This work was supported by National Institutes of Health grants HL087990 (G.L.).

הצהרת אתיקה: חולדות ספראג-Dawley מבוגרת זכר (במשקל 330-380 ז) היו בשימוש בפרוטוקול זה. פרוטוקול זה אושר על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) במדעי בריאות LSU המרכז-Shreveport ועומד ב&#39;המדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה &quot;(מהדורה השמינית, האקדמיה לאומית למדעים, 2011 ). .1 הכנת Tube PE-50 השתנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק צינור PE-50 ארוכי 30 סנטימטר מעל אש גז על ידי ידיים, לרכך את הצינור בהדרגה. בעדינות למתוח את הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר נקודה על הצינור נמתח באמצעות קליפר דיגיטלי (איור 1), לסמן אותו, ולחתוך את PE-50 הצינור הותאם למגזר ארוך 25 סנטימטר עם קצה 1 סנטימטר ארוך (מחוץ קוטר: .30-0.34 מ&quot;מ). </li></ol> 2 הכנת קרישי דם ההומולוגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברוש עם isoflurane (5% לזירוז, 2-3% לתחזוקה) בN 70% 2 O ו30% O &lt;תת&gt; 2 על ידי מסיכת פנים לפני איסוף דם. לאשר הרדמה על ידי קמצוץ הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע cannulation עורקי הירך של עכברוש תורם עם שיטה שפורסמה 4 ולהעביר דם עורק הירך ישירות לתוך PE-50 צינור ארוך 20 סנטימטר. מניחים את הצינור לשעה 2 בטמפרטורת חדר לדם להיקרש, ולאחר מכן לשמור על הצינור ל22 שעות ב 4 ° C.. הערה: Cannulation מבוצע באמצעות טכניקת ספטית, כמתואר בשלב 3.1. עכברוש התורם הוא התאושש לדגימה נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את צינור PE-50 ל50 מגזרי מ&quot;מ ולשטוף את הקריש מהצינור לתוך צלחת פטרי המכילה סטרילי מלח רגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את 50 מ&quot;מ הקריש ארוך לתוך ארוך 60 מ&quot;מ PE-10 צינור ולחבר את כל קצה של PE-10 צינור לצינור ארוך 20 סנטימטר PE-50 מחובר למזרק 1 מ&quot;ל המכיל מלח רגיל עם 23 מחט G (איור 2) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Shift הקריש על ידי תנועה לסירוגין רציפה ממזרק אחד למשנהו במשך 5 דקות, אשר יכולה להסיר את תאי דם שלהקריש ולמזער השביר של קריש קרוש extravascular, מבלי לשבש את ליבת הפיברין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את הקריש למגזר ארוך 40 מ&quot;מ ולהעביר את קטע הקריש לPE-50 קטטר שונה כמתואר בשלב 1.2 בתנאי ספטית. הערה: כל צינורות PE מעוקרים עם אתילן אוקסיד. </li></ol> .3 חסימת עורק תסחיפים התיכון מוחין (איור 3 א &#39;, ב&#39;) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את כל הכלים כירורגיים ידי מעוקר (מינימום 121 מעלות צלזיוס, 15 PSI, ל15 דקות). לטהר את שולחן הניתוחים וציוד כירורגי הקשורים באמצעות אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברוש עם isoflurane כמתואר בשלב 2.1. בדוק את עומק ההרדמה על ידי ביצוע קמצוץ הבוהן על שני רגליים האחוריות, וכל תנועה שנצפתה (משיכת הכפה) מצביעה על כך שבעלי החיים הוא לא מספיק בהרדמה לעשות ניתוח. למרוח כמות קטנה של משחה וטרינר בשני העיניים כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה. לגלח את הפרווה על הגחון הצוואר והראש מחדשgions עם קוצץ חשמלי לחשוף את אזורי העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה במצב שכיבה על כרית חימום. הכנס בדיקה, שליטה בפי הטבעת ולשמור על טמפרטורת גוף בין 36.5-37.5 מעלות צלזיוס באמצעות יחידת שמיכת שליטת homeothermic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את העור המגולח ופרווה המקיפה עם 10% povidone- יוד ואחריו 70% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קו האמצע של 2 סנטימטר ארוך על הצוואר תחת מיקרוסקופ לנתח. השתמש בכלי כתיבה כדי לחשוף את שדה הניתוח ולנתח את העורק הימני הנפוץ תרדמה (CCA), עורק תרדמה חיצוני (ECA), עורק תרדמה פנימי (ICA), ועורק pterygopalatine (PPA) חופשי מעצבים שמסביב וfascia (איור 3 א). הערה: לפני הניתוח, לשנות כפפות סטריליות אם לא עוזר עוזר להכין את בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את המרכז לאמנות עכשווית חופשית מהעצבים שמסביב (מבלי לפגוע בעצב המחנק) ומקום תפר 5-0 משי סטרילי תחת העורק. לקשור קשר תלוש (מס &#39;1) ולתפוס את התפר באמצעות hemos קטןמידה ולמשוך לימדה כלפי הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את ECA ושני הסניפים שלה, את העורק העורפי (OA) ועורק מעולה בלוטת התריס (STA). להקריש שני סניפים באמצעות יחידת