We thank Rachelle Kanippayoor for her help in identifying the new wild-type strain as being of the melanogaster species. R.W.F, O.F. and A.F.S were responsible for research design; R.W.F, M.N. and O.F. performed the experiments. R.W.F, M.N., O.F. and A.F.S. analyzed the data; R.W.F., I.S.M. and A.F.S. wrote the manuscript. 
This work was supported by PSC-CUNY research awards, jointly funded by The Professional Staff Congress and The City University of New York to A.F.S.; by internal funding from Western University to A.F.S. and I.S.M.; by a training support from the National Alliance for Hispanic Health&#8217;s Alliance/Merck Ciencia (Science) Hispanic Scholars Program and a University Fellowship from the Yale Graduate School of Arts and Sciences to R.W.F.

1. ציוד וריאגנטים שנוצרו בבית (ראה רשימה של חומר לאחרים) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מנגנון הרדמה קרה תסיסנית לבצע עבודת זבוב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך גיליון פוליאתילן נקבובי כדי לכסות קופסא קטנה מפלסטיק (12.7 סנטימטרים, רוחב 10.2 סנטימטרים), בדרך כלל את המכסה העליון של תיבת טיפים פיפטה (12.7 סנטימטר, רוחב 10.2 סנטימטר, 3.8 סנטימטרים עומק). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למלא את התיבה עם קרח כתוש, מכסה בגיליון פוליאתילן הנקבובי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מנגנון T-מבוך; להתאים את המנגנון שתואר קודם לכן בפרטי 28-31. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן aspirator לטוס כמתואר 32. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מנגנון תגובת Phototaxis לעקור זבובים ובמתוך בקבוקוני מבחן בלי לחץ: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במנגנון נגדי, כפי שתואר על ידי 29,33. </li></ol></li></ol> הערה: גם T-המבוך יכול לשמש למטרות אחרות, כפי שתואר על ידי 28. <ol start="5" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא Homתנאי תאורת ogeneous: לבצע את הניסוי על ספסל מכוסה בכיסוי ספסל לבן, ומול לוח לבן. הערה: בניסויים אלה, זנים לטוס השתמשו היו דרוזופילה melanogaster wild-סוגים: קנטון-S, אורגון וסמרקנד עף ממניות המעבדה שלנו 34; זבובי אלווד נאספו בסתיו 2011 בשכונת אלווד של הנטינגטון, בלונג איילנד, ניו יורק, ארה&quot;ב. </li></ol> 2. הכנת הזבובים לפני הניסוי 1-2 ימים לפני ביצוע הניסוי: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על זבובים בקמח תירס-אגר-מולסה-שמרים בינוניים סטנדרטי של 25 מעלות צלזיוס בשעתי אור 12 / מחזור כהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את הזבובים מגיבים בהרדמה קרה 1-2 ימים לפני ביצוע הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הזבובים מהבקבוקים שבו הם הועלו לצינורות 50 מיליליטר פלקון, תוך שימוש במשפך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצינור הבז עם הזבובים מתחת לרמת קרח, לדלי קרח מבודד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את מנגנון ההרדמה הקר עם קרח כתוש ב-4 ° C לצנן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חכה 5 דקות לזבובים להיכנס לתרדמת צינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הזבובים על גיליון פוליאתילן הנקבובי של מנגנון ההרדמה הקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את הזבובים מגיבים על מנגנון ההרדמה הקר. ב RT, תחת סטראו, להפריד גבר בן 3-7 ימים מזבובים נשיים ולשמור על זבובים אלה בקבוצות של 40. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את זבובי פולט 1-2 ימים לפני ביצוע הניסוי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות לאסוף מעורב-מין קנטון-S עף מהבקבוקים שלהם, באמצעות aspirator פה, שליטה על מספרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על זבובים אלה בקבוצה של 60-100, כפי שיהיה קרינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן דגימות רבות של קרינה כנקודות הנתונים דרושות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר לפחות לילה של התאוששות לאחר איסוף המגיבים והקרינה, כדי למזער את ההשפעה של בלבול ההרדמה הקרהואוסף הפה aspirator על התנהגות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את התיק של בקבוקוני בדיקה, כדי לאפשר לאוויר ריח פלסטיק המעופש בתיק להיות מוחלף על ידי אוויר צח, לפחות יום 1 לפני הניסוי. </li></ol> 2 שעות לפני ביצוע הניסוי: <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהטמפרטורה בחדר שבו הניסוי מתבצע היא סביב 23-25 ​​מעלות צלזיוס, עם אפילו אור, ולחות מעל 30%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את המגיבים וזבובי פירות קרינה לתוך צלוחיות מזון טריות על מנת להבטיח כי זבובים אלו אינם מורעבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו זבובי הפירות להסתגל לסביבה לשעה 2, על הספסל שבניסוי יבוצע. </li></ol> 3. ביצוע הניסוי החברתי ההימנעות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע כל ניסוי באותו הזמן של היום, בטווח של 3-4 שעות בשעתי אחר הצהריים בין הפעם צייטגבר ZT5 וZT9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את