The authors wish to thank Drs. David Calkins (Vanderbilt University) and James Morgan (Cardiff University) for sharing their expertise and for helpful advice towards developing this procedure. This study was supported by grants from the Canadian Institutes of Health Research (A.D.P.). Y.A.I. and N.B. are the recipients of postdoctoral fellowships from the Fonds de recherche du Qu&#233;bec-Sant&#233; (FRQS). N.B. was awarded a H.H. Jasper scholarship from the Groupe de Recherche sur le Syst&#232;me Nerveux Central (GRSNC). A.D.P. is a Chercheur Boursier National FRQS.

<ol>
	<li>Quigley, H. A., Broman, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+number+of+people+with+glaucoma+worldwide+in+2010+and+2020.">The number of people with glaucoma worldwide in 2010 and 2020.</a> Br J Ophthalmol. 90, 262-267 (2006).</li><li>Bouhenni, R. A., Dunmire, J., Sewell, A., Edward, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+glaucoma.">Animal models of glaucoma.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 692609 (2012).</li><li>Morrison, J. C., Cepurna Ying Guo, W. O., Johnson, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+human+glaucomatous+optic+nerve+damage:+insights+from+rodent+models+of+glaucoma.">Pathophysiology of human glaucomatous optic nerve damage: insights from rodent models of glaucoma.</a> Exp Eye Res. 93, 156-164 (2011).</li><li>Bunker, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+glaucoma+induced+by+ocular+injection+of+magnetic+microspheres.">Experimental glaucoma induced by ocular injection of magnetic microspheres.</a> J Vis Exp. , (2015).</li><li>Cone, F. E., Gelman, S. E., Son, J. L., Pease, M. E., Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+to+experimental+glaucoma+among+3+mouse+strains+using+bead+and+viscoelastic+injection.">Differential susceptibility to experimental glaucoma among 3 mouse strains using bead and viscoelastic injection.</a> Exp Eye Res. 91, 415-424 (2010).</li><li>Cone, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+anesthesia,+mouse+strain+and+age+on+intraocular+pressure+and+an+improved+murine+model+of+experimental+glaucoma.">The effects of anesthesia, mouse strain and age on intraocular pressure and an improved murine model of experimental glaucoma.</a> Exp Eye Res. 99, 27-35 (2012).</li><li>El-Danaf, R. N., Huberman, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristic+patterns+of+dendritic+remodeling+in+early-stage+glaucoma:+evidence+from+genetically+identified+retinal+ganglion+cell+types.">Characteristic patterns of dendritic remodeling in early-stage glaucoma: evidence from genetically identified retinal ganglion cell types.</a> Neuroscience. 35, 2329-2343 (2015).</li><li>Ngumah, Q. C., Buchthal, S. D., Dacheux, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+non-invasive+proton+NMR+spectroscopy+measurement+of+vitreous+lactate+in+a+rabbit+model+of+ocular+hypertension.">Longitudinal non-invasive proton NMR spectroscopy measurement of vitreous lactate in a rabbit model of ocular hypertension.</a> Exp Eye Res. 83, 390-400 (2006).</li><li>Samsel, P. A., Kisiswa, L., Erichsen, J. T., Cross, S. D., Morgan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+the+induction+of+experimental+glaucoma+using+magnetic+microspheres.">A novel method for the induction of experimental glaucoma using magnetic microspheres.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52, 1671-1675 (2011).</li><li>Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microbead+occlusion+model:+a+paradigm+for+induced+ocular+hypertension+in+rats+and+mice.">The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51, 207-216 (2010).</li><li>Urcola, J. H., Hernandez, M., Vecino, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+experimental+glaucoma+models+in+rats:+comparison+of+the+effects+of+intraocular+pressure+elevation+on+retinal+ganglion+cell+size+and+death.">Three experimental glaucoma models in rats: comparison of the effects of intraocular pressure elevation on retinal ganglion cell size and death.</a> Exp Eye Res. 83, 429-437 (2006).</li><li>Weber, A. J., Zelenak, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+glaucoma+in+the+primate+induced+by+latex+microspheres.">Experimental glaucoma in the primate induced by latex microspheres.</a> J neuroscience meth. 111, 39-48 (2001).</li><li>Ho, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+aqueous+humor+dynamics+upon+chronic+ocular+hypertension+and+hypotensive+drug+treatment+using+gadolinium-enhanced+MRI.">In vivo assessment of aqueous humor dynamics upon chronic ocular hypertension and hypotensive drug treatment using gadolinium-enhanced MRI.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55, 3747-3757 (2014).</li><li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbead-induced+ocular+hypertensive+mouse+model+for+screening+and+testing+of+aqueous+production+suppressants+for+glaucoma.">Microbead-induced ocular hypertensive mouse model for screening and testing of aqueous production suppressants for glaucoma.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 3733-3741 (2012).</li><li>Gallego, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IOP+induces+upregulation+of+GFAP+and+MHC-II+and+microglia+reactivity+in+mice+retina+contralateral+to+experimental+glaucoma.">IOP induces upregulation of GFAP and MHC-II and microglia reactivity in mice retina contralateral to experimental glaucoma.</a> J neuroinflammation. 9, 92 (2012).</li><li>Rojas, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+in+mouse+retina+contralateral+to+experimental+glaucoma+exhibit+multiple+signs+of+activation+in+all+retinal+layers.">Microglia in mouse retina contralateral to experimental glaucoma exhibit multiple signs of activation in all retinal layers.</a> J neuroinflammation. 11, 133 (2014).</li><li>Nadal-Nicolas, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brn3a+as+a+marker+of+retinal+ganglion+cells:+qualitative+and+quantitative+time+course+studies+in+naive+and+optic+nerve-injured+retinas.">Brn3a as a marker of retinal ganglion cells: qualitative and quantitative time course studies in naive and optic nerve-injured retinas.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50, 3860-3868 (2009).</li><li>Morquette, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=REDD2-mediated+inhibition+of+mTOR+promotes+dendrite+retraction+induced+by+axonal+injury.">REDD2-mediated inhibition of mTOR promotes dendrite retraction induced by axonal injury.</a> Cell Death Differ. 22, 612-625 (2015).</li><li>Almasieh, M., Zhou, Y., Kelly, M. E., Casanova, C., Di Polo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+neuroprotection+in+glaucoma:+role+of+galantamine-mediated+activation+of+muscarinic+acetylcholine+receptors.">Structural and functional neuroprotection in glaucoma: role of galantamine-mediated activation of muscarinic acetylcholine receptors.</a> Cell Death Dis. 1, 27 (2010).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

