The authors would like to acknowledge the Infectious Disease Department at Brigham and Women&#8217;s Hospital especially Michael S. Calderwood, MD, MPH for helping us construct this protocol. We would also like to thank the Institution&#8217;s endoscopy center and it&#8217;s leadership team for their support.

注：この原稿出版時点で治験薬（IND）アプリケーションは、臨床現場で再発CDIのためのFMTを行う必要がない。 FMTから、研究の一部として、または別の適応症のために行われている場合は、INDまたは同等のアプリケーション18を必要とすることができる。規制当局は、おそらくCDIと他の病状に適用されるFMTの安全性と有効性を評価していきますので、それに先立っFMTプログラムの開始と一回二ヶ月に一人一人にあなたのそれぞれの位置に規制要件を確認することをお勧めします積極的にFMTを行う。 注候補は糞便移植だけでなく、大腸内視鏡検査に同意するものとして喜んでなければなりません。 FMTのための適切な候補の1の識別<ol><li>従来の抗生物質に反応しない再発性CDIまたは難治性疾患の患者を持っている患者はappropriatですFMTの電子候補。 注：再発性CDIは毒素検査やPCRによって確認CDIの3以上のエピソード、または入院を必要とされる2つのエピソードの歴史として定義されている。 </li><li>患者が安全に大腸内視鏡検査を受けることができることを確認してください。これは、内視鏡医の裁量である。 </li></ol> 2.スツールのドナー選択 NOTE：スツールドナーの選択はCDIの治療に適用され、他の障害の治療に適用できないかもしれない。 <ol><li>患者がドナーを識別し確認してください。潜在的なドナーは、最初の消化器クリニック訪問時の受信者に存在すべきである。ドナーは配偶者、家族、または友人かもしれません。ドナーは限り他の基準が満たされている受信者と同じ居住地に住んでいることがあります。 </li></ol> 3.ドナー適格性<ol><li>参加基準：ドナーは（≥18歳）健康な成人で、毎日の形成された腸メートルを持っていることを確認してくださいovement。 </li><li>除外基準： <ol><li>ドナーが抗生物質を服用されていないか、または過去3カ月または感染のための任意の薬で抗生物質を取っていないことを確認してください。 </li><li>ドナーは便秘の歴史を持っているか、慢性的に下剤を使用していないことを確認してください。さらに、炎症性腸疾患、慢性下痢、顕微鏡的大腸炎、腸/結腸悪性腫瘍、または胃バイパス/他の減量手術の歴史の個人史の歴史を持っていないドナーを確保する。 </li><li>感染性下痢が懸念される地域へのドナー最近（最後の3カ月以内）旅していないことを確認してください。彼らが旅して下痢を経験している場合、それらはexludedする必要があります。 </li><li>ドナーはどんな免疫抑制剤を服用していないし、全身化学療法ではないされていることを確認。 </li><li>ドナーはメタボリック症候群、自己免疫状態またはアトピー性疾患を持っていないことを確認してください。 </li></ol></li><li>書かれた詐欺を取得前のスクリーニング検査の敏感な性質を与えられたスクリーニングにドナーとレシピエントから送られた。テスト結果は、相手と共有されることはありません両当事者を安心させる。 </li></ol> 4.スクリーニング注：このスクリーニングプロトコルは、ブリガムとマサチューセッツの女性の病院で患者に適応した、米国の前に、すべての適切なスクリーニング試験が検討されていることを確認するFMTプロトコルを開始する疾患部門と病院の感染対策感染コンサルティング考えてみましょう。 <ol><li>受信者： <ol><li>初期診療所の訪問の際には、受信者のスクリーニングのために、以下の臨床検査を送信（これらの感染症のためのベースラインテストを確立し、将来的には、送信の疑いがないことを確認するため）。 </li><li>肝炎A（IgGおよびIgM）、B型肝炎（HbsAgの/ AbおよびHbcAb）、C型肝炎抗体、HIV-1/2（Abおよびウイルス量）および梅毒（TP-IgG）を実験室血液tを行うESTは。 </li><li>この初期評価で、食物アレルギーの徹底した歴史を取得します。 </li></ol></li><li>ドナー： <ol><li>成形されたスツールが廃棄されていないことを確認するためのスクリーニング前に、微生物学研究室と調整。 </li><li>ドナー部3に従って適格基準を満たしている場合、ドナースクリーニングのために、以下の臨床検査を注文。 </li><li> A型肝炎（IgGおよびIgM）、B型肝炎（HBs抗原/ AbおよびHBcAb）、C型肝炎抗体、HIV-1/2（Abおよびウイルス量）と梅毒（TP-IgG）の実験室血液検査を行います。 </li><li> （培養による）C.ディフィシル 、ルーチン便の文化、ジアルジア抗原、クリプトスポリジウム抗原と卵子や寄生虫の研究室スツールテストを実行します。 </li><li>以上30日ドナーを選別するが、好ましくは1から2週間前にスケジュールの手順と。 注：ドナーが下痢や液状便を開発した場合、彼らは寄付の対象とはなりません長い。 </li></ol></li><li>顧問に基づいて回避する食品に関するドナー受信者の食物アレルギー。ドナーは、受信者が寄付する前に5日間アレルギーされた食品を摂取するべきではありません。 </li></ol> 5.事前手続きの準備<ol><li>受信者： <ol><li>受信者が経口バンコマイシン入っていない場合は、最初の来院時に、手続きの前に少なくとも7〜10日ごとに6時間は125 mgのバンコマイシン開始。 </li><li>スケジュールされた手順の前日に行われるための前大腸内視鏡検査腸の準備のための内視鏡検査センターの指示を受信者を提供します。受信者はまた、処置の前の週のための内視鏡検査センターの標準食餌の指示に従ってください。 </li><li>手続きの前に夜バンコマイシンの彼らの最後の投与量を取るために、受信者に指示します。 </li></ol></li><li>ドナー： <ol><li>いくつかの糞便採取カップを持つドナーを提供します。ラベルトイレインサート（帽子）やカップ受信者のラベルが付いただけでなく、3空のspecimenコンテナ。前（手続きの時間）を処理する6時間を超えない糞便の収集を開始するためにドナーを依頼。 注：ドナーは、複数の便検体を提供している場合、彼らは日付と時刻で標識する必要があります。新鮮なサンプルを使用します（1満たされた試料カップは十分であろう）。 </li><li>受信者がプロシージャに彼らとドナーの便試料をもたらしていることを確認します。 </li><li>室温で糞便サンプルを保管してください。すべての軟便を除外します。下水システム内の任意の未使用のスツールを破棄（研究目的のために保存しない限り）。 </li></ol></li></ol> 6.スツール準備注：この手順は、病院の感染管理部門で審議され、承認されていることを確認。 <ol><li>スツールを準備する際、個人用保護具を着用する。 </li><li> othの汚染を防止する18インチスプラッシュゾーンが存在している指定された作業領域内視鏡検査室で糞便を準備小胞体材料。 </li><li>病院が承認した消毒剤と指定された領域をきれいに、準備をスツールの前に。 </li><li>汚染を避けるために、使い捨てパッドで領域を覆う。 </li><li> 14オンスシングルスピードブレンダーに形成された糞便を移し、通常の生理食塩水の500 ccのを追加します。 </li><li>少なくとも1分間、または、液体、スラリーコンシステンシーに達するまで内容物を混合する。ブレンダーの蓋を除去するときにこぼれないように注意してください。 </li><li>任意の固体廃棄物を排除するためにプラスチック製の8クォート盆地にストレーナーを通して溶液を注ぐ。ストレーナーを捨てる。 </li><li> （大腸内視鏡検査によって標準FMTのために約8〜9）を60ccのルアーロックシリンジに緊張したソリューションを策定する。