המחקר לא יכול היה להשלים ללא מסירות ואת המאמצים של אנשים רבים על החקלאות Agri-Food Research Centre בקנדה, Lethbridge, אלברטה, קנדה. בהקשר זה, אנו מודים: טרה Shelton לקבלת טיפול לפני ואחרי הניתוח של בעלי חיים, הכנה כירורגי, ולאחר הרדמה, ניתוח של דגימות, וסיוע עם וידאו הדמיה: רנדי ויילד אסטלה קוסטה לטיפול טרום שלאחר הניתוח; ג&#39;ני Gusse לניתוח מדגם; ביירון לי את התמונה trocar; ובריאן Egland לכבשים בעלי. אנו מודים גם ברנט זלינגר (מחלקת מדעי הביולוגיה, אוניברסיטת Lethbridge) לאספקת ציוד וידאו ועצות, כמו גם סיוע אחרים (כלומר ייצור המבצעת), ואת תוכנית הלימודים מחדש פיתוח מרכז, אוניברסיטת Lethbridge עבור המומחיות videography. מחקר זה נתמך בחלקו על ידי תרומות של מזון וחומרים מתקדמים ברשת (GDI), קנדה, אלברטה בשר לפיתוח התעשייה קרן (GDI), ואת החקלאות Agri-מזון בקנדה (GDI ו JPK).

