The work was supported in part by funding from Alberta Livestock and Meat Agency and Natural Science and Research Council Discovery grant to S. D. Proctor.

비디오와 원고 모두에 설명 된 실험 동물의 모든 절차는 동물 케어의 캐나다위원회가 설정 한 가이드 라인을 기관 동물 관리 및 사용위원회의 승인을 관찰 하였다. 1. 수술 마취 및 신생아 돼지의 수술 준비 <ol><li> 된 azaperone (0.3 ㎎ / ㎏), 케타민 하이드로 클로라이드 (10 ㎎ / ㎏), 덱스 메데 토미 딘 (15 μg의 / kg) : 분리 대기실에서 25kg에 포함 된 근육 진정 마취 약물 칵테일 목의 기지 근처에 돼지를 premedicate. 참고 : 향상된 내 수술 통증 조절에 대한 사전 마취 약물 칵테일에 부 프레 노르 핀 (0.005-0.02 ㎎ / ㎏)를 추가합니다. </li><li> 안면 마스크를 사용하여 (500 ㎖-1000 ml / 분의 O이 4-5 %의 이소 플루 란) 흡입 이소 플루 란 흡입 가스 돼지 마취. 수의학 후두 범위 (17~25cm 긴 직선 칼날)를 사용하여 성대 시각화 및 보컬 국소 10 % 리도카인 중성화 적용코듀로이 바지. 리도카인 스프레이 성대 경련 및기도 폐쇄의 가능성을 줄이기 위해 삽관에 30 ~ 60 초 전에 성대에 문의 할 수 있습니다. </li><li> 이소 플루 란 가스로 마취 성대 사이에 수갑을 차고 기관 내 튜브 (5.0-7.0 mm 내부 직경 (ID))를 전달하여 돼지를 삽관 및 유지 보수 (/ 1,000-2,000 ml의에서 0.5 ~ 2.0 %의 이소 플루 란을 분 O 2)를 사용하여 폐쇄 수술을 통해 마취 시스템을 재 호흡 회로. 턱 톤에 의한 마취의 수준, 두 페달과 눈꺼풀 반사 반응을 평가합니다. 만료 된 마취 가스는 소기 및 수술 스위트 외부에 배출된다. </li><li> 70 % 이소 프로필 알코올 린스 2.0 %의 클로르헥시딘 수술 스크럽 솔루션 귀의 외부 표면을 청소합니다. 수술하는 동안, 20 G 정맥 카테터, 정맥 유체 (5-10 ㎖ / kg / hr로 락 테이트 화 링거액)을 제공 귀 정맥 카테 테르를 꽂다. 의대와 혀의 점막 표면에 맥박 산소 측정기를 고정iCal의 테이프 심박수 및 말초 혈액의 산소 포화도 (SPO 2)를 모니터링한다. </li><li> 지느러미 누운 위치에 마취 된 돼지를 놓고 치골의 복부 측면에 중반 흉부 꼬리 쪽의 복부 복부를 면도. 이 2.0 %의 클로르헥시딘에게 외과 수술 및 멸균 세척을 교대로이 지역을 청소합니다. </li><li> 수술 스위트 마취 돼지를 전송하고 70 % 이소 프로필 알코올 린스의 최종 수술 스크럽을 적용, 그것은 건조 할 수 있도록하고 동물을 드레이프. </li><li> 체온을 모니터링 직장으로 직장 온도 프로브로부터 약 2 ~ 4 cm의 삽입. 수술 중 정상 체온 (38 ~ 40 °의 C)를 유지하기 위해 물 순환 가열 패드에 돼지를 놓습니다. </li><li> 복부 주위의 상부 사분면 패턴에 배치 네 수건 커튼와 돼지 드레이프. 