T-המבוך על משטח הכתישה, ולהדק את הבורג קליפ כל כך tהוא המעלית הוא יציב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הזבובים מגיבים לתוך בקבוקון בדיקה טרי. הצמד בקבוקון זה מכיל את הזבובים מגיבים על החלק העליון של T-המבוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיפוע מנגנון T-המבוך והקש עליו על המזרן ההולם כל כך זבובי הפירות נופלים במעלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את החלק העליון של המעלית כלפי מטה, כך הזבובים הם בין החלק העליון ותחתון של T-המבוך, אבל לשים לב כדי לשמור על המעלית מעל נקודת הבחירה - כדי למנוע הזבובים לברוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג בקבוקונים עם DSO (ראה סעיף 5 ליצירת בקבוקוני DSO-החופשי שנכבשו בעבר על ידי זבובים). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד הזבובים מגיבים להסתגל לסביבה חדשה זו, למקם את זבובי הפולט בבקבוקון מבחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים פיסת צמר גפן כדי לסגור את הבקבוקון כך זבובי פירות שלא יברחו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכאני להתסיס בקבוקון זה על מיני-מערבולת כדלקמן: מערבולת במשך 15 שניות, הסר את הבקבוקון מהמערבולת במשך 5 שניות. חזור 3 פעמים עבור הסכום כולל של 55 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראםאובת זבובי הפולט מתוך הבקבוקון הטרי - על ידי העברה בבקבוקון מזון - ועד מהרה את מקום הבקבוקון זה מילא DSO לאחת משני צידי מכשיר T-המבוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את הצד של מיקום לבקבוקון מולא DSO בכל סיבוב חדש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח בקבוקון מבחן טרי בצד השני של T-המבוך האחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא את המעלית לגמרי, כך זבובי הפירות יכולים לבחור בין בקבוקון בדיקה הטרי ובקבוקון הבדיקה עם DSO, ולהתחיל את הטיימר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו הזבובים לבחור בין הבקבוקון הטרי ובקבוקון DSO, 1 דקות, אלא אם צוינו אחרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 1 דקות, להעביר את המעלית עד להפריד את הזבובים בבקבוקון הטרי, בקבוקון DSO, ואלה תקועים במעלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את מספר הזבובים בכל בקבוקון, ובמעלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על פעולה זו עבור כל גנוטיפ / מצב. </li></ol> 4. ניתוח נתונים החברתי ההימנעות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספור את מספר זבובי פירות בכל בקבוקון לכל חנוטype, ולהעביר את הנתונים לגיליון אלקטרוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בתוכנת גיליונות אלקטרוניים, לחשב את מדד ביצועים (PI) עבור כל גנוטיפ על ידי הפחתת מספר הזבובים בבקבוקון DSO ממספר הזבובים בבקבוקון DSO-חופשי, ולאחר מכן על ידי חלוקת המספר הכולל של זבובים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקלו את האמצעים &quot;החוקרים הפרטיים באמצעות תוכנת ניתוח סטטיסטית לניתוח התוצאות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן אידיאלי, להכין 2-3 חזרות פנימיות עבור כל ניסוי, ו -3 חזרות עצמאיות, ביצע בימים שונים, עם בקבוקים שונים או חוצה 30. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במבחנים סטטיסטיים הפצת גאוס, כנתונים מתפלגים נורמלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר בודק השפעה אחד (כלומר, צפיפות - איור 2), להשתמש בכיוון אחד ANOVA, עם פוסט-מבחן להשוואה מרובה (עמודה על ידי טור), או מבחן t פשוט להשוות כל תוצאה לשליטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר ניסויי קבוצה מבוצעים, לבדוק שני תנאים ומינים (בקבוקונים ריקים, הדגישזבובים-הדגיש un ד; והשפעת מגדר - איור 1), באמצעות דו-כיוונית ANOVA. </li></ol></li></ol> 5. צור בקבוקים כבושים בעבר על ידי זבובים unstressed - בצע במקום 3.5-3.6 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש Phototaxis להכין בקבוקונים שנכבשו על ידי זבובים שלא היה לחוץ, כביקורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הזבובים בבקבוקון בדיקה, והצמדת אותו למנגנון נגדי, עם בקבוקונים ריקים טריים במיקום ההפוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את המכשיר בצורה אופקית עם בקבוקון דיסטלי ישירות מול אור מגניב-לבן 15 ניאון W, ולכסות בבד שחור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו הזבובים בעדינות להזיז בבקבוקון הטרי. זה עלול לקחת כמה דקות. ברגע שרוב הזבובים הולכים לכיוון האור בבקבוקון דיסטלי, להפעיל את הטיימר דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוצא בעדינות את הבד השחור, לעבור את מיקומו של האור, להתאושש עם הבד השחור, ולאפשר לזבובים לעזוב את בקבוקון המבחן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באותו זמן, אניnitiate ניסוי הבחירה כמו ב3.2-3.5. דלג על 3.6 ו -3.7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את המחוון של המנגנון, כדי להפריד את הזבובים שפינו את בקבוקון המבחן מהצד השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בבקבוקון המבחן שהתפנה בT-המבוך מייד לניסוי הבחירה, כמו ב3.7. </li></ol>

