ברצוננו להודות לאלכס Hitchen ומג בות &#39;לעזרתם עם ניסויי ההזדווגות. עבודה זו נתמכה על ידי NE מענק NERC / H015604 / 1 לTP.

1. הכנת Fly מזון עם צבעי מאכל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח בקבוקון תסיסנית סטנדרטי עם כ 20 מיליליטר של מזון בתחתית (איור 1). השתמש במתכון לתערובת מזון באמצעות 1 ליטר של מים רותחים הבא: 10 גרם של אגר, 85 גרם של דקסטרוז, 60 גרם קמח תירס, 40 גרם של שמרים, ומערבבים במשך 5 דקות של מבעבע. להוסיף 25 מיליליטר של nipagen 10% פעם אחת את התערובת מתקררת ל -75 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי האוכל התקרר והתמצק להוסיף שתי טיפות (כ 0.5-1 מיליליטר) של צבע מאכל הכחול לחלק העליון של המזון ומשתרע על פני השטח של הבקבוקון השלם (איור 1). השתמש בצבע בצבע שונה, אם העדיף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאר את המזון ליומיים במקרר, כך שהצבע נספג על ידי השכבה העליונה של מזון; זה ימנע לחות מוגזמת פוגעת בזבובים בתקופת ההתבגרות. להוסיף חתיכה קטנה של נייר טישו אם לחות מוגזמת היא עדיין בעיה למחוק את לחות נוספת ולאחר מכן בהמשךהסר זאת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת זבובים על המזון בנפרד או בקבוצות. הערה: זבובים ירוויחו צביעת מעיים בתוך היום 1 של שיוצב על המזון. לחלופין, יבשיל באופן מלא זבובים על המזון הצבוע לפני הניסוי (התמותה המוגברת בתקופת ההתבגרות לא נצפתה מחשיפה לצבע מאכל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק שהזבובים צבועים ניתן להבחין בקלות מהזבובים שאינם צבועים. אם הם לא יכולים להבחין, חזור על שלבים 1.1-1.4 או באמצעות ריכוז גבוה יותר של צבע, או צבע שונה. </li></ol> 2. שני ניסויים הזדווגות זכר שימוש מזון צביעה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייצור צאצאים, הקים בקבוקונים המכילים מספר רב של זוגות של זבובים נשיים וגבריים (קבוצות קטנות של זכרים ונקבות גם מתאימים, למרות לטפל כדי למנוע צפיפות של זחלים). לאפשר לנקבות להטיל ביצים ולהעביר את הזבובים לבקבוקונים חדשים בכל 5-7 ימים. בקבוקוני חנות בטמפרטורה מתאימה למינים של עניין (ו C 22 °או ד פסאודו וד &#39; subobscura ו -25 מעלות צלזיוס למשך ד melanogaster). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני זבובים ניסיוניים איסוף להסיר את כל הזבובים מבקבוקוני האיסוף בשעה קבועה לפני איסוף זכרים ונקבות כדי להבטיח שהם יהיו בתולות (ד melanogaster - 6 שעות של 25 מעלות צלזיוס, ד &#39;פסאודו - 18 שעות על 22 מעלות צלזיוס, ו subobscura ד - 24 שעות על 22 מעלות צלזיוס). הערה: אם זבובים אינם בתולת הטיה רצון זה ההתנהגות שלהם בניסויי הזדווגות 15. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות וגברים בוגרים בנפרד ב -75 x 20 בקבוקוני פלסטיק מ&quot;מ סטנדרטיים (המכיל ~ 20 מיליליטר של מזון). זה ימנע את ההשפעות השליליות על גברים התנהגות הזדווגות וכושר ראה במינים מסוימים, כאשר זכרים נשמרים בקבוצות 16. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף מחצית מהזכרים לטיפול הרצוי (CO 2 הרדמה במקרה זה). השתמש במזרן CO 2 או הקש כדי לחשוף את הזבובים לזמן הנדרש. מחצית חנות של males בכל טיפול במזון צבעוני עד ההזדווגות מתרחש. זה יגרום להם מבחינה ויזואלית להבחין במהלך ניסויי ההזדווגות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעברת זבובים להשתמש aspirator 17. לייבל כל בקבוקון לזהות שני טיפול ומצב הצבע של הזכר. כאן, להשתמש בארבעה טיפולים (הרדמה, שאינו בצבע = G-NC, הרדמה, = GC צבעוני, ללא הרדמה, ללא צבע, NG-NC, ולא הרדמה,, NG-C בצבע). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הנקבות יצאו זה עתה לתוך צלוחיות מזון טריות להתבגר כקבוצות של 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר זבובים בוגרים לגיל ההזדווגות (ד melanogaster - 3 ימים, ד &#39;פסאודו - 5 ימים, subobscura ד - 7 ימים 18 חנות זבובים בטמפרטורה מתאימה למינים הנחקרים (למשל, 22 מעלות צלזיוס במשך D. . פסאודו וsubobscura ד ו -25 מעלות צלזיוס במשך ד melanogaster). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז נקבות לבקבוקונים בודדים (המשךaining ~ 20 מיליליטר של מזון) יום 1 לפני משפט ההזדווגות להתאקלמות לבקבוקון ההזדווגות. תווית בקבוקונים אלה, כך שיכולים להיות מובחנים בקבוקונים. להיות זהיר כדי לעוור את הניסוי באמצעות תיוג ניטראלי (כלומר, 1 - 150), כך שהוא לא ניתן לנחש את זהותו של זבובים בכל בקבוקון. הערה: האדם שמציב את הזבובים לכל בקבוקון יצטרך לדעת את זהותו של הזבובים להציב בכל בקבוקון כפי שהם לב שהטיפול היה מוכתם. עם זאת, צופה מתבונן ההזדווגות לא צריך לדעת את זהותם. כדי לעשות יהיו צורך בלפחות שני הנסיינים זה, אחד להתקנה ולאחת להתבונן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתחיל ניסויי ההזדווגות בין 10 - 12 בבוקר, או בכל פעם שעולה בקנה אחד עם האור שנכנס במחזור האור / חושך הזבובים נחשפים ל( &quot;שחר&quot; לזבובים). הוסף שני זבובים ממין זכר לכל בקבוקון הזדווגות (המכיל נקבת זבוב אחד) באמצעות aspirator. ודא ששני זכרים מטיפולים שונים (הרדמה אושליטה) וכי יש כתמי מעיים כדי לעשות את זה אפשרי כדי להבדיל אותם מאחד לשני, ושים לב שגברים מוכתם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הזדווגות מתרחשת, להקליט את מעמדם של הגברים שבני זוג (או בצבע או לא - בצבע). אם הניסויים האחרונים עבור שעה 2, להניח הנקבה לא תתחבר. הערה: 2 שעות מתאימה למינים אלה, אבל תסיסנית אחרת עשויה להזדקק ליותר או פחות זמן. </li></ol> 3. ניסויים הזדווגות רווק בן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניסויים זכר אחד, לחזור על פרוטוקול 2 עם שני שינויים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב 2.3 לא שומר זכרים על מזון צבעוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב 2.7, להוסיף רק זכר אחד לכל בקבוקון. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב 2.8, להקליט את הזמן לטוס מתווסף לבקבוקון, הזמן צריכים להיות מוקלט מתחילה ההזדווגות וזמן ההזדווגות סיימה. מהערכים אלה, לחשב הזדווגות הצלחה, חביון, ומשך. </li></ol> ניתוח נתונים 4. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בחבילת סטטיסטיקה מתאימה לanaתמוגה. אם הנתונים הם נורמלים ויש רק שני טיפולים, להשתמש במבחני t או לינארי דגם מקביל כללי (GLM). לשני ניסויים גבריים, להשתמש בבדיקות הבינומי או GLM הבינומי שזמינים בכל חבילת סטטיסטיקה בסיסית. הערה: נתוני הדוגמא, כל הניתוחים בוצעו בגרסת 3.0.3 R 19. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את נתוני חביון ההזדווגות ומשך הזדווגות לנורמליות, על ידי התוויית היסטוגרמות תדירות ומשך השהיה עבור כל טיפול 20, ושימוש במבחן לנורמליות כמו שפירו-וילק. אם זה לא נורמלי, להפוך אותו, או להשתמש בנתונים סטטיסטיים שווה ערך שאינו פרמטרית 20. הערה: נתוני דוגמא מהניסויים זכר יחידים לכניסת שינוי עמד בדרישות של נורמליות וסטיות שווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הנתונים יכולים להיות מנורמלים, מבחני t שימוש לבחון הבדלים בין חביון ההזדווגות ומשך בניסויי הזדווגות זכר היחיד בעת שימוש בשני טיפולים 21. אם טיפולים מרובים משמשים,לנסות ניתוח שונה (ANOVA) 20. אם לא ניתן מנורמלים נתונים, נסה בדיקות הלא פרמטרית שווה 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בדיקות הבינומי לבדיקת השפעה של שני צבעי מאכל או 2 הרדמה CO בהצלחת ההזדווגות של זכרים מתחרים 20. אם טיפולים מרובים משמשים, כמו במקרה עם נתוני הדוגמא, השתמש GLM עם מבנה שגיאה הבינומי 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשני ניסויים גבריים בנתונים הדוגמא, השתמש GLMs עם מבני שגיאה הבינומי. אחד GLM בחן צבע כמשתנה תגובה (בצבע = 0 ולא בצבע = 1) עם מינים, מעמד גז, וטיפול בגז מצויד כvariables.One GLM הסבר בחן CO 2 כמשתנה תגובה (גז = 0 ולא הומתו בגז- = 1) עם מינים, מעמד צבע, וטיפול בגז מצויד. בכל מקרה, לייצר המודל המקסימאלי, ולבצע פישוט מודל המבוסס על AIC 20. </li></ol>

