The work was supported in part by funding from Alberta Livestock and Meat Agency and Natural Science and Research Council Discovery grant to S. D. Proctor.

כל הנהלים על חיות ניסוי המתוארות הוא סרטון ואת כתב היד אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדיים השתמש ועקב אחר ההנחיות שנקבעו על ידי המועצה הקנדית של טיפול בבעלי החיים. 1. הרדמה כירורגית והכנת כירורגים של החזירים הילודים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחדר כניסה נפרדת, premedicate 25 חזירים ק&quot;ג סמוך לבסיס של הצוואר עם קוקטייל תרופות הרגעה-הרדמה תוך שרירית המכיל: azaperone (0.3 מ&quot;ג / ק&quot;ג), קטמין הידרוכלוריד (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג), dexmedetomidine (15 מיקרוגרם / ק&quot;ג). הערה: הוסף עצירות (0.005-.02 מ&quot;ג / ק&quot;ג) של קוקטייל התרופות מראש הרדמה לשיכוך כאבים התוך אופרטיבית משופרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את חזירים בגז משאיפת isoflurane בשאיפה (isoflurane 4-5% ב 500 מ&quot;ל-1000 מ&quot;ל / דקה O 2) באמצעות מסיכת פנים. דמיינו את מיתרי הקול באמצעות היקף בגרון וטרינרי (ארוך להב ישר 17-25 ס&quot;מ), ולהחיל עיקור לידוקאין 10% אקטואלי אל ווקאליתמייתרים. אפשר ספריי לידוקאין לפנות מיתרי הקול 30-60 שניות לפני אינטובציה כדי לצמצם את האפשרות של התכווצות מיתרי הקול ואת חסימה בדרכי הנשימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצנרר החזירים על ידי העברת הטובוס אזוקים (5.0-7.0 מ&quot;מ קוטר פנימי (ID)) בין מיתרי הקול ולשמור על הרדמה בגז isoflurane (isoflurane 0.5-2.0% ב 1,000-2,000 מ&quot;ל / דקה O 2) באמצעות ארגז סגור מעגל rebreathing מערכת הרדמה במהלך הניתוח. להעריך את רמת הרדמה מטון לסת, ושניהם תגובות רפלקס דוושת palpebral. גז הרדמה פג תוקף הוא יישחט פרק מחוץ לחדרי הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את המשטח החיצוני של האוזן עם פתרון לקרצף כירורגית 2.0% chlorhexidine ואחריו שטיפת אלכוהול איזופרופיל 70%. עם קטטר 20 G תוך ורידי, קטטר וריד האוזן לספק עירוי נוזלים (פתרון Ringer Lactated; 5-10 מ&quot;ל / ק&quot;ג / שעה) במהלך הניתוח. Secure דופק oximeter אל פני השטח הרירי של הלשון עם medקלטת iCal כדי לפקח על קצב לב ואת הרוויה של חמצון דם היקפי (SpO 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את החזיר הרדים בעמדת גב שכיבתה לגלח את בטן הגחון מאמצע חזה caudally להיבט הגחון של החיק. נקו בתחום זה עם שני לסירוגין כלורהקסידין 2.0% סקראבס כירורגית ושוטף במים סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את החזיר המורדם כדי לחדרי הניתוח ולהחיל את לקרצף כירורגית הסופית של שטיפת אלכוהול איזופרופיל 70%, לאפשר לו להתייבש, ולאחר מכן לעטוף את החיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס בדיקת טמפרטורת רקטלית כ ​​סנטימטר 2-4 לתוך פי הטבעת כדי לפקח על טמפרטורת גוף. מניחים החזירים על כרית חימום הסירקולציה המחודשת מים כדי לשמור על טמפרטורת גוף נורמלית (C ° 38-40) במהלך ההליך הכירורגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכרוך את החזיר עם וילונות ארבעה מגבות להציב דפוס ברבע שמעליה ברחבי הבטן. מניח את הווילון הראשון ברחבי xiphisternum, הווילון השני לאורך בצד הלטרלי של הבטן כ 5 גמ &#39;לרוחב קו אמצע הבטן. מניח את הווילון השלישי ברחבי ציצת ​​ileal