We wish to thank Peter Munro PhD for his assistance with optic nerve sectioning. This study was supported by the Medical Research Council (G0901303), and in part by the Dorothy Hodgkin Postgraduate Award/Medical Research Council, the Helen Hamlyn Trust, Fight for Sight, and Moorfields special trustess,.

הצהרת אתיקה: כל הניסויים בבעלי החיים שנערכו בהתאם לועדת הטיפול ושימוש בבעלי חיים המוסדיים (IACUC), ואושרו בהסכם עם הנחיות משרד פן בריטניה <a href="http://goo.gl/FLkirW" target="_blank">(http://goo.gl/FLkirW,</a> גישה 10 ביוני האחרון , 2014) והצהרת Arvo לשימוש בבעלי חיים ברפואת עיניים ומחקר Vision <a href="http://goo.gl/4LFOjD" target="_blank">(http://goo.gl/4LFOjD,</a> הגישה האחרונה 10 ביוני, 2014). 1. Ocular Hypertension אינדוקציה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום לגלאוקומה ניסיונית על ידי הרמת לחץ התוך עיני (IOP) באמצעות הזרקה חד-צדדית של microspheres פאראמגנטיים לתוך התא הקדמי של חולדות בראון נורבגיה, המבוסס על השיטה של et al Samsel. 3 חולדות פיגמנט אחרות עשויות להיות מתאימות, אם כי אלה היו צריכים להיות מאומתים ראשון על ידי המשתמש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקבת g 250-300 הביתחולדות לשעבר מגדל בראון נורבגיה במתמדת תאורה נמוכה סביבה (40-60 סוויטה דה לוקס) כדי למזער את התנודות יומי בלחץ התוך העיני 7, עם גישה כלרצונך מזון ומים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקחת מידות IOP בסיסיות בבעלי חיים ער 8 לפני ההרדמה והזרקת חרוז, באמצעות tonometer ריבאונד מכויל לשימוש בעיני העכברוש 9. IOP הוא נלקח כממוצע של חמש קריאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטשטש חולדות עם 37.5 מ&quot;ג / קילוגרם קטמין, ו0.25 מ&quot;ג / קילוגרם medetomidine hydrochloride נמסר intraperitoneally. לאשר עומק ההרדמה על ידי בדיקת רפלקסים הרגל האחורית של החיה, לפני Povidone יישום יוד (ראה שלב 1.5), והזרקת חרוז (ראה שלב 1.8). לנהל 0.5% hydrochloride proparacaine לשיכוך כאבים. הערה: אל להרחיב את התלמיד בכל שלב. זה יעזור לי חרוזים להתיישב טובים יותר לזווית iridocorneal, ולמנוע מחייבים את העדשה. החל משחה העין כדי למנוע התייבשות של קרנית בעין הנגדית המופעל un. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Wאפר עין האופרטיבית עם 5% יוד povidone במים 10 דקות 5 לפני הזריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 5 דקות, פתיל יוד povidone את השימוש בגזה סטרילית, ולשטוף את העיניים עם 0.9% תמיסת מלח סטרילית. שמור את העיניים לחות במהלך הרדמה עם יישום רגיל של תמיסת מלח סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים מגנט טבעתי סביב העין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 25 μl של תמיסה המכילה 30 מ&quot;ג / מיליליטר של גמא-הקרנה מעוקרת 8 מיקרומטר microspheres המגנטי בתמיסת מלח מאוזנת של האנק (HBSS) ללשכה הקדמית, באמצעות מחט משופעת 33 G. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין חרוזים, לשטוף מחדש על ידי מתלים, אז צנטריפוגה 3 פעמים ב10,000 XG למשך 5 דקות עם 1 מיליליטר HBSS, לפני קבלת 30 מ&quot;ג / מיליליטר הפתרון הסופי. לשמור על תנאים סטריליים לאורך כל דרך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזרקה, להיות זהיר, כדי למנוע החדרת המחט לאיריס, כדי למזער את הסיכון של טראומת קשתית. זה ניתן למנוע על ידי orientating המחט משיקה למשטח קרני, כמקביל לאיריס ככל האפשר. זה גם יעזור לי כדי להקטין את איבוד חרוז מאתר ההזרקה. הערה: הזרק חרוזים בקצב מהיר כדי להבטיח חלוקה שווה סביב זווית iridocorneal, שהוא קריטי להעלאת לחץ תוך עיני. בנוסף, חרוזים חנות, מחטים וטבעות מגנטיות בנפרד, כך שהחרוזים לא יוצרים אשכולות, מה שהופך אותם קשה לטעון לתוך המזרק ולהזריק, והמחט אינה הופכת להיות ממוגנטת. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאר את המחט במקום 1 דקות לאחר הזרקה על מנת להבטיח כי חרוזים להתיישב לתוך זווית iridocorneal לעכב ניקוז המימי מmeshwork trabecular. מעט זווית המחט לאחר חרוזים יש בתחילה התיישבה כדי לאפשר זליגה מסוימת של מימית, כדי למזער את העלייה חולפת בלחץ התוך עיני. בסופו של הניתוח לשטוף את המחט דרך עם פוספט הראשון שנאגרו (PBS), ולאחר מכן 70% אתנול, ואחריו מים מזוקקים, על מנת להבטיח את משך שימוש במחט בהליכים נפרדים. לחלופין, אפשר להשתמש במחטים חד פעמיות אם שילוב מד והמזרק הנכון זמין. אופציונליות: מחטים עשויות להיות מחודדות באמצעות beveller להאריך את השימוש בם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה במידת צורך, להסיר את המגנט, ולהשתמש בו כדי לצייר חרוזים לתחומי כיסוי חלקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאר את המגנט במקום סביב העין ללאחר הזרקה 10 דקות נוספת כדי להבטיח חרוזים להתיישב גם לזווית iridocorneal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה הפוכה באמצעות 0.25 מ&quot;ג / קילוגרם hydrochloride atipemezole. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל כלורמפניקול, או משחה אנטיביוטית אחרת, למשל gentamycin או טרמיצין topically כדי למנוע זיהום, ושל 0.5% hydrochloride proparacaine לשיכוך כאבים. השאר בעלי חיים להתאושש על מחצלת חום עד שהן חוזרים לתנועה, ולאחר מכן להעביר לתיבה חמה ואספקה ​​עם תזונה נוספת, כגון תוסף מזון או דיאטה רגילה טבולה עד להחלמה מלאה. שיכוך כאבים מערכתיים או מקומיים יש לתת לבעלי חיים בו מוצגות סימנים של כאב 24 שעות לאחר ניתוח. אם thesסימפטומים דואר להתמיד למרות טיפול, בעלי החיים צריכים להיות שלוקטו בצורה אנושית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בעין הנגדית כשליטת unoperated. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח מדידות לחצו תוך עיניות כל 2-3 ימים לאחר מתן חרוז, וכל 2-3 ימים לאחר מכן באמצעות tonometer ריבאונד מכויל לשימוש בעיני העכברוש 9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקריטריונים להכללת עיניים בלימודים יכולים להיות: אם 1) IOP מוגבה מעל הלחץ הנגדי על ידי שליטת 5 מ&quot;מ כספית, ו -2) לא יעלו על 60 מ&quot;מ כספית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיניים שבו חוזר לנקודת התחלת הלחץ (בדרך כלל על ידי לאחר הזרקת שבוע 1) לא צריך להיות כלולה בלימודים, אך זה אפשרי חרוזים מחדש להזריק בעיניים שאינם מצליחים לפתח גבוה IOP אם תרצה בכך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים בעלי חיים על ידי CO 2 מחנק בסוף הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את העיניים ועצבי ראייה, ולתקן בparaformaldehyde 4% (PFA) לילה לניתוח היסטולוגית נוסף. </li></ol> 2. הערכת נזק לרשתית Neuron שימוש TUNEL Staining <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לכמת תאים אפופטוטיים בהר שלם retinasuse assay dUTP ניק תיוג בתיווך transferase deoxynucleotidyl המסוף (TUNEL), על פי הוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את הרשתית מכוס עין, לשטוף 3 x 5 דקות בשיעור של 0.3% Triton X-100 בפוספט שנאגרו מלוח (T-PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Permeabilize הרקמה ב 3% T-PBS עבור שעה 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום לאזן רשתית באיזון הצפת למשך 10 דקות, לפני הדגירה בפתרון תגובת TUNEL עבור שעה 1 על 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את הרקמה למשך 3 x 5 דקות בשיעור של 0.3% T-PBS, לשטוף בשיעור של 0.3% T-PBS המכיל 5 מיקרומטר DAPI, ושטוח הר בתקשורת הרכבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לכמת גרעינים חיוביים TUNEL להשתמש מיקרוסקופ confocal לקחת 10 מיקרומטר Z- ערימות דרך שכבת תא גנגליון בהגדלה 20X. קח 3 תמונות בכל אחד 4 עלי הכותרת, באתרים קרובים לעצב הראייה, באמצע הפריפריה-, ובפריפריה הרחוקה של הרשתית, נותן סך של 12 תמונות לכל mount, דגימה כ -7,000 תאים. קריטריונים מורפולוגיים מופלים שאינו עצבי (אנדותל וגליה) תאים מהתאים עצביים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אזורי בחירה להדמיה באמצעות רק ערוץ DAPI, וחוקרי מסכה לקבוצות טיפול. </li></ol> 3. הערכת נזק לעצב הראייה באמצעות toluidine הכחול מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את עצבי ראייה הלילה בפתרון של Karnovsky ב 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנק את הדגימות עבור שעה 2 ב 1% (w / v) tetroxide אוסמיום ולאחר מכן ליבש באתנול 100%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה עצבי ראייה בפרופילן אוקסיד למשך 30 דקות, ואת המקום בתערובת 50:50 של פרופילן אוקסיד: לילה araldite. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשנות את הפתרון הזה ל -100 araldite%, ואחריו דגירה הלילה בשעה 60 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קטעי Cut semithin (0.75 מ&quot;מ עובי) וכתם עם toluidine 1% כחולים / בורקס (TB) ב 50% אתנול לפני הבדיקה על ידי מיקרוסקופ אור. </li></ol> 4. ניתוח סטטיסטי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע ana הסטטיסטיlyses באמצעות חבילת תוכנת סטטיסטיקה מתאימה. דו כיוונית ANOVA עם מבחן פוסט הוק-של ניומן-קאול ניתן להשתמש כדי לחשב מובהקות סטטיסטיות לIOP משתנה על פני זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ערך p של פחות מ 0.05 עשוי להיחשב משמעותי. </li></ol>