<ol>
	<li>Parker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+competition+and+its+consequences+in+insects.">Sperm competition and its consequences in insects.</a> Biological Reviews. 45, 525-567 (1970).</li><li>Hosken, D. J., Stockley, P., Tregenza, T., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monogamy+and+the+battle+of+the+sexes.">Monogamy and the battle of the sexes.</a> Annual Review of Entomology. 54, 361-378 (2009).</li><li>Chapman, T., Liddle, L., John, K., Wolfner, M., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+cost+of+mating+caused+by+males+accessory+gland+fluids.">Female cost of mating caused by males accessory gland fluids.</a> Nature. 373, 241-244 (1995).</li><li>Avent, T. D., Price, T. A. R., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-based+female+preference+in+the+fruit+fly+Drosophila+pseudoobscura.">Age-based female preference in the fruit fly Drosophila pseudoobscura.</a> Animal Behaviour. 75, 1413-1421 (2008).</li><li>Barron, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthetising+Drosophila.+for+behavioural+studies.">Anaesthetising Drosophila. for behavioural studies.</a> Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).</li><li>Moeers, A. O., Rundle, H. D., Whitlock, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+selection+and+bottlenecks+on+male+mating+success+in+peripheral+isolates.">The effects of selection and bottlenecks on male mating success in peripheral isolates.</a> The American Naturalist. 153, 437-444 (1999).</li><li>Ashburner, M., Thompson, J. N., Ashburner, M., Wright, T. R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+laboratory+culture+of+Drosophila.">The laboratory culture of Drosophila.</a> The Genetics and Biology of Drosophila. 2a, 1-109 (1978).</li><li>Powell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Progress and Prospects in Evolutionary Biology: The Drosophila Model. , (1997).</li><li>Moore, A. J., Moore, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balancing+sexual+selection+through+opposing+mate+choice+and+male+competition.">Balancing sexual selection through opposing mate choice and male competition.</a> Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 266, 711-716 (1999).</li><li>Hollocher, H., Ting, C., Pollack, F., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incipient+speciation+by+sexual+isolation+in+Drosophila+melanogaster.:+Variation+in+Mating+preference+and+Correlation+between+sexes.">Incipient speciation by sexual isolation in Drosophila melanogaster.: Variation in Mating preference and Correlation between sexes.</a> Evolution. 51, 1175-1181 (1997).</li><li>Perron, J. M., Huot, L., Corrivault, G. W., Chawla, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+carbon+dioxide+anaesthesia+on+Drosophila+melanogaster.">Effects of carbon dioxide anaesthesia on Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 18, 1869-1874 (1972).</li><li>Wu, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+isolation+in+Drosophila+melanogaster+:+A+possible+case+of+incipient+speciation.">Sexual isolation in Drosophila melanogaster : A possible case of incipient speciation.</a> Proceedings of the National academy of sciences. 92, 2519-2523 (1995).</li><li>Melcher, C., Pankratz, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candidate+gustatory+interneurons+modulating+feeding+behaviour+in+the+Drosophila+brain.">Candidate gustatory interneurons modulating feeding behaviour in the Drosophila brain.</a> PLoS Biology. 3, e305 (2005).</li><li>Kalaw, V., Drapeau, M. D., Long, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+food+coloring+on+longevity+and+viability+of+Drosophila+melanogaster.">Effects of food coloring on longevity and viability of Drosophila melanogaster.</a> Dros. Inf. Serv. 85, 128-129 (2002).</li><li>Friberg, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+perception+of+female+mating+status:+its+effect+on+copulation+duration,+sperm+defence+and+female+fitness.">Male perception of female mating status: its effect on copulation duration, sperm defence and female fitness.</a> Animal Behaviour. 72, 1259-1268 (2006).</li><li>Liz&#233;, A., Price, T. A. R., Heys, C., Lewis, Z., Hurst, G. D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extreme+cost+of+rivalry+in+a+monandrous+species+male+&#8722;+male+interactions+result+in+failure+to+acquire+mates+and+reduced+longevity.">Extreme cost of rivalry in a monandrous species male &#8722; male interactions result in failure to acquire mates and reduced longevity.</a> Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 281, 20140631 (2014).</li><li>Yeh, S. -. D., Chan, C., Ranz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+differences+in+sperm+competitive+ability+in+Drosophila.">Assessing differences in sperm competitive ability in Drosophila.</a> Journal of Visualized Experiments. (78), e50547 (2013).</li><li>Holman, L., Freckleton, R. P., Snook, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+use+is+an+infertile+sperm?+A+comparative+study+of+sperm-heteromorphic+Drosophila.">What use is an infertile sperm? A comparative study of sperm-heteromorphic Drosophila.</a> Evolution. 62, 374-385 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> R: A Language and Environment for Statistical Computing. , (2011).</li><li>Crawley, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Statistics: An introduction using R. , (2005).</li><li>Dytham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Choosing and Using Statistics: A Biologist's Guide. , (2010).</li><li>Kaiser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+anaesthesia+by+carbon+dioxide+on+hatching+time+and+weight+at+eclosion+in+Drosophila+melanogaster.">Influence of anaesthesia by carbon dioxide on hatching time and weight at eclosion in Drosophila melanogaster.</a> Drosophila Information Service. 76, 92-93 (1995).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila.+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila. PGC-1 homolog.</a> Cell Metabolism. 14, 623-634 (2011).</li><li>Crumpacker, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+micronized+fluorescent+dusts+to+mark+adult+Drosophila+pseudoobscura.">The use of micronized fluorescent dusts to mark adult Drosophila pseudoobscura.</a> American Midland Naturalist. 91, 118-129 (1974).</li><li>Jallon, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+few+chemical+words+exchanged+by+Drosophila+during+courtship+and+mating.">A few chemical words exchanged by Drosophila during courtship and mating.</a> Behaviour genetics. 14, 441-478 (1984).</li><li>Liimatainen, J. O., Jallon, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+cuticular+hydrocarbons+and+their+effect+on+courtship+in+Drosophila+virilis+and+D.+lummei.">Genetic analysis of cuticular hydrocarbons and their effect on courtship in Drosophila virilis and D. lummei.</a> Behaviour Genetics. 37, 713-725 (2007).</li></ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

