The authors would like to acknowledge the Infectious Disease Department at Brigham and Women&#8217;s Hospital especially Michael S. Calderwood, MD, MPH for helping us construct this protocol. We would also like to thank the Institution&#8217;s endoscopy center and it&#8217;s leadership team for their support.

HINWEIS: Zum Zeitpunkt der Veröffentlichung dieser Handschrift eine Investigational New Drug (IND) Anwendung ist nicht erforderlich, um eine FMT für wiederkehrende CDI in der klinischen Praxis durchzuführen. Allerdings, wenn FMTs wird als Teil einer Studie oder für eine andere Indikation kann eine IND oder gleichwertige Anwendung erforderlichen 18 werden. Aufsichtsbehörden werden wahrscheinlich auch weiterhin die Sicherheit und Wirksamkeit von FMT beurteilen, um CDI und anderen Erkrankungen angewendet und so ist es ratsam, die regulatorischen Anforderungen in Ihrem jeweiligen Standort vor der Einleitung eines FMT-Programm und jeder ein bis zwei Monate einmal überprüfen aktiv Durchführung FMT. HINWEIS Die Bewerber müssen bereit sein, auf die fäkale Transplantation sowie die Koloskopie einverstanden sein. 1. Bezeichnung des Geeignete Kandidaten für FMT <ol><li> Patienten, die schub CDI oder Patienten mit refraktärer Erkrankung haben, die nicht mehr auf herkömmliche Antibiotika sind appropriate Kandidaten für FMT. HINWEIS: rezidivierende CDI als eine Geschichte von drei oder mehr Episoden von CDI durch Toxintests oder PCR, oder zwei Episoden, die einen Krankenhausaufenthalt erforderlich bestätigt definiert. </li><li> Sicherstellen, dass der Patient in der Lage, eine Koloskopie sicher zu unterziehen. Diese liegen im Ermessen des endoscopist. </li></ol> 2. Hocker Spenderauswahl HINWEIS: Schemel Donor Auswahl bezieht sich auf die Behandlung von CDI und kann nicht für die Behandlung von anderen Erkrankungen. <ol><li> Stellen Sie sicher, der Patient identifiziert einen Spender. Potenzielle Spender sollten mit dem Empfänger zum Zeitpunkt der ersten Klinik für Gastroenterologie Besuch anwesend sein. Spender können Ehepartner, Familienmitglieder oder Freunde. Spender können im selben Haus wie der Empfänger, solange andere Kriterien erfüllt zu leben. </li></ol> 3. Geberberechtigung <ol><li> Einschlusskriterien: Stellen Sie sicher, dass der Spender ein gesunder Erwachsener (≥18 Jahre) und hat eine tägliche gebildet Darm movement. </li><li> Ausschlusskriterien: <ol><li> Stellen Sie sicher, dass der Spender nicht die Einnahme von Antibiotika oder Antibiotika nicht in den vorherigen drei Monaten alle Medikamente für eine Infektion entnommen. </li><li> Stellen Sie sicher, dass der Spender nicht eine Geschichte von Verstopfung oder Gebrauch von Abführmitteln haben chronisch. Darüber hinaus gewährleisten die Spender nicht eine Geschichte von chronisch entzündlichen Darmerkrankungen, chronischer Durchfall, mikroskopische Kolitis, eine persönliche Geschichte der Darm / Darm Malignität oder einer Vorgeschichte von Magen-Bypass / andere Gewichtsverlust Chirurgie zu haben. </li><li> Sicherstellen, dass die Spender nicht reiste kürzlich (innerhalb der letzten drei Monate) zu einem Bereich, in dem infektiösen Durchfall ist ein Anliegen. Wenn sie bereist und erlebt Durchfall haben sollten Gründen ausgeschlossen werden. </li><li> Stellen Sie sicher, dass der Spender nicht der Einnahme von Immunsuppressiva und ist nicht auf eine systemische Chemotherapie. </li><li> Stellen Sie sicher, dass der Spender nicht über das metabolische Syndrom, Autoimmunerkrankungen oder atopischen Erkrankungen. </li></ol></li><li> Erhalten geschrieben conaus dem Spender und Empfänger vor dem Screening berücksichtigt man die Sensibilität der Screening-Tests geschickt. Versichern beide Parteien, die Testergebnisse nicht mit der anderen Partei teilen. </li></ol> 4. Screening HINWEIS: Dieser Screening-Protokoll wurde für die Patienten am Brigham and Womens Hospital in Massachusetts angepasst, USA Betrachten Anhörung der Abteilung für Infektionskrankheiten und Spitalinfektionskontrolle vor Beginn der FMT-Protokoll, um sicherzustellen, dass alle geeigneten Screening-Tests berücksichtigt. <ol><li> Empfänger: <ol><li> Zum Zeitpunkt der ersten Klinikbesuch, senden Sie die folgenden Labortests für die Empfängerüberprüfungen (zur Grundlinie Tests für