<ol>
	<li>Fry, S. N., Rohrseitz, N., Straw, A. D., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TrackFly:+virtual+reality+for+a+behavioral+system+analysis+in+free-flying+fruit+flies.">TrackFly: virtual reality for a behavioral system analysis in free-flying fruit flies.</a> J Neurosci Methods. 171, 110-117 (2008).</li><li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster.">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> J Vis Exp. 24, 1096 (2009).</li><li>Dankert, H., Wang, L., Hoopfer, E. D., Anderson, D. J., Perona, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+monitoring+and+analysis+of+social+behavior+in+Drosophila.">Automated monitoring and analysis of social behavior in Drosophila.</a> Nat Methods. 6, 297-303 (2009).</li><li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila.">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nat Methods. 6, 451-457 (2009).</li><li>Simon, J. C., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+chamber+for+studying+the+behavior+of+Drosophila.">A new chamber for studying the behavior of Drosophila.</a> PLoS One. 5, 8793 (2010).</li><li>Wang, L., Dankert, H., Perona, P., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inaugural+Article:+A+common+genetic+target+for+environmental+and+heritable+influences+on+aggressiveness.">Inaugural Article: A common genetic target for environmental and heritable influences on aggressiveness.</a> in Drosophila. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 5657-5663 (2008).</li><li>Schneider, J., Dickinson, M. H., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+structures+depend+on+innate+determinants+and+chemosensory+processing+in+Drosophila.">Social structures depend on innate determinants and chemosensory processing in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 2, 17174-17179 (2012).</li><li>Miyamoto, T., Amrein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+male+courtship+by+a+Drosophila+pheromone+receptor.">Suppression of male courtship by a Drosophila pheromone receptor.</a> Nat Neurosci. 11, 874-876 (2008).</li><li>Villella, A., Hall, J. C., Jeffrey, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3+Neurogenetics+of+Courtship+and+Mating+in+Drosophila.+.">Chapter 3 Neurogenetics of Courtship and Mating in Drosophila. .</a> Advances in Genetics. 62, 67-184 (2008).</li><li>Ejima, A., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Courtship+Initiation+Is+Stimulated+by+Acoustic+Signals+in+Drosophila+melanogaster.">Courtship Initiation Is Stimulated by Acoustic Signals in Drosophila melanogaster.</a> PLoS ONE. 3, 3246 (2008).</li><li>Mery, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Public+Versus+Personal+Information+for+Mate+Copying+in+an+Invertebrate.">Public Versus Personal Information for Mate Copying in an Invertebrate.</a> Current Biology. 19, 730-734 (2009).</li><li>Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+taste+of+the+Drosophila+gustatory+receptors.">A taste of the Drosophila gustatory receptors.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 19, 345-353 (2009).</li><li>Billeter, J. -. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specialized+cells+tag+sexual+and+species+identity+in+Drosophila+melanogaster.">Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster.</a> Nature. 461, 987-991 (2009).</li><li>Krupp, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+experience+modifies+pheromone+expression+and+mating+behavior+in+male+Drosophila+melanogaster.">Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster.</a> Curr Biol. 18, 1373-1383 (2008).</li><li>Kent, C., Azanchi, R., Smith, B., Formosa, A., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+context+influences+chemical+communication+in+D.+melanogaster+males.">Social context influences chemical communication in D. melanogaster males.</a> Curr Biol. 18, 1384-1389 (2008).</li><li>Levine, J. D., Funes, P., Dowse, H. B., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resetting+the+Circadian+Clock+by+Social+Experience+in+Drosophila+melanogaster.">Resetting the Circadian Clock by Social Experience in Drosophila melanogaster.</a> Science. 298, 2010-2012 (2002).</li><li>Ganguly-Fitzgerald, I., Donlea, J., Shaw, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Waking+Experience+Affects+Sleep+Need+in+Drosophila.">Waking Experience Affects Sleep Need in Drosophila.</a> Science. 313, 1775-1781 (2006).</li><li>Billeter, J. -. C., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Who+is+he+and+what+is+he+to+you?+Recognition+in+Drosophila+melanogaster.">Who is he and what is he to you? Recognition in Drosophila melanogaster.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 23, 17-23 (2013).