הנתונים אלה מראה כי ההשפעה של ההרדמה CO 2 אינה עולה בקנה בין מינים, עם שניים משלושה מינים מראים השפעה מועטת. התוצאות שלנו מראות תיוג עם צבע מזון הייתה השפעה נמוכה יותר על הצלחת הזדווגות זכר מאשר CO 2 הרדמה לד melanogaster. ניסויים אלה מראים כי צבעים מאכל יכול בקלות ובזול לשמש לזבובי תווית עבור מבחני הזדווגות מעורבים זכרים מרובים. של מיני תסיסנית שלושה מודל נבחן, רק ד &#39; melanogaster הראה השפעה של CO 2 הרדמה על ביצועי הזדווגות במצב תחרותי. בניגוד לכך, אף אחד מהמינים הראה השפעה של אוסף על גז בניסויי הזדווגות אחת במונחים של זמן אחזור הזדווגות, בניגוד לתוצאות קודמות לד melanogaster 5. ההשפעה של תחרות ולכן יכולה להיות הדגשת השפעות עדינות יותר כושר של הרדמה CO 2, שהם רק לזיהויתחת מצבים שבם יש תחרות גברית-גברית. חשיפה באוסף מוקדם ויום אחד לפני המשפט יש לו השפעה שלילית על היכולת של גברים של ד &#39; melanogaster כדי לקבל הזדווגות. חשיפה יומיים לפני המשפט זאת לא הראתה כל השפעה. שני ד פסאודו וד &#39; subobscura לא הראה שום השפעה של חשיפה לגז בכל אחד מהניסויים. הסבר אחד הוא שד melanogaster היה פגיע לחשיפה המוקדמת לCO 2 כי זה חייב להיות שנאסף מוקדם יותר בחיים (0-6 שעות ישנות) מאשר המינים האחרים על מנת להבטיח זכרים בתולה. ד כאן גברי melanogaster בגיל זה עלול להיות רגיש יותר כמו הציפורן של הזבוב עדיין התקשות, בהשוואה למינים האחרים שיש לו יותר לציפורן שלהם להקשיח. באופן כללי, זה תומך ברעיון כי ההשפעות של CO 2 הרדמה הן מינים ספציפיים וחוקרים צריכים הולם לבחון את ההשפעה של מיני היעד שלהם. Currently, רוב העבודה על ההשפעה של CO 2 הרדמה בוצע על melanogaster תסיסנית 5,11,22 ולכן לא יכול להיות מתאים לפנות למינים קרובים אחרים. השיטה לא פולשנית החלופית שהוצגה כדי לבדל את הזבובים היא צבע מזון. תוצאות מצביעות על עבר את הטיפול הזה אין כל השפעה בכל המינים שנבדקו. עם זאת, בעוד שהשימוש בו היה מוצלח במתן סמן זול וגלוי בקלות להבחנה בין יחידים יש לציין שהצבע היה קל יותר להבחין בד פסאודו וד &#39; subobscura מאשר בד המחברים melanogaster. קודמים השתמשו בכמה צבעים (אדום, ירוק וכחול) 4,6. מצאנו צביעה כחולה להיות הקל ביותר להבחין בכל המינים, במיוחד ד פסאודו וד &#39; subobscura. שימוש במספר צבעים שעלולים היה לאפשר ניסויים מורכבים יותר עם לנשור רבים מסומן בנפרדs. עם זאת, בדיקות ראשוניות של צבעים שונים הן חיוניות, כמו כמה צבעים מאכל לא מצליחים לצבוע את הזבובים, אולי מתעכלים כאשר הוא נצרך. צבעים אחרים יכולים להיות השפעה רעילה ולהפחית הישרדות של הזבובים, ויש להימנע 14). שיטות צביעת מזון חלופיות באמצעות כתמים יקרים יותר יש גם שימשו לבחינת שלמות מעיים לד melanogaster 23. אלה עשויים לספק חלופה, אם כי יקרים יותר, שיטת צביעת 23. שיטת הצבע היא מהירה כמו CO 2 גזיר אגף כפי שניתן לאחסן זבובים על מזון צבוע מאוסף. הספיגה של המזון הייתה מהירה (~ 3 שעות), כך O האחסון / N על מזון צבעוני יהיה גם מספיק כדי לסמן זבובים, המשמש במחקרים אחרים 6. עם זאת, משך הזמן של הצביעה הוא קצר יחסית (~ 4 - 5 שעות) בהשוואה לחיתוך כנף (קבוע) או אבק ניאון לציון (10 - 12 ימים) 24. כמיני דרוזופילהלהשתנות במראה, צבעים שונים יהיו פחות או יותר יעיל למינים שונים, וכפי שכמה זנים (למשל, מוטציות נוק-אאוט) יכולות להיות חשופות לשינויים בדיאטה, כל שימוש בצבע דורש בדיקה ראשונית של האפקטיביות שלה במיוחד אם כבר חשיפה ארוכת לצבעים יכולה להיות רעילה 14. בניגוד למחקר של Kalaw et al. 14, לא מצאנו תמותה משמעותית לאחר האחסון במשך ימים רבים על מזונות צבעוניים לד melanogaster (3 ימים), ד &#39; פסאודו (5 ימים), או ד &#39; subobscura (7 ימים), ככל הנראה בשל ההבדל בצבע משמש. השלב הקריטי לשימוש מוצלח של טכניקת הצבע הוא צעד 1.5, אימות שהצבע שנבחר עובד היטב עם המינים ומתח בשימוש. טכניקה חלופית כרוכה החלת אבק בצבע לצד החיצוני של הזבוב לפני השימוש בניסויי שדה 24. שיטה זו נעשתה שימוש למעקב אחר אנשים בt בשל השדהo משך סימון והקלות המונית לציון טס 24. למרות שיש לנו באופן מפורש שנבדקו בשיטה זו בניסויי הזדווגות, זה יהיה חשוב לבחון תופעות שיכול להיות לי אבק על החושים החשובים בהזדווגות, במיוחד ב -25 דרוזופילה, 26. במינים, לעומת זאת, שבו צביעת מעיים אינה אפשרית, שיטות אלה יכולים להיות מתאימות. לסיכום מצאנו כי בשתיים משלושת המינים שנבדקו (ד &#39;פסאודו-וsubobscura ד) לא הייתה השפעה של כל אחד מצאה CO 2 הרדמה או צבעי מאכל על יכולת הזדווגות של זכרים. לד melanogaster השפעה שלילית של CO 2 הרדמה זוהתה, אך צבעי מאכל לא השפיעו על הזדווגות הצלחה במין זה. בסך הכל, בשיטת הצבע מספקת שיטה לא פולשנית פשוטה וזולה לזיהוי תסיסנית פרט שהוא שווה ערך או טוב יותר מאשר שיטות שדורשות CO 2 הרדמה. זהסביר להניח בשיטה זו תעבוד על פני מגוון של מינים.

