המחקר הנוכחי נתמכה על ידי ERC מתקדם החוקר גרנט (Pa-CSC 233,460), השביעית תכנית המסגרת של הקהילה האירופית (FP7 / 2007-2013) במסגרת הסכם מענק לא 256,974 (EPC-TM-NET) ולא 602,783 (CAM-פאק ), Subdirección גנרל דה Evaluación y Fomento de la Investigación, Fondo de Investigación תי-המרפא (PS09 / 02,129 &amp; PI12 / 02,643), ופרוגרמת Nacional de Internacionalización דה לה אני + D, Subprogramma: FCCI 2009 (PLE2009-0105; Ministerio דה Economía y Competitividad, ספרד). א Lonardo נתמכה על ידי רוש מלגה. מ &#39;שפי נתמכה על ידי predoctoral מלגת תכנית La Caixa.

<ol>
	<li>Whipple, C. A., Young, A. L., Korc, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+KrasG12D-driven+genetic+mouse+model+of+pancreatic+cancer+requires+glypican-1+for+efficient+proliferation+and+angiogenesis.">A KrasG12D-driven genetic mouse model of pancreatic cancer requires glypican-1 for efficient proliferation and angiogenesis.</a> Oncogene. 31 (20), 2535-2544 (2012).</li><li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas.">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nat Protoc. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li><li>Rahib, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projecting+cancer+incidence+and+deaths+to+2030:+the+unexpected+burden+of+thyroid,+liver,+and+pancreas+cancers+in+the+United+States.">Projecting cancer incidence and deaths to 2030: the unexpected burden of thyroid, liver, and pancreas cancers in the United States.</a> Cancer Res. 74 (11), 2913-2921 (2014).</li><li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 62 (1), 10-29 (2012).</li><li>Burris, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvements+in+survival+and+clinical+benefit+with+gemcitabine+as+first-line+therapy+for+patients+with+advanced+pancreas+cancer:+a+randomized+trial.">Improvements in survival and clinical benefit with gemcitabine as first-line therapy for patients with advanced pancreas cancer: a randomized trial.</a> J Clin Oncol. 15 (6), 2403-2413 (1997).</li><li>Moore, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erlotinib+plus+gemcitabine+compared+with+gemcitabine+alone+in+patients+with+advanced+pancreatic+cancer:+a+phase+III+trial+of+the+National+Cancer+Institute+of+Canada+Clinical+Trials+Group.">Erlotinib plus gemcitabine compared with gemcitabine alone in patients with advanced pancreatic cancer: a phase III trial of the National Cancer Institute of Canada Clinical Trials Group.</a> J Clin Oncol. 25 (15), 1960-1966 (2007).</li><li>Cunningham, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+III+randomized+comparison+of+gemcitabine+versus+gemcitabine+plus+capecitabine+in+patients+with+advanced+pancreatic+cancer.">Phase III randomized comparison of gemcitabine versus gemcitabine plus capecitabine in patients with advanced pancreatic cancer.</a> J Clin Oncol. 27 (33), 5513-5518 (2009).</li><li>Von Hoff, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+survival+in+pancreatic+cancer+with+nab-paclitaxel+plus+gemcitabine.">Increased survival in pancreatic cancer with nab-paclitaxel plus gemcitabine.</a> N Engl J Med. 369 (18), 1691-1703 (2013).</li><li>Conroy, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FOLFIRINOX+versus+gemcitabine+for+metastatic+pancreatic+cancer.">FOLFIRINOX versus gemcitabine for metastatic pancreatic cancer.</a> N Engl J Med. 364 (19), 1817-1825 (2011).</li><li>Gourgou-Bourgade, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+FOLFIRINOX+compared+with+gemcitabine+on+quality+of+life+in+patients+with+metastatic+pancreatic+cancer:+results+from+the+PRODIGE+4/ACCORD+11+randomized+trial.">Impact of FOLFIRINOX compared with gemcitabine on quality of life in patients with metastatic pancreatic cancer: results from the PRODIGE 4/ACCORD 11 randomized trial.</a> J Clin Oncol. 31 (1), 23-29 (2013).</li><li>Yachida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distant+metastasis+occurs+late+during+the+genetic+evolution+of+pancreatic+cancer.">Distant metastasis occurs late during the genetic evolution of pancreatic cancer.</a> Nature. 467 (7319), 1114-1117 (2010).</li><li>Garcia-Silva, S., Frias-Aldeguer, J., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+&amp;+pancreatic+cancer.">Stem cells &amp; pancreatic cancer.</a> Pancreatology. 13 (2), 110-113 (2013).</li><li>Hermann, P. C., Mueller, M. T., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+cancer+stem+cells--insights+and+perspectives.">Pancreatic cancer stem cells--insights and perspectives.</a> Expert Opin Biol Ther. 9 (10), 1271-1278 (2009).</li><li>Hermann, P. C., Huber, S. L., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+cancer+stem+cells:+a+new+target+for+anti-cancer+therapy.">Metastatic cancer stem cells: a new target for anti-cancer therapy.</a> Cell Cycle. 7 (2), 188-193 (2008).</li><li>Hermann, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+populations+of+cancer+stem+cells+determine+tumor+growth+and+metastatic+activity+in+human+pancreatic+cancer.">Distinct populations of cancer stem cells determine tumor growth and metastatic activity in human pancreatic cancer.</a> Cell Stem Cell. 1 (3), 313-323 (2007).</li><li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+pancreatic+cancer+stem+cells.">Identification of pancreatic cancer stem cells.</a> Cancer Res. 67 (3), 1030-1037 (2007).</li><li>Kreso, A., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+cancer+stem+cell+model.">Evolution of the cancer stem cell model.</a> Cell Stem Cell. 14 (3), 275-291 (2014).</li><li>Gallmeier, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+ataxia+telangiectasia-+and+Rad3-related+function+abrogates+the+in+vitro+and+in+vivo+tumorigenicity+of+human+colon+cancer+cells+through+depletion+of+the+CD133(+)+tumor-initiating+cell+fraction.">Inhibition of ataxia telangiectasia- and Rad3-related function abrogates the in vitro and in vivo tumorigenicity of human colon cancer cells through depletion of the CD133(+) tumor-initiating cell fraction.</a> Stem Cells. 29 (3), 418-429 (2011).</li><li>Hermann, P. C., Bhaskar, S., Cioffi, M., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells+in+solid+tumors.">Cancer stem cells in solid tumors.</a> Semin Cancer Biol. 20 (2), 77-84 (2010).