נוהל ניסיוני: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשירים כל autoclaved; הלא autoclaveable חומרים מעוקרים בפתרון עיקור קר Germex עבור מינימום של 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבשים הם מראש תרופות עם acepromazine (0.05 מ&quot;ג / ק&quot;ג), glycopyrrolate (0.005 מ&quot;ג / ק&quot;ג), ו tartrate butorphanol (0.2 מ&quot;ג / ק&quot;ג) IM, ויצא 15-20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצוואר הוא מגולח שפשף את העור בניתוח. לאחר וריד הצוואר הוא מדמיין, 0.1 מ&quot;ל של לידוקאין מוזרק SC על הווריד, את הקטטר מוחדר הווריד ומאובטחת על העור באמצעות תג זיהוי בעלי חיים מלט 2 &quot;סרט בית חולים. במהלך הניתוח, בעלי החיים מקבלים 10 מ&quot;ל / ק&quot;ג / שעה של Plasmalyte 148 (על ידי זרימת כוח הכבידה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Diazepam (0.2 מ&quot;ג / ק&quot;ג) מנוהל IV, הרדמה מושרה עם נתרן thiopental (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג). תרסיס לידוקאין endotracheal מוחל על קפלי הקול, כבשים הוא מחובר לצינורות, ומתוחזק על isoflurane (1.5-2.5% ב 100% O 2 בשיעור של 4 L / min) למשך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיה ממוקם שכיבה הגב על מחצלת מחומם מנת לשמור על חום הגוף במהלך הניתוח. צינור לקיבה מוכנס לתוך כרס פנימית כדי למנוע tympany מוגזמת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבטן הגחון הוא מגולח העור מוכן לניתוח עם שלושה מסכת מנתחים Prepodyne. הבטן אז הוא מכוסה, להבטיח כי חשיפה נאותה של האתר כירורגית (הטבור לבטן הזנב) נשמר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך קו האמצע 15-20 ס&quot;מ נעשית באמצעות electroscapel, caudally מן הטבור, ועל פי ileocecal ממוקם ברבע הימני התחתון של הבטן. מעי הזנב ואת cecum הם exteriorized אז. לאורך כל ההליך, טיפול של המעי ממוזער וטיפול נלקח על מנת להבטיח את המעי exteriorized נשמר לח עם חמימים (37-39 מעלות צלזיוס) פוספט סטרילי בופר סליין (PBS, pH 7.2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קטע 85 ס&quot;מ של מעי (כלומר, &quot;קטע המעי &#39;) נמדד ואחר הידק עם מלקחיים זקן (מהדק מעיים) גדול מלקחיים קלי בסוף כל קטע. בתוך קטע המעי, &quot;לולאות &#39;ו&#39; interspaces&quot; בין לולאות יוקם. מלקחיים זקן ממוקמות בצד של מעי להיות הצטרף (השקה), ואת מלקחיים קלי ממוקמים בצד קטע מעיים של מעי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעי היא לחתוך בין כל זקן וקלי המלקחיים ואת קטע המעי המיועדים לולאות סמוקות בעדינות פעמיים עם 60 מ&quot;ל של PBS חמים כדי להסיר ingesta. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קוקטייל של ספקטרום רחב, אנטיביוטיקה (200 מ&quot;ג ו -250 מ&quot;ג enrofloxacin metronidazole ב PBS חם, נפח 60 מ&quot;ל סה&quot;כ) מופץ ברחבי קטע המעי והשאירו למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסתיים חתך הפרוקסימלית ומ דיסטלי של מעי (למעט קטע המעי) מצטרפים כדי ליצור מערכת העיכול מתמשכת תפקודית. ראשית, מעי מיושרת על ידי שני תפרים להישאר, להציב את הגבולות mesenteric ו antimesenteric של המעי, בהתאמה. ואז, דפוס פשוטה תפר מתמשך (2-0 Vicryl) תושלם על שני הצדדים של המעי להצטרף המעי ביחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PBS חם (3-5 מ&quot;ל) מוזרק באתר השקה כדי לבדוק זליגת וכישלון תפר. לאחר מכן, קצה קלי המלקחיים הוא נצמד למשטח serosal של המעי, קרוב לאתר של האתר השקה, ו פנימה מתקדם באתר השקה כדי להבטיח את לומן המעי הוא גדול פטנט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קוקטייל האנטיביוטיקה היא להסיר את קטע המעי. בסוף כל קטע סגור עם דפוס תפר פשוט רציפה (תפר נספג; 2-0 Vicryl) ואחריו תבנית היפוך באמצעות תפר 2-0 Vicryl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 85 ס&quot;מ באורך קטע המעי הוא מחולק לשלושה &quot;לולאות&quot; 15 ס&quot;מ, שניים באורך 15 ס&quot;מ &quot;interspaces&quot; בין הלולאות, ושני 5 ס&quot;מ באורך בוטה סוף תאים ב Termini של קטע המעי (איור 1) . לולאות נוצרות על ידי הנחת תחבושת סביב המעי באמצעות 2-0 משי. ראוי לציין כי כלי mesenteric הגדולות אינן ligated במהלך הליך זה, כמו אלה נדרשים כדי לספק את המעי עם הדם, שמירה על יכולת הקיום של המעיים. כמו כן, חיבורי אותיות נשארים זמן רב, כפי שהם ישמשו להבטחת צנתרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנתרים (צינורות כלומר silastic) מזוהים בנפרד באמצעות סמן קבע. כדור סיליקון (5 מ&quot;מ בקוטר) המקיפות את הקטטר, ממוקם 4-5 ס&quot;מ מקצה קטטר כדי למנוע את הקטטר מלהחליק מתוך המעי (איור 1). לאחר עיקור על ידי מעוקר, במשחה שאינו אנטיביוטי (Orbeseal) מוכנס לתוך בסביבה נקייה מחיידקים סוף את הקטטר (3-5 מ&quot;מ); זה מבטיח כי קטטר נשאר הפטנט (כלומר, זה לא להיות מחובר על ידי רירית השילה בתוך הלולאה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך קטן שהוצב ההיבט הגולגולת של כל אחת משלוש לולאות. כל חור מוגדל עם ההיכרויות צנתר (&quot;המרחיב כלי&quot; כלומר), וכן קטע 6-8 ס&quot;מ של צנתר מוחדר לתוך caudallyלולאה, עד הכדור silcone עובר לתוך לומן (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדופן המעי מאובטח סביב הקטטר עם תפר תיק מחרוזת (2-0 Vicryl). קטטר מובטחת נוספת המעי על ידי קשירת קטטר עם משי את הקשר שתחמו את קצה הגולגולת של הלולאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אמפיצילין (5 מ&quot;ל: 100 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​PBS חם) מוזרק לתוך הלולאה כל אינטרספייס, ואת המעי ממוקם חזרה בחלל הבטן. Cefazolin (8 מ&quot;ל, 100 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​PBS חם) מוזרק לתוך חלל הצפק באמצעות חתך הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך דקירה אחת קטנה נעשית דרך דופן הבטן סמוך החתך קו האמצע, ואת צנתרים הם exteriorized דרך אתר זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עמדת והמתח של צנתרים מותאם בתוך חלל הצפק. שרירי הבטן סגורים עם דפוס תפר פשוט קטע (תפר נספג; מיתר מס &#39;3), העור נסגר עם דפוס קטע מזרן האופקי (שאינם נספגים תפר; Supramid # 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינור מעוקל חלול נירוסטה (7 מזהה מ&quot;מ, 10 מ&quot;מ OD: 65 ס&quot;מ אורך) מוחדר מתחת לעור ליד החתך בבטן, מנהרה מתחת לעור לאתר יציאה הזנב רק הצוואר בין הכתפיים. צנתרים מוכנסים לתוך הצינור ודחף קדימה לפחות 50% של אורך הצינור. צינורית עם צנתרים היא משכה אז מהעור באתר היציאה, חשיפת צנתרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתח של צנתרים מותאם באתר חתך דקירה, והעור נסגר עם Supramid # 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנתרים הפרט מזוהים ממוקם בתוך &quot;כיס&quot; תחבושת אשר sutured לעור עם Supramid # 1. נרתיק מגן על צנתרים מנזק הבאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הניתוח, כבשים מוזרקים IM במינון ראשונית עם flunixin (SID) 2.2 מ&quot;ג / ק&quot;ג, ואחריו מינון אחזקה של 1.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג סיד במשך 3 ימים. כבשה גם מוזרקים IM עם Hemostam (3 מ&quot;ל) ו enrofloxacin (2.5 מ&quot;ג / ק&quot;ג) sid עבור 3 ו - 5 ימים, בהתאמה. בעלי חיים מתוחזקים על Plasmalyte תוך ורידי 148 עם פתרון דקסטרוז 5%, מנוהל באופן רציף עם משאבה peristaltic כדי להבטיח זרימה (145 מ&quot;ל / שעה) ממשיך ללא קשר למיקום הגוף. מותר להם לשתות כרצונך, אבל להאכיל מוגבל עד כרס פנימית רגילה פונקציות המעי משוחזרים. צריכת המזון, צריכת המים, טמפרטורת הגוף, מעבר של צואה ושתן, רעשי בטן, אי נוחות בבטן, התנהגות, ריכוז הגלוקוז בדם נמצאים תחת פיקוח הדוק (ההצעה); בעת הצורך, ריכוזי גלוקוז בעירוי נוזלים מותאמים לשמור על ריכוז הגלוקוז בדם בטווח התקין. דם כימיה המטולוגיה (כלומר phosphatase אלבומין, אלקליין, אלאנין aminotransferase, סידן עמילאז, כולסטרול, קריאטינין, גלוקוז, פוספט אורגניים, בילירובין הכולל, הכולל חלבון, אוריאה, גלובולין, נתרן, אשלגן, כלור, חמצן בלחץ חלקי, pH, חלקית פחמן דו חמצני בלחץ, ביקרבונט, ופחמן דו חמצני הכולל, אדום ולבן תא ספירת דם, המטוקריט, המוגלובין, דם לבנים ההפרש תא לספור ספירת הטסיות) מנוטרים לפני ומיד לאחר הניתוח, וכל יום נוספים לאחר מכן. לאחר פעולת המעיים נורמלי מתחיל, טיפול תוך ורידי נוזל מסתיימת ובעלי חיים מועברים כרי המרעה (כלומר 5-7 ימים אחרי ניתוח). בעלי חיים נשמרות עטים בודדים (בטווח ראייה של בעלי חיים אחרים), ובכך להפחית את הלחץ ואת הסיכוי לקיום נזק שקיות קטטר שלהם (למשל, על ידי לעיסת penmate א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להזריק לתוך לולאות טיפולים בודדים, 5 מ&quot;ל של הטיפול מוזרק לתוך הקטטר באמצעות מזרק סטרילי מצויד מד 18, בוטה, הסתיים מחט. כדי להבטיח את הפקדת כל הטיפול לתוך הלולאה, הצנתר מוזרק אז עם 3 מ&quot;ל של PBS. </li></ol> נקודות קריטיות: נהלים חשיבות מכרעת להצלחת התהליך הזה כירורגית כוללים: (1) לאימות המעי אינו מעוות על עצמה לפני הקמת השקה, (2) להבטיח את שלמות patency של השקה, (3) במידה מספקת כדי להבטיח את הקטטר הקיר לולאה עם המיתר המגדירה את סוף הגולגולת של הלולאה, אך להבטיח כי הקובץ המצורף אינו משפיע על patency של הקטטר, (4) צמצום הטיפול במעי להבטיח כי המעי exteriorized נשמר לח; (5) להבטיח את הקטטר המתאים המתח; (6) להבטיח כי היושרה של הקטטר אינו מושפע במהלך שרירים תפירת עור; (7) על ידי מניעת הזלילה כבשים שלאחר הניתוח (כלומר בתקופת שלאחר הניתוח ileus) אשר יכול לגרום לירידת impaction הכרס של פונקציה כרס פנימית; ו (8) להבטיח כי בעלי החיים מקבלים טיפול מספיק נוזלים תוך ורידי במשך 3-5 הימים הראשונים שלאחר הניתוח, כי ריכוזי גלוקוז בדם מנוטרים בקפידה, ריכוזי גלוקוז בעירוי נוזלים הם adjusטד במידת הצורך על מנת למנוע היפוגליקמיה. <img src="/files/ftp_upload/1301/1301fig1.jpg" alt="דמות 1" /> באיור 1. ייצוג סכמטי של לולאות ileal צינתור. הערה שלוש 15 ס&quot;מ באורך צינתור &quot;לולאות&quot;, שני 15 ס&quot;מ באורך אי - צינתור &quot;interspaces&quot; שנוצר בין הלולאות, ושני 5 ס&quot;מ באורך מקטעי הטרמינל, שהוקם בתוך כל קטע ס&quot;מ באורך &quot;מעיים 85 &quot;מעי של כבשה.