ほてりのための通常の生理食塩水の余分な60のccを策定する。 </li></ol>大腸内視鏡検査を経由7.糞便移植<ol><li>実行またはinfusioを支援しながら、内視鏡検査ユニット方針に従って個人用保護具を着用N。 </li><li>可能な場合は、患者が処置後にスツールを保持に協力することが可能となるよう、光鎮静を考えてみましょう。 </li><li>回腸末端に大腸内視鏡検査を行います（または限り技術的に可能）。 colonscope、洗浄、吸引、残留液状便の挿入時に。 </li><li>炎症の証拠のための粘膜の壁を点検したが、粘膜生検を定期的にFMT手順の間に実行されません。 注：完全な大腸内視鏡検査による炎症の程度に安全であるかどうかを決定します。そうでない場合は、点滴とのより限定軟性S状結腸鏡検査（糞便スラリーの半分を使用）を検討してください。 </li><li>延長チューブとの生検チャネルキャップを使用して結腸鏡の生検チャネルを介して一度回腸末端に60 CC（1注射器）を注入する。 </li><li>スツールシリンジのアプリケーション間の、目詰まりを避けるために、通常の生理食塩水でチャンネルをフラッシュする。 </li><li>盲腸にスツールの他の60のccを注入し、右Cで繰り返すOLON。 </li><li>半ば横行結腸に到達するまで均等にすべての4つの結腸壁の象限にスラリーを配布しながら、すべての5〜10センチメートル30 CCを注入続行。便の注射器の間に生理食塩水で洗い流すことを忘れないでください。 注：スラリーの粘性が高い場合は、注射器にかなりの力でプッシュする必要があるかもしれない。生検チャネルキャップは大腸内視鏡から分離し、糞便内容の流出を生じさせないように注意してください。頻繁な洗浄は、スラリーのより容易に通過を可能にします。スラリーを押しての継続的な難しさがある場合は、二度目の残りのドナースツールを再緊張または生理食塩水でさらに希釈することを検討してください。 </li><li>任意の液体スツールを吸引しないように注意しながら、シリンジバレルを変更する際に撤退の際に過剰空気を吸引。 注：患者は便失禁を知っていた場合は、最後の注射器は、肝湾曲よりも低い時のリークとPOST手順を避けるためないように注入されるべきである。 </li><li>第一回FMTとのE大腸内視鏡検査が完了する限り、彼らができるように糞便を保持するために患者に助言する。彼らは、大腸内視鏡検査が完了した2時間後に彼らの通常の食事や薬を再開することができる。 </li></ol> FMTクリーンアップ8.大腸内視鏡検査<ol><li>病院のプロトコールに従ってポスト手続き機器再処理、環境洗浄/消毒と廃棄物処理を実行します。 </li><li>適切なバイオハザードコンテナ内のすべての糞便材料廃棄してください。 </li><li>標準プロトコルごとのルーチンの処理のために除染エリアに結腸内視鏡を持参。 </li><li>他の汚れた廃棄物と一緒にブレンダーとストレーナ廃棄してください。 注：シングルユースブレンダーとストレーナメソッド各混合機関交互に実行可能ではない場合が考えられる。一つの例：オートクレーブ内でクリーニングすることができるステンレス製のポテトライサーを通じてスツールを渡す。私たちはあなたの施設の感染制御DEPを持つ任意の潜在的な方法を議論することをお勧めしますartment。 </li><li>施設が承認した製品を使用してプロシージャのために使用されたすべての表面を除染。 </li></ol> 9.フォローアップ<ol><li>約30日FMT後の患者のための消化器クリニックでフォローアップの予定を配置します。 </li><li>カウンセル抗生物質の将来のコースを持つC.ディフィシル再発のリスクについて患者。 </li></ol>有害事象の10のレポート<ol><li> FMTは、安全な手順であると考えられているが、それは強く、すべての有害事象を追跡することをお勧めします手順と関連していることが感じたと適切な規制のボードに報告する。 </li><li> FMTの長期安全性を文書化するために、定期的に照会することができる信頼性のあるデータベースを保持。 </li></ol>

