוח, ושטחית גנטיקה.עם זאת, צעדים דמוגרפיים של הזדקנות, כולל הישרדות גיל ספציפי ותמותה, הם רגישים במיוחד אפילו שינויים קלים בעיצוב וסביבה ניסיוניים, והתחזוקה של נהלים מחמירים למעבדת משך ניסויי הזדקנות נדרשה. שיקולים אלה, יחד עם הצורך לתרגל שליטה קפדנית של רקע גנטי, הם חיוניים ליצירת מדידות חזקות. ואכן, יש הרבה מחלוקות בולטות המקיפות היקש מניסויי מאריך חיים בשמרים, תולעים, זבובים ועכברים שהיו לייחס לחפצים סביבתיים או גנטיים 1-4. בפרוטוקול זה, אנו מתארים מערכת הנהלים שהיו מותאמים לאורך שנים רבות של מדידת אריכות ימים בדרוזופילה באמצעות בקבוקוני מעבדה. גם אנו מתארים את השימוש בתוכנת dLife, אשר פותח על ידי המעבדה שלנו, והוא זמין להורדה <a href="http://sitemaker.umich.edu/pletcherlab/software">(http://sitemaker.umich.edu/ple</a>tcherlab / תוכנה). dLife מאיץ את התפוקה ומקדמת שיטות עבודה טובות בעיצוב ניסיוני אופטימלי שילוב, פישוט טיפול זבוב ואיסוף נתונים, ניתוח נתונים ותקנון. נדונונו גם את החסרונות הפוטנציאליים רבים בתכנון, איסוף, ופרשנות של נתוני תוחלת חיים, ואנו מספקים צעדים כדי למנוע סכנות אלה.

ערכה פשוטה של הפרוטוקול מוצגת באיור 1, שבו מתוארים שלבים עיקריים. חלק הסנכרון של הפרוטוקול יכול לשמש למבחנים שונים הדורשים זבובים בוגרים שגילו מותאם. עקומות שארות אופייניות של זבובי סוג פראי מוצגות באיור 2a, באמ?...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster at JoVE.com

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

דרוזופילה melanogaster הוא אורגניזם מודל רב עצמה לחקר הבסיס המולקולרי של ויסות אריכות ימים. פרוטוקול זה יעסוק השלבים הכרוכים ביצירת מדידה לשחזור, המבוסס על אוכלוסייה של אריכות ימים, כמו גם בעיות פוטנציאליות וכיצד להימנע מהם.

מדידה של תוחלת חיים ב<em&gt; דרוזופילה melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

measurement-of-lifespan-in-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

34.0K Views.  University of Michigan. דרוזופילה melanogaster הוא אורגניזם מודל רב עצמה לחקר הבסיס המולקולרי של ויסות אריכות ימים. פרוטוקול זה יעסוק השלבים הכרוכים ביצירת מדידה לשחזור, המבוסס על אוכלוסייה של אריכות ימים, כמו גם בעיות פוטנציאליות וכיצד להימנע מהם.

Video: Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to examine the expression of various novel and marker proteins.  Staining of whole larvae is impractical because the tough cuticle prevents antibodies from penetrating inside the body cavity.  In order to stain these tissues it is necessary to dissect the animal prior to fixing and staining.  In this article we demonstrate how to dissect Drosophila larvae without damaging the CNS.  Begin by tearing the larva in half with a pair of fine forceps, and then turn the cuticle "inside-out" to expose the CNS.  If the dissection is performed carefully the CNS will remain attached to the cuticle.  We usually keep the CNS attached to the cuticle throughout the fixation and staining steps, and only completely remove the CNS from the cuticle just prior to mounting the samples on glass slides.  We also show some representative images of a larval CNS stained with Eve, a transcription factor expressed in a subset of neurons in the CNS.  The article concludes with a discussion of some of the practical uses of this technique and the potential difficulties that may arise.

In this article we demonstrate how to dissect the central nervous system from third instar Drosophila larvae.

