The authors would like to acknowledge the Infectious Disease Department at Brigham and Women&#8217;s Hospital especially Michael S. Calderwood, MD, MPH for helping us construct this protocol. We would also like to thank the Institution&#8217;s endoscopy center and it&#8217;s leadership team for their support.

참고 :이 원고 발행 시점에서 임상 시험용 신약 (IND) 응용 프로그램이 임상에서 재발 성 CDI에 대한 FMT를 수행 할 필요가 없습니다. FMTs이 연구의 일부로서 또는 다른 표시에 대해 수행되는 경우, 또는 동등한 IND 응용 프로그램 (18)을 요구할 수있다. 규제 기관은 가능성 CDI 및 기타 질환에 적용되는 FMT의 안전성과 유효성을 지속적으로 평가하고 그래서 전에 FMT 프로그램의 시작과 한 번 두 달에 하나 하나에 각각의 위치에 규제 요구 사항을 확인하는 것이 좋습니다 적극적 FMT을 수행하는 단계를 포함한다. 주 후보는 배설물 이식뿐만 아니라 대장 내시경 검사에 동의 기꺼이해야합니다. FMT에 적합한 후보자 1. 확인 <ol><li> 기존의 항생제에 응답하지 않는 재발 CDI 또는 난치성 질환 환자가 환자 appropriat 있습니다FMT의 전자 후보. 참고 : CDI 재발하는 것은 독소 테스트 또는 PCR, 입원이 필요 개의 에피소드에 의해 확인 CDI 3 개 이상의 에피소드의 역사로 정의된다. </li><li> 환자가 안전하게 대장 내시경 검사를 받아야 할 수 있는지 확인하십시오. 이 내시경의의 재량이다. </li></ol> 2. 의자 기증 선택 참고 : 의자 기증 선택 CDI의 치료에 적용 및 기타 장애의 치료에 적용 할 수없는 경우가 있습니다. <ol><li> 환자가 기증자를 식별해야합니다. 잠재적 기증자는 초기 소화기 클리닉 방문시받는 사람으로 존재해야한다. 기부자는 배우자, 가족, 또는 친구가 될 수 있습니다. 기부자 한 다른 기준이 충족되는받는 사람과 동일 거주지에 살고있다. </li></ol> 3. 기증자 적격성 <ol><li> 포함 기준은 : 기증자가 건강한 성인인지 확인 (≥18 세)와 매일 형성 장 m가ovement. </li><li> 제외 기준 : <ol><li> 기증자가 항생제를 복용하지 않거나 이전 3 개월 감염에 대한 약물 치료에 항생제를 촬영하지 않았 음을 확인합니다. </li><li> 기증자가 만성 변비 또는 사용 변비약의 역사를 가지고 있지 않음을 확인합니다. 또한, 염증성 장 질환, 만성 설사, 현미경 대장염, 장 / 대장 암, 또는 위장 / 기타 체중 감소 수술의 역사의 개인 역사의 역사를 가지고 있지 않은 기증자를 확인합니다. </li><li> 감염성 설사이 중요한 영역으로 기증자 최근 (지난 3 개월 이내에) 여행을하지 않은 지 확인하십시오. 그들은 여행과 설사를 경험 한 경우 그들은 exluded해야합니다. </li><li> 기증자가 어떤 면역 억제제를 복용하지 및 전신 화학 요법에없는되어 있는지 확인합니다. </li><li> 기증자가 대사 증후군,자가 면역 조건이나 아토피 질환이 없음을 확인합니다. </li></ol></li><li> 기록 죄수를 얻전에 선별 검사의 민감한 특성상 선별 검사에 기증자와받는 사람에서 보냈습니다. 시험 결과를 상대방과 공유되지 쌍방을 안심. </li></ol> 4. 