</li><li>Suh, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+population+of+olfactory+sensory+neurons+mediates+an+innate+avoidance+behaviour+in+Drosophila.">A single population of olfactory sensory neurons mediates an innate avoidance behaviour in Drosophila.</a> Nature. 431, 854-859 (2004).</li><li>Bonini, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Tribute+to+Seymour+Benzer+1921-2007.">A Tribute to Seymour Benzer 1921-2007.</a> 180, 1265-1273 (2008).</li><li>Castermans, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurobeachin+gene+is+disrupted+by+a+translocation+in+a+patient+with+idiopathic+autism.">The neurobeachin gene is disrupted by a translocation in a patient with idiopathic autism.</a> Journal of Medical Genetics. 40, 352-356 (2003).</li><li>Medrihan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobeachin,+a+protein+implicated+in+membrane+protein+traffic+and+autism,+is+required+for+the+formation+and+functioning+of+central+synapses.">Neurobeachin, a protein implicated in membrane protein traffic and autism, is required for the formation and functioning of central synapses.</a> J Physiol. 587, 5095-5106 (2009).</li><li>Simon, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+assay+to+study+social+behavior+in+Drosophila:+measurement+of+social+space+within+a+group.">A simple assay to study social behavior in Drosophila: measurement of social space within a group.</a> Genes Brain Behav. 11, 243-252 (2012).</li><li>Venkatesh, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cold Spring Harbor Meeting: From Molecules to Circuit Behavior. , (2013).</li><li>Hamilton, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+mutation+in+the+dopamine+transporter+gene+associates+dopamine+dysfunction+with+autism+spectrum+disorder.">De novo mutation in the dopamine transporter gene associates dopamine dysfunction with autism spectrum disorder.</a> Mol Psychiatry. 18, 1315-1323 (2013).</li><li>Gadow, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+dopamine+gene+variants,+emotion+dysregulation+and+ADHD+in+autism+spectrum+disorder.">Association of dopamine gene variants, emotion dysregulation and ADHD in autism spectrum disorder.</a> Research in Developmental Disabilities. 35, 1658-1665 (2014).</li><li>Fernandez, R. W., Akinleye, A. A., Nurilov, M., Rouzyi, Z., Simon, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> , (2014).</li><li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assaying+Locomotor,+Learning,+and+Memory+Deficits+in+Drosophila+Models+of+Neurodegeneration.">Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration.</a> J Vis Exp. , 2504 (2011).</li><li>Connolly, J. B., Tully, T., Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: A Practical Approach. 1, 265-317 (1998).</li><li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical-conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophila+melanogaster.">Classical-conditioning and retention in normal and mutant Drosophila melanogaster.</a> J Comp Physiol [A]. 157, 263-277 (1985).</li><li>Krashes, M. J., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Aversive+Olfactory+Conditioning.">Drosophila Aversive Olfactory Conditioning.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2011, (2011).</li><li>Ejima, A., Griffith, L. C., Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+30.">Ch. 30.</a> Drosophila Neurobiology, A Laboratory Manual. , 475-481 (2010).</li><li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+mutants+of+Drosophila+melanogaster+isolated+by+countercurrent+distribution.">Behavioral mutants of Drosophila melanogaster isolated by countercurrent distribution.</a> PNAS. 58, 1112-1119 (1967).</li><li>Simon, A. F., Shih, C., Mack, A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+control+of+longevity+in+Drosophila+melanogaster.">Steroid control of longevity in Drosophila melanogaster.</a> Science. 299, 1407-1410 (2003).</li><li>Vaux, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+methods:+Know+when+your+numbers+are+significant.">Research methods: Know when your numbers are significant.</a> Nature. 492, 180-181 (2012).</li><li>Stowers, L., Logan, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+olfactory+signaling.">Sexual dimorphism in olfactory signaling.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 20, 770-775 (2010).</li><li>Simon, A. F., Liang, D. T., Krantz, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+decline+in+behavioral+performance+of+Drosophila+melanogaster+with+age.">Differential decline in behavioral performance of Drosophila melanogaster with age.</a> Mechanisms of Ageing and Development. , 127-647 (2006).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

