אנו מכירים את מרכז Caenorhabditis הגנטיקה לג זני elegans. תמיכת מימון ניתן על ידי טרי פוקס מכון המחקר. אנחנו גם מכירים תמיכה שניתנה לEP מRolande ומרסל גוסלין בוגר Studentship ומענק אימון CIHR / FRSQ בFRN53888 חקר הסרטן של חקר סרטן תכנית הכשרת מקגיל המשולבת.

1. הכנת ריאגנטים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת מדיה לג צמיחת elegans (במקרה זה, חיות בר-סוג ובעלי חיים flcn-1 (ok975) מוטציה). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן השתנה Bacto-peptone בלבד (MYOB) התערובת היבשה של Youngren המכילה 5.5 גרם של טריס HCl, 2.4 גרם של בסיס טריס, 31 גרם של Bactopetone, 20 גרם של NaCl ו0.08 גרם של כולסטרול. מערבבים היטב עם רעד. הערה: תערובת זו מספיקה כדי להכין 10 ליטר של מדיום MYOB. הערה: ניתן להשתמש בצלחות רגילה מדיום גידול (NGM) במקום צלחות MYOB 27. עם זאת, אותו הסוג של צלחות יש להשתמש להשוואות תקפות בין זנים ובין חזרות עצמאיות. בפרוטוקול זה, השתמשנו רק צלחות MYOB. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 1 ליטר של מדיום MYOB ידי הוספת 6 גרם של תערובת יבשה MYOB, 17 גרם של אגר ולעשות עד 1 ליטר עם H 2 O וחיטוי במשך 45 דקות ב 122 מעלות צלזיוס. יוצקים צלחות ולתת יבשים ב RT עבור 2 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות טכניקה סטרילית, לחסן של cultu 100 מיליליטרמחדש של מדיום מרק LB עם E. חיידקים וcoli OP50 לגדול O / N על 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחות MYOB הזרע עם א חיידקי coli OP50. מאפשר לו לגדול ב RT במשך 48 שעות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנה לdownregulation גן באמצעות RNAi <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן צלחות RNAi האכלת MYOB. המשך כמו בשלבים 1.1.1 ו1.1.2. לאחר מעוקר, תאפשר הבינוני להתקרר לכ -55 מעלות צלזיוס ולהוסיף 1 מיליליטר של 1 β-D-1-thiogalactopyranoside M איזופרופיל (IPTG) ו 1 מיליליטר של 100 מ&quot;מ אמפיצילין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פס ה coli HT115 חיידקים הפכו עם פלסמיד, שמבטא גם EV שליטה או RNAi flcn-1 ספציפי על אמפיצילין (50 מיקרוגרם / מיליליטר) / tetracyclin (15 מיקרוגרם / מיליליטר) אגר צלחות. לגדול תרבות O / N על 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיק מושבות ולחסן E. coli HT115 חיידקים הפכו עם פלסמיד המבטא גם EV השליטה או flcn-1 RNAi הספציפי ולגדול תרבות במדיום LB / אמפיצילין (50 מיקרוגרם / מיליליטר) וO / N ב 37 &amp; #176; C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחות זרע עם א coli HT115 EV חיידקים או חיידקי RNAi HT115 flcn-1. הערה: שמור צלחות 48 שעות בRT לפני השימוש. אם RNAi מציאה על ידי האכלה היא בתוקף, להשתמש בשיטות אחרות של משלוח של DS-רנ&quot;א 28. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גרימת סטרס חמצונים באמצעות paraquat (PQ): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן חיץ M9 ידי ערבוב 3 גרם של KH 2 PO 4, 6 גרם של Na 2 HPO 4, 5 גרם של NaCl ו0.25 גרם של MgSO 4 · 7 H 2 O. להביא עד 1 ליטר עם מים מזוקקים. פתרון החיטוי במשך 45 דקות ב 122 מעלות צלזיוס בקבוקים ולאחסן ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום של assay, להכין את פתרון M9 / PQ המכיל. לפרוטוקול זה, השתמש 100 מ&quot;מ PQ (.1028 גרם של PQ המומס ב 4 מיליליטר של חיץ M9 ממלא צלחות גם כל 96 עם 40 μl של M9 / PQ בכל טוב). זהירות: PQ הוא תרכובת מסוכנת ורעילה ביותר. ידית על פי הנחיות מתאימות. הערה: בעת הפעלה של חדש הראשונהרכבת או מצב חדש, מומלץ assay הישרדות בהגדלת ריכוזים של PQ כדי לקבוע את הריכוז הטוב ביותר להשתמש כדי להרוג חיות בתוך 7-10 שעות. </li></ol></li></ol> 2. הכנת אוכלוסיית L4 מסונכרנת-גיל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה 20 הרמפרודיטים מבוגרים הרה להולדת לצלחת MYOB טרי זורעים עם E. חיידקי coli OP50. הכן כמה צלחות המבוססות על המספר של תולעי צורך במהלך assay. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר להם להטיל ביצים במשך שעה 6 ולאחר מכן באמצעות תולעת חוט פלטינה לאסוף להסיר את האמהות. בדוק את הצלחות תחת מיקרוסקופ כדי להעריך את מספר הביצים שהוטלו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר הביצים לבקוע ולגדול ב 20 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות. בשלב זה, בעלי החיים נמצאים ב/ שלב בוגר מאוחר L4 צעיר. פיק אותו שלב חיות ולהעביר לבארות המכיל פתרון PQ. הערה: מאחר 48 הדגירה שעה חלה רק על מוטציות שגדלות באופן דומה לחיות בר-סוג, חשוב לפקח התפתחותיתשיעור מוטציות שנבדקו חדש כדי להבטיח שהיא עומדת בקצב הפיתוח בר-הסוג, אחרת, יש להשתמש בצירה זמן אחר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין, להשתמש בטכניקות סנכרון. צור אוכלוסייה מסונכרנת של תולעי זחלי L1 באמצעות פתרון hypochlorite (25 מיליליטר מים, 125 מיליליטר של 5.25% נתרן היפוכלוריט, 50 מיליליטר של 4 M NaOH; לעטוף בקבוק בנייר אלומיניום כדי לבודד מהאור). עם זאת, עבור assay זה, זה אינו מומלץ, שכן הלבנה אינטנסיבית עשויה להשפיע על התנהגותם של בעלי החיים במהלך assay. זהירות: טפל בפתרון hypochlorite על פי הנחיות. הערה: בעת שימוש RNAi להסדיר את הגן של עניין, לסנכרן את הרמפרודיטים כפי שתואר בסעיף 2, למעט העברת האמהות לצלחות RNAi זרע עם חיידקי RNAi הספציפיים. כאשר מציאה עם RNAi היא חלשה, האכלה למספר דורות מומלצת. </li></ol> 3. ביצוע סטרס חמצוני ההתנגדות Assay &lt;/ P&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 40 μl של פתרון 100 מ&quot;מ PQ (מוכנים טרי) לכל גם צלחת 96 היטב. השתמש לפחות 12 בארות כמשכפל של כל תנאי (טיפול, מוטציה, וכו &#39;). באמצעות איסוף תולעת חוט פלטינה, להעביר 5-8 חיות זחלי L4 לכל המציינים את שעת ההתחלה ושעת הסיום היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר מתחיל מצב אחר, שים לב לשעת ההתחלה ושעת הסיום. מניחים את הצלחת על 20 מעלות צלזיוס בזמן הדגירה בין העברת התולעים ובקיע חיות מתות כעבור שעה מרגע ההתחלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מיקרוסקופ לנתח, לספור הישרדות כל שעה. נער בעדינות את הצלחת לפני שמתחיל לספור. מצביע תולעים שלא זזו, אפילו אחרי שהבחין באור בעוצמה גבוהה, כמו חיות מתות. כמו כן לציין את מספר בעלי החיים בחיים. הערה: כאשר מסתכלים על צורת תולעת, זנבות ותנועת הראש בהגדלה גבוהה, לעזור לקבוע תולעים מתים מחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על פעולה זו בכל שעה עד שרוב התולעים מתים. </li></ol> &lt;class = &quot;jove_title&quot; p&gt; 4. קביעת אחוז הישרדות בכל זמן נקודה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את המספר הכולל של בעלי חיים לכל מצב על ידי הוספת המספר הכולל של בעלי חיים הועברו לכל גם. להתעלם מבעלי החיים שנפגעו או נהרגו על העברה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור כל נקודת זמן, לחשב את המספר הכולל של חיות מתות לכל מצב (סכום של חיות מתות בבארות 12). עבור כל נקודת זמן, לחשב את האחוז של מוות (מספר חיות מתות מחולקות במספר כולל של בעלי חיים וכפולים 100) ואחוז ההישרדות (100 מינוס מות אחוזים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור assay זה לפחות 3 פעמים עצמאיות. </li></ol>