심사 참고 :이 검사 프로토콜은 브리검 매사추세츠 여성 병원에서 환자에 대한 적응했다, 미국은 이전에 모든 적절한 선별 검사가 고려되었는지 확인하기 위해 FMT 프로토콜을 시작으로 질병 부서 및 병원 감염 관리 감염 컨설팅 고려하십시오. <ol><li> 받는 사람 : <ol><li> 초기 병원 방문시,받는 검사에 대해 다음과 실험실 테스트를 보내 (이 감염성 질환에 대한 기본 검사를 구축하여 미래의 전송에는 문제가 없는지 확인). </li><li> A 형 간염 (IgG에와 IgM 항체), B 형 간염 (HbsAg / Ab의 및 HbcAb), C 형 간염 Ab의, HIV-1 / 2 (Ab의 바이러스 성 부하) 및 매독 (TP-의 IgG) 실험실 혈액 t을 수행ESTS. </li><li> 이 초기 평가에서 식품 알레르기에 대한 철저한 역사를 가져옵니다. </li></ol></li><li> 기증자 : <ol><li> 폐기되지 형성된 대변을 보장하기 위해 심사 전에 미생물학 실험실과 좌표. </li><li> 기증자가 제 3 항에 따라 자격 기준을 충족하는 경우 기증자 선별을 위해 아래의 실험실 테스트를 주문하십시오. </li><li> A 형 간염 (IgG에와 IgM 항체), B 형 간염 (HBsAg / Ab의 및 HBcAb), C 형 간염 Ab의, HIV-1 / 2 (Ab의 바이러스 성 부하) 및 매독 (TP-의 IgG) 실험실 혈액 검사를 수행합니다. </li><li> (문화로) C. 디피 일상 대변 문화, 지아 디아 항원,와 포자충 항원과 난자와 기생충 실험실 의자 테스트를 수행합니다. </li><li> 더 이상 30 일 이상 기증자를 화면 바람직 1~2주 전에 예약 절차. 참고 : 기부자들이 기부에 대한 자격이없는 이상 설사 또는 액체 대변을 개발합니다. </li></ol></li><li> 변호사 식품에 기증자가에 기반을 방지하기 위해받는 사람의 음식에 대한 알레르기. 기증자는받는 사람이 기부하기 전에 오일에 대한 알레르기가되는 음식을 섭취해서는 안된다. </li></ol> 5. 사전 절차 준비 <ol><li> 받는 사람 : <ol><li> 받는 사람이 경구 반코마이신에 이미없는 경우 초기 병원 방문에서, 절차 이전에 적어도 7-10일 125 mg을 매일 6 시간 반코마이신 시작합니다. </li><li> 전 대장 내시경 검사 대장 준비를 위해 내시경 센터의 지침에 수신자를 제공은 예약 절차 전에 일을 수행 할 수 있습니다. 받는 사람은 절차에 앞서 일주일 동안 내시경 센터의 표준식이 지침을 따라야합니다. </li><li> 절차 전날 밤 반코마이신의 마지막 복용량을 수신자에게 지시합니다. </li></ol></li><li> 기증자 : <ol><li> 여러 대변 수집 컵 기증자를 제공합니다. 라벨 화장실 삽입 (모자)와 컵받는 사람의 레이블뿐만 아니라 3 빈 SPecimen 용기. 어떤 의자 컬렉션 이상 6 시간 처리하기 전에 (절차의 시간) 시작하지 않으려면 기증자에게 문의하십시오. 참고 : 기증자가 여러 대변 샘플을 제공하는 경우, 그들은 날짜와 시간으로 표시해야한다. 신선한 샘플을 사용 (하나 가득 표본 컵 충분합니다). </li><li> 에받는 사람이 절​​차에 그들과 함께 기증자의 대변 샘플을 제공합니다 있는지 확인하십시오. </li><li> 실온에서 대변 샘플을 저장합니다. 어떤 무형의 대변을 제외합니다. 위생 하수 시스템에서 사용하지 않는 대변을 폐기 (연구 목적으로 저장하지 않는 한). </li></ol></li></ol> 6. 의자 준비 참고 :이 절차를 확인 논의와 병원의 감염 관리 부서에 의해 승인됩니다. <ol><li> 대변​​을 준비 할 때 개인 보호 장비를 착용 할 것. </li><li> OTH의 오염을 방지 십팔 인치 스플래시 존 존재하는 지정된 작업 영역 내시경 방 자 준비어 재료. </li><li> 병원 승인 살균제로 지정된 영역을 청소 준비를 대변하기 전에. </li><li> 오염을 방지하기 위해 일회용 패드 영역을 커버. </li><li> 십사온스 단일 속도 믹서에 형성 대변을 전송하고 생리 식염수 500 CC를 추가합니다. </li><li> 적어도 1 분 동안 또는 그 액체 슬러리 농도에 도달 할 때까지 내용물을 혼합. 믹서의 뚜껑을 제거 할 때 유출되지 않도록주의해야합니다. </li><li> 어떤 고체 폐기물을 제거하기 위해 플라스틱 팔쿼트 유역에 스트레이너를 통해 솔루션을 붓고. 스트레이너를 폐기하십시오. </li><li> 60 CC 루어 잠금 주사기에 긴장 솔루션 (대장 내시경 검사에 의한 표준 FMT 아홉에 약 8)를 그립니다. 