פרוטוקול זה מתאר נוהל מפורט לassay ההימנעות החברתי. קנטון-S רק להימנע מבקבוקון שבטס כבר בעבר באופן מכאני הדגיש, וכי יחסי מין ומספר המגיבים אינם משפיעים על ביצועי שהימנעות חברתיים. עם זאת, רקע גנטי של המגיבים יש השפעה גדולה. להלן כמה צ...

מטרתה של שיטה זו היא לכמת היבט חדש של התנהגות פשוטה חברתית בmelanogaster דרוזופילה, עצמאית מחיזור ותוקפנות בקלות. אינטראקציות חברתיות הן קריטיות להתפתחות התקינה ובריאותו של אדם בחברה, כמו גם את הפונקציונליות של קבוצה חברתית בכללותו. המורכבות גבוהות של אינטראקציות אלה מחייבים גדלי מדגם גדולים ומערכת המאפשרת לפישוט של ההתנהגות כבסיס הגנטי ועצבי של התנהגות חברתית עדיין לא נחקרו מספיק. Melanogaster תסיסנית הוא מודל גנטי רב עוצמה שיכול לשמש לזיהוי הגנטי ו בסיסים עצביים של אינטראקציות חברתיות. ואכן, ד &#39; יש melanogaster רפרטואר של התנהגויות חברתיות מורכבות וכמה מדידות ישירות של סוציאליזציה כבר נעשו 1-7. עם זאת, רוב המאמצים האלה כבר התמקדו התנהגויות חברתיות מורכבות יחסית, כגון aggresאינטראקציות sive 3,6, היבטים שונים של חיזור 3,8-12, וכיצד משפיעים על התנהגויות חברתיות ניסיון אחרים כגון למידה, או קצב היממה 13-17. בנוסף, רב של מבחני אלה מסתמכים על ניתוח דפוסי אינטראקציה מורכבים של קבוצות של זבובים, באמצעות מעקב וידאו ותוכנת מחשב כדי לנתח את השפע של נתונים וכתוצאה מכך. ניתוח כזה הוא לא יסולא בפז, ולהוביל לתובנות חדשות וחשובות כמו הדינמיקה של אינטראקציות לטוס לטוס בקבוצות 7. מגבלה אחת, לעומת זאת, היא הנגישות של מבחני אלה לקהילה בכללותה, והידע המוגבל של המנגנונים העומדים בבסיס הכרה של אחרים. במילים אחרות, הבסיס של הפליטה של אות על ידי אדם אחד וההכרה שלה על ידי אחר עדיין הבין היטב 18. בניגוד לכך, זבובים גם תערוכת התנהגות פשוטה, הימנעות חברתית, שבו אנשים להתרחק מאות הנפלטת על ידי זבובים הדגישו: ד Melanogaster מתח odorant או DSO 19. בassay תפוקה גבוהה, התנהגות זו ניתן לכמת כהימנעות מאות מתח הנפלטת על ידי זבובים אחרים, או הימנעות חברתית 19. זבובים ממוקמים במנגנון T-מבוך וניתנו להם האפשרות להימנע מבקבוקון המכיל DSO. שימוש assay זה, CO 2 הוצג להיות מרכיב של DSO, וחלק מהמעגלים העצביים ההכרחיים להגיב ל- CO 2 היו גזורים 19. Assay ההימנעות החברתי שהוצג כאן הוא דומה מבחינה רעיונית למבחני התנהגות הפשוטים שפותחו במעבדתו של סימור Benzer שאפשרו דורות של חוקרים לנתח התנהגויות מורכבות 20. ניתוח של הימנעות חברתית יכול להתבצע בצורה חסכונית באמצעות assay T-המבוך, ומאפשר למחקר נרחב יותר של התנהגות חברתית. לדוגמא, באמצעות assay זה אנו הוכיחו לאחרונה כי יש לי סיכונים גנטיים שונים לאוטיזם השפעות מנוגדות בb החברתיתמבחני ehavior. מוטציות לגן מועמד לאוטיזם - neurobeachin 21,22 - ליקויים הנוכחיים הן במרחב חברתי (שתוארו במקום אחר 23) והימנעות חברתית 24. איתות דופאמין חריגה היא גם הציעה לשחק תפקיד באטיולוגיה של אוטיזם בבני האדם 25,26. בניגוד לתוצאות שהושגו עם neurobeachin, מצאנו כי ביצועי הימנעות חברתיים היו מושפעים מעלייה או הירידה ברמות של דרוזופילה לפוחי מונואמין Transporter (VMAT) בתאי דופאמין, למרות שהמרחב חברתי הראה המתאם גבוה לרמות של 27 VMAT אלה. התוצאות המנוגדות שהושגו עם neurobeachin וVMAT מדגישות את האפשרות של זיהוי צורות שונות של התנהגות א-סוציאלית, ובכך circuitries העצבי הבסיסי שונה ויסות התגובה לאחרים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Stereo Zoom Microscope&#160;</td>
			<td>Nikon&#160;&#160;</td>
			<td>SMZ-645</td>
			<td>Any other standard scope for fly handling would work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small paint brushes&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for pushing flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porous Polyethylene, 12&#34; x 12&#34; Sheet</td>
			<td>Flystuff - Genesee</td>
			<td>46-100</td>
			<td>http://www.flystuff.com/ProductInfo.php?productID=46-100 
			Porous Plastic sheet for the cold anesthesia box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-Alarm Timer/Stopwatch</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Sharpie pens</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive Tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini vortex</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-151&#160;</td>
			<td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail 
			For mechanical agitation of the flies - any vortex would work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Life Sciences DL No.:352017, Falcon test tube; round bottom; disposable; no closure, 14mL;&#160; 17 x 100mm</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-8 &#160;&#160;</td>
			<td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&#38;langId=-1&#38;catalogId=29104&#38;productId=2771811&#38;distype=0&#38;highlightProductsItemsFlag=Y&#38;fromSearch=1&#38;searchType=PROD&#38;hasPromo=0 
			These snap in place in the in-house made T-maze and counter-current apparatus (see text)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cotton balls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>to close the vials after the experiment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trifold board and white bench cover</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>to provide a white background, and a homogeneous light.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>white bench cover</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pounding pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any mouse pad works.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>large black cloth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>to cover the counter-current apparatus in phototaxis response.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cool-white light&#160;</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td>1000516563</td>
			<td>http://www.homedepot.ca/product/illume-26-fluorescent-plug-in-linear/911423 
			any similar linear light with fluorescent light bulb cool-white at 13-15W would work</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

