מחקר זה נתמך על ידי קרן פיטרסון טום ולהעניק NIH R01-HL119780 (Jain, ח"כ).

בעלי חיים פרוטוקול נבדקה, אושרה על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועד שימוש Case Western Reserve הספר לרפואה של אוניברסיטת, נערך על פי המדריך הלאומית המכונים לבריאות (NIH) טיפול ושימוש של חיות מעבדה (המהדורה השמינית, 2011). עכברים היו מורדמים על ידי שיטות תואם ההנחיות אמריקאי וטרינרי רפואי האגודה (AVMA) המתת חסד של בעלי חיים (2013 מהדורה). עכברים בשבוע 8-16 בן זכר, C57BL/6J, שימשו פרוטוקול זה. עכברים שוכנו בסביבה כהה/אור מחזור 12 h.
 1. הכנה מראש פעיל <ol><li>עכברים העברת לכלוב נקי 24 שעות לפני ההליך. לאפשר חיות גישה חופשית למים. החלף צ'או מזון מזון רך (תוסף תזונה ג'ל) 4-6 שעות לפני הניתוח כדי להפחית את התוכן של המעי הדק לניתוח.</li>
	<li>לעקר כל מכשירי ניתוח והכן החומרים כירורגי סטרילי חד-פעמיים. לנקות את אזור הניתוח והחרוט האף הרדמה עם אתנול 70%-</li>
	<li>להגדיר מיקרוסקופ לנתיחה, מאדה הרדמה איזופלוריין, כלי נגינה, מבוקרי טמפרטורה בעלי חיים כירורגי שולחן קטן לתחזוקה טמפרטורת הגוף. לארגן כלי נגינה, תפרים, מזרקים במיקום עבור גישה חופשית במהלך הניתוח.</li>
	<li>להגדיר את מקור אור כדי לספק מספיק אור עבור האזור כירורגי.</li>
	<li>הכנת מלח סטרילית 0.9% במזרק מ לניקוי המעיים והבטן.</li>
</ol> 2. Ileectomy והשקה <ol><li>Anesthetize עכברים עם איזופלוריין (2-3%) בחדר דגירה בעלי חיים קטנים. לקבוע ההרדמה נאותה בטכניקה הבוהן קמצוץ בעוד החיה נמצאת באיזופלוריין.</li>
	<li>להסיר שיער בטן על-ידי החלת מוצרים להסרת שיער, לנגב את השיער משם באמצעות ניתוח ספוגים תוך שמירה על הרדמה. הצב את העכבר על טמפרטורה מבוקרת בעלי חיים כירורגי שולחן קטן ( איור 1 א') כדי לשמור על טמפרטורת הגוף ב- 37 מעלות צלזיוס. שמור על הרדמה עם איזופלוריין (1-2%) דרך facemask. לטיפול בעיניים עכבר עם משחה עינית.</li>
	<li>לנקות את העור באמצעות povidone יוד ו- 70% אלכוהול ולכסות את האזור הכירורגי של הבטן עם גזה סטרילית כירורגי ( איור 1 B).</li>
	<li>עושים חתך בבטן קו האמצע באמצעות אזמל כירורגי לאחר הרדמה בתוקף. להשתמש המוליך שקצהו כותנה כדי להגן על המעי ולמשוך העכבר שריר הבטן עם רטרקטורים מלא לפתוח ולחשוף את חלל הבטן ( איור 1 ג).</li>
	<li>אתר המעי. החל מהמעי, הזז בזהירות את מעי מחוברים וחלק מעי צם מתוך חלל הבטן ( איור 1 D). 
	הערה: המעי האטום ניתן לזהות בקלות בגלל הגודל שלה גדול גם לאחר צום.</li>
	<li>מאתרים ומפסיקים את הענף העליון של עורק מצע המעי העליון סופריור 7-0 בתפר משי כדי occlude ויישם על קטע ileal כדי להוציא את הדם. צבע ileal משתנה מורוד כהה לאחר מצדו. (E - F איור 1).</li>