<ol>
	<li>Schieber, M., Chandel, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS+function+in+redox+signaling+and+oxidative+stress.">ROS function in redox signaling and oxidative stress.</a> Curr Biol. 24, R453-R462 (2014).</li><li>Alfadda, A. A., Sallam, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+in+health+and+disease.">Reactive oxygen species in health and disease.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 936486 (2012).</li><li>Finkel, T., Holbrook, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidants,+oxidative+stress+and+the+biology+of+ageing.">Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing.</a> Nature. 408, 239-247 (2000).</li><li>Di Carlo, M., Giacomazza, D., Picone, P., Nuzzo, D., San Biagio, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+oxidative+stress+and+mitochondrial+dysfunction+the+key+players+in+the+neurodegenerative+diseases.">Are oxidative stress and mitochondrial dysfunction the key players in the neurodegenerative diseases.</a> Free Radic Res. 46, 1327-1338 (2012).</li><li>Gandhi, S., Abramov, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+oxidative+stress+in+neurodegeneration.">Mechanism of oxidative stress in neurodegeneration.</a> Oxid Med Cell Longev. 2012, 428010 (2012).</li><li>Trushina, E., McMurray, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+mitochondrial+dysfunction+in+neurodegenerative+diseases.">Oxidative stress and mitochondrial dysfunction in neurodegenerative diseases.</a> Neuroscience. 145, 1233-1248 (2007).</li><li>Touyz, R. M., Briones, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+vascular+biology:+implications+in+human+hypertension.">Reactive oxygen species and vascular biology: implications in human hypertension.</a> Hypertens Res. 34, 5-14 (2011).</li><li>Gorrini, C., Harris, I. S., Mak, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+oxidative+stress+as+an+anticancer+strategy.">Modulation of oxidative stress as an anticancer strategy.</a> Nat Rev Drug Discov. 12, 931-947 (2013).</li><li>Sosa, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+cancer:+an+overview.">Oxidative stress and cancer: an overview.</a> Ageing research reviews. 12, 376-390 (2013).</li><li>Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+Oxygen+Species+and+Aging+in+Caenorhabditis+elegans:+Causal+or+Casual+Relationship.">Reactive Oxygen Species and Aging in Caenorhabditis elegans: Causal or Casual Relationship.</a> Antioxid Redox Signal. 13, 1911-1953 (2010).</li><li>Baumeister, R., Schaffitzel, E., Hertweck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine+signaling+in+Caenorhabditis+elegans+controls+stress+response+and+longevity.">Endocrine signaling in Caenorhabditis elegans controls stress response and longevity.</a> J Endocrinol. 190, 191-202 (2006).</li><li>Markaki, M., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+diseases+in+Caenorhabditis+elegans.">Modeling human diseases in Caenorhabditis elegans.</a> Biotechnol J. 5, 1261-1276 (2010).</li><li>Rodriguez, M., Snoek, L. B., De Bono, M., Kammenga, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worms+under+stress:+C.+elegans+stress+response+and+its+relevance+to+complex+human+disease+and+aging.">Worms under stress: C. elegans stress response and its relevance to complex human disease and aging.</a> Trends Genet. 29, 367-374 (2013).</li><li>Hope, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Practical approach series. , 282 (1999).</li><li>C. elegans Sequencing Consortium. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+sequence+of+the+nematode+C.+elegans:+a+platform+for+investigating+biology.">Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology.</a> Science. 282, 2012-2018 (1998).</li><li>Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turn+to+the+worm!.">Turn to the worm!.</a> Current opinion in genetics &amp; development. 7, 410-415 (1997).</li><li>Wheelan, S. J., Boguski, M. S., Duret, L., Makalowski, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+and+nematode+orthologs--lessons+from+the+analysis+of+1800+human+genes+and+the+proteome+of+Caenorhabditis+elegans.">Human and nematode orthologs--lessons from the analysis of 1800 human genes and the proteome of Caenorhabditis elegans.</a> Gene. 238, 163-170 (1999).</li><li>Culetto, E., Sattelle, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Caenorhabditis+elegans+in+understanding+the+function+and+interactions+of+human+disease+genes.">A role for Caenorhabditis elegans in understanding the function and interactions of human disease genes.</a> Hum Mol Genet. 9, 869-877 (2000).</li><li>Fire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li><li>Lamitina, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomic+approaches+in+C.+elegans.">Functional genomic approaches in C. elegans.</a> Methods Mol Biol. 351, 127-138 (2006).</li><li>Poulin, G., Nandakumar, R., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+RNAi+screens+in+Caenorhabditis+elegans:+impact+on+cancer+research.">Genome-wide RNAi screens in Caenorhabditis elegans: impact on cancer research.</a> Oncogene. 23, 8340-8345 (2004).</li><li>Moreno-Arriola, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans:+A+Useful+Model+for+Studying+Metabolic+Disorders+in+Which+Oxidative+Stress+Is+a+Contributing+Factor.">Caenorhabditis elegans: A Useful Model for Studying Metabolic Disorders in Which Oxidative Stress Is a Contributing Factor.</a> Oxid Med Cell Longev. , 705253 (2014).</li><li>Possik, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folliculin+regulates+ampk-dependent+autophagy+and+metabolic+stress+survival.">Folliculin regulates ampk-dependent autophagy and metabolic stress survival.</a> PLoS Genet. 10, e1004273 (2014).</li><li>Fukushima, T., Tanaka, K., Lim, H., Moriyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+cytotoxicity+of+paraquat.">Mechanism of cytotoxicity of paraquat.</a> Environ Health Prev Med. 7, 89-94 (2002).</li><li>Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+dismutase+is+dispensable+for+normal+animal+lifespan.">Superoxide dismutase is dispensable for normal animal lifespan.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 5785-5790 (2012).</li><li>Schulz, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+restriction+extends+Caenorhabditis+elegans+life+span+by+inducing+mitochondrial+respiration+and+increasing+oxidative+stress.">Glucose restriction extends Caenorhabditis elegans life span by inducing mitochondrial respiration and increasing oxidative stress.</a> Cell Metab. 6, 280-293 (2007).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li><li>Timmons, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+methods+for+RNA+interference+in.">Delivery methods for RNA interference in.</a> C. elegans. Methods Mol Biol. 351, 119-125 (2006).</li><li>Wang, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+Eyes+Absent+Ortholog+EYA-1+Is+Required+for+Stress+Resistance.">Caenorhabditis elegans Eyes Absent Ortholog EYA-1 Is Required for Stress Resistance.</a> Biochemistry (Mosc). 79, 653-662 (2014).</li><li>Paz-Gomez, D., Villanueva-Chimal, E., Navarro, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DEAD+Box+RNA+helicase+VBH-1+is+a+new+player+in+the+stress+response+in+C.+elegans.">The DEAD Box RNA helicase VBH-1 is a new player in the stress response in C. elegans.</a> PLoS One. 9, 97924 (2014).</li><li>Ward, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defects+in+the+C.+elegans+acyl-CoA+synthase,+acs-3,+and+nuclear+hormone+receptor,+nhr-25,+cause+sensitivity+to+distinct,+but+overlapping+stresses.">Defects in the C. elegans acyl-CoA synthase, acs-3, and nuclear hormone receptor, nhr-25, cause sensitivity to distinct, but overlapping stresses.</a> PLoS One. 9, 92552 (2014).</li><li>Staab, T. A., Evgrafov, O., Knowles, J. A., Sieburth, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+synaptic+nlg-1/neuroligin+abundance+by+the+skn-1/Nrf+stress+response+pathway+protects+against+oxidative+stress.">Regulation of synaptic nlg-1/neuroligin abundance by the skn-1/Nrf stress response pathway protects against oxidative stress.</a> PLoS Genet. 10, e1004100 (2014).</li><li>Greer, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+AMPK-FOXO+pathway+mediates+longevity+induced+by+a+novel+method+of+dietary+restriction+in.">An AMPK-FOXO pathway mediates longevity induced by a novel method of dietary restriction in.</a> C. elegans. Curr Biol. 17, 1646-1656 (2007).</li><li>Allen, E., Walters, I. B., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brivanib,+a+dual+FGF/VEGF+inhibitor,+is+active+both+first+and+second+line+against+mouse+pancreatic+neuroendocrine+tumors+developing+adaptive/evasive+resistance+to+VEGF+inhibition.">Brivanib, a dual FGF/VEGF inhibitor, is active both first and second line against mouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance to VEGF inhibition.</a> Clin Cancer Res. 17, 5299-5310 (2011).</li><li>Apfeld, J., O'Connor, G., McDonagh, T., DiStefano, P. S., Curtis, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+AMP-activated+protein+kinase+AAK-2+links+energy+levels+and+insulin-like+signals+to+lifespan+in+C.+elegans.">The AMP-activated protein kinase AAK-2 links energy levels and insulin-like signals to lifespan in C. elegans.</a> Genes Dev. 18, 3004-3009 (2004).</li><li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+AMP-activated+protein+kinase+AAK-2+is+phosphorylated+by+LKB1+and+is+required+for+resistance+to+oxidative+stress+and+for+normal+motility+and+foraging+behavior.">The Caenorhabditis elegans AMP-activated protein kinase AAK-2 is phosphorylated by LKB1 and is required for resistance to oxidative stress and for normal motility and foraging behavior.</a> J Biol Chem. 283, 14988-14993 (2008).</li><li>Honda, Y., Honda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+daf-2+gene+network+for+longevity+regulates+oxidative+stress+resistance+and+Mn-superoxide+dismutase+gene+expression+in+Caenorhabditis+elegans.">The daf-2 gene network for longevity regulates oxidative stress resistance and Mn-superoxide dismutase gene expression in Caenorhabditis elegans.</a> FASEB J. 13, 1385-1393 (1999).</li><li>Restif, C., Metaxas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+swimming+motions+of+C.+elegans+worms+with+applications+in+aging+studies.">Tracking the swimming motions of C. elegans worms with applications in aging studies.</a> Med Image Comput Comput Assist Interv. 11, 35-42 (2008).</li><li>Buckingham, S. D., Sattelle, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast,+automated+measurement+of+nematode+swimming+(thrashing)+without+morphometry.">Fast, automated measurement of nematode swimming (thrashing) without morphometry.</a> BMC Neurosci. 10, 84 (2009).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