straightforward assay for quantification of social avoidance in drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Assay ההימנעות החברתי הוא מבחן חזק כימות היכולת של דרוזופילה melanogaster להכיר אות מתח (DSO) הנפלטת על ידי זבובים אחרים, ובכך להעריך היבט אחד של אינטראקציות חברתיות. Assay מתבצע באמצעות מנגנון נפוץ במבחני התנהגות שונים המכונים T-מבוך, המציג את הזבובים עם בחירה בין שתי אפשרוי...

Watch this Scientific Journal Video about Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster at JoVE.com

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

straightforward-assay-for-quantification-social-avoidance-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

11.1K Views.  Yale University. Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Video: Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We developed a novel nanoinjection/electrophysiology assay that allows the detection of bioactive modulatory effects of compounds on the function of a neuronal circuit that mediates the escape response in Drosophila melanogaster3,4. Our in vivo assay, which uses the Drosophila Giant Fiber System (GFS, Figure 1) allows screening of different types of compounds, such as small molecules or peptides, and requires only minimal quantities to elicit an effect. In addition, the Drosophila GFS offers a large variety of potential molecular targets on neurons or muscles. The Giant Fibers (GFs) synapse electrically (Gap Junctions) as well as chemically (cholinergic) onto a Peripheral Synapsing Interneuron (PSI) and the Tergo Trochanteral Muscle neuron (TTMn)5. The PSI to DLMn (Dorsal Longitudinal Muscle neuron) connection is dependent on D&alpha;7 nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs)6. Finally, the neuromuscular junctions (NMJ) of the TTMn and the DLMn with the jump (TTM) and flight muscles (DLM) are glutamatergic7-12. Here, we demonstrate how to inject nanoliter quantities of a compound, while obtaining electrophysiological intracellular recordings from the Giant Fiber System13 and how to monitor the effects of the compound on the function of this circuit. We show specificity of the assay with methyllycaconitine citrate (MLA), a nAChR antagonist, which disrupts the PSI to DLMn connection but not the GF to TTMn connection or the function of the NMJ at the jump or flight muscles.
Before beginning this video it is critical that you carefully watch and become familiar with the JoVE video titled "Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster " from Augustin et al7, as the video presented here is intended as an expansion to this existing technique. Here we use the electrophysiological recordings method and focus in detail only on the addition of the paired nanoinjections and monitoring technique.

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

A rapid in vivo assay to test for neuromodulatory compounds using the Giant Fiber System (GFS) of Drosophila melanogaster is described. Nanoinjections in the head of the animal along with electrophysiological recordings of the GFS can reveal bioactivity of compounds on neurons or muscles.

