우리는 짝짓기 실험에 도움을 준 알렉스 Hitchen와 멕 부스에게 감사의 말씀을 전합니다. 이 작품은 TP에 H015604 / 1 / NERC 보조금 NE에 의해 지원되었다.

식용 색소와 플라이 음식 1. 준비 <ol><li> 바닥에 음식의 약 20 ㎖ (그림 1)과 표준 초파리 병을 가져 가라. 끓는 물 1 L 이용한 식품 믹스하기 배합 사용 한천 10g, 85g의 포도당, 옥수수 가루 60g, 효모 40g을 서서히 끓는하고 5 분 동안 교반한다. 혼합물을 75 ℃로 냉각되면 10 % nipagen의 25 ML을 추가합니다. </li><li> 음식은 냉각시키고, 두 방울 추가 고화 후 - 음식 위로 청색 식용 색소 (대략 0.5 내지 1 ㎖) 및 바이알의 표면 전체에 걸쳐 (도 1). 선호하는 경우 다른 색상의 염료를 사용합니다. </li><li> 염료가 식품의 상부층에서 흡수되도록 냉장고에서 이틀 동안 음식 남기기; 이 숙성 기간 동안에 파리 과도한 수분 손상을 방지한다. 과도한 습기가 여전히 다음 이후에 남은 물기과를 가릴 수있는 문제의 경우 조직에 작은 종이 조각을 추가를 제거합니다. </li><li> 전송은 개별적으로 또는 그룹으로 음식에 파리. 참고 : 파리는 음식에 배치되는 일일 내 장 염색을 얻을 것입니다. 또한, 전에 완전히 실험 (식품 염료에 노출 관찰되지 않았다 성숙 기간 동안 사망률 증가)로 염색 음식에 파리를 성숙. </li><li> 염색 파리 비 염색 파리에서 쉽게 구별 될 수 있는지 확인합니다. 염료의 높은 농도, 또는 다른 염료를 사용하여 1.4 - 그들이 구별 될 수없는 경우, 반복 단계 1.1. </li></ol> 음식 색을 사용하여 2. 두 남자 상대의 시험 <ol><li> 자손을 생산하는 경우, 여성과 남성 파리 쌍 포함 된 여러 바이알 (남성과 여성의 작은 그룹을 애벌레의 과밀을 방지하기 위해주의를 기울여야하지만,도 적합하다)를 설정합니다. 7 일 - 암컷이 알을 낳기 모든 5 새로운 유리 병에 파리를 이동할 수 있습니다. 관심의 종류에 적합한 온도에서 보관 유리 병 (22 ° C 형 (F)또는 D. pseudoobscura 및 D. subobscura 및 D. 25 ° C의 melanogaster의). </li><li> pseudoobscura 25 ° C, D.에서 6 시간 - - 수집 실험 파리는 남성과 여성을 수집하기 전에 설정 한 시간에 수집 유리 병에서 모든 파리를 제거하기 전에 그들이 처녀 (D. melanogaster의 될 것입니다 보장하기 위해 18 시간 22 ° C에서, 그리고 D.의 subobscura - 22 ° C에서 24 시간). 참고 : 파리는 처녀가 아닌 경우이 의지 바이어스 짝짓기 실험 (15)에 자신의 행동. <ol><li> 저장 및 개별적으로 표준 75 X 20mm 플라스틱 병에서 성숙한 남자 (음식 ~ 20 ㎖를 포함). 남성은 그룹 16에 보관 때 남성 짝짓기 행동과 어떤 종에서 볼 피트니스에 부정적인 영향을 피할 수 있습니다. </li><li> 원하는 치료로 남성의 절반을 노출 (CO이 경우 2 마취). CO 2 매트를 사용하거나 필요한 시간 동안 파리를 노출 누릅니다. 말의 저장 절반ES 상대까지 색깔 음식의 각 처리에서 발생한다. 이 짝짓기 시험 동안 그들을 시각적으로 구별 할 것입니다. </li><li> 전송을 위해 파리 흡인기 (17)를 사용합니다. 치료 및 남성의 색 상태 모두를 식별하기 위해 각 바이알 레이블. 여기에, 네 개의 트리트먼트 사용 (마취, 비 색깔 = G-NC, 마취, 색깔 = GC, 마취, 비 착색, NG-NC 및 마취, 색깔, NG-C). </li></ol></li><li> 10의 그룹으로 성숙 신선한 음식 바이알에 새로 등장 여성을 전송합니다. </li><li> 삼일, D.의 pseudoobscura - - 오일, D.의 subobscura -. D에 대한 (예를 들어, 22 ° C를 연구되고 18 저장소 종에 적합한 온도에서 날아 칠일 파리가 짝짓기 나이 (D. melanogaster의에 성숙 할 수 있도록 허용 . pseudoobscura 및 D의 subobscura 25 ° C D. melanogaster의 경우). </li><li> 계속 (개별 유리 병에 여성 이동음식 ~ 20 ml)을 결합 유리 병에 순응의 결합 시험 전에 일일를 aining. 