The authors would like to acknowledge the Infectious Disease Department at Brigham and Women&#8217;s Hospital especially Michael S. Calderwood, MD, MPH for helping us construct this protocol. We would also like to thank the Institution&#8217;s endoscopy center and it&#8217;s leadership team for their support.

הערה: בעת פרסום כתב היד הזה יישום Investigational New Drug (IND) אינו נדרש לבצע FMT לCDI החוזר ונשנה בפרקטיקה קלינית. עם זאת, אם FMTs הם מתבצעים כחלק ממחקר או לאינדיקציה נוספת, ייתכן שיידרש IND או יישום מקביל 18. רשויות רגולטוריות צפויות להמשיך להעריך את הבטיחות ויעילות של FMT כפי שהוחל על מצבים רפואיים CDI ואחרים ולכן מומלץ לבדוק את הדרישות הרגולטוריות במיקום המתאים שלך לפני תחילת תכנית FMT אחד ואחת לחודשיים ברגע ש באופן פעיל בביצוע FMT. מועמדים הערה חייבים להיות מוכנים להסכים להשתלת הצואה כמו גם קולונוסקופיה. 1. זיהוי של מועמדים המתאימים לFMT <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולים שיש להם CDI ההתקפי או חולים עם מחלה עקשן שאינו מגיבים לאנטיביוטיקה מסורתית appropriatמועמדי דואר לFMT. הערה: התקפי CDI מוגדר כהיסטוריה של שלוש או יותר אפיזודות של CDI אושר על ידי בדיקות רעלן או PCR, או שני פרקים שנזקקו לאשפוז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא החולה אינו מסוגל לעבור קולונוסקופיה בבטחה. זה בשיקול דעתו של endoscopist. </li></ol> 2. בחירת תורם צואה הערה: בחירת תורם הצואה חלה על הטיפול של CDI וייתכן שלא תהיה ישים לטיפול בהפרעות אחרות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא המטופל מזהה תורם. תורמים פוטנציאליים צריכים להיות נוכחים עם הנמען בעת ​​הביקור במרפאת הראשונית גסטרואנטרולוגיה. תורמים יכולים להיות בני זוג, בני משפחה, או חברים. תורמים יכולים לחיות באותו המקום המגורים הנמען, כל עוד קריטריונים אחרים הם נפגשו. </li></ol> זכאות 3. תורם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קריטריונים להכללה: ודאו שהתורם הוא אדם בוגר בריא (ישן ≥18 שנים) ויש לו מ &#39;מעי נוצר יומיovement. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קריטריונים לאי הכללה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבטיח שהתורם אינו נוטל אנטיביוטיקה או לא נקט אנטיביוטיקה בשלושה חודשים שקדמו או תרופות כל לזיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהתורם לא קיים היסטוריה של משלשלים עצירות או שימוש כרוני. בנוסף, להבטיח את התורם אין היסטוריה של מחלת מעי דלקתית, שלשול כרוני, קוליטיס המיקרוסקופי, היסטוריה אישית של מעיים / ממאירות מעי הגס, או היסטוריה של עוקף / ניתוח הרזיה אחר קיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא התורם לא נסע לאחרונה (בתוך שלושת החודשים האחרונים) לאזור שבו שלשולים מדבקים הוא דאגה. אם הם טיילו וחוו שלשול הם צריכים להיות exluded. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהתורם לא לוקח שום סוכנים מדכאים את מערכת חיסון ולא בכימותרפיה מערכתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהתורם אין סינדרום מטבולים, מחלות אוטואימוניות או מחלות דרמטיטיס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג con נכתבנשלח מהתורם למקבל לפני הקרנה בהתחשב באופי רגיש של בדיקות הסקר. להרגיע את שני הצדדים שתוצאות בדיקה לא ישותפו עם הצד השני. </li></ol> 4. הקרנה הערה: פרוטוקול הקרנה זו הותאם לחולים בריגהאם ובית החולים לנשים במסצ&#39;וסטס, ארה&quot;ב לשקול ייעוץ זיהומיות מחלקה למחלות ומניעת זיהומים בבית חולים לפני ייזום פרוטוקול FMT כדי לוודא שכל בדיקות הסקר המתאימות כבר נחשבו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נמען: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעת הביקור במרפאת הראשונית, לשלוח בדיקות המעבדה הבאות להקרנת נמען (להקמת בדיקות בסיס למחלות זיהומיות אלה ועל מנת להבטיח שאין שאלה של שידור בעתיד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע צהבת (IgG וIgM), צהבת מסוג B (HBsAg / Ab וHbcAb), הפטיטיס C Ab, HIV-1/2 (Ab ועומס נגיפי) ועגבת (TP-IgG) t דם מעבדהests. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג היסטוריה יסודית של אלרגיות למזון בהערכה ראשונית זו. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תורם: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתאם עם המעבדה למיקרוביולוגיה לפני ההקרנה על מנת להבטיח שרפרף נוצר הוא לא מבוטלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזמין בדיקות המעבדה מתחת להקרנת תורם אם התורם עונה על קריטריונים לזכאות כאמור בסעיף 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע צהבת (IgG וIgM), צהבת מסוג B (HBsAg / Ab וHBcAb), הפטיטיס C Ab, HIV-1/2 (עומס נגיפי וAb) ועגבת (TP-IgG) בדיקות דם במעבדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע difficile ג (על ידי תרבות), תרבות שרפרף שגרתית, אנטיגן Giardia, אנטיגן Cryptosporidium ובדיקות צואת מעבדה ביציות וטפילים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסך התורם לא יותר מ 30 ימים, אבל רצוי 1-2 שבועות לפני ההליך המתוכנן. הערה: אם תורם מפתחת שרפרף שלשול או נוזלי הם אינם זכאים עוד לתרומה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יועץ התורם על מזונות להימנע מבוסס עלאלרגיות למזון של הנמען. התורם לא צריך לבלוע מזונות שהנמען הוא אלרגי במשך 5 הימים לפני התרומה. </li></ol> 5. טרום הליך הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נמען: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בביקור במרפאת הראשונית, אם הנמען אינו נמצא כבר בvancomycin האוראלי, להתחיל vancomycin 125 מ&quot;ג כל שעה 6 לפחות שבוע עד עשרה ימים לפני ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק את הנמען להוראות מרכז אנדוסקופיה להכנת מעי לפני קולונוסקופיה להיעשות היום לפני ההליך המתוכנן. לנמענים צריכים גם לעקוב אחר הוראות התזונה סטנדרטית של מרכז אנדוסקופיה לשבוע לפני ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להורות לנמען לקחת המנה האחרונה של vancomycin בלילה שלפני ההליך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תורם: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק תורם עם כמה כוסות אוסף שרפרף. מוסיף שירותים לייבל (כובעים) וכוסות עם התווית של הנמען, כמו גם 3 sp הריקecimen מכולות. שאל את התורם להתחיל אוסף שרפרף לא יותר מ -6 שעות לפני העיבוד (זמן של הליך). הערה: אם התורם מספק דגימות צואה מרובות, הם צריכים להיות מתויגים עם תאריכים ושעות. השתמש במדגם העדכניים ביותר (כוס דגימה מולא באופן אחד תספיק). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהנמען למביא דגימת הצואה של התורם עימם להליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את דגימות הצואה בטמפרטורת חדר. תכלול כל שרפרף מעוצב. לבטל את כל צואה שאינה בשימוש במערכת ביוב סניטרית (אלא אם כן חיסכון למטרות מחקר). </li></ol></li></ol> 6. צואה הכנה הערה: ודא הליך זה נדונה ואושרה על ידי מחלקת בקרת זיהום בבית החולים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללבוש ציוד מגן אישי בעת הכנת השרפרף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן שרפרף באנדוסקופיה החדרים בשטח עבודה ייעודי שבו יש שטח הצפת שמונה עשר אינץ &#39;המונע זיהום של othחומרי er. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני צואת הכנה, לנקות את האזור המיועד עם חומר חיטוי שאושר על-חולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכסות את האזור עם כרית חד פעמית, כדי למנוע זיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את השרפרף נוצר לתוך בלנדר מהירות אחת ארבעה עשר אונקיה ולהוסיף 500 סמ&quot;ק של מלח רגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למזג את התוכן לדקה אחת לפחות או עד שהוא מגיע עקביות slurry נוזלית. להיות זהיר, כדי למנוע דליפה בעת הסרת המכסה של הבלנדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים את הפתרון דרך המסננת לתוך קערת שמונה ליטר מפלסטיק כדי לחסל כל פסולת מוצקה. מחק את המסננת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צייר את הפתרון המתוח למזרקי מנעול luer 60 סמ&quot;ק (כ שמונה עד תשעה לFMT סטנדרטי על ידי קולונוסקופיה). צייר את 60 סמ&quot;ק נוסף של מלח רגיל לחום. </li></ol> 7. השתלות צואה באמצעות קולונוסקופיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללבוש ציוד מגן אישי בהתאם למדיניות יחידת אנדוסקופיה בעת ביצוע או סיוע בinfusion. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול תרופת הרגעה קלה, אם אפשר, כך שהמטופל יוכל לשתף פעולה עם שמירה על השרפרף לאחר ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע קולונוסקופיה למעי המסוף (או ככל אפשרי מבחינה טכנית). על הכנסה של colonscope, שטיפה ושאיבת צואה נוזלית שייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את הקירות הריריים לראיות של ביופסיות דלקת ברירית אך אינם מבוצעים באופן שיגרתי במהלך הליך FMT. הערה: לקבוע אם או לא קולונוסקופיה מלאה היא בטוחה כתוצאה מהמידה של דלקת. אם לא, כדאי לשקול סיגמואידוסקופיה מוגבלת יותר גמישה עם עירוי (להשתמש במחצית של slurry השרפרף). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשרות 60 סמ&quot;ק (מזרק אחד) פעם אחת במעי המסוף דרך ערוץ הביופסיה של הקולונוסקופ באמצעות כובע ערוץ ביופסיה עם צינורות הארכה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בין יישומים של מזרקים שרפרף, לשטוף את הערוץ עם מלח רגיל, כדי למנוע סתימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחדיר עוד 60 cc של צואה לcecum ולאחר מכן לחזור בג הנכוןolon. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך יציקת 30 סמ&quot;ק כל 9:55 סנטימטר בעת שחלקה את התערובת באופן שווה על כל ארבעת קירות מעי גס הרביעים עד שיגיע למעי גס אמצע רוחבי. זכור לשטוף עם מי מלח בין מזרקים שרפרף. הערה: אם slurry הוא צמיג מאוד ייתכן שיהיה צורך לדחוף בכוח רב על המזרק. היזהר שכובע ערוץ הביופסיה אינו נפרד מהקולונוסקופ ולגרום לדליפה של תוכן צואה. תכופה שטיפה תאפשר למעבר קל יותר של התרחיף. אם יש קושי מתמשך בדוחפים סלארי, לשקול מחדש מתאמץ שרפרף התורם שנותר בפעם שנייה או דילול נוסף עם מלח רגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב אוויר עודף על נסיגה בעת שינוי חביות מזרק בעוד נזהר שלא לשאוב כל שרפרף נוזלי. הערה: אם החולה ידע בריחת צואה, המזרק האחרון צריכה להיות חדור לא נמוכה מכפף הכבד כדי למנוע דליפה במהלך ולאחר הליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהקולונוסקופיה דואר עם FMT הושלמה, לייעץ לחולה לשמור על השרפרף כל עוד הם יכולים. הם עשויים לחדש את התזונה הרגילה שלהם ותרופות שעות לאחר קולונוסקופיה היא מלאה. </li></ol> קולונוסקופיה 8. עם FMT Clean Up <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע עיבוד מחדש לאחר הליך ציוד, ניקוי / חיטוי סביבה וסילוק פסולת לפי פרוטוקול בית חולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להיפטר מכל החומר צואתי במכל Biohazard המתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא הקולונוסקופ לאזור הטיהור לעיבוד שיגרתי לכל פרוטוקול סטנדרטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלך את הבלנדר ומסנן עם כל פסולת מלוכלכת אחרת. הערה: אם בלנדרים ליחד ומסננות הם לא ריאלי בחלופי מוסד בודד יכולות להיחשב שיטות ערבוב. דוגמא אחת: להעביר את הצואה דרך ricer תפוח אדמה נירוסטה שניתן לנקות בחיטוי. אנו ממליצים לדון בכל שיטות אפשריות עם dep בקרת זיהום של המתקן שלךartment. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטהר את כל המשטחים ששמשו להליך שימוש במוצרים שאושר המתקן. </li></ol> 9. מעקב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לארגן פגישת מעקב במרפאת גסטרואנטרולוגיה עבור המטופל כ -30 יום לאחר FMT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יועץ המטופל על הסיכון להשנות difficile ג עם קורסי עתיד של אנטיביוטיקה. </li></ol> 10. דיווח על תופעות לוואי חמורים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרות FMT נחשב הליך בטוח, זה מומלץ מאוד לעקוב אחר כל תופעות הלוואי הרגישו להיות קשורות להליך ולדווח עליהם ללוחות הרגולציה המתאימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת לתעד את הבטיחות לטווח הארוך של FMT, לשמור על מסד נתונים אמין שניתן שאילתא מעת לעת. </li></ol>