<ol>
	<li>Quigley, H. A., Broman, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+number+of+people+with+glaucoma+worldwide+in+2010+and+2020.">The number of people with glaucoma worldwide in 2010 and 2020.</a> Br J Ophthalmol. 90 (3), 262-267 (2006).</li><li>Weinreb, R. N., Aung, T., Medeiros, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiology+and+treatment+of+glaucoma:+a+review.">The pathophysiology and treatment of glaucoma: a review.</a> JAMA. 311 (18), 1901-1911 (2014).</li><li>Samsel, P. A., Kisiswa, L., Erichsen, J. T., Cross, S. D., Morgan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+the+induction+of+experimental+glaucoma+using+magnetic+microspheres.">A novel method for the induction of experimental glaucoma using magnetic microspheres.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (3), 1671-1675 (2011).</li><li>Libby, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inherited+glaucoma+in+DBA/2J+mice:+pertinent+disease+features+for+studying+the+neurodegeneration.">Inherited glaucoma in DBA/2J mice: pertinent disease features for studying the neurodegeneration.</a> Vis Neurosci. 22 (5), 637-648 (1017).</li><li>Morrison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+intraocular+pressure+and+optic+nerve+injury+models+in+the+rat.">Elevated intraocular pressure and optic nerve injury models in the rat.</a> J Glaucoma. 14 (4), 315-317 (2005).</li><li>Levkovitch-Verbin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translimbal+laser+photocoagulation+to+the+trabecular+meshwork+as+a+model+of+glaucoma+in+rats.">Translimbal laser photocoagulation to the trabecular meshwork as a model of glaucoma in rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 43 (2), 402-410 (2002).</li><li>Moore, C. G., Johnson, E. C., Morrison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythm+of+intraocular+pressure+in+the+rat.">Circadian rhythm of intraocular pressure in the rat.</a> Curr Eye Res. 15 (2), 185-191 (1996).</li><li>Morrison, J. C., Jia, L., Cepurna, W., Guo, Y., Johnson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliability+and+sensitivity+of+the+TonoLab+rebound+tonometer+in+awake+Brown+Norway+rats.">Reliability and sensitivity of the TonoLab rebound tonometer in awake Brown Norway rats.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (6), 2802-2808 (2009).</li><li>Wang, W. H., Millar, J. C., Pang, I. H., Wax, M. B., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+measurement+of+rodent+intraocular+pressure+with+a+rebound+tonometer.">Noninvasive measurement of rodent intraocular pressure with a rebound tonometer.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46 (12), 4617-4621 (2005).</li><li>Isenberg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ocular+application+of+povidone-iodine.">The ocular application of povidone-iodine.</a> Community Eye Health. 16 (46), 30-31 (2003).</li><li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+chronic+pressure-induced+optic+nerve+damage.">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Exp Eye Res. 64 (1), 85-96 (1997).</li><li>Foxton, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-A+is+necessary+and+sufficient+for+retinal+neuroprotection+in+models+of+experimental+glaucoma.">VEGF-A is necessary and sufficient for retinal neuroprotection in models of experimental glaucoma.</a> Am J Pathol. 182 (4), 1379-1390 (2013).</li></ol>

David T. Shima is an employee of Hofmann-La Roche, Switzerland. The remaining authors declare they have no competing financial interests.

כאן אנו מדגימים שיטה לגרימת IOP הגבוה בחולדה, על ידי הזרקת microspheres המגנטי לתוך התא הקדמי של העין. שיטה זו היא פשוטה לביצוע, ודורשת מומחיות כירורגית קטנה, או שעות של תרגול ועידון. יתר על כן, ההליך הוא אפקטיבי; לעתים רחוקות דורש יותר מאשר זריקה אחת של חרוזים כדי לגרום לעלייה חזקה, חזקה בלחץ (reinjection שיעור של כ -10%). זה עשוי לספק יתרון על פני שיטות מושרה קיימות, כגון וריד episceral המאתגר מבחינה טכנית טרשת נפוצה מודל 11, או פרוטוקול photocoagulation לייזר 6, אשר יכול לדרוש הליכים מרובים כדי לשמור העלו IOP. על מנת שהשיטה כדי להצליח עם זאת, יש כמה קריטי צעדים קטנים שיש לנקוט. ראשית כדאי להשתמש במגנט בצורה טבעתי לצייר חרוזים לזווית iridocorneal. צעד זה הוא שינוי של הפרוטוקול המקורי, wherדואר חרוזים הוזרקו לתוך התא הקדמי, ולאחר מכן עברו ביד חופשית סביב העין 3. באמצעות מגנט טבעתי אומר שmicrospheres צריך להתיישב באופן שווה סביב הזווית, הדורש חלוקה מחדש ידנית מינימאלית. שנית, שיעור ההזרקה צריך להיות מהיר - איטי מדי והחרוזים בעיקר יצטברו בצד אחד של הזווית, שהובילו לכיסוי חלקי, ובאופן פוטנציאלי אין עלייה בלחץ. באופן כללי אם כי, השיטה היא פשוטה מספיק שהמשתמש יכול בקלות לבצע שינויים בפרוטוקול, כגון שינוי הגודל או הנפח של חלקיקי microsphere, אולי כדי לנסות לשנות את מידת גובה IOP. עם זאת, חסרון פוטנציאלי אחד של השיטה הוא שיש אחד מעט שליטה על היקף יתר לחץ דם, אשר בכ 5-10% מהמקרים שצפינו עלה מעל 60 מ&quot;מ כספית. עלייה מוגזמת בIOP יכולה להיות מאוד הרסנית לרקמת רשתית, ועלולה להפוך את חקר המנגנונים ויומשעמם של מוות של תאים מאתגרים. עם זאת, השיטה מייצרת פתולוגיה עצבית עקבית, הן בעצב הרשתית ואופטי, שניתן להשפיע פרמקולוגית 12. זה עלול להפוך את המודל אטרקטיבי לפיתוח תרופות חדשניות לטיפול בגלאוקומה. בנוסף, מאחר שהחרוזים מופנים לזווית iridocorneal, זה משאיר חזותי הציר חופשי להדמית חיה של דיסק הרשתית או אופטי. אנו צופים כי מודל זה יותאם ומשמש ליישומים עתידיים במינים אחרים, כוללים עכבר.