	<li>בהתאם מטרת הניסוי, באמצעות מספריים, בלו ולהסיר את 50% או 90% של מעי. 
	הערה: עבור ניתוח דמה, אל תבצע את מצדו סופריור עורק מצע המעי העליון ואל תסיר מעי.</li>
	<li>סומק לומן שני הקצוות ileal עם סליין 0.9%. 
	הערה: כמו מעי ללא פגע הנותרים עדיין מקבל הספקת דם נורמלי של עורק מצע המעי העליון מעולה, כמות קטנה של דם יבוצע ריקון בתהליך. זה גם מציין כי אספקת הדם הקצוות ileal נורמלי ומבטיחה אין איסכמיה במהלך ההליך השקה ( איור 1 G)-</li>
	<li>לאתר את mesenteries בצד שני הקצוות ileal. יישר את mesenteries, תפר את הקצוות ileal יחד באמצעות 8-0 בתפר ( איור 1 G - H).</li>
	<li>תפר הצד contralateral של מעי לשמור מעי anastomosed באופן טבעי ( איור 1 אני).</li>
	<li>תפר הצד העליון והתחתון בין התפרים המקורי שני ביסודיות צירוף השני ileal הקצוות יחד ( איור 1 J).</li>
	<li>מאשרים כי קיים אין נזילה מתוך אתר השקה לאחר סיום ההליך הפתולוגיים שלושה שלבים ( איור 1 G-אני). להחזיר את המעי האטום של המעי הדק לתוך חלל הבטן למיקום האנטומי המקורי. לשטוף את אזור הניתוח עם מלחית 0.9% באמצעות מחט בוטה. ( איור 1 K).</li>
	<li>לסגור את החתך של השכבה שריר הבטן 6-0 בתפר. יישר את החתך בעור בטן באמצעות מלקחיים, תפר בעור בטן כדי להקל על ריפוי הפצע אופטימלית ( איור 1 L).</li>
</ol> 3. טיפול לאחר הניתוח <ol><li>העברת הניתוח שלאחר עכברים נמרץ להתאוששות. בית אותם בתוך כלוב נייר-מצעים על כרית החימום טמפרטורה מבוקרת כדי להמשיך את ההתאוששות לאחר הניתוח בן לילה. מספקים עכברים עם מזון רך בנוסף מקבלים מזון ומים.</li>
	<li>לנהל הבופרנורפין (0.05 - 0.1 מ"ג/ק"ג) עם הזרקה תת-עוריים כל ה 8-12 עבור כאבים. 
	הערה: המתת חסד עכברים ב- CO 2 אם חולה קשות.</li>
	<li>-מובילים, להקריב עכברים באמצעות מנת יתר איזופלוריין ו הקציר דגימות לפי הצורך (סעיף 4).</li>
</ol> 4. הערכה של Ileectomy-induced מרה Overaccumulation <ol><li>שוקל ומנתחים את העכברים יום אחד לאחר כריתה של 0% (דמה), 50% או 90% של מעי.</li>
	<li>להסיר GI בדרכי, שוקל אותה. לחשב את המשקל GI ליחס משקל הגוף כדי להעריך את חומרת תת ספיגה של מלח מרה, overaccumulation.</li>
	<li>להעביר את ספינלי GI לתוך צינורות חרוט 15 מ"ל וחותכים אותם למקטעים קצרים באמצעות מספריים. לאחר חיתוך, צנטריפוגה ב 3000 g x עבור 10 דקות להעביר את תגובת שיקוע (GI נוזל המכיל מלחי מרה) צינור נקי.</li>
	<li>למדוד את הנפח הכולל ומשקל של נוזל GI ולחשב את משקל נוזל GI בדרכי יחס המשקל להעריך עוד יותר overaccumulation מרה ב- GI בדרכי.</li>
	<li>לקבוע את הסכום הכולל מרה ב תגובת שיקוע על ידי חומצות מרה assay כפי שמתואר הפניה 8.</li>
</ol>