בעשרות השנים האחרונות יש כבר עניין גובר באופן מיני בחירה ותחרות בין הזכרים השפעה על האבולוציה 1,2. ניסויים בהתנהגות חיזור שיחקו תפקיד חשוב בפיתוח ובדיקת תאוריות של ברירה מינית 3,4. במינים של סוג מסוימים דרוזופילה, מחקר באמצעות, תרם רב להבנה של בחירה והתנהגות מיניות. עם זאת, חשוב לבדוק האם טכניקות נפוצות עשויות באופן מלאכותי להטות את התוצאות של ניסויי הזדווגות סטנדרטיים 5,6. אלחוש משמש לעתים קרובות לטיפול וזיהוי בניסויים 7. לדוגמא, זבובים נאספים בדרך כלל לפני ההזדווגות, או מיון לגנוטיפים או טיפולים ניסיוניים באמצעות פחמן דו חמצני הרדמה (CO 2). בניסויים שבם שני אנשים או יותר צריכים להיות מכובדים, הוא מנהג נפוץ לְאַלחֵשׁ flies וחלק קליפ של האגף מעל לזהות כל קבוצה בודדת או טיפול 5,8. זה חיוני, עם זאת, כדי להבין כיצד CO 2 ישפיע טיפול על התנהגות. ההשפעה של CO 2 הרדמה נבדקה בדרוזופילה melanogaster שבן גברים נחשף ל- CO 2 לקחו באופן משמעותי יותר להזדווג וכולל הייתה הצלחת הזדווגות נמוכה מזכרים או זכרים-מורדם אינם מורדמים באמצעות חשיפה ל5 קרים. השפעה זו נצפתה גם כאשר ההרדמה יושמה ביום של הניסוי וכאשר זבובים קיבלו יום אחד להתאושש. עם זאת, מחקר זה היה מוגבל בניסויי בחינה היחידה שבו זכר יחיד שהוצג לכל נקבה 5. תרחיש מציאותי יותר הוא לנקבה להיתקל זכרים מרובים 9,10, המאפשרת תחרות בין זכרים, שעשוי לאפשר זיהוי של הפסדים עדינים יותר של כושר גברי עקב הרדמה. השימוש בהרדמת CO 2 גם להיותen נמצא להפחית פוריות ואריכות ימיו של ד &#39;למבוגרים melanogaster כאשר הם נחשפים זמן קצר לאחר eclosion, כמקובל בעת איסוף בתולה טס 11. חלופה ל- CO 2 הרדמה היא לסמן זבובים על ידי האכלה להם אוכל בצבע עם צבע 4,6,10,12,13. צבע זה נכנס למעיים של הזבוב וגלוי דרך הבטן, המאפשר זבובים צבעוניים כדי להבחין בין זבובים צבועים, או מזבובים שכותרתו עם צבע שונה. שיטות שונות בכיצד ניתן ליישם את זה: להתווסף ישירות למזון 12, באמצעות שמרים משלימים להדביק צבוע 6, או באמצעות חשיפה לרומן צבוע מצע מזון 13. טכניקות לציון אלה מופיעים להראות שום השפעה על ביצועי 4,6 הזדווגות. עם זאת, נייר ישירות בוחן את ההשלכות של אותו צבע מאכל על מבוגר ד melanogaster מצא הפחתה משמעותית בתוחלת חיים 14. העבודה קודמת התמקדה גם ALMost כולו על ד &#39; melanogaster, הן בנוגע להשפעות של CO 2 הרדמה 5,11 וצבע מאכל 14 שיטות. נכון לעכשיו, יש מעט מידע על איך CO 2 הרדמה או השימוש בצביעת מעיים משפיעה על התנהגות החיזור של דרוזופילה אחרת. המחקר הבא מעריך את ההשפעה של CO 2 הרדמה על התנהגות החיזור של שלושה מינים של דרוזופילה (melanogaster ד, ד &#39;פסאודו, וsubobscura ד). ההשפעה של איסוף זבובים על CO 2 נבדקה בשני שני ניסויי הזדווגות זכר אחד ו. ההשפעה של CO 2 נמצאה גם לגוון בד melanogaster 5 ותקופות זמן אחזור כל כך שונות בין החשיפה ל- CO 2 והזדווגות נבדקו. אלטרנטיבה לציון שיטה לגזיר הרדמה ואגף: השימוש בצבעי מזון להכתים את הזבובים גם העריכו.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Plastic tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>TWT-200-061G</td>
			<td>Other tubing may be suitable however it must fit within a 1ml pipette tip.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine mesh</td>
			<td>Any haberdashery</td>
			<td>-</td>
			<td>Fine curtain mesh is suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml pipette tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83007-376</td>
			<td>Various brands of pipette tips would be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Vials</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>58.49</td>
			<td>Larger vials or bottles could also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Balls</td>
			<td>Lewis Medical Solutions</td>
			<td>28170</td>
			<td>The size of cotton will vary depending on the size of vials used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue Food colouring</td>
			<td>Thesugarcraftcompany</td>
			<td>-</td>
			<td>Other dye colours and brands can have variable results.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Tank</td>
			<td>BOC</td>
			<td>BOC 40VK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharpie Markers</td>
			<td>Steadtler</td>
			<td>Lumocolor 313 S</td>
			<td>Various colours can be used, but Lumocolor S give an excellent combination of durability and fineness</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Salter</td>
			<td>SL3920</td>
			<td>Any stopwatch with a good digital display would be fine</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dyeing insects for behavioral assays: the mating behavior of anesthetized drosophila