Dissection של מערכת העצבים המרכזית הזחל ב תסיסנית melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field. Studying locomotor behavior in Drosophila melanogaster relies on the ability to be able to quantify changes in motion during or in response to a given task. For this reason, a high-resolution video tracking system, such as the one we describe in this paper, is a valuable tool for measuring locomotion in real-time. Our protocol involves the use of an initial air pulse to break the flies momentum, followed by a thirty second filming period in a square chamber. A tracking program is then used to calculate the instantaneous speed of each fly within the chamber in 10 msec increments. Analysis software then compiles this data, and outputs a variety of parameters such as average speed, max speed, time spent in motion, acceleration, etc. This protocol will discuss proper feeding and management of flies for behavioral tasks, handling flies without anesthetization or immobilization, setting up a controlled environment, and running the assay from start to finish.

The study of complex locomotor behavior in Drosophila melanogaster is dependent upon the ability to quantify changes in a given fly's movement. This article demonstrates how to do this using a high-resolution tracking system.

וידאו ברזולוציה גבוהה של מעקב אחר תנועה של מבוגרים תסיסנית melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained and restrained whole larvae. For direct control of the environment around the heart another approach utilizes the dissected larvae and removal of the internal organs in order to bathe the heart in desired compounds. The exposed heart also allows membrane potentials to be monitored which can give insight of the ionic currents generated by the myocytes and for electrical conduction along the heart tube. These approaches have various advantages and disadvantages for future experiments that are discussed. The larval heart preparation provides an additional model besides the Drosophila skeletal NMJ to investigate the role of intracellular calcium regulation on cellular function. Learning more about the underlying ionic currents that shape the action potentials in myocytes in various species, one can hope to get a handle on the known ionic dysfunctions associated to specific genes responsible for various diseases in mammals.

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

We present various ways to monitor heart function in the larva of Drosophila for assessing questions dealing with the function of gap junctions, ion channel mutations, modulation of pacemaker activity and pharmacological studies.

ניטור הלב לתפקד הזחל תסיסנית melanogaster ללימודים פיזיולוגיים

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained  and  ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we present a protocol for the mounting of Drosophila melanogaster embryos and subsequent live imaging of fluorescently labeled hemocytes, the embryonic macrophages of this organism. Using the Gal4-uas system1 we drive the expression of a variety of genetically encoded, fluorescently tagged markers in hemocytes to follow their developmental dispersal throughout the embryo. Following collection of embryos at the desired stage of development, the outer chorion is removed and the embryos are then mounted in halocarbon oil between a hydrophobic, gas-permeable membrane and a glass coverslip for live imaging. In addition to gross migratory parameters such as speed and directionality, higher resolution imaging coupled with the use of fluorescent reporters of F-actin and microtubules can provide more detailed information concerning the dynamics of these cytoskeletal components.

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Drosophila hemocytes disperse over the entirety of the developing embryo. This protocol demonstrates how to mount and image these migrations using embryos with fluorescently labelled hemocytes.

הדמיה חיה של תסיסנית melanogaster Hemocyte נדידות עובריים

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element (CRE) Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

Gene expression patterns are specified by cis-regulatory element (CRE) sequences, which are also called enhancers or cis-regulatory modules. A typical CRE possesses an arrangement of binding sites for several transcription factor proteins that confer a regulatory logic specifying when, where, and at what level the regulated gene(s) is expressed. The full set of CREs within an animal genome encodes the organism&prime;s program for development1, and empirical as well as theoretical studies indicate that mutations in CREs played a prominent role in morphological evolution2-4. Moreover, human genome wide association studies indicate that genetic variation in CREs contribute substantially to phenotypic variation5,6. Thus, understanding regulatory logic and how mutations affect such logic is a central goal of genetics. 
Reporter transgenes provide a powerful method to study the in vivo function of CREs. Here a known or suspected CRE sequence is coupled to heterologous promoter and coding sequences for a reporter gene encoding an easily observable protein product. When a reporter transgene is inserted into a host organism, the CRE&prime;s activity becomes visible in the form of the encoded reporter protein. P-element mediated transgenesis in the fruit fly species Drosophila (D.) melanogaster7 has been used for decades to introduce reporter transgenes into this model organism, though the genomic placement of transgenes is random. Hence, reporter gene activity is strongly influenced by the local chromatin and gene environment, limiting CRE comparisons to being qualitative. In recent years, the phiC31 based integration system was adapted for use in D. melanogaster to insert transgenes into specific genome landing sites8-10. This capability has made the quantitative measurement of gene and, relevant here, CRE activity11-13 feasible. The production of transgenic fruit flies can be outsourced, including phiC31-based integration, eliminating the need to purchase expensive equipment and/or have proficiency at specialized transgene injection protocols. 
Here, we present a general protocol to quantitatively evaluate a CRE&prime;s activity, and show how this approach can be used to measure the effects of an introduced mutation on a CRE&prime;s activity and to compare the activities of orthologous CREs. Although the examples given are for a CRE active during fruit fly metamorphosis, the approach can be applied to other developmental stages, fruit fly species, or model organisms. Ultimately, a more widespread use of this approach to study CREs should advance an understanding of regulatory logic and how logic can vary and evolve.