<ol>
	<li>Vidal, J. E., McClane, B. A., Saputo, J., Parker, J., Uzal, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Clostridium+perfringens+beta-toxin+on+the+rabbit+small+intestine+and+colon.">Effects of Clostridium perfringens beta-toxin on the rabbit small intestine and colon.</a> Infect. Immun. 76, 4396-4404 (2008).</li><li>Santos, R. L., Zhang, S., Tsolis, R. M., Baumler, A. J., Adams, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+and+molecular+characterization+of+Salmonella+typhimurium+infection+in+neonatal+calves.">Morphologic and molecular characterization of Salmonella typhimurium infection in neonatal calves.</a> Vet. Pathol. 39, 200-215 (2002).</li><li>Uzzau, S., Leori, G. S., Petruzzi, V., Watson, P. R., Schianchi, G., Bacciu, D., Mazzarello, V., Wallis, T. S., Rubino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonella+enterica+serovar-host+specificity+does+not+correlate+with+the+magnitude+of+intestinal+invasion+in+sheep.">Salmonella enterica serovar-host specificity does not correlate with the magnitude of intestinal invasion in sheep.</a> Infect. Immun. 69, 3092-3099 (2001).</li><li>Gerdts, V., Uwiera, R. R. E., Mutwiri, G. K., Wilson, D. J., Bowersock, T., Kindane, A., Babiuk, L. A., Griebel, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J. Immunol. Methods. 256, 19-33 (2001).</li><li>Greibel, P. J., Davis, W. C., Reynolds, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+the+growth+and+differentiation+of+b+cells+isolated+from+follicles+from+ileal+Peyer's+patch+of+sheep.">An analysis of the growth and differentiation of b cells isolated from follicles from ileal Peyer's patch of sheep.</a> Immunology. 75, 601-607 (1992).</li><li>Motyka, G., Greibel, P. J., Reynolds, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agents+that+activate+protein+kinase+C+resue+sheep+ileal+Peyer's+patch+B+cells+from+apoptosis.">Agents that activate protein kinase C resue sheep ileal Peyer's patch B cells from apoptosis.</a> Eur. J. Immunol. 23, 1314-1321 (1993).</li></ol>