ניסויי הזדווגות באמצעות תסיסנית תרמו רב להבנה של בחירה והתנהגות מיניות. ניסויים לעתים קרובות דורשים שיטות פשוטות, קלה וזולה להבחין בין פרטים במשפט. טכניקה סטנדרטית לכך היא CO 2 הרדמה ולאחר מכן תיוג או אגף גזיר כל זבוב. עם זאת, זה פולשני והוכח משפיע על התנהגות. טכניקות אחרות השתמשו בצבע לזהות זבובים. מאמר זה מציג שיטה פשוטה ולא פולשנית לתיוג תסיסנית המאפשרת להם להיות מזוהים בנפרד בתוך ניסויים, באמצעות צבע מאכל. שיטה זו משמשת בניסויים שבו שני גברים להתחרות להזדווג עם נקבה. צביעה אפשרה זיהוי מהיר וקל. היה, עם זאת, כמה הבדל בכוחו של הצבע על פני שלושת המינים שנבדקו. הנתונים מוצגים מראים את הצבע יש השפעה נמוכה יותר על התנהגות חיזור מאשר CO 2 בmelano דרוזופילהגסטר. ההשפעה של ההרדמה CO 2 מוצגת לסמוך על המינים של דרוזופילה, עם ד &#39; פסאודו וד &#39; subobscura מראה שום השפעה, ואילו ד הזכרים melanogaster הפחיתו הצלחת הזדווגות. שיטת הצבע המוצגת הינה ישימה למגוון רחב של עיצובים ניסיוניים.