복부 약 5 (c)의 좌우 측면을 따라, 흉부의 검상 부부를 통해 두 번째 드레이프를 처음 드레이프를 놓습니다복부 정중선에 m의 측면. (반대편에 있지만), 약 5 센티미터 복부 정중선 측 방향 복부의 측면 측면을 따라 배치되는 제 2 드레이프처럼 골반의 회장 크레스트와 네 번째 드레이프에서 세 번째 드레이프를 놓습니다. </li><li> 기본 수건 커튼을 통해, 수술 부위에 대한 액세스를 허용하는 슬릿 개구, 큰 테이블 드레이프를 놓고 돼지와 전체 수술 테이블 커버. 마지막 드레이프가 큰 테이블 드레이프에 둔 일회용 steri - 드레이프이다. </li></ol> 창자 림프 트렁크 2. 복부 수술 및 도관 <ol><li> 기본 복부 근육을 노출 메스 블레이드 20cm의 피부 절개를합니다. 정수리 복막을 노출 모노 폴라 전기 소 (20 와트 설정)으로 복근 층 절개. 복부 내장과 림프관에 액세스 할 수 Metzenbaum 가위와 정수리 복막의 20cm의 직선 세그먼트를 엽니 다. </li><li&gt; 수술 기간 동안 열린 복강을 유지하기 위해 수술 절개의 두개골 측면에서 트랙터를 놓습니다. </li><li> 전체 수술 따뜻한 (37 ° C) 멸균 식염수로 모든 조직을 적셔. 조심스럽게 복강에서 결장, 맹장, 회장 및 공장을 포함한 대장의 큰 부분을 들어 올려 상단 복부, 간, 림프관에 액세스 할 돼지의 왼쪽 측면에 외면 화하다. 부드럽게 장을 지원하기 위해 슬링을 형성하기 위해 추가 수건 커튼과 위치에 표면화 소장을 고정합니다. </li><li> 림프관을 찾은는 약 4cm 오른쪽 신장 정맥, 6cm 꼬리-medial- 대정맥 반장의 복부 및 췌장 22,36,37 근처 오른쪽 간 엽의 내장 측면 아래의 두개골 - 중간을 낳는다. 포털 정맥 (36, 37)의 오른쪽 복부 세그먼트에 나란히 반투명 구조로 림프관을 확인합니다. </li><li> 림프의 VESS를 분리엘 부드럽게 Q 팁 어플리케이터와 함께 첨부 된 조직을 멀리 괴롭 히고하여 주변의 밴드에서. 용기의 측면 측면이 주변 조직으로부터 분리되면, 미세 무딘는 집게를 팁으로 용기 아래에 &quot;터널&quot;개방을 만들 수 있습니다. </li><li> 미세 집게로 림프관 아래에 세 2-0 실크 봉합사를 전달합니다. , 폐색 팽창과 림프와 혈관을 채우기 위해 먼저 대부분의 꼬리 봉합사를 결찰. 의도적으로 림프 혈관에 카테터를 확보하기 위해 상대적으로 긴이 봉합 (4cm)의 끝을 둡니다. 다른 두 봉합은 서로 1.0 cm를 분리하고 보안 꼬리 봉합에 두개골 1.0-1.5 cm 약입니다 놓습니다. 혈관에 카테터의 빠른 확보 할 수 있도록 &#39;하나의 느슨한 끈 넥타이&#39;로이 두 봉합을 둡니다. 참고 : 대부분의 꼬리 결찰 봉합하고 (두 개의 두개골 봉합의) 중간 봉합 사이에있는 림프관의 세그먼트는 카테터를위한 사이트입니다. 스와 관련하여필요한 경우 스트럭처 재료는 2-0 polyglactin 봉합사 2-0 실크 봉합사를 대체 할 수있다. </li><li> 홍채 가위로 배에 작은 구멍을 잘라 잘 무딘 집게로 혈관을 팽창. 용기에 경 사진 단부와 전문 카테터 튜브 (4.06 외경 (OD) X 2.31 mm의 ID)의 약 1.0-1.5 cm를 삽입하고 제자리에 카테터를 고정하는 두 개의 두개골 봉합을 묶어. 용기에 카테터를 확보하기 위해 꼬리 봉합의 긴 봉합 끝을 사용합니다. </li><li> 따뜻한 식염수의 풍부한 양으로 표면화 장을 세척하고 부드럽게 창자의 정확한 해부학 적 위치를 확보 복강으로 돌아갑니다. </li><li> (paralumbar 포사에서 5-10cm 복부) 왼쪽 중간 측면에서 카테터를 외면 화하다. 