גלאוקומה ראשונית היא מחלה הרסנית עין משפיעה על 60.5 מיליון אנשים מוערכים ברחבי העולם 1, מה שעלול להוביל לאובדן ראיית חי שינוי ועיוורון 2. מחקר על מנגנוני המחלה, ופיתוח תרופות חדשניות לגלאוקומה, תלויים בדגמים טובים של המחלה אשר לשחזר כמה מסימני ההיכר של פתולוגיה. אנו מציגים כאן מודל גלאוקומה עכברוש על פי השיטה של et al Samsel. 3 המטרה הכוללת של שיטה זו היא להגביר את לחץ התוך עיני (IOP) בעיניים על ידי הזרקת microspheres המגנטי ללשכה הקדמית, ומשתמש בטבעת מגנטית, ישיר אותם לזווית iridocorneal. זה פוגע ביצוא ימי, אשר מגדיל את לחץ התוך עיני, שהוביל לניזק עצבי ואובדן תא. הפרוטוקול פותח כדי לנסות לספק מודל פשוט, מושרה של גלאוקומה. פרוטוקול זה יכול להיות כמה יתרונותעל טכניקות קיימות. מודלים עכבר גנטיים כגון DBA / י 2 זמינים, שאינו דורשים הליכים ליזום; עם זאת אלה עשויים להיות תחילתה צפויה של התקדמות המחלה 4. בניגוד לכך, מודלים מושרה, שרובם מסתמכים על ניתוח הרמת IOP במכרסמים, יש את היתרון שייזום יכול להיות נשלט על ידי המשתמש. חלק מהשיטות הללו יכול להיות חסרונות משלהם לעומת זאת, כולל להיות מאתגרים מבחינה טכנית 5, ויכול לדרוש הליכים מרובים כדי לשמור על לחץ תוך עיני מוגבר 6. בניגוד לכך, השיטה מושרה המפורטת בכתב היד הזה היא טכניקה פשוטה, יעילה, ושחזור שמייצרת עליות יציבים, חזקות בלחץ, עם צורך מינימאלי לreinjection. בנוסף, הוא אינו כרוך בציוד יקר, ורק דורש מיומנויות כירורגיות בסיסיות לביצוע. פרוטוקול זה יכול להיות מתאים לקוראים שמחפשים להגדיר פחות תובעני מבחינה טכנית מושרהמודל גלאוקומה במעבדה שלהם.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="784">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:324px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:175px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:324px;">250-300g female Brown Norway ex-breeder rats</td>
			<td style="width:175px;">Harlan UK</td>
			<td style="width:119px;">203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Tonolab Rebound Tonometer</td>
			<td style="width:175px;">Tiolat</td>
			<td style="width:119px;">TV02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:324px;">Ketaset (Ketamine)</td>
			<td style="width:175px;">Fort Dodge Animal health</td>
			<td>BN1000118</td>
			<td>37.5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Domitor (medetomidine hydrochloride)</td>
			<td style="width:175px;">Orion Pharma</td>
			<td style="width:119px;">140-999</td>
			<td>0.25 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Povidone iodine</td>
			<td style="width:175px;">Ecolab</td>
			<td>BN4369LE10</td>
			<td>5% in H2O</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Minim&#39;s Saline Solution</td>
			<td style="width:175px;">Bausch and Lomb</td>
			<td>PL00033/5017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Toroidal magnet</td>
			<td style="width:175px;">Supermagnete</td>
			<td>R-10-07-03-N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Magnetic Microspheres</td>
			<td style="width:175px;">Bangs Laboratories</td>
			<td>UMC4N/9692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">HBSS</td>
			<td style="width:175px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">33-guage bevelled needle</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td>7747-01</td>
			<td>Custom needle</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Luer tip syringe</td>
			<td style="width:175px;">Hamilton</td>
			<td>80601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Antisedan (atipemezole hydrochloride )</td>
			<td style="width:175px;">Orion Pharma</td>
			<td style="width:119px;">141-003</td>
			<td>0.25 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Chloramphenicol ointment</td>
			<td style="width:175px;">Medicom</td>
			<td>18956-0005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">TUNEL staining kit</td>
			<td style="width:175px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G3250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">DAPI</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:324px;">Vectashield Mounting Media</td>
			<td style="width:175px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental glaucoma induced by ocular injection of magnetic microspheres