<ol>
	<li>McLeod, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+for+inflammatory+bowel+diseases.">Surgery for inflammatory bowel diseases.</a> Dig Dis. 21, 168-179 (2003).</li><li>Hancock, L., Windsor, A. C., Mortensen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+bowel+disease:+the+view+of+the+surgeon.">Inflammatory bowel disease: the view of the surgeon.</a> Colorectal Dis. 8, 10-14 (2006).</li><li>Polle, S. W., Bemelman, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+insight:+minimally+invasive+surgery+for+IBD.">Surgery insight: minimally invasive surgery for IBD.</a> Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol. 4, 324-335 (2007).</li><li>Fon Tacer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+resource:+Comprehensive+expression+atlas+of+the+fibroblast+growth+factor+system+in+adult+mouse.">Research resource: Comprehensive expression atlas of the fibroblast growth factor system in adult mouse.</a> Mol Endocrinol. 24, 2050-2064 (2010).</li><li>Pournaras, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+bile+after+Roux-en-Y+gastric+bypass+in+promoting+weight+loss+and+improving+glycaemic+control.">The role of bile after Roux-en-Y gastric bypass in promoting weight loss and improving glycaemic control.</a> Endocrinology. 153, 3613-3619 (2012).</li><li>Spreckley, E., Murphy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+L-Cell+in+Nutritional+Sensing+and+the+Regulation+of+Appetite.">The L-Cell in Nutritional Sensing and the Regulation of Appetite.</a> Front Nutr. 2, 23 (2015).</li><li>Inagaki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor+15+functions+as+an+enterohepatic+signal+to+regulate+bile+acid+homeostasis.">Fibroblast growth factor 15 functions as an enterohepatic signal to regulate bile acid homeostasis.</a> Cell Metab. 2, 217-225 (2005).</li><li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+control+of+bile+acid+synthesis+by+a+KLF15-Fgf15+axis.">Circadian control of bile acid synthesis by a KLF15-Fgf15 axis.</a> Nat Commun. 6, 7231 (2015).</li><li>Christl, S. U., Scheppach, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+consequences+of+total+colectomy.">Metabolic consequences of total colectomy.</a> Scand J Gastroenterol Suppl. 222, 20-24 (1997).</li><li>Helmrath, M. A., VanderKolk, W. E., Can, G., Erwin, C. R., Warner, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+adaptation+following+massive+small+bowel+resection+in+the+mouse.">Intestinal adaptation following massive small bowel resection in the mouse.</a> J Am Coll Surg. 183, 441-449 (1996).</li><li>Tappenden, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+short+bowel+syndrome:+considerations+of+resected+and+residual+anatomy.">Pathophysiology of short bowel syndrome: considerations of resected and residual anatomy.</a> J Parenter Enteral Nutr. 38, 14-22 (2014).</li><li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+Acid+diarrhea:+prevalence,+pathogenesis,+and+therapy.">Bile Acid diarrhea: prevalence, pathogenesis, and therapy.</a> Gut Liver. 9, 332-339 (2015).</li><li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+understanding+of+bile+acid+diarrhea.">Advances in understanding of bile acid diarrhea.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 8, 49-61 (2014).</li><li>Mottacki, N., Simren, M., Bajor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+article:+bile+acid+diarrhoea+-+pathogenesis,+diagnosis+and+management.">Review article: bile acid diarrhoea - pathogenesis, diagnosis and management.</a> Aliment Pharmacol Ther. 43, 884-898 (2016).</li><li>Rao, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+organic+solute+transporter+alpha-beta,+Ostalpha-Ostbeta,+is+essential+for+intestinal+bile+acid+transport+and+homeostasis.">The organic solute transporter alpha-beta, Ostalpha-Ostbeta, is essential for intestinal bile acid transport and homeostasis.</a> Proc Natl Acad Sci. 105, 3891-3896 (2008).</li><li>Hofmann, A. F., Poley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholestyramine+treatment+of+diarrhea+associated+with+ileal+resection.">Cholestyramine treatment of diarrhea associated with ileal resection.</a> N Engl J Med. 281, 397-402 (1969).</li><li>Kir, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF19+as+a+postprandial,+insulin-independent+activator+of+hepatic+protein+and+glycogen+synthesis.">FGF19 as a postprandial, insulin-independent activator of hepatic protein and glycogen synthesis.</a> Science. 331, 1621-1624 (2011).</li><li>Kuipers, F., Bloks, V. W., Groen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+intestinal+soap--bile+acids+in+metabolic+control.">Beyond intestinal soap--bile acids in metabolic control.</a> Nat Rev Endocrinol. 10, 488-498 (2014).</li><li>Buchman, A. L., Scolapio, J., Fryer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AGA+technical+review+on+short+bowel+syndrome+and+intestinal+transplantation.">AGA technical review on short bowel syndrome and intestinal transplantation.</a> Gastroenterology. 124, 1111-1134 (2003).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