</li><li>Mueller, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+targeted+treatment+to+eliminate+tumorigenic+cancer+stem+cells+in+human+pancreatic+cancer.">Combined targeted treatment to eliminate tumorigenic cancer stem cells in human pancreatic cancer.</a> Gastroenterology. 137 (3), 1102-1113 (2009).</li><li>Lonardo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nodal/Activin+signaling+drives+self-renewal+and+tumorigenicity+of+pancreatic+cancer+stem+cells+and+provides+a+target+for+combined+drug+therapy.">Nodal/Activin signaling drives self-renewal and tumorigenicity of pancreatic cancer stem cells and provides a target for combined drug therapy.</a> Cell Stem Cell. 9 (5), 433-446 (2011).</li><li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=c-Met+is+a+marker+of+pancreatic+cancer+stem+cells+and+therapeutic+target.">c-Met is a marker of pancreatic cancer stem cells and therapeutic target.</a> Gastroenterology. 141 (6), 2218-2227 (2011).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+restricted+cell+population+propagates+glioblastoma+growth+after+chemotherapy.">A restricted cell population propagates glioblastoma growth after chemotherapy.</a> Nature. 488 (7412), 522-526 (2012).</li><li>Schepers, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+tracing+reveals+Lgr5++stem+cell+activity+in+mouse+intestinal+adenomas.">Lineage tracing reveals Lgr5+ stem cell activity in mouse intestinal adenomas.</a> Science. 337 (6095), 730-735 (2012).</li><li>Driessens, G., Beck, B., Caauwe, A., Simons, B. D., Blanpain, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+mode+of+tumour+growth+by+clonal+analysis.">Defining the mode of tumour growth by clonal analysis.</a> Nature. 488 (7412), 527-530 (2012).</li><li>Shaw, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kinase+LKB1+mediates+glucose+homeostasis+in+liver+and+therapeutic+effects+of+metformin.">The kinase LKB1 mediates glucose homeostasis in liver and therapeutic effects of metformin.</a> Science. 310 (5754), 1642-1646 (2005).</li><li>Martin-Castillo, B., Vazquez-Martin, A., Oliveras-Ferraros, C., Menendez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metformin+and+cancer:+doses,+mechanisms+and+the+dandelion+and+hormetic+phenomena.">Metformin and cancer: doses, mechanisms and the dandelion and hormetic phenomena.</a> Cell Cycle. 9 (6), 1057-1064 (2010).</li><li>Honjo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metformin+sensitizes+chemotherapy+by+targeting+cancer+stem+cells+and+the+mTOR+pathway+in+esophageal+cancer.">Metformin sensitizes chemotherapy by targeting cancer stem cells and the mTOR pathway in esophageal cancer.</a> Int J Oncol. 45 (2), 567-574 (2014).</li><li>Wurth, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metformin+selectively+affects+human+glioblastoma+tumor-initiating+cell+viability:+A+role+for+metformin-induced+inhibition+of+Akt.">Metformin selectively affects human glioblastoma tumor-initiating cell viability: A role for metformin-induced inhibition of Akt.</a> Cell Cycle. 12 (1), 145-156 (2013).</li><li>Cufi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metformin-induced+preferential+killing+of+breast+cancer+initiating+CD44+CD24-/low+cells+is+sufficient+to+overcome+primary+resistance+to+trastuzumab+in+HER2++human+breast+cancer+xenografts.">Metformin-induced preferential killing of breast cancer initiating CD44+CD24-/low cells is sufficient to overcome primary resistance to trastuzumab in HER2+ human breast cancer xenografts.</a> Oncotarget. 3 (4), 395-398 (2012).</li><li>Lonardo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metformin+targets+the+metabolic+achilles+heel+of+human+pancreatic+cancer+stem+cells.">Metformin targets the metabolic achilles heel of human pancreatic cancer stem cells.</a> PLoS One. 8 (10), e76518 (2013).</li><li>Gu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+B27+supplement+on+promoting+in+vitro+propagation+of+Her2/neu-transformed+mammary+tumorspheres.">The effect of B27 supplement on promoting in vitro propagation of Her2/neu-transformed mammary tumorspheres.</a> J Biotech Res. 3, 7-11 (2011).</li><li>Ishizawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-initiating+cells+are+rare+in+many+human+tumors.">Tumor-initiating cells are rare in many human tumors.</a> Cell Stem Cell. 7 (3), 279-282 (2010).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255 (5052), 1707-1710 (1992).</li><li>Singec, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+actual+sensitivity+and+specificity+of+the+neurosphere+assay+in+stem+cell+biology.">Defining the actual sensitivity and specificity of the neurosphere assay in stem cell biology.</a> Nat Methods. 3 (10), 801-806 (2006).</li><li>Lawson, D. A., Xin, L., Lukacs, R. U., Cheng, D., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+functional+characterization+of+murine+prostate+stem+cells.">Isolation and functional characterization of murine prostate stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (1), 181-186 (2007).</li><li>Seaberg, R. M., van der Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+rodent+neurogenic+regions:+the+ventricular+subependyma+contains+neural+stem+cells,+but+the+dentate+gyrus+contains+restricted+progenitors.">Adult rodent neurogenic regions: the ventricular subependyma contains neural stem cells, but the dentate gyrus contains restricted progenitors.</a> J Neurosci. 22 (5), 1784-1793 (2002).</li><li>Jimeno, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+pancreatic+cancer+xenograft+model+as+a+platform+for+cancer+stem+cell+therapeutic+development.">A direct pancreatic cancer xenograft model as a platform for cancer stem cell therapeutic development.</a> Mol Cancer Ther. 8 (2), 310-314 (2009).</li><li>Hirschmann-Jax, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+distinct+'side+population'+of+cells+with+high+drug+efflux+capacity+in+human+tumor+cells.">A distinct 'side population' of cells with high drug efflux capacity in human tumor cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (39), 14228-14233 (2004).</li><li>Miranda-Lorenzo, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+autofluorescence:+a+biomarker+for+epithelial+cancer+stem+cells.">Intracellular autofluorescence: a biomarker for epithelial cancer stem cells.</a> Nat Methods. 11 (11), 1161-1169 (2014).</li></ol>