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The authors have nothing to disclose relevant to the material presented in this manuscript.

糞便移植は再発CDI有効かつ安全な治療法であることが示されている。私たちは、大腸内視鏡検査を経由して 、FMTための標準プロトコルの概要を説明し、再発性CDIのための手順を受けた22人の患者のための当社の業績が含まれている。我々の結果は、これまで1ヶ月後のFMTを繰り返しだけ一人の患者に再発性疾患のために公表されたデータに匹敵する。手順の重要なステップは、ドナーが...

pseumembranous大腸炎の治療のための糞便移植が最初に1958年に記載された1。しかし、バックには早く四世紀中国2などの食中毒と重度の下痢日の治療のための糞便を摂取するとの報告。糞便微生物移植（FMT）は、文献にも呼ばれている「糞便細菌療法」、「ヒトプロバイオ注入」、「糞便移植」、「腸のmicrobiome修復」、および「糞便転送」。それは健康、事前スクリーニングドナーから糞便を収集し、経鼻胃管、esophagogastricduodenoscopy、大腸内視鏡検査、または浣腸3を介して受信者の消化管に調製したスラリーを提供することを含む。多くの症例は、しかし、より最近の研究では、大腸内視鏡検査を介してドナー糞便の投与が安全で4非常に有効であることが示されている、NGT及び浣腸を介して投与の有効性を報告している。そのような経鼻胃管投与などの他の方法が報告されているが、大腸内視鏡を介してドナー糞便の送達は、以下の即時副作用（ 例えば腹部膨満および悪心）4を有しており、我々はそれをすることによって行われるとき、患者は、よりFMTの概念を受け入れていることを見出した大腸内視鏡検査。大腸内視鏡検査を介して、FMTの治療上の利点の一つは、前の手順4に行われる腸洗浄液に結腸バイオマスの減少である。 複数の研究は、日和見病原体によって引き起こさC.大腸炎及び下痢の治療のためのFMTの役割を検討したディフィシル （CDI）。 CDIの発生率は上昇し続け、世界中で大きな経済的負担、罹患率および死亡率の主要な原因である。 CDIのための第一選択治療は抗生物質治療で構成されて、しかし、再発率は15から35% 5との間で報告されている。いくつかのケースシリーズとの報告を行う必要が抗生物質4,6-16に標準医療にCDIの耐火用FMTの安全性と有効性をcumented。 CDIのための大腸内視鏡検査を経由してFMT後の患者の長期的なフォローアップを見て研究では、77人の患者17で91パーセントの一次治癒率を報告した。 私たちのセンター（消化器、肝臓や内視鏡検査のブリガム·アンド·ウィメンズ病院課）で、我々は再発性または難治性のCDIの患者のための糞便移植プログラムを開始した。適切な候補は、従来の抗生物質に反応しない難治性疾患の再発性のCDI（入院を必要とした3つ以上のエピソード、または2エピソードの歴史）、または患者を有する患者と定義されている。私たちは、この手順のすべての段階に体系的なアプローチが有効性を最大化すると考えています。この原稿とそれに付随するビデオでは、我々詳細我々は、患者とドナーのスクリーニング、スツールの準備が含まれて私たちのセンター、で採用しているプロトコル、および糞便aの配信大腸内視鏡検査の時間をトン。この方法は、公表された文献に匹敵する肯定的な結果をもたらした。 症例提示： この患者は、糞便移植のために呼ばれる典型的な患者を表します。 患者は、化学療法とのさらなる治療を要する疾患の再発を持っていた慢性リンパ性白血病の歴史を持つ69歳の女性です。彼女は昨年のCDIの3つのエピソードに苦しんで、そのために再起動する化学療法に先立ってFMTの検討のために私たちのクリニックに紹介された。 CDIの彼女の最初のエピソードは彼女がいずれかの抗生物質がなかった2012年10月に発生した。彼女は、敗血症性ショックを呈した後、ICUで非常に病気だったと順行性が彼女の病気の重症度与えられた経口バンコマイシンとの組み合わせで6週間のコースのために浣腸をバンコマイシンとループ回腸を流用受けた。彼女は下痢の分解能で非常によくやったと彼女は来ることができました抗生物質オフ。それが逆転したので、彼女は彼女のストーマの周りにヘルニアを開発しました。まもなくオストミー逆転した後、彼女は再び下痢を開発し、Cであるために再び発見されたディフィシル毒素ポジティブ。彼女は、経口バンコマイシンの別の6週間のコースを完了し、正常にの先細りすることができました。しかし、数か月後に、彼女は再びであった下痢を開発ディフィシル毒素陽性および経口バンコマイシンの彼女の第三のコースを開始した。それは彼女の白いカウントが&gt; 100に上昇させ、彼女は骨髄生検の彼女のCLLの再発を有することが判明したことが注目されたとき、彼女は抗生物質でよくやっていた。彼女の腫瘍医は彼女のCDIの完全な解像度ずに化学療法を開始することを懸念したので、我々はFMTを実行するように求めていた。