플러시에 대한 생리 식염수의 추가 60 CC를 그립니다. </li></ol> 대장 내시경 검사를 통해 7. 대변 이식 <ol><li> 수행하거나 infusio으로 지원하면서 내시경 단위 정책에 따라 개인 보호 장비를 착용N. </li><li> 가능하면 환자가 시술 후 대변을 유지 협력 할 수있을 수 있도록, 빛 진정 작용을 고려하십시오. </li><li> 회장 말단에 대장 내시경 검사를 수행 (또는까지 기술적으로 가능). colonscope, 세척 및 흡입 잔여 액체 대변의 삽입에. </li><li> 염증하지만 점막 조직 검사의 증거 점막 벽 검사는 정기적으로 FMT 과정에서 수행되지 않습니다. 참고 : 전체 대장 내시경 검사로 인해 염증의 정도에 안전 여부를 확인합니다. 그렇지 않은 경우, 주입과 더 제한된 S 상 결장경 검사 (대변 슬러리의 절반을 사용)을 고려한다. </li><li> 확장 튜브와 생검 채널 캡을 사용하여 colonoscope의 생검 채널을 통해 회장 말단에 한 번 60 CC (한 주사기)를 주입한다. </li><li> 의자 주사기의 응용 프로그램 사이에 막힘을 방지하기 위해 생리 식염수로 채널을 세척하십시오. </li><li> 맹장에 대변의 또 다른 60 CC를 주입 한 다음 오른쪽 C에서 반복olon. </li><li> 균일 미드 횡행 결장에 도달 할 때까지 모든 네 결장 벽 사분면에 슬러리를 분배하는 동안은 30cc마다 5~10cm를 계속 주입. 대변​​ 주사기 사이에 식염수로 세척해야합니다. 참고 : 슬러리는 매우 점성이있는 경우는 주사기에 상당한 힘으로 밀어해야 할 수도 있습니다. 생검 채널 캡 colonoscope에서 분리 대변 내용의 유출이 발생하지 않도록주의해야합니다. 자주 세척 슬러리를 쉽게 통과를 허용 할 것이다. 슬러리를 추진 지속적인 어려움이있는 경우, 두 번째 시간 동안 남은 도너 대변을 재 긴장 또는 생리 식염수로 희석하여 더 고려한다. </li><li> 액체 대변을 흡입하지 않도록주의하면서 주사기 배럴을 변경할 때 철수에 과잉 공기를 기음. 주 : 환자 변실금 알려진 경우, 마지막 주사기 중에 누출 및 사후 절차를 피하기 위해 간만 곡보다 더 낮은 주입되어서는 안된다. </li><li> 일 회FMT와 전자 대장 내시경 검사가 완료되면만큼 그들은 할 수있는 발판을 유지하는 환자를 조언한다. 대장 내시경 검사가 완료된 후 그들은 정규식이 요법과 약물 두 시간 다시 시작할 수 있습니다. </li></ol> FMT 정리 8. 대장 내시경 검사 <ol><li> 병원 프로토콜에 따라 사후 절차 장비 재 처리, 환경 세척 / 소독, 폐기물 처리를 수행합니다. </li><li> 적절한 생물 학적 컨테이너에서 모든 분뇨 처리하십시오. </li><li> 표준 프로토콜 당 루틴 처리를 위해 오염 지역에 colonoscope를 가져와. </li><li> 다른 오염 폐기물과 함께 믹서 및 스트레이너 폐기하십시오. 참고 : 단일 사용 블렌더 및 스트레이너 혼합 방법이 고려 될 수있다 개별 기관의 대체에 적합하지 않은 경우. 하나의 예 : 오토 클레이브 세척 할 수있는 스테인레스 스틸 감자 ricer을 통해 대변을 전달합니다. 우리는 당신의 시설의 감염 관리 DEP와 잠재적 인 방법을 논의하는 것이 좋습니다artment. </li><li> 시설 승인 제품을 사용하는 절차에 사용 된 모든 표면의 오염을 제거. </li></ol> 9. 후속 조치 <ol><li> 약 30 일 FMT 후 환자에 대한 소화기 클리닉 후속 약속을 정렬합니다. </li><li> 변호사 항생제의 미래 코스 C. 디피 재발의 위험에 대한 환자. </li></ol> 이상 반응의보고 (10) <ol><li> FMT는 안전한 절차로 간주되지만, 강하게 모든 부작용은 절차와 관련된 것으로 규정하고 해당 게시판에보고 느낀 추적 할 의뢰한다. </li><li> FMT의 장기 안전을 기록하기 위해, 주기적으로 질의 할 수있는 신뢰성있는 데이터베이스를 유지한다. </li></ol>