<ol>
	<li>Eiseman, B., Silen, W., Bascom, G. S., Kauvar, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+enema+as+an+adjunct+in+the+treatment+of+pseudomembranous+enterocolitis.">Fecal enema as an adjunct in the treatment of pseudomembranous enterocolitis.</a> Surgery. 44 (5), 854-859 (1958).</li><li>Zhang, F., Luo, W., Shi, Y., Fan, Z., Ji, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Should+we+standardize+the+1,700-year-old+fecal+microbiota+transplantation.">Should we standardize the 1,700-year-old fecal microbiota transplantation.</a> Am J Gastroenterol. 107 (11), 1755-1710 (2012).</li><li>Borody, T. J., Paramsothy, S., Agrawal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+microbiota+transplantation:+indications,+methods,+evidence,+and+future+directions.">Fecal microbiota transplantation: indications, methods, evidence, and future directions.</a> Curr Gastroenterol Rep. 15 (8), 337 (2013).</li><li>Mattila, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+transplantation,+through+colonoscopy,+is+effective+therapy+for+recurrent+Clostridium+difficile+infection.">Fecal transplantation, through colonoscopy, is effective therapy for recurrent Clostridium difficile infection.</a> Gastroenterology. 142 (3), 490-496 (2012).</li><li>Brandt, L. J., Aroniadis, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+fecal+microbiota+transplantation:+techniques,+indications,+and+outcomes.">An overview of fecal microbiota transplantation: techniques, indications, and outcomes.</a> Gastrointest Endosc. 78 (2), 240-249 (2013).</li><li>Aas, J., Gessert, C. E., Bakken, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrent+Clostridium+difficile+colitis:+case+series+involving+18+patients+treated+with+donor+stool+administered+via+a+nasogastric+tube.">Recurrent Clostridium difficile colitis: case series involving 18 patients treated with donor stool administered via a nasogastric tube.</a> Clin Infect Dis. 36 (5), 580-585 (2003).</li><li>Garborg, K., Waagsbo, B., Stallemo, A., Matre, J., Sundoy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+faecal+donor+instillation+therapy+for+recurrent+Clostridium+difficile-associated+diarrhoea.">Results of faecal donor instillation therapy for recurrent Clostridium difficile-associated diarrhoea.</a> Scand J Infect Dis. 42 (11-12), 857-861 (2010).</li><li>Kassam, Z., Lee, C. H., Yuan, Y., Hunt, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+microbiota+transplantation+for+Clostridium+difficile+infection:+systematic+review+and+meta-analysis.">Fecal microbiota transplantation for Clostridium difficile infection: systematic review and meta-analysis.</a> Am J Gastroenterol. 108 (4), 500-508 (2013).</li><li>Kelly, C. R., de Leon, L., Jasutkar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+microbiota+transplantation+for+relapsing+Clostridium+difficile+infection+in+26+patients:+methodology+and+results.">Fecal microbiota transplantation for relapsing Clostridium difficile infection in 26 patients: methodology and results.</a> J Clin Gastroenterol. 46 (2), 145-149 (2012).</li><li>Lund-Tonnesen, S., Berstad, A., Schreiner, A., Midtvedt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clostridium+difficile-associated+diarrhea+treated+with+homologous+feces.">Clostridium difficile-associated diarrhea treated with homologous feces.</a> Tidsskr Nor Laegeforen. 118 (7), 1027-1030 (1998).</li><li>MacConnachie, A. A., Fox, R., Kennedy, D. R., Seaton, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Faecal+transplant+for+recurrent+Clostridium+difficile-associated+diarrhoea:+a+UK+case+series.">Faecal transplant for recurrent Clostridium difficile-associated diarrhoea: a UK case series.</a> QJM. 102 (11), 781-784 (2009).</li><li>Mellow, M. H., Kanatzar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonoscopic+fecal+bacteriotherapy+in+the+treatment+of+recurrent+Clostridium+difficile+infection--results+and+follow-up.">Colonoscopic fecal bacteriotherapy in the treatment of recurrent Clostridium difficile infection--results and follow-up.</a> J Okla State Med Assoc. 104 (3), 89-91 (2011).</li><li>Polak, P., Freibergerova, M., Jurankova, J., Kocourkova, H., Mikesova, L., Svacina, R., Husa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+experiences+with+faecal+bacteriotherapy+in+the+treatment+of+relapsing+pseudomembranous+colitis+due+to+Clostridium+difficile.">First experiences with faecal bacteriotherapy in the treatment of relapsing pseudomembranous colitis due to Clostridium difficile.</a> Klin Mikrobiol Infekc Lek. 17 (6), 214-217 (2011).</li><li>Rohlke, F., Surawicz, C. M., Stollman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+flora+reconstitution+for+recurrent+Clostridium+difficile+infection:+results+and+methodology.">Fecal flora reconstitution for recurrent Clostridium difficile infection: results and methodology.</a> J Clin Gastroenterol. 44 (8), 567-570 (2010).</li><li>Sekirov, I., Russell, S. L., Antunes, L. C., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota+in+health+and+disease.">Gut microbiota in health and disease.</a> Physiol Rev. 90 (3), 859-904 (2010).</li><li>Yoon, S. S., Brandt, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+refractory/recurrent+C.+difficile-associated+disease+by+donated+stool+transplanted+via+colonoscopy:+a+case+series+of+12+patients.">Treatment of refractory/recurrent C. difficile-associated disease by donated stool transplanted via colonoscopy: a case series of 12 patients.</a> J Clin Gastroenterol. 44 (8), 562-566 (2010).</li><li>Brandt, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+follow-up+of+colonoscopic+fecal+microbiota+transplant+for+recurrent+Clostridium+difficile+infection.">Long-term follow-up of colonoscopic fecal microbiota transplant for recurrent Clostridium difficile infection.</a> Am J Gastroenterol. 107 (7), 1079-1087 (2012).</li><li>Kelly, C. R., Kunde, S. S., Khoruts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+on+preparing+an+investigational+new+drug+application+for+fecal+microbiota+transplantation+studies.">Guidance on preparing an investigational new drug application for fecal microbiota transplantation studies.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 12 (2), 283-288 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose relevant to the material presented in this manuscript.