שני ניסויי הזדווגות זכר - ההשפעה של CO 2 הרדמה על התנהגות חיזור המודל הטוב ביותר מצא להסביר את השונות בהשפעה של CO 2 הרדמה הכיל מינים כגורם (עם ד &#39;פסאודו-וsubobscura ד התמזגו כפי שהם לא הראו הבדלים בין אחד לשנייה). בד פסאודו וד &#39; subobscura לא הייתה השפעה משמעותית של CO 2 הרדמה על הצלחה בשני ניסויי הזדווגות זכר (Z = 1,589 0.087, P = .931). לד melanogaster, גברים נחשפו ל- CO 2 הרדמה היו הצלחה נמוכה באופן משמעותי הזדווגות (Z1,589 = 2.467, P = 0.014). הייתה שם גם אינטראקציה מובהקת בין מינים וטיפול (χ 2 1,589 = 6.83, P = 0.009) עם השפעה גדולה יותר שיראו כאשר ד melanogaster נחשף לגז באוסף או יום 1 לפני ניסויים (טבלת 1). Howevאה, ד &#39; זכרים melanogaster נחשפו ל- CO 2 יומיים לפני המשפט הניסיוני לא הראה השפעה של CO 2. שני ניסויי הזדווגות זכר - האפקט של צביעה במעיים על התנהגות חיזור פישוט מודל לא הראה כל השפעה משמעותית של צבע מאכל שנמצאה עבור כל אחד משלושת המינים (P&gt; 0.1). כאשר טיפול או מעמד גז נכלל בניתוח אלה גם לא היו משמעותיים (P&gt; 0.1). הפרופורציות של הזדווגויות מוצלחות לזבובים בצבע על פני טיפולים מוצגות בטבלה 2. ההבדל בצבע בין הזבובים המשיך צבעוני ומזון צבוע שניתן לראות באיור 1. העצמה של צבע מאכל המעיים הייתה גדולה יותר בד פסאודו וד &#39; subobscura מאשר בד melanogaster. ניסויי הזדווגות בודדים - ההשפעה של שימוש CO 2 הרדמה על מ &#39;ating התנהגות לא היה הבדל בהשהית הזדווגות לכל אחד משלושת המינים כאשר CO 2 הרדמה שימשה לאיסוף לאחרונה יצא מבוגרים. נמצאה השפעה של משך הזדווגות בד subobscura כאשר הוא נחשף ל- CO 2 יומיים לפני ניסויי הזדווגות (איורים 2 ו -3; טבלה 2). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig1.jpg" /> צילום איור 1. מראה בקבוקים של צבע וללא צבעוני Fly מזון () והכוח של מעיים סוג צבע בזכר ד Subobscura (B). <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig2.jpg" /> רווח סמך איור 2. Mean ו -95% להזדווגות Latency למיני שלושת נחקרו בניסויי גבר רווק, כאשר הזכרים היו לטשטשד (ברים אור) או (ברים אפלים) לא מורדמים כאשר נאסף כבתולות לפני בגרות מינית. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig3.jpg" /> איור 3. Mean ורווח סמך של 95% עבור משך הזדווגות למיני שלושת נחקרו בניסויי גבר רווק, כאשר הזכרים היו מורדמים (ברים אור) או לא מורדם (ברים אפלים) כאשר נאספו כבתולות לפני בגרות מינית. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> טיפול </td><td> מינים </td><td> ניסויי מס &#39; </td><td> זבובי מס &#39;צבעוניים שהזדווגו </td><td> p-value </td><td> זבובי מס &#39;הגז שהזדווגו </td><td> p-value </td></tr><tr><td rowspan="3"> אוסף בCO 2 </td><td> ד מל </td><td> 73 </td><td> 36 </td><td> 1 </td><td> 27 </td><td> .0344 </td></tr><tr><td> PSE ד </td><td>79 </td><td> 41 </td><td> .8221 </td><td> 44 </td><td> .3682 </td></tr><tr><td> תת ד </td><td> 71 </td><td> 40 </td><td> .3425 </td><td> 33 </td><td> .6353 </td></tr><tr><td rowspan="3"> נחשף ל- CO 2 18 שעות לפני </td><td> ד מל </td><td> 57 </td><td> 28 </td><td> 1 </td><td> 19 </td><td> .0163 </td></tr><tr><td> PSE ד </td><td> 65 </td><td> 32 </td><td> 1 </td><td> 31 </td><td> .8043 </td></tr><tr><td> תת ד </td><td> 68 </td><td> 38 </td><td> .3961 </td><td> 35 </td><td> .9036 </td></tr><tr><td rowspan="3"> נחשף ל- CO 2 2days. </td><td> ד מל </td><td> 56 </td><td> 19 </td><td> .0222 </td><td> 32 </td><td> .3497 </td></tr><tr><td> PSE ד </td><td> 70 </td><td> 32 </td><td> .5504 </td><td> 33 </td><td> .7202 </td></tr><tr><td> תת ד </td><td> 56 </td><td> 29 </td><td> .8939 </td><td> 26 </td><td> .6889 &lt;/ Td&gt; </tr></tbody></table> טבלה 1. תוצאות משני ניסויי זכר בחירה בכל המינים הטיפולים ונבדקו. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מינים </td><td> תכונה </td><td> df </td><td> t-ערך </td><td> p-value </td></tr><tr><td rowspan="2"> ד melanogaster </td><td> חביון </td><td> 58 </td><td> 1.379 </td><td> 0.174 </td></tr><tr><td> משך </td><td> 58 </td><td> 1.243 </td><td> 0.221 </td></tr><tr><td rowspan="2"> ד &#39;פסאודו- </td><td> חביון </td><td> 109 </td><td> .419 </td><td> .676 </td></tr><tr><td> משך </td><td> 109 </td><td> .436 </td><td> .664 </td></tr><tr><td rowspan="2"> subobscura ד </td><td> חביון </td><td> 83 </td><td> 0.098 </td><td> .922 </td></tr><tr><td> משך </td><td> 83 </td><td> 1.767 </td><td> 0.081 </td></tr></tbody></table> טבלת 2. תוצאות מניסויים יחיד הזדווגות בוחנים את ההשפעה של האוסף בCO 2 אלחוש על Latency ההזדווגות ומשך. בדיקות בוצעו על שלושה מינים של דרוזופילה (melanogaster ד, ד &#39;פסאודו-וsubobscura ד).