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The authors have nothing to disclose relevant to the material presented in this manuscript.

분변 이식 재발 CDI 대한 치료 효과적​​이고 안전한 것으로 밝혀졌다. 우리는 대장 내시경 검사를 통해 FMT위한 표준 프로토콜을 설명하고 재발 CDI하는 절차를 시행 한 22 명에 대한 우리의 결과를 포함했다. 우리의 결과는 지금까지 단 한 환자가 한 달 후 FMT 반복과 재발 성 질환의 게시 된 데이터와 비교합니다. 절차의 중요한 단계는 도너가 적합한 지 확인하는 사전 선별 방문 및 환자는 ?...

위 막성 대장염의 원인의 치료를위한 대변 이식은 1958에 설명 된 1. 그러나, 다시 빠르면 4 세기 중국이 같은 식중독과 심한 설사 날짜의 치료를 위해 대변을 섭취보고. 분변 미생물 이식 (FMT)는 또한 문헌에 불린다 &quot;분변 bacteriotherapy&quot;, &quot;인간 생균제 투여&quot;, &quot;이식 자&quot;, &quot;장내 마이크로 바이 복원&quot;및 &quot;분변 전송&quot;. 그것은 건강하고 사전 선별 기증자에서 대변을 수집하고 비위 관, esophagogastricduodenoscopy, 대장 내시경, 또는 관장 3를 통해받는 사람의 위장관에 준비된 슬러리를 제공하는 것을 포함한다. 많은 경우 시리즈는 대장 내시경 검사는 안전하고 4 매우 효과적입니다 통해 그러나 최근의 연구는 기증자 의자의 관리를 보여, NGT 및 관장을 통해 관리의 효과를보고있다.이러한 비위 관 관리 같은 다른 방법이보고되었지만, 대장 내시경 검사를 통해 기증자 의자의 전달이 덜 즉각적인 부작용 (예를 들어, 복부 팽만감과 메스꺼움)가 4, 우리는에 의해 수행 될 때 환자가 FMT의 개념의를 받아들이고 있음을 발견 하였다 대장 내시경 검사. 대장 내시경을 통해 FMT의 치료 이점 중 하나는 종래의 절차로 인해 4 행한다 창자 폐포 결장 생물량 감소이다. 여러 연구 기회 병원체 C. 의한 대장염, 설사 등의 치료에 FMT의 역할을 조사 하였다 디피 (CDI). CDI의 발생률은 계속 증가하여 전 세계적으로 큰 경제적 부담과 질병률과 사망률의 중요한 원인이다. CDI에 대한 첫 번째 라인 치료하지만 재발률이 15-35% (5) 사이에보고 된, 항생제 치료로 구성되어 있습니다. 여러 경우 시리즈 및 보고서 수행이항생제 4,6-16 표준 치료에 CDI 내화물에 대한 FMT의 안전성과 효능을 cumented. CDI를위한 대장 내시경 검사를 통해 FMT 후 환자의 장기 추적 관찰을 찾고 연구는 77 명의 환자 (17)의 91 % 차 경화 속도를보고했다. 우리 센터 (브리검과 소화기, 간 장학 및 여성 병원 부문 내시경)에서, 우리는 재발 성 또는 불응 성 CDI 환자 배설물 이식 프로그램을 시작했다. 적절한 후보는 기존의 항생제에 응답하지 않는 난치성 질환 재발의 CDI (입원이 필요한 3 개 이상의 에피소드, 또는 2 에피소드의 역사), 또는 환자를 환자로 정의됩니다. 우리는이 절차의 모든 단계에 대한 체계적인 접근이 효과를 극대화 믿습니다. 이 원고와 첨부 된 비디오에서, 우리는 세부 사항 우리가 환자와 기증자 검사, 대변 준비를 포함 우리 센터에 고용 한 프로토콜 및 대변의 전달대장 내시경 검사 시간을 t. 이 방법은 출간 된 문헌에 비해 긍정적 인 결과를 산출했다. CASE 프리젠 테이션 : 이 환자는 대변 이식에 대한 언급 전형적인 환자를 나타냅니다. 환자는 화학 요법에 추가 처리를 필요로하는 질병의 재발이 있었다 만성 림프 구성 백혈병의 역사를 가진 69 세의 여성입니다. 그녀는 지난 해에 CDI의 3 개의 에피소드로 고통 때문에 FMT 이전에 다시 시작하는 항암 화학 요법의 고려 사항을 위해 우리 병원에 의뢰되었다. CDI 그녀의 첫 번째 에피소드는 2012 년 10 월에 그녀는 어느 한 항에 항생제 없었다고 발생했습니다. 그녀는 패 혈성 쇼크로 제시 한 후 ICU에서 매우 아픈이고 전향 그녀의 질병의 심각성 주어진 경구 반코마이신과 함께 6 주 과정에 대한 관장 반코마이신과 루프 ileostomy를 전환 받았다. 그녀는 그녀의 설사의 해상도로 매우 잘했고, 그녀는 올 수 있었다오프 항생제. 이 반전 그래서 그녀는 그녀의 장루 주위 탈장을 개발했다. 인공 항문 반전은 그녀가 다시 설사를 개발하고 발견 된 직후 다시 C.이어야합니다 남과 어울리지 않는 독소 긍정적. 그녀는 경구 반코마이신의 또 다른 육주 과정을 완료하고 성공적으로 점점 줄 수 있었다. 그러나 몇 달 후, 그녀는 다시 C.이었다 설사를 개발 남과 어울리지 않는 독소 긍정적 인 경구 반코마이신의 그녀의 제 3의 코스에서 시작되었다. 그것은 그녀의 하얀 카운트가&gt; 100으로 증가하고 그녀가 골수 생검에 그녀의 만성 림프 구성 백혈병의 재발이 발견했다고 언급 할 때 그녀는 항생제에 잘되었다. 그녀의 종양 전문의는 그녀의 CDI의 완전한 해결하지 않고 화학 요법을 시작하고 우리가 FMT를 수행했다 걱정했다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="840">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:121px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:355px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="92">
			<td height="92" style="height:92px;width:247px;">Blender</td>
			<td style="width:121px;">Hamilton Beach</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:355px;">http://www.amazon.com/Hamilton-Beach-51101-Personal-Blender/dp/B00065L6CU/ref=pd_sim_k_2?ie=UTF8&#38;refRID=1Q06MXAE9XKTB4QG0AEN</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:247px;">Strainer</td>
			<td style="width:121px;">Winco MS3A-8S Strainer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:355px;">http://www.amazon.com/Winco-MS3A-8S-Strainer-Single-Wooden/dp/B001VZ5E40/ref=sr_1_3?s=home-garden&#38;ie=UTF8&#38;qid=1395001295&#38;sr=1-3&#38;keywords=kitchen+strainer+wooden+handle</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Disposable pads (chux), 17in x 24in.&#160;</td>
			<td>hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>one package&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Pink rectangular hospital standard wash basin, 8 quart&#160;</td>
			<td>hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>1 or 2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">500 cc bottle of sterile normal saline</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">60cc leur lock syringes</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>8 or 9</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Biopsy channel cap with extension</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fecal microbiota transplantation via colonoscopy for recurrent c. difficile infection