יש הסופרים שום עניין מתחרה לחשוף.

עם הופעתה ולאחר מכן אימות של מושג CSC לגידולים רבים, תחום פיתוח תרופות צבר תאוצה חדשה, עם הפוטנציאל לפיתוח טיפולים יעילים יותר בסרטן ובהמשך הפחתת סיכון להשנות מחלה. עם זאת, בתחום CSC הוא עדיין במצב מוקדם יותר וצריכים להיות מושגים במונחים של הבנת מקור CSC והתפשטות, ותפקידם בעיצוב ארכיטקטורת הגידול וקידום גרורות. בהקשר זה, השימוש במבחני CSC לשחזור ומשמעותיים, כמו גם את הפרשנות מושכלת של נתונים המתקבלים מהווה מרכיב חיוני לקידום ההבנה של הביולוגיה CSC שלנו. מהרבה נקודות מבט ביולוגיות, היווצרות הכדור התפתחה כassay יקר מאוד; בכל זאת משתמשים צריכים להיות מודעים למגבלותיה כדי לפרש כראוי תוצאות הניסויים שלהם. היבט חשוב לשקול עוד לפני ההערכה של פורם תחוםנתונים tion הוא המקור של המדגם נחקר, שכן התוצאות המתקבלות מדגימות שמקורם בחולה טריות יכולות להיות שונות באופן משמעותי מאלה המתקבלים משורות תאי הסרטן שהוקמו. מבחני היווצרות כדור קלאסיים כרוכים בזריעת תאים בצפיפות משובט בצלחות ultralow-התקשרות והערכת היווצרות כדור בנוכחות גורם הגדילה באפידרמיס (EGF) ו / או הגורם בסיסי צמיחת פיברובלסטים (ב-FGF) מועשר, אבל בינוני סרום ללא 21, 34. הרכב בינוני התרבות הוא גם נושא חשוב לשקול. מניסיוננו מצאנו כי DMEM / F12 בתוספת B27, bFGF וגלוטמין בהעדר הסרום היה בינוני אופטימלי לגדול, להתרחב ולשמור על CSC בתנאים שלא עברו התמיינות. מצאנו כי במצב זה תרבות (בינוני והשעיה) התאים לבטא כמויות גבוהות של סמני תא גזע סרטני (כולל CD133 +, CD44 + וCD24 +) ואינו מבטאים את החלבונים הקשורים בידול (CK-20 וCK-19). אחת מהנחות היסוד למבחנים אלה הוא שכל תחום הוא משובט, כלומר, כדור אחד כתוצאה מהתרחבות של תאי גזע בודדים. עם זאת, התחומים הם במהות מבנים דינמיים שנוטים הפתיל אפילו בצפיפות זריעה נמוכה 35. תאי ציפוי הוא שלב קריטי בפרוטוקול והצפיפות של תא אחד / טוב בהחלט יכול לעקוף את הבעיה הצבירה. אבל גם לאבות מסודרים מכאן ולהבא, זה תוצאות באופן קבוע בהיווצרות כדור נמוכה מאוד בשל פעילות היווצרות כדור פנימית נמוכה ויכול גם להיות מיוחס לגירוי autocrine מוגבל בשל תופעות דילול. מניסיוננו אנו ציינו כי רק 30% מתאים מצופים מסוגלים ליצור כדורים. אנו ממליצים להשתמש בלפחות 100 תאים / טובים כדי להשיג תוצאות עקביות לשחזור. שיטות אחרות לתרבות CSC צמיחה מבוססות על תרבויות 3D מוצקות או חצי מוצק (למשל, מבוססת על מ &#39;atrigel, קולגן או methylcellulose). שיטות אלה היו בשימוש כדי להגביל את הניידות תא ותא צבירה לאחר 36. עם זאת, כל אחד ממטריצות אלה נושא מגבלות שלהם. לדוגמא, matrigel הוא קרום מסיס מרתף מבודד מEngelbreth-הולם-סוואן (EHS) גידול ואף לחלץ דומה סביבת גידול תאית המורכבת הנמצאת ברקמות רבות, הוא מכיל גורמי גדילה מוגדרים יותר או פחות מרובים אשר לעתים קרובות הופך מכניסטית לימודים לאלמנטי רגולציה ספציפיים קשים מאוד. נקודת השיקול נוספת היא שפונקציות תא קיבולת וגזע יוצרי תחום אינן תנאים להחלפה 34. בעוד תאי גזע ואב מסוימים הוכחו תערוכה כישלון להרכיב תחום יכולת 37, ליצור כדורים במבחנה אינו שולל in vivo תפקוד גזע / אב. לדוגמא, תאי גזע שקטים יכולים פשוט לא להגיב לרמזים תאיים הניתנים על ידינבחר בתנאי תרבות חוץ גופית. כך, לטווח ארוך במבחנה וביכולת התחדשות עצמית vivo של אוכלוסיות תאים מטוהרים, מעדיף בpassaging הסידורי, יש לבחון על מנת להוכיח או להפריך תפקוד תא גזע. בהקשר זה, את היכולת מכאן ולהבא ובו זמנית כדי להפיץ אוכלוסיות מגוונות של תאי גזע ואב הוא היבט קריטי של assay יוצרי תחום והופך assay זה יקר מאוד לשדה CSC; כל עוד המגבלות שלה נשמרות במוח לפרשנות של נתונים המתקבלים. מבחני יוצרי כדור היו בשימוש נרחב לזהות למפרע תאי גזע המבוססים על היכולת שלהם לחידוש עצמי ובידול ברמת התא הבודד במבחנה. הגילוי של סמנים המאפשרים בידוד הפוטנציאלי של תאי גזע וצאצאיהם מהנישה שלהם in vivo מאפשר התכונות הפונקציונליות של אוכלוסיות מטוהרים להיות מוגדרות. גombination של assay היווצרות הכדור וFACS הוא אסטרטגיה מוצלחת לבודד תאים מרקמות מוצקות או להעשיר תת-אוכלוסיות ספציפיות של PDAC בתרבות. לדוגמא, ביטוי בו זמני של EpCAM, CD24 וCD44 מגדיר תת-אוכלוסייה של CSCS מסוגל: התחדשות עצמית, להבדיל וליזום גידול, המשקף את ההטרוגניות של הגידול המקורי. הרמן ואח &#39;. הראה כי תאי CD133 + דיבוק יכולת שגשוג מוגבר וCSC כולל 15. סמנים אחרים יש גם שימשו לאפיון של CSCS: הביטוי (dehydrogenase-1 אלדהיד) ALDH- 1 קשור לתאים סרטניים מאוד בסרטן לבלב 38; תאים מסוגלים להוציא את צבע DNA Hoechst 33342, אוכלוסיית צד בשם תאים (SP), יש את היכולת המוכחת ליזום גידולים 39. לאחרונה הראו כי תא autofluorescence subcellular מאפיין אוכלוסייה מובחנת של תאים אנושיים עם תכונות CSC בלעדיות על פני סוגים שונים של גידול40. למרות שאף אחד מסמנים אלה מופיע לאפיין אוכלוסייה טהורה של CSCS סלקטיבי, יותר ומורכבים יותר שילובים של סמנים צריכים לשמש כדי לטהר FACS אוכלוסיות מעודנות יותר של תאים. שאלות רבות עדיין נותרו על התפקיד המדויק של CSCS במקור, ההתקדמות, והעמידות לתרופות של גידולים. לדוגמא, דרך אחת להתייחס לשאלה של התפתחות משובט להגדיר אם וכיצד CSC אחד יוזם גידול, יכול להיות לנתח דגימות מטופל בשלבים שונים של המחלה, ובמיוחד אחרי המספרים של CSCS במהלך ואחרי הטיפול. על ידי מענה על שאלות אלה, אנחנו יכולים לעשות התקדמות משמעותית של הידע שלנו על CSCS בגידולים מוצקים ולפתח טיפולים תרופתיים למניעת התקדמות גידול והישנות סופו של דבר.