메스 피부 절개를하고 카테터의 exteriorization위한 개구를 만들 피부 표면에 복강에서 투관침을 통과한다. 복부 CAV에서 카테터를 외면 화하다하기 위해 큰 켈리 집게를 사용하여투관침 개방을 통해 ITY. </li><li> 라운드 (테이퍼) 바늘 2-0 polyglactin 봉합의 간단한 연속 봉합 패턴 정수리 복막을 닫습니다. 둥근 바늘에 2-0 polyglactin 봉합과 간단한 중단 봉합 패턴으로 복부 근육 레이어를 닫습니다. </li><li> 절단 바늘에 2-0 polyglactin 봉합과 표피 하 패턴으로 피부를 닫습니다. 지갑 문자열 봉합 패턴 피부와 절단 바늘에 2-0 나일론 봉합사로 표면화 카테터를 고정합니다. </li><li> 여전히 배치를 용이하게하고 복구하는 동안 돼지의 스트레스를 줄이기 위해 마취 상태에서 돼지 전문 재킷을 놓습니다. </li></ol> 3. 포스트 수술 복구 및 림프 컬렉션 <ol><li> 이전에 흡입 마취의 중단에 약 10 분, 즉시 수술 후 진통제를 제공하기 위해 근육 bupenorphine (0.1 ㎎ / ㎏)을 관리 할 수​​ 있습니다. bupenorphine 계속 (0.1 ㎎ / ㎏) 24 ~ 48 시간 유지하기위한 모든 12 시간수술 후 진통제. </li><li> 수술 후 합병증에 대해 7 일 동안 매일 8 ~ 12 시간을 돼지를 모니터링합니다. </li><li> 에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA), 코팅 및 항생제로 보충 된 500㎖의 폴리 프로필렌 세척 병 림프를 수집; 페니실린 (6000 IU), 스트렙토 마이신 (6 mg) 및 암포 테리 신 B (3 mg)을 7 일 동안 매 12 시간. </li></ol> 지단백질 ApoB48, 중성 지방, 콜레스테롤 및 총 단백질의 정량 4. 림프에서 수집 <ol><li> 4 ℃에서 5 분 동안 1,800 XG에서 림프 샘플을 원심 분리기. 상층 액을 수집하고 중성 지방, 콜레스테롤 및 총 단백질의 정량을 위해 사용합니다. </li><li> 희석 샘플, 샘플 희석 1시 20분 증류수와 1 희석 최종 샘플 : 증류수로 100 세 샘플로 뜨는을 나눈다. </li><li> 시판의 키트, 콜레스테롤 수준을 측정하는 희석 상등액을 사용한다. </li><li> 1시 20분 1:10 사용0 희석 된 샘플은 시판 키트 각각 bicinchoninic 산 총 단백질 분석과 트리글리 세라이드 및 총 단백질 수준을 측정 하였다. </li></ol> 림프 (38)로부터 수집 된 지단백 ApoB48 5. 정량, <ol><li> 적응 면역 웨스턴 블로 팅 방법 (38) 지질 단백질 ApoB48의 농도를 결정합니다. 3~8% 트리스 초산 나트륨 도데 실 설페이트 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동 (SDS-PAGE)으로 분리 총 림프. </li><li> 항 - 염소 이차 항체로 바인딩 할 : 폴리 비닐 리덴 플루오 라이드 막 (0.45 μm의)로 분리 된 단백질을 옮기고 형 ApoB (4000 1)에 염소 폴리 클로 날 항체와이를 부화. </li><li> 정제 설치류 ApoB48 단백질 표준 선형 농도계 비교하여 화학 발광 지단백질 ApoB48 정량화. </li></ol>