diese Infektionskrankheiten zu schaffen und sicherzustellen, gibt es keine Frage der Übertragung in der Zukunft). </li><li> Führen Hepatitis A (IgG und IgM), Hepatitis B (HBsAg / Ab und HBcAb), Hepatitis C Ab, HIV-1/2 (Ab und Viruslast) und Syphilis (TP-IgG) Labor Blut tInteressen. </li><li> Besorgen Sie sich eine gründliche Geschichte der Nahrungsmittelallergien bei dieser ersten Einschätzung. </li></ol></li><li> Spender: <ol><li> Koordinieren Sie mit dem mikrobiologischen Labor vor Screening bis geformten Stuhl zu gewährleisten wird nicht verworfen. </li><li> Bestellen Sie die unter Labortests für Spender-Screening, wenn der Spender erfüllt Zulassungskriterien gemäß Abschnitt 3. </li><li> Führen Hepatitis A (IgG und IgM), Hepatitis B (HBsAg / Ab und HBcAb), Hepatitis C Ab, HIV-1/2 (Ab und Viruslast) und Syphilis (TP-IgG) Labor Blutuntersuchungen. </li><li> Führen C. difficile (durch Kultur), Routine Stuhlkultur, Giardia Antigen Cryptosporidium-Antigens und Eizellen und Parasiten Laborstuhltests. </li><li> Bildschirm den Spender nicht mehr als 30 Tage, aber vorzugsweise 1 - 2 Wochen vor der geplanten Vorgehensweise. HINWEIS: Wenn der Spender entwickelt Durchfall oder flüssigen Stuhl sie Anspruch auf Spende nicht mehr. </li></ol></li><li> Counsel der Spender auf Lebensmittel zu vermeiden, auf der GrundlageNahrungsmittelallergien des Empfängers. Der Spender sollte nicht zu sich nehmen Lebensmittel, denen der Empfänger für die 5 Tage vor der Spende allergisch. </li></ol> 5. Pre-Verfahren Vorbereitung <ol><li> Empfänger: <ol><li> Bei der ersten Klinikbesuch, wenn der Empfänger nicht bereits auf Vancomycin oral, starten Vancomycin 125 mg alle 6 Stunden für mindestens sieben bis zehn Tage vor dem Eingriff. </li><li> Geben Sie den Empfänger mit den Anweisungen des Endoskopiezentrum für Pre-Koloskopie Darmvorbereitung, den Tag vor der geplanten Vorgehensweise durchgeführt werden. Die Empfänger sollten nach standardisierten Nahrungs Anweisungen des Endoskopie-Zentrum für die Woche vor dem Eingriff. </li><li> Weisen Sie den Empfänger, um ihre letzten Dosis von Vancomycin in der Nacht vor dem Eingriff zu nehmen. </li></ol></li><li> Spender: <ol><li> Geben Sie den Spender mit mehreren Stuhlentnahmebecher. Marken-Toiletteneinsätze (Hut) und Tassen mit Label des Empfängers sowie 3 leer specimen Containern. Bitten Sie den Geber für Stuhlsammlung nicht mehr als 6 Stunden vor der Verarbeitung (Zeitordnung) beginnen. HINWEIS: Wenn der Geber bietet mehrere Stuhlproben, sollten sie mit Datum und Uhrzeit gekennzeichnet werden. Verwenden Sie die frischesten Probe (eine gefüllte Probenbecher genügt). </li><li> Stellen Sie sicher, dass der Empfänger auf bringt Stuhlprobe des Spenders mit ihnen auf das Verfahren. </li><li> Bewahren Sie die Stuhlproben bei Raumtemperatur. Schließen Sie alle mögliche ungeformten Stuhl. Nicht verwendete Stuhl in einer Kanalisation gelangen (es sei denn, sparen zu Forschungszwecken). </li></ol></li></ol> 6. Hocker Vorbereitung HINWEIS: Achten Sie darauf, dieses Verfahren wird diskutiert und durch das Krankenhaus der Infektionskontrolle Abteilung genehmigt. <ol><li> Persönliche Schutzausrüstung tragen bei der Erstellung der Hocker. </li><li> Bereiten Stuhl in der Endoskopie Raum in einem bestimmten Arbeitsbereich, in dem es eine achtzehn Zoll Splash-Zone, die eine Kontamination der other Materialien. </li><li> Vor der Zubereitung Hocker, reinigen Sie den vorgesehenen Bereich mit Krankenhaus-zugelassenen Desinfektionsmittel. </li><li> Decken Sie den Bereich mit einem Einweg-Pad, um Verunreinigungen zu vermeiden. </li><li> Übertragen Sie die geformten Stuhl in eine 14 Unzen Single Speed ​​Mixer und fügen 500 ml physiologischer Kochsalzlösung. </li><li> Mischung der Inhalte für mindestens eine Minute, oder bis es einer flüssigen Aufschlämmung Konsistenz erreicht. Achten Sie darauf, um das Auslaufen zu vermeiden, wenn Sie den Deckel des Mixers. </li><li> Füllen Sie die Lösung durch das Sieb in einen Plastik acht Liter Becken, jede feste Abfälle zu beseitigen. Entsorgen Sie das Sieb. </li><li> Ziehen Sie den angespannten Lösung in 60 ml Luer-Lock-Spritzen (etwa acht bis neun für eine Standard-FMT durch Koloskopie). Erstellen Sie eine zusätzliche 60 ml physiologischer Kochsalzlösung für Wallungen. </li></ol> 