אדנוקרצינומה ductal לבלב (PDAC) היא אחד מהגידולים מוצקים האגרסיביים ביותר. זה כרגע 4 th המוות הקשורים לסרטן הנפוץ ביותר בחברה מערבית, והוא צפוי לעלות ל -2 הגורם השכיח ביותר בעשור הקרוב (~ 400,000 מקרי מוות בשנה בעולם) 3 הורגש תכונת זמן אבחון 90% מהחולים בהווה עם מחלה מתקדמת, שבו יש 5 שנות הישרדות של פחות מ -5%. שיעור הישרדות זה נותר ללא שינוי ב -50 השנים האחרונות מאכזב למרות פעילות מחקר אינטנסיבית יותר ויותר 4. של יתרת 10% מהחולים שיש להם פוטנציאל מחלת ריפוי &quot;דרך כריתה כירורגית, 80% ימותו מהישנות בתוך 5 שנים. במשך שנים רבות את רמת הטיפול למחלה מתקדמת הייתה טיפול יחיד gemcitabine, אבל זה רק מקנה יתרון הישרדות שולי 5. שיפורים קטנים בהישרדות לטווח קצר הושגו על ידי התוספתשל erlotinib 6 או 7 capecitabine, אולם יתרון ההישרדות הוא בסדר הגודל של שבועות עם חציון ההישרדות הכוללת עדיין ~ 6 חודשים. לאחרונה, תוצאות מעודדות יותר צמחו לgemcitabine / NAB -paclitaxel 8 ושילוב FOLFIRINOX משטר 9,10. טיפולים אלה משפרים הישרדות החציוני על ידי צנוע חודשים 2 ו -4 בהתאמה, אבל הם רעילים ביותר וניצולים לטווח ארוך עדיין יוצא דופן. למרות שהטיפול מציע את הפוטנציאל לשיפור, אלה הם רעילים למשטרים שחולים רבים אינם מגיבים או רק להראות שיפור מצטבר בהישרדות כוללת. כתוצאה מכך, יש צורך דחוף להשלים טיפולים הנוכחיים ולפתח רומן, גישות טיפוליות multimodal הסבירות ביותר. הטרוגניות גידול זה הופך להיות ברור יותר ויותר כי ההטרוגניות הסרטן אינה מוגבלת רק לwithi subclones אבולוציונית נפרדn כל גידול 11, אלא גם מונע על ידי פנוטיפי והטרוגניות פונקציונלית וגמישות בתוך כל subclone 12. מה שנקרא תאי גזע סרטני (CSCS) או תאי קידום גידול אחראים להטרוגניות intraclonal 13-16. באופן ספציפי, CSCS מייצג קבוצת משנה של תאי סרטן, שעבורו אנו ואחרים סיפקנו ראיות חותכות, עד לתא הבודד, שהם מייצגים את השורש של מחלה על ידי מתן עלייה לכל progenies המובחן בתוך כל subclone סרטן 17. יותר מכך, תאים אלה הם חיוניים להתנהגות גרורתי וגם מהווים מקור חשוב להישנות מחלה לאחר טיפול, אפילו עם תרופות יעילות יחסית מסוגלת גרימת רגרסיה ראשונית גידול (למשל, -paclitaxel NAB) 15,18-20. חשוב לציין כי CSCS אינו מיצג בהכרח תאי גזע בתום לב, ואין הם נובעים מתאי גזע רקמות במקרים רבים, אלא שהם צריכים ACQuired תכונות מסוימות של תאי גזע. רוב אלה תפקודי מוגדרים, לדוגמא CSCS מצויד ביכולת התחדשות עצמית בלתי מוגבלת הופכת אותם עמידה לכימותרפיה קונבנציונלית, ולהראות עליית הפולשנות שמקדמת פעילות גרורתי. פנוטיפים תאי גזע סרטניים פונקציונליים פנוטיפ הפונקציונלי של CSCS מבוסס על היכולת שלהם להגדרה עצמית, לחדש, אשר יכול להיבדק במבחנה באמצעות היווצרות כדור סידורי ומבחני הקמת המושבה בהתאמה. אפילו יותר מכך, CSCS מסוגל דוב התחדשות עצמית בtumorigenicity vivo אשר יכול להיבדק על ידי הגבלת דילול במבחני vivo כקריאת הנתונים הפונקציונליות האולטימטיבית, רצוי במהלך השתלה סידורי מעידה על tumorigenicity לטווח ארוך הבלעדי. יתר על כן, יש הטרוגניות בתוך תא CSC, עם תת-אוכלוסייה מובחנת של CSCS נושא את היכולת הבלעדית ללהצמיח גרורות שאינה רקתוצאה ישירה שלהם בלעדי בtumorigenicity vivo. ואכן, CSCS metastastitic לרכוש את היכולת להתחמק הגידול הראשוני, לשרוד anoikis וסופו של הדבר translocate וזרע אתרים משניים. ניתן לבדוק את היכולות הפונקציונליות המתקדמות אלה במבחנה באמצעות מבחני שונה פלישה וin vivo באמצעות מבחני גרורות. מיקוד תאי גזע סרטני אנחנו ואחרים סיפקנו ראיות משכנעות כי טיפולים המתמקדים בגידול בכמות גדולה של תאי PDAC מובחנים, אפילו בשילוב עם סוכני מיקוד סטרומה, אין להם השפעה גדולה על התקדמות גידול ותוצאה שלאחר מכן, אלא אם כן בשילוב עם אסטרטגית CSC מיקוד 21, 22. לפיכך, המבוסס על הפונקציות חיוניות של CSCS בהתקדמות מחלה והתנגדות לטיפול, תאים אלה צריכים לסמן רכיב חיוני לכל גישת טיפול חדשנית 18,20, אבל ידרשו הבנה הרבה יותר מעמיקה oF מכונות רגולציה של CSCS. למרות CSCS וprogenies המובחן יותר שלהם לשאת מדינות קרקע גנטיות זהות ביחס לשינויים גנטיים, CSCS להפגין ביטוי גנים שונה ובכך epigenetically נחוש פרופילי שמודולים שתפו עם תאי גזע pluripotent. רוב הגנים מעורבים בתאי גזע pluripotent מניבה מושרה (Nanog, Oct3 / 4, Klf4, Sox2) לא רק קשור לסרטן, אבל הביטוי שלהם הוא בעיקר מוגבל לתא CSCS. יתר על כן, את הרלוונטיות הפונקציונליות של CSCS על ידי ניסויי פסד של פונקציה באמצעות כלים גנטיים למיקוד CSCS כעת מבוססים היטב את מושג CSC לכמה סוגי הסרטן 23-25. בעוד שרוב הגישות אלה מבוססים על מודלים של עכברים, ולכן הם לא בקלות להעברה למרפאה, הם מספקים הוכחה של קונספט להרלוונטיות קלינית הפוטנציאלית של מיקוד CSCS בשילוב עם תאי גידול בתפוצה רחבה. לומד תאי גזע סרטניים וביtro לזהות עקב אכילס שלהם על מנת לזהות דרכים חדשות וקליני רלוונטיות למיקוד CSCS, התכונות שלהם הם למדו באופן קבוע במבחנה והיווצרות כדור נמצאת בשימוש נרחב בהקשר זה. פותח במקור ללימוד ביולוגיה של תא גזע נורמלי, לרבות חידוש עצמי ויכולת הבחנה, assay זה היה מאוחר יותר מותאם ללמוד CSCS במבחנה והיה בשימוש כבר חוקר CSCS מבודד מPDAC 20. מצאנו כי תחומי גידול שנוצרו מתאי PDAC אנושיים ראשוניים לשאת את כל התכונות הייחודיות של CSCS, לכן מציין שהם מכילים CSCS לבלב בתום לב 21. לפיכך, assay תחום גידול מייצג כלי רב עוצמה למסך לטיפולים יעילים יותר במבחנה, אבל תוצאות צריכה להיות מוערכות יותר במחמיר יותר במבחני vivo. ואכן, יש להתייחס אל הנתונים שנוצרו עם assay זה במבחנה בזהירות רבה כמו הassay הדואר יכול להיות כפוף לשגיאה משמעותית. פרוטוקולים סטנדרטיים ביותר, כולל ספירה אוטומטית של תחומים נוצרו, יש להקים כדי להבטיח נתונים לשחזור וחיזוי. בהקשר זה, לאחרונה בשימוש assay זה מסך CSCS לבלב נגזר מקבוצה מגוונת של PDACs האנושי הראשוני, והראינו כי תאים אלה הם פגיעים מאוד לתכנות מחדש על ידי חילוף חומרים מטפורמין מתחם נגד סוכרת. בעבר, מטפורמין כבר הוכיח לעכב התפשטות תאים סרטנית על ידי הפעלה עקיפה של קינאז מופעל-AMP חלבון (AMPK) איתות ועיכוב הבא של mTOR 26, וכתוצאה מכך סינתזת חלבון מופחתת ותא התפשטות 27. בנוסף להשפעות אלה על אוכלוסיית הגידול בתפוצה רחבה, אנו ואחרים מצאנו כי מטפורמין יכול למקד ולמעשה לחסל את תת-האוכלוסיה CSCS במספר גידולים מוצקים כגון שד, סרטן הוושט, סרטן הלבלב וגליובלסטומה 28-31 &lt;/ Sup&gt;. לפיכך, מטפורמין מייצג אסטרטגיה טיפולית חדשה ומבטיחה ובטוחה לכמה סוגי סרטן עם צורך רפואי כיום. יתר על כן, באמצעות יצירת מרחב כדרך להעשיר לCSCS, הראו שההשפעות העיקריות של מטפורמין על CSCS הלבלב היו עצמאית של הפעלת AMPK והסתמך בעיקר על הרעילות של המיטוכונדריה הצנועה שלה (באמצעות בלימה שלי מורכב), שככל הנראה הייתה קטלני לקבוצת משנה של CSCS בלבד. לזה האחרון שהיינו מסוגל להעריך ייצור צריכת החמצן וROS המיטוכונדריה הסלולרי שלהם כמדדי הרעילות של התרופה ברמה התאית. בהמשך לכך, במבחנה נתונים אלה ניתן היו לאמת במודלים של עכברים פרה-קליניים ואכן הביאו ממושך הישרדות 31 באופן משמעותי. המתודולוגיה המוצגת כאן מאפשרת לדור המהיר של פרופילי רגישות התרופה לCSCS, כוללים מחקרים על ההשפעות שלהם על חילוף חומרים CSC. עכשיו אנו מספקים הוארכו פרטים ניסיוניים על com מנוצלplementary במבחנה ובנהלי vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Counting Chamber/Hemocytometer&#160;</td>
			<td>Hausser Scientific Co</td>
			<td>3200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CASY Cell Counter and Analyzer for proliferation and viability measurement</td>
			<td>Roche Innovatis</td>
			<td>AG CASY Model TTC 45,60,150 &#956;m</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS Dissociator&#160;</td>
			<td>Miltenyi Co</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS C Tubes&#160;</td>
			<td>Miltenyi Co</td>
			<td>130-093-237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well Ultra-low Attachment Plates&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3474</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100-mm tissue culture dishes&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15-mL polypropylene conical tube&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50-mL polypropylene conical tube&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 ml sterile tubes&#160;</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>0030 120.086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml centrifuge tubes&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile petri dishes, 10 cm dishes&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26G needles&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>300600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 ul Hamilton Syringe&#160;</td>
			<td>Hamilton Syringe Co</td>
			<td>81075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type IV&#160;</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>7909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium 1640&#160;</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>11875-085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin solution, 100X&#160;</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metformin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D150959-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine, 200 mM, 100X&#160;</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100mM Sodium Pyruvate solution&#160;</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse Assay medium&#160;</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>100965-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cell-TAK Cell and Tissue adhesive&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin solution, 0.05%&#160;</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement 50x&#160;</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basic Fibroblast Growth Factor&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F0291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9576</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium/F12&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 1x Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue&#160;</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carboxy-DCFDA(5-(and-6)-Carboxy-2&#39;,7&#39;-DichlorofluoresceinDiacetate)&#160;</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>C-369</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R8875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% (vol/vol)&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>459844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluorane</td>
			<td>IsoVet, Braun</td>
			<td>571105.8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>35620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Sterile Cotton tipped applicator</td>
			<td>&#160;Puritan medical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF96e FluxPak with cell plates, calibrant and cartridges</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XF96e Extracellular Flux analyzer</td>
			<td>Seahorse Bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator with CO2 input&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Splinter forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caliper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