טכניקת הווידאו המובאת כאן מספקת מפורטות צעד אחר צעד הוראות כיצד לבצע הזרקת intracameral של microbeads המגנטי ביעילות reproducibly לגרום העלאת IOP בעכברים. תוצאות הליך זה ב עלייה מתמשכת IOP שאינה דורשת זריקות נוספות ומקדם soma RGC לגילוי ואובדן האקסון בתוך 3 השבועות הראשונים של יתר לחץ דם עינית induction.Elevated IOP הוא גורם סיכון עיקרי לפיתוח גלאוקומה בבני אדם. לכן, זהו מודל גלאוקומת יתר לחץ דם תלוי עינית murine ערך כי יש פוטנציאל עבור מגוון רחב של יישומים. חסרון נפוץ הקשורות הזרקת microbeads לתוך החדר הקדמי מתייחס חרוז ריפלוקס באמצעות זריקת כשהמחט היא נסוגה, עלולה לגרום לחסימה חלקית בלבד של יצוא מהימי ולהבדלים מוגברים. כדי לטפל בבעיה זו, כמה משינויים מהותיים יושמו. firs<html> t, ההכנה הקפדנית של microneedle זכוכית נקיה, חד עם שפוע facetted חיוני הזריקה המוצלחת של microbeads. Microneedle הוכן כראוי מאפשר חדירה מבוקרת וחלקה של הקרנית עם יישום מינימאלי של לחץ על פני השטח של עין העדינה. לנקב קרנית הקטנה מונע זרימה חוזרת של microbeads. בנוסף, microneedle המיקרוסקופי מפחית את הסיכון של מבנים סמוכים תהליכים מזיקים כגון קשתית ואת העדשה, אשר עלול לגרום דלקת שאינה קשור למחלה. שנית, הבקשה של מגנט כף יד לאזורים עיניים אסטראטגי במהלך ואחרי ההזרקה עוד היבט קריטי של הטכניקה הזו. במהלך ההזרקה, המגנט משמש כדי למשוך את microbeads המגנטי ריפלוקס מניעת הלשכה הקדמי של microbeads כאשר microneedle היא נסוגה. לאחר הזריקה, המגנט מכן נעשה שימוש כדי לכוון את microbeads לזווית iridocorneal לחסום יצוא הומור מימי. אוהל &quot;&gt; בעיה נוספת נתקל לעתים קרובות במודלים חסימה microbead הוא כי זריקות חרוז חוזרות לעתים קרובות יש צורך להשיג מתמשכת IOP העלאת 10,11. זו עשויה להיות התוצאה של microbeads dislodging מהזווית iridocorneal עם הזמן. השילוב של מגנט כף יד, כמתואר לעיל, ואת המיקום של העכבר שלאחר ניתוח משפר באופן משמעותי את התוצאה. שימוש הרדמה בזריקות, המאפשרים גמיש כדי להזיז את הראש במהלך ההליך ודורש תקופת החלמה שלאחר ניתוח ארוך יותר, הוא מועדף. מיקום של עכבר בעין המופעלת כלפי מעלה במשך כמה שעות לאחר הניתוח תורם ליישוב microbeads בזווית iridocorneal ומפחית את הסיכון של פירוק בחזרה לתוך החדר הקדמי. הבטחה כי מספר החרוזים המוזרקים הוא יחסית עקבי היא עוד שלב קריטי כדי למזער וריאציות בין-חיה. מאז microbeads להתיישב בבית בottom של הצינור, יש צורך homogenize פתרון microbead המלא ולסגת הנפח המתאים לתוך microneedle מבעוד מועד. הזרקה של חרוזים פחות לתוך החדר הקדמי עלולה לגרום לחסימה החלקית של מבני ניקוז הומור המימיים, אשר צפוי לגרום העלאת IOP עניה או משתנית. מן הראוי לציין כי, למרות המטרה הסופית של הזרקת microbead היא לרומם IOP, יש לנקוט זהירות כאשר מדידות לחץ תוך עיני מעכברים ער גבוהים יותר מאשר ערכי השיא שדווח במחקר זה (~ 25 מ&quot;מ כספית). IOPS גבוהה מאוד להגדיל את הסיכון לנזק איסכמי עלולים גם הם לגרום כאב לחיה. את העלאתו של IOP צריכה להיחשב כאחד גורמים רבים להעריך את ההצלחה של הניתוח. ככזה, התוצאה של ההליך צריך תעיד מבוסס על מספר פרמטרים ובכלל זה העלאת IOP, מוות soma RGC, ואובדן האקסון. אף על פי הפרוטוקול המתואר כאן תוצאות ברוב microbeads מוצלחly ליישוב בזווית, מגבלת פוטנציאל של מודל זה היא כי חרוזים אלה שנותרו צף החדר הקדמי עלולים להפריע הדמית רשתית חייה דרך הקרנית, כמו גם מבחני אלקטרו או התנהגותיים הדורשים מעבר של אור יעיל. היבט חשוב נוסף שיש לקחת בחשבון בעת ​​ניצול מודל חסימה microbead זו היא כי מידת הגובה IOP וניוון RGC עוקבות משתנה עם גיל ורקע הגנטי של העכבר פעל [4]. לכן, במידה של העלאת IOP ואת ציר הזמן של ניוון RGC יהיה צורך שנקבע לכל קו עכבר מהונדס ספציפיים ו / או טווח הגילאים. אחד מאפיינים של מודל זה הוא שתוצאות IOP גבוהות לאובדן ההדרגתי של מות RGC במהלך שלושת השבועות הראשונים לאחר הזרקת microbead, ומות RGC משמעותי מזוהות ב 3 שבועות לאחר ההליך. לפיכך, מודל זה מאפשר בחינת שינויים מוקדמים ו / או עדינים המתרחשים ד זהisease, לפני גלויים soma RGC ואובדן האקסון. עלייה משמעותית למות RGC לא נצפתה בין 3 ו -6 שבועות לאחר הגיוס של יתר לחץ דם עיניים. למעשה, אובדן סומה האקסון RGC נותר יציב ברמה של ~ 22 - 25% בין 3 ל -6 שבועות למרות מוצלח ומתמשך העלאת IOP בנקודות זמן אלה. משכו זמן ארוך יותר של IOP המתמשכת עשוי להידרש אובדן RGC נוסף להתרחש C57BL / 6 עכברים, שכפי הנראה להיות עמיד יותר בפני ניזקי RGC לעומת זני עכבר אחרים. 5 שינויים נוספים הפרוטוקול המובא כאן, לרבות התאמת גודל חרוז וזריקות נוספות, ייתכן שתידרש כדי ללמוד אובדן RGC בנקודות מאוחר יותר זמן. לכן, הפרוטוקול שלנו הוא אידיאלי עבור מחקרים התמקדו בשינויי pathophysiological מוקדם מתואמים עם ניוון מוחיה צנוע RGC אשר רלוונטיים התפרצות והתקדמות מוקדם גלאוקומת אדם.