electrosurgical וטרינרים. הנח שתי חתיכות של תפרי משי סטרילי 6-0 תחת ECA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפריד בין שני המשי ממוקם מתחת לעורק, חתיכה אחת לכיוון הראש (קצה הדיסטלי) והשני לכיוון הגוף. לקשור קשירה הדוקה (מס &#39;2) בצד הקרוב ביותר לראש, לתפוס את המשי עם hemostats הקטן ולמשוך לימד לכיוון הראש. הכן קשר רופף (# 3) עם המשי האחר לשימוש מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את ICA וPPA מהעצבים שמסביב (מבלי לפגוע בעצב המחנק). לקשור את PPA עם תפר 6-0 (מס &#39;4). הפוך קשר להחליק עם 6-0 תפר סביב ICA (המס &#39;5). לחלופין, קליפ ICA באמצעות קליפ כלי דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך חור קטן (1/2 thru) לתוך ECA בין ההדוק (המס &#39;2) ו( # 3) חיבורי אותיות רופפות עם מספריים באביב בסגנון Vannas. הכנס את PE-50 אמבטיה שונהדואר המכיל קריש דם לתוך החתך ומראש להסתעפות של המרכז לאמנות העכשווית. הדק את המייתר הרופף (# 3) סביב לומן מספיק כדי לאבטח לשמר את הניידות של צינור שוכני ב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את ECA באתר של חור קטן כדי לשחרר את הגדם ומקם את הגדם מתחת להסתעפות של ECA ויק&quot;א; זה יאפשר הצינור הותאם להחליק בקלות לתוך ICA. פתח את ICA ובעדינות לקדם את הצינור מלומן של ECA לתוך ICA עד קצה הצנתר מגיע למקורו של MCA (~ 17 מ&quot;מ מההסתעפות). הערה: לפני הכנס את קצה הצינור לתוך ECA, על פני השטח החיצוניים של צינור סטרילי עם 70% אתנול, ולאחר מכן לשטוף עם מלח רגיל סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק את הקריש באמצעות PE-50 קטטר שונה יחד עם 10 μl של תמיסת מלח מעל 10 שניות באמצעות מזרק המילטון 100 μl (איור 3 ב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למשוך את הצנתר מECA 5 דקות מאוחר יותר. לקשור את ECA ולפתוח מחדש מרכז לאמנות עכשווית. לתפור את החתך בצוואר. </li></ol> .4 ניטור דם אזורי במוח זרימה (rCBF) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני חסימת MCA, לעשות חתך קו האמצע ארוך 1.2 סנטימטר בקרקפת כדי לחשוף את עצם הגולגולת. הסר את הרקמות על עצם הגולגולת עם מגרד שיניים ועסקות חלף גפן סטרילי. הערה: לפני הניתוח, אזור הקרקפת החשופה ופרווה מסביב לחטא עם 10% povidone- יוד ואחריו 70% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדוח חור בר קוטר 1.5 מ&quot;מ הממוקם ב2 מ&quot;מ אחורי ו 5 מ&quot;מ לרוחב גבחת באמצעות בר 0.7 מ&quot;מ כדורי נירוסטה (איור 4). הערה: שמור את הדורה ללא פגע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החללית 0.5 מ&quot;מ מעל פני השטח הדורה. צג rCBF ב 0 (בסיס), 5, 15, 30, 60, 90, ו120 דקות לאחר אמבוליזציה ולהמשיך ב5, 15, 30, 45, ו60 דקות לאחר עירוי לוריד של tPA. לאחר המדידה האחרונה של rCBF, החתך בקרקפת סגור על ידי תפר. הערה: לפני חתך צוואר אנו מודדים rCBF כבסיס לפני occlus MCAיון. חסימת ההודעה MCA אנו מודדים rCBF לאחר סגירת איחוי החתך בצוואר. כך, חתך הצוואר נשמר סטרילי. </li></ol> טיפול .5 לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 2.5 מ&quot;ל של תמיסת מלח תת עורי על מנת למנוע התייבשות ולהזריק Buprenex (0.05 מ&quot;ג / קילוגרם, SC) מייד לאחר הניתוח וכל שעה 6-12 בהתאם לצורך להקלה על כאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפסיק הרדמה isoflurane. מניחים את החולדה בחדר התאוששות וטרינרי 37 ° C (לשמור על חום בעלי חיים) ולשמור על תצפית. זה בדרך כלל לוקח 10 דקות לחולדה להתאושש מהרדמה. לאחר מכן, הכניס את בעלי החיים לכלוב מעוקר, למקם את מזון רטוב כמה בצלחת פטרי בכלוב, ולהחזיר את הכלוב לחדר עיקור בעלי החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 24 שעות לאחר שבץ, להרדים את העכברוש עם מנת יתר של נתרן pentobarbital (100 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף, IP). </li></ol> .6 ציון גירעון נוירולוגיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את ציון Bederson לפני ובשעה 2 לאחר אמבוליזציה. השתמש של דירוגקייל של 0-3 כפי שתואר בעבר 5: 0, העלאת העכברוש בזנב, בעלי החיים המשתרעים שני forelimbs לרצפה ושאינם מראים שום גירעונות אחרים (תנועה רגילה); 1, העלאת העכברוש בזנב, כופף את forelimb הנגדי; 2, ירד התנגדות לדחיפה לרוחב (וכיפוף forelimb) בלי שחג; 3, אותה ההתנהגות כמו בדרגה 2 עם חג. הערה: חולדות מראים ציון = 0 (אין גירעון) Bederson בשעה 2 לאחר אמבוליזציה אינן נכללות במחקר נוסף. </li></ol>