של האגן ואת הווילון הרביעי, כמו הווילון השני (אם כי בצד הנגדי), מושם לאורך בצד הלטרלי של הבטן כ 5 סנטימטרים לרוחב קו אמצע הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים וילון שולחן גדול, עם פתיחת חריץ המאפשר גישה לאתר כירורגית, על וילונות מגבת שבבסיס ולכסות את חזיר ושולחן הכירורגי כולו. הווילון הסופי הוא וילון Steri-הפנויה מונח על וילון השולחן הגדול. </li></ol> 2. ניתוח בטן צנתור של טרונק הלימפה המעיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך בעור 20 ס&quot;מ עם להב סכין המנתחים כדי לחשוף את שרירי הבטן הבסיסית. לחתוך את שכבות שרירי הבטן עם electrocautery מונו-קוטבית (20 הגדרה ואט) לחשוף את הצפק הקודקודית. פתח קטע ליניארי 20 ס&quot;מ של הצפק הקודקודית במספריים מצנבאום לגשת הקרביים בטן וכלי הלימפה. </li><li&gt; צב מפשקים על ההיבט גולגולתי של החתך הניתוחי לשמור על חלל הבטן פתוח למשך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרטיב את כל הרקמות עם חם (37 מעלות צלזיוס) תמיסת מלח סטרילית עבור ההליך הכירורגי כולו. הרם בעדינות פלח גדול של המעי כולל המעי הגס, cecum, מעי והמעי הריק יתכן שרמת מחלל הבטן exteriorize אותו בכנף שמאל של חזיר כדי לגשת בבטן העליונה, כבד וכלי הלימפה. אבטח את המעי exteriorized בעמדה עם וילונות מגבת נוספת לגבש קלע לתמוך המעי בעדינות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את כלי הלימפה, היא מטילה כ 4 סנטימטרים גולגולתי המדיאלי של הווריד התקין כליות, 6 סנטימטרים זנב-medial- גחון של מנהלי עבודת caval ומתחת ההיבט הקרבי של האונה הכבדה ממש ליד הלבלב 22,36,37. זהה את כלי הלימפה כמבנה שקוף חופף למגזר הגחון הימני של וריד שער 36,37. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את הלימפה Vessאל מן fascia שמסביב ידי מנסים לשחזר את הרקמה המצורפת בעדינות עם אפליקטורים Q-Tip. לאחר ההיבטים לרוחב של כלי מופרדים מן הרקמה הסובבת, ליצור פתח &quot;מנהרה&quot; מתחת לכלי השייט עם בוטה קנס שקצהו מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבור שלושה 2-0 תפרי משי מתחת לכלי השייט הלימפה עם מלקחיים בסדר. ולקשור את תפר הזנב ביותר הראשון כדי לחסום, להתרחב ולמלא את הכלי עם הלימפה. Purposefully לעזוב את הקצוות של תפר זה ארוך יחסית (4 ס&quot;מ) כדי לאבטח את הקטטר אל כלי הלימפה. מניח שני תפרים אחרים מופרדים 1.0 סנטימטר אחד מהשני והם כ 1.0-1.5 סנטימטר גולגולתי אל תפר הזנב המאובטח. להשאיר את שני התפרים הללו עם &quot;עניבה ליגטורה רופפת יחידה &#39;כדי לאפשר לאבטחה מהירה יותר של קטטר לתוך הכלי. הערה: הקטע של כלי הלימפה ממוקם בין תפר ligating הזנב ביותר התפר באמצע (של שני תפרי הגולגולת) הוא האתר עבור צנתור. לגבי suחומר ture, 2-0 תפר polyglactin יכול להוות תחליף 2-0 תפרי משי במידת צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכי חור קטן לתוך הכלי עם מספרי איריס להרחיב את הכלי עם מלקחיים בוטים בסדר. הכנס כ 1.0-1.5 סנטימטר של צינורות קטטר מיוחדים (4.06 קוטר חיצוני (OD) X 2.31 מזהים מ&quot;מ) עם קצה משופע לתוך הכלי ולקשור שני תפרי הגולגולת כדי לאבטח את הקטטר במקום. השתמש קצות התפר הארוכים של תפר הזנב כדי לאבטח את הקטטר אל כלי השיט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את מעי exteriorized עם כמויות של מלח חם ובעדינות להחזירו חלל הבטן להבטיח מיצוב אנטומי נכון של המעיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Exteriorize