גלאוקומה היא מחלה מסנוורת מתקדמת ובלתי הפיכה שתשפיע כ -80 מיליון אנשים ברחבי עולם עד שנת 2020 1. בחולי גלאוקומה, אובדן ראייה נגרם על ידי מותו סלקטיבית של תאי הגנגליון ברשתית (RGCs), הנוירונים פלט המעבירים מידע חזותי מן מהרשתית אל המוח. גלאוקומה היא מחלה ניוונית של מערכת עצבים הקשורות לגיל עם גורמי סיכון רבים אשר הנפוץ ביותר היא לחץ תוך עיני מוגבר (IOP). ואכן, IOP הוא גורם הסיכון הניתנים לשינוי רק גלאוקומה טיפולים שוטפים להתמקד אך ורק בניהול הלחץ בעין. עם זאת, גורמים גנטיים, הסלולר, וסביבתיים מרובים המשפיעים על ההופעה והתקדמות של המחלה הזאת. לכן, הבנת המנגנונים השונים שבסופו של דבר לתרום ומוות עצבי חיוני לפתח טיפולים יעילים גלאוקומה. במודלים של בעלי חיים של גלאוקומה חיוניים ללמוד פתופיזיולוגיה מחלות לזהות ולבדוקרפוי הבטיח. הזמינות הגוברת של קווי עכבר מהונדס כולל זנים בנוקאאוט מותנה עכברים שנשאו קליעים נותבים ניאון גנטית בקידוד הזניקה את הצורך מודלים גלאוקומה murine מושרה. במודלים של מכרסמים כמה גלאוקומה פותחו לאורך השנים (הנסקרת ב 2,3). ברבים מן המודלים האלה, גלאוקומה מושרה ע&quot;י שיבוש דינמיקת הומור מימי, וכתוצאה מכך העלאת IOP. מודלים ספיגים, שבו microbeads או חומרים אחרים מוזרקים לתוך החדר הקדמי של העין לחסום ניקוז מימי, צברו פופולריות בשנים האחרונות בין היתר בשל הקלות היחסית שלהם להגדיל IOP 4-14. מודל חסימת microbead של גלאוקומה, בצע לראשונה פרימטים 12, ארנבות 8, וחולדות 4,9,11, הותאם לאחרונה לשימוש בעכברים 5,6,10. במחקרים אלה, זריקת intracameral של microbeads פוליסטירן, לבד אובשילוב עם חומר viscoelastic, הביא העלאת IOP מוביל 6,10 למות RGC שלאחר מכן. עם זאת, ריפלוקס כשהמחט היא נסוגה מן העין ומן הפירוק של microbeads מזווית iridocorneal הן בעיות נפוצות המתעוררות במהלך ההליך. כדי למזער את החסרונות האלה, מגנטים שימשו כדי למשוך את microbeads מגנטי לזווית iridocorneal של העין 4,9. הפרוטוקול המתואר כאן הוא הליך שונה בהתבסס על מחקרים קודמים 9,10 המשתמש microbeads מגנטי מגנט כף יד מותאמי עין העכבר (איור 1). כמה משינויים מהותיים הוכנסו בפרוטוקול שלנו על מנת להבטיח עליית IOP יעילה לשחזור בעכברים. ראשית, הזרקה של microbeads נעשה באמצעות microneedle זכוכית שהוכן בקפידה עם שפוע facetted. משטחי החלקים וכתוצאה מכך של microneedle וכן הקצה המחודד שלה מבטיח כי ניזק מינימאלי הואשנגרם כפי שהוא מנפץ את הקרנית. השימוש microneedle זכוכית פעולה זו גורמת גם שליטה מוגברת כאשר קצה microneedle נכנס לתא הקדמי, ובכך להפחית את הסיכון של מבנים סמוכים תהליכים מזיקים כגון הקשתית ואת העדשה. בנוסף, נגע ההזרקה הזעיר הופך לפשוט תיקון עצמי קרני ומפחית תופעות הקשורות פגיעה בלתי רצויות. שנית, ההזרקה של microbeads המגנטי ושימוש מגנט כף יד מאפשרים שליטה מדויקת כדי למשוך את החרוזים לזווית iridocorneal בעיני העכבר הקטנות. microbeads מגנטי כי הם 4.5 מיקרומטר בקוטר היו בשימוש בגלל גודל microbead זה לא לסתום את פתח microneedle המוכן חשוב, פעם מוזרקת, microbeads אלה ביעילות חסם את ניקוז הומור מימי. גישה זו לא רק מפחיתה ריפלוקס של microbeads המוזרק, אלא גם מבטיחה כי מספר מרבי של microbeads מצטבר באזור היעד לחסום ניקוז הומור מימי ביעילות. Furthermore, אסטרטגיה זו גם מפחיתה את מספר החרוזים צפים בלשכה הקדמית הימנעות ממגע עם מבנים אחרים, כמו אירוס ואת העדשה, ומעבר מניעה לתא האחורי. ביחד, שינויים אלה להבטיח כי ניתוח הזרקת microbead מתבצע בקלות יחסית במועד וכתוצאה מכך אינדוקציה לשחזור, יעילה מאוד, ומתמשכת של יתר לחץ דם עינית בעכברים.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Puller</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin Wall Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW150F-4</td>
			<td>Capillary has an outer diameter of 1.5 mm and inner diameter of 1.12 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>MZ9.5</td>
			<td>Zoom factor range of 2.5 to 6.0. Microscope used for needle-making and the micro-bead injection surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Footswitch</td>
			<td>Linemaster</td>
			<td>T-91-SE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Blade</td>
			<td>Feather</td>
			<td>No. 11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode Beveler</td>
			<td>Science Products</td>
			<td>BV-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Duster</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>23-022-523</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP359-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP152-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-812</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads M-450 Epoxy</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14011</td>
			<td>Magnetic beads are 4.5 &#181;m in diameter. Stock solution is at a concentration of 4 x 108 beads/mL. Store at 4&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-Tube Rotators</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-450-127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 Handheld Magnets</td>
			<td>Geomag</td>
			<td></td>
			<td>0.45 Tesla. Magnet used for microbead preparation and microbead injection surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL serological pipet</td>
			<td>Costar</td>
			<td>4489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biological Containment Hood</td>
			<td>Biostad</td>
			<td>377355</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balanced salt solution (BSS)</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>0065-0800-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P1000 Micropipet</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtube 1.5 mL</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P200 Micropipet</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.2 mL PCR tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72737.002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Controlled substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer Healthcare</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acepromazine</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U-100 Insulin Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>CS 200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Controlled substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide ophthalmic solution</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>0998-0355-15</td>
			<td>1% Mydriacyl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual Microsyringe Pump with Digital Display</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>DMP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual Micromanipulator</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>M3301R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-673-52</td>
			<td>8 x 8 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent swabs</td>
			<td>Kettenbach</td>
			<td>30601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P20 Micropipet</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic forcep</td>
			<td>Euroband</td>
			<td>1001</td>
			<td>Ensure forcep is plastic and has a flat surface to avoid damaging the eye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroquinolone ophthalmic solution</td>
			<td>Alcon</td>
			<td></td>
			<td>Vigamox</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>E12107-834</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tonometer</td>
			<td>iCare</td>
			<td>TV02</td>
			<td>TONOLAB rebound tonometer&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde, Para</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>T353-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small brush</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Cacodylate, tryhydrate</td>
			<td>Canemco and Marivec</td>
			<td>124-65-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brn-3a antibody (C-20)</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-31984</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Plate, 48 well</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP151-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Goat IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 594 conjugate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum foil</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slow fade Gold antifade reagent</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>S36936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Glass</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-548-5E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide 2% aqueous solution</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>3294949</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embed-812</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>14900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecenyl succinic anhydride</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>13710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nadic methyl anhydride</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMP-30</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>13600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propylene oxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>110205-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding mold-Dykstra</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>70907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porter-Blum ultra-microtome</td>
			<td>Sorvall</td>
			<td>MT-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine blue O (Certified Biological Stain)</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>T161-25</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a magnetic microbead occlusion model to induce ocular hypertension-dependent glaucoma in mice