סי אלגנס הוא אורגניזם מודל אטרקטיבי ללמוד התנגדות מתח גנטי חמצוני in vivo שכן הוא יכול להיות בקלות בתרבית, ומהירות מוביל למספר רב של צאצאים זהים גנטי. מספר שיטות למדידת התנגדות סטרס חמצונים תוארו בעבר והם מבוססים על התוספים של צלחות תרבות עם מקורות ROS שונים כגון PQ, rotenone, H 2 O 2, וjuglone 25,26,29-32. כאן אנו מתארים פרוטוקול המודד התנגדות סטרס חמצונים בנוזל ב 96 צלחות גם באמצעות 100 מ&quot;מ PQ. Assay דומה שבוצע על ידי אח גריר אל. 33. assay זה יכול להיות מותאם נוסף ללמוד סטרס חמצונים בנוזל באמצעות מקורות ROS אחרים. לדוגמא, שהראינו הפסד של התנגדות עליות flcn-1 לכמה 2 O 2 ריכוזי H כמו גם 23. assay זה יכול להיות טכניly מאתגר לכמה זנים המציגים פגמי תנועתיות או שחייה-induced פנוטיפים שיתוק כגון זנים נושאים מוטציה בטרנספורטר דופאמין DAT-1 34. במקרה זה, חוסר היכולת להזיז מבלבלת שכן הוא לא בהכרח מתכוון ירד התנגדות חמצוני לחץ אלא פגם תנועתיות. יתר על כן, ספירה של חיות מתות אמור להסתיים בזהירות וחוקרים יש לשים לב לג פרטי התנהגות elegans כגון תנועות זנב, ותנועות ראש, או תנועות גוף גם איטיות. אם ריכוז PQ הוא גבוה מדי, וקינטיקה מותם של בעלי החיים היא מהירה מאוד, אפשר לשקול הפחתת הריכוז של PQ כדי לקבל שיעורי מוות איטיים יותר. חלק מבעלי החיים רגישים מאוד ללחץ חמצוני כגון aak-2 בעלי חיים מוטציה 26,33,35,36 ואילו אחרים הם עמידים מאוד כגון daf-2 בעלי חיים מוטציה 37. במקרה זה, מנסה לאמוד הישרדות עם עמיתים שוניםncentrations של PQ צריך להיחשב. לניסויי RNAi, תוצאות שליליות יכולות להיות בגלל חוסר יעילות של טיפול RNAi. במקרה זה, מדידה של רמות ה- mRNA היא חיונית כדי לקבוע אם גן מציאה הוא מוצלח. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם נוסף להקרנת תפוקה גבוהה של עמידות סטרס חמצונים באמצעות גלאי שעוקב חי ההתנהגות של ג elegans ב38,39 נוזליים. פעולה זו עלולה לאפשר הניטור של הסיבולת של ג elegans ושחי ההתנהגות כגון תדירות של גוף כיפוף תחת לחץ חמצוני. שיעור גבוה יותר של תנועת גוף יכול להצביע על כושר תולעת גבוה יותר תחת לחץ. מסלולים שיובילו לחמצוני התנגדות מתח אאוקריוטים התחתונים השמורים ביותר על פני אבולוציה וצמודות למחלות הקשורות ללחץ חמצוני והזדקנות בבני אדם. Mitohormesis וgeneratio המאוזןn של ROS חיוני להאריך את תוחלת חיים ולשפר את תוחלת בריאות. עם זאת, ROS המופרז הוא מזיק ביותר לתאים, רקמות / איברים, ואורגניזמים. מציאת מסלולים, שאם שינה, מספק איזון אופטימלי היא ROS כך חיונית והמסכים לתרופות המווסתים את ההתנגדות ללחץ חמצוני יכולים לסייע בפיתוח של תרופות למחלות מרובות עם המכנה המשותף: סטרס חמצוני. ביצוע ההקרנות הללו בג elegans הוא שיטת יתרון מהירה, זולה, ואמינה שיש פוטנציאל גדול וערך להבנה והטיפול במחלות אנושיות קשורות ללחץ חמצוני.