studying pancreatic cancer stem cell characteristics for developing new treatment strategies

אדנוקרצינומה ductal לבלב (PDAC) מכילה תת-קבוצה של תאים סרטניים באופן בלעדי גזע סרטני (CSCS) אשר הוכחו לנהוג ייזום גידול, גרורות והתנגדות לradio- וכימותרפיה. כאן אנו מתארים מתודולוגיה ספציפית לculturing CSCS לבלב האנושי ראשוני כתחומי גידול בתנאי מעגן-עצמאי. תאים גדלים בתנאים שאינם חסיד סרום ללא כדי להעשיר לCSCS תוך progenies המובחן יותר שלהם אינו שורד ומתרבה בשלב הראשוני לאחר זריעה של תאים בודדים. assay זה יכול לשמש כדי להעריך את אחוז CSCS הנוכחי באוכלוסייה של תאים סרטניים. שני הגודל (אשר יכול לנוע 35-250 מיקרומטר) ומספר תחומים גידול שנוצרו מייצגים פעילות CSC טיפחה בשני אוכלוסיות בתפזורת של תאים סרטניים בתרבית או גידולים טריים שנקטפו ומתעכלים 1,2. שימוש assay זה, מצאנו לאחרונה כי מטפורמין סלקטיבי ablates pancreatCSCS IC; ממצא זה אומת לאחר מכן נוסף על ידי הוכחת ביטוי מצומצם של גנים / סמני משטח הקשורים pluripotency ומופחת בtumorigenicity vivo של תאים שטופל במטפורמין. כצעד הסופי לפיתוח פרה-קליני שטופלנו עכברי נושאי גידולים הוקמו עם מטפורמין ומצאנו ממושכים הישרדות באופן משמעותי. מחקרים קליניים בודקים את השימוש במטפורמין בחולים עם PDAC נערכים כיום (לדוגמא, NCT01210911, NCT01167738, וNCT01488552). מכניסטי, מצאנו כי מטפורמין גורם למשבר אנרגיה חמור בCSCS ידי שיפור מיני חמצן מגיבים ייצור (ROS) וצמצום פוטנציאל הטרנסממברני המיטוכונדריה. לעומת זאת, אינו CSCS לא בוטל על ידי טיפול במטפורמין, אלא עבר עצירת מחזור התא הפיכה. לכן, המחקר שלנו משמש כדוגמא מוצלחת לפוטנציאל של היווצרות כדור במבחנה ככלי מיון לזהות תרכובות שעלולים להיות יעד CSCים, אך טכניקה זו תדרוש נוספת במבחנה ובאימות vivo לחסל תגליות שווא.