השימוש במודלים של מכרסמים של גלאוקומה כבר חיוני כדי להבין את המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס הפתופיזיולוגיה של מחלות ניווניות multifactorial זה. עם כניסתו של קווי עכבר מהונדסים רבים, יש עניין גובר במודלי Murine מושרים של יתר לחץ דם עיניים. כאן, אנו מציגים מודל חסימה של גלאוקומה מבוסס על הזרקה של microbeads המגנטי לתוך החדר הקדמי של העין באמצעות microneedle שונה עם שיפוע facetted. Microbeads המגנטי נמשך לזווית iridocorneal באמצעות מגנט כף יד כדי לחסום את ניקוז הומור מימי מן החדר הקדמי. הפרעה זו בתוצאות דינמיקה מימיות בתוך התעלות מתמדת של לחץ תוך עיניים, אשר לאחר מכן מוביל לאובדן של תאי גנגליון רשתית, כפי שנצפה בחולי גלאוקומת אדם. מודל חסימת microbead שהוצג בכתב היד הזה הוא פשוט בהשוואה לדגמים מושרים אחרים של גלאוקומה גם מאודיעיל לשחזור. חשוב לציין, השינויים המוצגים כאן למזער בעיות נפוצות לעתים קרובות עולות במודלי חסימה. ראשית, השימוש microneedle מזכוכית משופעת מונע זרימה חוזרת של microbeads ומבטיח כי נזק מינימלי מתרחשת לקרנית במהלך ההזרקה, ובכך להקטין תופעות הקשורות לפציעה. שנית, השימוש של microbeads המגנטי מבטיח את היכולת למשוך החרוזים ביותר לזווית iridocorneal, ובכך מפחית ביעילות את מספר החרוזים צפים בלשכה הקדמית הימנעות ממגע עם מבנים אחרים (למשל., איריס, עדשה). לבסוף, שימוש מגנט כף יד מאפשר גמישות בעת טיפול בעין העכבר הקטנה לכוון את microbeads המגנטי ביעילות להבטיח שיש ריפלוקס הקטן של microbeads מהעין כאשר microneedle היא נסוגה. לסיכום, מודל עכבר חסימת microbead המוצג כאן הוא כלי מחקר רב עצמה כדי לחקור שינויים ניווניות המתרחשים במהלך ההתפרצות וההתקדמות של גלאותִרדֶמֶת.