נהלים על כל חיות הניסוי אושרו על ידי ועדת Animal Care מוסדיים (השתמש בבעלי חיים פרוטוקול # 0609) ו - בעקבות ההנחיות שנקבעו על ידי המועצה הקנדית של טיפול בבעלי חיים. אין לנו שום דבר לגלות.

בהליך זה, היינו יכולים להקים בהצלחה צנתרים בלולאות המעי הוקמה בתוך מעי של כבשה. על ידי הקפדה על הטיפול שלאחר הניתוח מחמירות, חיות התאושש במהירות ההליך וחזר לפעילות רגילה 5-7 ימים לאחר הניתוח. אנחנו נקבע כי הקמתה של צנתרים בתוך לולאות לא להשפיע על תפקוד מערכת החיסון ברי?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> קטגוריה / פריט מספר </td><td> חברה </td><td> קטלוג </td></tr><tr><td colspan="3"> מנתח אספקה </td></tr><tr><td> כפפות כירורגיות </td><td> WDDC </td><td> 103091 </td></tr><tr><td> כירורגי מסכה </td><td> WDDC </td><td> MAX53013 </td></tr><tr><td> כירורגי שמלת </td><td> CDMV ב </td><td> 3365 </td></tr><tr><td> OB סינר </td><td> WDDC </td><td> 900062 </td></tr><tr><td> כירורגי כובע </td><td> WDDC </td><td> 903271 </td></tr><tr><td> EZ מברשת קרצוף </td><td> WDDC </td><td> BDC377479 </td></tr><tr><td colspan="3"> הרדמה ותרופות </td></tr><tr><td> מכונת הרדמה </td><td> בויל </td><td> </td></tr><tr><td> Sodasorb </td><td> WDDC </td><td> 108638 </td></tr><tr><td> ראי גרון </td><td> WDDC </td><td> </td></tr><tr><td> ראי גרון להב (blade מילר מס &#39;4) </td><td> WDDC </td><td> 902667 </td></tr><tr><td> צינור Endotracheal (7.0-8.5 מ&quot;מ) </td><td> WDDC </td><td> </td></tr><tr><td> לידוקאין endotracheal תרסיס </td><td> WDDC </td><td> 103364 </td></tr><tr><td> Acepromazine </td><td> WDDC </td><td> AUS01020 </td></tr><tr><td> Glycopyrrolate </td><td> WDDC </td><td> SAB2880 </td></tr><tr><td> Butorphanol tartrate </td><td> WDDC </td><td> AYE304541 </td></tr><tr><td> Diazepam </td><td> WDDC </td><td> sab790 </td></tr><tr><td> Thiopental נתרן </td><td> WDDC </td><td> 103508 </td></tr><tr><td> אפינפרין hydrochloride </td><td> WDDC </td><td> 103856 </td></tr><tr><td> Doxapram </td><td> Strathcona לרוקחות </td><td> </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> WDDC </td><td> 100339 </td></tr><tr><td> Hemostam </td><td> WDDC </td><td> 103857 </td></tr><tr><td> Flunixin </td><td> WDDC </td><td> sch140100 </td></tr><tr><td> Enrofloxacin </td><td> WDDC </td><td> hll0049 </td></tr><tr><td> Metronidazole </td><td> WDDC </td><td> 101653 </td></tr><tr><td> אמפיצילין </td><td> WDDC </td><td> NOV67185-6 </td></tr><tr><td> Cefazolin </td><td> WDDC </td><td> nov69397 </td></tr><tr><td colspan="3"> ציוד כירורגי וציוד </td></tr><tr><td> Electroscapel </td><td> Macan </td><td> MV8 </td></tr><tr><td> חימום מחצלת </td><td> קיין </td><td> PHMD-48 </td></tr><tr><td> צינור קיבה (צינורות Nalgene 5 / 16 &quot;ID) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> </td></tr><tr><td> מחט הנהג </td><td> WDDC </td><td> 108338 </td></tr><tr><td> אדיסון חום המלקחיים </td><td> WDDC </td><td> 911075 </td></tr><tr><td> שן עכברוש המלקחיים </td><td> CDMV </td><td> 5275 </td></tr><tr><td> קלי המלקחיים </td><td> WDDC </td><td> 901133 </td></tr><tr><td> יתוש hemostat </td><td> WDDC </td><td> 108471 </td></tr><tr><td> Carmalt המלקחיים </td><td> WDDC </td><td> 901225 </td></tr><tr><td> איזמל לטפל </td><td> WDDC </td><td> 900285 </td></tr><tr><td> איזמל להב # 22 </td><td> WDDC </td><td> 900511 </td></tr><tr><td> מצנבאום מספריים </td><td> WDDC </td><td> 901166 </td></tr><tr><td> שארפ חד מספריים </td><td> WDDC </td><td> 108264 </td></tr><tr><td> מגבת מהדק </td><td> WDDC </td><td> 901213 </td></tr><tr><td> Allis רקמות המלקחיים </td><td> WDDC </td><td> 901201 </td></tr><tr><td> זקן הסגל של המלקחיים </td><td> WDDC </td><td> 904226 </td></tr><tr><td> קערת נירוסטה פלדה </td><td> WDDC </td><td> 903601 </td></tr><tr><td> נירוסטה trocar (מעוגל) </td><td> מקומי הספק </td><td> </td></tr><tr><td> צנתר ההיכרויות </td><td> WDDC </td><td> 11440 </td></tr><tr><td> כירורגי מגבת </td><td> CDMV </td><td> 7972 </td></tr><tr><td> פנויה וילון </td><td> WDDC </td><td> 900035 </td></tr><tr><td> Steri וילון </td><td> CDMV </td><td> 2323 </td></tr><tr><td> הנח (40 x 40 ס&quot;מ) </td><td> CDMV </td><td> 8358 </td></tr><tr><td> וילון כירורגי (7 &quot;x 11&quot; פתיחה) </td><td> CDMV </td><td> 2694 </td></tr><tr><td> Vicryl (2-0) </td><td> WDDC </td><td> JJMJ333H </td></tr><tr><td> משי 2-0 </td><td> WDDC </td><td> 105248 </td></tr><tr><td> מיתר # 3 </td><td> WDDC </td><td> CSL547-2070 </td></tr><tr><td> Supramid # 1 </td><td> WDDC </td><td> CSL547-3040 </td></tr><tr><td> מחטים (חיתוך ללא חיתוך) </td><td> WDDC </td><td> </td></tr><tr><td colspan="3"> צנתר </td></tr><tr><td> צינורות Silastic (0.040 &quot;מזהה, .085&quot; OD) </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 11-189-15d </td></tr><tr><td> Orbeseal משחה </td><td> WDDC </td><td> 106344 </td></tr><tr><td> סיליקון שקוף (732 רב תכליתי איטום) </td><td> מקומי הספק </td><td> </td></tr><tr><td> סוף בלאנט מחט </td><td> WDDC </td><td> 905035 </td></tr><tr><td> דה מרקר (תעשייתי קבע) </td><td> מקומי הספק </td><td> </td></tr><tr><td> כיס צנתר (בנוי הפלסטר 7.5 ס&quot;מ) </td><td> WDDC </td><td> 104094 </td></tr><tr><td colspan="3"> תחבושות </td></tr><tr><td> החולים קלטת (2 &quot;) </td><td> WDDC </td><td> 103842 </td></tr><tr><td> החולים קלטת (1 &quot;) </td><td> WDDC </td><td> VLMRENF20 </td></tr><tr><td> גזה ספוג 4x4 </td><td> WDDC </td><td> 107551 </td></tr><tr><td> גזה נאחזים </td><td> WDDC </td><td> 107633 </td></tr><tr><td> הפלסטר 7.5cm </td><td> WDDC </td><td> 104094 </td></tr><tr><td> הפלסטר rippable תחבושת </td><td> WDDC </td><td> 104093 </td></tr><tr><td colspan="3"> Needles מזרקים </td></tr><tr><td> מזרק (60 מ&quot;ל) </td><td> WDDC </td><td> 104004 </td></tr><tr><td> מזרק (10 מ&quot;ל) </td><td> WDDC </td><td> bdc301604 </td></tr><tr><td> 25 גרם מחט </td><td> WDDC </td><td> BDC305122 </td></tr><tr><td> 20 גרם מחט </td><td> WDDC </td><td> BDC305175 </td></tr><tr><td> 18G מחט </td><td> WDDC </td><td> 903353 </td></tr><tr><td colspan="3"> תוך ורידי </td></tr><tr><td> Intracath IV קטטר (16G 8 &quot;) </td><td> WDDC </td><td> bdc3831621 </td></tr><tr><td> IV הממשל להגדיר (10 ירידה) </td><td> WDDC </td><td> 101797 </td></tr><tr><td> 0.9% NaCl פתרון </td><td> WDDC </td><td> BAXJB1322P </td></tr><tr><td> Plasmalyte 148 פתרון </td><td> WDDC </td><td> BAXJB2534 </td></tr><tr><td> דקסטרוז </td><td> WDDC </td><td> MCT60190 </td></tr><tr><td> Peristaltic משאבה </td><td> קול בן הזוג </td><td> 7524-10 </td></tr><tr><td> תג זיהוי בעלי חיים מלט </td><td> מקומי הספק </td><td> </td></tr><tr><td colspan="3"> Sanatizers / חיטוי </td></tr><tr><td> Germex פתרון </td><td> WDDC </td><td> mtc60270 </td></tr><tr><td> איזופרופיל אלכוהול </td><td> WDDC </td><td> 104590 </td></tr><tr><td> Stanhexidine ניקוי </td><td> WDDC </td><td> 109248 </td></tr><tr><td> Prepodyne פתרון </td><td> WDDC </td><td> 105710 </td></tr><tr><td> Prepodyne לשפשף </td><td> WDDC </td><td> 105711 </td></tr></table> הפצה מערבית והתרופות מרכז בע&quot;מ, אדמונטון, AB. ב הפצה מרכז וטרינרי תרופות בע&quot;מ, רח&#39; Hyacinthe, QE.