הקטטר את פרוותו אמצע שמאל (5-10 ס&quot;מ ventrally מן fossa paralumbar). לעשות חתך בעור עם אזמל להעביר נקז מחלל הבטן אל פני העור כדי ליצור פתח עבור ההחצנה של הקטטר. השתמש מלקחיים גדולים קלי exteriorize הקטטר מן CAV בטןity דרך פתח הנקז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הצפק הקודקודית עם דפוס תפר מתמשך פשוט של תפר 2-0 polyglactin עם מחט עגול (קונים). סגור את שכבות שרירי הבטן עם דפוס תפר קטע פשוט עם תפר 2-0 polyglactin על מחט עגול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את העור בדפוס subcuticular עם 2-0 תפר polyglactin על מחט חיתוך. Secure את הקטטר exteriorized על העור עם דפוס תפר ארנק חוט תפר ניילון 2-0 על מחט חיתוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח מעייל מיוחד על החזיר ועדיין מורדם להקל מיקומה ולהפחית את הלחץ של החזיר במהלך התאוששות. </li></ol> שחזור 3. פוסט-כירורגית אוסף לימפה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כ -10 דקות לפני הפסקת הרדמה משאיפת, לנהל bupenorphine (0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג) לשריר כדי לספק שיכוך כאבים שלאחר ניתוח מיידי. המשך bupenorphine (0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג) כל 12 שעות במשך 24-48 שעות כדי לשמור עלשיכוך כאבים שלאחר ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג החזירים לסיבוכים ניתוחים דואר בכל שעות 8-12 לתקופה של 7 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף את הלימפה 500 מ&quot;ל בקבוקים לשטוף פוליפרופילן, מצופה חומצה ethylenediamine tetraacetic (EDTA), שיושלם עם אנטיביוטיקה; פניצילין (6,000 IU), סטרפטומיצין (6 מ&quot;ג) ו- B amphotericin (3 מ&quot;ג) כל 12 שעות למשך 7 ימים. </li></ol> 4. כימות ApoB48 ליפופרוטאין, טריגליצריד, כולסטרול וחלבון הסכום שנגבה מן לימפה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה מדגם הלימפה 1,800 XG במשך 5 דקות ב 4 ° C.. איסוף supernatant ולהשתמש בו עבור כימות של טריגליצרידים, כולסטרול וחלבון כולל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחלק את supernatant לשלוש דוגמאות: מדגם חי, מים מזוקקים מדולל מדגם 1:20 מדגם סופי המדולל 1: 100 עם מים מזוקקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש supernatant חי כדי למדוד את רמות כולסטרול, עם ערכה זמינה מסחרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 1:20 01:100 דגימות בדילול למדוד טריגליצרידים ורמות חלבון הכולל עם ערכה זמינה מסחרי ואת assay חלבון bicinchoninic סך-חומצת בהתאמה. </li></ol> 5. כימות של ליפופרוטאין ApoB48, שנאספו לימפה 38 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את הריכוז של ליפופרוטאין ApoB48 עם שיטה מערבית סופגת מותאמת חיסון 38. הלימפה הכולל הפרד (SDS-PAGE) ג&#39;ל אלקטרופורזה polyacrylamide סולפט dodecyl נתרן טריס-acetate- 3-8%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את החלבונים מופרדים אל קרום פלואוריד polyvinylidene (0.45 מיקרומטר) דגירה אותם עם נוגדן polyclonal עז אל apoB (1: 4,000), ולאחר מכן לאגד את זה עם נוגדנים משני אנטי-עז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכמת את ליפופרוטאין ApoB48 עם chemiluminescence באמצעות השוואה ליניארי densitometric עם תקן חלבון ApoB48 מכרסם מטוהרים. </li></ol>