유리 병이 차별화 될 수 있도록 이러한 병 레이블. 중립 라벨을 사용하여 실험을 눈 멀게주의하십시오 (즉, 1-150) 그래서 어떤 병에 파리의 신원을 추측 할 수 없습니다. 참고 : 각 유리 병에 파리를 배치하는 사람이 그들이 염색 된 치료주의 할 것이다 각 유리 병에 배치 파리의 신원을 알고 있어야합니다. 그러나, 짝짓기 시계 관찰자는 자신의 정체성을 모르는 것이다. 이 두 개 이상의 실험자이 필요합니다 설정하는 하나 하나 관찰을 수행합니다. </li><li> (10) 사이의 결합 시험 시작 - 자정, 또는 빛이 파리가 (파리에 대해 &quot;새벽&quot;)에 노출되는 빛 / 어둠주기에 오는 일치 한 번에. 흡입기를 사용 (하나의 여성 비행 포함) 각각의 짝짓기 유리 병에 두 남성 파리를 추가합니다. 두 남성 (다른 치료에서 마취 있는지 확인 또는제어) 및 그 하나는 가능한 서로를 구별 할 수 있도록하고, 염색 된 남성주의해야 할 장 염색이있다. </li><li> (- 색 색깔 또는 비 중) 교미가 발생하면, 동료 남성의 상태를 기록한다. 2 시간 동안 마지막 시련, 가정하면 암컷은 짝짓기를하지 않습니다. 2 시간이 종에 적합하지만, 다른 초파리는 다소 시간이 필요할 수 있습니다. </li></ol> 3. 단일 남성 짝짓기 시험 <ol><li> 단일 남성 시험의 경우, 두 가지 변화와 프로토콜 2를 반복합니다 : <ol><li> 단계 2.3에서 색깔의 음식에 남성을 보관하지 않습니다. </li><li> 단계 2.7에서 각 바이알에 단 하나의 남성을 추가합니다. </li></ol></li><li> 단계 2.8에서, 비행 바이알, 정합 완료 메이팅 시작하고 시간이 기록되어야하는 시간에 부가되는 시간을 기록한다. 이 값에서, 성공, 대기 시간 및 기간을 짝짓기 계산합니다. </li></ol> 4. 데이터 분석 <ol><li> 아나에 적합한 통계 패키지를 사용하여용해. 데이터가 정상입니다 만, 두 치료가 t-시험 또는 이와 동등한 일반화 선형 모델 (GLM)를 사용하는 경우. 두 남성 실험을 위해, 이항 시험 또는 기본 통계 패키지로 제공된다 이항 GLM을 사용합니다. 참고 : 예를 들어 데이터의 경우, 모든 분석은 R 버전 3.0.3 (19)을 실시 하였다. </li><li> 각각의 치료 (20) 대기 시간 및 기간의 주파수 히스토그램을 플로팅 및 샤피로 - 윌크으로 정상에 대한 테스트를 사용하여, 정상의 짝 대기 시간과 짝짓기 기간 데이터를 확인합니다. 정상이 아닌 경우이를 변환하거나, 비모수 통계 20 당량을 사용한다. 참고 : 하나의 남성 실험의 예 데이터 로그 변환이 정상과 등분의 요구 사항을 충족. </li><li> 데이터가 표준화 될 수있는 경우 두먼트 (21)를 사용하는 경우, 사용 t-테스트 남성 단일 결합 시험에서 상대 지연 및 지속 시간의 차이를 조사한다. 다중 처리는 사용되는 경우,분산 분석 (ANOVA) (20)를보십시오. 데이터를 정규화 할 수없는 경우, 해당하는 비 파라 메트릭 테스트 (21)를보십시오. </li><li> 경쟁 남성 (20)의 짝짓기 성공에 식용 색소 또는 CO 2 마취 중 하나의 효과를 테스트하기 위해 이항 테스트를 사용합니다. 예컨대 데이터의 경우처럼 다수의 처리가 사용되면, 오류 이항 구조 (21)를 사용 GLM. </li><li> 예컨대 데이터의 두 남성 시험 들어 에러 이항 구조와 GLMS를 사용한다. 하나 GLM는 응답 변수 (0 = 가스실 및 가스화하지로서 CO 2 검사 설명 variables.One GLM으로 장착 응답 변수 (컬러 = 0이고 비 착색 = 1) 종, 가스 상태 및 가스 처리로서 색을 조사 = 1)를 장착 종 색상 상태 및 가스 처리와. 각각의 경우에 최대 모델을 생성하고, AIC (20)에 기초하여 단순화 된 모델을 수행한다. </li></ol>

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저자는 그들이 더 경쟁 금융 이익이 없다는 것을 선언합니다.