7. Fecal Transplant über Koloskopie <ol><li> Persönliche Schutzausrüstung nach den Endoskopie-Einheit Politik während der Durchführung oder Unterstützung bei der infusion. </li><li> Betrachten Licht Sedierung, falls möglich, so dass der Patient in der Lage, mit Halte den Stuhl nach dem Verfahren kooperieren. </li><li> Führen Sie eine Koloskopie zur terminalen Ileum (oder, soweit technisch möglich). Beim Einstecken des colonscope, Lavage und Absaugung der restliche flüssigen Stuhl. </li><li> Überprüfen Sie die Schleimhautwände auf Beweise von Entzündung aber Schleimhaut-Biopsien während der FMT Verfahren nicht routinemäßig durchgeführt. HINWEIS: Stellen Sie fest, ob eine vollständige Koloskopie ist sicher wegen der Grad der Entzündung. Wenn nicht, sollten Sie ein begrenzter flexible Sigmoidoskopie mit Infusions (verwenden Sie die Hälfte der Stuhl Slurry). </li><li> Die Infusion 60 ml (eine Spritze) einmal im terminalen Ileum über den Biopsiekanal des Koloskop mit dem Biopsiekanal Kappe mit Verlängerungsschlauch. </li><li> Zwischen Anwendungen von Stuhl Spritzen, spülen Sie den Kanal mit physiologischer Kochsalzlösung, um Verstopfungen zu vermeiden. </li><li> Infuse einen weiteren 60 ccm Hocker in den Blinddarm und dann in die richtige c wiederholenolon. </li><li> Die Infusion 30 ccm alle fünf bis zehn cm, während die gleichmäßige Verteilung des Schlamms auf allen vier Quadranten Darmwand bis zur Mitte des Colon transversum erreicht ist. Vergessen Sie nicht, mit Kochsalzlösung zwischen Stuhl Spritzen spülen. HINWEIS: Wenn die Aufschlämmung sehr viskos kann es notwendig sein, mit erheblicher Kraft auf die Spritze zu drücken. Achten Sie darauf, dass die Biopsiekanal Kappe nicht aus dem Koloskop zu trennen und zu verschüttetes Hocker Inhalte. Häufige Spülung für leichtere Passage des Schlamms zu ermöglichen. Wenn es anhaltende Schwierigkeiten bei Drücken der Gülle, in Erwägung ziehen, belasten die übrigen Geber Stuhl ein zweites Mal oder mit physiologischer Kochsalzlösung weiter verdünnt. </li><li> Saugen Sie überschüssige Luft beim Herausziehen beim Wechsel Spritzenzylinder, während sie vorsichtig, dass kein flüssiger Stuhl abzusaugen. HINWEIS: Wenn der Patient Stuhlinkontinenz bekannt, die letzte Spritze sollte nicht weniger als der Flexur infundiert werden, um ein Auslaufen während und nach dem Eingriff zu vermeiden. </li><li> Sobald the-Koloskopie mit FMT abgeschlossen ist, teilen Sie dem Patienten, den Stuhl so lange wie möglich zu behalten. Sie können ihre regelmäßige Ernährung und Medikamente 2 Stunden fortgesetzt, nachdem die Koloskopie ist abgeschlossen. </li></ol> 8. Koloskopie mit FMT Clean Up <ol><li> Führen Sie nach dem Eingriff Ausrüstung Wiederaufarbeitung, Umwelt Reinigung / Desinfektion und Entsorgung gemäß Krankenhausprotokoll. </li><li> Entsorgen Sie alle Fäkalien in dem entsprechenden Behälter für biologischen Sondermüll. </li><li> Bringen Sie das Koloskop zur Dekontamination Bereich für Routineverarbeitung gemäß dem Standardverfahren. </li><li> Entsorgen Sie den Mixer und Sieb mit einer anderen verschmutzten Abfällen. HINWEIS: Bei Einzelnutzung Mixer und Siebe nicht durchführbar sind an einer einzelnen Institution alternativen Mischverfahren berücksichtigt werden können. Ein Beispiel: Leiten des Stuhl durch ein Edelstahl-Kartoffelpresse, die in einem Autoklaven zu reinigen sind. Wir raten Ihnen, potenzielle Methoden mit Ihrer Einrichtung zur Infektionskontrolle department. </li><li> Dekontaminieren Sie alle Oberflächen, die für das Verfahren mit Hilfe der Anlage zugelassene Produkte verwendet wurden. </li></ol> 9. Follow Up <ol><li> Vereinbaren Sie einen Follow-up-Termin in der Gastroenterologie Klinik für den Patienten etwa 30 Tage nach der FMT. </li><li> Counsel der Patient über das Risiko von C. difficile Rezidiv mit zukünftigen Kurse von Antibiotika. </li></ol> 10. Meldung von Nebenwirkungen <ol><li> Obwohl FMT gilt als ein sicheres Verfahren ist, wird dringend empfohlen, den Überblick zu behalten über alle Nebenwirkungen, mit dem Verfahren verbunden werden und an den zuständigen Aufsichts Boards berichten fühlte. </li><li> Um die langfristige Sicherheit der FMT dokumentieren, halten Sie eine zuverlässige Datenbank, die regelmäßig abgefragt werden können. </li></ol>