The authors have nothing to disclose.

장 림프를 수집하는 다양한 실험 동물 모델에서 지질 8-12 및 약물 13-15 대사, 암 전이 16, 17, 셀 인신 매매와 면역 기능 18-26에 관여하는 메커니즘을 조사 할 수있는 좋은 방법입니다. 실제로, 장기간에 걸쳐 어느 주연 (심성) 및 중앙 (원심성 큰 트렁크 용기) 림프 다량 수확 할 수있는 능력은 면역 변조 제 18-22을 가진 도전 다음 세포 집단에서 발생하는 시간 ?...

림프 시스템은 생리학의 파악 하였다 영역입니다. 림프 카테터의 전임상 모델은 다른 동물 종 1-8에서 발생하는 지질 8-12 및 약물 대사 13-15, 실험적인 치료 (17)와 암 전이 (16)에 관여하는 메커니즘을 조사하기 위해 제약 산업 및 연구 기관에 의해 사용되며, 면역 기능 (18) -26. 본 연구는 지단백질 대사의 성분을 측정하는 돼지 모델에서 장 림프 트렁크 카테터의 사용을 탐구한다. 지단백질 대사는 생산과 분비 킬로 미크론의뿐만 아니라 연관된 지질 및 총 단백질의 변화에​​ 관여한다. 일반적으로 사용되는 설치류 모델과 인간 사이와 같은 지질 대사에 큰 차이가 있기 때문에이 날 지질 연구를 더 비교 정보를 제공 할 수있는 장 림프를 수집하기 위해 돼지 모델을 사용, 중요한 고려 사항입니다사람들 27-31에서 tabolism. 여러 가지 수술 기법은 많은 동물 종에서 장 림프 수집하는 데 사용됩니다 두개골 어깨 접근 방식 (즉, 흉부 덕트 카테터) (5), 측면 상부 측면의 접근 방식 32-34, 및 복부 정중선 또는 paramedian 접근 22,35. 이 동영상은 자세히 장 림프 줄기의 카테터를위한 복부 정중선 수술 방법을 사용하여 돼지의 수술 절차를 설명합니다. 조심 수술 기법의 허가 림프 카테터의이 방법은 장시간에 걸쳐 큰 림프의 수량과 그 구성 요소를 수집합니다. 이 기술은 다양한 생리적 기능을 검사 다양한 분야에 응용 프로그램의 무수를 엽니 다. 응용 프로그램이 포함될 수 있지만, 전신 지질 및 지단백질 대사 immunosurveillance 종양 기원 및 전이, 장 기능, developm, 이에 한정되지 않는다엔트과 장 염증 질환의 진행.

<table><tbody><tr><td>Miller laryngoscope blade</td><td>Welch Allyn</td><td>68044</td><td>182 mm length</td></tr><tr><td>Surgivet advisor: Vital signs monitor</td><td>Surgivet</td><td>V9203</td><td></td></tr><tr><td>Rectal temperature probe</td><td>Surgivet</td><td>V3417</td><td></td></tr><tr><td>Mono-polar electrosurgery generator</td><td>Valley Lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum scissors</td><td>Fine Science</td><td>14518-18</td><td></td></tr><tr><td>Tuffier retractor</td><td>Stevens</td><td>162-11-676</td><td></td></tr><tr><td>Mosquito forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-10</td><td></td></tr><tr><td>Kelly forceps-curved (14cm)</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Allis tissue forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-eye (10.2cm)</td><td>Stevens</td><td>162-18-780</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-Adison (12.1cm)</td><td>Stevens</td><td>162-17-2510</td><td></td></tr><tr><td>Needle Drivers</td><td>Stevens</td><td>162-V98-42</td><td></td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Fine science</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Circulating water pump</td><td>Jorvet</td><td>J-783X</td><td></td></tr><tr><td>Maxitherm-Vinyl blanket</td><td>Jorvet</td><td>J-784C</td><td></td></tr><tr><td>Q tip applicators</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-960</td><td></td></tr><tr><td>Catheterization&amp;nbsp; tubing (4.06 OD X 2.31 ID)</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-160</td><td>Micro-Renethane implantation tubing</td></tr><tr><td>2-0 silk suture</td><td>Ethicon</td><td>LA556</td><td></td></tr><tr><td>2-0 polyglactin suture</td><td>Ethicon</td><td>J443H</td><td>2-0 vicryl</td></tr><tr><td>Large animal jacket</td><td>Lomir Biomedical Inc.</td><td>SSJ2YC</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene wash bottles</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-22C</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4333</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2411</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone</td><td>Elanco Animal Health</td><td></td><td>Stresnil</td></tr><tr><td>Dexmedetomidine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>6295</td><td>Dexdomitor</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Animal&amp;nbsp; Health</td><td>05260-5</td><td>IsoFlo</td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>2626</td><td>Ketaset</td></tr><tr><td>Bupenorphine hydrochloride</td><td>Champion Alstoe Animal Health</td><td></td><td>DIN:02347510</td></tr><tr><td>6 mm Endotracheal tube</td><td>Jorvet</td><td>J-165d</td><td></td></tr><tr><td>10% Lidocaine spray</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>DIN:02003767</td></tr><tr><td>4 % Chlorhexidine surgical scrub</td><td>Partnar Animal Health</td><td>PCH-011</td><td>Diluted: 2.0% solution</td></tr><tr><td>3M Surgical steri- drape</td><td>3M Health Care</td><td>1040</td><td></td></tr><tr><td>SDS page gel</td><td>Invitrogen</td><td>EA0375BOX</td><td>3-8 % tris acetate</td></tr><tr><td>Polyvinylidene fluoride membrane</td><td>Millipore</td><td>IPVH00010</td><td>0.45 &amp;mu;m pore size</td></tr><tr><td>ApoB antibody&amp;nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>AB742</td><td>1:4000 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-goat IgG-HRP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-2304</td><td></td></tr><tr><td>ECL Prime Western Blotting Reagent</td><td>GE Healthcare LifeSciences</td><td>RPN2232&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Triglyceride Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>998-40391/994-40491</td><td></td></tr><tr><td>Total Cholesterol Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>439-17501</td><td></td></tr><tr><td>Total Protein</td><td>&amp;nbsp;Pierce&amp;nbsp;</td><td>23225</td><td>Bicinchoninic Acid Assay</td></tr></tbody></table>