이 데이터는 CO 2 마취의 영향은 거의 영향을 보여주는 두 세 가지의 종과 종 사이의 일관성이 있음을 보여줍니다. 우리의 결과는 음식 염료와 라벨 2 마취 D.에 대한 CO보다 남성 짝짓기 성공에 낮은 영향을 미쳤다 제안 melanogaster의. 이러한 실험 음식 염료 쉽고 싸게 여러 수컷 관련된 결합 분석법 라벨 날아간하는데 사용될 수 있다는 것을 입증한다. 세 가지 모델 초파리 종의 만 D., 검사 melanogaster의 경쟁력있는 상황에서 정합 성능에 CO 2 마취 효과를 나타내었다. 대조적으로, 종 중에 D. 대한 이전 결과 반대로 상대 지연의 측면에서 단일 결합 시험에서 가스의 컬렉션에 효과가 없었다 melanogaster의 5. 경쟁의 영향은 따라서 만 검출 가능한 CO 2 마취 미묘한 니스 효과를 강조 할 수있다상황에 따라 남성 남성 경쟁이입니다. 초기 수집 및 일일에 노출 재판에 앞서 D.의 남성의 능력에 부정적인 영향을 미칠 짝짓기를 얻기 위해 melanogaster의. 이일 이전 시험에 노출 그러나 효과적인 결과를 보이지 못했다. D. 두 pseudoobscura 및 D. subobscura은 시험 중 임의의 가스에 노출 된 효과적인 결과를 보이지 못했다. 한 설명은 것입니다 D. 남성 처녀 보장하기 위해 다른 종보다 - (6 시간 이전 0)이 이전의 삶에서 수집해야하기 때문에 melanogaster의 주식 2 초 노출에 취약했다. 따라서 남성 D. 파리의 표피는 여전히 강화하기 위해 자신의 표피에 대해 더 이상 가지고있는 다른 종에 비해 강화 된 바와 같이이 시대의 melanogaster의 더 민감 할 수있다. 일반적으로, 이것은 CO 2 마취 효과가 특정 종에서 적절 타겟 종의 효과를 테스트해야 조사관 있다는 생각을 지원한다. CurrentlY, CO 2 마취의 효과에 대한 작업의 대부분은 다른 관련 종에 적용하는 것이 적절하지 않을 수 있습니다 때문에 초파리 5,11,22에서 수행하고있다. 파리를 구별하기 위해 제시된 대안 비 침습적 방법은 음식 염료입니다. 이러한 처리 결과는 모든 종에 걸쳐 조사에 영향을 미치지 아니 제안한다. 그 사용은 개인을 구별하는 저렴하고 쉽게 볼 마커를 제공하는데 성공하면서 그러나, 염료 D.에서 구별하기 쉽다는 것을 주목해야한다 pseudoobscura 및 D. D.보다 subobscura melanogaster의. 이전 저자는 4,6 (적색, 녹색 및 청색) 여러 가지 색상을 사용했다. 우리는 D. 모든 종에서 구별하는 가장 쉬운 특히으로 푸른 색을 발견 pseudoobscura 및 D. subobscura. 잠재적으로 많은 개별적으로 표시 flie 더 복잡한 실험을 허용하는 여러 가지 색상을 사용하여의. 어떤 음식 염료 소비 할 때 가능성이 소화되고, 파리 색상을 실패하지만, 다른 염료의 예비 시험은 필수적이다. 다른 염료)은 독성을 가지고 날아 생존을 감소시키고, 14 피해야있다. 더 비싼 얼룩을 이용한 대체 착색료 방법은 D. 위해 장내 무결성을 검사하는 데 사용되어왔다 23 melanogaster의. 이러한 대안을 제공 할 수 있지만, 고가의 염색 방법 (23). 파리 컬렉션에서 염색이 식품에 저장 될 수있는 방법은 염료 CO 2 날개 클리핑만큼 빠르다. 음식의 흡수는 (~ 3 시간) 빠른, 그래서 다른 연구 (6)에 사용되는 색깔의 음식에 저장 O / N은, 파리를 표시하기에 충분하다. (10-12일) 24 마킹 날개 (영구) 클리핑이나 형광등 먼지 비교 - (5 시간 ~ 4) 그러나, 착색의 기간이 상대적으로 짧다. 초파리 종으로서에 따라 다릅니다, 다른 염료는 다소 다른 종에 대해서 유효합니다, 일부 균주로 (예를 들어, 녹아웃 돌연변이) 다이어트의 변화에 취약 할 수있는, 염료의 사용은 그 효과에 대한 예비 시험 특히 긴 경우 필요합니다 염료에 장기간 노출 14 독성이있을 수 있습니다. Kalaw 등. (14)의 연구와는 달리, 우리는 D.에 대한 색깔의 음식에 여러 일 동안 저장 후 유의 한 사망률 발견 melanogaster의 (3 일), D. pseudoobscura (오일), 또는 D. subobscura (7 일), 아마도 염료의 차이로 사용했다. 염료 기술을 성공적으로 사용하기위한 중요한 단계는 선택한 염료 종과 변형을 사용하고 잘 작동하는지 확인하는 단계입니다 1.5입니다. 대체 기술은 현장 실험 24에서 사용하기 전에 즉시 외부로 착색 분진을 적용하는 단계를 포함한다. 이 방법은 필드에서 t 인해 개인을 추적하기 위해 사용되어왔다O 마킹 기간 및 마킹 질량의 용이성 24 날아간다. 우리가 명시 적으로 결합 시험에서이 방법을 테스트하지 않았지만, 그것은 먼지가 특히 초파리 25, 26, 짝짓기에 중요한 감각에 미칠 수있는 영향을 검토하는 것이 중요 할 것입니다. 종 그러나, 장 염색이 가능하지 않은, 이 방법이 적합 할 수있다. 결론적으로 우리는 테스트 세 종 (D.의 pseudoobscura 및 D의 subobscura)의 두 CO 2 마취 또는 수컷의 짝짓기 능력에 식용 색소 중 하나의 발견 아무런 효과가 없다는 것을 발견했다. D. 들어 검출 된 CO 2 마취의 부정적인 영향을 melanogaster의,하지만 식용 색소는이 종에 성공 짝짓기에 영향을 미치지 않았다. 전반적으로, 염색 방법은 동일 또는 CO 2 마취를 필요 방법보다 더 낫다고 초파리 개인을 식별하기위한 단순 및 저렴한 비 침습적 방법을 제공한다. 그것가능성이 방법은 종의 범위에서 작동하는 것입니다.