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S., Khoruts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+on+preparing+an+investigational+new+drug+application+for+fecal+microbiota+transplantation+studies.">Guidance on preparing an investigational new drug application for fecal microbiota transplantation studies.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 12 (2), 283-288 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose relevant to the material presented in this manuscript.

Fecal Transplantate wurde gezeigt, daß eine wirksame und sichere Behandlung von rezidivierenden CDI werden. Wir haben ein Standardprotokoll für FMT über Koloskopie skizziert und enthalten unsere Ergebnisse für die 22 Patienten, die das Verfahren für die wiederkehrende CDI unterzog. Unsere bisherigen Ergebnisse sind mit nur einem Patienten wiederkehr einen Monat nach der FMT vergleichbar mit veröffentlichten Daten für die wiederkehrende Krankheit. Ein entscheidender Schritt der Prozedur ist die Vorschaltu...

Fecal Transplantationen zur Behandlung von Colitis pseumembranous wurden erstmals im Jahr 1958 beschrieben 1. Allerdings berichtet der Einnahme von Fäkalien zur Behandlung von Lebensmittelvergiftungen und schweren Durchfall stammen bereits vierten Jahrhundert China 2. Fecal Mikrobiota Transplantation (FMT) wird in der Literatur auch als &quot;Übertragung der Darmflora&quot;, &quot;menschlich probiotischen Infusion&quot;, &quot;Stuhl-Transplantation&quot;, &quot;Darm microbiome Wiederherstellung&quot; und &quot;fäkale Übertragung&quot;. Es geht um das Sammeln Hocker von einem gesunden, sorgfältig geprüften Spender und liefert eine hergestellte Aufschlämmung in den Gastrointestinaltrakt des Empfängers via Magensonde, esophagogastricduodenoscopy, Koloskopie oder Einlauf 3. Viele Fallserien haben die Wirksamkeit von Verwaltung über NGT und Einlauf berichtet jedoch neuere Studien, dass die Verabreichung von Spender Hocker gezeigt über eine Darmspiegelung ist sicher und hochwirksam 4.Obwohl andere Verfahren, wie Magensonde Verabreichung berichtet, Lieferung von Spender Hocker über Koloskopie weniger unmittelbare Nebenwirkungen (zB Blähungen, Übelkeit) 4 und wir haben gefunden, dass die Patienten mehr Akzeptanz des Begriffs FMT, wenn es durchgeführt wird durch Koloskopie. Eine der therapeutischen Vorteile FMT über Koloskopie ist die Verringerung colonic Biomasse durch Spülen des Darmes, die vor dem Verfahren 4 durchgeführt wird. Mehrere Studien haben die Rolle der FMT für die Behandlung von Colitis und Durchfall durch das opportunistisch pathogene C. verursacht untersucht difficile (CDI). Die Inzidenz von CDI steigt weiter und ist eine Hauptursache für Morbidität und Mortalität mit einer großen wirtschaftlichen Belastung der ganzen Welt. First-Line Behandlung für CDI besteht aus Antibiotika-Therapie jedoch Rezidivraten zwischen 15 bis 35% 5 berichtet. Mehrere Fallserien und Berichte haben zu tuncumented die Sicherheit und Wirksamkeit von FMT für CDI refraktär medizinische Standardbehandlung mit Antibiotika 4,6-16. Eine Studie, die langfristigen Follow-up von Patienten nach FMT über Koloskopie für CDI berichtet eine 91% primäre Heilungsrate bei 77 Patienten 17. In unserem Center (Brigham and Womens Hospital Abteilung für Gastroenterologie, Hepatologie und Endoskopie), haben wir ein fäkale Transplantation Programm für Patienten mit rezidivierendem oder refraktärem CDI. Geeignete Kandidaten werden als Patienten, die wiederkehrende CDI (eine Geschichte von 3 oder mehr Episoden oder 2 Episoden, die einen Krankenhausaufenthalt erforderlich) oder Patienten mit refraktärer Erkrankung, die nicht mehr auf herkömmliche Antibiotika haben definiert. Wir glauben, dass ein systematischer Ansatz für alle Phasen des Verfahrens maximiert Wirksamkeit. In diesem Manuskript und dazugehörige Video, die wir ausführlich das Protokoll wir in unserem Center, das Patienten und Spender-Screening, Stuhl Vorbereitung umfasst beschäftigt haben, und die Lieferung von Stuhl eint die Zeit der Koloskopie. Dieses Verfahren hat positive Ergebnisse vergleichbar mit der veröffentlichten Literatur lieferte. Falldarstellung: Dieser Patient stellt einen typischen Patienten auf fäkales Transplantation bezeichnet. Der Patient ist ein 69 Jahre alte Frau mit einer Geschichte von chronischer lymphatischer Leukämie, der Rückfall der Erkrankung erfordern eine weitere Behandlung mit einer Chemotherapie hatte. Sie litt unter drei Folgen der CDI im vergangenen Jahr, und wurde daher in unsere Klinik zur Behandlung von FMT vor der erneuten Einleitung der Chemotherapie bezeichnet. Ihre erste Episode von CDI erfolgte im Oktober 2012 hatte sie keine vorstehenden Antibiotika hatte. Sie war sehr krank auf der Intensivstation nach der Präsentation mit septischem Schock und unterzog sich abzulenken Schleife Ileostomie mit ante Vancomycin Einläufe für einen 6-Wochen-Kurs in Kombination mit oralen Vancomycin angesichts der Schwere ihrer Krankheit. Sie haben sehr gut mit einer Auflösung von ihrem Durchfall und sie in der Lage zu kommen, waroff Antibiotika. Sie entwickelte eine Hernie um sie Stoma so dass es umgekehrt wurde. Kurz nach dem Stoma Umkehrung sie wieder entwickelt Durchfall und wurde wieder gefunden zu sein C difficile Toxin positiv. Sie absolvierte einen weiteren 6 Wochen Behandlung mit oralen Vancomycin und konnte es erfolgreich auslaufen. Doch einige Monate später wieder bekam sie Durchfall C betrug difficile Toxin positiv und lag auf dem dritten Behandlung mit oralen Vancomycin gestartet. Sie war gut auf Antibiotika zu tun, wenn es wurde festgestellt, dass ihre weißen Zahl erhöhte sich auf&gt; 100, und sie hat festgestellt, um eine Wiederholung ihres CLL auf Knochenmark-Biopsie haben. Ihre Onkologen waren besorgt über die Einleitung einer Chemotherapie ohne vollständige Auflösung ihres CDI und so wurden wir gebeten, FMT durchzuführen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="840">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:121px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:355px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="92">
			<td height="92" style="height:92px;width:247px;">Blender</td>
			<td style="width:121px;">Hamilton Beach</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:355px;">http://www.amazon.com/Hamilton-Beach-51101-Personal-Blender/dp/B00065L6CU/ref=pd_sim_k_2?ie=UTF8&#38;refRID=1Q06MXAE9XKTB4QG0AEN</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:247px;">Strainer</td>
			<td style="width:121px;">Winco MS3A-8S Strainer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:355px;">http://www.amazon.com/Winco-MS3A-8S-Strainer-Single-Wooden/dp/B001VZ5E40/ref=sr_1_3?s=home-garden&#38;ie=UTF8&#38;qid=1395001295&#38;sr=1-3&#38;keywords=kitchen+strainer+wooden+handle</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Disposable pads (chux), 17in x 24in.&#160;</td>
			<td>hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>one package&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Pink rectangular hospital standard wash basin, 8 quart&#160;</td>
			<td>hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>1 or 2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">500 cc bottle of sterile normal saline</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">60cc leur lock syringes</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>8 or 9</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Biopsy channel cap with extension</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fecal microbiota transplantation via colonoscopy for recurrent c. difficile infection