long-term catheterization of the intestinal lymph trunk and collection of lymph in neonatal pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.

<html> 신생아 돼지의 창자 림프 트렁크의 림프 카테터는 7 일 동안 약 1 L 중앙 림프의 / 24 시간의 모음을 할 수 있습니다. 이 실험에서 수집 된 림프 지질 대사, 즉 총 림프 단백질, ApoB48 지단백, 중성 지방, 총 단백질, 콜레스테롤의 구성 요소가 포함되어 있습니다. 표 1 주요 세 돼지 풀 림프 샘플에서 이러한 지질 성분의 대표 양. 특히, 림프의 흐름과 지질 성분은 인라인 장 ?...

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Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

신생아 돼지에서 림프의 창자 림프 트렁크와 컬렉션의 장기 도관

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

8.6K 조회수.  University of Alberta. We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

비디오: Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a surveillance system for potentially harmful antigens, optimizing mucosal immunity and adaptive immune responses1. Lymph is formed from interstitial fluid that enters blind-ended initial lymphatics, and then is transported against a pressure gradient in larger collecting lymphatics. Each collecting lymphatic is made up of a series of segments called lymphangions, separated by bicuspid valves that prevent backflow. Each lymphangion possesses a contractile cycle that propels lymph against a pressure gradient toward the central circulation2. This phasic contractile pattern is analogous to the cardiac cycle, with systolic and diastolic phases, and with a lower contraction frequency4. In addition, lymphatic smooth muscle generates tone and displays myogenic constriction and dilation in response to increases and decreases in luminal pressure, respectively5. A hybrid of molecular mechanisms that support both the phasic and tonic contractility of lymphatics are thus proposed.
Contraction of smooth muscle is generally regulated by the cytosolic Ca2+ concentration ([Ca2+]i) plus sensitivity to Ca2+, of the contractile elements in response to changes in the environment surrounding the cell6. [Ca2+]i is determined by the combination of the movement of Ca2+ through plasma membrane ligand or voltage gated Ca2+ channels and the release and uptake of Ca2+ from internal stores. Cytosolic Ca2+ binds to calmodulin and activates enzymes such as myosin light chain (MLC) kinase (MLCK), which in turn phosphorylates MLC leading to actin-myosin-mediated contraction8. However, the sensitivity of this pathway to Ca2+ can be regulated by the MLC phosphatase (MLCP)9. MLCP activity is regulated by Rho kinase (ROCK) and the myosin phosphatase inhibitor protein CPI-17.
Here, we present a method to evaluate changes in [Ca2+]i over time in isolated, perfused lymphatics in order to study Ca2+-dependent and Ca2+-sensitizing mechanisms of lymphatic smooth muscle contraction. Using isolated rat mesenteric collecting lymphatics we studied stretch-induced changes in [Ca2+]i and contractile activity. The isolated lymphatic model offers the advantage that pressure, flow, and the chemical composition of the bath solution can be tightly controlled. [Ca2+]i was determined by loading lymphatics with the ratiometric, Ca2+-binding dye Fura-2. These studies will provide a new approach to the broader problem of studying the different molecular mechanisms that regulate phasic contractions versus tonic constriction in lymphatic smooth muscle.