Nanoinjection לזווג ו Assay Electrophysiology למסך עבור bioactivity של תרכובות באמצעות תסיסנית melanogaster סיבים הענק מערכת

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

A growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive manipulation of the neural activity of specific neurons in Drosophila melanogaster1. Chief among these are optogenetic tools, which enable the activation or silencing of specific neurons in the intact and freely moving animal using bright light. Channelrhodopsin (ChR2) is a light-activated cation channel that, when activated by blue light, causes depolarization of neurons that express it. ChR2 has been effective for identifying neurons critical for specific behaviors, such as CO2 avoidance, proboscis extension and giant-fiber mediated startle response2-4. However, as the intense light sources used to stimulate ChR2 also stimulate photoreceptors, these optogenetic techniques have not previously been used in the visual system. Here, we combine an optogenetic approach with a mutation that impairs phototransduction to demonstrate that activation of a cluster of loom-sensitive neurons in the fly's optic lobe, Foma-1 neurons, can drive an escape behavior used to avoid collision. We used a null allele of a critical component of the phototransduction cascade, phospholipase C-&beta;, encoded by the norpA gene, to render the flies blind and also use the Gal4-UAS transcriptional activator system to drive expression of ChR2 in the Foma-1 neurons. Individual flies are placed on a small platform surrounded by blue LEDs. When the LEDs are illuminated, the flies quickly take-off into flight, in a manner similar to visually driven loom-escape behavior. We believe that this technique can be easily adapted to examine other behaviors in freely moving flies.

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Genetically encoded optogenetic tools enable noninvasive manipulation of specific neurons in the Drosophila brain. Such tools can identify neurons whose activation is sufficient to elicit or suppress particular behaviors. Here we present a method for activating Channelrhodopsin2 that is expressed in targeted neurons in freely walking flies.

גירוי Optogenetic של התנהגות בריחה ב<em&gt; דרוזופילה melanogaster</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

קביעת הפעילות של תנועה הספונטנית ב<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a straightforward manner. As we previously demonstrated 1, in a two-dimensional chamber, we first force the flies to form a tight group, subsequently allowing them to take their preferred distance from each other. After the flies have settled, we measure the distance to the closest neighbor (or social space), processing a static picture with free online software (ImageJ). The analysis of the distance to the closest neighbor allows researchers to determine the effects of genetic and environmental factors on social interaction, while controlling for potential confounding factors. Diverse factors such as climbing ability, time of day, sex, and number of flies, can modify social spacing of flies. We thus propose a series of experimental controls to mitigate these confounding effects. This assay can be used for at least two purposes. First, researchers can determine how their favorite environmental shift (such as isolation, temperature, stress or toxins) will impact social spacing 1,2. Second, researchers can dissect the genetic and neural underpinnings of this basic form of social behavior 1,3. Specifically, we used it as a diagnostic tool to study the role of orthologous genes thought to be involved in social behavior in other organisms, such as candidate genes for autism in humans 4.

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The effect of genes and environment on social space of Drosophila melanogaster can be quantified through a powerful but straightforward analytical paradigm. We show here different factors that can affect this social space, and thus need to be taken into consideration when designing experiments in this paradigm.

תנאים המשפיעים על המרחב חברתי ב<em&gt; תסיסנית melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To complicate matters even further, the odors detected by the insect nervous system usually are not single compounds but mixtures whose composition and concentration ratios vary. This leads to an almost infinite amount of different olfactory stimuli which have to be evaluated by the nervous system.
To understand which aspects of an odor stimulus determine its evaluation by the fly, it is therefore desirable to efficiently examine odor-guided behavior towards many odorants and odor mixtures. To directly correlate behavior to neuronal activity, behavior should be quantified in a comparable time frame and under identical stimulus conditions as in neurophysiological experiments. However, many currently used olfactory bioassays in Drosophila neuroethology are rather specialized either towards efficiency or towards resolution.
Flywalk, an automated odor delivery and tracking system, bridges the gap between efficiency and resolution. It allows the determination of exactly when an odor packet stimulated a freely walking fly, and to determine the animal&#180;s dynamic behavioral reaction.

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

The automated tracking system Flywalk is used for high-resolution quantification of odor-guided behavior in Drosophila melanogaster.