Quantitative Comparison of cis-Regulatory Element CRE Activities in Transgenic Drosophila melanogaster

Phenotypic variation for traits can result from mutations in cis-regulatory element (CRE) sequences that control gene expression patterns. Methods derived for use in Drosophila melanogaster can quantitatively compare the levels of spatial and temporal patterns of gene expression mediated by modified or naturally occurring CRE variants.

השוואה כמותית של Cis-רגולטוריות (Cre) אלמנט פעילות טראנסגנטי תסיסנית melanogaster</em

Gene expression patterns are specified by cis-regulatory element (CRE) sequences, which are also called enhancers or cis-regulatory modules. A typical CRE ...

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

The longstanding use of Drosophila as a model for cell and developmental biology has yielded an array of tools. Together, these techniques have enabled analysis of cell and developmental biology from a variety of methodological angles. Live imaging is an emerging method for observing dynamic cell processes, such as cell division or cell motility. Having isolated mutations in uncharacterized putative cell cycle proteins it became essential to observe mitosis in situ using live imaging. Most live imaging studies in Drosophila have focused on the embryonic stages that are accessible to manipulation and observation because of their small size and optical clarity. However, in these stages the cell cycle is unusual in that it lacks one or both of the gap phases. By contrast, cells of the pupal wing of Drosophila have a typical cell cycle and undergo a period of rapid mitosis spanning about 20 hr of pupal development. It is easy to identify and isolate pupae of the appropriate stage to catch mitosis in situ. Mounting intact pupae provided the best combination of tractability and durability during imaging, allowing experiments to run for several hours with minimal impact on cell and animal viability. The method allows observation of features as small as, or smaller than, fly chromosomes. Adjustment of microscope settings and the details of mounting, allowed extension of the preparation to visualize membrane dynamics of adjacent cells and fluorescently labeled proteins such as tubulin. This method works for all tested fluorescent proteins and can capture submicron scale features over a variety of time scales. While limited to the outer 20 &#181;m of the pupa with a conventional confocal microscope, this approach to observing protein and cellular dynamics in pupal tissues in vivo may be generally useful in the study of cell and developmental biology in these tissues.

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

This paper demonstrates the use of a fast scanning confocal microscope to image cell behavior directly through the puparium. By leaving the pupal case intact, this method allows observation and measurement of dynamic cell processes at a stage of Drosophila development that is difficult to study directly.

הדמיה באמצעות המקרה גלמי של<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

The longstanding use of Drosophila as a model for cell and developmental biology has yielded an array of tools. Together, these techniques have enabled ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial scientific task. Many disease causing genes in humans have a fly homologue, making Drosophila a good model to study signaling pathways involved in the development of different disorders. Additionally, the tractability of Drosophila simplifies genetic screens to aid in identifying novel therapeutic targets that may regulate metabolism. In order to perform such a screen a simple and fast method to identify changes in the metabolic state of flies is necessary. In general, carbon dioxide production is a good indicator of substrate oxidation and energy expenditure providing information about metabolic state. In this protocol we introduce a simple method to measure CO2 output from flies. This technique can potentially aid in the identification of genetic perturbations affecting metabolic rate.

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolic disorders are among one of the most common diseases in humans. The genetically tractable model organism D. melanogaster can be used to identify novel genes that regulate metabolism. This paper describes a relatively simple method which allows studying the metabolic rate in flies by measuring their CO2 production.