분변 미생물 이식 (FMT)는 재발 및 불응 C. 안전하고 매우 효과적인 치료 남과 어울리지 않는 감염 (CDI). FMT 투여하는 다양한 방법 비위 관 상부 내시경, 결장경 검사법 및 관장을 포함하여 문헌에보고되어있다. 대장 내시경 검사 수율 우수한 치료율을 통해 FMT와도 잘 허용됩니다. 우리는 환자가 전달이 허용하고 허용 모드를 찾을 것을 발견했다. 우리 센터에서, 우리는 재발 성 또는 불응 성 CDI 환자 배설물 이식 프로그램을 시작했다. 우리는 개정의 반복적 인 프로세스를 사용하여 프로토콜을 개발하고 현재 출간 된 문헌에 비해 성공률과 22 명에 24 대변 이식을 수행했습니다. 환자와 기증자 검사, 대변의 준비, 대변의 전달에 대한 체계적인 접근은 치료의 성공을 극대화 할 수 있습니다. 여기서 상세히 어떤 내시경에서 수행 될 수있다 FMT 프로토콜의 각 단계를 우리안전와 성공 고도 중심.

우리는 위의 프로토콜을 사용하여 우리 센터 (표 1)에서 22 명에 24 FMTs을 수행했습니다. 9 명 동시 IBD (크론 병 여섯 세 궤양 성 대장염)를했다. 모두 아홉 CDI의 해상도를 가지고 있었다. 크론 병 환자 중 하나는 상태가 크론 대장염에 대한 총 절제술을 게시했다. 처음에 그는 그러나 그는 CDI 확인 결과 위 내시경 검사를 통해 두 번째 FMT을 시행 재발 2 주 후 FMT를 경험 한 후 대장 내시경 ?...

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Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

대장 내시경 검사를 통해 분변 미생물 이식은 재발 및 불응 C.difficile 감염에 대한 안전하고 효과적인 치료입니다. 대장 내시경 검사 중 환자와 기증자 선별, 대변의 준비, 대변의 전달에 대한 체계적인 접근은 치료의 성공을 극대화합니다.

재발을위한 대장 내시경 검사를 통해 분변 미생물 이식<em&gt; C. 남과 어울리지 않는</em&gt; 감염

Fecal Microbiota Transplantation (FMT) is a safe and highly effective treatment for recurrent and refractory C. difficile infection (CDI). Various methods ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

27.0K 조회수.  Brigham and Women‘s Hospital.  대장 내시경 검사를 통해 분변 미생물 이식은 재발 및 불응 C.difficile 감염에 대한 안전하고 효과적인 치료입니다. 대장 내시경 검사 중 환자와 기증자 선별, 대변의 준비, 대변의 전달에 대한 체계적인 접근은 치료의 성공을 극대화합니다. 