ההזרקה של microbeads המגנטי לתוך החדר הקדמי של עכברים בוגרים המתואר בפרוטוקול זה הביאה העלאה חזקה לשחזור של IOP. שבוע לאחר ההליך, IOP עלה מ 10 ± 0.6 מ&quot;מ הכספי (ממוצע ± SEM), את IOP הבסיס הממוצע בעיניים נגדיות, עד 19 ± 0.5 מ&quot;מ כספית בעיני יתר לחץ דם (t של הסטודנט -test; *** p &lt;0.001, n = 12, טבלה 1, איור 2). IOP התייצב ואילך ונשאר גבוה בקצב ממוצע של 20 מ&quot;מ כספית במשך לפחות 6 שבועות, בחנו זמן הנקודות הארוכות במחקר זה. IOP השיא הממוצע בעיניים מוזרקות microbead ב 2, 3, ו -6 שבועות לאחר הניתוח היה 25 מ&quot;מ כספי. הרוב המכריע של עכברים שטופלו שפותח IOP הגבוה מתמשך, ולכן פרוטוקול זה אינו מחייב זריקה שנייה של microbeads. כדי להעריך את מהלך הזמן של אובדן RGC במודל זה, סומה RGC היוראשון לכמת ידי immunostaining עם Brn3a, סמן ספציפי RGC 17. מספר התאים Brn3a החיובי היה לכמת על רשתיות שטוחות רכוב על 1, 2, 3 ו -6 שבועות לאחר הגיוס של יתר לחץ דם עיניים. למרות העלאת IOP משמעותית זוהתה מוקדם ככל 1 שבוע לאחר הזרקת microbead, ללא אובדן משמעותי של סומה RGC נצפה בתוך 2 השבועות הראשונים של ההליך (איור 3). RGC מוות משמעותי (22%), לעומת זאת, בא לידי ביטוי גם 3 שבועות (2,430 ± 67 RGCs / מ&quot;מ 2, ממוצע ± SEM, n = 12) ו -6 שבועות (2,350 ± 74 RGCs / מ&quot;מ 2, n = 10) פוסט אינדוקציה של יתר לחץ דם עינית, לעומת עיניים מלאות שלמים מעכברי un מופעל (3,141 ± 49 RGCs / מ&quot;מ 2, n = 23) (ANOVA, p &lt;0.001). חוסר תפקוד וניוון של אקסונים RGC הוא תכונת קרדינל של גלאוקומה. לכן, אובדן axonal נבדק ב 3 ו 6 שבועות לאחר הזרקת microbead ידיכימות של אקסונים RGC בחיתוכי עצב ראייה מוכתמים toluidine הכחול (איור 4). הפסד משמעותי של אקסונים RGC (25%) נצפתה ב 3 שבועות (28,401 ± 702 אקסונים / עצב, ממוצע ± SEM, n = 5) ו -6 שבועות (29,426 ± 948 אקסונים / עצב, n = 6) לאחר ההזרקה של microbeads לעומת עצבים שלא ניזוקו אופטיים מעיני מופעלי האו&quot;ם (39,467 ± 137 אקסונים / עצב, n = 4) (ANOVA, p &lt;0.001). ביחד, נתונים אלו מראים כי הזרקה של microbeads המגנטי לתוך תא עכבר הקדמי מוביל לשחזור מתמשך גובה IOP שתוצאתו soma RGC וניוון האקסון. <table style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td colspan="2"> זמן לאחר ניתוח OHT </td><td> N </td><td colspan="3"> לחץ תוך עיני ממוצע (מ&quot;מ כספית) ± SEM </td><td colspan="2"> שיא IOP (מ&quot;מ כספית) </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> נגדי </td><td> בַּרקִית </td><td> difference </td><td> נגדי </td><td> בַּרקִית </td></tr><tr><td colspan="2"> שבוע 1 </td><td> 12 </td><td> 10 ± 0.4 </td><td> 19 ± 0.5 </td><td> 9 ± 0.6 </td><td> 12 ± 0.4 </td><td> 22 ± 0.6 </td></tr><tr><td colspan="2"> 2 שבועות </td><td> 13 </td><td> 11 ± 0.5 </td><td> 20 ± 0.8 </td><td> 9 ± 0.5 </td><td> 12 ± 0.9 </td><td> 25 ± 0.7 </td></tr><tr><td colspan="2"> 3 שבועות </td><td> 10 </td><td> 11 ± 0.8 </td><td> 20 ± 0.7 </td><td> 10 ± 0.9 </td><td> 13 ± 0.2 </td><td> 25 ± 0.9 </td></tr><tr><td colspan="2"> 6 שבועות </td><td> 12 </td><td> 12 ± 0.5 </td><td> 20 ± 0.6 </td><td> 9 ± 0.7 </td><td> 13 ± 0.5 </td><td> 24 ± 0.6 </td></tr></tbody></table> העלאת טבלה 1. הלחץ התוך עיני בבית Occlusi Microbead מגנטי Murineעל דגם. בשנת נקבה ערה C57 BL / 6 עכברים, IOP נמדדו באמצעות tonometer ריבאונד מכויל. עיניים מופעלות מוצגות עלייה בלחץ תוך עיניים זוהתה שלאחר ניתוח שבוע שנותרה גבוה במשך שישה שבועות לפחות לאחר ההליך. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53731/53731fig1.jpg" /> באיור 1. Workflow של השלבים הכרוכים במודל של גלאוקומה ספיגה Microbead מגנטי Murine. צעד אחר צעד המתאר של כל ההליכים שבוצעו לפני, במהלך, ואחרי הניתוח. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53731/53731fig2.jpg" /> הגדל איור 2. לחץ תוך עיני במודל ספיגה Microbead מגנטי Murine. ב ערC57 BL / 6 נקבות עכברים, IOP נמדדה באמצעות tonometer ריבאונד מכויל. IOPS עיניים מוזרק microbead היה גבוה משמעותי שלאחר ניתוח שבוע (ANOVA, p &lt;0.001). IOPS נותר גבוה יחסית משמעותי לעין הנגדית של עכברים שהוזרקו במשך לפחות 6 שבועות (ANOVA, p &lt;0.001). (שלמים: n = 12; 1 בשבוע: n = 12, 2 שבועות: n = 13, 3 שבועות: n = 10, 6 שבועות: n = 12). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig2large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/53731/53731fig3.jpg" /> איור 3. רשתית גנגליון תא מות הדגם הספיג Microbead מגנט Murine. RGCs היה דמיין ידי immunostaining של רשתית שטוחה רכוב באמצעות Brn3a רשתיות שליטות ללא פגע (א) רשתיות גלאוקומה קשות ב 3 ו 6 שבועות לאחר הזרקת microbead להשרותיתר לחץ דם עינית (OHT) (B, C). ברי סולם: 20 מיקרומטר. (ד) ניתוח כמותי אישר כי הזרקת microbead הביא לאובדן soma משמעותי RGC ב 3 ו 6 שבועות לאחר ההליך לעומת שליטה העיניים. הצפיפות של סומה RGC פנימה בשלמותו, הלא גלאוקומת C57 / עכברי BL6 מוצגת כנקודת התייחסות (פסים לבנים, 100% הישרדות). ערכים באים לידי ביטוי כממוצע ± SEM (Intact: n = 23; 1 בשבוע: n = 6, 2 שבועות: n = 6, 3 שבועות: n = 12, 6 שבועות: n = 10, ANOVA, *** p &lt; 0.001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig3large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/53731/53731fig4.jpg" /> איור 4. אקסונלית ניוון במודל ספיגה Microbead מגנטי Murine. אקסונים RGC היו דמיינו ידי מכתים של חתכים עצב הראייה עם toluidine כחול בשליטה ללא פגע (א) רשתיות גלאוקומה קשות ב 3 ו 6 שבועות לאחר הזרקת microbead לגרום ליתר לחץ דם עינית (OHT) (B, C). ברי סולם: 10 מיקרומטר. (ד) ניתוח כמותי אישר כי הזרקת microbead הביא לאובדן האקסון RGC משמעותי בשבועות 3 ו -6 לאחר ההליך לעומת שליטה העיניים. הצפיפות של אקסונים RGC פנימה בשלמותו, הלא גלאוקומת C57 / עכברי BL6 מוצגת כנקודת התייחסות (פסים לבנים, 100% הישרדות). ערכים באים לידי ביטוי כממוצע ± SEM (Intact: n = 4; 3 שבועות: n = 5, 6 שבועות: n = 6, ANOVA, *** p &lt;0.001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig4large.jpg" target="_blank">נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו .</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice at JoVE.com