על מנת לבצע ileectomy מוצלח, עורק מצע המעי העליון מעולה חייב להיות מאתרים מראש כדי לחסום את אספקת הדם קטע resecting. קטע ileal איסכמי יהפוך סגול כהה לאחר מצדו. בטח קטע ileal תור הודעות ' ואז resected לחלוטין. הספקת דם נורמלי והקפדה על יתרת הקצוות. זה חיוני כדי למנוע דימום והסרת פסולים, אשר יכול בקלות לגרום כשל כ...

במחקר ביו-רפואי מודרני, חייתיים גנטי מנוצלים נרחב כדי ללקט תובנות מחלות אנושיות. בפרט, רקמות או פונקציות ייחודיות תא רווח-הפסד של גנים שימשו ללמוד תקנה מולקולרית, כמו גם השפעות ביולוגיות המושרה. למרות החידושים מניפולציה היעד גנים ויוו, קיימות מגבלות מתמשכת. ראשון, הרבה תאים או רקמות ספציפיות מחיקות ישפיעו על איברים מרובים. לדוגמה, מחיקת הגן אפיתל יבטל ביטוי epithelia של רקמות מרובים. עוד יותר, גם אם המחיקה היא מוגבלת לרקמות ספציפיות, השליטה במרחב הוא לעיתים רחוקות ריאלי. לדוגמה, בטישו כמו המעי, מקטעים נפרדים לבצע פונקציות ספציפיות מאוד זה לא יכול להיות מניפולציות עם דיוק ויוו. במצבים אלה, נחשב כריתה של הרקמות המכילות ג'ין בגישה לימוד יעיל יותר כדי לקבוע את המשמעות מכניסטית ופונקציונליים של רקמות תקשורת.
Ileectomy היא בעיקר בשימוש חולי קרוהן ומחלות דלקתיות המערבים את2, 1,מעי דיסטלי3. מעי בדרך כלל מייצר מספר הורמונים אחסון אנרגיה כמו פיברובלסט גורם גידול 15/19 (FGF15/19), פפטיד YY (PYY) ופפטיד דמוי גלוקגון 1/2 (GLP1/2); הורמונים אלה תפקיד חשוב האנדוקרינית ומקומיים רבים תפקודים ביולוגיים4,5,6. בין אלה ההורמונים, זוהה FGF15 מעכב האנדוקרינית חזקים של סינתזה של חומצות מרה בכבד. ברגע נספג מחדש לתוך ileal enterocytes חומצות מרה להפעיל את הקולטן farnesoid X קולטן הגרעין (FXR) כדי לעורר את הביטוי Fgf15 , אשר מוביל לאחר מכן משוב עיכוב של סינתזה של חומצות מרה בכבד 7. במחקר שנערך לאחרונה, הצגנו את המודל ileectomy העכבר ללימוד הגורם kruppel דמוי ileal 15 (KLF15) -Fgf15 איתות ציר המסדירה ייצור חומצות מרה היממה הכבד 8. והכי חשוב, הצגנו משפחה הרומן, הגורמים כמו kruppel, במיוחד KLF15, חומצות מרה לביולוגיה. על סמך מחקרים תפקודית כולל ניתוח ileectomy, קבענו את סינתזה חומצות מרה upregulates KLF15 באמצעות מנגנון שאינו ולשננו עקיף. לבסוף, ileal KLF15 גם מזוהה המתקן הראשון שלילי אנדוגני של Fgf15.
הקטעים המעי היורד proximal לאזורים דיסטלי אחראים ספיגת חומרים מזינים שונים. מעי היא קטע מרכזי אחראי חומצות מרה וויטמין B12 (VB12) הקליטה 9. מחקר קודם המועסקים דגם העכבר של הבטן proximal כריתה ללמוד תסמונת המעי הקצר; שונים באורכים כריתה, דיאטות וסוגי תפירה הוצעו כדי לשמור על קצב של האופטימלית הישרדות לאחר הניתוח 10. יתר על כן, סקירה עדכנית יותר מציין שכי כריתה ileal בדרך כלל מתבטא במחלות חמורות יותר מאשר שאר כריתות קטע במערכת העיכול (GI) בגלל יכולת אדפטיבית ירד מ בדרכי הנותרים 11. נושא זה צבר אינטנסיבית האינטרסים של קבוצות מחקר בסיסי וקליני, ואילו ההבנה של שחזור וגישות טיפוליות יעיל הן עדיין מוגבל.
שלשול חומצות מרה היא תוצאה של חוסר איזון של חומצות מרה הומאוסטזיס enterohepatic 12,של מחזור13. זה יכול להיות תוצאה של כריתה ileal, מחלות במערכת העיכול או תוצאה של תת ספיגה של חומצות מרה אידיופטית. יותר מ- 80% מהחולים נמצאו להציג עם שלשול לאחר שעברו כריתה ileal 14. Ileectomy יש את הפוטנציאל להיות מודל ניתוח חשוב עבור החקירה של חומצות מרה שלשול. במחקר זה, סדרה של כריתות ileal לספק הערכה הדרגתי של מחסור FGF15, כמו גם תת ספיגה של מלח מרה מעיים, overaccumulation נזקים רעילים.