השתלות צואה הוכחו להיות טיפול יעיל ובטוח לCDI החוזר ונשנה. נציין כאן פרוטוקול סטנדרטי לFMT באמצעות קולונוסקופיה וכללו התוצאות שלנו במשך 22 חולים שעברו את הפרוצדורה לCDI החוזר ונשנה. התוצאות שלנו עד כה דומות לנתונים שפורסמו למחלה חוזרת עם רק חולה אחד חוזר לאחר FMT חודש אחד. שלב קריטי של ההליך הוא ביקור prescreening כדי להבטיח שהתורם מתאים וכי לחולה יש אין התוויות נגד לעובר קולונוסקופיה. הקרנה בדרך כלל לוקחת שלושה עד ארבעה ימים כדי להשלים את ההליך וניתן לתזמן זמן קצר לאחר מכן. שינויים קלים עשויים להיות נעשו בהתאם למטופל. המטופל שנדרש שתי FMTs גם מחלת קרוהן והיה פוסט מעמד כריתת מעי גס מוחלטת עם ההשקה ileo-אנאלי. ההשתלה הראשונה שלו הייתה באמצעות הקולונוסקופ שבו אנו החדירו שרפרף ב -90 סנטימטרים frאום פי הטבעת למעי הדק שלו. כאשר ג difficile חזר על עצמו, המשיך עם FMT שני באמצעות enteroscopy המעי הדק וכתוצאה מהחלטה. כפי שצוין בפרוטוקול, ניתן לבצע סיגמואידוסקופיה גמישה מוגבלת יותר אם יש עדות לדלקת משמעותית או החולה אינו יכול לסבול קולונוסקופיה מלאה. הגבלה של FMT עשויה להיות כיסוי ביטוחי. בארצות הברית, לא כל חברות הביטוח המסחריים לכסות הליך זה. לכן, חשוב לבדוק עם חברת הביטוח של המטופל לפני FMT ומכתב צורך רפואי יש צורך לעתים קרובות. לסיכום, FMT הוא טיפול יעיל לCDI החוזר וטומן בחובו הבטחה לטיפול בתהליכי מחלה אחרים, כגון מחלות אוטואימוניות ומחלות מעי דלקתיות. בעתיד הקרוב, מקדם כגון יצירת &quot;בנקים שרפרף&quot; עשויה לייתר את הצורך בתורמי שרפרף ולייעל את הקדם-pתהליך מיון שרפרף rocedure. למרות שפרופיל הבטיחות של קולונוסקופיה עם FMT נראה מצוין, ההשלכות ארוכת הטווח עדיין לא ידועות. בכל הקשור בהצגת מקרה האישה בת 69, היא עברה FMT מוצלח והייתה נורמליזציה של תנועותיה מעי בתוך 2 ימים של ההליך. היא עברה טיפול נוסף של CLL עם כימותרפיה ונשארה ג difficile חופשי ליותר משישה חודשים.