지난 몇 년 동안이 진화 1,2에 어떻게 성적 선택과 경쟁 남성 사이에 미치는 영향에 대한 관심이 증가하고있다. 교미 행동에 대한 실험은 개발 및 3,4- 성 선택 이론 테스트에서 중요한 역할을 해왔다. 속 초파리의 특정 연구하여 종에서는 성적 선택과 행동의 이해에 크게 기여하고있다. 그러나, 일반적으로 사용되는 표준 기술은 5,6- 결합 실험의 결과를 인공적으로 치우치게 할 수 있는지 여부를 조사하는 것이 중요하다. 마취는 종종 실험 7 취급 및 식별을 위해 사용됩니다. 예를 들어, 파리 일반적 메이팅 수집 전에, 또는 (CO 2) 마취 이산화탄소를 이용하여 실험 치료 또는 유전자형으로 분류. 둘 이상의 개인이 구별 될 필요가 실험에서, FL을 anaesthetise 것이 일반적이다IES와 날개 오프 클립 부분은 각각의 처리 그룹 또는 5,8- 동정을 행 하였다. 그것은 그러나, CO 2 처리가 행동에 미치는 영향을 이해하는 매우 중요합니다. CO 2 마취의 효과가 초파리 melanogaster의에서 조사 된이있는 2 짝짓기를 더 크게했다 및 전반적인 비 마취 남성 또는 남성보다 낮은 짝짓기 성공을 거두었 감기 5 노출을 사용하여 마취 CO에 노출 된 남성. 이 효과는 관찰 모두 마취 실험 당일에 도포했을 때 복구 할 수는 파리 하루 주어진 경우. 그러나이 연구는 하나의 남성 각 여성 5에 제출에만 검사 시험에서 제한되었다. 여성이 때문에 마취에 대한 남성의 적합성에 미묘한 손실의 검출을 허용 할 수 있습니다 남성 간의 경쟁을 허용, 여러 남성 9,10 발생하는보다 현실적인 시나리오입니다. CO 2 마취의 사용은 또한 수있다실내는 성인 D.의 다산과 장수를 줄이기 위해 발견 그들은 우화 직후에 노출되었을 때 처녀를 수집하는 것은 11을 날아 때 일반적인로, melanogaster의. 2 마취를 공동의 대안은 그들에게 염료 4,6,10,12,13과 색깔의 음식을 공급하여 파리를 표시하는 것입니다. 이 염료는 색의 파리가 무색 파리에서, 또는 다른 색으로 표시 파리 구별 될 수 있도록, 파리의 창자를 입력하고 복부를 통해 볼 수 있습니다. 염색 보충 효모 붙여 넣기 (6)를 통해, 또는 새로운 염색 음식 기판 (13)에 노출을 통해, 음식 (12)에 직접 추가되는 : 방법은 어떻게 적용 할 수 다르다. 이러한 마킹 기술이 결합 성능 4,6에 영향을 보여주지 보인다. 그러나, 종이에 직접 성인 D. 같은 식용 색소의 효과를 검토 melanogaster의 수명은 14 강한 감소를 발견했다. 이전 작업은 ALM 초점을 맞추고있다OST 완전히 D.에 melanogaster의 모두 CO 2 마취 5,11 및 착색료 방법 (14)의 효과에 관해서. 현재, CO 2 마취 또는 장 색상의 사용이 다른 초파리의 짝짓기 행동에 영향을 미치는 방법에 대한 약간의 정보가있다. 다음의 연구는 초파리의 세 가지 종 (D. melanogaster의, D.의 pseudoobscura 및 D.의 subobscura)의 정합 동작에 CO 2 마취 효과를 평가한다. CO 2에 날아 포집 효과와 두 남성 단일 결합 실험 모두에서 확인 하였다. CO 2의 효과는 다양 D. 밝혀졌다 melanogaster의 5와 2를 공동 노출과 결합 사이의 너무 다른 대기 기간이 시험 하였다. 마취 날개 클리핑에 방법을 표시 대안 : 파리 스테인 음식 염료의 사용도 평가된다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Plastic tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>TWT-200-061G</td>
			<td>Other tubing may be suitable however it must fit within a 1ml pipette tip.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine mesh</td>
			<td>Any haberdashery</td>
			<td>-</td>
			<td>Fine curtain mesh is suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml pipette tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83007-376</td>
			<td>Various brands of pipette tips would be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Vials</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>58.49</td>
			<td>Larger vials or bottles could also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Balls</td>
			<td>Lewis Medical Solutions</td>
			<td>28170</td>
			<td>The size of cotton will vary depending on the size of vials used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue Food colouring</td>
			<td>Thesugarcraftcompany</td>
			<td>-</td>
			<td>Other dye colours and brands can have variable results.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Tank</td>
			<td>BOC</td>
			<td>BOC 40VK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharpie Markers</td>
			<td>Steadtler</td>
			<td>Lumocolor 313 S</td>
			<td>Various colours can be used, but Lumocolor S give an excellent combination of durability and fineness</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Salter</td>
			<td>SL3920</td>
			<td>Any stopwatch with a good digital display would be fine</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dyeing insects for behavioral assays: the mating behavior of anesthetized drosophila