Fecal Microbiota Transplantation (FMT) ist eine sichere und hochwirksame Behandlung für wiederkehrende und feuerfesten C. difficile-Infektion (CDI). Verschiedene Methoden der FMT Verwaltung sind in der Literatur berichtet worden, einschließlich Magensonde, oberen Endoskopie, Einlauf und Koloskopie. FMT über Koloskopie liefert hervorragende Heilungsraten und ist auch gut vertragen. Wir haben festgestellt, dass Patienten finden dies eine akzeptable und erträglich Art der Lieferung. In unserem Zentrum haben wir eine fäkale Transplantation Programm für Patienten mit rezidivierendem oder refraktärem CDI eingeleitet. Wir haben ein Protokoll entwickelt, in einem iterativen Prozess der Überprüfung und haben 24 fäkale Transplantation auf 22 Patienten mit Erfolgsraten vergleichbar mit der aktuellen Fachliteratur durchgeführt. Ein systematischer Ansatz, um Patienten und Spender-Screening, Vorbereitung der Stuhl, und die Lieferung des Stuhl maximiert Therapieerfolg. Hier die einzelnen Schritte des FMT-Protokoll, das bei jeder Endoskopie durchgeführt werden können wir DetailZentrum mit einem hohen Grad an Sicherheit und Erfolg.

Wir haben 24 FMTs an 22 Patienten in unserem Center (Tabelle 1) unter Verwendung des obigen Protokoll. Neun Patienten hatten gleichzeitige IBD (sechs mit Morbus Crohn und drei mit Colitis ulcerosa). Alle neun hatten Auflösung von CDI. Einer der Patienten mit Morbus Crohn war Status veröffentlichen insgesamt Kolektomie für Morbus ulcerosa. Er unterzog sich zunächst FMT über Koloskopie jedoch nach erleben eine Wiederholung zu 2 Wochen nach der FMT er unterzog sich einer zweiten FMT über obere Endosk...

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Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

Fecal Mikrobiota Transplantation über Koloskopie ist eine sichere und wirksame Behandlung für wiederkehrende und feuerfesten C.difficile Infektion. Während der Koloskopie Ein systematischer Ansatz für Patienten und Spender-Screening, Vorbereitung der Stuhl, und die Lieferung des Stuhls wird den Therapieerfolg zu maximieren.

Fecal Mikrobiota Transplantation über Koloskopie für Recurrent<em&gt; C. difficile</em&gt; Infektions

Fecal Microbiota Transplantation (FMT) is a safe and highly effective treatment for recurrent and refractory C. difficile infection (CDI). Various methods ...