השתלות צואה לטיפול בקוליטיס pseumembranous תוארו לראשונה בשנת 1958 1. עם זאת, דיווחים על בליעת צואה לטיפול בהרעלת מזון ותאריך שלשול חמור בחזרה כבר במאה הרביעית סין 2. השתלת חיידקי צואה (FMT) נקראת גם בספרות &quot;השתלת צואה&quot;, &quot;עירוי פרוביוטיים אנושי&quot;, &quot;השתלת צואה&quot;, &quot;שיקום Microbiome מעיים&quot;, ו &quot;העברת צואה&quot;. היא כוללת איסוף צואת מתורם בריא, הוקרן מראש ומתן תרחיף מוכן למערכת העיכול של הנמען באמצעות צינור nasogastric, esophagogastricduodenoscopy, קולונוסקופיה, או חוקן 3. סדרת מקרה רב דיווחה על היעילות של ממשל באמצעות NGT וחוקן, אולם האחרון יותר מחקרים הראו כי ממשל של שרפרף תורם באמצעות קולונוסקופיה היא בטוחה ויעילה ביותר 4.בעוד דווחו שיטות אחרות כגון ניהול צינור nasogastric, משלוח של שרפרף תורם באמצעות קולונוסקופיה יש פחות תופעות לוואי מיידיות (נפיחות בבטן ובחילות למשל) 4 ומצאנו כי חולים מקבלים יותר את מושג FMT כאשר הוא מבוצע על ידי קולונוסקופיה. אחד היתרונות הטיפוליים של FMT באמצעות קולונוסקופיה היא הירידה ביומסה מעי הגס עקב שטיפת המעי שמתבצעת לפני ההליך 4. מחקרים רבים חקרו את התפקיד של FMT לטיפול בדלקת המעי גס ושלשולים הנגרם על ידי C. הפתוגן האופורטוניסטי difficile (CDI). השכיחות של CDI ממשיכה לעלות והוא גורם עיקרי לתחלואה ולתמותה בניטל כלכלי גדול ברחבי העולם. טיפול קו הראשון לCDI מורכב מטיפול האנטיביוטי, אולם שיעורי הישנות דווחו בין 15-35% 5. סדרת מקרים ודיווחים כמה יש לי לעשותcumented את הבטיחות ויעילות של FMT לעקשן CDI לטיפול רפואי סטנדרטי באנטיביוטיקה 4,6-16. מחקר מסתכל על מעקב ארוך טווח של חולים לאחר FMT באמצעות קולונוסקופיה לCDI דיווח 91% שיעור ריפוי ראשוני בחולי 77 17. במרכז שלנו (Brigham and אגף בית החולים לנשים לגסטרואנטרולוגיה, Hepatology ואנדוסקופיה), יזמנו תכנית השתלת צואה בחולים עם הישנות או CDI עקשן. מועמדים מתאימים מוגדרים כמטופלים שיש להם CDI החוזר (היסטוריה של 3 או יותר פרקים, או כ -2 פרקים שנזקקה לאשפוז), או בחולים עם מחלת עקשן שאינה מגיבים לאנטיביוטיקה מסורתית. אנו מאמינים בגישה שיטתית לכל שלבי הליך זה ממקסם את היעילות. בכתב היד הזה וסרטון נלווה, אנחנו פירוט הפרוטוקול שמועסקים במרכז שלנו, הכולל חולה ותורם הקרנה, הכנת שרפרף, והמשלוח של שרפרףt הזמן של קולונוסקופיה. שיטה זו הניבה תוצאות חיוביות דומות לספרות שפורסמה. הצגת מקרה: חולה זה מייצג מטופל טיפוסי התייחס להשתלת צואה. המטופל הוא אישה בת 69 עם היסטוריה של לוקמיה לימפוציטית כרונית שהייתה לי הישנות של מחלה הדורשת טיפול נוסף עם כימותרפיה. היא סבלה משלושה פרקים של CDI בשנה האחרונה, ולכן הופנתה למרפאת שלנו בתמורה של כימותרפיה לפני FMT מחדש ייזום. הפרק הראשון שלה CDI התרחש באוקטובר 2012. היא לא הייתה כל אנטיביוטיקה שקדמה. היא הייתה חולה מאוד במחלקה לטיפול הנמרץ לאחר שהציג עם הלם זיהומי ועברה הסטת ileostomy לולאה עם antegrade vancomycin חוקנים לקורס 6 בשבוע בשילוב עם vancomycin האוראלי נתן את חומרת מחלתה. היא עשתה טובה מאוד עם רזולוציה של שלשולה והיא הייתה מסוגלת לבואאנטיביוטיקה מ. היא פיתחה בקע סביב סטומה אז זה היה הפוך. זמן קצר לאחר היפוך ostomy היא שוב פיתחה שלשולים ונמצא שוב להיות C. רעלן difficile חיובי. היא סיימה עוד קורס 6 שבוע של vancomycin האוראלי והיה מסוגל לרדת, שלו בהצלחה. עם זאת כמה חודשים לאחר מכן, היא שוב פיתחה שלשול שהיה ג רעלן difficile חיובי והחל בקורס השלישי שלה vancomycin האוראלי. היא עושה גם באנטיביוטיקה כאשר צוין כי הספירה הלבנה שלה עלתה ל&gt; 100 והיא מצאה שיש הישנות של CLL בביופסיה של מוח עצם. אונקולוגים היו מודאגים לגבי ייזום כימותרפיה ללא רזולוציה של CDI מלא ולכן אנחנו התבקשו לבצע FMT.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="840">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:121px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:355px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="92">
			<td height="92" style="height:92px;width:247px;">Blender</td>
			<td style="width:121px;">Hamilton Beach</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:355px;">http://www.amazon.com/Hamilton-Beach-51101-Personal-Blender/dp/B00065L6CU/ref=pd_sim_k_2?ie=UTF8&#38;refRID=1Q06MXAE9XKTB4QG0AEN</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:247px;">Strainer</td>
			<td style="width:121px;">Winco MS3A-8S Strainer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:355px;">http://www.amazon.com/Winco-MS3A-8S-Strainer-Single-Wooden/dp/B001VZ5E40/ref=sr_1_3?s=home-garden&#38;ie=UTF8&#38;qid=1395001295&#38;sr=1-3&#38;keywords=kitchen+strainer+wooden+handle</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Disposable pads (chux), 17in x 24in.&#160;</td>
			<td>hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>one package&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Pink rectangular hospital standard wash basin, 8 quart&#160;</td>
			<td>hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>1 or 2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">500 cc bottle of sterile normal saline</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">60cc leur lock syringes</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>8 or 9</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Biopsy channel cap with extension</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fecal microbiota transplantation via colonoscopy for recurrent c. difficile infection

הצואה חיידקי השתלה (FMT) היא טיפול בטוח ויעיל ביותר עבור ג החוזר והעקשן זיהום difficile (CDI). שיטות שונות של ממשל FMT דווחו בספרות כוללים צינור nasogastric, העליונה אנדוסקופיה, חוקן וקולונוסקופיה. FMT באמצעות תשואות קולונוסקופיה שיעורי ריפוי מצוינים, והוא גם נסבל היטב. מצאנו כי חולים למצוא מצב מקובל ונסבל זה של משלוח. במרכז שלנו, יש לנו יזמה תכנית השתלת צואה בחולים עם הישנות או CDI עקשן. פיתחנו פרוטוקול באמצעות תהליך חוזר ונשנה של תיקון ובצענו 24 השתלות צואה על 22 חולים עם הצלחת שיעורים דומים לספרות שפורסמה הנוכחית. גישה שיטתית להקרנת מטופל ותורם, הכנת השרפרף, ואספקה ​​של השרפרף למקסימום הצלחה טיפולית. כאן אנו פירוט כל צעד של פרוטוקול FMT שיכול להתבצע בכל אנדוסקופיהמרכז עם רמה גבוהה של בטיחות והצלחה.