A reference was corrected in the publication of <a href="http://www.jove.com/video/52746">Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates</a>. There was an error with reference 34 in the Citations section. It has been updated from:
Allen, E., Walters, I.B., Hanahan, D. Brivanib a dual FGF/VEGF inhibitor,is active both first and second line againstmouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance toVEGF inhibition. Clin Cancer Res. 17, (16) 5299-310 (2011).
to:
Allen, A. T., Maher, K. N., Wani, K. A., Betts, K. E., &#38; Chase, D. L. Coexpressed D1- and D2-like dopamine receptors antagonistically modulate acetylcholine release in Caenorhabditis elegans. Genetics. 188, 579-590 (2011).

Erratum: Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

באאוקריוטים, זרחון חמצוני מתרחשים בשרשרת הובלת אלקטרונים של המיטוכונדריה הוא הנהג העיקרי של ייצור אנרגיה בצורה של ה- ATP. מיני חמצן מגיבים (ROS) הם תוצר לוואי טבעי של תהליך זה. למרות תפקידם החשוב כמולקולות איתות, ROS מוגזם יכול לגרום לנזק לדנ&quot;א, carbonylation חלבון, וחמצון שומנים בדם. חוסר איזון בין ייצור וסילוק הרעלים ROS גורם ללחץ חמצוני, מה שמוביל לדלדול אנרגיה, נזק לתאים, וגורם לתא מוות 1,2. סטרס חמצונים תורמים להזדקנות וההתפתחות של מחלות מסכנות חיים רבות, כולל סרטן, סוכרת, לב וכלי דם ומחלות ניווניות 3-9. תאים התפתחו אסטרטגיות הגנה האנזימטית ואינם אנזימטית כדי לשמור על רמות ROS נכונים ולהגן על בוחריהם מפני נזק חמצוני 1,2. סופראוקסיד דיסמוטאז אנזימים (SOD) לפעול ראשון לconveסופראוקסיד RT לH 2 O 2, אשר מאוחר יותר הופך למים על ידי catalase או אנזימי peroxidase. אסטרטגיות הגנה האנזימטית ללא כוללות בעיקר מולקולות המגיבות מהר יותר עם ROS בהשוואה למקרו-מולקולות תאיות, הגנה על מרכיבים תאיים חיוניים. למרות התפקיד המגן של ROS הטיהור אנזימים, כמה מולקולות ROS לברוח מנגנוני הגנה נוגדי חמצון ולגרום לנזק חמצוני. איתור, תיקון, והשפלה של המרכיבים התאיים הפגומים אסטרטגיות הגנה חיוניות בסטרס החמצונים 1,2. מסלולי איתות מעורבים בהתנגדות ללחץ ומתח במיוחד חמצוני הם מאוד שמורים באבולוציה 10,11. בניגוד לניסויי תא תרבות שבה תנאי האורגניזם הם בתמונות באופן חלקי בלבד, המחקר של סטרס חמצונים באורגניזמים מודל 12,13 יש משמעות רבה. ג elegans הוא נמטודות חיים חופשיים שיכול להיות בקלות ובזול רחוב ללאשניחן בדשא חיידקים על תקשורת אגר. הוא קטן בגודלם (כ 1 מ&quot;מ אורך) ובדרך כלל גדל כאנדרוגינוס דישון עצמי, המאפשר מניפולציות גנטיות. יש לה מחזור חיים מהיר ויכולת רבייה גבוהה, הפקה כ -300 צאצאים לדור, מה שהופך אותו לכלי רב עוצמה כדי לבצע מסכי גנטיים בקנה מידה גדולה 14. ג הגנום elegans הוא רצף באופן מלא ו40-50% מהגנים הם חזו להיות homologues של גנים הקשורים למחלות אנושיים 15-18. מציאה של גנים של עניין באמצעות RNAi היא מהירה וקל בג elegans. ג&#39;ין את הרגולציה יכול להיות מושגת על ידי האכלת בעלי החיים א חיידקי coli כי נמל פלסמיד המבטא את RNA פעמיים תקועים שמכוון את ה- mRNA של עניין 19. לכן, קביעת תפקוד גן באמצעות מסכי RNAi בקנה מידה גדולה יש השפעה רבה על הבנת מחלות בבני אדם, כולל סרטן 20,21. מחקרים של oהתנגדות מתח xidative בג elegans הוביל לזיהוי של מנגנוני שימור של התנגדות ללחץ חמצוני 13,22. כמה מסלולים המזוהים הם מסלולים נפוצים שלווסת אריכות ימים והתנגדות ללחצים אחרים, כמו גם כמו היפוקסיה, חום, ולחץ האוסמוטי. מסלולים אלה כוללים את איתות האינסולין, איתות TOR, וautophagy. מסלולים מרכזיים אחרים כרוכים סילוק רעלים של ROS כגון אנזימי סופראוקסיד דיסמוטאז ואנזימי catalase, או בתיקון נזק כגון חלבוני הלם חום ומלווה 11,13,22. פרוטוקול זה מתאר כיצד לקבוע את ההתנגדות ללחץ חמצוני של ג elegans בנוזל. השתמשנו flcn-1 (ok975) וחיות בר-סוג להפגין הפרוטוקול מאז שהראינו בעבר התנגדות מוגברת ללחץ חמצוני על אובדן flcn-1 (ok975) בג elegans 23. יש לנו גם הראה כי התנגדות מוגברת זה תלויהעל AMPK וautophagy, ציר איתות שמשפר bioenergetics הסלולרי ומקדם התנגדות מתח 23. PQ הוא לחץ חמצוני שמפריע לשרשרת הובלת אלקטרונים כדי לייצר מיני חמצן מגיב 24. אותו assay יכול להיות מותאם ומקורות ROS אחרים או תרכובות יצירת ROS יכולים לשמש כגון H 2 O 2 וrotenone. מבחני דומים פותחו על צלחות שבו ריכוזים נמוכים של PQ משמשים 25,26. היתרון של assay זה הוא שזה מאוד מהר, ויכול להיות שהושגו התוצאות ביום אחד. בנוסף, ההיקף הכולל של נוזל המשמש לביצוע assay התנגדות סטרס החמצונים ב 96 צלחות גם הוא נמוך בהשוואה לנפח המשמש להכנת לוחות PQ המכיל. לפיכך, הסכום של PQ משמש הוא בassay הנוזלי הוא נמוך, שהופך את assay זול ומגביל את הייצור של פסולת רעילה. עם זאת, מגבלות של assay זה בהשוואה למבחני צלחת כוללות להck של מזון בassay הנוזלי והריכוז הנמוך של חמצן בנוזל בהשוואה לאוויר. אלה הם גורמים חשובים שבמקרים מסוימים, עלול להשפיע על התוצאות. לכן, המאשר שחזור תוך שימוש בשיטות אחרות של התנגדות ללחץ חמצוני מומלץ לתמוך תוצאות שהתקבלו בassay זה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar bacteriological grade</td>
			<td>Multicell</td>
			<td>800-010-LG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacteriological peptone</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride biotechnology grade</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8503-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure tris hydrochloride</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15506-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris aminomethane</td>
			<td>Bio Basic Canada Inc</td>
			<td>77-86-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPTG</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-202185A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>69-52-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>8013-01-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl viologen dichloride hydrate</td>
			<td>Aldrich chemistry</td>
			<td>856177-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 60x15mm</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet 10ml</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1367520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>G-Biosciences</td>
			<td>RC-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M-5921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">Discovery v8 stereo zeiss microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well clear microtiter plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flcn-1 RNAi source</td>
			<td colspan="2">Ahringer Library</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring oxidative stress resistance of caenorhabditis elegans in 96-well microtiter plates

סטרס חמצונים, אשר הוא התוצאה של חוסר איזון בין ייצור וסילוק רעלים של מיני חמצן מגיבים, הוא תורם עיקרי להפרעות אנושיות כרוניות, כוללים לב וכלי דם ומחלות ניווניות, סוכרת, הזדקנות וסרטן. לכן, חשוב ללמוד סטרס חמצונים לא רק במערכות תא אלא גם באמצעות כל האורגניזמים. ג elegans הוא אורגניזם מודל אטרקטיבי ללמוד את הגנטיקה של מסלולי חמצוני אות מתח התמרה, אשר השמורים ביותר מבחינה אבולוציונית. כאן, אנו מספקים פרוטוקול למדידת התנגדות סטרס חמצונים בג elegans בנוזל. ריאגנטים לזמן קצר, ROS-התרמה כגון paraquat (PQ) ו- H 2 O 2 מומסים במאגר M9, ופתרונות aliquoted בבארות של צלחת microtiter 96 גם. L4 המסונכרן / מבוגרים צעירים ג בעלי החיים elegans מועברים לבארות (5-8 בעלי חיים / טוב) והישרדות נמדדתבכל שעה עד שרוב התולעים מתים. בעת ביצוע assay התנגדות סטרס חמצונים באמצעות ריכוז נמוך של לחץ בצלחות, הזדקנות עשויה להשפיע על התנהגותם של בעלי חיים על סטרס חמצונים, אשר עלול להוביל לפרשנות שגויה של הנתונים. עם זאת, בassay תאר במסמך זה, בעיה זה לא סביר שיתרחש שכן רק בעלי חיים מבוגרים צעירים L4 / נמצאים בשימוש. יתר על כן, פרוטוקול זה הוא זול ותוצאות מתקבלות ביום אחד, אשר הופך את הטכניקה הזאת אטרקטיבית למסכים גנטיים. בסך הכל, זה יעזור להבין מסלולי העברת אותות עקה חמצונית, שיכול להיות מתורגם לאפיון טוב יותר של הפרעות אנושיות הקשורים סטרס חמצונים.