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present here a protocol for elevating intraocular pressure (IOP) in the rat, by injecting magnetic microspheres into the anterior chamber of the eye. The use of magnetic particles allows the user to manipulate the beads into the iridocorneal angle, thus providing a very effective blockade of fluid outflow from the trabecular meshwork. This leads to long-lasting IOP rises, and eventually neuronal death in the ganglion cell layer (GCL) as well as optic nerve pathology, as seen in patients with the disease. This method is simple to perform, as it does not require machinery, specialist surgical skills, or many hours of practice to perfect. Furthermore, the pressure elevations are very robust, and reinjection of the magnetic microspheres is not usually required unlike in some other models using plastic beads. Additionally, we believe this method is suitable for adaptation for the mouse eye.

הזרקה של חרוזים מגנטיים לזווית iridocorneal מושרה באופן עקבי עלייה ממושכת ויציבה בלחץ (איור 1), שהייתה לצפות בקלות בנקודת הזמן הראשונה, 3 ימים לאחר ההזרקה. יתר על כן, העלייה בלחץ נשמרה לאורך תקופת הניסוי, ועל אף שכמובן הזמן שלנו סיימו בגיל 18 ימים לאחר הזרקה, אחרים דיווחו כי לחץ נמשך לטווח ארוך 3. IOP הממוצע בממוצע לכל אורכו של הניסוי לשליטה, עיניים הזריקו-לא-חרוז הייתה 19.7 ± 0.3 מ&quot;מ כספית, לעומת 40.5 ± 2.8 מ&quot;מ כספית לעיניים-הזריק חרוז (P &lt;0.001). בנוסף, שיא לחץ תוך עיני מוגבר מ22.8 ± 0.3 מ&quot;מ כספית ל49.9 ± 2.3 מ&quot;מ כספית. כדי לקבוע אם ההעלאה בIOP מובילה למוות של תאי הגנגליון ברשתית, ביצענו צביעת TUNEL על רשתית, והיסטולוגיה על סעיפי עצב ראייה רוחביים (איור 2). ברשתית<html> צפינו עלייה בצביעת TUNEL (איור 2 א) בעיניים מוזרק חרוז עם IOP הגבוה. מספר הגרעינים אפופטוטיים עלה כ -15 מתקפלים, מ -1.6 ± 0.5 תאים בבקרה הנגדית, ל24.5 ± 0.5 תאים ברשתית עם יתר לחץ דם (איור 2; P &lt;0.05). יתר על כן, בעיניים שבחרוזים מגנטיים הוזרקו אבל לחץ לא גדל (כנראה עקב חסימה חלקית של זווית iridocorneal), מספרם של תאי TUNEL חיוביים לא היו שונה באופן משמעותי מאלה של בקרות uninjected (P&gt; 0.05). הדבר מצביע על כך המוות של תאים היה קשור לעלייה בלחץ, לא בשל רעילות ישירה של microspheres המגנטי. לבסוף, חקרנו פתולוגיה עצב ראייה במודל הגלאוקומה, וראיתי הצטברות של toluidine כחול ברבים מהאקסונים, המצביעים על ניוון של תהליכים אלה סלולריים (איור 2 ג). &quot;Src =&quot; יור 1 &quot;/&gt; / קבצים / ftp_upload / 52,400 / 52400fig1highres.jpg איור 1. העלאת לחץ התוך עיני באמצעות microspheres המגנטי. הזרקה של microspheres המגנטי ללשכה הקדמית מושרה עלייה חזקה, משמעותית בלחץ התוך עיני (IOP) בהשוואה לשליטה הנגדית, עיניים-מוזרק אינם. יחידות ציר Y = מילימטר כספית (ממ&quot;כ). = נתונים ממוצע ± SEM. * = P &lt;0.001; = 12. דמות N זה שונה מFoxton et al, Am.. J. Pathol 182 (4):. 1,379-1,390. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52400/52400fig2highres.jpg" /> איור 2. העלאת IOP על ידי הזרקה של microspheres המגנטי לזווית iridocorneal, הנגרמת מוות עצבי בשכבת תא גנגליון (GCL). (א) נציג תמונות של רשתית משליטה (משמאל) וגלאוקומה (מימין) העיניים מוכתמות לגרעינים אפופטוטיים ידי TUNEL (ירוק;חצים לבנים) וDAPI (כחול), המציינים את מספר הגרעינים אפופטוטיים מוגבר כIOP עלה. (ב) כימות של תאים חיוביים TUNEL בGCL, מראים כי עיניים עם IOP הגבוה (באמצע), היו תאים באופן משמעותי יותר אפופטוטיים בהשוואה ל שליטה (משמאל). בניגוד לכך, בעיניים מוזרק חרוז שבו לחץ לא עלה (מימין), ללא גידול משמעותי בהכתמת TUNEL נצפה. = נתונים ממוצע ± SEM. * = P &lt;0.05; N = 7 - 8 (ג) נציג תמונות של צביעת עצב ראייה, דגי עלייה בהצטברות כחולה toluidine (חיצים שחורים) באקסונים פגועים מהגלאוקומה (מימין), אבל עיניים לא שולטות (משמאל).. ברים סולם = 50 מיקרומטר. נתון זה שונה מאל Foxton et., Am. J. Pathol 182 (4):. 1,379-1,390.