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Research

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Medicine

Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

27.0K Aufrufe.  Brigham and Women‘s Hospital.  Fecal Mikrobiota Transplantation über Koloskopie ist eine sichere und wirksame Behandlung für wiederkehrende und feuerfesten C.difficile Infektion. Während der Koloskopie Ein systematischer Ansatz für Patienten und Spender-Screening, Vorbereitung der Stuhl, und die Lieferung des Stuhls wird den Therapieerfolg zu maximieren. 

Serie: Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

Einem Mausmodell der In Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Forschung

Medizin

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness of a variety of oncolytic platforms including HSV, Reovirus, and Vaccinia OVs as treatment for cancer are currently underway2-5. One key characteristic of oncolytic viruses is that they can be genetically modified to express reporter transgenes which makes it possible to visualize the infection of tissues by microscopy or bio-luminescence imaging6,7. This offers a unique advantage since it is possible to infect tissues from patients ex vivo prior to therapy in order to ascertain the likelihood of successful oncolytic virotherapy8. To this end, it is critical to appropriately sample tissue to compensate for tissue heterogeneity and assess tissue viability, particularly prior to infection9. It is also important to follow viral replication using reporter transgenes if expressed by the oncolytic platform as well as by direct titration of tissues following homogenization in order to discriminate between abortive and productive infection. The object of this protocol is to address these issues and herein describes 1. The sampling and preparation of tumor tissue for cell culture 2. The assessment of tissue viability using the metabolic dye alamar blue 3. Ex vivo infection of cultured tissues with vaccinia virus expressing either GFP or firefly luciferase 4. Detection of transgene expression by fluorescence microscopy or using an In Vivo Imaging System (IVIS) 5. Quantification of virus by plaque assay. This comprehensive method presents several advantages including ease of tissue processing, compensation for tissue heterogeneity, control of tissue viability, and discrimination between abortive infection and bone fide viral replication.

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic viruses are promising for cancer therapeutics. The ability to ascertain the infectability of live tissue specimens obtained from patients prior to treatment is a unique advantage of this therapeutic approach. This protocol describes how to process tissues for ex vivo infection with oncolytic virus and subsequent viral quantification.

Ex-vivo-Infektion von lebendem Gewebe mit onkolytischen Viren

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

Intraspinal Cell Transplantation for Targeting Cervical Ventral Horn in Amyotrophic Lateral Sclerosis and Traumatic Spinal Cord Injury

Respiratory compromise due to phrenic motor neuron loss is a debilitating consequence of a large proportion of human traumatic spinal cord injury (SCI) cases 1 and is the ultimate cause of death in patients with the motor neuron disorder, amyotrophic laterals sclerosis (ALS) 2.
ALS is a devastating neurological disorder that is characterized by relatively rapid degeneration of upper and lower motor neurons. Patients ultimately succumb to the disease on average 2-5 years following diagnosis because of respiratory paralysis due to loss of phrenic motor neuron innnervation of the diaphragm 3. The vast majority of cases are sporadic, while 10% are of the familial form. Approximately twenty percent of familial cases are linked to various point mutations in the Cu/Zn superoxide dismutase 1 (SOD1) gene on chromosome 21 4. Transgenic mice 4,5 and rats 6 carrying mutant human SOD1 genes (G93A, G37R, G86R, G85R) have been generated, and, despite the existence of other animal models of motor neuron loss, are currently the most highly used models of the disease.
Spinal cord injury (SCI) is a heterogeneous set of conditions resulting from physical trauma to the spinal cord, with functional outcome varying according to the type, location and severity of the injury 7. Nevertheless, approximately half of human SCI cases affect cervical regions, resulting in debilitating respiratory dysfunction due to phrenic motor neuron loss and injury to descending bulbospinal respiratory axons 1. A number of animal models of SCI have been developed, with the most commonly used and clinically-relevant being the contusion 8.
Transplantation of various classes of neural precursor cells (NPCs) is a promising therapeutic strategy for treatment of traumatic CNS injuries and neurodegeneration, including ALS and SCI, because of the ability to replace lost or dysfunctional CNS cell types, provide neuroprotection, and deliver gene factors of interest 9.
Animal models of both ALS and SCI can model many clinically-relevant aspects of these diseases, including phrenic motor neuron loss and consequent respiratory compromise 10,11. In order to evaluate the efficacy of NPC-based strategies on respiratory function in these animal models of ALS and SCI, cellular interventions must be specifically directed to regions containing therapeutically relevant targets such as phrenic motor neurons. We provide a detailed protocol for multi-segmental, intraspinal transplantation of NPCs into the cervical spinal cord ventral gray matter of neurodegenerative models such as SOD1G93A mice and rats, as well as spinal cord injured rats and mice 11.

Neural precursor transplantation is a promising strategy for protecting and/or replacing lost/dysfunctional cervical phrenic motor neurons in spinal cord injury (SCI) and the motor neuron disorder, amyotrophic laterals sclerosis (ALS). We provide a protocol for cell delivery to cervical spinal cord ventral horn in rodent models of ALS and SCI.

Intraspinale Cell Transplantation für Targeting Cervical Vorderhorn in Amyotrophe Lateralsklerose und traumatische Rückenmarksverletzungen

Respiratory compromise due to phrenic motor neuron loss is a debilitating consequence of a large proportion of human traumatic spinal cord injury (SCI) ...