<ol>
	<li>Overgaard, K., Sereghy, T., Boysen, G., Pedersen, H., H&#248;yer, S., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+reproducible+cerebral+infarction+using+thrombotic+blood+clot+emboli.">A rat model of reproducible cerebral infarction using thrombotic blood clot emboli.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 12 (3), 484-490 (1992).</li><li>Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+focal+embolic+cerebral+ischemia.">A rat model of focal embolic cerebral ischemia.</a> Brain Res. 766 (1-2), 83-92 (1997).</li><li>Dinapoli, V. A., Rosen, C. L., Nagamine, T., Crocco, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+MCA+occlusion:+a+precise+embolic+stroke+model.">Selective MCA occlusion: a precise embolic stroke model.</a> J. Neurosci. Methods. 154 (1-2), 233-238 (2006).</li><li>Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femoral+arterial+and+venous+catheterization+for+blood+sampling,+drug+administration+and+conscious+blood+pressure+and+heart+rate+measurements.">Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements.</a> J Vis Exp. 59 (3496), (2012).</li><li>Bederson, J. B., Pitts, L. H., Tsuji, M., Nishimura, M. C., Davis, R. L., Bartkowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+middle+cerebral+artery+occlusion:+evaluation+of+the+model+and+development+of+a+neurologic+examination.">Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination.</a> Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).</li><li>Henninger, N., Bouley, J., Br&#229;tane, B. T., Bastan, B., Shea, M., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+Doppler+flowmetry+predicts+occlusion+but+not+tPA-mediated+reperfusion+success+after+rat+embolic+stroke.">Laser Doppler flowmetry predicts occlusion but not tPA-mediated reperfusion success after rat embolic stroke.</a> Exp Neurol. 215 (2), 290-297 (2009).</li><li>Zhu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Annexin+A2+combined+with+low-dose+tPA+improves+thrombolytic+therapy+in+a+rat+model+of+focal+embolic+stroke.">Annexin A2 combined with low-dose tPA improves thrombolytic therapy in a rat model of focal embolic stroke.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 30 (6), 1137-1146 (2010).</li><li>Cheng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+protein+C+inhibits+tissue+plasminogen+activator-induced+brain+hemorrhage.">Activated protein C inhibits tissue plasminogen activator-induced brain hemorrhage.</a> Nat Med. 2 (11), 1278-1285 (2006).</li><li>Taniguchi, H., Andreasson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypoxic-ischemic+encephalopathy+model+of+perinatal+ischemia.">The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia.</a> J Vis Exp. 21 (955), (2008).</li><li>Sicard, K. M., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+focal+brain+ischemia.">Animal models of focal brain ischemia.</a> Exp Transl Stroke Med. 1 (7), (2009).</li><li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia.">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).</li><li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats.">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li><li>Westendorp, W. F., Nederkoorn, P. J., Vermeij, J. D., Dijkgraaf, M. G., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-stroke+infection:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Post-stroke infection: a systematic review and meta-analysis.</a> BMC Neurol. 11 (110), (2011).</li></ol>