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres at JoVE.com

Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

We present a method for inducing elevated intraocular pressure (IOP), by injecting magnetic microspheres into the rat eye, to model glaucoma. This leads to strong pressure rises, and extensive neuronal death. This protocol is easy to perform, does not require repeat injections, and produces stable long-lasting IOP rises.

ניסוי הגלאוקומה נגרמת על ידי הזרקת Ocular של מיקרוסכמות מגנטית

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present ...

experimental-glaucoma-induced-ocular-injection-magnetic

Research

JoVE Journal

Medicine

16.9K Views.  University College London Institute of Ophthalmology. We present a method for inducing elevated intraocular pressure (IOP), by injecting magnetic microspheres into the rat eye, to model glaucoma. This leads to strong pressure rises, and extensive neuronal death. This protocol is easy to perform, does not require repeat injections, and produces stable long-lasting IOP rises.

Video: Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

Generation of Alginate Microspheres for Biomedical Applications

Alginate-based materials have received considerable attention for biomedical applications because of their hydrophilic nature, biocompatibility, and physical architecture. Applications include cell encapsulation, drug delivery, stem cell culture, and tissue engineering scaffolds. In fact, clinical trials are currently being performed in which islets are encapsulated in PLO coated alginate microbeads as a treatment of type I diabetes. However, large numbers of islets are required for efficacy due to poor survival following transplantation. The ability to locally stimulate microvascular network formation around the encapsulated cells may increase their viability through improved transport of oxygen, glucose and other vital nutrients. Fibroblast growth factor-1 (FGF-1) is a naturally occurring growth factor that is able to stimulate blood vessel formation and improve oxygen levels in ischemic tissues. The efficacy of FGF-1 is enhanced when it is delivered in a sustained fashion rather than a single large-bolus administration. The local long-term release of growth factors from islet encapsulation systems could stimulate the growth of blood vessels directly towards the transplanted cells, potentially improving functional graft outcomes. In this article, we outline procedures for the preparation of alginate microspheres for use in biomedical applications. In addition, we describe a method we developed for generating multilayered alginate microbeads. Cells can be encapsulated in the inner alginate core, and angiogenic proteins in the outer alginate layer. The release of proteins from this outer layer would stimulate the formation of local microvascular networks directly towards the transplanted islets.

In the following sections, we outline procedures for the preparation of alginate microspheres for use in biomedical applications. We specifically illustrate a technique for creating multilayered alginate microspheres for the dual purpose of cell and protein encapsulation as a potential treatment for type 1 diabetes.

דור של אלגינט microspheres עבור יישומים ביו

Alginate-based materials have received considerable attention for biomedical applications because of their hydrophilic nature, biocompatibility, and ...

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

הזרקת subretinal של וקטורי ריפוי גנטי ותאי גזע לעיניים המאוסות

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

A Laser-induced Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension to Characterize Visual Defects

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model of ocular hypertension to mimic human high-tension glaucoma. Here laser illumination is applied to the corneal limbus to photocoagulate the aqueous outflow, inducing angle closure. The changes of IOP are monitored using a rebound tonometer before and after the laser treatment. An optomotor behavioral test is used to measure corresponding changes in visual capacity. The representative result from one mouse which developed sustained IOP elevation after laser illumination is shown. A decreased visual acuity and contrast sensitivity is observed in this ocular hypertensive mouse. Together, our study introduces a valuable model system to investigate neuronal degeneration and the underlying molecular mechanisms in glaucomatous mice.

Chronic ocular hypertension is induced using laser photocoagulation of the trabecular meshwork in mouse eyes. The intraocular pressure (IOP) is elevated for several months after laser treatment. The decrease of visual acuity and contrast sensitivity of experimental animals are monitored using the optomotor test.

מודל עכבר לייזר המושרה של לחץ תוך עיני מוגבר כרוני לאפיון פגמים חזותיים

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the occurrence of subretinal hemorrhage can affect photoreceptor cell death in the detached retina. Hence, it is advantageous to create reproducible RDs without subretinal hemorrhage for evaluating photoreceptor cell death. We modified a previously reported method to create bullous and persistent RDs in a reproducible location with rare occurrence of subretinal hemorrhage. The critical step of this modified method is the creation of a self-sealing scleral incision, which can prevent leakage of sodium hyaluronate after injection into the subretinal space. To make the self-sealing scleral incision, a scleral tunnel is created, followed by scleral penetration into the choroid with a 30 G needle. Although choroidal hemorrhage may occur during this step, astriction with a surgical spear reduces the rate of choroidal hemorrhage. This method allows a more reproducible and reliable model of photoreceptor death in diseases that involve RD such as rhegmatogenous RD, retinopathy of prematurity, diabetic retinopathy, central serous chorioretinopathy, and age-related macular degeneration (AMD).

Creating experimental retinal detachments with a reproducible and sustained height of detachment, and without subretinal hemorrhage, is important for studying the pathophysiology of photoreceptor cell loss in retinal disease and evaluating potential therapeutic interventions. Here, we report such a method in detail.