השוואת wild-type ג elegans לflcn-1 (ok975) בעלי חיים מוטציה כאן אנו משמשים 100 מ&quot;מ PQ כדי לקבוע את ההתנגדות של ג wild-type elegans בעלי חיים בהשוואה לflcn-1 (ok975) אשר הוכח להתנגד סטרס חמצונים, חום, ואנוקסיה 23. לאחר 4 שעות של טיפול, 48.3% מברים-סוג שרד לעומת 77.8% הישרדות בflcn 1-חיות (ok975). כצפוי, flcn-1 (ok975) בעלי החיים מוטציה היו עמידים יותר בפני 100 מ&quot;מ PQ בהשוואה לפרא-סוג (איור 2 ולוח 1). השוואת חיות בר-סוג נמאס עם EV שליטה או flcn-1 חיידקי RNAi דומה לתוצאות שהוצגו בסעיף הקודם, את הרגולציה של flcn-1 RNAi באמצעות הגדיל את ההתנגדות 100 מ&quot;מ PQ. תוצאה זו מוכיחה כי את רגולציה של תפקוד גן באמצעות מחקה RNAi פסד של פונקציה מ &#39;<html> utation (איור 2 ולוח 1). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52746/52746fig1.jpg" /> איור 1. איור סכמטי של השיטה של קביעת התנגדות ללחץ חמצוני ב 96 צלחות גם בג elegans. / בעלי חיים מסונכרנים L4 צעירים מבוגרים גדלו על צלחות MYOB והאכילו עם OP50 חיידקי החיידק מועברים לבארות של צלחת microtiter 96 היטב המכילה 100 מ&quot;מ PQ והישרדות נמדדת לפי שעה עד מספר גדול של תולעים מתים. במקרה של knockdowns RNAi, באותו ההליך ואחריו פרט לכך שבעלי החיים המסונכרנים גדלים על צלחות בתוספת IPTG, וניזונים עם E. חיידקי coli HT115 מחסה פלסמיד שמציאת גן המטרה על ביטוי. קבצים / ftp_upload / 52746 / 52746fig2.jpg &quot;/&gt; הפסד איור 2. התנגדות FLCN-1 עולה לסטרס החמצונים בג elegans. (- B) הישרדות אחוזים עד 100 מ&quot;מ PQ של () WT וflcn-1 (ok975) בעלי חיים ומוטציה (ב) WT בעלי החיים שטופלו בשליטה או flcn-1 RNAi. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td colspan="5"> הישרדות אחוזים עד 100 מ&quot;מ PQ </td></tr><tr><td> שעה 1 </td><td> מתח, RNAi </td><td> אחוזים הישרדות (± סטיית תקן) </td><td> P ערך </td><td> מספר הניסויים </td><td> מספר כולל של תולעים </td></tr><tr><td></td><td> WT </td><td> 82.38 ± 1.31 </td><td align="right"> 0.0002 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </td><td> 99.03 ± 1.67 </td><td></td><td align="right"> 3 </td&gt; <td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> WT; שליטה </td><td> 91.70 ± 0.55 </td><td align="right"> .0462 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> WT; flcn-1 (RNAi) </td><td> 95.93 ± 2.48 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2 שעות </td><td> מתח, RNAi </td><td> אחוזים הישרדות (± סטיית תקן) </td><td> P ערך </td><td> מספר הניסויים </td><td> מספר כולל של תולעים </td></tr><tr><td></td><td> WT </td><td> 72.13 ± 7.13 </td><td align="right"> 0.005 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </td><td> 96.33 ± 2.28 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> WT; שליטה </td><td> -80.27 ± 5.34 </td><td align="right"> .0261 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> WT; flcn-1 (RNAi) </td><td> 91.23 ± 1.42 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 שעות </td><td> מתח, RNAi </td><td> אחוזים הישרדות (± סטיית תקן) </td><td> P ערך </td><td> מספר הניסויים </td><td> מספר כולל של תולעים </td></tr><tr><td></td><td> WT </td><td> 55.37 ± 4.72 </td><td align="right"> 0.0004 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </eמ &#39;&gt; </td><td> 87.00 ± 1.36 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> WT; שליטה </td><td> 70.77 ± 3.50 </td><td align="right"> 0.0027 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> WT; flcn-1 (RNAi) </td><td> 87.63 ± 2.67 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4 שעות </td><td> מתח, RNAi </td><td> אחוזים הישרדות (± סטיית תקן) </td><td> P ערך </td><td> מספר הניסויים </td><td> מספר כולל של תולעים </td></tr><tr><td></td><td> WT </td><td> 48.30 ± 6.39 </td><td align="right"> 0.002 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </td><td> 77.80 ± 3.12 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> WT; שליטה </td><td> 63.77 ± 0.66 </td><td align="right"> .0122 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> WT; flcn-1 (RNAi) </td><td> -80.57 ± 6.68 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 5 שעות </td><td> מתח, RNAi </td><td> אחוזים הישרדות (± סטיית תקן) </td><td> P ערך </td><td> מספר הניסויים </td><td> מספר כולל של תולעים </td></tr><tr><td></td><td> WT </td><td> 41.60 ± 8.33 </td><td align="right"> .0062 </td><td align="right"> 3 </td><td align = &quot;right&quot;&gt; 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </td><td> 67.43 ± 1.42 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> WT; שליטה </td><td> 60.53 ± 2.58 </td><td align="right"> .0313 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> WT; flcn-1 (RNAi) </td><td> 71.53 ± 5.24 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 שעות </td><td> מתח, RNAi </td><td> אחוזים הישרדות (± סטיית תקן) </td><td> P ערך </td><td> מספר הניסויים </td><td> מספר כולל של תולעים </td></tr><tr><td></td><td> WT </td><td> 34.86 ± 5.88 </td><td align="right"> .0021 </tד&gt; <td align="right"> 3 </td><td align="right"> 210 </td></tr><tr><td></td><td> flcn-1 (ok975) </td><td> 60.34 ± 2.05 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 224 </td></tr><tr><td></td><td> WT; שליטה </td><td> 44.43 ± 3.93 </td><td align="right"> .0042 </td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 202 </td></tr><tr><td></td><td> WT; flcn-1 (RNAi) </td><td> 62.13 ± 3.44 </td><td></td><td align="right"> 3 </td><td align="right"> 207 </td></tr></tbody></table> סיכום 1. לוח תוצאות והניתוח סטטיסטי של התנגדות סטרס חמצונים מאיור 2.

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates at JoVE.com

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

C. elegans is an attractive model organism to study signal transduction pathways involved in oxidative stress resistance. Here we provide a protocol to measure oxidative stress resistance of C. elegans animals in liquid phase, using several oxidizing agents in 96 well plates.

מדידת התנגדות סטרס חמצוני של<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; בצלחות microtiter 96-היטב

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic ...

measuring-oxidative-stress-resistance-caenorhabditis-elegans-96-well

Google

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

15.3K Views.  McGill University. C. elegans is an attractive model organism to study signal transduction pathways involved in oxidative stress resistance. Here we provide a protocol to measure oxidative stress resistance of C. elegans animals in liquid phase, using several oxidizing agents in 96 well plates. 

Video: Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode Caenorhabditis elegans has emerged as a principal model used to study the biology of aging. Because virtually every biological subsystem undergoes functional decline with increasing age, life span is the primary endpoint of interest when considering total rate of aging. In nematodes, life span is typically defined as the number of days an animal remains responsive to external stimuli. Nematodes can be propagated either in liquid media or on solid media in plates, and techniques have been developed for measuring life span under both conditions. Here we present a generalized protocol for measuring life span of nematodes maintained on solid nematode growth media and fed a diet of UV-killed bacteria. These procedures can easily be adapted to assay life span under various common conditions, including a diet consisting of live bacteria, dietary restriction, and RNA interference.

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

In this article we present a general protocol for measuring life span of nematodes maintained on solid media with UV-killed bacterial food.

מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח על מדיה מוצק

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode ...