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A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

의 마우스 모델 Utero에 이식

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

연구

의학

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness of a variety of oncolytic platforms including HSV, Reovirus, and Vaccinia OVs as treatment for cancer are currently underway2-5. One key characteristic of oncolytic viruses is that they can be genetically modified to express reporter transgenes which makes it possible to visualize the infection of tissues by microscopy or bio-luminescence imaging6,7. This offers a unique advantage since it is possible to infect tissues from patients ex vivo prior to therapy in order to ascertain the likelihood of successful oncolytic virotherapy8. To this end, it is critical to appropriately sample tissue to compensate for tissue heterogeneity and assess tissue viability, particularly prior to infection9. It is also important to follow viral replication using reporter transgenes if expressed by the oncolytic platform as well as by direct titration of tissues following homogenization in order to discriminate between abortive and productive infection. The object of this protocol is to address these issues and herein describes 1. The sampling and preparation of tumor tissue for cell culture 2. The assessment of tissue viability using the metabolic dye alamar blue 3. Ex vivo infection of cultured tissues with vaccinia virus expressing either GFP or firefly luciferase 4. Detection of transgene expression by fluorescence microscopy or using an In Vivo Imaging System (IVIS) 5. Quantification of virus by plaque assay. This comprehensive method presents several advantages including ease of tissue processing, compensation for tissue heterogeneity, control of tissue viability, and discrimination between abortive infection and bone fide viral replication.

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic viruses are promising for cancer therapeutics. The ability to ascertain the infectability of live tissue specimens obtained from patients prior to treatment is a unique advantage of this therapeutic approach. This protocol describes how to process tissues for ex vivo infection with oncolytic virus and subsequent viral quantification.

Oncolytic 바이러스 살아있는 조직의 전의 VIVO 감염

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

Intraspinal Cell Transplantation for Targeting Cervical Ventral Horn in Amyotrophic Lateral Sclerosis and Traumatic Spinal Cord Injury

Respiratory compromise due to phrenic motor neuron loss is a debilitating consequence of a large proportion of human traumatic spinal cord injury (SCI) cases 1 and is the ultimate cause of death in patients with the motor neuron disorder, amyotrophic laterals sclerosis (ALS) 2.
ALS is a devastating neurological disorder that is characterized by relatively rapid degeneration of upper and lower motor neurons. Patients ultimately succumb to the disease on average 2-5 years following diagnosis because of respiratory paralysis due to loss of phrenic motor neuron innnervation of the diaphragm 3. The vast majority of cases are sporadic, while 10% are of the familial form. Approximately twenty percent of familial cases are linked to various point mutations in the Cu/Zn superoxide dismutase 1 (SOD1) gene on chromosome 21 4. Transgenic mice 4,5 and rats 6 carrying mutant human SOD1 genes (G93A, G37R, G86R, G85R) have been generated, and, despite the existence of other animal models of motor neuron loss, are currently the most highly used models of the disease.
Spinal cord injury (SCI) is a heterogeneous set of conditions resulting from physical trauma to the spinal cord, with functional outcome varying according to the type, location and severity of the injury 7. Nevertheless, approximately half of human SCI cases affect cervical regions, resulting in debilitating respiratory dysfunction due to phrenic motor neuron loss and injury to descending bulbospinal respiratory axons 1. A number of animal models of SCI have been developed, with the most commonly used and clinically-relevant being the contusion 8.
Transplantation of various classes of neural precursor cells (NPCs) is a promising therapeutic strategy for treatment of traumatic CNS injuries and neurodegeneration, including ALS and SCI, because of the ability to replace lost or dysfunctional CNS cell types, provide neuroprotection, and deliver gene factors of interest 9.
Animal models of both ALS and SCI can model many clinically-relevant aspects of these diseases, including phrenic motor neuron loss and consequent respiratory compromise 10,11. In order to evaluate the efficacy of NPC-based strategies on respiratory function in these animal models of ALS and SCI, cellular interventions must be specifically directed to regions containing therapeutically relevant targets such as phrenic motor neurons. We provide a detailed protocol for multi-segmental, intraspinal transplantation of NPCs into the cervical spinal cord ventral gray matter of neurodegenerative models such as SOD1G93A mice and rats, as well as spinal cord injured rats and mice 11.

Neural precursor transplantation is a promising strategy for protecting and/or replacing lost/dysfunctional cervical phrenic motor neurons in spinal cord injury (SCI) and the motor neuron disorder, amyotrophic laterals sclerosis (ALS). We provide a protocol for cell delivery to cervical spinal cord ventral horn in rodent models of ALS and SCI.

루게릭병과 외상 척수 상해에서 자궁암 복부 호른를 타겟팅하는 Intraspinal 세포 이식

Respiratory compromise due to phrenic motor neuron loss is a debilitating consequence of a large proportion of human traumatic spinal cord injury (SCI) ...