מדידה של קצב חילוף החומרים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; באמצעות Respirometry

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

The last decades have witnessed the explosion of scientific interest around gene expression control mechanisms at the RNA level. This branch of molecular biology has been greatly fueled by the discovery of noncoding RNAs as major players in post-transcriptional regulation. Such a revolutionary perspective has been accompanied and triggered by the development of powerful technologies for profiling short RNAs expression, both at the high-throughput level (genome-wide identification) or as single-candidate analysis (steady state accumulation of specific species). Although several state-of-art strategies are currently available for dosing or visualizing such fleeing molecules, Northern Blot assay remains the eligible approach in molecular biology for immediate and accurate evaluation of RNA expression. It represents a first step toward the application of more sophisticated, costly technologies and, in many cases, remains a preferential method to easily gain insights into RNA biology. Here we overview an efficient protocol (Enhanced Northern Blot) for detecting weakly expressed microRNAs (or other small regulatory RNA species) from Drosophila melanogaster whole embryos, manually dissected larval/adult tissues or in vitro cultured cells. A very limited amount of RNA is required and the use of material from flow cytometry-isolated cells can be also envisaged.

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

The aim of this publication is to visualize and discuss the operative steps of an Enhanced Northern Blot protocol on RNA extracted from Drosophila melanogaster embryos, cells, and tissues. This protocol is particularly useful for the efficient detection of small RNA species.

Enhanced צפון כתם איתור של RNA קטן מינים ב<em&gt; תסיסנית</em

The last decades have witnessed the explosion of scientific interest around gene expression control mechanisms at the RNA level. This branch of molecular ...

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life cycle of Drosophila enables collection of large quantities of material from embryos, larvae, pupae and adult flies, in a synchronized way, at a low economic cost. A major strategy for propagating large numbers of flies is the use of a fly population cage. This useful and common tool in the Drososphila community is an efficient way to regularly produce milligrams to tens of grams of embryos, depending on uniformity of developmental stage desired. While a population cage can be time consuming to set up, maintaining a cage over months takes much less time and enables rapid collection of biological material in a short period. This paper describes a detailed and flexible protocol for the maintenance of a Drosophila melanogaster population cage, starting with 1.5 g of harvested material from the previous cycle.

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

This manuscript reports a detailed protocol for culturing, on a regular basis, a population of Drosophila melanogaster using a fly population cage.

תחזוקה של<em&gt; תסיסנית</em&gt; אוכלוסיית קייג

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life ...

Measurement of Carbon Dioxide Production from Radiolabeled Substrates in Drosophila melanogaster

The power of Drosophila genetics is increasingly being applied to questions of hormone signaling and metabolism and to the development of models of human disease in this organism. Sensitive methods for measurements of parameters such as metabolic rates are needed to drive the understanding of physiology and disease in small animals such as the fruit fly. The method described here assesses fuel oxidation in small numbers of adult flies fed food containing trace amounts of 14C-labeled substrates such as glucose or fatty acid. After the feeding period and any additional experimental manipulations, flies are transferred to short tubes capped with mesh, which are then placed in glass vials containing KOH-saturated filter paper that traps exhaled, radiolabeled CO2 generated from oxidation of radiolabeled substrates as potassium bicarbonate, KHCO3. This radiolabeled bicarbonate is measured by scintillation counting. This is a quantitative, reproducible, and simple approach for the study of fuel oxidation. The use of radiolabeled glucose, fatty acids, or amino acids allows determination of the contribution of these different fuel sources to energy metabolism under different conditions such as feeding and fasting and in different genetic backgrounds. This complements other approaches used to measure in vivo energy metabolism and should further the understanding of metabolic regulation.

Measurement of Carbon Dioxide Production from Radiolabeled Substrates in Drosophila melanogaster

This paper describes a method for the measurement of fuel oxidation in Drosophila melanogaster in which trace amounts of specific radiolabeled metabolic substrates are fed to flies. The exhaled radiolabeled CO2 that is a produced from fuel oxidation is collected and measured.

מדידת ייצור פחמן דו-חמצני מן radiolabeled מצעים ב<em&gt; תסיסנית</em

The power of Drosophila genetics is increasingly being applied to questions of hormone signaling and metabolism and to the development of models of human ...