The authors have nothing to disclose.

איסוף לימפה במעי הוא שיטה מצוינת לחקור מנגנוני המעורבים שומנים 8-12 ו מטבוליזם התרופה 13-15, סרטן גרורות 16,17, סחר תא ותפקוד מערכת חיסון 18-26, במודלים של בעלי חיים שונים הניסיונות. ואכן, את היכולת לקצור כמויות גדולות של מי היקפי (מביא) ומרכז (efferent וכלי ?...

מערכת הלימפה היא שטח אלתר של פיזיולוגיה. במודלים פרה של צנתור הלימפה להתרחש מיני בעלי חיים שונה 1-8 ומשמשים והפרמצבטיקה ומכוני מחקר לחקור מנגנוני המעורבים שומנים 8-12 סמים מטבוליזם 13-15, גרורות סרטן 16 עם טיפול ניסיוני 17, ו -18 תפקוד מערכת החיסון -26. מחקר זה בוחן את שימוש צנתור מטען לימפה במעי במודל חזיר בית למדוד רכיבים של מטבוליזם שומנים בדם. מטבוליזם Lipoprotein מעורב בייצור הפרשת chylomicrons, כמו גם משינויים בשיעורי שומנים הקשורים חלבון כולל. אלה הם שיקולים חשובים כמו שיש הבדלים גדולים במטבוליזם שומנים בין במודלים של מכרסמים נפוצים ובני אדם וככזה, במודלי חזירים לאסוף לימפה במעי יכולים לספק מידע דומה יותר ללימוד שומנים ליtabolism באנשים 27-31. מספר טכניקות כירורגיות משמשות כדי לאסוף את לימפה במעי במינים של בעלי חיים גדולים: גישת כתף גולגולתי (כלומר, צנתור צינור חזה) 5, גישת אגף העליון לרוחב 32-34, וכן קו אמצע גחון או גישת paramedian 22,35. וידאו זה מתאר בפירוט את ההליך הניתוח חזירים בגישה כירורגית קו אמצע גחון עבור הצנתור של המטען לימפה במעי. היתרי טכניקה כירורגית זהירות שיטה זו של צנתור הלימפה לאסוף כמויות גדולות של הלימפה מרכיביו לאורך תקופות ממושכות של זמן. טכניקה זו פותחת מספר עצום של יישומים לתחומים רבים לבחון פונקציות פיסיולוגיות שונות. יישומים יכולים לכלול, אך אינם מוגבלים, ליפופרוטאין גוף וחילוף חומרי שומנים, immunosurveillance, בראשית גידול וגרור, תפקוד מעיים, ואת developmאף אוזן גרון והתקדמות של מחלה דלקתית של המעי.