Watch this Scientific Journal Video about Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila at JoVE.com

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

צביעת חרקים למבחני התנהגות: התנהגות חיזור של הרדים<em&gt; דרוזופילה</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

dyeing-insects-for-behavioral-assays-mating-behavior-anesthetized

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

9.7K Views.  University of Liverpool. This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Video: Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

Sensillum הקלטות סינגל חרקים תסיסנית melanogaster ו אנופלס gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Studying the Neural Basis of Adaptive Locomotor Behavior in Insects

Studying the neural basis of walking behavior, one often faces the problem that it is hard to separate the neuronally produced stepping output from those leg movements that result from passive forces and interactions with other legs through the common contact with the substrate. If we want to understand, which part of a given movement is produced by nervous system motor output, kinematic analysis of stepping movements, therefore, needs to be complemented with electrophysiological recordings of motor activity. The recording of neuronal or muscular activity in a behaving animal is often limited by the electrophysiological equipment which can constrain the animal in its ability to move with as many degrees of freedom as possible. This can either be avoided by using implantable electrodes and then having the animal move on a long tether (i.e. Clarac et al., 1987; Duch &amp; Pfl&uuml;ger, 1995; B&ouml;hm et al., 1997; Gruhn &amp; Rathmayer, 2002) or by transmitting the data using telemetric devices (Kutsch et al, 1993; Fischer et al., 1996; Tsuchida et al. 2004; Hama et al., 2007; Wang et al., 2008). Both of these elegant methods, which are successfully used in larger arthropods, often prove difficult to apply in smaller walking insects which either easily get entangled in the long tether or are hindered by the weight of the telemetric device and its batteries. In addition, in all these cases, it is still impossible to distinguish between the purely neuronal basis of locomotion and the effects exerted by mechanical coupling between the walking legs through the substrate. One solution for this problem is to conduct the experiments in a tethered animal that is free to walk in place and that is locally suspended, for example over a slippery surface, which effectively removes most ground contact mechanics. This has been used to study escape responses (Camhi and Nolen, 1981; Camhi and Levy, 1988), turning (Tryba and Ritzman, 2000a,b; Gruhn et al., 2009a), backward walking (Graham and Epstein, 1985) or changes in velocity (Gruhn et al., 2009b) and it allows the experimenter easily to combine intra- and extracellular physiology with kinematic analyses (Gruhn et al., 2006).
We use a slippery surface setup to investigate the timing of leg muscles in the behaving stick insect with respect to touch-down and lift-off under different behavioral paradigms such as straight forward and curved walking in intact and reduced preparations.