מטפורמין סלקטיבי מטרות CSCS לבלב בדקנו ראשון השפעות התפקודיות של טיפול מטפורמין על יכולת התחדשות עצמית במבחנה של CSCS. לצורך כך, ערכנו מבחני היווצרות כדור באמצעות תאים ראשוניים אדם לבלב סרטן מבודד מרקמות PDAC במהלך ניתוח כריתה. הבחנו כי מטפורמין חזק ירד בגודל של כדורים נוצרו (איור 1 א). זה היה ככל הנראה על ידי עיכוב התפשטות progenies של CSC, שעדיין מייצג את חלק הארי של תאים הנמצאים בתחומים שהם מועשרים רק לCSCS. ואכן, תחומים יותר מתורבתים ללא passaging נרחב יותר הרחבת progenies המובחן יותר יהיה. כך מצאנו מטפורמין כדי להקטין באופן משמעותי את מספר התחומים יצרו למעשה ללא קשר לגודלם, המתרחש באופן תלוי מינון מציע עיכוב חזק של יכולת ההתחדשות העצמית של Cמאמנים (מידע לא מוצג). מצאנו מטפורמין שב -3 מ&quot;מ ירד מספר תחומים נוצר (איור 1) באופן משמעותי. כדי ללמוד יותר מחמיר ההשפעות ארוכת הטווח של מטפורמין על יכולת ההתחדשות העצמית של CSCS, אנחנו לאחר מכן passaged תחומים העיקריים נוצרו לתחומים שניוניים ושלישונית. למרות שטופלו רק תחומים עיקריים עם מטפורמין, ההיווצרות של תחומים בקטעים השני והשלישי הייתה באופן דרסטי ויותר ויותר מופחת, לסבך את טיפול מטפורמין אכן בלתי הפיך בוטל רוב CSCS (איור 1 ג). כך, הנתונים שלנו הראו השפעות טיפול משמעותיות למטפורמין על יכולת ההתחדשות העצמית של CSCS לבלב העיקרי ובכך עודדו אותנו לבצע מכניסטית נוסף, כמו גם מחקרי in vivo. מטפורמין מעכב צריכת חמצן מיטוכונדריאלי וגורם ייצור ROS מאז metformin הוצג לפעול כרעל המיטוכונדריה על ידי באופן חלקי עיכוב אני פעילות מורכבת, אנחנו הבאים בחנו את ההשפעות אקוטיות של מטפורמין על צריכת חמצן סלולרית בתאים שמקורם תחום. לשם כך, אנו נבחרו תאים נגזרים משני גידולים עיקריים PDAC נציג ומדדנו את צריכת החמצן לאורך זמן לאחר הזרקה רציפה של 3 מ&quot;מ מטפורמין (שלוש זריקות) וrotenone 1 מיקרומטר (זריקה אחת). כפי שניתן לראות באיור 2 א, הזרקת מטפורמין ביאה לירידה מהירה ותלוי-מינון בצריכת חמצן, שהייתה שונות משמעותי בין הגידולים השונים. חישבנו את פעילות המיטוכונדריה שייר על טיפול מטפורמין על ידי הזרקת rotenone, מורכב חזקה אני מעכב, אשר מסוגל עיכוב צריכת חמצן במיטוכונדריה לחלוטין. רגישות למטפורמין במונחים של צריכת חמצן במיטוכונדריה מתואמת עם היכולת שלה לגרום לייצור ROS המוגדר כעקירה של הממוצע של popuויסות לאחר טיפול מטפורמין (איור 2, פנל משמאל), שניתן לכמת (איור 2, פנל מימין) בקלות. כצפוי, התאים הראשוניים שהיו רגישים ביותר לעיכוב של צריכת חמצן גם הראו העלייה החזקה ביותר בייצור ROS על טיפול מטפורמין. לפיכך, חילוף חומרים במבחנה ניסויים אלה מראים כי CSCS מטרות מטפורמין על ידי עיכוב התלות שלהם בתפקוד המיטוכונדריה, וכתוצאה מכך עלייה שלאחר מכן בייצור ROS המיטוכונדריה וסופו של דבר אינדוקציה של אפופטוזיס. מטפורמין הדוכנים PDAC התקדמות in vivo לבסוף בחנו את ההשפעות של מטפורמין in vivo באמצעות xenografts רקמה נובע מחולים שונים עם PDAC. צפינו ירידה משמעותית בהתקדמות גידול לעכברים שטופל במטפורמין לעומת קבוצת הביקורת, אך לא גידולי Disa לחלוטיןppeared (איור 3). בהמשך לכך, במהלך תקופת מעקב כל הגידולים ארוך טווח הישנות סופו של דבר המצביעה על התנגדות מטפורמין של תאים ששרדו את השלב הראשון של טיפול. עם זאת, הטיפול במטפורמין, אפילו כשהם מיושמים כסוכן יחיד, הרחיב באופן משמעותי את הישרדות בכל העכברים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52801/52801fig1.jpg" /> איור 1. מטפורמין סלקטיבי מטרות CSCS. () מטפורמין ירידה בגודל של כדורים. נציג תמונות של תחומים המתקבלות לאחר הטיפול עם המינונים המצוין של מטפורמין במשך 7 ימים (פנל מימין). כימות של גודל כדור (n≥6) (פנל משמאל), המספרים שצוינו בציר abscissas מייצגים גידול בודד. יכולת היווצרות כדור בנוכחות או עדר של מטפורמין במשך 7 ימים (n≥6), המספרים שצוינו בabscissas (ב)ציר מייצג גידול בודד. גרף נציג יכולת התחדשות עצמית CSC בתחומים שניוניים ושלישונית של תאי סרטן לבלב עיקריים (C). טופלו התחומים רק במהלך היווצרות כדור הדור הראשון עבור הסכום כולל של 7 ימים (n = 6). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52801/52801fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52801/52801fig2.jpg" /> איור 2. צריכת חמצן מטפורמין הטיפול מעכב וגורם ROS ייצור. () בנוסף מטפורמין מעכבים צריכת חמצן (OCR) של תאים שמקורם בתחום. טופלו שני תחומים משניים PDAC שונים עם מטפורמין ושינויי OCR נמדדו על ידי ניתוח שטף תאי. הזרקת Rotenone שימשה כביקורת לצריכת OCR המיטוכונדריה.ציר ה- X מייצג את שיעור צריכת החמצן בpmol של חמצן / שעה מנורמלות על ידי תכולת החלבון בכל טוב. תחומי PDAC (ב &#39;) בשימוש בטופלו במשך שעה 8 עם מטפורמין וייצור ROS הוערך על ידי cytometry זרימה באמצעות carboxy-DCFDA. עזבתי זרימת נציג, cytometry מגרשים. נכון, סיכום של נתונים משלושה ניסויים בלתי תלויים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52801/52801fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52801/52801fig3.jpg" /> איור 3. מטפורמין דוכנים PDAC התקדמות in vivo. שתי רקמות xenograft PDAC שונות הושתלו לעכברים דיכוי חיסוניים וטיפול הוקצה לאחר לקחת גידול ראשוני אומת. (150 מ&quot;ג / קילוגרם גוף טופלו עכברים עם מטפורמין (Met) הוסיפו למים שתיית ווילהילחם; בהתבסס על 5 מיליליטר של צריכת מים ליום). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52801/52801fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies at JoVE.com

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Pancreatic cancer stem cells (CSCs) can be expanded in vitro using the anchorage-independent sphere culture technique, which represents a powerful tool to study CSC biology and can serve as the first step to develop novel CSC-targeting therapies. Here the methodology for expanding, analyzing and targeting of pancreatic CSCs is provided.

לומד סרטן לבלב גזע מאפייני תא לפיתוח טיפול חדש אסטרטגיות

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

studying-pancreatic-cancer-stem-cell-characteristics-for-developing

Google

Research

JoVE Journal

Medicine

19.4K Views.  Spanish National Cancer Research Center. Pancreatic cancer stem cells (CSCs) can be expanded in vitro using the anchorage-independent sphere culture technique, which represents a powerful tool to study CSC biology and can serve as the first step to develop novel CSC-targeting therapies. Here the methodology for expanding, analyzing and targeting of pancreatic CSCs is provided.

Video: Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Stem Cell Transplantation Strategies for the Restoration of Cognitive Dysfunction Caused by Cranial Radiotherapy

Radiotherapy often provides the only clinical recourse for those afflicted with primary or metastatic brain tumors. While beneficial, cranial irradiation can induce a progressive and debilitating decline in cognition that may, in part, be caused by the depletion of neural stem cells. Given the increased survival of patients diagnosed with brain cancer, quality of life in terms of cognitive health has become an increasing concern, especially in the absence of any satisfactory long-term treatments.
To address this serious health concern we have used stem cell replacement as a strategy to combat radiation-induced cognitive decline. Our model utilizes athymic nude rats subjected to cranial irradiation. The ionizing radiation is delivered as either whole brain or as a highly focused beam to the hippocampus via linear accelerator (LINAC) based stereotaxic radiosurgery. Two days following irradiation, human neural stem cells (hNSCs) were stereotaxically transplanted into the hippocampus. Rats were then assessed for changes in cognition, grafted cell survival and for the expression of differentiation-specific markers 1 and 4-months after irradiation. Our cognitive testing paradigms have demonstrated that animals engrafted with hNSCs exhibit significant improvements in cognitive function. Unbiased stereology reveals significant survival (10-40%) of the engrafted cells at 1 and 4-months after transplantation, dependent on the amount and type of cells grafted. Engrafted cells migrate extensively, differentiate along glial and neuronal lineages, and express a range of immature and mature phenotypic markers.
Our data demonstrate direct cognitive benefits derived from engrafted human stem cells, suggesting that this procedure may one day afford a promising strategy for the long-term functional restoration of cognition in individuals subjected to cranial radiotherapy. To promote the dissemination of the critical procedures necessary to replicate and extend our studies, we have provided written and visual documentation of several key steps in our experimental plan, with an emphasis on stereotaxic radiosurgey and transplantation.

Brain tumor patients routinely undergo cranial radiotherapy, and while beneficial, this treatment often results in debilitating cognitive dysfunction. This serious unresolved problem has at present, no clinical recourse, and has driven our efforts to devise stem cell based therapies for the recovery of radiation-induced cognitive decrements.

גזע להשתלות אסטרטגיות Cell לשיקום של ליקוי קוגניטיבי נגרמת על ידי הקרנות גולגולתי

Radiotherapy often provides the only clinical recourse for those afflicted with primary or metastatic brain tumors. While beneficial, cranial irradiation ...