catheterization of intestinal loops in ruminants

המעי הוא מבנה מורכב כי הוא מעורב לא רק ספיגה של חומרים מזינים, אך גם משמש כמחסום בין הפרט לבין העולם החיצון. ככזו, למעי תפקיד מרכזי immunosurveillance והגנה מפני פתוגנים enteric. חקירת הפיזיולוגיה מעיים ואימונולוגיה כלל מעסיקה &quot;לולאות מעיים&quot; כמודל ניסיוני. רוב המודלים האלה הם לולאה ללא התאוששות ניתוחים כי המחקר לטווח קצר (&lt;24 שעות) שינויים במעי (1-3). אנחנו קודם לכן יצר לולאת המעי התאוששות מודל ספציפי מדד לטווח ארוך (&lt;6 מו) שינויים אימונולוגיים במעי החשיפה כבשים הבאים לחיסונים, adjuvants, ווירוסים (4). הליך זה טיפולים מקומיים ל &#39;לופ&#39; מסוים, ומאפשר לנו מדגם אזור זה של המעי. החיסרון המשמעותי של שיטה זו היא חלון הזדמנויות יחיד לנהל טיפולים (כלומר בזמן הניתוח). יתר על כן, דגימות של רירית המעי הן ותכנים luminal יכול להיות רק נלקחה ב סיומו של הפרויקט. המגבלות העיקריות אחרות של הדגם הנ&quot;ל כי מניפולציה כירורגית הנדרשים שלאחר הניתוח אמצעים (כגון מתן אנטיביוטיקה ומשככי כאבים) יכולה להשפיע ישירות על הטיפול עצמו ו / או לשנות את תפקוד המערכת החיסונית, ובכך תוצאות בלבול. לכן, אנו מודל שונה לולאת המעי על ידי החדרת שלנו לטווח ארוך קטטר לתוך הלולאות. כבשים להתאושש באופן מלא מן הנוהל, אינם מושפעים על ידי קטטר exteriorized. יש לציין, את הקמתה של צנתרים בלולאות מאפשר לנו להציג טיפולים מרובים על הפסקה ממושכת, לאחר ההתאוששות מהניתוח ולאחר אישור של תרופות מנוהל במהלך הניתוח והתקופה שלאחר הניתוח.

Watch this Scientific Journal Video about Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants at JoVE.com

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

אנו מתארים שיטה כירורגית חדשנית catheterizing &quot;לולאות מעיים&quot; בתוך מעי של כבשה. לאחר חיות התאוששו מהניתוח ויש לי פינה אנטיביוטיקה משככי כאבים, טיפולים מרובים ניתן להפקיד ישירות לולאות באמצעות קטטר.

צנתור של לולאות מעיים של מעלי גירה

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

catheterization-of-intestinal-loops-in-ruminants

Research

JoVE Journal

Biology

13.6K Views.  University of Alberta. אנו מתארים שיטה כירורגית חדשנית catheterizing "לולאות מעיים" בתוך מעי של כבשה. לאחר חיות התאוששו מהניתוח ויש לי פינה אנטיביוטיקה משככי כאבים, טיפולים מרובים ניתן להפקיד ישירות לולאות באמצעות קטטר.

Video: Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease (CD). Both UC and CD, when present in the colon, generate a similar symptom profile which can include diarrhea, rectal bleeding, abdominal pain, and weight loss.1 Although the pathogenesis of IBD remains unknown, it is described as a multifactorial disease that involves both genetic and environmental components.2
There are numerous and variable animal models of colonic inflammation that resemble several features of IBD. Animal models of colitis range from those arising spontaneously in susceptible strains of certain species to those requiring administration of specific concentrations of colitis-inducing chemicals, such as dextran sulphate sodium (DSS). Chemical-induced models of gut inflammation are the most commonly used and best described models of IBD. Administration of DSS in drinking water produces acute or chronic colitis depending on the administration protocol.3 Animals given DSS exhibit weight loss and signs of loose stool or diarrhea, sometimes with evidence of rectal bleeding.4,5 Here, we describe the methods by which colitis development and the resulting inflammatory response can be characterized following administration of DSS. These methods include histological analysis of hematoxylin/eosin stained colon sections, measurement of pro-inflammatory cytokines, and determination of myeloperoxidase (MPO) activity, which can be used as a surrogate marker of inflammation.6
The extent of the inflammatory response in disease state can be assessed by the presence of clinical symptoms or by alteration in histology in mucosal tissue. Colonic histological damage is assessed by using a scoring system that considers loss of crypt architecture, inflammatory cell infiltration, muscle thickening, goblet cell depletion, and crypt abscess.7 Quantitatively, levels of pro-inflammatory cytokines with acute inflammatory properties, such as interleukin (IL)-1&beta;, IL-6 and tumour necrosis factor (TNF)-&alpha;,can be determined using conventional ELISA methods. In addition, MPO activity can be measured using a colorimetric assay and used as an index of inflammation.8
In experimental colitis, disease severity is often correlated with an increase in MPO activity and higher levels of pro-inflammatory cytokines. Colitis severity and inflammation-associated damage can be assessed by examining stool consistency and bleeding, in addition to assessing the histopathological state of the intestine using hematoxylin/eosin stained colonic tissue sections. Colonic tissue fragments can be used to determine MPO activity and cytokine production. Taken together, these measures can be used to evaluate the intestinal inflammatory response in animal models of experimental colitis.