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Small bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with short gut syndrome and failure of parenteral nutrition (irreversible intestinal failure). In specialized centers improved operative and managing strategies have led to excellent short- and intermediate term patient and graft survival while providing high quality of life 1,3. Unlike in the more common transplantation of other solid organs (i.e. heart, liver) many underlying mechanisms of graft function and immunologic alterations induced by intestinal transplantation are not entirely known6,7. Episodes of acute rejection, sepsis and chronic graft failure are the main obstacles still contributing to less favorable long term outcome and hindering a more widespread employment of the procedure despite a growing number of patients on home parenteral nutrition who would potentially benefit from such a transplant. The small intestine contains a large number of passenger leucocytes commonly referred to as part of the gut associated lymphoid system (GALT) this being part of the reason for the high immunogenity of the intestinal graft. The presence and close proximity of many commensals and pathogens in the gut explains the severity of sepsis episodes once graft mucosal integrity is compromised (for example by rejection). To advance the field of intestinal- and multiorgan transplantation more data generated from reliable and feasible animal models is needed. The model provided herein combines both reliability and feasibility once established in a standardized manner and can provide valuable insight in the underlying complex molecular, cellular and functional mechanisms that are triggered by intestinal transplantation. We have successfully used and refined the described procedure over more than 5 years in our laboratory 8-11. The JoVE video-based format is especially useful to demonstrate the complex procedure and avoid initial pitfalls for groups planning to establish an orthotopic rodent model investigating intestinal transplantation.

Small bowel transplantation has become an accepted treatment option for patients with irreversible intestinal failure. Our experimental model of orthotopic small bowel transplantation in rats serves as a reliable tool to address underlying immunologic and inflammatory processes that complicate intestinal transplantation.

Orthotopen Dünndarm Transplantation in Ratten

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove nonadherent cells and lung lining fluid from the mucosal surface. In research environments, BAL allows sampling of innate (lung macrophage), cellular (B- and T- cells), and humoral (immunoglobulin) responses within the lung.
BAL is internationally accepted for research purposes and since 1999 the technique has been performed in &#62; 1,000 subjects in the UK and Malawi by our group.
Our technique uses gentle hand-held suction of instilled fluid; this is designed to maximize BAL volume returned and apply minimum shear force on ciliated epithelia in order to preserve the structure and function of cells within the BAL fluid and to preserve viability to facilitate the growth of cells in ex vivo culture. The research technique therefore uses a larger volume instillate (typically in the order of 200 ml) and employs manual suction to reduce cell damage.
Patients are given local anesthetic, offered conscious sedation (midazolam), and tolerate the procedure well with minimal side effects. Verbal and written subject information improves tolerance and written informed consent is mandatory. Safety of the subject is paramount. Subjects are carefully selected using clear inclusion and exclusion criteria.
This protocol includes a description of the potential risks, and the steps taken to mitigate them, a list of contraindications, pre- and post-procedure checks, as well as precise bronchoscopy and laboratory techniques.

Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy and bronchoalveolar lavage using low pressure suction. The technique is used to harvest immune cells from the lung bronchoalveolar surfaces. Local anesthetic and mild conscious sedation (midazolam) is used. Subjects tolerate the procedure well and experience minimal side effects.

Bronchoalveoläre Lavage (BAL) für Forschung, Beschaffung angemessene Probenausbeute

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

Tumor Treating Field Therapy in Combination with Bevacizumab for the Treatment of Recurrent Glioblastoma

A novel device that employs TTF therapy has recently been developed and is currently in use for the treatment of recurrent glioblastoma (rGBM). It was FDA approved in April 2011 for the treatment of patients 22 years or older with rGBM. The device delivers alternating electric fields and is programmed to ensure maximal tumor cell kill1.
Glioblastoma is the most common type of glioma and has an estimated incidence of approximately 10,000 new cases per year in the United States alone2. This tumor is particularly resistant to treatment and is uniformly fatal especially in the recurrent setting3-5. Prior to the approval of the TTF System, the only FDA approved treatment for rGBM was bevacizumab6. Bevacizumab is a humanized monoclonal antibody targeted against the vascular endothelial growth factor (VEGF) protein that drives tumor angiogenesis7. By blocking the VEGF pathway, bevacizumab can result in a significant radiographic response (pseudoresponse), improve progression free survival and reduce corticosteroid requirements in rGBM patients8,9. Bevacizumab however failed to prolong overall survival in a recent phase III trial26. A pivotal phase III trial (EF-11) demonstrated comparable overall survival between physicians&#8217; choice chemotherapy and TTF Therapy but better quality of life were observed in the TTF arm10.
There is currently an unmet need to develop novel approaches designed to prolong overall survival and/or improve quality of life in this unfortunate patient population. One appealing approach would be to combine the two currently approved treatment modalities namely bevacizumab and TTF Therapy. These two treatments are currently approved as monotherapy11,12, but their combination has never been evaluated in a clinical trial. We have developed an approach for combining those two treatment modalities and treated 2 rGBM patients. Here we describe a detailed methodology outlining this novel treatment protocol and present representative data from one of the treated patients.