Evaluation of Cancer Stem Cell Migration Using Compartmentalizing Microfluidic Devices and Live Cell Imaging

In the last 40 years, the United States invested over 200 billion dollars on cancer research, resulting in only a 5% decrease in death rate. A major obstacle for improving patient outcomes is the poor understanding of mechanisms underlying cellular migration associated with aggressive cancer cell invasion, metastasis and therapeutic resistance1. Glioblastoma Multiforme (GBM), the most prevalent primary malignant adult brain tumor2, exemplifies this difficulty. Despite standard surgery, radiation and chemotherapies, patient median survival is only fifteen months, due to aggressive GBM infiltration into adjacent brain and rapid cancer recurrence2. The interactions of aberrant cell migratory mechanisms and the tumor microenvironment likely differentiate cancer from normal cells3. Therefore, improving therapeutic approaches for GBM require a better understanding of cancer cell migration mechanisms. Recent work suggests that a small subpopulation of cells within GBM, the brain tumor stem cell (BTSC), may be responsible for therapeutic resistance and recurrence. Mechanisms underlying BTSC migratory capacity are only starting to be characterized1,4.
Due to a limitation in visual inspection and geometrical manipulation, conventional migration assays5 are restricted to quantifying overall cell populations. In contrast, microfluidic devices permit single cell analysis because of compatibility with modern microscopy and control over micro-environment6-9.
We present a method for detailed characterization of BTSC migration using compartmentalizing microfluidic devices. These PDMS-made devices cast the tissue culture environment into three connected compartments: seeding chamber, receiving chamber and bridging microchannels. We tailored the device such that both chambers hold sufficient media to support viable BTSC for 4-5 days without media exchange. Highly mobile BTSCs initially introduced into the seeding chamber are isolated after migration though bridging microchannels to the parallel receiving chamber. This migration simulates cancer cellular spread through the interstitial spaces of the brain. The phase live images of cell morphology during migration are recorded over several days. Highly migratory BTSC can therefore be isolated, recultured, and analyzed further. 
Compartmentalizing microfluidics can be a versatile platform to study the migratory behavior of BTSCs and other cancer stem cells. By combining gradient generators, fluid handling, micro-electrodes and other microfluidic modules, these devices can also be used for drug screening and disease diagnosis6. Isolation of an aggressive subpopulation of migratory cells will enable studies of underlying molecular mechanisms.

A compartmentalizing microfluidic device for investigating cancer stem cell migration is described. This novel platform creates a viable cellular microenvironment and enables microscopic visualization of live cell locomotion. Highly motile cancer cells are isolated to study molecular mechanisms of aggressive infiltration, potentially leading to more effective future therapies.

הערכה של נדידת תאי גזע סרטני באמצעות מכשירי microfluidic מידור והדמית תא חייה

In the last 40 years, the United States invested over 200 billion dollars on cancer research, resulting in only a 5% decrease in death rate. A major ...

Processing of Primary Brain Tumor Tissue for Stem Cell Assays and Flow Sorting

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction of cells in the tumor with stem cell properties, termed brain tumor initiating cells (BTICs), possess an ability to differentiate along multiple lineages, self-renew, and initiate tumors in vivo. We applied culture conditions originally used for normal neural stem cells (NSCs) to a variety of human brain tumors and found that this culture method specifically selects for stem-like populations. Serum-free medium (NSC) allows for the maintenance of an undifferentiated stem cell state, and the addition of bFGF and EGF allows for the proliferation of multi-potent, self-renewing, and expandable tumorspheres.
To further characterize each tumor's BTIC population, we evaluate cell surface markers by flow cytometry. We may also sort populations of interest for more specific characterization. Self-renewal assays are performed on single BTICs sorted into 96 well plates; the formation of tumorspheres following incubation at 37 &deg;C indicates the presence of a stem or progenitor cell. Multiple cell numbers of a particular population can also be sorted in different wells for limiting dilution analysis, to analyze self-renewal capacity. We can also study differential gene expression within a particular cell population by using single cell RT-PCR.
The following protocols describe our procedures for the dissociation and culturing of primary human samples to enrich for BTIC populations, as well as the dissociation of tumorspheres. Also included are protocols for staining for flow cytometry analysis or sorting, self-renewal assays, and single cell RT-PCR.

The identification of brain tumor initiating cells (BTICs), the rare cells within a heterogeneous tumor possessing stem cell properties, provides new insights into human brain tumor pathogenesis. We have refined specific culture conditions to enrich for BTICs, and we routinely use flow cytometry to further enrich these populations. Self-renewal assays and transcript analysis by single cell RT-PCR can subsequently be performed on these isolated cells.

עיבוד של רקמת גידול במוח העיקרית למבחנים בתאי גזע וזרימת מיון

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human malignancies.1 Other than surgery for the minority of patients who present with localized disease, there is little or no survival benefit of systemic therapy. Therefore, there is a great need to better understand the biology of NETs, and in particular define new therapeutic targets for patients with nonresectable or metastatic neuroendocrine tumors. 3D cell culture is becoming a popular method for drug screening due to its relevance in modeling the in vivo tumor tissue organization and microenvironment.2,3 The 3D multicellular spheroids could provide valuable information in a more timely and less expensive manner than directly proceeding from 2D cell culture experiments to animal (murine) models.
To facilitate the discovery of new therapeutics for NET patients, we have developed an in vitro 3D multicellular spheroids model using the human NET cell lines. The NET cells are plated in a non-adhesive agarose-coated 24-well plate and incubated under physiological conditions (5% CO2, 37 &deg;C) with a very slow agitation for 16-24 hr after plating. The cells form multicellular spheroids starting on the 3rd or 4th day. The spheroids become more spherical by the 6th day, at which point the drug treatments are initiated. The efficacy of the drug treatments on the NET spheroids is monitored based on the morphology, shape and size of the spheroids with a phase-contrast light microscope. The size of the spheroids is estimated automatically using a custom-developed MATLAB program based on an active contour algorithm. Further, we demonstrate a simple method to process the HistoGel embedding on these 3D spheroids, allowing the use of standard histological and immunohistochemical techniques. 
This is the first report on generating 3D spheroids using NET cell lines to examine the effect of therapeutic drugs. We have also performed histology on these 3D spheroids, and displayed an example of a single drug's effect on growth and proliferation of the NET spheroids. Our results support that the NET spheroids are valuable for further studies of NET biology and drug development.

We present a simple agarose overlay platform to grow 3D multicellular spheroids using neuroendocrine cancer cell lines. This method provides a very convenient way to examine the effect of therapeutic drugs on the neuroendocrine tumor cells. It could also help us establish human neuroendocrine tumor spheroids for cancer therapy.

האדם תאים סרטניים נוירואנדוקריניים קווים כמו מודל תלת ממדי לחקר הטיפול האנושי גידול נוירואנדוקריניים

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for progression-free and overall survival. Therefore, translational research needs to provide further molecular evidence to improve targeted therapies for malignant melanomas. In the past, oncogenic mechanisms related to melanoma were extensively studied in established cell lines. On the way to more personalized treatment regimens based on individual genetic profiles, we propose to use patient-derived cell lines instead of generic cell lines. Together with high quality clinical data, especially on patient follow-up, these cells will be instrumental to better understand the molecular mechanisms behind melanoma progression.
Here, we report the establishment of primary melanoma cultures from dissected fresh tumor tissue. This procedure includes mincing and dissociation of the tissue into single cells, removal of contaminations with erythrocytes and fibroblasts as well as primary culture and reliable verification of the cells' melanoma origin.
Recent reports revealed that melanomas, like the majority of tumors, harbor a small subpopulation of cancer stem cells (CSCs), which seem to exclusively fuel tumor initiation and progression towards the metastatic state. One of the key markers for CSC identification and isolation in melanoma is CD133. To isolate CD133+ CSCs from primary melanoma cultures, we have modified and optimized the Magnetic-Activated Cell Sorting (MACS) procedure from Miltenyi resulting in high sorting purity and viability of CD133+ CSCs and CD133- bulk, which can be cultivated and functionally analyzed thereafter.

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

This article describes the preparation of freshly obtained melanoma tissue into primary cell cultures, and how to remove contaminations of erythrocytes and fibroblasts from the tumor cells. Finally, we describe how CD133+ putative melanoma stem cells are sorted from the CD133- bulk using Magnetic Activated Cell Sorting (MACS).

תרבות מטופל נגזר סלולרי ובידוד של CD133<sup&gt; +</sup&gt; תאי גזע סרטני משוערים מלנומה

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

דגם orthotopic bioluminescent של התקדמות סרטן הלבלב

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

Enrichment for Chemoresistant Ovarian Cancer Stem Cells from Human Cell Lines

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, invasive, and chemoresistant tumor cells. Therefore, CSCs are an attractive population of cells to target therapeutically. CSCs are predicted to contribute to a number of types of malignancies including those in the blood, brain, lung, gastrointestinal tract, prostate, and ovary. Isolating and enriching a tumor cell population for CSCs will enable researchers to study the properties, genetics, and therapeutic response of CSCs. We generated a protocol that reproducibly enriches for ovarian cancer CSCs from ovarian cancer cell lines (SKOV3 and OVCA429). Cell lines are treated with 20 &#181;M cisplatin for 3 days. Surviving cells are isolated and cultured in a serum-free stem cell media containing cytokines and growth factors. We demonstrate an enrichment of these purified CSCs by analyzing the isolated cells for known stem cell markers Oct4, Nanog, and Prom1 (CD133) and cell surface expression of CD177 and CD133. The CSCs exhibit increased chemoresistance. This method for isolation of CSCs is a useful tool for studying the role of CSCs in chemoresistance and tumor relapse.

Cancer stem cells (CSCs) are&#160;implicated in tumor relapse due to chemoresistance. We have optimized a protocol for selection and expansion of CSCs from ovarian cancer cell lines. By treating cells with the chemotherapeutic cisplatin and culturing&#160;in a stem cell promoting media we enrich for non-adherent CSC cultures.

העשרה לתאי גזע Chemoresistant סרטן השחלות משורות תאים אנושיות

Cancer stem cells (CSCs) are defined as a subset of slow cycling and undifferentiated cells that divide asymmetrically to generate highly proliferative, ...

High Throughput Characterization of Adult Stem Cells Engineered for Delivery of Therapeutic Factors for Neuroprotective Strategies

Mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow are a powerful cellular resource and have been used in numerous studies as potential candidates to develop strategies for treating a variety of diseases. The purpose of this study was to develop and characterize MSCs as cellular vehicles engineered for delivery of therapeutic factors as part of a neuroprotective strategy for rescuing the damaged or diseased nervous system. In this study we used mouse MSCs that were genetically modified using lentiviral vectors, which encoded brain-derived neurotrophic factor (BDNF) or glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF), together with green fluorescent protein (GFP). 
Before proceeding with in vivo transplant studies it was important to characterize the engineered cells to determine whether or not the genetic modification altered aspects of normal cell behavior. Different culture substrates were examined for their ability to support cell adhesion, proliferation, survival, and cell migration of the four subpopulations of engineered MSCs. High content screening (HCS) was conducted and image analysis performed. 
Substrates examined included: poly-L-lysine, fibronectin, collagen type I, laminin, entactin-collagen IV-laminin (ECL). Ki67 immunolabeling was used to investigate cell proliferation and Propidium Iodide staining was used to investigate cell viability. Time-lapse imaging was conducted using a transmitted light/environmental chamber system on the high content screening system.
Our results demonstrated that the different subpopulations of the genetically modified MSCs displayed similar behaviors that were in general comparable to that of the original, non-modified MSCs. The influence of different culture substrates on cell growth and cell migration was not dramatically different between groups comparing the different MSC subtypes, as well as culture substrates. 
This study provides an experimental strategy to rapidly characterize engineered stem cells and their behaviors before their application in long-term in vivo transplant studies for nervous system rescue and repair.

This study describes an experimental platform to rapidly characterize engineered stem cells and their behaviors before their application in long-term in vivo transplant studies for nervous system rescue and repair.

תפוקה אפיון גבוה של תאי גזע בוגרי תכנון הנדסי למשלוח גורמים טיפוליים לאסטרטגיה הגנה עצבית

Mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow are a powerful cellular resource and have been used in numerous studies as potential candidates to ...

Isolation and Characterization of a Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Subpopulation Having Stem Cell Characteristics

Despite advances in the understanding of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) progression, the five-year survival rate remains low due to local recurrence and distant metastasis. One hypothesis to explain this recurrence is the presence of cancer stem-like cells (CSCs) that present inherent chemo- and radio-resistance. In order to develop new therapeutic strategies, it is necessary to have experimental models that validate the effectiveness of targeted treatments and therefore to have reliable methods for the identification and isolation of CSCs. To this end, we present a protocol for the isolation of CSCs from human HNSCC cell lines that relies on the combination of two successive cell sortings performed by fluorescence activated cell sorting (FACS). The first one is based on the property of CSCs to overexpress ATP-Binding Cassette (ABC) transporter proteins and thus exclude, among others, vital DNA dyes such as Hoechst 33342. The cells sorted with this method are identified as a &#34;side population&#34; (SP). As the SP cells represent a low percentage (&#60;5%) of parental cells, a growing phase is necessary in order to increase their number before the second cell sorting. The next step allows for the selection of cells that possess two other HNSCC stem cell characteristics i.e. high expression level of the cell surface marker CD44 (CD44high) and the over-expression of aldehyde dehydrogenase (ALDHhigh). Since the use of a single marker has numerous limitations and pitfalls for the isolation of CSCs, the combination of SP, CD44 and ALDH markers will provide a useful tool to isolate CSCs for further analytical and functional assays requiring viable cells. The stem-like characteristics of CSCs was finally validated in vitro by the formation of tumorispheres and the expression of &#946;-catenin.

Understanding the role of cancer stem-like cells in tumor recurrence and resistance to therapies has become a topic of great interest in the last decade. This article describes the isolation and characterization of the sub-population of cancer stem-like cells from head and neck squamous carcinoma cell lines (HNSCC).

בידוד ואפיון של ראש וצוואר קשקש Cell Carcinoma-אוכלוסיית מאפייני תאי גזע לאחר

Despite advances in the understanding of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) progression, the five-year survival rate remains low due to local ...

Radiation Treatment of Organotypic Cultures from Submandibular and Parotid Salivary Glands Models Key In Vivo Characteristics

Hyposalivation and xerostomia create chronic oral complications that decrease the quality of life in head and neck cancer patients who are treated with radiotherapy. Experimental approaches to understanding mechanisms of salivary gland dysfunction and restoration have focused on in vivo models, which are handicapped by an inability to systematically screen therapeutic candidates and efficiencies in transfection capability to manipulate specific genes. The purpose of this salivary gland organotypic culture protocol is to evaluate maximal time of culture viability and characterize cellular changes following ex vivo radiation treatment. We utilized immunofluorescent staining and confocal microscopy to determine when specific cell populations and markers are present during a 30-day culture period. In addition, cellular markers previously reported in in vivo radiation models are evaluated in cultures that are irradiated ex vivo. Moving forward, this method is an attractive platform for rapid ex vivo assessment of murine and human salivary gland tissue responses to therapeutic agents that improve salivary function.

Using three-dimensional organotypic cultures to visualize morphology and functional markers of salivary glands may provide novel insights into the mechanisms of tissue damage following radiation. Described here is a protocol to section, culture, irradiate, stain, and image 50&#8211;90 &#956;m thick salivary gland sections prior to and following exposure to ionizing radiation.

הטיפול בקרינה של תרבויות אורגנוטימית מתוך הלסת התחתונה ובלוטות הרוק פרודה מודלים מפתח Vivo מאפיינים

Hyposalivation and xerostomia create chronic oral complications that decrease the quality of life in head and neck cancer patients who are treated with ...