רשתית דגם ניתוק במכרסמים על ידי הזרקת subretinal של נתרן Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Noninvasive Assessment of Cardiac Abnormalities in Experimental Autoimmune Myocarditis by Magnetic Resonance Microscopy Imaging in the Mouse

Myocarditis is an inflammation of the myocardium, but only ~10% of those affected show clinical manifestations of the disease. To study the immune events of myocardial injuries, various mouse models of myocarditis have been widely used. This study involved experimental autoimmune myocarditis (EAM) induced with cardiac myosin heavy chain (Myhc)-&#945; 334-352 in A/J mice; the affected animals develop lymphocytic myocarditis but with no apparent clinical signs. In this model, the utility of magnetic resonance microscopy (MRM) as a non-invasive modality to determine the cardiac structural and functional changes in animals immunized with Myhc-&#945; 334-352 is shown. EAM and healthy mice were imaged using a 9.4 T (400 MHz) 89 mm vertical core bore scanner equipped with a 4 cm millipede radio-frequency imaging probe and 100 G/cm triple axis gradients. Cardiac images were acquired from anesthetized animals using a gradient-echo-based cine pulse sequence, and the animals were monitored by respiration and pulse oximetry. The analysis revealed an increase in the thickness of the ventricular wall in EAM mice, with a corresponding decrease in the interior diameter of ventricles, when compared with healthy mice. The data suggest that morphological and functional changes in the inflamed hearts can be non-invasively monitored by MRM in live animals. In conclusion, MRM offers an advantage of assessing the progression and regression of myocardial injuries in diseases caused by infectious agents, as well as response to therapies.

This study demonstrates the successful establishment of magnetic resonance microscopy imaging as a non-invasive tool to assess the cardiac abnormalities in mice affected with autoimmune myocarditis. The data indicate that the technique can be used to monitor the disease-progression in live animals.

הערכה לא פולשנית של לב חריגות בניסויית אוטואימוניות דלקת שריר לב על ידי תהודה מגנטית מיקרוסקופית הדמיה בעכבר

Myocarditis is an inflammation of the myocardium, but only ~10% of those affected show clinical manifestations of the disease. To study the immune events ...

A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial neurodegenerative disease. With the advent of numerous transgenic mouse lines, there is increasing interest in inducible murine models of ocular hypertension. Here, we present an occlusion model of glaucoma based on the injection of magnetic microbeads into the anterior chamber of the eye using a modified microneedle with a facetted bevel. The magnetic microbeads are attracted to the iridocorneal angle using a handheld magnet to block the drainage of aqueous humour from the anterior chamber. This disruption in aqueous dynamics results in a steady elevation of intraocular pressure, which subsequently leads to the loss of retinal ganglion cells, as observed in human glaucoma patients. The microbead occlusion model presented in this manuscript is simple compared to other inducible models of glaucoma and also highly effective and reproducible. Importantly, the modifications presented here minimize common issues that often arise in occlusion models. First, the use of a bevelled glass microneedle prevents backflow of microbeads and ensures that minimal damage occurs to the cornea during the injection, thus reducing injury-related effects. Second, the use of magnetic microbeads ensures the ability to attract most beads to the iridocorneal angle, effectively reducing the number of beads floating in the anterior chamber avoiding contact with other structures (e.g., iris, lens). Lastly, the use of a handheld magnet allows flexibility when handling the small mouse eye to efficiently direct the magnetic microbeads and ensure that there is little reflux of the microbeads from the eye when the microneedle is withdrawn. In summary, the microbead occlusion mouse model presented here is a powerful investigative tool to study neurodegenerative changes that occur during the onset and progression of glaucoma.

Here, we present a protocol to induce ocular hypertension in the murine eye that results in the loss of retinal ganglion cells as observed in glaucoma. Magnetic microbeads are injected into the anterior chamber and attracted to the iridocorneal angle using a magnet to block the outflow of aqueous humour.

לחסימה Microbead מגנטי דגם כדי לגרום Ocular Hypertension-Dependent גלאוקומה עכברים

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial ...

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to microperimetry (MY) in eyes affected by dry Age-related Macular Degeneration (AMD) over time through the production and secretion of growth factors (GFs) on surrounding tissue. Patients were randomly assigned to each study group. All patients were diagnosed with dry AMD and with BCVA equal to or greater than 1 logarithm of the minimum angle of resolution (logMAR). A suprachoroidal autologous graft by Limoli Retinal Restoration Technique (LRRT) was carried out on group A, which included 11 eyes from 11 patients. The technique was performed by implanting adipocytes, adipose-derived stem cells obtained from the stromal vascular fraction, and platelets from platelet-rich plasma in the suprachoroidal space. Conversely, group B, including 14 eyes of 14 patients, was used as a control group. For each patient, diagnosis was verified by confocal scanning laser ophthalmoscope and spectral domain-optical coherence tomography (SD-OCT). In group A, BCVA improved by 0.581 to 0.504 at 90 days and to 0.376 logMAR at 180 days (+32.20%) postoperatively. Furthermore, MY test increased by 11.44 dB to 12.59 dB at 180 days. The different cell types grafted behind the choroid were able to ensure constant GF secretion in the choroidal flow. Consequently, the results indicate that visual acuity (VA) in the grafted group can increase more than in the control group after six months.