יש לנו לבצע 24 FMTs על 22 חולים במרכז שלנו (טבלת 1), תוך שימוש בפרוטוקול לעיל. היו תשעה חולים במחל מעי דלקתיים במקביל (שישה עם מחלת קרוהן ושלוש עם קוליטיס כיבית). כל תשע היו החלטה של ​​CDI. אחד מהחולים עם מחלת קרוהן היה מעמד לפרסם כריתת מעי גס הכולל לקוליטיס קרוהן. בהתחלה הוא עבר FMT באמצעות קולונוסקופיה אולם לאחר שחווה בשבועות שלאחר FMT הישנות הוא עבר FMT שני באמצעות אנדוסקופיה העליונה אשר הביאה בהחלטת CDI. עשר מתוך שלושה עשר של החולים שאינם IBD היו החלטה של תסמינים הקשורים לג מלא difficile לאחר FMT אחד עם אורך ממוצע של מעקב של 3 חודשים [2 שבועות - 17 חודשים]. חולה אחד עבר FMT שני, שהביא להחלטה של ​​CDI. החולה השני שהישנות לאחר FMT בחר שלא צריך השתלה שנייה. לא היו סיבוכים הקשורים להליך או FMT (כלומר זיהומים,התלקחות של IBD, בחילות, הקאות, כאבי בטן, או דימום במערכת עיכול) במהלך המוגבל למועד מעקב. חולה אחד עם IBD לא חוויה עצמית מוגבל כאבי בטן יום אחד לאחר FMT. טבלת 1: מאפיינים של חולים שעברו השתלת צואה חיידקים במרכז שלנו. <img alt="טבלת 1" src="/files/ftp_upload/52154/52154table1.jpg" width="500" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52154/52154table1.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של השולחן הזה.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection at JoVE.com

Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

הצואה חיידקי השתלה באמצעות קולונוסקופיה היא טיפול בטוח ויעיל לזיהום C.difficile חוזר ועקשן. גישה שיטתית למטופל והקרנת תורם, הכנת השרפרף, ואספקה ​​של הצואה במהלך קולונוסקופיה תהיה למקסם את ההצלחה טיפולית.

צואה חיידקי השתלה באמצעות קולונוסקופיה לחוזרת<em&gt; C. difficile</em&gt; זיהום

Fecal Microbiota Transplantation (FMT) is a safe and highly effective treatment for recurrent and refractory C. difficile infection (CDI). Various methods ...

fecal-microbiota-transplantation-via-colonoscopy-for-recurrent-c

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

27.0K Views.  Brigham and Women‘s Hospital.  הצואה חיידקי השתלה באמצעות קולונוסקופיה היא טיפול בטוח ויעיל לזיהום C.difficile חוזר ועקשן. גישה שיטתית למטופל והקרנת תורם, הכנת השרפרף, ואספקה ​​של הצואה במהלך קולונוסקופיה תהיה למקסם את ההצלחה טיפולית. 

Video: Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations and do not accurately simulate tumor biology and tumor cell dissemination. Genetically engineered mouse models have been introduced to overcome these limitations; however, such models are technically demanding, especially in large organs such as the colon in which only a single tumor is desired.
As a result, an immunocompetent, genetically engineered mouse model of colorectal cancer was developed which develops highly uniform tumors and can be used for tumor biology studies as well as therapeutic trials. Tumor development is initiated by surgical, segmental infection of the distal colon with adeno-cre virus in compound conditionally mutant mice. The tumors can be easily detected and monitored via colonoscopy. We here describe the surgical technique of segmental adeno-cre infection of the colon, the surveillance of the tumor via high-resolution colonoscopy and present the resulting colorectal tumors.

A protocol for the establishment of a genetically engineered mouse model of colorectal cancer by segmental adeno-cre infection and its surveillance via high-resolution colonoscopy is presented.

דגם עכבר מהונדס גנטית של סרטן המעי הגס ספוראדי

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Cancer Research

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

Clostridium difficile is a Gram-positive, anaerobic, sporogenic bacterium that is primarily responsible for antibiotic associated diarrhea (AAD) and is a significant nosocomial pathogen. C. difficile is notoriously difficult to isolate and cultivate and is extremely sensitive to even low levels of oxygen in the environment. Here, methods for isolating C. difficile from fecal samples and subsequently culturing C. difficile for preparation of glycerol stocks for long-term storage are presented. Techniques for preparing and enumerating spore stocks in the laboratory for a variety of downstream applications including microscopy and animal studies are also described. These techniques necessitate an anaerobic chamber, which maintains a consistent anaerobic environment to ensure proper conditions for optimal C. difficile growth. We provide protocols for transferring materials in and out of the chamber without causing significant oxygen contamination along with suggestions for regular maintenance required to sustain the appropriate anaerobic environment for efficient and consistent C. difficile cultivation.

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

Clostridium difficile is a pathogenic bacterium that is a strict anaerobe and causes antibiotic associated diarrhea (AAD). Here, methods for isolating, culturing and maintaining C. difficile vegetative cells and spores are described. These techniques necessitate an anaerobic chamber, which requires regular maintenance to ensure proper conditions for optimal C. difficile cultivation.