<table><tbody><tr><td>Blender</td><td>Hamilton Beach</td><td>51101</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.amazon.com/Hamilton-Beach-51101-Personal-Blender/dp/B00065L6CU/ref=pd_sim_k_2?ie=UTF8&amp;amp;refRID=1Q06MXAE9XKTB4QG0AEN&quot; target=&quot;_blank&quot;&gt;Link to Amazon.com&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Strainer</td><td>Winco</td><td>MS3A-8S</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.amazon.com/Winco-MS3A-8S-Strainer-Single-Wooden/dp/B001VZ5E40/ref=sr_1_3?s=home-garden&amp;amp;ie=UTF8&amp;amp;qid=1395001295&amp;amp;sr=1-3&amp;amp;keywords=kitchen+strainer+wooden+handle&quot; target=&quot;_blank&quot;&gt;Link to Amazon.com&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Disposable pads (chux), 17 x 24 in.</td><td>hospital standard</td><td></td><td>one package</td></tr><tr><td>Pink rectangular hospital standard wash basin, 8 quart</td><td>hospital standard</td><td></td><td>1 or 2</td></tr><tr><td>500 cc bottle of sterile normal saline</td><td>hospital standard</td><td></td><td>2</td></tr><tr><td>60 cc luer lock syringes</td><td>hospital standard</td><td></td><td>8 or 9</td></tr><tr><td>Biopsy channel cap with extension</td><td>hospital standard</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fecal microbiota transplantation via colonoscopy for recurrent c. difficile infection

糞便細菌叢移植（FMT）再発性および難治性のC.のための安全で効果の高い治療法であるディフィシル感染症（CDI）。 FMT投与の様々な方法が経鼻胃管、上部内視鏡検査、浣腸、および大腸内視鏡検査などの文献に報告されている。 FMT大腸内視鏡検査の収量を経由して優れた治癒率とも良好な耐容性である。我々は、患者がこの送達に許容可能かつ許容モードを見つけることを見出した。私たちのセンターでは、再発性または難治性のCDIの患者のための糞便移植プログラムを開始した。私たちは、改訂の反復プロセスを使用してプロトコルを開発してきたし、現在発表された文献に匹敵する成功率を持つ22人の患者に24糞便移植を行った。患者とドナースクリーニング、スツールの準備、および便の配達への体系的なアプローチは、治療の成功を最大化します。ここでは詳細任意の内視鏡検査で行うことができるFMTプロトコルの各ステップを安全と成功度の高いセンター。

我々は、上記のプロトコルを使用して、我々のセンター（ 表1）で22人の患者に24 FMTからを行った。ナインの患者が同時IBD（クローン病と6と潰瘍性大腸炎の3）を有していた。全9は、CDIの解像度を持っていた。クローン病患者の一つは、状態が、クローン病、大腸炎の合計結腸切除を投稿した。彼は当初、しかし、彼はCDIの解像度が得られた上部消化管内視鏡検査を介して第二のF...

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Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

大腸内視鏡検査を介した糞便細菌叢移植は再発性および難治性C。ディフィシル感染症のための安全で効果的な治療法である。大腸内視鏡検査中に患者とドナースクリーニング、スツールの準備、および便の配達への体系的なアプローチは、治療の成功を最大化します。

再発のための大腸内視鏡検査を経由して糞便細菌叢移植<em&gt; C。ディフィシル</em&gt;感染

Fecal Microbiota Transplantation (FMT) is a safe and highly effective treatment for recurrent and refractory C. difficile infection (CDI). Various methods ...

fecal-microbiota-transplantation-via-colonoscopy-for-recurrent-c

Research

JoVE Journal

Medicine

Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

27.1K ビュー.  Brigham and Women‘s Hospital. 大腸内視鏡検査を介した糞便細菌叢移植は再発性および難治性C。ディフィシル感染症のための安全で効果的な治療法である。大腸内視鏡検査中に患者とドナースクリーニング、スツールの準備、および便の配達への体系的なアプローチは、治療の成功を最大化します。 

ビデオ: Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations and do not accurately simulate tumor biology and tumor cell dissemination. Genetically engineered mouse models have been introduced to overcome these limitations; however, such models are technically demanding, especially in large organs such as the colon in which only a single tumor is desired.
As a result, an immunocompetent, genetically engineered mouse model of colorectal cancer was developed which develops highly uniform tumors and can be used for tumor biology studies as well as therapeutic trials. Tumor development is initiated by surgical, segmental infection of the distal colon with adeno-cre virus in compound conditionally mutant mice. The tumors can be easily detected and monitored via colonoscopy. We here describe the surgical technique of segmental adeno-cre infection of the colon, the surveillance of the tumor via high-resolution colonoscopy and present the resulting colorectal tumors.

A protocol for the establishment of a genetically engineered mouse model of colorectal cancer by segmental adeno-cre infection and its surveillance via high-resolution colonoscopy is presented.