We do not have any potential conflicting interests to disclose.

במחקר זה, שהדגמנו שיטה סטנדרטית לביצוע מודל שבץ MCAO תסחיפים בחולדה, שבמקורו של MCA הוא occluded על ידי קריש הפיברין העשיר. היתרון העיקרי של מודל זה הוא: החסימה של הגזע של MCA עם קריש דם הפיברין העשיר דומה לשבץ תרומבו בבני אדם, מודל שבץ תסחיפים הוא מתאים לביצוע חקירה פרה קלינית של טיפול Fibrinolytic, וכי מודל זה יכול לפתח לשחזור וצפוי אוטם נפח בתוך השטח המסופק על ידי MCA. לביצוע מודל תסחיפי MCAO, מבוא קריש, היציבות ותפס המאחז הם קשים לניהול, מה שמוביל לשינויים בגודל אוטם ואזורים במוח מושפעים 2,3. מחקרים קודמים הראו כי נגעים איסכמיים לשחזור בשטח MCA יכולים רק להיות מושגת כאשר קרישי שיבוש הם נתקעו בגזע של MCA 2,3. לבדיוק להגיש את הקריש ולייצר מודל שבץ תסחיפים לשחזור, במחקר זה, אנו מדגימים כיצד להכין צינור PE-50 שונה ואיך להציג את הקצה של הצינור הותאם למקורו של MCA וכיצד להזריק קריש הפיברין העשיר לMCA. עולה בקנה אחד עם הדו&quot;ח הקודם 2, קריש הדם המוזרק היה דמיין בקלות במוצא של MCA בכל החולדות שטופלה בתמיסת מלח (n = 9), אבל פורקה במידה רבה בכל החולדות שטופלו tPA (n = 12) בשעה 24 שעות לאחר אמבוליזציה. כדי להעריך את ההצלחה של MCAO, rCBF, גירעונות נוירולוגיות, והדפוס וההפצה של נגעים במוח הוערכו. לאחר הזרקת הקריש, rCBF ירד ל30% מנקודת ההתחלה וירידה של rCBF נמשכה לפחות 2 שעות לאחר אמבוליזציה, עולות בקנה אחד עם דיווחים קודמים 6,7. לאחר טיפול עם tPA בשעה 2 לאחר אמבוליזציה, הרמות של rCBF שוקמו קרובות לבסיס לאחר 30 דקות של טיפול tPA. ציון נוירולוגיות נמדד 10 דקותלפני הטיפול תרופתי באמצעות ציון Bederson שונה כדי לעזור להערכת ההצלחה של MCAO. ניקוד נוירולוגית זוהי דרך פשוטה ומהירה כדי לזהות תפקוד נוירולוגים בעולם בשלב חריף של אירוע מוחי. בעלי חיים מראים התנהגויות נורמליות (ציון = 0) הוצאו מטיפול תרופתי וניתוח נוסף. יתר על כן, אנו הוכיחו כי נגע הרקמה הופק בעיקר בתוך השטח MCA כפי שניתן לראות באזורי קליפת המוח וסטריאטום, וטיפול tPA (בשעה 2) הקטין את גודל האוטם באופן משמעותי ב24 שעות לאחר שבץ. יחד, הנתונים שלנו הראו שמודל שבץ תסחיפים שהוצגו בעבודה זו יכול להתפתח לחיזוי אוטם נפח בתוך שטח MCA. לבסוף, נציין, כי יש מספר עניינים טכניים שעשויות להשפיע על ההצלחה של מודל MCAO תסחיפים. בעיה נפוצה נתקלה בביצוע מודל MCAO תסחיפים מוקדם reperfusion הספונטני לאחר אמבוליזציה. ההתרחשות של i reperfusion הספונטניתזה עשוי להיות קשור לשברירי של קריש קרוש extravascular ואורכו של הקריש המשמש כדי לחסום את 2,3,10 MCA. אנו מאמינים כי השיטה שתארנו (שלב 2) להכין קריש דם הייתה למזער השבירה של קריש קרוש extravascular. אורכו של קריש דם בודד המשמש כדי לחסום MCA מגוון ממעבדה למעבדה בין 25 מ&quot;מ לאורך 50 מ&quot;מ-2,3,6-8,10. מצאנו כי השימוש בקריש ארוך 35-40 מ&quot;מ באופן אידיאלי occluded MCA והפיק מאוד לשחזור אוטם נפח. שינוי צינור PE-50 עם קוטר הקצה בין .30-0.34 מ&quot;מ. אם קוטר הקצה הוא&gt; 0.34 מ&quot;מ, זה לא יכול להגיע למקור של MCA. אם קוטר הקצה הוא &lt;0.30 מ&quot;מ, הקריש בתוך PE-50 הצינור שונה הוא קשה לעבור את הקצה. שיעור התמותה קשור קשר הדוק לנפיחות במוח חמורות ודימום תוך מוחי. בעבודה זו, שיעור תמותת 24 שעות הוא 16% (4/25; לראות תוצאות נציג), וכל החולדות מתות הראו להתנפח מוחי חמורing למרות שאנחנו לא ראינו דימום תוך מוחי (אולי בשל גודל מדגם מוגבל). גורם תמותה לשליטה הוא טמפרטורת גוף במהלך הניתוח. בשליטה על טמפרטורת הגוף בין 36.5-37.5 ° C מההתחלה של ניתוח עד להחלמה מלאה מן ההרדמה. טמפרטורת גוף משפיעה באופן משמעותי על היקף נזק לרקמות המוח. היפותרמיה מפחיתה והיפרתרמיה מגבירה את 11,12 אוטם הנפח. ביצוע הניתוח בתקופה קצרה זמן (כ 20-25 דקות) על פי הפרוטוקול כדי לייצר גודל אוטם מאוד לשחזור. סיבוכי זיהומיות הם סיבת מוות מובילה בחולים עם שבץ חריף 13. כדי להפחית את השכיחות של סיבוכי זיהומיות ולשפר את שיעור ההישרדות לאחר שבץ, יש להשתמש בטכניקה ספטית במהלך ניתוח. לסיכום: הטכניקות שהוצגו במאמר זה אמורות לעזור לחוקרים להתגבר על בעיות טכניות להקמת ההוא מודל למחקר שבץ.