Culturing ושמירה<em&gt; Difficile Clostridium</em&gt; בסביבת אנאירובית

Clostridium  difficile is a Gram-positive, anaerobic, sporogenic bacterium  that is primarily responsible for antibiotic associated diarrhea (AAD) and is ...

Immunology and Infection

Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer being two common examples. Despite the frequency of these procedures, a significant knowledge gap remains in describing the inherent effects of intestinal resection on host physiology and disease pathophysiology. This article provides detailed instructions for an ileocolic resection with primary end-to-end anastomosis in mice, as well as essential aspects of peri-operative care to maximize post-operative success. When followed closely, this procedure yields a 95% long-term survival rate, no failure to thrive, and minimizes post-operative complications of bowel obstruction and anastomotic leak. The technical challenges of performing the procedure in mice are a barrier to its wide spread use in research. The skills described in this article can be acquired without previous surgical experience. Once mastered, the murine ileocolic resection procedure will provide a reproducible tool for studying the effects of intestinal resection in models of human disease.

Ileocolic resection is commonly performed in several human diseases; however, little is known regarding the impact of intestinal resection on surgical illnesses. This article provides instruction on executing the procedure in mice with high success, providing a means to study the effects of ileocolic resection in models of disease.

עכברי Ileocolic מעי כריתה עם השקה ראשונית

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and consequently poses an urgent threat to public health. Recurrence of a C. difficile infection (CDI) after successful treatment with antibiotics is high, occurring in 20-30% of patients, thus necessitating the discovery of novel therapeutics against this pathogen. Current animal models of CDI result in high mortality rates and thus do not approximate the chronic, insidious disease manifestations seen in humans with CDI. To evaluate therapeutics against C. difficile, a mouse model approximating human disease utilizing a clinically-relevant strain is needed. This protocol outlines the cefoperazone mouse model of CDI using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Techniques for clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol. Compared to other mouse models of CDI, this model is not uniformly lethal at the dose administered, allowing for the observation of a prolonged clinical course of infection concordant with the human disease. Therefore, this cefoperazone mouse model of CDI proves a valuable experimental platform to assess the effects of novel therapeutics on the amelioration of clinical disease and on the restoration of colonization resistance against C. difficile.

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

This protocol outlines the cefoperazone mouse model of Clostridium difficile infection (CDI) using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Emphasis on clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol.

Cefoperazone שטופל עכבר דגם של קליני רלוונטי<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; R20291 הזנים

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted considerable attention. Accumulating evidence suggests that dysbiotic microbiota plays an active role in triggering or worsening the inflammatory process in IBD and that fecal microbiota transplantation (FMT) is an attractive therapeutic strategy since transferring a healthy microbiota to IBD patient could restore the appropriate host-microbiota communication. However, the molecular mechanisms are unclear, and the efficacy of FMT has not been very well established. Thus, further studies in animal models of IBD are necessary. In this method, we applied FMT from wild-type C57BL/6J mice to IL-10 deficient mice, a widely used mouse model of colitis. The study elaborates on collecting fecal pellets from the donor mice, making the fecal solution/suspension, administering the fecal solution, and monitoring the disease. We found that FMT significantly mitigated the cardiac impairment in IL-10 knockout mice, underlining its therapeutic potential for IBD management.

The interaction of genetic susceptibility, mucosal immunity, and intestinal microecological environment is involved in the pathogenesis of inflammatory bowel disease (IBD). In this study, we applied fecal microbiota transplantation to IL-10 deficient mice and investigated its impact on colonic inflammation and heart function.

הערכה טיפולית של השתלת מיקרוביוטה בצואה במודל עכבר עם מחסור באינטרלוקין 10

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted ...

Murine Fecal Isolation and Microbiota Transplantation

Gut microbiota dysbiosis plays a role in the pathophysiology of cardiovascular and metabolic disorders, but the mechanisms are not well understood. Fecal microbiota transplantation (FMT) is a valuable approach to delineating a direct role of the total microbiota or isolated species in disease pathophysiology. It is a safe treatment option for patients with recurrent Clostridium difficile infection. Preclinical studies demonstrate that manipulating the gut microbiota is a useful tool to study the mechanistic link between dysbiosis and disease. Fecal microbiota transplantation may help elucidate novel gut microbiota-targeted therapeutics for the management and treatment of cardiometabolic disease. Despite a high success rate in rodents, there remains translational changes associated with the transplantation. The goal here is to provide guidance in studying the effects of gut microbiome in experimental cardiovascular disease. In this study, a detailed protocol for the collection, handling, processing, and transplantation of fecal microbiota in murine studies is described. The collection and processing steps are described for both human and rodent donors. Lastly, we describe using a combination of the Swiss-rolling and immunostaining techniques to assess gut-specific morphology and integrity changes in cardiovascular disease and related gut microbiota mechanisms.

The goal here is to outline a protocol to investigate the mechanisms of dysbiosis in cardiovascular disease. This paper discusses how to aseptically collect and transplant murine fecal samples, isolate intestines, and use the "Swiss-roll" method, followed by immunostaining techniques to interrogate changes in the gastrointestinal tract.

בידוד צואה מורין והשתלת מיקרוביוטה

Gut microbiota dysbiosis plays a role in the pathophysiology of cardiovascular and metabolic disorders, but the mechanisms are not well understood. Fecal ...