散発性結腸直腸癌の遺伝子操作マウスモデル

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

がん研究

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

Clostridium difficile is a Gram-positive, anaerobic, sporogenic bacterium that is primarily responsible for antibiotic associated diarrhea (AAD) and is a significant nosocomial pathogen. C. difficile is notoriously difficult to isolate and cultivate and is extremely sensitive to even low levels of oxygen in the environment. Here, methods for isolating C. difficile from fecal samples and subsequently culturing C. difficile for preparation of glycerol stocks for long-term storage are presented. Techniques for preparing and enumerating spore stocks in the laboratory for a variety of downstream applications including microscopy and animal studies are also described. These techniques necessitate an anaerobic chamber, which maintains a consistent anaerobic environment to ensure proper conditions for optimal C. difficile growth. We provide protocols for transferring materials in and out of the chamber without causing significant oxygen contamination along with suggestions for regular maintenance required to sustain the appropriate anaerobic environment for efficient and consistent C. difficile cultivation.

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

Clostridium difficile is a pathogenic bacterium that is a strict anaerobe and causes antibiotic associated diarrhea (AAD). Here, methods for isolating, culturing and maintaining C. difficile vegetative cells and spores are described. These techniques necessitate an anaerobic chamber, which requires regular maintenance to ensure proper conditions for optimal C. difficile cultivation.

培養およびメンテナンス<em&gt;クロストリジウム·ディフィシル</em&gt;嫌気性環境での

Clostridium  difficile is a Gram-positive, anaerobic, sporogenic bacterium  that is primarily responsible for antibiotic associated diarrhea (AAD) and is ...

免疫・感染学

Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer being two common examples. Despite the frequency of these procedures, a significant knowledge gap remains in describing the inherent effects of intestinal resection on host physiology and disease pathophysiology. This article provides detailed instructions for an ileocolic resection with primary end-to-end anastomosis in mice, as well as essential aspects of peri-operative care to maximize post-operative success. When followed closely, this procedure yields a 95% long-term survival rate, no failure to thrive, and minimizes post-operative complications of bowel obstruction and anastomotic leak. The technical challenges of performing the procedure in mice are a barrier to its wide spread use in research. The skills described in this article can be acquired without previous surgical experience. Once mastered, the murine ileocolic resection procedure will provide a reproducible tool for studying the effects of intestinal resection in models of human disease.

Ileocolic resection is commonly performed in several human diseases; however, little is known regarding the impact of intestinal resection on surgical illnesses. This article provides instruction on executing the procedure in mice with high success, providing a means to study the effects of ileocolic resection in models of disease.

プライマリ吻合とネズミ回結腸腸切除

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

医学

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and consequently poses an urgent threat to public health. Recurrence of a C. difficile infection (CDI) after successful treatment with antibiotics is high, occurring in 20-30% of patients, thus necessitating the discovery of novel therapeutics against this pathogen. Current animal models of CDI result in high mortality rates and thus do not approximate the chronic, insidious disease manifestations seen in humans with CDI. To evaluate therapeutics against C. difficile, a mouse model approximating human disease utilizing a clinically-relevant strain is needed. This protocol outlines the cefoperazone mouse model of CDI using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Techniques for clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol. Compared to other mouse models of CDI, this model is not uniformly lethal at the dose administered, allowing for the observation of a prolonged clinical course of infection concordant with the human disease. Therefore, this cefoperazone mouse model of CDI proves a valuable experimental platform to assess the effects of novel therapeutics on the amelioration of clinical disease and on the restoration of colonization resistance against C. difficile.

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

This protocol outlines the cefoperazone mouse model of Clostridium difficile infection (CDI) using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Emphasis on clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol.

臨床的に関連のセフォペラゾン処理されたマウスモデル<em&gt;クロストリジウム・ディフィシル</em&gt;ひずみR20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted considerable attention. Accumulating evidence suggests that dysbiotic microbiota plays an active role in triggering or worsening the inflammatory process in IBD and that fecal microbiota transplantation (FMT) is an attractive therapeutic strategy since transferring a healthy microbiota to IBD patient could restore the appropriate host-microbiota communication. However, the molecular mechanisms are unclear, and the efficacy of FMT has not been very well established. Thus, further studies in animal models of IBD are necessary. In this method, we applied FMT from wild-type C57BL/6J mice to IL-10 deficient mice, a widely used mouse model of colitis. The study elaborates on collecting fecal pellets from the donor mice, making the fecal solution/suspension, administering the fecal solution, and monitoring the disease. We found that FMT significantly mitigated the cardiac impairment in IL-10 knockout mice, underlining its therapeutic potential for IBD management.