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Small bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with short gut syndrome and failure of parenteral nutrition (irreversible intestinal failure). In specialized centers improved operative and managing strategies have led to excellent short- and intermediate term patient and graft survival while providing high quality of life 1,3. Unlike in the more common transplantation of other solid organs (i.e. heart, liver) many underlying mechanisms of graft function and immunologic alterations induced by intestinal transplantation are not entirely known6,7. Episodes of acute rejection, sepsis and chronic graft failure are the main obstacles still contributing to less favorable long term outcome and hindering a more widespread employment of the procedure despite a growing number of patients on home parenteral nutrition who would potentially benefit from such a transplant. The small intestine contains a large number of passenger leucocytes commonly referred to as part of the gut associated lymphoid system (GALT) this being part of the reason for the high immunogenity of the intestinal graft. The presence and close proximity of many commensals and pathogens in the gut explains the severity of sepsis episodes once graft mucosal integrity is compromised (for example by rejection). To advance the field of intestinal- and multiorgan transplantation more data generated from reliable and feasible animal models is needed. The model provided herein combines both reliability and feasibility once established in a standardized manner and can provide valuable insight in the underlying complex molecular, cellular and functional mechanisms that are triggered by intestinal transplantation. We have successfully used and refined the described procedure over more than 5 years in our laboratory 8-11. The JoVE video-based format is especially useful to demonstrate the complex procedure and avoid initial pitfalls for groups planning to establish an orthotopic rodent model investigating intestinal transplantation.

Small bowel transplantation has become an accepted treatment option for patients with irreversible intestinal failure. Our experimental model of orthotopic small bowel transplantation in rats serves as a reliable tool to address underlying immunologic and inflammatory processes that complicate intestinal transplantation.

쥐 Orthotopic 작은 창자 이식

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove nonadherent cells and lung lining fluid from the mucosal surface. In research environments, BAL allows sampling of innate (lung macrophage), cellular (B- and T- cells), and humoral (immunoglobulin) responses within the lung.
BAL is internationally accepted for research purposes and since 1999 the technique has been performed in &#62; 1,000 subjects in the UK and Malawi by our group.
Our technique uses gentle hand-held suction of instilled fluid; this is designed to maximize BAL volume returned and apply minimum shear force on ciliated epithelia in order to preserve the structure and function of cells within the BAL fluid and to preserve viability to facilitate the growth of cells in ex vivo culture. The research technique therefore uses a larger volume instillate (typically in the order of 200 ml) and employs manual suction to reduce cell damage.
Patients are given local anesthetic, offered conscious sedation (midazolam), and tolerate the procedure well with minimal side effects. Verbal and written subject information improves tolerance and written informed consent is mandatory. Safety of the subject is paramount. Subjects are carefully selected using clear inclusion and exclusion criteria.
This protocol includes a description of the potential risks, and the steps taken to mitigate them, a list of contraindications, pre- and post-procedure checks, as well as precise bronchoscopy and laboratory techniques.

Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy and bronchoalveolar lavage using low pressure suction. The technique is used to harvest immune cells from the lung bronchoalveolar surfaces. Local anesthetic and mild conscious sedation (midazolam) is used. Subjects tolerate the procedure well and experience minimal side effects.

연구를위한 기관지 폐포 세척액 (BAL), 적절한 샘플 수익률을 얻기

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

Tumor Treating Field Therapy in Combination with Bevacizumab for the Treatment of Recurrent Glioblastoma

A novel device that employs TTF therapy has recently been developed and is currently in use for the treatment of recurrent glioblastoma (rGBM). It was FDA approved in April 2011 for the treatment of patients 22 years or older with rGBM. The device delivers alternating electric fields and is programmed to ensure maximal tumor cell kill1.
Glioblastoma is the most common type of glioma and has an estimated incidence of approximately 10,000 new cases per year in the United States alone2. This tumor is particularly resistant to treatment and is uniformly fatal especially in the recurrent setting3-5. Prior to the approval of the TTF System, the only FDA approved treatment for rGBM was bevacizumab6. Bevacizumab is a humanized monoclonal antibody targeted against the vascular endothelial growth factor (VEGF) protein that drives tumor angiogenesis7. By blocking the VEGF pathway, bevacizumab can result in a significant radiographic response (pseudoresponse), improve progression free survival and reduce corticosteroid requirements in rGBM patients8,9. Bevacizumab however failed to prolong overall survival in a recent phase III trial26. A pivotal phase III trial (EF-11) demonstrated comparable overall survival between physicians&#8217; choice chemotherapy and TTF Therapy but better quality of life were observed in the TTF arm10.
There is currently an unmet need to develop novel approaches designed to prolong overall survival and/or improve quality of life in this unfortunate patient population. One appealing approach would be to combine the two currently approved treatment modalities namely bevacizumab and TTF Therapy. These two treatments are currently approved as monotherapy11,12, but their combination has never been evaluated in a clinical trial. We have developed an approach for combining those two treatment modalities and treated 2 rGBM patients. Here we describe a detailed methodology outlining this novel treatment protocol and present representative data from one of the treated patients.

A novel methodology that is employed for the treatment of recurrent glioblastomas is described. This treatment approach employs the application of alternating electric tumor treating fields (TTFields), known as TTF Therapy in combination with bevacizumab, a targeted agent that is currently FDA approved as monotherapy.