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

The goal of this study is to assess whether the suprachoroidal graft of adipose-derived stem cells included in the stromal vascular fraction and platelets derived from platelet-rich plasma by the Limoli Retinal Restoration Technique can improve visual acuity and retinal sensitivity responses in eyes affected by dry age-related macular degeneration.

משובי טיפול על ידי תא Suprachoroidal בשתל ב ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש: דוח ראשוני In Vivo

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to ...

An Experimental Model of Diet-Induced Metabolic Syndrome in Rabbit: Methodological Considerations, Development, and Assessment

In recent years, obesity and metabolic syndrome (MetS) have become a growing problem for public health and clinical practice, given their increased prevalence due to the rise of sedentary lifestyles and unhealthy eating habits. Thanks to animal models, basic research can investigate the mechanisms underlying pathological processes such as MetS. Here, we describe the methods used to develop an experimental rabbit model of diet-induced MetS and its assessment. After a period of acclimation, animals are fed a high-fat (10% hydrogenated coconut oil and 5% lard), high-sucrose (15% sucrose dissolved in water) diet for 28 weeks. During this period, several experimental procedures were performed to evaluate the different components of MetS: morphological and blood pressure measurements, glucose tolerance determination, and the analysis of several plasma markers. At the end of the experimental period, animals developed central obesity, mild hypertension, pre-diabetes, and dyslipidemia with low HDL, high LDL, and an increase of triglyceride (TG) levels, thus reproducing the main components of human MetS. This chronic model allows new perspectives for understanding the underlying mechanisms in the progression of the disease, the detection of preclinical and clinical markers that allow the identification of patients at risk, or even the testing of new therapeutic approaches for the treatment of this complex pathology.

We describe methods to develop an experimental model of diet-induced metabolic syndrome (MetS) in rabbits using a high-fat, high-sucrose diet. Animals developed central obesity, mild hypertension, pre-diabetes, and dyslipidemia, thus reproducing the main components of human MetS. This chronic model will allow acquisition of knowledge underlying mechanisms of disease progression.

מדגם ניסיוני של דיאטה-Induced סינדרום מטבולי בקרב ארנב: שיקולים מתודולוגי, פיתוח והערכה

In recent years, obesity and metabolic syndrome (MetS) have become a growing problem for public health and clinical practice, given their increased ...

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known risk factor for glaucoma. This protocol demonstrates a step-by-step guide on this technique in Long Evans rats and C57BL/6 mice. Under general anesthesia, a "purse-string" suture is applied on the conjunctiva, around the equator and behind the limbus of the eye. The fellow eye serves as an untreated control. Over the duration of our study, which was a period of 8 weeks for rats and 12 weeks for mice, IOP remained elevated, as measured regularly by rebound tonometry in conscious animals without topical anesthesia. In both species, the sutured eyes showed electroretinogram features consistent with preferential inner retinal dysfunction. Optical coherence tomography showed selective thinning of the retinal nerve fiber layer. Histology of the rat retina in cross-section found reduced cell density in the ganglion cell layer, but no change in other cellular layers. Staining of flat-mounted mouse retinae with a ganglion cell specific marker (RBPMS) confirmed ganglion cell loss. The circumlimbal suture is a simple, minimally invasive and cost-effective way to induce ocular hypertension that leads to ganglion cell injury in both rats and mice.

Chronic ocular hypertension is induced by applying a circumlimbal suture in rats and mice, leading to functional and structural deterioration of the retinal ganglion cells consistent with glaucoma.

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

A Rabbit Model of Aqueous-Deficient Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Glands: Application to Drug Efficacy Studies

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for quality of life and health care costs. The lack of informative animal models that recapitulate its key features impedes the search for new therapeutic agents for DED. Available DED animal models have limited reproducibility and efficacy. A model is presented here in which DED is induced by injecting the mitogen concanavalin A (Con A) into the orbital lacrimal glands of rabbits. Innovative aspects of this model are the use of ultrasound (US) guidance to ensure optimal and reproducible injection of Con A into the inferior lacrimal gland; injection of Con A into all orbital lacrimal glands that limits compensatory production of tears; and use of periodic repeat injections of Con A that prolong the state of DED at will. DED and its response to test agents are monitored with a panel of parameters that assess tear production, the stability of the tear film, and the status of the corneal and conjunctival mucosa. They include tear osmolarity, tear break-up time, Schirmer&#39;s tear test, rose bengal staining, and tear lactoferrin levels. The induction of DED and the monitoring of its parameters are described in detail. This model is simple, robust, reproducible, and informative. This animal model is suitable for the study of tear physiology and of the pathophysiology of DED as well as for the assessment of the efficacy and safety of candidate agents for the treatment of DED.

This article describes the development of a method to induce acute or chronic dry eye disease in rabbits by injecting concanavalin A to all portions of the orbital lacrimal gland system. This method, superior to those already reported, generates a reproducible, stable model of dry eye suitable for the study of pharmacological agents.

מודל ארנב של מחלה מימית לקויה עין יבש הנגרמת על ידי Concanavalin זריקה לתוך בלוטות לקטמאל: יישום ללימודי יעילות הסמים

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for ...