<table><tbody><tr><td>Dissection microscope</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Animal temperature controller</td><td>Physitemp Instruments, Inc.</td><td>TCAT-2LV</td><td>For body temperature control</td></tr><tr><td>Isoflurane anesthetic vaporizer</td><td>VetEquip</td><td>&amp;nbsp;911104</td><td>For anesthesia</td></tr><tr><td>Dissection forceps</td><td>&amp;nbsp;Fine Science Tools, Inc.</td><td>11274-20</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Scissors</td><td>&amp;nbsp;Fine Science Tools, Inc.</td><td>14084-08</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>&amp;nbsp;Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-7882</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Micro knives-needle blade</td><td>Fisher Scientific</td><td>10318-14</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>6-0 monofilament suture</td><td>Ethicon</td><td>1698G</td><td>For abdominal skin closure</td></tr><tr><td>7-0 silk suture</td><td>Ethicon</td><td>766G</td><td>For ligation</td></tr><tr><td>8-0 monofilament suture</td><td>Ethicon</td><td>1714G</td><td>For anastomosis</td></tr><tr><td>Surgical sponges</td><td>Dynarex Corp.</td><td>3333</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Small cotton-tipped applicators&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-118</td><td>For surgery&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare Limited</td><td>66794-013-25</td><td>For anasthesia</td></tr><tr><td>Buprenorphine hydrochloride</td><td>Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals</td><td>12496-0757-1</td><td>For analgesia</td></tr><tr><td>0.9% sodium chloride Injection</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>0264-7800-10</td><td>For washing/injection</td></tr><tr><td>Povidone iodine prep solution</td><td>Dynarex Corp.</td><td>1413</td><td>For skin preparation</td></tr><tr><td>Puralube vet ointment</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>17033-211-38</td><td>For eye pretection</td></tr><tr><td>Hair remover lotion</td><td>Church &amp;amp; Dwight Co., Inc.</td><td></td><td>For skin preparation</td></tr><tr><td>Intensive care unit</td><td>ThermoCare</td><td>FW-1</td><td>For post-surgery recovery</td></tr><tr><td>DietGel recovery</td><td>ClearH2O</td><td>72-06-5022</td><td>For post-surgery recovery</td></tr><tr><td>Aurum total RNA fatty and fibrous tissue kit</td><td>Bio-Rad</td><td>7326830</td><td>For RNA isolation</td></tr><tr><td>iScript reverse transcription supermix for RT-qPCR</td><td>Bio-Rad</td><td>1708841</td><td>For reverse transcription assay</td></tr><tr><td>TaqMan fast advanced master mix</td><td>Applied Biosystems/Life Technologies</td><td>4444965</td><td>For QPCR analysis</td></tr><tr><td>Total bile acid assay kit</td><td>Genzyme Diagnostic</td><td>DZ042A-K01</td><td>For bile acid assay</td></tr><tr><td>C57BL/6J&amp;nbsp;</td><td>The Jackson Laboratory</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ileectomy-induced bile overaccumulation in mouse intestine