A correction was made to <a href="/video/51956">Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats</a>. The institution information was updated.
The institution "Louisiana State University Health Science Center" was changed to "Louisiana State University Health Science Center, Shreveport".

A correction was made to <a href="/video/51956">Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats</a>. The institution information was updated.

Erratum: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

שבץ הוא הגורם המוביל השלישי למוות בארצות הברית, אבל אפשרויות טיפול בשבץ חריף יישארו מוגבלות. נכון לעכשיו, עירוי תוך ורידי של activator plasminogen רקמות רקומביננטי (tPA) לפזר את קרישי הדם הוא הטיפול יעיל ביותר לשבץ איסכמי חריף. עם זאת, השימוש בtPA מוגבל על ידי החלון הטיפולי הצר שלה ועל ידי עלייה בסיכון לדימום תוך מוחי. לכן, יש צורך במודל של שבץ מתאים למחקר הטרומבוליטיות בדחיפות. עורק אמצע המוח (MCA) הוא העורק לרוב האפיל בשבץ בבני אדם. התמקד בעורק זה, מודלים של בעלי חיים רבים של שבץ איסכמי הוקמו. נכון לעכשיו, שני סוגים עיקריים של מודלים איסכמיה מכרסמים מוקד על ידי הגורם לחסימת MCA פותחו: מודל תפר מודל MCAO ותסחיפי MCAO. למרות שדגמי MCAO באמצעות טכניקת תפר intraluminal היו בשימוש נרחב במחקר שבץ מונע מנגנון, מודלים תפר אלה לאשבץ אדם לחקות, כעד 80% ממקרי שבץ אדם נגרמים על ידי פקקת או תסחיף. עם זאת, מודל שבץ תסחיפים באמצעות קרישי דם מחקה באופן הדוק שבץ אדם ונחשב מתאים למחקר הטרומבוליטיות. מודל תסחיפים זו פותח לראשונה בחולדות על ידי et Overgaard אל. 1 ב1992 ועוד מאופיין בet ג&#39;אנג אל. בשנת 1997 2 ועל ידי Dinapoli et al. ב2006 3. למרות MCAO תסחיפים זכה לתשומת לב גוברת, יש בעיות טכניות מתמודדות על ידי מעבדות רבות. במאמר זה, אנו מדגימים שיטה סטנדרטית לייצור MCAO תסחיפים עם קרישי דם הומולוגיים בחולדה הבוגרת, אשר יכול לפתח אוטם צפוי בתוך שטח MCA. הטכניקות שהוצגו במאמר זה אמורות לעזור לחוקרים להתגבר על בעיות טכניות להקמת מודל זה למחקר שבץ.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="739">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">rh-tPA</td>
			<td style="width:135px;">Chemical</td>
			<td style="width:237px;">Genentech</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:232px;">2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td style="width:135px;">Chemical</td>
			<td style="width:237px;">Sigma</td>
			<td style="width:135px;">T8877</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:232px;">Anesthesia vaporizer</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Soma Technology</td>
			<td style="width:135px;">Drager Vapor 19.1&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:232px;">Rechargeable high speed micro drill</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:135px;">18000-17</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved scissors</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:135px;">14117-14</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:232px;">Dumont forceps(Medical #7)</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:135px;">11270-20</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Dumont forceps(Medical #5)</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:135px;">11251-35</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:232px;">Vannas-style spring scissors</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Veterinary recovery chamber&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Equipment&#160;</td>
			<td style="width:237px;">Peco Services&#160;</td>
			<td style="width:135px;">V1200&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Genie plus syringe pump</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Rat brain matrix</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:135px;">RBMA-310C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Digital caliper&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:135px;">501601</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Dissecting microscope</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:135px;">PZMTIII-BS-LWD</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Hamilton syringe</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Hamilton</td>
			<td style="width:135px;">model 710</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:232px;">Homeothermic blanket control unit</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:232px;">Electric clipper</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:135px;">CLP-9931</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:232px;">Veterinary electrosurgical unit</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">MACAN Manufacturing Company</td>
			<td style="width:135px;">MV-9</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Blood flowmeter</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Adinstruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">PowerLab 4/30</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Adinstruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:232px;">LabChart 7.2</td>
			<td style="width:135px;">software</td>
			<td style="width:237px;">Adinstruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:232px;">1ml syringe</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td style="width:237px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:135px;">309659</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">23G needle</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td style="width:237px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:135px;">305143</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:232px;">30G needle</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td style="width:237px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:135px;">305106</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:232px;">PE-50 tubing</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td style="width:237px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:135px;">427517</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:232px;">PE-10 tubing</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td style="width:237px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:135px;">427400</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">6-0 Silk suture</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td style="width:135px;">723287</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">5-0 Silk suture</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>517607</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

embolic middle cerebral artery occlusion (mcao) for ischemic stroke with homologous blood clots in rats