<table><tbody><tr><td>Miller laryngoscope blade</td><td>Welch Allyn</td><td>68044</td><td>182 mm length</td></tr><tr><td>Surgivet advisor: Vital signs monitor</td><td>Surgivet</td><td>V9203</td><td></td></tr><tr><td>Rectal temperature probe</td><td>Surgivet</td><td>V3417</td><td></td></tr><tr><td>Mono-polar electrosurgery generator</td><td>Valley Lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum scissors</td><td>Fine Science</td><td>14518-18</td><td></td></tr><tr><td>Tuffier retractor</td><td>Stevens</td><td>162-11-676</td><td></td></tr><tr><td>Mosquito forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-10</td><td></td></tr><tr><td>Kelly forceps-curved (14cm)</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Allis tissue forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-eye (10.2cm)</td><td>Stevens</td><td>162-18-780</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-Adison (12.1cm)</td><td>Stevens</td><td>162-17-2510</td><td></td></tr><tr><td>Needle Drivers</td><td>Stevens</td><td>162-V98-42</td><td></td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Fine science</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Circulating water pump</td><td>Jorvet</td><td>J-783X</td><td></td></tr><tr><td>Maxitherm-Vinyl blanket</td><td>Jorvet</td><td>J-784C</td><td></td></tr><tr><td>Q tip applicators</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-960</td><td></td></tr><tr><td>Catheterization&amp;nbsp; tubing (4.06 OD X 2.31 ID)</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-160</td><td>Micro-Renethane implantation tubing</td></tr><tr><td>2-0 silk suture</td><td>Ethicon</td><td>LA556</td><td></td></tr><tr><td>2-0 polyglactin suture</td><td>Ethicon</td><td>J443H</td><td>2-0 vicryl</td></tr><tr><td>Large animal jacket</td><td>Lomir Biomedical Inc.</td><td>SSJ2YC</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene wash bottles</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-22C</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4333</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2411</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone</td><td>Elanco Animal Health</td><td></td><td>Stresnil</td></tr><tr><td>Dexmedetomidine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>6295</td><td>Dexdomitor</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Animal&amp;nbsp; Health</td><td>05260-5</td><td>IsoFlo</td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>2626</td><td>Ketaset</td></tr><tr><td>Bupenorphine hydrochloride</td><td>Champion Alstoe Animal Health</td><td></td><td>DIN:02347510</td></tr><tr><td>6 mm Endotracheal tube</td><td>Jorvet</td><td>J-165d</td><td></td></tr><tr><td>10% Lidocaine spray</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>DIN:02003767</td></tr><tr><td>4 % Chlorhexidine surgical scrub</td><td>Partnar Animal Health</td><td>PCH-011</td><td>Diluted: 2.0% solution</td></tr><tr><td>3M Surgical steri- drape</td><td>3M Health Care</td><td>1040</td><td></td></tr><tr><td>SDS page gel</td><td>Invitrogen</td><td>EA0375BOX</td><td>3-8 % tris acetate</td></tr><tr><td>Polyvinylidene fluoride membrane</td><td>Millipore</td><td>IPVH00010</td><td>0.45 &amp;mu;m pore size</td></tr><tr><td>ApoB antibody&amp;nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>AB742</td><td>1:4000 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-goat IgG-HRP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-2304</td><td></td></tr><tr><td>ECL Prime Western Blotting Reagent</td><td>GE Healthcare LifeSciences</td><td>RPN2232&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Triglyceride Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>998-40391/994-40491</td><td></td></tr><tr><td>Total Cholesterol Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>439-17501</td><td></td></tr><tr><td>Total Protein</td><td>&amp;nbsp;Pierce&amp;nbsp;</td><td>23225</td><td>Bicinchoninic Acid Assay</td></tr></tbody></table>

long-term catheterization of the intestinal lymph trunk and collection of lymph in neonatal pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.

<html> צנתור הלימפה של המטען הלימפה מעיים של חזיר בילוד מאפשר איסוף של כ 1 L / 24 שעות של הלימפה מרכזית על תקופה של 7 ימים. הלימפה שנאסף בניסויים זה הכיל רכיבים של מטבוליזם שומנים בדם, כלומר חלבון הלימפה הכולל, ליפופרוטאין ApoB48, טריגליצרידים, חלבון כולל, וכול?...

Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs at JoVE.com

Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

צנתור לטווח ארוך של טרונק לימפה במעי וגביית הלימפה חזירים ילודים

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

long-term-catheterization-intestinal-lymph-trunk-collection-lymph

Research

JoVE Journal

Medicine

9.0K Views.  University of Alberta. We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