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

We introduce an approach to evaluate the cytosolic Ca2+ concentration in isolated lymphatics to study Ca2+-dependent and Ca2+-sensitizing mechanisms of lymphatic smooth muscle contraction.

Cytosolic CA의 측정 2 + 절연 수축성 Lymphatics에

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

연구

면역학 및 감염병학

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the outside world. As such, the intestine plays a pivotal role in immunosurveillance and protection from enteric pathogens. Investigating intestinal physiology and immunology commonly employs 'intestinal loops' as an experimental model. The majority of these loop models are non-recovery surgical procedures that study short-term (&lt;24 hr) changes in the intestine (1-3). We previously created a recovery intestinal loop model to specifically measure long-term (&lt;6 mo) immunological changes in the intestine of sheep following exposure to vaccines, adjuvants, and viruses (4). This procedure localized treatments to a specific 'loop', allowing us to sample this area of the intestine. A significant drawback of this method is the single window of opportunity to administer treatments (i.e. at the time of surgery). Furthermore, samples of both the intestinal mucosa and luminal contents can only be taken at the termination of the project. Other salient limitations of the above model are that the surgical manipulation and requisite post-operative measures (e.g. administration of antibiotics and analgesics) can directly affect the treatment itself and/or alter immune function, thereby confounding results. Therefore, we modified our intestinal loop model by inserting long-term catheters into the loops. Sheep recover fully from the procedure, and are unaffected by the exteriorized catheters. Notably, the establishment of catheters in loops allows us to introduce multiple treatments over an extended interval, following recovery from surgery and clearance of drugs administered during surgery and the post-operative period.

We describe a novel surgical method for catheterizing 'intestinal loops' within the ileum of sheep. Once animals have recovered from surgery and have cleared antibiotics and analgesics, multiple treatments can be deposited directly in loops via the catheters.

Ruminants에 창자 루프 Catheterization

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

생물학

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine via a series of lymphatic vessels and nodes that converge at the superior mesenteric lymph duct. Cannulation of the mesenteric lymph duct thus enables the collection of mesenteric lymph flowing from the intestine. Mesenteric lymph consists of a cellular fraction of immune cells (99% lymphocytes), aqueous fraction (fluid, peptides and proteins such as cytokines and gut hormones) and lipoprotein fraction (lipids, lipophilic molecules and apo-proteins). The mesenteric lymph duct cannulation model can therefore be used to measure the concentration and rate of transport of a range of factors from the intestine via the lymphatic system. Changes to these factors in response to different challenges (e.g., diets, antigens, drugs) and in disease (e.g., inflammatory bowel disease, HIV, diabetes) can also be determined. An area of expanding interest is the role of lymphatic transport in the absorption of orally administered lipophilic drugs and prodrugs that associate with intestinal lipid absorption pathways. Here we describe, in detail, a mesenteric lymph duct cannulated rat model which enables evaluation of the rate and extent of lipid and drug transport via the lymphatic system for several hours following intestinal delivery. The method is easily adaptable to the measurement of other parameters in lymph. We provide detailed descriptions of the difficulties that may be encountered when establishing this complex surgical method, as well as representative data from failed and successful experiments to provide instruction on how to confirm experimental success and interpret the data obtained.

Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

장간막 림프 덕트 유관 쥐 모델 : 창자 림프 약물 운송의 평가에 응용

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important phenomenon in the gut immunity. The stroma of secondary lymphoid organs, such as Peyer&#8217;s patches (PPs) or mesenteric lymph nodes, are where na&#239;ve lymphocytes sense antigens. Na&#239;ve lymphocytes circulate through the bloodstream to reach high endothelial venules, the portal of entry into PPs. Some immunomodulators are estimated to influence lymphocyte migration, but the precise evaluation of microcirculation dynamics is very difficult, and establishing a method to observe lymphocyte migration in vivo can contribute to the clarification of the precise mechanisms. We refined the method of collecting lymphocytes from the lymph duct and observing the detailed dynamics of gut-tropic lymphocytes in rat PPs. We chose confocal laser scanning microscopy to observe rat PPs in vivo and recorded it using time-lapse photography. We can now obtain clear images that can contribute to the analysis of lymphocyte dynamics.

Here, we describe a precise method for collecting thoracic duct lymphocytes and observing the migration of gut-tropic lymphocytes in rat Peyer&#8217;s patches for 3 hours using time-lapse photography. This technique can clarify how the dynamics of lymphocytes are affected under inflammatory conditions.

쥐 페이어의 패치에서 림프구 역학의 현미경 관찰

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important ...

의학

Intubation, Central Venous Catheter, and Arterial Line Placement in Swine for Translational Research in Abdominal Transplantation Surgery

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries does not solely rely on the research team's surgical skills; perioperative care and management procedures, like intubation, central venous line, and arterial line placement, are necessary and of the utmost importance for favorable experiment results. As it is uncommon for research teams to have anesthesiologists or any other staff other than the surgical team, the surgical team involved in translational research must acquire and/or develop the skills to perform the perioperative care. The purpose of this paper is to show the techniques of intubation, central venous catheter, and arterial line placement used and perfected at the Toronto Organ Preservation Laboratory over the last 10 years, to be used as a reference for future researchers joining either this team or any other lab performing translational research protocols in swine and/or abdominal transplantation.

To obtain the best possible results, surgeons performing translational research experiments should be proficient at intubation and vascular line placement. This paper describes the techniques used by the Toronto Organ Preservation Laboratory to perform these procedures.

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries ...

돼지의 장기 혈관 접근을 위한 Hickman 카테터

Hickman Catheter Use for Long-Term Vascular Access in a Preclinical Swine Model

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood monitoring and reliable intravenous fluid and drug administration. Specifically, the tunneled multi-lumen Hickman catheter (HC) is commonly used in swine models due to its lower extrication and complication rates. Despite fewer complications relative to other CVCs, HC-related morbidity presents a significant challenge, as it can significantly delay or otherwise negatively impact ongoing studies. The proper insertion and maintenance of HCs is paramount in preventing these complications, but there is no consensus on best practices. The purpose of this protocol is to comprehensively describe an approach for the insertion and maintenance of a tunneled HC in swine that mitigates HC-related complications and morbidity. The use of these techniques in &gt;100 swine has resulted in complication-free patent lines up to 8 months and no catheter-related mortality or infection of the ventral surgical site. This protocol offers a method to optimize the lifespan of the HC and guidance for approaching issues during use.

저자 스포트라이트: 전임상 돼지 모델에서 장기 혈관 접근을 위한 Hickman 카테터 사용  

A reliable and reproducible approach for the insertion and maintenance of a tunneled Hickman catheter for long-term vascular access in swine is described. Placement of a central venous catheter allows for convenient daily sampling of whole blood from awake animals and intravenous administration of medication and fluids.

전임상 돼지 모델에서 장기 혈관 접근을 위한 Hickman 카테터 사용

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood ...