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and hermaphrodites. In the earlier phase of gametogenesis, the germ cells of hermaphrodites differentiate into limited number of sperm - around 300 - and are stored in a small 'bag' called the spermatheca. Later on, hermaphrodites continually produce oocytes1. In contrast, males produce exclusively sperm throughout their adulthood. The males produce so much sperm that it accounts for &gt;50% of the total cells in a typical adult worm2. Therefore, isolating sperm from males is easier than from that of hermaphrodites.
Only a small proportion of males are naturally generated due to spontaneous non-disjunction of X chromosome3. Crossing hermaphrodites with males or more conveniently, the introduction of mutations to give rise to Him (High Incidence of Males) phenotype are some of strategies through which one can enrich the male population3.
Males can be easily distinguished from hermaphrodites by observing the tail morphology4. Hermaphrodite's tail is pointed, whereas male tail is rounded with mating structures.
Cutting the tail releases vast number of spermatids stored inside the male reproductive tract. Dissection is performed under a stereo microscope using 27 gauge needles. Since spermatids are not physically connected with any other cells, hydraulic pressure expels internal contents of male body, including spermatids2.
Males are directly dissected on a small drop of 'Sperm Medium'. Spermatids are sensitive to alteration in the pH. Hence, HEPES, a compound with good buffering capacity is used in sperm media. Glucose and other salts present in sperm media help maintain osmotic pressure to maintain the integrity of sperm.
Post-meiotic differentiation of spermatids into spermatozoa is termed spermiogenesis or sperm activation. Shakes5, and Nelson6 previously showed that round spermatids can be induced to differentiate into spermatozoa by adding various activating compounds including Pronase E. Here we demonstrate in vitro spermiogenesis of C. elegans spermatids using Pronase E.
Successful spermiogenesis is pre-requisite for fertility and hence the mutants defective in spermiogenesis are sterile. Hitherto several mutants have been shown to be defective specifically in spermiogenesis process7. Abnormality found during in vitro activation of novel Spe (Spermatogenesis defective) mutants would help us discover additional players participating in this event.

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

A protocol for isolating and activating spermatids from male C. elegans is described here. Cutting the posterior end of male releases spermatids. The spermatids can be activated by addition of protease.

בידוד במבחנה הפעלת Caenorhabditis elegans זרע

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor mutations in components of age-regulatory pathways. If these mutations perturb the function of the age-regulatory pathway and therefore alter the lifespan of the entire organism, they provide important mechanistic insights1-3.
Another strategy to investigate the regulation of lifespan is to use small molecules to perturb age-regulatory pathways. To date, a number of molecules are known to extend lifespan in various model organisms and are used as tools to study the biology of aging4-16. The number of molecules identified thus far is small compared to the genetic "toolset" that is available to study the biology of aging.
Caenorhabditis elegans is one of the principle models used to study aging because of its excellent genetics and short lifespan of three weeks. More recently, C.elegans has emerged as a model organism for phenotype based drug screens5,7,16-20 because of its small size and its ability to grow in microtiter plates.
Here we present an assay to measure C.elegans lifespan in 96 well microtiter plates. The assay was developed and successfully used to screen large libraries for molecules that extend C.elegans lifespan7. The reliability of the assay was evaluated in multiple tests: first, by measuring the lifespan of wild type animals grown at different temperatures; second, by measuring the lifespan of mutants with altered lifespans; third, by measuring changes in lifespan in response to different concentrations of the antidepressant Mirtazepine. Mirtazepine has previously been shown to extend lifespan in C.elegans7. The results of these tests show that the assay is able to replicate previous findings from other assays and is quantitative. The microtiter format also makes this lifespan assay compatible with automated liquid handling systems and allows integration into automated platforms.

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

In this protocol we present a method to measure Caenorhabditis elegans lifespan in 96 well microtiter plates.

מדידת Caenorhabditis elegans חיים טווח של 96 צלחות microtiter טוב

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes. The transparency of the 
embryos, the genetic resources, and the relative ease of transformation are qualities that make C. elegans an excellent model for early embryogenesis. Laser-based 
confocal microscopy and fluorescently labeled tags allow researchers to follow specific cellular structures and proteins in the developing embryo. For example, 
one can follow specific organelles, such as lysosomes or mitochondria, using fluorescently labeled dyes. These dyes can be delivered to the early embryo by means 
of microinjection into the adult gonad. Also, the localization of specific proteins can be followed using fluorescent protein tags. Examples are presented here 
demonstrating the use of a fluorescent lysosomal dye as well as fluorescently tagged histone and ubiquitin proteins. The labeled histone is used to visualize 
the DNA and thus identify the stage of the cell cycle. GFP-tagged ubiquitin reveals the dynamics of ubiquitinated vesicles in the early embryo. Observations 
of labeled lysosomes and GFP:: ubiquitin can be used to determine if there is colocalization between ubiquitinated vesicles and lysosomes. A technique for 
the microinjection of the lysosomal dye is presented. Techniques for generating transgenenic strains are presented elsewhere (1, 2). For imaging, embryos 
are cut out of adult hermaphrodite nematodes and mounted onto 2% agarose pads followed by time-lapse microscopy on a standard laser scanning confocal 
microscope or a spinning disk confocal microscope. This methodology provides for the high resolution visualization of early embryogenesis.

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

This article describes a technique for the visualization of the early events of embryogenesis in the nematode Caenorhabditis elegans.

זמן לשגות מיקרוסקופית של העובר בשלב מוקדם Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Ice-Cap: A Method for Growing Arabidopsis and Tomato Plants in 96-well Plates for High-Throughput Genotyping

It is becoming common for plant scientists to develop projects that require the genotyping of large numbers of plants. The first step in any genotyping project is to collect a tissue sample from each individual plant. The traditional approach to this task is to sample plants one-at-a-time. If one wishes to genotype hundreds or thousands of individuals, however, using this strategy results in a significant bottleneck in the genotyping pipeline. The Ice-Cap method that we describe here provides a high-throughput solution to this challenge by allowing one scientist to collect tissue from several thousand seedlings in a single day 1,2. This level of throughput is made possible by the fact that tissue is harvested from plants 96-at-a-time, rather than one-at-a-time.
The Ice-Cap method provides an integrated platform for performing seedling growth, tissue harvest, and DNA extraction. The basis for Ice-Cap is the growth of seedlings in a stacked pair of 96-well plates. The wells of the upper plate contain plugs of agar growth media on which individual seedlings germinate. The roots grow down through the agar media, exit the upper plate through a hole, and pass into a lower plate containing water. To harvest tissue for DNA extraction, the water in the lower plate containing root tissue is rapidly frozen while the seedlings in the upper plate remain at room temperature. The upper plate is then peeled away from the lower plate, yielding one plate with 96 root tissue samples frozen in ice and one plate with 96 viable seedlings. The technique is named "Ice-Cap" because it uses ice to capture the root tissue. The 96-well plate containing the seedlings can then wrapped in foil and transferred to low temperature. This process suspends further growth of the seedlings, but does not affect their viability. Once genotype analysis has been completed, seedlings with the desired genotype can be transferred from the 96-well plate to soil for further propagation. We have demonstrated the utility of the Ice-Cap method using Arabidopsis thaliana, tomato, and rice seedlings. We expect that the method should also be applicable to other species of plants with seeds small enough to fit into the wells of 96-well plates.

Ice-Cap: A Method for Growing Arabidopsis and Tomato Plants in 96-well Plates for High-Throughput Genotyping

The Ice-Cap method allows one to grow plants in 96-well plates and non-destructively harvest root tissue from each seedling. DNA extracted from this root tissue can be used for genotyping reactions. We have found that Ice-Cap works well for Arabidopsis thaliana, tomato, and rice seedlings.