Preparation and Maintenance of Bioexclusion IsoPositive Cage Experiment for Human Fecal Transplantation into Germ-Free Mice

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of the specific role of individuals, defined or complex groups of microorganisms in host response. Traditionally bred and reared in flexible-film or semi-rigid isolators, germ-free mouse husbandry and experimental manipulation are costly and require numerous trained staff and a large space footprint in animal housing facilities. The IsoPositive caging system allows for experimental manipulation of germ-free mice in individual, hermetically-sealed, positive-pressure isolator cages (isocages), reducing cost and enabling greater flexibility in experimental manipulations. 
Here, a protocol is described for transferring germ-free mice from breeding isolators to isocages and subsequent fecal transfer from human donor stool into mice to create stable long-term gut "humanized" mice for future studies. The materials and preparation needed for the utilization of the isocage system are described, including the use of chlorine-dioxide sterilant chemical sterilant to clean cages, supplies, equipment, and personal protective equipment. The methods for confirming the germ-free status of transferred mice and how to determine contamination in the caging system are discussed. The procedure for husbandry, including bedding, food, and water supply, is further discussed. The protocol for human fecal slurry preparation and gavage into germ-free mice to create gut "humanized" mice, along with stool collection to monitor the microbial community composition of these mice, are described. An experiment illustrates that two weeks post-human fecal transplant allows for stable colonization of donor microbiota in the murine hosts, enabling subsequent experimental usage. Furthermore, the collection of humanized mouse feces in viability preservation media, enabling use in further functional experiments, is described. Overall, these methods allow for the safe and effective establishment of humanized mouse communities in experimental gnotobiotic cages for further manipulation.

This protocol describes the best practices for germ-free mouse transfer to and housing in experimental single-cage isolators (isocages) while maintaining sterile conditions. Methods for fecal transplant into germ-free mice and the collection of viable bacteria from these gut "humanized" mice for further applications are discussed.

הכנה ותחזוקה של ניסוי כלוב איזופוזיטיבי להדרה ביולוגית להשתלת צואה אנושית בעכברים נטולי חיידקים

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of ...

Fecal Microbiota Transplantation and Detection of Prevalence of IgA-Coated Bacteria in the Gut

Gut microbiota exert pleiotropic roles in human health and disease. Fecal microbiota transplantation (FMT) is an effective method to investigate the biological function of intestinal bacteria as a whole or at the species level. Several different FMT methods have been published. Here, we present an FMT protocol that successfully depletes gut microbiota in a matter of days, followed by transplantation of fecal microbiota from fresh or frozen donor intestinal contents to conventional mice. Real time-PCR is applied to test the efficacy of bacterial depletion. Sequencing of the 16S ribosomal RNA (rRNA) is then applied to test the relative abundance and identity of gut microbiota in recipient mice. We also present a flow cytometry-based detection method of immunoglobulin A (IgA)-coated bacteria in the gut.

We established an efficient way to deplete intestinal bacteria in three days, and subsequently transplant fecal microbiota via gavage of fecal fluid prepared from fresh or frozen intestinal contents in mice. We also present an optimized method to detect the frequency of IgA-coated bacteria in the gut.

Gut microbiota exert pleiotropic roles in human health and disease. Fecal microbiota transplantation (FMT) is an effective method to investigate the ...

Biology

Investigating the Alleviating Effects of Bacillus cereus Administration on Colitis through Gut Microbiota Modulation

Gut microbiota dysbiosis is thought to exert a role in the progression of colitis. However, the precise standards for probiotic administration in alleviating colitis remain undefined. Most analysis methods rely on limited diversity and abundance of gut microorganisms. Therefore, observational studies cannot establish causation. In this study, we applied antibiotic-induced pseudo-germ-free mice to investigate the role of gut microbiota in regulating the probiotic effects of Bacillus&#160;cereus (B. cereus)&#160;on dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis in mice. This process allows for evaluating the bidirectional regulating effect of B. cereus&#160;supplementation on health and provides stable and reproducible results. Here, the detailed protocols for B. cereus cultivation, gavage operation, stool collection, and antibiotic clearance treatment on colitis mice are provided. The optimization methods are also applicable for other chronic inflammatory-associated disorders. The results showed that B. cereus administration decreased body weight loss, colon length shortening, disease activity index, and histopathological scores. However, treatment with antibiotics suppressed the positive effect of B. cereus on colitis. These results indicate that gut microbiota are needed for the alleviating effects of B. cereus on colitis. Therefore, exploring the beneficial effects of probiotics in this research is a promising approach for developing novel treatment strategies for alleviating the symptoms of chronic inflammatory-associated disorders.

Investigating the Alleviating Effects of Bacillus cereus Administration on Colitis through Gut Microbiota Modulation

Here, we present a protocol to establish the antibiotic-induced pseudo-germ-free dextran sulfate sodium-induced colitis mouse model to investigate the role of gut microbiota in regulating the positive effects of Bacillus cereus on colitis.

Gut microbiota dysbiosis is thought to exert a role in the progression of colitis. However, the precise standards for probiotic administration in ...

Generating a Double Humanized BLT (Bone-Marrow, Liver, Thymus) Mouse Model

Source: Daharsh, L. et al., <a href="https://app.jove.com/v/59773">A Double Humanized BLT-mice Model Featuring a Stable Human-Like Gut Microbiome and Human Immune System.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2019)
This video demonstrates the method for generating a double humanized bone BLT (marrow, liver, and thymus) mouse with a functional human immune system and a stable engrafted human-like gut microbiome.

יצירת מודל עכבר BLT (מח עצם, כבד, תימוס) כפול אנושי

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. Mice ...

צואה חיידקי השתלה באמצעות קולונוסקופיה לחוזרת

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

דגם עכבר מהונדס גנטית של סרטן המעי הגס ספוראדי

Culturing ושמירה

עכברי Ileocolic מעי כריתה עם השקה ראשונית

Cefoperazone שטופל עכבר דגם של קליני רלוונטי

הערכה טיפולית של השתלת מיקרוביוטה בצואה במודל עכבר עם מחסור באינטרלוקין 10

בידוד צואה מורין והשתלת מיקרוביוטה

הכנה ותחזוקה של ניסוי כלוב איזופוזיטיבי להדרה ביולוגית להשתלת צואה אנושית בעכברים נטולי חיידקים

Fecal Microbiota Transplantation and Detection of Prevalence of IgA-Coated Bacteria in the Gut

Investigating the Alleviating Effects of Bacillus cereus Administration on Colitis through Gut Microbiota Modulation

יצירת מודל עכבר BLT (מח עצם, כבד, תימוס) כפול אנושי