Video: Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a surveillance system for potentially harmful antigens, optimizing mucosal immunity and adaptive immune responses1. Lymph is formed from interstitial fluid that enters blind-ended initial lymphatics, and then is transported against a pressure gradient in larger collecting lymphatics. Each collecting lymphatic is made up of a series of segments called lymphangions, separated by bicuspid valves that prevent backflow. Each lymphangion possesses a contractile cycle that propels lymph against a pressure gradient toward the central circulation2. This phasic contractile pattern is analogous to the cardiac cycle, with systolic and diastolic phases, and with a lower contraction frequency4. In addition, lymphatic smooth muscle generates tone and displays myogenic constriction and dilation in response to increases and decreases in luminal pressure, respectively5. A hybrid of molecular mechanisms that support both the phasic and tonic contractility of lymphatics are thus proposed.
Contraction of smooth muscle is generally regulated by the cytosolic Ca2+ concentration ([Ca2+]i) plus sensitivity to Ca2+, of the contractile elements in response to changes in the environment surrounding the cell6. [Ca2+]i is determined by the combination of the movement of Ca2+ through plasma membrane ligand or voltage gated Ca2+ channels and the release and uptake of Ca2+ from internal stores. Cytosolic Ca2+ binds to calmodulin and activates enzymes such as myosin light chain (MLC) kinase (MLCK), which in turn phosphorylates MLC leading to actin-myosin-mediated contraction8. However, the sensitivity of this pathway to Ca2+ can be regulated by the MLC phosphatase (MLCP)9. MLCP activity is regulated by Rho kinase (ROCK) and the myosin phosphatase inhibitor protein CPI-17.
Here, we present a method to evaluate changes in [Ca2+]i over time in isolated, perfused lymphatics in order to study Ca2+-dependent and Ca2+-sensitizing mechanisms of lymphatic smooth muscle contraction. Using isolated rat mesenteric collecting lymphatics we studied stretch-induced changes in [Ca2+]i and contractile activity. The isolated lymphatic model offers the advantage that pressure, flow, and the chemical composition of the bath solution can be tightly controlled. [Ca2+]i was determined by loading lymphatics with the ratiometric, Ca2+-binding dye Fura-2. These studies will provide a new approach to the broader problem of studying the different molecular mechanisms that regulate phasic contractions versus tonic constriction in lymphatic smooth muscle.

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

We introduce an approach to evaluate the cytosolic Ca2+ concentration in isolated lymphatics to study Ca2+-dependent and Ca2+-sensitizing mechanisms of lymphatic smooth muscle contraction.

מדידה של Cytosolic Ca 2 + ב lymphatics כויץ מבודד

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

Immunology and Infection

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the outside world. As such, the intestine plays a pivotal role in immunosurveillance and protection from enteric pathogens. Investigating intestinal physiology and immunology commonly employs 'intestinal loops' as an experimental model. The majority of these loop models are non-recovery surgical procedures that study short-term (&lt;24 hr) changes in the intestine (1-3). We previously created a recovery intestinal loop model to specifically measure long-term (&lt;6 mo) immunological changes in the intestine of sheep following exposure to vaccines, adjuvants, and viruses (4). This procedure localized treatments to a specific 'loop', allowing us to sample this area of the intestine. A significant drawback of this method is the single window of opportunity to administer treatments (i.e. at the time of surgery). Furthermore, samples of both the intestinal mucosa and luminal contents can only be taken at the termination of the project. Other salient limitations of the above model are that the surgical manipulation and requisite post-operative measures (e.g. administration of antibiotics and analgesics) can directly affect the treatment itself and/or alter immune function, thereby confounding results. Therefore, we modified our intestinal loop model by inserting long-term catheters into the loops. Sheep recover fully from the procedure, and are unaffected by the exteriorized catheters. Notably, the establishment of catheters in loops allows us to introduce multiple treatments over an extended interval, following recovery from surgery and clearance of drugs administered during surgery and the post-operative period.

We describe a novel surgical method for catheterizing 'intestinal loops' within the ileum of sheep. Once animals have recovered from surgery and have cleared antibiotics and analgesics, multiple treatments can be deposited directly in loops via the catheters.