A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

לחסימה Microbead מגנטי דגם כדי לגרום Ocular Hypertension-Dependent גלאוקומה עכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לגרום ליתר לחץ דם עינית בעין murine שתוצאתו אובדן תאי הגנגליון ברשתית כפי שנצפה גלאוקומה. microbeads המגנטי מוזרק לתוך החדר הקדמי ומשך לזווית iridocorneal שימוש במגנט כדי לחסום את היצוא של הומור מימי.

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial ...

a-magnetic-microbead-occlusion-model-to-induce-ocular-hypertension

Research

JoVE Journal

Medicine

19.2K Views.  CRCHUM and University of Montreal.  כאן, אנו מציגים פרוטוקול לגרום ליתר לחץ דם עינית בעין murine שתוצאתו אובדן תאי הגנגליון ברשתית כפי שנצפה גלאוקומה. microbeads המגנטי מוזרק לתוך החדר הקדמי ומשך לזווית iridocorneal שימוש במגנט כדי לחסום את היצוא של הומור מימי. 

Video: A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged mechanical ventilation, contributes to morbidity and mortality of critical illness, and studies on novel genetic or pharmacological targets are areas of intense investigation (1-3, 5, 8, 26, 30, 33-36). ALI is defined by the acute onset of the disease, which leads to non-cardiac pulmonary edema and subsequent impairment of pulmonary gas exchange (36). We have developed a murine model of ALI by using a pressure-controlled ventilation to induce ventilator-induced lung injury (2). For this purpose, C57BL/6 mice are anesthetized and a tracheotomy is performed followed by induction of ALI via mechanical ventilation. Mice are ventilated in a pressure-controlled setting with an inspiratory peak pressure of 45 mbar over 1 - 3 hours. As outcome parameters, pulmonary edema (wet-to-dry ratio), bronchoalveolar fluid albumin content, bronchoalveolar fluid and pulmonary tissue myeloperoxidase content and pulmonary gas exchange are assessed (2). Using this technique we could show that it sufficiently induces acute lung inflammation and can distinguish between different treatment groups or genotypes (1-3, 5). Therefore this technique may be helpful for researchers who pursue molecular mechanisms involved in ALI using a genetic approach in mice with gene-targeted deletion.