כריתה מעי היא גישה טיפולית משותפת עבור מחלות אנושיות כגון השמנת יתר, מחלות מעי דלקתיות, קרוהן, סרטן המעי הגס, כי לעתים קרובות התוצאות תופעות לוואי של כמו תסמונת המעי הקצר חמורות כולל חומצות מרה שלשולים, התייבשות הפרעות אלקטרוליט, תת ספיגה של מזון. כאן אנו מציגים מודל כריתה ileal מאתר, הנקרא ileectomy, כדי להעריך את רקמת תקשורת ותחזוקה של הומאוסטזיס מערכתית. לאחר כריתה ileal, כלי-דם נטול לצמיתות מעי ספציפיות הורמון האנדוקרינית פיברובלסט גורם גידול 15 (FGF15), אשר משחרר את עיכוב endocrinal של סינתזה של חומצות מרה בכבד. בשילוב עם ייצור מוגבר, ביטל התחדשות של חומצות מרה לאחר הסרת מעי, עכברים נותח סובלים מלח מרה overaccumulation של המעי, משויכת שלשול, התחלואה והתמותה. השימוש הרומן של המודל לניתוח הציגה מחקר זה עשוי לספק תובנות מכניסטית ופונקציונליים ileal שליטה מערכתית רגולציה חילוף החומרים בפיזיולוגיה ומחלות.

נהלי ileectomy מוצגים באיור1. השלב הראשון כולל הכנת בעור בטן העכבר, ביצוע חתך בבטן ושימוש רטרקטורים לחשוף באופן מלא את המעי (איור 1A-C). בשלב הבא, המעי העכבר היה ממוקם (איור 1D); נתון כי הגודל והצורה שלה לעשות את זה ?...

Watch this Scientific Journal Video about Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine at JoVE.com

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

חומצות מרה תלויי-המעי הדק התחדשות וניגוד משוב של סינתזה של חומצות מרה הכבד חשוב הומאוסטזיס מערכתית ובריאות. במחקר זה, נתאר מודל העכבר עבור כריתה ileal להעריך malabsorption מרה הנוצרות על-ידי ileectomy, overaccumulation, ורעילות במעי העכבר.