초파리를 이용하여 결합 실험은 성적 선택과 행동의 이해에 크게 기여했다. 실험은 종종 시험에서 개인을 구별하는, 간단 간단하고 저렴한 방법이 필요합니다. 이에 대한 표준 기술은 각 비행 클리핑 CO 2 마취 후 라벨 또는 날개입니다. 그러나, 이는 침입 성 및 동작에 영향을 미치는 것으로 밝혀졌다. 다른 기술은 파리를 식별하기 위해 채색을 사용했다. 이 문서에서는 식용 색소를 사용하여, 그들을 개별적으로 실험 내에서 확인할 수 있습니다 라벨링 초파리을위한 간단하고 비 침습적 방법을 제안한다. 이 방법은 두 남성이 여성과 짝짓기 경쟁 시험에서 사용된다. 염색 빠르고 쉽게 식별을 허용했다. 시험 세 종간 착색의 강도에 약간 차이가 있지만,이 있었다. 데이터는 염료를 보여주는 제시 초파리 멜라노에서 CO 2보다 짝짓기 행동에 낮은 영향을gaster. CO 2 마취의 영향은 D.으로, 초파리의 종에 의존 도시 pseudoobscura 및 D. subobscura, D. 반면 영향을 보여주는 melanogaster의 남성은 짝짓기 성공을 감소했다. 제시된 방법은 염료 실험 광범위한 설계에도 적용 가능하다.