The interaction of genetic susceptibility, mucosal immunity, and intestinal microecological environment is involved in the pathogenesis of inflammatory bowel disease (IBD). In this study, we applied fecal microbiota transplantation to IL-10 deficient mice and investigated its impact on colonic inflammation and heart function.

インターロイキン10欠損マウスモデルにおける糞便微生物叢移植の治療的評価

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted ...

Murine Fecal Isolation and Microbiota Transplantation

Gut microbiota dysbiosis plays a role in the pathophysiology of cardiovascular and metabolic disorders, but the mechanisms are not well understood. Fecal microbiota transplantation (FMT) is a valuable approach to delineating a direct role of the total microbiota or isolated species in disease pathophysiology. It is a safe treatment option for patients with recurrent Clostridium difficile infection. Preclinical studies demonstrate that manipulating the gut microbiota is a useful tool to study the mechanistic link between dysbiosis and disease. Fecal microbiota transplantation may help elucidate novel gut microbiota-targeted therapeutics for the management and treatment of cardiometabolic disease. Despite a high success rate in rodents, there remains translational changes associated with the transplantation. The goal here is to provide guidance in studying the effects of gut microbiome in experimental cardiovascular disease. In this study, a detailed protocol for the collection, handling, processing, and transplantation of fecal microbiota in murine studies is described. The collection and processing steps are described for both human and rodent donors. Lastly, we describe using a combination of the Swiss-rolling and immunostaining techniques to assess gut-specific morphology and integrity changes in cardiovascular disease and related gut microbiota mechanisms.

The goal here is to outline a protocol to investigate the mechanisms of dysbiosis in cardiovascular disease. This paper discusses how to aseptically collect and transplant murine fecal samples, isolate intestines, and use the "Swiss-roll" method, followed by immunostaining techniques to interrogate changes in the gastrointestinal tract.

マウス糞便分離と微生物叢移植

Gut microbiota dysbiosis plays a role in the pathophysiology of cardiovascular and metabolic disorders, but the mechanisms are not well understood. Fecal ...

Preparation and Maintenance of Bioexclusion IsoPositive Cage Experiment for Human Fecal Transplantation into Germ-Free Mice

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of the specific role of individuals, defined or complex groups of microorganisms in host response. Traditionally bred and reared in flexible-film or semi-rigid isolators, germ-free mouse husbandry and experimental manipulation are costly and require numerous trained staff and a large space footprint in animal housing facilities. The IsoPositive caging system allows for experimental manipulation of germ-free mice in individual, hermetically-sealed, positive-pressure isolator cages (isocages), reducing cost and enabling greater flexibility in experimental manipulations. 
Here, a protocol is described for transferring germ-free mice from breeding isolators to isocages and subsequent fecal transfer from human donor stool into mice to create stable long-term gut "humanized" mice for future studies. The materials and preparation needed for the utilization of the isocage system are described, including the use of chlorine-dioxide sterilant chemical sterilant to clean cages, supplies, equipment, and personal protective equipment. The methods for confirming the germ-free status of transferred mice and how to determine contamination in the caging system are discussed. The procedure for husbandry, including bedding, food, and water supply, is further discussed. The protocol for human fecal slurry preparation and gavage into germ-free mice to create gut "humanized" mice, along with stool collection to monitor the microbial community composition of these mice, are described. An experiment illustrates that two weeks post-human fecal transplant allows for stable colonization of donor microbiota in the murine hosts, enabling subsequent experimental usage. Furthermore, the collection of humanized mouse feces in viability preservation media, enabling use in further functional experiments, is described. Overall, these methods allow for the safe and effective establishment of humanized mouse communities in experimental gnotobiotic cages for further manipulation.

This protocol describes the best practices for germ-free mouse transfer to and housing in experimental single-cage isolators (isocages) while maintaining sterile conditions. Methods for fecal transplant into germ-free mice and the collection of viable bacteria from these gut "humanized" mice for further applications are discussed.

無菌マウスへのヒト糞便移植のためのBioexclusion IsoPositive Cage実験の調製と維持

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of ...