Experimental models of inflammatory bowel disease have allowed us to examine the complex innate and adaptive immune responses associated with pathogenesis. Using histological scoring, quantification of pro-inflammatory cytokines and myeloperoxidase activity, one can begin to assess these responses seen in inflammatory bowel disease.

חקירת דלקת מעיים במודל DSS-Induced של IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease ...

A Video Protocol of Retroviral Infection in Primary Intestinal Organoid Culture

Lgr5-positive stem cells can be supplemented with the essential growth factors Egf, Noggin, and R-Spondin, which allows us to culture ever-expanding primary 3D epithelial structures in vitro. Both the architecture and physiological properties of these &#39;mini-guts&#39;, also called organoids, closely resemble their in vivo counterparts. This makes them an attractive model system for the small intestinal epithelium. Using retroviral transduction, functional genetics can now be performed by conditional gene overexpression or knockdown. This video demonstrates the procedure of organoid culture, the generation of retroviruses, and the retroviral transduction of organoids to assist phenotypic analysis of the small intestinal epithelium in vitro. This novel organotypic model system in combination with retroviral mediated gene expression provides a valuable tool for rapid analysis of gene function in vitro without the need of costly and time-consuming generation for transgenic animals.

This protocol explains primary Lgr5-positve organoid culture and the subsequent performance of retroviral transduction. This enables Cre-inducible overexpression or knockdown of the delivered transgene and allows functional studies to be carried out in the novel in vitro organotypic model system.

פרוטוקול וידאו של זיהום retroviral ביסודי מעיים Organoid תרבות

Lgr5-positive stem cells can be supplemented with the essential growth factors Egf, Noggin, and R-Spondin, which allows us to culture ever-expanding ...

A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth factors. Since organoids are highly similar to the original tissue in terms of homeostatic stem cell differentiation, cell polarity and presence of all terminally differentiated cell types known to the adult intestinal epithelium, they serve as an essential resource in experimental research on the epithelium. The possibility to express transgenes or interfering RNA using lentiviral or retroviral vectors in organoids has increased opportunities for functional analysis of the intestinal epithelium and intestinal stem cells, surpassing traditional mouse transgenics in speed and cost. In the current video protocol we show how to utilize transduction of small intestinal organoids with lentiviral vectors illustrated by use of doxycylin inducible transgenes, or IPTG inducible short hairpin RNA for overexpression or gene knockdown. Furthermore, considering organoid culture yields minute cell counts that may even be reduced by experimental treatment, we explain how to process organoids for downstream analysis aimed at quantitative RT-PCR, RNA-microarray and immunohistochemistry. Techniques that enable transgene expression and gene knock down in intestinal organoids contribute to the research potential that these intestinal epithelial structures hold, establishing organoid culture as a new standard in cell culture.

In this video protocol we give a step by step explanation of lentiviral transduction in organoids of primary intestinal epithelium and of processing and downstream analysis of these cultures by quantitative RT-PCR, RNA-microarray and immunohistochemistry.

פרוטוקול לlentiviral התמרה וניתוח במורד הזרם של המעיים Organoids

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth ...

Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the mouse provides great potential to explore cardiac function at the molecular level. The mouse&#39;s small size does present some challenges in regards to performing detailed cardiac phenotyping. Miniaturization and other advancements in technology have made many methods of cardiac assessment possible in the mouse. Of these, the simultaneous collection of pressure and volume data provides a detailed picture of cardiac function that is not available through any other modality. Here a detailed procedure for the collection of pressure-volume loop data is described. Included is a discussion of the principles underlying the measurements and the potential sources of error. Anesthetic management and surgical approaches are discussed in great detail as they are both critical to obtaining high quality hemodynamic measurements. The principles of hemodynamic protocol development and relevant aspects of data analysis are also addressed.

This manuscript describes a detailed protocol for the collection of pressure-volume data from the mouse.

מדידת לולאות נפח לחץ העכבר

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the ...

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and epithelial cell integrity, and disruption of the intestinal barrier function contributes to progression of gastrointestinal and systemic disease. Two simple methods are described here to measure the permeability of intestinal epithelium. In vitro, Caco-2BBe cells are plated in tissue culture wells as a monolayer and transepithelial electrical resistance (TER) can be measured by an epithelial (volt/ohm) meter. This method is convincing because of its user-friendly operation and repeatability. In vivo, mice are gavaged with 4 kDa fluorescein isothiocyanate (FITC)-dextran, and the FITC-dextran concentrations are measured in collected serum samples from mice to determine the epithelial permeability. Oral gavage provides an accurate dose, and therefore is the preferred method to measure the intestinal permeability in vivo. Taken together, these two methods can measure the permeability of the intestinal epithelium in vitro and in vivo, and hence be used to study the connection between diseases and barrier function.

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

Two methods are presented here to determine intestinal barrier function. An epithelial meter (volt/ohm) is used for measurements of transepithelial electrical resistance of cultured epithelia directly in tissue culture wells. In mice, the FITC-dextran gavage method is used to determine the intestinal permeability in vivo.