Ice יתר: שיטה גידול ארבידופסיס צמחים עגבניות ב 96-פלטות היטב genotyping תפוקה גבוהה

It is becoming common for plant scientists to develop projects that require the genotyping of large numbers of plants. The first step in any genotyping ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has since been used extensively as a model organism 1. C. elegans possesses key attributes such as simplicity, transparency and short life cycle that have made it a suitable experimental system for fundamental biological studies for many years 2. Discoveries in this nematode have broad implications because many cellular and molecular processes that control animal development are evolutionary conserved 3.
C. elegans life cycle goes through an embryonic stage and four larval stages before animals reach adulthood. Development can take 2 to 4 days depending on the temperature. In each of the stages several characteristic traits can be observed. The knowledge of its complete cell lineage 4,5 together with the deep annotation of its genome turn this nematode into a great model in fields as diverse as the neurobiology 6, aging 7,8, stem cell biology 9 and germ line biology 10. 
An additional feature that makes C. elegans an attractive model to work with is the possibility of obtaining populations of worms synchronized at a specific stage through a relatively easy protocol. The ease of maintaining and propagating this nematode added to the possibility of synchronization provide a powerful tool to obtain large amounts of worms, which can be used for a wide variety of small or high-throughput experiments such as RNAi screens, microarrays, massive sequencing, immunoblot or in situ hybridization, among others. 
Because of its transparency, C. elegans structures can be distinguished under the microscope using Differential Interference Contrast microscopy, also known as Nomarski microscopy. The use of a fluorescent DNA binder, DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole), for instance, can lead to the specific identification and localization of individual cells, as well as subcellular structures/defects associated to them.

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

The easiness of maintaining and propagating the nematode C. elegans make it a nice model organism to work with. The possibility of synchronizing worms allows the work with a significant amount of subjects at the same developmental stage, what facilitates the study of one particular process in many animals.

בסיסי<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; שיטות: סנכרון תצפית

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, which are lipid signals derived from polyunsaturated fatty acids (PUFAs)10-14. These signalling molecules are difficult to study because of their low abundance and reactive nature. The characteristic feature of prostaglandins is a cyclopentane ring structure located within the fatty acid backbone. In mammals, prostaglandins can be formed through cyclooxygenase enzyme-dependent and -independent pathways10,15. C. elegans synthesizes a wide array of prostaglandins independent of cyclooxygenases6,16,17. A large class of F-series prostaglandins has been identified, but the study of eicosanoids is at an early stage with ample room for new discoveries. Here we describe a procedure for extracting and analyzing prostaglandins and other eicosanoids. Charged lipids are extracted from mass worm cultures using a liquid-liquid extraction technique and analyzed by liquid chromatography coupled to electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). The inclusion of deuterated analogs of prostaglandins, such as PGF2 &alpha;-d4 as an internal standard is recommended for quantitative analysis. Multiple reaction monitoring or MRM can be used to quantify and compare specific prostaglandin types between wild-type and mutant animals. Collision-induced decomposition or MS/MS can be used to obtain information on important structural features. Liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS) survey scans of a selected mass range, such as m/z 315-360 can be used to evaluate global changes in prostaglandin levels. We provide examples of all three analyses. These methods will provide researchers with a toolset for discovering novel eicosanoids and delineating their metabolic pathways.

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

In this paper, we describe an optimized procedure for extracting and analyzing prostaglandins and other eicosanoids from C. elegans using LC-MS/MS.

הפקה וניתוח בפרוסטגלנדין<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes oxidation of molecules (lipid, DNA, protein) and leads to cell death. Oxidative stress also impacts the progression of several pathological conditions such as diabetes, retinopathies, neurodegeneration, and cancer. Thus, it is important to define tools to investigate oxidative stress conditions not only at the level of single cells but also in the context of whole organisms. Here, we consider the zebrafish embryo as a useful in vivo system to perform such studies and present a protocol to measure in vivo oxidative stress. Taking advantage of fluorescent ROS probes and zebrafish transgenic fluorescent lines, we develop two different methods to measure oxidative stress in vivo: i) a &#8220;whole embryo ROS-detection method&#8221; for qualitative measurement of oxidative stress and ii) a &#8220;single-cell&#160;ROS detection method&#8221; for quantitative measurements of oxidative stress. Herein, we demonstrate the efficacy of these procedures by increasing oxidative stress in tissues by oxidant agents and physiological or genetic methods. This protocol is amenable for forward genetic screens and it will help address cause-effect relationships of ROS in animal models of oxidative stress-related pathologies such as neurological disorders and cancer.

Here we report a protocol to measure oxidative stress in living zebrafish embryos. This procedure allows reactive oxygen species (ROS) detection in both whole embryo tissues and single-cell populations. This protocol will accomplish both qualitative and quantitative analyses.

ניתוח של סטרס חמצוני בעוברי דג הזברה

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we know about C. elegans is limited to laboratory cultivation of the nematodes that may not necessarily reflect the environments they normally inhabit in nature. Cultivation of C. elegans in a 3D habitat that is more similar to the 3D matrix that worms encounter in rotten fruits and vegetative compost in nature could reveal novel phenotypes and behaviors not observed in 2D. In addition, experiments in 3D can address how phenotypes we observe in 2D are relevant for the worm in nature. Here, a new method in which C. elegans grows and reproduces normally in three dimensions is presented. Cultivation of C. elegans in Nematode Growth Tube-3D (NGT-3D) can allow us to measure the reproductive fitness of C. elegans strains or different conditions in a 3D environment. We also present a novel method, termed Nematode Growth Bottle-3D (NGB-3D), to cultivate C. elegans in 3D for microscopic analysis. These methods allow scientists to study C. elegans biology in conditions that are more reflective of the environments they encounter in nature. These can help us to understand the overlying evolutionary relevance of the physiology and behavior of C. elegans we observe in the laboratory.

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

We present a simple method to construct 3D nematode cultivation systems called NGT-3D and NGB-3D. These can be used to study nematode fitness and behaviors in habitats that are more similar to natural Caenorhabditis elegans habitats than the standard 2D laboratory C. elegans culture plates.

טיפוח<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; ב בשלושה ממדים במעבדה

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we ...

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous system and muscle. Consistent with this, mitochondrial dysfunction has been associated with a myriad of neurodegenerative diseases and aging in general. Caenorhabditis elegans have been a powerful model system for elucidating the many intricacies of mitochondrial function. Mitochondrial respiration is a strong indicator of mitochondrial function and recently developed respirometers offer a state-of-the-art platform to measure respiration in cells. In this protocol, we provide a technique to analyze live, intact C. elegans. This protocol spans a period of ~7 days and includes steps for (1) growing and synchronization of C. elegans, (2) preparation&#160;of compounds to be injected and hydration of probes, (3) drug loading and cartridge equilibration, (4) preparation of worm assay plate and assay run, and (5) post-experiment data analysis.

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Mitochondrial respiration is critical for organismal survival; therefore, oxygen consumption rate is an excellent indicator of mitochondrial health. In this protocol, we describe the use of a commercially available respirometer to measure basal and maximal oxygen consumption rates in live, intact, and freely-motile Caenorhabditis elegans.

מדידה של קצב הצריכה של חמצן בשלם Caenorhabditis elegans

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous ...