We thank Rachelle Kanippayoor for her help in identifying the new wild-type strain as being of the melanogaster species. R.W.F, O.F. and A.F.S were responsible for research design; R.W.F, M.N. and O.F. performed the experiments. R.W.F, M.N., O.F. and A.F.S. analyzed the data; R.W.F., I.S.M. and A.F.S. wrote the manuscript. 
This work was supported by PSC-CUNY research awards, jointly funded by The Professional Staff Congress and The City University of New York to A.F.S.; by internal funding from Western University to A.F.S. and I.S.M.; by a training support from the National Alliance for Hispanic Health&#8217;s Alliance/Merck Ciencia (Science) Hispanic Scholars Program and a University Fellowship from the Yale Graduate School of Arts and Sciences to R.W.F.

1. equipamentos e reagentes criados em casa (Veja a lista de material para os outros) <ol><li> Prepare um aparelho de anestesia Drosophila frio para realizar o trabalho real. <ol><li> Cortar uma folha de polietileno poroso para cobrir uma pequena caixa de plástico (12.7 cm de comprimento, 10,2 cm de largura), normalmente a tampa superior de uma caixa de pontas de pipeta (12.7 cm de comprimento, 10,2 cm de largura, 3,8 cm de profundidade). </li><li> Preencha a caixa com gelo picado, cubra com a folha de polietileno poroso. </li></ol></li><li> Prepare um aparelho T-maze; adaptar o aparelho anteriormente descrito em detalhes 28-31. </li><li> Preparar um aspirador de mosca como descrito 32. </li><li> Prepare um aparelho de resposta phototaxis para deslocar moscas dentro e fora de frascos de teste sem estresse: <ol><li> Usar um aparelho em contracorrente, tal como descrito por 29,33. </li></ol></li></ol> NOTA: O labirinto em T pode também ser utilizado para outros fins, como descrito por 28. <ol start="5"><li> Certifique-homcondições de iluminação ogeneous: realizar o experimento em um banco coberto com uma capa de banco branco, e na frente de um quadro branco. NOTA: Para estas experiências, as linhagens de moscas utilizados foram Drosophila melanogaster tipos selvagens: Canton-S, Oregon e Samarkand voa de nossos estoques de laboratório 34; Elwood moscas foram coletadas no outono de 2011 no bairro de Elwood de Huntington, em Long Island, Nova York, EUA. </li></ol> 2. Preparar as moscas antes do experimento 1-2 dias antes de realizar o experimento: <ol><li> Manter moscas em meio padrão fubá-agar-melaço de levedura a 25 ° C em um ciclo claro / escuro de 12 horas de luz. </li><li> Recolher as moscas que respondem sob anestesia frio 1-2 dias antes de se efectuar a experiência <ol><li> Transferem-se as moscas das garrafas no qual foram colocadas em tubos Falcon de 50 ml, utilizando um funil. </li><li> Coloque o tubo de falcão com as moscas sob nível de gelo, em umbalde de gelo isolado. </li><li> Coloque o aparelho de anestesia fria com gelo picado a -4 ° C para relaxar. </li><li> Espere 5 minutos para as moscas para entrar em um coma frio. </li><li> Transferem-se as moscas para a folha de polietileno poroso do aparelho de anestesia frio. </li><li> Colete as moscas de resposta sobre o aparelho de anestesia frio. No RT, sob microscópio estereoscópico, separe masculina 3-7 dias de idade de moscas fêmeas e manter essas moscas em grupos de 40. </li></ol></li><li> Recolher as moscas emissor 1-2 dias antes de realizar a experiência. <ol><li> Gentilmente recolher Canton-S mixed-sexo voa de suas garrafas, usando um aspirador de boca, controlando o seu número. </li><li> Manter essas moscas no grupo de 60-100, pois eles serão os emissores. </li><li> Preparar todas as amostras de emissores como pontos de dados necessários. </li></ol></li><li> Permitir que pelo menos uma noite de recuperação após a coleta dos respondentes e emissores, para minimizar qualquer efeito de confusão da anestesia frioe coleta de boca aspirador no comportamento. </li><li> Abrir o saco de frascos de teste, para permitir que o ar com cheiro plástico obsoleto em que o saco seja substituído por ar fresco, pelo menos 1 dia antes da experiência. </li></ol> 2 horas antes da realização do ensaio: <ol start="6"><li> Certifique-se de que a temperatura na sala em que a experiência é realizada é de cerca de 23-25 ​​° C, com luz uniforme, e humidade superior a 30%. </li><li> Transfira os respondedores e moscas emissores de frutas em frascos de alimentos frescos para garantir que estas moscas não estão morrendo de fome. </li><li> Deixe que as moscas de fruta ajustar ao ambiente, durante 2 horas, no banco em que o experimento será realizado. </li></ol> 3. a realização do experimento evitação social <ol><li> Executar cada experiência à mesma hora do dia, num intervalo de 3-4 horas, à tarde entre o tempo Zeitgeber ZT5 e ZT9. </li><li> Coloque o T-maze no teclado batendo, e aperte o parafuso de modo clipe tele é estável elevador. </li><li> Transfira as moscas de resposta em um tubo de ensaio fresco. Encaixe este frasco contendo as moscas de resposta sobre a parte superior do labirinto-T. </li><li> Inclinar o aparelho T-maze e coloque-a sobre o tapete batendo tão moscas da fruta cair no elevador. </li><li> Mover a parte superior do elevador para baixo para que as moscas são entre a secção superior e inferior do labirinto em T, mas prestar atenção para manter o elevador acima do ponto de escolha - para impedir que as moscas de escapar. </li><li> Obter frascos com DSO (ver seção 5 para gerar DSO-free frascos que foram anteriormente ocupadas por moscas). <ol><li> Enquanto as moscas de resposta estão se ajustando a esse novo ambiente, coloque as moscas de emissor em um tubo de ensaio. </li><li> Coloque um pedaço de algodão para fechar o frasco de modo que as moscas de fruta não escapam. </li><li> Mecanicamente isto agitar o frasco numa mini-vórtice do seguinte modo: em vórtice durante 15 seg, remover o frasco de vórtice durante 5 segundos. Repita 3 vezes para um total de 55 seg. </li><li> Remove as moscas emissor para fora do frasco fresco - por transferência num frasco de alimentos - e rapidamente colocar esse frasco cheio DSO em um dos dois lados do aparelho de labirinto-T. </li><li> Alterne o lado de colocação para o frasco DSO preenchidos em cada nova execução. </li></ol></li><li> Coloque um tubo de ensaio fresco no outro lado do labirinto-T. </li><li> Traga o elevador completamente para baixo, de modo que as moscas de fruta pode escolher entre o tubo de ensaio fresco eo tubo de ensaio com DSO, e iniciar o timer. </li><li> Deixe as moscas escolher entre o frasco fresco e o frasco DSO, por 1 min, salvo indicação em contrário. </li><li> Após 1 min, mover o elevador para cima para separar as moscas no frasco fresco, DSO frasco, e os que estão presos no elevador. </li><li> Contar o número de moscas em cada frasco, e no elevador. </li><li> Repita esse procedimento para cada genótipo / condição. </li></ol> 4. Analisando os dados evitação social <ol><li> Contar o número de moscas da fruta em cada frasco para cada Genotipo, e transferir os dados para uma planilha. </li><li> Usando um programa de planilha, calcular o Índice de Desempenho (PI) para cada genótipo, subtraindo o número de moscas no frasco DSO do número de moscas no frasco DSO-livre, e dividindo pelo número total de moscas. </li><li> Compare dos IPs que consiste em utilizar o software de análise estatística para análise dos resultados. <ol><li> Idealmente, preparar 2-3 repetições internas de cada experiência, e três repetições independentes, realizadas em dias diferentes, com diferentes garrafas ou 30 atravessa. </li><li> Use testes estatísticos de distribuição de Gauss, como os dados seguem uma distribuição normal. </li><li> Ao testar um efeito (isto é, densidade - Figura 2), utilizar um ANOVA de uma via, com o pós-teste de comparação múltipla (coluna por coluna), ou um t-teste simples para comparar cada resultado de um controlo. </li><li> Quando experimentos do grupo são realizadas, testar ambas as condições e sexos (frascos vazios, destacou umd moscas un-esforçado; e efeito de gênero - Figura 1), usando uma ANOVA de duas vias. </li></ol></li></ol> 5. Gerar frascos anteriormente ocupado por Flies átonas - Realizar Em vez de 3,5-3,6 <ol><li> Use fototaxia para preparar frascos ocupados por moscas que não têm sido destacadas, como um controlo. </li><li> Transfira as moscas em um tubo de ensaio, e encaixe-o aparelho em contracorrente, com frescos frascos vazios no local oposto. </li><li> Coloque o aparelho na horizontal, com o frasco distal diretamente em frente a 15 W fluorescente luz cool-branco, e cubra com um pano preto. </li><li> Deixe as moscas mover suavemente no frasco fresco. Isso pode levar vários minutos. Uma vez que a maioria das moscas estão caminhando em direção à luz no frasco distal, iniciar o temporizador para 1 min. </li><li> Remova cuidadosamente o pano preto, mudar a localização da luz, recuperar com o pano preto, e permitir que as moscas de deixar o tubo de ensaio. </li><li> Naquela época, eunitiate o experimento escolha como em 3.2 a 3.5. Ir 3.6 e 3.7. </li><li> Mover o cursor do aparelho, para separar as moscas que desocupado o tubo de ensaio a partir do outro lado. </li><li> Use o frasco teste desocupado na T-labirinto de imediato para o experimento escolha, como em 3.7. </li></ol>

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The authors declare that they have no competing financial interests.

Este protocolo descreve um procedimento detalhado para o ensaio de evitação social. Canton-S só vai evitar um frasco em que voa tenham sido previamente stress mecânico, e que o sexo e número de respondentes que não afeta o desempenho evitação social. No entanto, a base genética dos respondentes tem uma grande influência. Seguem-se vários passos críticos para a realização deste experimento com sucesso: 1) sempre transferir as moscas 2 horas antes do experimento e certifique-se d...

O objetivo deste método é quantificar facilmente um novo aspecto do comportamento social simples em Drosophila melanogaster, independente do namoro e agressão. As interações sociais são cruciais para o bom desenvolvimento e saúde dos indivíduos dentro de uma sociedade, bem como a funcionalidade de um grupo social como um todo. A elevada complexidade destas interacções exige grandes tamanhos de amostra e um sistema que permite a simplificação do comportamento como as bases genéticas e neurais do comportamento social são ainda pouco compreendidos. Drosophila melanogaster é um poderoso modelo genético que pode ser usada para identificar os factores genéticos e bases neurais de interações sociais. Com efeito, D. melanogaster tem um repertório de comportamentos sociais complexos e algumas medições diretas de socialização já foram feitas 1-7. No entanto, a maioria desses esforços têm sido focados em comportamentos sociais relativamente complexas, como aggresinterações sive 3,6, vários aspectos do namoro 3,8-12, e como experiência social afeta outros comportamentos como a aprendizagem, ou ritmo circadiano 13-17. Além disso, muitos desses ensaios dependem de analisar os padrões de interacção complexas de grupos de moscas, usando o acompanhamento de vídeo e software de computador para analisar a abundância resultante de dados. Essas análises são de valor inestimável, e levar a novos conhecimentos importantes, como a dinâmica das interações fly-fly em grupos de sete. Uma limitação, no entanto, é a inacessibilidade destes ensaios para a comunidade em geral, e o limitado conhecimento dos mecanismos subjacentes reconhecimento dos outros. Em outras palavras, com base na emissão de um sinal por um indivíduo e o seu reconhecimento por outro ainda está mal compreendida 18. Em contraste, as moscas também exibem um comportamento simples, evitação social, onde os indivíduos se afastar de um sinal emitido por moscas estressados: o D. Melanogaster Estresse Odorant ou DSO 19. Em um ensaio de elevado débito, este comportamento pode ser quantificada como a prevenção de um sinal de tensão emitida por outros, moscas ou evitação social 19. As moscas são colocadas num aparelho de labirinto em T e dada a opção de evitar um frasco contendo DSO. Utilizando este ensaio, CO 2 mostrou ser um componente do DSO, e parte do circuito neural necessário para responder ao CO 2 foi dissecada 19. O ensaio de evitação social aqui apresentada é semelhante conceitualmente para os ensaios comportamentais simples desenvolvido no laboratório de Seymour Benzer que permitiram gerações de pesquisadores para dissecar comportamentos complexos 20. Análise de evitação social pode ser levada a cabo de forma eficaz em termos de custos, utilizando o ensaio de labirinto em T, para permitir um estudo mais generalizada do comportamento social. Por exemplo, com este ensaio que recentemente demonstrou que diferentes riscos genéticos para autismo têm efeitos contrastantes em b sociaisensaios ehavior. Mutantes para um gene candidato para o autismo - neurobeachin 21,22 - deficiências presentes tanto no espaço social (descritos em outros 23) e evitação social 24. Sinalização dopaminérgica anormal também é proposto para desempenhar um papel na etiologia de autismo em humanos 25,26. Em contraste com os resultados obtidos com neurobeachin, descobrimos que o desempenho evitação social não foi afectada por um aumento ou diminuição dos níveis de Drosophila vesicular da monoamina transportador (VMAT) em células dopaminérgicas, embora espaço social foi directamente correlacionada com estes níveis de VMAT 27. Os resultados contrastantes obtidos com neurobeachin e VMAT ressaltam a possibilidade de identificar várias formas de comportamento anti-social e, assim, os diferentes circuitos neurais subjacentes modulando a resposta para os outros.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Stereo Zoom Microscope&#160;</td>
			<td>Nikon&#160;&#160;</td>
			<td>SMZ-645</td>
			<td>Any other standard scope for fly handling would work</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small paint brushes&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for pushing flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porous Polyethylene, 12&#34; x 12&#34; Sheet</td>
			<td>Flystuff - Genesee</td>
			<td>46-100</td>
			<td>http://www.flystuff.com/ProductInfo.php?productID=46-100 
			Porous Plastic sheet for the cold anesthesia box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-Alarm Timer/Stopwatch</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Sharpie pens</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive Tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini vortex</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-151&#160;</td>
			<td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail 
			For mechanical agitation of the flies - any vortex would work.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Life Sciences DL No.:352017, Falcon test tube; round bottom; disposable; no closure, 14mL;&#160; 17 x 100mm</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-8 &#160;&#160;</td>
			<td>http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&#38;langId=-1&#38;catalogId=29104&#38;productId=2771811&#38;distype=0&#38;highlightProductsItemsFlag=Y&#38;fromSearch=1&#38;searchType=PROD&#38;hasPromo=0 
			These snap in place in the in-house made T-maze and counter-current apparatus (see text)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cotton balls</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>to close the vials after the experiment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trifold board and white bench cover</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>to provide a white background, and a homogeneous light.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>white bench cover</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pounding pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>any mouse pad works.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>large black cloth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>to cover the counter-current apparatus in phototaxis response.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cool-white light&#160;</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td>1000516563</td>
			<td>http://www.homedepot.ca/product/illume-26-fluorescent-plug-in-linear/911423 
			any similar linear light with fluorescent light bulb cool-white at 13-15W would work</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

straightforward assay for quantification of social avoidance in drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

O ensaio de evitação social é um ensaio robusto quantificar a capacidade de Drosophila melanogaster para reconhecer um sinal de tensão (DSO) emitidos por outras moscas, e avaliando assim um aspecto de interacções sociais. O ensaio é realizado utilizando um aparelho comumente usado em vários ensaios de comportamento conhecido como T-labirinto, que apresentam as moscas com uma escolha entre duas opções diferentes - a esquerda ou direita 19,28-31. Neste caso, a eficiência com que as moscas ev...

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Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Ensaio simples para Quantificação de Prevenção Social<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

straightforward-assay-for-quantification-social-avoidance-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

11.1K visualizações.  Yale University. Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.