צנתור של לולאות מעיים של מעלי גירה

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

Biology

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine via a series of lymphatic vessels and nodes that converge at the superior mesenteric lymph duct. Cannulation of the mesenteric lymph duct thus enables the collection of mesenteric lymph flowing from the intestine. Mesenteric lymph consists of a cellular fraction of immune cells (99% lymphocytes), aqueous fraction (fluid, peptides and proteins such as cytokines and gut hormones) and lipoprotein fraction (lipids, lipophilic molecules and apo-proteins). The mesenteric lymph duct cannulation model can therefore be used to measure the concentration and rate of transport of a range of factors from the intestine via the lymphatic system. Changes to these factors in response to different challenges (e.g., diets, antigens, drugs) and in disease (e.g., inflammatory bowel disease, HIV, diabetes) can also be determined. An area of expanding interest is the role of lymphatic transport in the absorption of orally administered lipophilic drugs and prodrugs that associate with intestinal lipid absorption pathways. Here we describe, in detail, a mesenteric lymph duct cannulated rat model which enables evaluation of the rate and extent of lipid and drug transport via the lymphatic system for several hours following intestinal delivery. The method is easily adaptable to the measurement of other parameters in lymph. We provide detailed descriptions of the difficulties that may be encountered when establishing this complex surgical method, as well as representative data from failed and successful experiments to provide instruction on how to confirm experimental success and interpret the data obtained.

Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

לימפה Duct cannulated עכברוש דגם mesenteric: בקשה להערכה של המעיים הלימפה תרופות תחבורה

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important phenomenon in the gut immunity. The stroma of secondary lymphoid organs, such as Peyer&#8217;s patches (PPs) or mesenteric lymph nodes, are where na&#239;ve lymphocytes sense antigens. Na&#239;ve lymphocytes circulate through the bloodstream to reach high endothelial venules, the portal of entry into PPs. Some immunomodulators are estimated to influence lymphocyte migration, but the precise evaluation of microcirculation dynamics is very difficult, and establishing a method to observe lymphocyte migration in vivo can contribute to the clarification of the precise mechanisms. We refined the method of collecting lymphocytes from the lymph duct and observing the detailed dynamics of gut-tropic lymphocytes in rat PPs. We chose confocal laser scanning microscopy to observe rat PPs in vivo and recorded it using time-lapse photography. We can now obtain clear images that can contribute to the analysis of lymphocyte dynamics.

Here, we describe a precise method for collecting thoracic duct lymphocytes and observing the migration of gut-tropic lymphocytes in rat Peyer&#8217;s patches for 3 hours using time-lapse photography. This technique can clarify how the dynamics of lymphocytes are affected under inflammatory conditions.

תצפית מיקרוסקופית של לימפוציטים דינמיקה במדבקות של עכברוש פייר

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important ...

Intubation, Central Venous Catheter, and Arterial Line Placement in Swine for Translational Research in Abdominal Transplantation Surgery

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries does not solely rely on the research team's surgical skills; perioperative care and management procedures, like intubation, central venous line, and arterial line placement, are necessary and of the utmost importance for favorable experiment results. As it is uncommon for research teams to have anesthesiologists or any other staff other than the surgical team, the surgical team involved in translational research must acquire and/or develop the skills to perform the perioperative care. The purpose of this paper is to show the techniques of intubation, central venous catheter, and arterial line placement used and perfected at the Toronto Organ Preservation Laboratory over the last 10 years, to be used as a reference for future researchers joining either this team or any other lab performing translational research protocols in swine and/or abdominal transplantation.

<meta charset="utf8"></head><body>אינטובציה, צנתר ורידי מרכזי ומיקום קו עורקי בחזירים למחקר תרגומי בניתוחי השתלת בטן

To obtain the best possible results, surgeons performing translational research experiments should be proficient at intubation and vascular line placement. This paper describes the techniques used by the Toronto Organ Preservation Laboratory to perform these procedures.

אינטובציה, צנתר ורידי מרכזי ומיקום קו עורקי בחזירים למחקר תרגומי בניתוחי השתלת בטן

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries ...