Ileectomy-induced מרה Overaccumulation במעי העכבר

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

ileectomy-induced-bile-overaccumulation-in-mouse-intestine

Research

JoVE Journal

Medicine

9.4K Views.  Case Western Reserve University. חומצות מרה תלויי-המעי הדק התחדשות וניגוד משוב של סינתזה של חומצות מרה הכבד חשוב הומאוסטזיס מערכתית ובריאות. במחקר זה, נתאר מודל העכבר עבור כריתה ileal להעריך malabsorption מרה הנוצרות על-ידי ileectomy, overaccumulation, ורעילות במעי העכבר.

Video: Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

Determining Bile Duct Density in the Mouse Liver

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques are used, including serum chemistry, histological analysis, and immunostaining for specific markers. Although these techniques can provide important information about the biliary system, they often do not present a full picture of bile duct (BD) developmental defects across the whole liver. This is in part due to the robust ability of the mouse liver to drain the bile even in animals with significant impairment in biliary development. Here we present a simple method to calculate the average number of BDs associated with each portal vein (PV) in sections covering all lobes of mutant/transgenic mice. In this method, livers are mounted and sectioned in a stereotypic manner to facilitate comparison among various genotypes and experimental conditions. BDs are identified via light microscopy of cytokeratin-stained cholangiocytes, and then counted and divided by the total number of PVs present in liver section. As an example, we show how this method can clearly distinguish between wild-type mice and a mouse model of Alagille syndrome. The method presented here cannot substitute for techniques that visualize the three-dimensional structure of the biliary tree. However, it offers an easy and direct way to quantitatively assess BD development and the degree of ductular reaction formation in mice.

We present a rather simple and sensitive method for accurate quantification of bile duct density in the mouse liver. This method can aid in determining the effects of genetic and environmental modifiers and the effectiveness of potential therapies in mouse models of biliary diseases.

קביעת צפיפות צינור המרה בכבד העכבר

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques ...

Developmental Biology

Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer being two common examples. Despite the frequency of these procedures, a significant knowledge gap remains in describing the inherent effects of intestinal resection on host physiology and disease pathophysiology. This article provides detailed instructions for an ileocolic resection with primary end-to-end anastomosis in mice, as well as essential aspects of peri-operative care to maximize post-operative success. When followed closely, this procedure yields a 95% long-term survival rate, no failure to thrive, and minimizes post-operative complications of bowel obstruction and anastomotic leak. The technical challenges of performing the procedure in mice are a barrier to its wide spread use in research. The skills described in this article can be acquired without previous surgical experience. Once mastered, the murine ileocolic resection procedure will provide a reproducible tool for studying the effects of intestinal resection in models of human disease.

Ileocolic resection is commonly performed in several human diseases; however, little is known regarding the impact of intestinal resection on surgical illnesses. This article provides instruction on executing the procedure in mice with high success, providing a means to study the effects of ileocolic resection in models of disease.

עכברי Ileocolic מעי כריתה עם השקה ראשונית

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

מרה Duct קשירת בעכברים: אינדוקציה של דלקת כבד פגיעה ופיברוזיס ידי חסימתית cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

מאתר למעי הגס הדיסטלי, מודל הרומן של הסחה קוליטיס בעכברים C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

מורנה הנדנדקטומיה מודל של קוליטיס כרונית הקשורים סרטן המעי הגס על ידי לוקליזציה מדויקת של תיקון Caecal

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

<meta charset="utf8"></head><body>מודל מורין לחקר אילאוס לאחר הניתוח באמצעות מניפולציה במעיים

Postoperative Ileus Murine Model

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI is a consequence of mechanical damage during surgery, resulting in disruption of motility in the gastrointestinal tract. The mechanisms of POI are related to aberrant neuronal sensitivity, impaired epithelial barrier function, and increased local inflammation. However, the details remain enigmatic. Therefore, experimental murine models are crucial for elucidating the pathophysiology and mechanism of POI injury and for the development of novel therapies.
Here, we introduce a murine model of POI generated via intestinal manipulation (IM) that is similar to clinical surgery; this is achieved by mechanical damage to the small intestine by massaging the abdomen 1-3 times with a cotton swab. IM delayed gastrointestinal transit 24 h after surgery, as assessed by FITC-dextran gavage and fluorescence detection of the segmental digestive tract. Moreover, tissue swelling of the submucosa and immune cell infiltration were investigated by hematoxylin and eosin staining and flow cytometry. Proper pressure of the IM and a hyperemic effect on the intestine are critical for the procedure. This murine model of POI can be utilized to study the mechanisms of intestinal damage and recovery after abdominal surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

We describe a murine model of postoperative ileus generated via intestinal manipulation. Gastrointestinal transit function, pathologic changes, and immune cell activation were assessed 24 h after surgery.

מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

Immunology and Infection

Single-Anastomosis Duodeno-Ileal Bypass with Sleeve Gastrectomy Model in Mice

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes mellitus, dyslipidemia, non-alcoholic steatohepatitis, cardiovascular events, and cancers) through restrictive and malabsorptive mechanisms. Understanding the mechanisms by which these procedures allow such improvements often require their transposition into animals, especially in mice, because of the ease of generating genetically modified animals. Recently, the single-anastomosis duodeno-ileal bypass with sleeve gastrectomy (SADI-S) has emerged as a procedure that uses both restrictive and malabsorptive effects, which is being used as an alternative to gastric bypass in case of major obesity. Thus far, this procedure has been associated with strong metabolic improvements, which has led to a marked increase in its use in daily clinical practice. However, the mechanisms underlying these metabolic effects have been poorly studied as a result of a lack of animal models. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice, with a special focus on perioperative management. The description and use of this new rodent model will be helpful for the scientific community to better understand the molecular, metabolic, and structural changes induced by the SADI-S and to better define the surgical indications for clinical practice.

Single-anastomosis duodeno-ileal bypass (SADI-S) is an emerging bariatric procedure with important metabolic effects. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice.

מעקף Duodeno-Ileal יחיד Anastomosis עם שרוול Gastrectomy דגם בעכברים

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes ...

Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile duct proliferation. However, long-term experiments can lead to increased morbidity and mortality. In select mouse strains with underlying liver disease, meaningful comparisons can be made even with ligation of a single lobe of the liver, which can reduce animal losses and expenses. Here, we describe partial bile duct ligation (pBDL) in the mouse, in which only the left hepatic bile duct is ligated, causing biliary obstruction in the left lobe but not the remaining lobes. With careful microsurgical technique, pBDL experiments can be cost-effective, since the unligated lobe serves as an internal control to the ligated lobes, when subjected to the same conditions in the same animal. Unlike cBDL, a separate sham-operated control group is not necessary. pBDL is highly useful to directly compare localized versus systemic effects of cholestasis and other retained bile components. pBDL can also be repurposed as a novel method to investigate mechanisms related to medications and cell migration.

Here, we present partial bile duct ligation as a surgical model of liver injury and regeneration in rodents.

צינור המרה חלקית מצדו העכבר: מודל מבוקרת של מקומי חסימתית לחסימת מרה תוך כבדית

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...

Ileectomy-induced מרה Overaccumulation במעי העכבר

Summary

Explore More Videos

קביעת צפיפות צינור המרה בכבד העכבר

עכברי Ileocolic מעי כריתה עם השקה ראשונית

מרה Duct קשירת בעכברים: אינדוקציה של דלקת כבד פגיעה ופיברוזיס ידי חסימתית cholestasis

מאתר למעי הגס הדיסטלי, מודל הרומן של הסחה קוליטיס בעכברים C57BL/6

מורנה הנדנדקטומיה מודל של קוליטיס כרונית הקשורים סרטן המעי הגס על ידי לוקליזציה מדויקת של תיקון Caecal

מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

מודל Ileus Murine לאחר הניתוח

מעקף Duodeno-Ileal יחיד Anastomosis עם שרוול Gastrectomy דגם בעכברים

צינור המרה חלקית מצדו העכבר: מודל מבוקרת של מקומי חסימתית לחסימת מרה תוך כבדית