Surgical Technique for Lumbar Spinal Catheter Insertion in Pigs Enabling Continuous Access to the Thecal Sac in a Terminal Setup

Pigs are increasingly used as a large animal model for pharmacologic CNS research due to the anatomical and physiological similarities between the porcine and human central nervous systems (CNS). However, accessing the cerebrospinal fluid (CSF) in larger pig breeds by conventional lumbar puncture techniques can be challenging due to an oblique orientation of the spinal spinous processes and a limited interlaminar space. Accordingly, an open surgical procedure for inserting a lumbar spinal catheter for continuous CSF sampling at the L4/L5 level in pigs is thoroughly described in this work. After positioning the pig and identifying the anatomical landmarks, a dorsal midline surgical incision is made to expose the spinous processes. By advancing the introducer needle, the spinal catheter is inserted inside the thecal sac of the spinal canal while leaving the bone structures of the spine intact. This method allows continuous infusion into or sampling from the porcine thecal sac with minimal bleeding or CSF leakage. The procedure is simple, time-efficient, and reproducible across different experimental setups, offering significant potential for various pre-clinical studies, including pharmacokinetic research, surgical training, and spinal cord injury models.

We present a technique for inserting a lumbar spinal catheter at the L4-L5 level in a 3-month-old Danish Landrace pig as part of a terminal research protocol, enabling continuous infusion or CSF sampling from the thecal sac.

돼지의 요추 척추 카테터 삽입을 위한 수술 기법으로 터미널 설정에서 종골낭에 지속적으로 접근할 수 있습니다.

Pigs are increasingly used as a large animal model for pharmacologic CNS research due to the anatomical and physiological similarities between the porcine ...

신경과학

The Isolation of Flowing Mesenteric Lymph in Mice to Quantify In Vivo Kinetics of Dietary Lipid Absorption and Chylomicron Secretion

Intestinal lipoproteins, especially triglyceride-rich chylomicrons, are a major driver of metabolism, inflammation, and cardiovascular diseases. However, isolating intestinal lipoproteins is very difficult in vivo because they are first secreted from the small intestine into the mesenteric lymphatics. Chylomicron-containing lymph then empties into the subclavian vein from the thoracic duct to deliver components of the meal to the heart, lungs, and, ultimately, whole-body circulation. Isolating na&#239;ve chylomicrons is impossible from blood since chylomicron triglyceride undergoes hydrolysis immediately upon interaction with lipoprotein lipase and other lipoprotein receptors in circulation. Therefore, the original 2-day lymph fistula procedure, described by Bollman et al. in rats, has historically been used to isolate fresh mesenteric lymph before its entry into the thoracic vein. That protocol has been improved upon and professionalized by the laboratory of Patrick Tso for the last 45 years, allowing for the analysis of these critical lipoproteins and secretions from the gut. The Tso lymph fistula procedure has now been updated and is presented here visually for the first time. This revised procedure is a single-day surgical technique for installing a duodenal feeding tube, cannulating the mesenteric lymph duct, and collecting lymph after a meal in conscious mice. The major benefits of these new techniques include the ability to reproducibly collect lymph from mice (which harnesses the power of genetic mouse models); the reduced anesthesia time for mice during the implantation of the duodenal infusion tube and the lymph cannula; the ability to continuously sample lymph throughout the feeding and post-prandial period; the ability to quantitatively measure hormones and cytokines before their dilution and enzymatic hydrolysis in blood; and the ability to collect large quantities of lymph for isolating intestinal lipoproteins. This technique is a powerful tool for directly and quantitatively measuring dietary nutrient absorption, intestinal lipoprotein synthesis, and chylomicron secretion.

The Isolation of Flowing Mesenteric Lymph in Mice to Quantify In Vivo Kinetics of Dietary Lipid Absorption and Chylomicron Secretion

The present protocol describes a detailed surgical protocol for isolating flowing intestinal lymph in response to intraduodenal nutrient infusions in mice. This allows for the physiological determination of total intestinal lipid absorption and chylomicron synthesis and secretion in response to various experimental nutrients.

식이 지질 흡수 및 유미미크론 분비의 생체 내 동역학을 정량화하기 위한 마우스의 흐르는 장간막 림프의 분리

Intestinal lipoproteins, especially triglyceride-rich chylomicrons, are a major driver of metabolism, inflammation, and cardiovascular diseases. However, ...

신생아 돼지에서 림프의 창자 림프 트렁크와 컬렉션의 장기 도관

요약

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전임상 돼지 모델에서 장기 혈관 접근을 위한 Hickman 카테터 사용

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