צנתר היקמן לגישה ארוכת טווח של כלי הדם בחזירים

Hickman Catheter Use for Long-Term Vascular Access in a Preclinical Swine Model

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood monitoring and reliable intravenous fluid and drug administration. Specifically, the tunneled multi-lumen Hickman catheter (HC) is commonly used in swine models due to its lower extrication and complication rates. Despite fewer complications relative to other CVCs, HC-related morbidity presents a significant challenge, as it can significantly delay or otherwise negatively impact ongoing studies. The proper insertion and maintenance of HCs is paramount in preventing these complications, but there is no consensus on best practices. The purpose of this protocol is to comprehensively describe an approach for the insertion and maintenance of a tunneled HC in swine that mitigates HC-related complications and morbidity. The use of these techniques in &gt;100 swine has resulted in complication-free patent lines up to 8 months and no catheter-related mortality or infection of the ventral surgical site. This protocol offers a method to optimize the lifespan of the HC and guidance for approaching issues during use.

מחבר זרקור: שימוש בצנתר היקמן לגישה ארוכת טווח לכלי דם במודל חזירי פרה-קליני  

A reliable and reproducible approach for the insertion and maintenance of a tunneled Hickman catheter for long-term vascular access in swine is described. Placement of a central venous catheter allows for convenient daily sampling of whole blood from awake animals and intravenous administration of medication and fluids.

שימוש בצנתר היקמן לגישה ארוכת טווח לכלי דם במודל חזירי פרה-קליני

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood ...

Surgical Technique for Lumbar Spinal Catheter Insertion in Pigs Enabling Continuous Access to the Thecal Sac in a Terminal Setup

Pigs are increasingly used as a large animal model for pharmacologic CNS research due to the anatomical and physiological similarities between the porcine and human central nervous systems (CNS). However, accessing the cerebrospinal fluid (CSF) in larger pig breeds by conventional lumbar puncture techniques can be challenging due to an oblique orientation of the spinal spinous processes and a limited interlaminar space. Accordingly, an open surgical procedure for inserting a lumbar spinal catheter for continuous CSF sampling at the L4/L5 level in pigs is thoroughly described in this work. After positioning the pig and identifying the anatomical landmarks, a dorsal midline surgical incision is made to expose the spinous processes. By advancing the introducer needle, the spinal catheter is inserted inside the thecal sac of the spinal canal while leaving the bone structures of the spine intact. This method allows continuous infusion into or sampling from the porcine thecal sac with minimal bleeding or CSF leakage. The procedure is simple, time-efficient, and reproducible across different experimental setups, offering significant potential for various pre-clinical studies, including pharmacokinetic research, surgical training, and spinal cord injury models.

We present a technique for inserting a lumbar spinal catheter at the L4-L5 level in a 3-month-old Danish Landrace pig as part of a terminal research protocol, enabling continuous infusion or CSF sampling from the thecal sac.

טכניקה כירורגית להחדרת קטטר עמוד השדרה המותני בחזירים המאפשרת גישה רציפה לשק ה-thecal במערך מסוף

Pigs are increasingly used as a large animal model for pharmacologic CNS research due to the anatomical and physiological similarities between the porcine ...

צנתור לטווח ארוך של טרונק לימפה במעי וגביית הלימפה חזירים ילודים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

מדידה של Cytosolic Ca^{2 +} ב lymphatics כויץ מבודד

צנתור של לולאות מעיים של מעלי גירה

לימפה Duct cannulated עכברוש דגם mesenteric: בקשה להערכה של המעיים הלימפה תרופות תחבורה

תצפית מיקרוסקופית של לימפוציטים דינמיקה במדבקות של עכברוש פייר

אינטובציה, צנתר ורידי מרכזי ומיקום קו עורקי בחזירים למחקר תרגומי בניתוחי השתלת בטן

אינטובציה, צנתר ורידי מרכזי ומיקום קו עורקי בחזירים למחקר תרגומי בניתוחי השתלת בטן

שימוש בצנתר היקמן לגישה ארוכת טווח לכלי דם במודל חזירי פרה-קליני

שימוש בצנתר היקמן לגישה ארוכת טווח לכלי דם במודל חזירי פרה-קליני

שימוש בצנתר היקמן לגישה ארוכת טווח לכלי דם במודל חזירי פרה-קליני

טכניקה כירורגית להחדרת קטטר עמוד השדרה המותני בחזירים המאפשרת גישה רציפה לשק ה-thecal במערך מסוף