재발 성 아교 모세포종의 치료를 위해 베바 시주 맙과 조합하여 필드 요법 치료 종양

A novel device that employs TTF therapy has recently been developed and is currently in use for the treatment of recurrent glioblastoma (rGBM). It was FDA ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

기증자의 간을의 현지 외 정상 체온 기계 관류

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Veno-Venous Extracorporeal Membrane Oxygenation in a Mouse

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for acute as well as end-stage lung diseases. With the increase in clinical demand and prolonged use of ECMO, procedural optimization and prevention of multi-organ damage are of critical importance. The aim of this protocol is to present a detailed technique of veno-venous ECMO in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This protocol demonstrates the technical design of the ECMO and surgical steps. This murine ECMO model will facilitate the study of pathophysiology related to ECMO (e.g., inflammation,bleeding and thromboembolic events). Due to the abundance of genetically modified mice, the molecular mechanisms involved in ECMO-related complications can also be dissected.

Here we present a protocol describing the technique of veno-venous extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This murine model of ECMO can be effectively implemented in experimental studies of acute and end-stage lung diseases.

마우스에 Veno 정 맥 체 외 막 산소

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for ...

Immunofluorescence Labelling of Human and Murine Neutrophil Extracellular Traps in Paraffin-Embedded Tissue

Neutrophil granulocytes, also called polymorphonuclear leukocytes (PMN) due to their lobulated nucleus, are the most abundant type of leukocytes. They mature in the bone marrow and are released into the peripheral blood, where they circulate for about 6&#8722;8 h; however, in tissue, they can survive for days. By diapedesis through the endothelium, they leave the blood stream, enter tissues, and migrate towards the site of an infection following chemotactic gradients.&#160;Neutrophils can combat invading microorganisms by phagocytosis,&#160;degranulation, and generation of neutrophil extracellular traps (NETs). This protocol will help to detect NETs in paraffin-embedded tissue. NETs are the result of a process called NETosis, which leads to the release of nuclear, granular, and cytoplasmic components either from living (vital NETosis) or dying (suicidal NETosis) neutrophils. In vitro, NETs form cloud-like structures, which occupy a space several times larger than that of the cells from which they descended. The backbone of NETs is chromatin, to which a selection of proteins and peptides originating from granules and cytoplasm are bound. Thereby, a high local concentration of toxic compounds is maintained so that NETs can capture and inactivate a variety of pathogens including bacteria, fungi, viruses, and parasites, while diffusion of the highly active NET components leading to damage in neighboring tissue is limited. Nevertheless, in recent years it has become apparent that NETs, if generated in abundance or cleared insufficiently, do have pathological potential ranging from autoimmune diseases to cancer. Thus, detection of NETs in tissue samples may have diagnostic significance, and the detection of NETs in diseased tissue can influence the treatment of patients. Since paraffin-embedded tissue samples are the standard specimen used for pathological analysis, it was sought to establish a protocol for fluorescent staining of NET components in paraffin-embedded tissue using commercially available antibodies.

Neutrophil extracellular traps (NETs) are three-dimensional structures generated by stimulated neutrophil granulocytes. It has become clear in recent years that NETs are involved in a wide variety of diseases. Detection of NETs in tissue may have diagnostic relevance, so standardized protocols for labelling NET components are required.

파라핀 내장 된 조직에서 인간과 뮤린 호중구 세포 외 트랩의 면역 형광 라벨링

Neutrophil granulocytes, also called polymorphonuclear leukocytes (PMN) due to their lobulated nucleus, are the most abundant type of leukocytes. They ...

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for islet transplantation in rodent models. However, the tight kidney capsule limits the transplantation of sufficient islets in large animals and humans. The inguinal subcutaneous white adipose tissue (ISWAT), a new subcutaneous space, was found to be a potentially valuable site for islet transplantation. This site has better blood supply than other subcutaneous spaces. Moreover, the ISWAT accommodates a larger islet mass than the kidney capsule, and transplantation into it is simple. This manuscript describes the procedure of mouse islet isolation and transplantation in the ISWAT site of syngeneic diabetic mouse recipients. Using this protocol, murine pancreatic islets were isolated by standard collagenase digestion and a basement membrane matrix hydrogel was used for fixing the purified islets in the ISWAT site. The blood glucose levels of the recipient mice were monitored for more than 100 days. Islet grafts were retrieved at day 100 after transplantation for histological analysis. The protocol for islet transplantation in the ISWAT site described in this manuscript is simple and effective.

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

In this protocol, a method of murine islet isolation and transplantation into the inguinal subcutaneous white adipose tissue is described. Isolated syngeneic murine islets are transplanted into a murine recipient using a basement membrane hydrogel. The blood glucose level of the recipients is monitored, and histology analysis of the islet grafts is performed.

뮤린 아일렛의 인과 피하 백색 지방 조직 (ISWAT) 이식 모형

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...