두 남성 짝짓기 시험 - 2 마취 짝짓기 행동에 CO의 효과 CO 2의 마취 효과의 변화를 설명하는 것으로 최상의 모델은 요소로 (D. D.의 pseudoobscura과의 subobscura 서로간에 차이가 없었다로 융합)와 종을 함유 하였다. D.에서 pseudoobscura 및 D. subobscura 두 남성 시험 (Z 1589 = 0.087, P = 0.931)에서 짝짓기 성공에 CO 2 마취의 유의 한 효과가 없었다. D. 들어 melanogaster의, 2 마취를 CO에 노출 된 남성은 상당히 낮은 짝짓기 성공 (Z1,589 = 2.467, P = 0.014)을했다. 더 큰 효과 종 및 치료 (χ 2 1589 = 6.83, P = 0.009) 사이에 상당한 상호 작용 D. 때 들키지이 있었다 melanogaster의 컬렉션에서 가스에 노출 또는 일일 시험 (표 1) 전 하였다. Howev어, D. melanogaster의 남성은 CO 2의 효과를 보여주지 않았다 2 이일 실험 시험 전에 CO에 노출. 두 남성 짝짓기 시험 - 짝짓기 행동에 장 채색의 효과 모델 단순화는 식용 색소의 유의 한 효과는 세 가지 종 (&gt; 0.1 P) 중 어떤 발견되고 있었다. 치료 또는 가스 상태가 분석에 포함되었을 때 이들은 (P는&gt; 0.1) 또한 유의하지 않았다. 치료법에 걸쳐 컬러 파리 성공적인 교배 비율은 표 2에 나타낸다. 파리 사이 착색 차가 컬러 및 착색 음식도 1에서 볼 수있다. 장내 식용 색소 강도 D. 컸다에 보관 pseudoobscura 및 D. D.보다 subobscura melanogaster의. 단일 결합 실험 - CO에게 마취 m 2를 사용하는 효과운 전압 동작 CO 2 마취 최근 등장 성인 수집하는 데 사용 된 세 가지 경우 중 어느 한 종을위한 정합 지연 시간의 차이는 없었다. 효과는 D.의 짝짓기 기간 동안 발견 subobscura는 그것은 2 이일 결합 시험 (; 표 2 그림 2와 3) 전에 CO에 노출되었을 때. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig1.jpg" /> 그림 1. 컬러 및 비 컬러 플라이 식품 (A)의 유리 병을 보여주는 사진과 남성 D. 장내 착색의 힘 Subobscura (B). <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig2.jpg" /> 남성은 마취시키다 때, 싱글 남성 시험에서 조사 세 종의 교미 대기 시간 그림 2. 평균 95 % 신뢰 구간D (조명 막대)하거나하지 마취 (어두운 바)를 할 때 성적 성숙하기 전에 처녀로 수집. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig3.jpg" /> 성적 성숙하기 전에 처녀로 수집 할 때 남성이 (어두운 막대) 마취 (조명 막대)을 마취하거나하지 된 그림 3. 평균 및 단일 남성 시험에서 조사 세 종의 교미 기간에 대한 95 % 신뢰 구간,. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 치료 </td><td> 종 </td><td> 번호 시험 </td><td> 번호 파리 색깔의 짝 그 </td><td> p- 값 </td><td> 번호 파리 가스실에 어울리게 그 </td><td> p- 값 </td></tr><tr><td rowspan="3"> CO 2 컬렉션 </td><td> D. 멜 </td><td> 73 </td><td> (36) </td><td> (1) </td><td> (27) </td><td> 0.0344 </td></tr><tr><td> D.의 PSE </td><td>79 </td><td> (41) </td><td> 0.8221 </td><td> (44) </td><td> 0.3682 </td></tr><tr><td> D. 서브 </td><td> (71) </td><td> (40) </td><td> 0.3425 </td><td> (33) </td><td> 0.6353 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 이 18 시간을 CO에 노출 이전 </td><td> D. 멜 </td><td> 57 </td><td> (28) </td><td> (1) </td><td> (19) </td><td> 0.0163 </td></tr><tr><td> D.의 PSE </td><td> (65) </td><td> (32) </td><td> (1) </td><td> (31) </td><td> 0.8043 </td></tr><tr><td> D. 서브 </td><td> (68) </td><td> (38) </td><td> 0.3961 </td><td> (35) </td><td> 0.9036 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 이 이일을 공동 노출. </td><td> D. 멜 </td><td> (56) </td><td> (19) </td><td> 0.0222 </td><td> (32) </td><td> 0.3497 </td></tr><tr><td> D.의 PSE </td><td> (70) </td><td> (32) </td><td> 0.5504 </td><td> (33) </td><td> 0.7202 </td></tr><tr><td> D. 서브 </td><td> (56) </td><td> (29) </td><td> 0.8939 </td><td> (26) </td><td> 0.6889 &lt;/ TD&gt; </tr></tbody></table> 표 심사 모든 종과 치료의 맞은 편에 두 남자의 선택 실험 1. 결과. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 종 </td><td> 특성 </td><td> DF </td><td> t 값 </td><td> p- 값 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. melanogaster의 </td><td> 대기 시간 </td><td> (58) </td><td> 1.379 </td><td> 0.174 </td></tr><tr><td> 지속 </td><td> (58) </td><td> 1.243 </td><td> 0.221 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D.의 pseudoobscura </td><td> 대기 시간 </td><td> (109) </td><td> 0.419 </td><td> 0.676 </td></tr><tr><td> 지속 </td><td> (109) </td><td> 0.436 </td><td> 0.664 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D.의 subobscura </td><td> 대기 시간 </td><td> (83) </td><td> 0.098 </td><td> 0.922 </td></tr><tr><td> 지속 </td><td> (83) </td><td> 1.767 </td><td> 0.081 </td></tr></tbody></table> 단일 결합의 결합 대기 시간에 CO 2 마취에 컬렉션의 효과를 검사 실험 및 기간에서 표 2. 결과. 시험은 초파리의 세 종 (D. melanogaster의, D.의 pseudoobscura 및 D의 subobscura)에서 수행 하였다.