טיפול קליני, הטרומבוליטיות עם שימוש בactivator plasminogen רקמות רקומביננטי (tPA) נשאר הטיפול היעיל ביותר עבור שבץ איסכמי חריף. עם זאת, השימוש בtPA מוגבל על ידי החלון הטיפולי הצר שלה ועל ידי עלייה בסיכון לשינוי המורגי. יש צורך דחוף לפתח מודלים שבץ מתאימים ללמוד סוכנים הטרומבוליטיות חדשים ואסטרטגיות לטיפול בשבץ איסכמי. נכון לעכשיו, שני סוגים עיקריים של מודלים שבץ איסכמי פותחו בחולדות ועכברים: MCAO התפר intraluminal ותסחיפים MCAO. למרות שדגמי MCAO באמצעות טכניקת תפר intraluminal היו בשימוש נרחב במחקר שבץ מונע מנגנון, מודלים תפר אלה אינם מחקים את המצב הקליני ואינם מתאימים ללימודים הטרומבוליטיות. בין הדגמים הללו, מודל MCAO תסחיפים מחקה באופן הדוק שבץ איסכמי אנושי ומתאים לחקירה פרה קלינית של טיפול טרומבוליטי. מודל תסחיפים זו פותח לראשונה בחולדות על ידי אובergaard et al. 1 ב1992 ומאופיין יותר על ידי Zhang et al. בשנת 1997 2. למרות MCAO תסחיפים צבר הגדלת תשומת לב, יש בעיות טכניות שעומדות בפני מעבדות רבות. כדי לענות על הצרכים גוברים למחקר הטרומבוליטיות, אנו מציגים מודל לשחזור ביותר של MCAO תסחיפים בחולדה, אשר יכול לפתח צפוי אוטם נפח בתוך שטח MCA. בקיצור, PE-50 צינור שונה הוא מתקדם בעדינות מעורק התרדמה החיצונית (ECA) לתוך לומן של עורק התרדמה הפנימי (ICA) עד קצה הצנתר מגיע למקורו של MCA. דרך הצנתר, קריש דם הומולוגי יחיד ממוקם במוצאו של MCA. כדי לזהות את ההצלחה של חסימת MCA, זרימת דם במוח האזורית הייתה פיקוח, גירעונות נוירולוגיות וכרכי אוטם נמדדו. הטכניקות שהוצגו במאמר זה אמורות לעזור לחוקרים להתגבר על בעיות טכניות להקמת מודל זה למחקר שבץ. &lt;/ P&gt;