Fecal Microbiota Transplantation and Detection of Prevalence of IgA-Coated Bacteria in the Gut

Gut microbiota exert pleiotropic roles in human health and disease. Fecal microbiota transplantation (FMT) is an effective method to investigate the biological function of intestinal bacteria as a whole or at the species level. Several different FMT methods have been published. Here, we present an FMT protocol that successfully depletes gut microbiota in a matter of days, followed by transplantation of fecal microbiota from fresh or frozen donor intestinal contents to conventional mice. Real time-PCR is applied to test the efficacy of bacterial depletion. Sequencing of the 16S ribosomal RNA (rRNA) is then applied to test the relative abundance and identity of gut microbiota in recipient mice. We also present a flow cytometry-based detection method of immunoglobulin A (IgA)-coated bacteria in the gut.

<meta charset="utf8"></head><body>糞便微生物叢移植と腸内IgA被覆細菌の有病率の検出

We established an efficient way to deplete intestinal bacteria in three days, and subsequently transplant fecal microbiota via gavage of fecal fluid prepared from fresh or frozen intestinal contents in mice. We also present an optimized method to detect the frequency of IgA-coated bacteria in the gut.

糞便微生物叢移植と腸内IgA被覆細菌の有病率の検出

Gut microbiota exert pleiotropic roles in human health and disease. Fecal microbiota transplantation (FMT) is an effective method to investigate the ...

生物学

Investigating the Alleviating Effects of Bacillus cereus Administration on Colitis through Gut Microbiota Modulation

Gut microbiota dysbiosis is thought to exert a role in the progression of colitis. However, the precise standards for probiotic administration in alleviating colitis remain undefined. Most analysis methods rely on limited diversity and abundance of gut microorganisms. Therefore, observational studies cannot establish causation. In this study, we applied antibiotic-induced pseudo-germ-free mice to investigate the role of gut microbiota in regulating the probiotic effects of Bacillus&#160;cereus (B. cereus)&#160;on dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis in mice. This process allows for evaluating the bidirectional regulating effect of B. cereus&#160;supplementation on health and provides stable and reproducible results. Here, the detailed protocols for B. cereus cultivation, gavage operation, stool collection, and antibiotic clearance treatment on colitis mice are provided. The optimization methods are also applicable for other chronic inflammatory-associated disorders. The results showed that B. cereus administration decreased body weight loss, colon length shortening, disease activity index, and histopathological scores. However, treatment with antibiotics suppressed the positive effect of B. cereus on colitis. These results indicate that gut microbiota are needed for the alleviating effects of B. cereus on colitis. Therefore, exploring the beneficial effects of probiotics in this research is a promising approach for developing novel treatment strategies for alleviating the symptoms of chronic inflammatory-associated disorders.

<meta charset="utf8"></head><body>腸内細菌叢の調節による大腸炎に対するセレウス菌投与の緩和効果の調査

Here, we present a protocol to establish the antibiotic-induced pseudo-germ-free dextran sulfate sodium-induced colitis mouse model to investigate the role of gut microbiota in regulating the positive effects of Bacillus cereus on colitis.

再発のための大腸内視鏡検査を経由して糞便細菌叢移植

要約

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散発性結腸直腸癌の遺伝子操作マウスモデル

培養およびメンテナンス

プライマリ吻合とネズミ回結腸腸切除

臨床的に関連のセフォペラゾン処理されたマウスモデル

インターロイキン10欠損マウスモデルにおける糞便微生物叢移植の治療的評価

マウス糞便分離と微生物叢移植

無菌マウスへのヒト糞便移植のためのBioexclusion IsoPositive Cage実験の調製と維持

糞便微生物叢移植と腸内IgA被覆細菌の有病率の検出

糞便微生物叢移植と腸内IgA被覆細菌の有病率の検出

腸内細菌叢の調節による大腸炎に対するセレウス菌投与の緩和効果の調査

再発のための大腸内視鏡検査を経由して糞便細菌叢移植

要約

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散発性結腸直腸癌の遺伝子操作マウスモデル

培養およびメンテナンス

プライマリ吻合とネズミ回結腸腸切除

臨床的に関連のセフォペラゾン処理されたマウスモデル

インターロイキン10欠損マウスモデルにおける糞便微生物叢移植の治療的評価

マウス糞便分離と微生物叢移植

無菌マウスへのヒト糞便移植のためのBioexclusion IsoPositive Cage実験の調製と維持

糞便微生物叢移植と腸内IgA被覆細菌の有病率の検出

糞便微生物叢移植と腸内IgA被覆細菌の有病率の検出

腸内細菌叢の調節による大腸炎に対する セレウス菌 投与の緩和効果の調査

腸内細菌叢の調節による大腸炎に対するセレウス菌投与の緩和効果の調査