A novel methodology that is employed for the treatment of recurrent glioblastomas is described. This treatment approach employs the application of alternating electric tumor treating fields (TTFields), known as TTF Therapy in combination with bevacizumab, a targeted agent that is currently FDA approved as monotherapy.

Tumor Behandlung Feldtherapie in Kombination mit Bevacizumab für die Behandlung von rezidivierendem Glioblastom

A novel device that employs TTF therapy has recently been developed and is currently in use for the treatment of recurrent glioblastoma (rGBM). It was FDA ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

Ex-situ-normothermen Maschine Perfusion von Spenderlebern

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Veno-Venous Extracorporeal Membrane Oxygenation in a Mouse

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for acute as well as end-stage lung diseases. With the increase in clinical demand and prolonged use of ECMO, procedural optimization and prevention of multi-organ damage are of critical importance. The aim of this protocol is to present a detailed technique of veno-venous ECMO in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This protocol demonstrates the technical design of the ECMO and surgical steps. This murine ECMO model will facilitate the study of pathophysiology related to ECMO (e.g., inflammation,bleeding and thromboembolic events). Due to the abundance of genetically modified mice, the molecular mechanisms involved in ECMO-related complications can also be dissected.

Here we present a protocol describing the technique of veno-venous extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This murine model of ECMO can be effectively implemented in experimental studies of acute and end-stage lung diseases.

VENO-venöse extrakorporalen Membran Sauerstoffversorgung in eine Maus

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for ...

Immunofluorescence Labelling of Human and Murine Neutrophil Extracellular Traps in Paraffin-Embedded Tissue

Neutrophil granulocytes, also called polymorphonuclear leukocytes (PMN) due to their lobulated nucleus, are the most abundant type of leukocytes. They mature in the bone marrow and are released into the peripheral blood, where they circulate for about 6&#8722;8 h; however, in tissue, they can survive for days. By diapedesis through the endothelium, they leave the blood stream, enter tissues, and migrate towards the site of an infection following chemotactic gradients.&#160;Neutrophils can combat invading microorganisms by phagocytosis,&#160;degranulation, and generation of neutrophil extracellular traps (NETs). This protocol will help to detect NETs in paraffin-embedded tissue. NETs are the result of a process called NETosis, which leads to the release of nuclear, granular, and cytoplasmic components either from living (vital NETosis) or dying (suicidal NETosis) neutrophils. In vitro, NETs form cloud-like structures, which occupy a space several times larger than that of the cells from which they descended. The backbone of NETs is chromatin, to which a selection of proteins and peptides originating from granules and cytoplasm are bound. Thereby, a high local concentration of toxic compounds is maintained so that NETs can capture and inactivate a variety of pathogens including bacteria, fungi, viruses, and parasites, while diffusion of the highly active NET components leading to damage in neighboring tissue is limited. Nevertheless, in recent years it has become apparent that NETs, if generated in abundance or cleared insufficiently, do have pathological potential ranging from autoimmune diseases to cancer. Thus, detection of NETs in tissue samples may have diagnostic significance, and the detection of NETs in diseased tissue can influence the treatment of patients. Since paraffin-embedded tissue samples are the standard specimen used for pathological analysis, it was sought to establish a protocol for fluorescent staining of NET components in paraffin-embedded tissue using commercially available antibodies.

Neutrophil extracellular traps (NETs) are three-dimensional structures generated by stimulated neutrophil granulocytes. It has become clear in recent years that NETs are involved in a wide variety of diseases. Detection of NETs in tissue may have diagnostic relevance, so standardized protocols for labelling NET components are required.

Immunfluoreszenz-Kennzeichnung von humanen und murinen neutrophilen extrazellulären Fallen in Paraffin-Embedded Tissue

Neutrophil granulocytes, also called polymorphonuclear leukocytes (PMN) due to their lobulated nucleus, are the most abundant type of leukocytes. They ...

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for islet transplantation in rodent models. However, the tight kidney capsule limits the transplantation of sufficient islets in large animals and humans. The inguinal subcutaneous white adipose tissue (ISWAT), a new subcutaneous space, was found to be a potentially valuable site for islet transplantation. This site has better blood supply than other subcutaneous spaces. Moreover, the ISWAT accommodates a larger islet mass than the kidney capsule, and transplantation into it is simple. This manuscript describes the procedure of mouse islet isolation and transplantation in the ISWAT site of syngeneic diabetic mouse recipients. Using this protocol, murine pancreatic islets were isolated by standard collagenase digestion and a basement membrane matrix hydrogel was used for fixing the purified islets in the ISWAT site. The blood glucose levels of the recipient mice were monitored for more than 100 days. Islet grafts were retrieved at day 100 after transplantation for histological analysis. The protocol for islet transplantation in the ISWAT site described in this manuscript is simple and effective.

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

In this protocol, a method of murine islet isolation and transplantation into the inguinal subcutaneous white adipose tissue is described. Isolated syngeneic murine islets are transplanted into a murine recipient using a basement membrane hydrogel. The blood glucose level of the recipients is monitored, and histology analysis of the islet grafts is performed.

Leisten-Subkutanes weißes Adiposeengewebe (ISWAT) Transplantationsmodell von Murine-Inseln

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...