Flowmetry הלייזר דופלר (LDF) שימש כדי לפקח rCBF במהלך האינדוקציה של איסכמיה המוחית 6,7. מעבדות רבות, כולל המעבדה שלנו כבר משתמשים rCBF לזהות בעלי חיים עם חסימת MCA מוצלחת, אבל הספים של תחילת המחקר נעו בין מעבדות הקשורים לאתר של מדידה. הבדיקה של LDF ממוקמת באחורי 2 מ&quot;מ ו 5 מ&quot;מ לרוחב לגבחת כפי שתואר לעיל 6. rCBF היה פיקוח על 0, 5, 15, 30, 60, 90, ו120 דקות לאחר ההזרקה של הקריש. על בסיס הנתונים אלה, רק בעלי חיים שמפגינים ירידה בrCBF&gt; 70% מנקודת ההתחלה נחשבים חסימת תסחיפים מוצלחת של MCA (איור 5). בשעה 2 לאחר ההזרקה של קריש, מינון עכברוש סטנדרטי של tPA (10 מ&quot;ג / קילוגרם) 7,8 היה בהזרקה לווריד עם בולוס 10% ו90% עירוי רציף על פני 30 דקות באמצעות 7,8 משאבת עירוי מזרק. הבחנו כי רמות rCBF increas בהדרגהed ל&gt; 70% מנקודת ההתחלה תוך 30 דקות של טיפול tPA (איור 5). ב24 שעות לאחר אמבוליזציה, החיות מורדמים וtranscardially perfused עם 200 מ&quot;ל של PBS להסיר דם intravascular. מחקרים קודמים 2,3,7,8 והנתונים שלנו (איור 6) הראו אוטם רקמה באופן משמעותי גדול יותר מיוצר ב24 שעות לאחר אמבוליזציה. המוח נאסף ונלקח תמונות. בקבוצה שטופלה בתמיסת מלח, קריש הדם היה דמיין בקלות במוצא של MCA וACA, אבל הקריש התפרק כמעט לחלוטין בקבוצה שטופלה-tPA (איור 6 א). אחרי זה, המוח היה פרוס לשבעה סעיפי העטרה 2 מ&quot;מ עם מטריצת מוח חולדה על קרח. דגירה את פרוסות המוח ב2% כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazolium (TTC) בשעה 37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות 9,10. לאחר צביעת TTC, סעיפי העטרה הונחו על צלחת וצילמו (איור 6). האזור של inf<html> arction בכל פרוסה נקבע על ידי המערכת הממוחשבת לניתוח תמונה (המכונים הלאומיים לבריאות תמונה), וממוצע אוטם הנפח מחושב על ידי הכפלת המרחק בין סעיפים. מודל שבץ תסחיפים זה מיוצר אוטם רקמה בתוך שטח MCA כפי שניתן לראות באזורי קליפת המוח וסטריאטום (איור 6). reperfusion המוקדם הוקם על ידי עירוי לוריד של tPA בשעה 2 לאחר אמבוליזציה, כרכי האוטם הופחתו באופן משמעותי בקבוצה שטופלה-tPA (229.1 ± 45.7 מ&quot;מ 3, n = 12) בהשוואה לקבוצה שטופלה בתמיסת מלח (394.2 ± 68.2 מ&quot;מ 3, n = 9) (P &lt;0.01). שיעור התמותה 24 שעות הוא 16% (4/25). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/51956/51956fig1highres.jpg" /> איור 1 מדידה של הקוטר החיצוני של צינור PE-50 שונה באמצעות קליפר דיגיטלי. nt &quot;FO: לשמור-together.within-page =&quot; תמיד &quot;&gt; <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/51956/51956fig2highres.jpg" /> איור קריש דם 2 כביסה בPE-10 צינור. קריש הדם נשטף על ידי חלופי דוחף שני המזרקים מחוברים לקצה של PE-50 צינור. <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51956/51956fig3highres.jpg" width="600" /> נכון עורקי איור 3 (א) פשוטה תכנית של עכברוש חצי כדור מבודד מראים תפרים רצופים כדי להכין את כניסתה של PE-50 צינור שונה. (ב) תכנית של ארכיטקטורת העורקים במוח החולדה, וקטטר מתקדם מECA ל ICA של העכברוש. קריש דם בודד (שחורה) היה כלול בצינור. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/51956/51956fig4highres.jpg" /> איור 4 buחור RR (1.5 מ&quot;מ קוטר) הממוקם ב2 מ&quot;מ אחורי ו 5 מ&quot;מ לרוחב לגבחת. <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/51956/51956fig5highres.jpg" /> איור 5 זרימת דם במוח אזורית (rCBF) נמדדה באמצעות מד זרימת דופלר לייזר (LDF). הזרקת הקריש הוביל ל70% הפחתת rCBF&gt; של הערך הבסיסי. tPA (10 מ&quot;ג / קילוגרם) שטופל בשעה 2 לאחר rCBF המשוחזר הזרקת קריש הקרוב לבסיס לאחר 30 דקות של טיפול tPA. נתונים באו לידי ביטוי כממוצע ± SD. <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/51956/51956fig6highres.jpg" /> איור 6 (א) תמונות נציג מראים קרישי דם (חיצים שחורים) במקורו של עורק המוח האמצעי (MCA) וקדמיות עורק המוח (ACA) בשעה 24 שעות לאחר שבץ. עזב, חולדה שטופל מלוחה; ימין, שטופל tPA חולדה, בר = 5 מ&quot;מ. <stronז&gt; (ב) נציג תמונות מראים פרוסות מוח צבעוניים TTC ב24 שעות לאחר שבץ. עזב, חולדה שטופל מלוחה; ימין, שטופל tPA חולדה, בר = 5 מ&quot;מ.

Watch this Scientific Journal Video about Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats at JoVE.com

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) לשבץ איסכמי עם קרישי דם הומולוגיים בחולדות

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

embolic-middle-cerebral-artery-occlusion-mcao-for-ischemic-stroke

Google

Research

JoVE Journal

Medicine

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

26.8K Views.  Louisiana State University Health Science Center, Shreveport. In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke. 

Video: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

ספיגה דו צדדי משותף עורק תרדמה כגירוי נפשית מראש מספיק כדי לגרום סובלנות איסכמי מוקדמת לאיסכמיה מוחית מיקוד

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

אנדותלין-1 דגם מושרה מזרח מוחות עורקים ספיגים לשבץ איסכמי עם הדרכת Flowmetry ליזר דופלר בעכברוש

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

ניצול חלון גולגולת לדמיין עורק המוח האמצעי במהלך ספיג אנדותלין-1 מושרה מזרח מוחות עורקים

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

מערכת אופטימלית לניטור זלוף מוחות במודל שבץ העכברוש של חסימת עורק מוח האמצעית intraluminal

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

Performing מוחות תיכונים דיסטלי קבוע עם ספיגה עורקת Common הראש אצל חולדות בנים לחקר קורטיקלי איסכמיה עם נכות קבועה זה

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.