We describe a method to record motor activity, timed to the electrically recorded tarsal contact signal in a tethered insect, walking on a slippery surface. This is used to study the neural basis of adaptive behavior under reduced influence of mechanical interaction between legs through the substrate.

ללמוד את הבסיס העצבי של התנהגות מסתגלת של תנועה בתוך חרקים

Studying the neural basis of walking behavior, one often faces the problem that it is hard to separate the neuronally produced stepping output from those ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב<em&gt; דרוזופילה</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution has been a long sought tool for neuroscientists in the systems-level search for the neural circuitry governing complex behavioral states. Optogenetics is a cutting-edge tool that is revolutionizing the field of neuroscience and represents one of the first systematic approaches to enable causal testing regarding the relation between neural signaling events and behavior. By combining optical and genetic approaches, neural signaling can be bi-directionally controlled through expression of light-sensitive ion channels (opsins) in mammalian cells. The current protocol describes delivery of specific wavelengths of light to opsin-expressing cells in deep brain structures of awake, freely-moving rodents for neural circuit modulation. Theoretical principles of light transmission as an experimental consideration are discussed in the context of performing in vivo optogenetic stimulation. The protocol details the design and construction of both simple and complex laser configurations and describes tethering strategies to permit simultaneous stimulation of multiple animals for high-throughput behavioral testing.

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

Optogenetics has become a powerful tool for use in behavioral neuroscience experiments. This protocol offers a step-by-step guide to the design and set-up of laser systems, and provides a full protocol for carrying out multiple and simultaneous in vivo optogenetic stimulations compatible with most rodent behavioral testing paradigms.

בoptogenetic גירוי vivo של מערכת העצבים המרכזית מכרסם

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To complicate matters even further, the odors detected by the insect nervous system usually are not single compounds but mixtures whose composition and concentration ratios vary. This leads to an almost infinite amount of different olfactory stimuli which have to be evaluated by the nervous system.
To understand which aspects of an odor stimulus determine its evaluation by the fly, it is therefore desirable to efficiently examine odor-guided behavior towards many odorants and odor mixtures. To directly correlate behavior to neuronal activity, behavior should be quantified in a comparable time frame and under identical stimulus conditions as in neurophysiological experiments. However, many currently used olfactory bioassays in Drosophila neuroethology are rather specialized either towards efficiency or towards resolution.
Flywalk, an automated odor delivery and tracking system, bridges the gap between efficiency and resolution. It allows the determination of exactly when an odor packet stimulated a freely walking fly, and to determine the animal&#180;s dynamic behavioral reaction.

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

The automated tracking system Flywalk is used for high-resolution quantification of odor-guided behavior in Drosophila melanogaster.

כימות ברזולוציה גבוהה של התנהגות מודרכת ריח<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt; שימוש ב<em&gt; Flywalk</em&gt; פרדיגמה

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

התנהגות Assay עבור Mechanosensation של MARCM מבוסס משובט ב<em&gt; תסיסנית melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their worlds when trying to understand their behavior and ecology. Sensitivity to the ultraviolet spectrum (UV; 300 - 400 nm) is found across multiple genera of birds, fish, reptiles, amphibians, and even mammals. This protocol describes a technique for examining organisms for the presence of UV-reflecting structures and a method for testing whether these cues are used as social signals in the context of mate choice. A spectrophotometer is used to detect the presence of UV reflectance and variation in reflective intensity between individuals and sexes. An example of this technique is presented in which a dichotomous mate choice test exposes sexually receptive individuals to opposite sex individuals whose visual appearance can be manipulated by filters that either transmit full spectrum or block UV wavelengths. This system allowed for the determination that female, but not male, sailfin mollies (Poecilia latipinna) were using UV markings as part of their mating decisions. These types of studies serve to expand our knowledge of the range of organisms that utilize UV and provide insight into how UV plays a role in their lives.

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

This protocol outlines the use of spectrophotometry to detect ultraviolet-reflecting structures on organisms (in this example, the sailfin molly Poecilia latipinna) and describes dichotomous choice tests for fish that allow inferences to be made on the role of ultraviolet cues during mate selection.

מבחנים כדי זיהוי מבנים המשקף-UV ו לקבוע וחשיבותם העדפות Mate באמצעות מולי המפרש<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

דרך פשוטה למדוד שינויים בהתנהגות שוחרת זכה שימוש<em&gt; תסיסנית</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a grooming assay protocol and novel chamber design that is cost-efficient and scalable for either small or large-scale studies of Drosophila grooming. Flies are dusted all over their body with Brilliant Yellow dye and given time to remove the dye from their bodies within the chamber. Flies are then deposited in a set volume of ethanol to solubilize the dye. The relative spectral absorbance of dye-ethanol samples for groomed versus ungroomed animals are measured and recorded. The protocol yields quantitative data of dye accumulation for individual flies, which can be easily averaged and compared across samples. This allows experimental designs to easily evaluate grooming ability for mutant animal studies or circuit manipulations. This efficient procedure is both versatile and scalable. We show work-flow of the protocol and comparative data between WT animals and mutant animals for the Drosophila type I Dopamine Receptor (DopR).

This protocol describes a scalable individual grooming assay technique in Drosophila that yields robust, quantitative data to measure grooming behavior. The method is based on comparing the difference in dye accumulation on the bodies of un-groomed versus groomed animals over a set period of time.

כימות של תסיסנית התנהגות Grooming

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...