A murine model for ventilator induced lung injury is an important tool to study an acute lung injury in vivo. Here, we report an easy applicable in situ model for acute lung injury using high-pressure mechanical ventilation to induce acute failure of the lung.

לחץ אוורור מבוקר כדי לגרום פגיעה ריאות חריפה על עכברים

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice

Murine studies of acute injury are an area of intense investigation, as knockout mice for different genes are becoming increasingly available 1-38. Cardioprotection by ischemic preconditioning (IP) remains an area of intense investigation. To further elucidate its molecular basis, the use of knockout mouse studies is particularly important 7, 14, 30, 39. Despite the fact that previous studies have already successfully performed cardiac ischemia and reperfusion in mice, this model is technically very challenging. Particularly, visual identification of the coronary artery, placement of the suture around the vessel and coronary occlusion by tying off the vessel with a supported knot is technically difficult. In addition, re-opening the knot for intermittent reperfusion of the coronary artery during IP without causing surgical trauma adds additional challenge. Moreover, if the knot is not tied down strong enough, inadvertent reperfusion due to imperfect occlusion of the coronary may affect the results. In fact, this can easily occur due to the movement of the beating heart.
Based on potential problems associated with using a knotted coronary occlusion system, we adopted a previously published model of chronic cardiomyopathy based on a hanging weight system for intermittent coronary artery occlusion during IP 39. In fact, coronary artery occlusion can thus be achieved without having to occlude the coronary by a knot. Moreover, reperfusion of the vessel can be easily achieved by supporting the hanging weights which are in a remote localization from cardiac tissues.
We tested this system systematically, including variation of ischemia and reperfusion times, preconditioning regiments, body temperature and genetic backgrounds39. In addition to infarct staining, we tested cardiac troponin I (cTnI)
as a marker of myocardial infarction in this model. In fact, plasma levels of cTnI correlated with infarct sizes (R2=0.8). Finally, we could show in several studies that this technique yields highly reproducible infarct sizes during murine IP and myocardial infarction6, 8, 30, 40, 41. Therefore, this technique may be helpful for researchers who pursue molecular mechanisms involved in cardioprotection by IP using a genetic approach in mice with targeted gene deletion. Further studies on cardiac IP using transgenic mice may consider this technique.

A murine model for myocardial ischemia and ischemic preconditioning is an important tool study cardioprotective mechanisms in vivo. Here, we report an easy applicable in situ model for cardiac IP using a hanging-weight system for coronary artery occlusion.

השימוש במערכת משקל תליה על חסימת העורקים הכליליים של עכברים

Murine studies of acute injury are an area of intense investigation, as knockout mice for different genes are becoming increasingly available 1-38. ...

The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to generate an animal model that reflects the characteristics of the human disease 3-5. However, in various models the induction of disease was rather complex and often hepatitis was only transient3-5. Therefore, we have developed a straightforward mouse model that uses the major human autoantigen in type 2 autoimmune hepatitis (AIH-2), namely hCYP2D6, as a trigger6. Type 1 liver-kidney microsomal antibodies (LKM-1) antibodies recognizing hCYP2D6 are the hallmark of AIH-27,8. Delivery of hCYP2D6 into wildtype FVB or C57BL/6 mice was by an Adenovirus construct (Ad-2D6) that ensures a direct delivery of the triggering antigen to the liver. Thus, the ensuing local inflammation generates a fertile field9 for the subsequent development of autoimmunity. A combination of intravenous and intraperitoneal injection of Ad-2D6 is the most effective route to induce a long-lasting autoimmune damage to the liver (section 1). Here we provide a detailed protocol on how autoimmune liver disease is induced in the CYP2D6 model and how the different aspects of liver damage can be assessed. First, the serum levels of markers indicating hepatocyte destruction, such as aminotransferases, as well as the titers of hCYP2D6 antibodies are determined by sampling blood retroorbitaly (section 2). Second, the hCYP2D6-specific T cell response is characterized by collecting lymphocytes from the spleen and the liver. In order to obtain pure liver lymphocytes, the livers are perfused by PBS via the portal vein (section 3), digested in collagen and purified over a Percoll gradient (section 4). The frequency of hCYP2D6-specific T cells is analyzed by stimulation with hCYP2D6 peptides and identification of IFN&gamma;-producing cells by flow cytometry (section 5). Third, cellular infiltration and fibrosis is determined by immunohistochemistry of liver sections (section 6). Such analysis regimen has to be conducted at several times after initiation of the disease in order to prove the chronic nature of the model. The magnitude of the immune response characterized by the frequency and activity of hCYP2D6-specific T and/or B cells and the degree of the liver damage and fibrosis have to be assessed for a subsequent evaluation of possible treatments to prevent, delay or abrogate the autodestructive process of the liver.

Infection of mice with an Adenovirus expressing the major human autoantigen cytochrome P450 2D6 (hCYP2D6) recognized by sera of patients suffering from type 2 autoimmune hepatitis results in a persistent form of autoimmune-mediated liver disease characterized by extensive hepatitis, fibrosis and generation of a CYP2D6-specific immune response.