במבחנה , גישות In Vivo כדי לקבוע חדירות תאים אפיתל המעי

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including tumorous growths. However, the cellular remodeling mechanisms involved in, and caused by, intestinal obstructions are poorly understood. Several animal models of intestinal obstructions have been developed, but the mouse model is the most cost/time effective. The mouse model uses the surgical implantation of an intestinal partial obstruction (PO) that has a high mortality rate if it is not performed correctly. In addition, mice receiving PO surgery fail to develop hypertrophy if an appropriate blockade is not used or not properly placed. Here, we describe a detailed protocol for PO surgery which produces reliable and reproducible intestinal obstructions with a very low mortality rate. This protocol utilizes a surgically placed silicone ring that surrounds the ileum which partially blocks digestive movement in the small intestine. The partial blockage makes the intestine become dilated due to the halt of digestive movement. The dilation of the intestine induces smooth muscle hypertrophy on the oral side of the ring that progressively develops over 2 weeks until it causes death. The surgical PO mouse model offers an in vivo model of hypertrophic intestinal tissue useful for studying pathological changes of intestinal cells including smooth muscle cells (SMC), interstitial cells of Cajal (ICC), PDGFR&#945;+, and neuronal cells during the development of intestinal obstruction.

Intestinal obstructions are a partial or complete blockage of the intestine that can cause severe abdominal pain, nausea, vomiting, and preventing the passage of stool. This procedure for creating intestinal partial obsructions in mice is reliable in studying the mechanisms underlying pathological cell growth and death in the intestine.

דגם העכבר של חסימת מעיים חלקית

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Intestinal Epithelial Regeneration in Response to Ionizing Irradiation

The intestinal epithelium consists of a single layer of cells yet contains multiple types of terminally differentiated cells, which are generated by the active proliferation of intestinal stem cells located at the bottom of intestinal crypts. However, during events of acute intestinal injury, these active intestinal stem cells undergo cell death. Gamma irradiation is a widely used colorectal cancer treatment, which, while therapeutically efficacious, has the side effect of depleting the active stem cell pool. Indeed, patients frequently experience gastrointestinal radiation syndrome while undergoing radiotherapy, in part due to active stem cell depletion. The loss of active intestinal stem cells in intestinal crypts activates a pool of typically quiescent reserve intestinal stem cells and induces dedifferentiation of secretory and enterocyte precursor cells. If not for these cells, the intestinal epithelium would lack the ability to recover from radiotherapy and other such major tissue insults. New advances in lineage-tracing technologies allow tracking of the activation, differentiation, and migration of cells during regeneration and have been successfully employed for studying this in the gut. This study aims to depict a method for the analysis of cells within the mouse intestinal epithelium following radiation injury.

The gastrointestinal tract is one of the most sensitive organs to injury upon radiotherapeutic cancer treatments. It is simultaneously an organ system with one of the highest regenerative capacities following such insults. The presented protocol describes an efficient method to study the regenerative capacity of the intestinal epithelium.

התחדשות אפיתל המעי בתגובה לקרינה מייננת

The intestinal epithelium consists of a single layer of cells yet contains multiple types of terminally differentiated cells, which are generated by the ...

השפעות אפיתל של דלקת מעיים על קולונואידים מורינים מבוססים

Studying the Epithelial Effects of Intestinal Inflammation In Vitro on Established Murine Colonoids

The intestinal epithelium plays an essential role in human health, providing a barrier between the host and the external environment. This highly dynamic cell layer provides the first line of defense between microbial and immune populations and helps to modulate the intestinal immune response. Disruption of the epithelial barrier is a hallmark of inflammatory bowel disease (IBD) and is of interest for therapeutic targeting. The 3-dimensional colonoid culture system is an extremely useful in vitro model for studying intestinal stem cell dynamics and epithelial cell physiology in IBD pathogenesis. Ideally, establishing colonoids from the inflamed epithelial tissue of animals would be most beneficial in assessing the genetic and molecular influences on disease. However, we have shown that in vivo epithelial changes are not necessarily retained in colonoids established from mice with acute inflammation. To address this limitation, we have developed a protocol to treat colonoids with a cocktail of inflammatory mediators that are typically elevated during IBD. While this system can be applied ubiquitously to various culture conditions, this protocol emphasizes treatment on both differentiated colonoids and 2-dimensional monolayers derived from established colonoids. In a traditional culture setting, colonoids are enriched with intestinal stem cells, providing an ideal environment to study the stem cell niche. However, this system does not allow for an analysis of the features of intestinal physiology, such as barrier function. Further, traditional colonoids do not offer the opportunity to study the cellular response of terminally differentiated epithelial cells to proinflammatory stimuli. The methods presented here provide an alternative experimental framework to address these limitations. The 2-dimensional monolayer culture system also offers an opportunity for therapeutic drug screening ex vivo. This polarized layer of cells can be treated with inflammatory mediators on the basal side of the cell and concomitantly with putative therapeutics apically to determine their utility in IBD treatment.

Author Spotlight: חקר ההשפעות האפיתליות של דלקת מעיים במבחנה על קולונואידים מורינים מבוססים  

We describe a protocol detailing the isolation of murine colonic crypts for the development of 3-dimensional colonoids. The established colonoids can then be terminally differentiated to reflect the cellular composition of the host epithelium prior to receiving an inflammatory challenge or being directed to establish an epithelial monolayer.

חקר ההשפעות האפיתליאליות של דלקת מעיים במבחנה על קולונואידים מורינים מבוססים

The intestinal epithelium plays an essential role in human health, providing a barrier between the host and the external environment. This highly dynamic ...