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Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동<em&gt; 초파리</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

9.8K 조회수.  University of Liverpool. This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

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Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

곤충의 단일 Sensillum 레코딩 Drosophila melanogaster과 아노 펠 레스 gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

연구

신경과학

Studying the Neural Basis of Adaptive Locomotor Behavior in Insects

Studying the neural basis of walking behavior, one often faces the problem that it is hard to separate the neuronally produced stepping output from those leg movements that result from passive forces and interactions with other legs through the common contact with the substrate. If we want to understand, which part of a given movement is produced by nervous system motor output, kinematic analysis of stepping movements, therefore, needs to be complemented with electrophysiological recordings of motor activity. The recording of neuronal or muscular activity in a behaving animal is often limited by the electrophysiological equipment which can constrain the animal in its ability to move with as many degrees of freedom as possible. This can either be avoided by using implantable electrodes and then having the animal move on a long tether (i.e. Clarac et al., 1987; Duch &amp; Pfl&uuml;ger, 1995; B&ouml;hm et al., 1997; Gruhn &amp; Rathmayer, 2002) or by transmitting the data using telemetric devices (Kutsch et al, 1993; Fischer et al., 1996; Tsuchida et al. 2004; Hama et al., 2007; Wang et al., 2008). Both of these elegant methods, which are successfully used in larger arthropods, often prove difficult to apply in smaller walking insects which either easily get entangled in the long tether or are hindered by the weight of the telemetric device and its batteries. In addition, in all these cases, it is still impossible to distinguish between the purely neuronal basis of locomotion and the effects exerted by mechanical coupling between the walking legs through the substrate. One solution for this problem is to conduct the experiments in a tethered animal that is free to walk in place and that is locally suspended, for example over a slippery surface, which effectively removes most ground contact mechanics. This has been used to study escape responses (Camhi and Nolen, 1981; Camhi and Levy, 1988), turning (Tryba and Ritzman, 2000a,b; Gruhn et al., 2009a), backward walking (Graham and Epstein, 1985) or changes in velocity (Gruhn et al., 2009b) and it allows the experimenter easily to combine intra- and extracellular physiology with kinematic analyses (Gruhn et al., 2006).
We use a slippery surface setup to investigate the timing of leg muscles in the behaving stick insect with respect to touch-down and lift-off under different behavioral paradigms such as straight forward and curved walking in intact and reduced preparations.

We describe a method to record motor activity, timed to the electrically recorded tarsal contact signal in a tethered insect, walking on a slippery surface. This is used to study the neural basis of adaptive behavior under reduced influence of mechanical interaction between legs through the substrate.

곤충의 적응 운동력이있는 사람의 행동의 신경 기초를 공부

Studying the neural basis of walking behavior, one often faces the problem that it is hard to separate the neuronally produced stepping output from those ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

분석의 방법 Drosophila 행동

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

먹이 찾아 돌아다 행동에 대한 단일 비행 분석에<em&gt; 초파리</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

A Simple Flight Mill for the Study of Tethered Flight in Insects

Flight in insects can be long-range migratory flights, intermediate-range dispersal flights, or short-range host-seeking flights. Previous studies have shown that flight mills are valuable tools for the experimental study of insect flight behavior, allowing researchers to examine how factors such as age, host plants, or population source can influence an insects' propensity to disperse. Flight mills allow researchers to measure components of flight such as speed and distance flown. Lack of detailed information about how to build such a device can make their construction appear to be prohibitively complex. We present a simple and relatively inexpensive flight mill for the study of tethered flight in insects. Experimental insects can be tethered with non-toxic adhesives and revolve around an axis by means of a very low friction magnetic bearing. The mill is designed for the study of flight in controlled conditions as it can be used inside an incubator or environmental chamber. The strongest points are the very simple electronic circuitry, the design that allows sixteen insects to fly simultaneously allowing the collection and analysis of a large number of samples in a short time and the potential to use the device in a very limited workspace. This design is extremely flexible, and we have adjusted the mill to accommodate different species of insects of various sizes.

Flight in insects is influenced by a number of factors and the propensity to disperse is an important variable in understanding insect ecology and biological control strategies. We describe the construction and use of a simple, relatively inexpensive, and flexible flight mill for measuring parameters of tethered flight in insects.