CYP2D6 מודל החיה: כיצד לגרום דלקת כבד אוטואימונית עכברים

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

ספיגה דו צדדי משותף עורק תרדמה כגירוי נפשית מראש מספיק כדי לגרום סובלנות איסכמי מוקדמת לאיסכמיה מוחית מיקוד

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Background 
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered advancements to decrease the occurrence this injury.&#160;The current model demonstrates reproducible lower&#160;extremity paralysis following thoracic aortic occlusion.
Methods 
Adult male C57BL6 mice were anesthetized with isoflurane. Through a cervicosternal incision the aorta was exposed. The descending thoracic aorta and left subclavian arteries were identified without entrance into pleural space. Skeletonization of these arteries was followed by immediate closure (Sham) or occlusion for 4 min (moderate ischemia) or 8 min (prolonged ischemia). The sternotomy and skin were closed and the mouse was transferred to warming bed for recovery.&#160; Following recovery, functional analysis was obtained at 12 hr intervals until 48 hr.
Results 
Mice that underwent sham surgery showed no observable hind&#160;limb deficit. Mice subjected to moderate ischemia for 4 min had minimal functional deficit at 12 hr followed by progression to complete paralysis at 48 hr. Mice subjected to prolonged ischemia had an immediate paralysis with no observable hind-limb movement at any point in the postoperative period. There was no observed intraoperative or post&#160;operative mortality.
Conclusion 
Reproducible lower extremity paralysis whether immediate or delayed can be achieved in a murine model. Additionally, by using a median sternotomy and careful dissection, high survival rates, and reproducibility can be achieved.

The lack of mechanistic understanding of spinal cord ischemia-reperfusion injury has hindered further adjuncts to prevent paraplegia following high risk aortic operations. Thus, the development of animal models is imperative. This manuscript demonstrates reproducible lower extremity paralysis following thoracic aortic occlusion in a murine model.

פרפלגיה Reproducable ידי בית חזה אבי העורקים ספיגה במודל Murine של חוט השדרה איסכמיה reperfusion

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present here a protocol for elevating intraocular pressure (IOP) in the rat, by injecting magnetic microspheres into the anterior chamber of the eye. The use of magnetic particles allows the user to manipulate the beads into the iridocorneal angle, thus providing a very effective blockade of fluid outflow from the trabecular meshwork. This leads to long-lasting IOP rises, and eventually neuronal death in the ganglion cell layer (GCL) as well as optic nerve pathology, as seen in patients with the disease. This method is simple to perform, as it does not require machinery, specialist surgical skills, or many hours of practice to perfect. Furthermore, the pressure elevations are very robust, and reinjection of the magnetic microspheres is not usually required unlike in some other models using plastic beads. Additionally, we believe this method is suitable for adaptation for the mouse eye.

We present a method for inducing elevated intraocular pressure (IOP), by injecting magnetic microspheres into the rat eye, to model glaucoma. This leads to strong pressure rises, and extensive neuronal death. This protocol is easy to perform, does not require repeat injections, and produces stable long-lasting IOP rises.

ניסוי הגלאוקומה נגרמת על ידי הזרקת Ocular של מיקרוסכמות מגנטית

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the brain for visual perception. Damage to RGCs and their axons leads to vision loss and/or blindness. Although the specific cause of glaucoma is unknown, the primary risk factor for the disease is an elevated intraocular pressure. Glaucoma-inducing procedures in animal models are a valuable tool to researchers studying the mechanism of RGC death. Such information can lead to the development of effective neuroprotective treatments that could aid in the prevention of vision loss. The protocol in this paper describes a method of inducing glaucoma - like conditions in an in vivo rat model where 50 &#181;l of 2 M hypertonic saline is injected into the episcleral venous plexus. Blanching of the vessels indicates successful injection. This procedure causes loss of RGCs to simulate glaucoma. One month following injection, animals are sacrificed and eyes are removed. Next, the cornea, lens, and vitreous are removed to make an eyecup. The retina is then peeled from the back of the eye and pinned onto sylgard dishes using cactus needles. At this point, neurons in the retina can be stained for analysis. Results from this lab show that approximately 25% of RGCs are lost within one month of the procedure when compared to internal controls. This procedure allows for quantitative analysis of retinal ganglion cell death in an in vivo rat glaucoma model.

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma is characterized by damage to retinal ganglion cells. Inducing glaucoma in animal models can provide insight into the study of this disease. Here, we outline a procedure that induces loss of RGCs in an in vivo rat model and demonstrates the preparation of whole-mount retinas for analysis.

גלאוקומה וישכנע נוהל בבית<em&gt; In vivo</em&gt; מודל עכברוש ואת כל הר רשתית הכנה

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.

גישה ניתוחית עבור העורקים התיכון ספיגה מוחין ושבץ reperfusion מושרה של עכברים

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to perform a partial thoracotomy to visualize the transverse aortic arch. However, the surgical trauma caused by the thoracotomy in open-chest models changes the respiratory physiology as the ribs are dissected and left unattached after chest closure. To prevent this, we established a minimally invasive, closed chest approach via lateral thoracotomy. Herein we approach the aortic arch via the 2nd intercostal space without entering the chest cavities, leaving the mouse with a less traumatic injury to recover from. We perform this operation using standard laboratory settings for open chest TAC procedures with equal survival rates. Apart from maintaining physiological breathing patterns due to the closed chest approach, the mice seem to benefit by showing rapid recovery, as the less invasive technique appears to facilitate a fast healing process and to reduce immune response after trauma.

Here, we present a protocol of Transverse Aortic constriction (TAC) via a lateral thoracotomy. This technique is a minimally invasive, closed chest surgical procedure aiming to simulate pressure overload and heart failure in mice utilizing standard TAC laboratory settings.

דגם סגור-החזה לזירוז רוחבי. התרחבות אבי העורקים בעכברים

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...