כימות ברזולוציה גבוהה של התנהגות מודרכת ריח<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt; שימוש ב<em&gt; Flywalk</em&gt; פרדיגמה

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

התנהגות Assay עבור Mechanosensation של MARCM מבוסס משובט ב<em&gt; תסיסנית melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. When selecting sites to deposit their eggs, female flies are capable of ranking the relative attractiveness of their options and choosing the &#34;greater of two goods.&#34; However, most egg-laying preference assays are not practical if one wants to take a systematic genetic screening approach to search for the circuit basis underlying this simple decision-making process, as they are population-based and laborious to set up. To increase the throughput of studying of egg-laying preferences of single females, we developed custom chambers that each can simultaneously assay egg-laying preferences of up to thirty individual flies as well as a protocol that ensures each female has a high egg-laying rate (so that their preference is readily discernable and more convincing). Our approach is simple to execute and produces very consistent results. Additionally, these chambers can be equipped with different attachments to allow video recording the egg-laying animals and to deliver light for optogenetics studies. This article provides the blueprints for fabricating these chambers and the procedure for preparing the flies to be assayed in these chambers.

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

This protocol describes a high throughput assay for testing egg-laying preferences of Drosophila melanogaster at single-animal resolution. This assay provides a simple, efficient, and scalable platform to identify genes and circuit components that control a simple decision-making process.

Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט<em&gt; תסיסנית</em

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral variation. The larval path-length assay was developed to measure individual differences in foraging behavior that were later linked to the foraging gene. Larval path-length is an easily scored trait that facilitates the collection of large sample sizes, at minimal cost, for genetic screens. Here we provide a detailed description of the current protocol for the larval path-length assay first used by Sokolowski. The protocol details how to reproducibly handle test animals, perform the behavioral assay and analyze the data. An example of how the assay can be used to measure behavioral plasticity in response to environmental change, by manipulating feeding environment prior to performing the assay, is also provided. Finally, appropriate test design as well as environmental factors that can modify larval path-length such as food quality, developmental age and day effects are discussed.

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.

פרוטוקול נתיב באורך שארגן לעצמו<em&gt; תסיסנית</em&gt; זחלים

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of the right type and quantity of food therefore has a major influence on quality of life. Research on feeding behavior focuses on the underlying processes that ensure actual feeding and unravels the role of factors regulating internal energy homeostasis and the neuronal bases of decision-making. The model organism Drosophila melanogaster, with its great variety of genetically traceable tools for labeling and manipulating single neurons, allows mapping of neuronal networks and identification of molecular signaling cascades involved in the regulation of food intake. This report demonstrates the CApillary FEeder assay (CAFE) and shows how to measure food intake in a group of flies for time spans ranging from hours to days. This easy-to-use assay consists of glass capillaries filled with liquid food that flies can freely access and feed on. Food consumption in the assay is accurately determined using simple measurement tools. Herein we describe step-by-step the method from setup to successful execution of the CAFE assay, and provide practical examples to analyze the food intake of a group of flies under controlled conditions. The reader is guided through possible limitations of the assay, and advantages and disadvantages of the method compared to other feeding assays in D. melanogaster are evaluated.

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

The CApillary FEeder (CAFE) assay is a simple, budget-friendly, highly reliable method for investigating mechanisms underlying food intake. Used with the highly versatile genetic model organism Drosophila melanogaster, it provides a powerful means of gaining new insights into regulatory mechanisms of food intake.

את assay נימי מזין מודד צריכת המזון ב<em&gt; תסיסנית</em

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc superoxide dismutase 1 (SOD1). The structural instability of SOD1 and the detection of SOD1-positive inclusions in familial-ALS patients supports a potential causal role for misfolded and/or aggregated SOD1 in ALS pathology. In this study, we describe the development of a cell-based assay designed to quantify the dynamics of SOD1 aggregation in living cells by high content screening approaches. Using lentiviral vectors, we generated stable cell lines expressing wild-type and mutant A4V SOD1 tagged with yellow fluorescent protein and found that both proteins were expressed in the cytosol without any sign of aggregation. Interestingly, only SOD1 A4V stably expressed in HEK-293, but not in U2OS or SH-SY5Y cell lines, formed aggregates upon proteasome inhibitor treatment. We show that it is possible to quantify aggregation based on dose-response analysis of various proteasome inhibitors, and to track aggregate-formation kinetics by time-lapse microscopy. Our approach introduces the possibility of quantifying the effect of ALS mutations on the role of SOD1 in aggregate formation as well as screening for small molecules that prevent SOD1 A4V aggregation.

We describe a method to quantify the aggregation of misfolded proteins. Our protocol details lentiviral induced stable cell line generation, automated confocal imaging, and image analysis of protein aggregates. As an illustrative application, we studied the effect of small molecules in promoting SOD1 aggregation in a time- and dose-dependent manner.

פיתוח assay על כימות תוכן גבוהה של היווצרות צבירה של מוטציה בחלבון Sod1 בתאים חיים

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...