곤충에 닿는 비행의 연구에 대한 간단한 비행 밀

Flight in insects can be long-range migratory flights, intermediate-range dispersal flights, or short-range host-seeking flights. Previous studies have ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To complicate matters even further, the odors detected by the insect nervous system usually are not single compounds but mixtures whose composition and concentration ratios vary. This leads to an almost infinite amount of different olfactory stimuli which have to be evaluated by the nervous system.
To understand which aspects of an odor stimulus determine its evaluation by the fly, it is therefore desirable to efficiently examine odor-guided behavior towards many odorants and odor mixtures. To directly correlate behavior to neuronal activity, behavior should be quantified in a comparable time frame and under identical stimulus conditions as in neurophysiological experiments. However, many currently used olfactory bioassays in Drosophila neuroethology are rather specialized either towards efficiency or towards resolution.
Flywalk, an automated odor delivery and tracking system, bridges the gap between efficiency and resolution. It allows the determination of exactly when an odor packet stimulated a freely walking fly, and to determine the animal&#180;s dynamic behavioral reaction.

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

The automated tracking system Flywalk is used for high-resolution quantification of odor-guided behavior in Drosophila melanogaster.

에서 냄새 유도 행동의 고해상도 정량화<em&gt; 초파리</em사용&gt;<em&gt; Flywalk</em&gt; 패러다임

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

의 Mechanosensation에 대한 행동 분석 클론의 MARCM은 기반<em&gt; 초파리</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their worlds when trying to understand their behavior and ecology. Sensitivity to the ultraviolet spectrum (UV; 300 - 400 nm) is found across multiple genera of birds, fish, reptiles, amphibians, and even mammals. This protocol describes a technique for examining organisms for the presence of UV-reflecting structures and a method for testing whether these cues are used as social signals in the context of mate choice. A spectrophotometer is used to detect the presence of UV reflectance and variation in reflective intensity between individuals and sexes. An example of this technique is presented in which a dichotomous mate choice test exposes sexually receptive individuals to opposite sex individuals whose visual appearance can be manipulated by filters that either transmit full spectrum or block UV wavelengths. This system allowed for the determination that female, but not male, sailfin mollies (Poecilia latipinna) were using UV markings as part of their mating decisions. These types of studies serve to expand our knowledge of the range of organisms that utilize UV and provide insight into how UV plays a role in their lives.

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

This protocol outlines the use of spectrophotometry to detect ultraviolet-reflecting structures on organisms (in this example, the sailfin molly Poecilia latipinna) and describes dichotomous choice tests for fish that allow inferences to be made on the role of ultraviolet cues during mate selection.

분석은 UV 반사 구조를 검색 및 SailFin을 몰리를 사용하여 메이트 환경 설정에서 자신의 중요성을 확인하는 방법<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

사용 보상 추구 행동의 변화를 측정하는 간단한 방법<em&gt; 노랑 초파리</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a grooming assay protocol and novel chamber design that is cost-efficient and scalable for either small or large-scale studies of Drosophila grooming. Flies are dusted all over their body with Brilliant Yellow dye and given time to remove the dye from their bodies within the chamber. Flies are then deposited in a set volume of ethanol to solubilize the dye. The relative spectral absorbance of dye-ethanol samples for groomed versus ungroomed animals are measured and recorded. The protocol yields quantitative data of dye accumulation for individual flies, which can be easily averaged and compared across samples. This allows experimental designs to easily evaluate grooming ability for mutant animal studies or circuit manipulations. This efficient procedure is both versatile and scalable. We show work-flow of the protocol and comparative data between WT animals and mutant animals for the Drosophila type I Dopamine Receptor (DopR).

This protocol describes a scalable individual grooming assay technique in Drosophila that yields robust, quantitative data to measure grooming behavior. The method is based on comparing the difference in dye accumulation on the bodies of un-groomed versus groomed animals over a set period of time.

Drosophila 그루밍 행동의 부량

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...

행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동

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곤충의 단일 Sensillum 레코딩 Drosophila melanogaster과 아노 펠 레스 gambiae

곤충의 적응 운동력이있는 사람의 행동의 신경 기초를 공부

분석의 방법 Drosophila 행동

먹이 찾아 돌아다 행동에 대한 단일 비행 분석에

곤충에 닿는 비행의 연구에 대한 간단한 비행 밀

에서 냄새 유도 행동의 고해상도 정량화

의 Mechanosensation에 대한 행동 분석 클론의 MARCM은 기반

분석은 UV 반사 구조를 검색 및 SailFin을 몰리를 사용하여 메이트 환경 설정에서 자신의 중요성을 확인하는 방법

사용 보상 추구 행동의 변화를 측정하는 간단한 방법

Drosophila 그루밍 행동의 부량