Name: bile duct ligation in mice: induction of inflammatory liver injury and fibrosis by obstructive cholestasis
Uploaded: 2015-02-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 56 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis at JoVE.com

המחברים רוצים להכיר את התמיכה הכספית של קרן המחקר הגרמנית (SFB / TRR57, Q3 וQ2). המחברים מודים מרייק שולץ, פסקל Paschenda, וקלאודיה Warzecha על עזרתם בהכנת התמונות.

הערה: כל הניסויים אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים מדינה ושימוש הרשמית (LANUV, רקלינגהאוזן, גרמניה). העכברים הם שוכנו בתנאים מסוימים-הפתוגן ללא בהתאם להנחיות של הפדרציה למעבדת עמותות מדע בעלי חיים (FELASA). כל הניסויים נערכו בהתאם לחוק הפדרלי הגרמני הנוגע להגנה על בעלי החיים ו&#39;המדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה &#39;(המכון הלאומי לפרסום 8 Edition ה הבריאות, 2011). 1. הכנת Presurgical הערה: בצע את כל הנהלים בתנאים נקיים, אבל לא סטרילי. כל המכשירים והציוד לשימוש חוזר אחר כגון מלקחיים כירורגיים, מספריים, ומפשק Colibri שמשמשים לביצוע ניתוח חייבים להיות מעוקרים לפני שימוש על פי פרוטוקולים שנמצאים בהקפדה על ההנחיות מוסדיות לביצוע ניתוחים בבעלי חיים.; לקבלת רשימה מפורטת של חומרים כימיים, חומרים וציוד דרושים, עיינו ברשימה של חומרים / ציוד ספציפי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הניסויים מלאים, לשמור על בעלי החיים על צלחת התחממות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, באופן קבוע המחוברת למערכת הרדמה, וכיסוי השטח התפעולי הכולל עם, וילונות מודבקים עצמם נוזל-חדיר. כראוי לארגן את כל כלי מדידה ופתרונות המשמשים בניסויים לפני הניתוח (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם שאיפה של isoflurane% 4 כרך ב 100% חמצן בקצב זרימה של 4 L / min לאינדוקציה של ההרדמה. עומק הרדמה הוא מספיק בעת הקריטריונים החיוניים הבאים הגיעו: נשימה רגילה ספונטנית, לא רפלקס לאחר ההגדרה של גירויי כאב בין אצבעות רגליים, ולא כתגובה לכאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הפרווה הבטן של העכבר עם מכונת גילוח חשמלי פרווה ולהגן על העיניים מהתייבשות על ידי שימוש בעין וnהמשחה OSE. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר על צלחת חמה מחוממת 37 מעלות צלזיוס, להכניס את חוטם העכבר במסכת Fluovac של מערכת ההרדמה Fluovac, ולתקן את הרגליים של בעלי החיים עם פסים של סרט משי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על ההרדמה של העכבר על ידי שאיפה של isoflurane% 1.5-3 כרך ב 100% חמצן בקצב זרימה של L / min 1 ולגייס את שיכוך כאבים סביב ניתוח באמצעות זריקת intraperitoneal של פתרון עצירות (0.1 מ&quot;ג / קילוגרם BW מומס בשיעור של 0.9% פתרון NaCl) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את עור הבטן המגולח עם ספוגית גזה שטבולה בתקן חיטוי, מוכן לשימוש פתרון אלכוהוליים לטיפול טרום ניתוחי של העור. הערה: בפרוטוקולים שלנו אנו משתמשים antisepticum עור פולי-אלכוהול. זאת בהתאם מלא עם החוק הפדרלי הגרמני הנוגע להגנה על בעלי חיים וההנחיות של הפדרציה למעבדת עמותות מדע בעלי חיים. חיטוי זה מכיל 70% (v / v) 2-propanol, butan-1,3.diol ועקבות של quinoline צהובות, וperfumדואר. </li></ol> 2. ניתוחים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את הבטן עם laparotomy קו האמצע של אורך של כ 2 סנטימטר על ידי חיתוך cutis תוספת fascia באותו הזמן עם מספריים כירורגיות 11.5 סנטימטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את רקמת החיבור בחלקו העליון של הצפק באמצעות המספריים כמפזר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את הצפק לאורך linea alba כדי לפתוח את חלל הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדלת החלל על ידי החדרת תפר החזקה בחזה, העלאת נימה של התפר, ולתקן אותו על גבי מסכת Fluovac. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורחים את אזור הפעולה על ידי החדרת מפשק Colibri בחלל הצפק (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את הכבד עם (0.9% פתרון NaCl) מקלון צמר גפן לחות כך שצד הגחון שלו נדבק לסרעפת וhilum נראה בבירור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את צינור המרה על ידי תנועת הזנב של הבטן (איור 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפריד בזהירות את צינור מרה מאיגוף וריד שער ועורק כבד באמצעות מלקחיים מיקרו-serrations (איור 4 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את 5-0 התפר סביב צינור המרה ולאבטח אותו עם שני קשרים כירורגית. כאשר קשירת הקשרים להגדיל את כוח המשיכה ברציפות כדי להבטיח חסימה אפקטיבית מבלי לנתק את צינור המרה (איור 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף קשירת גולגולת שנייה באותו אופן, אבל לא לנתח את צינור המרה בין (איור 4C). אחרת קיים סיכון ניכר שהדלפות מרה אם קשר אחד אינו מאובטח, ובעלי החיים שלא לחוות כל cholestasis אבל לפתח דלקת הצפק חמורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את הקצוות של התפרים (איור 4D), להוריד את עצם החזה, והסר את מפשק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את חלל הצפק עם 0.9% פתרון NaCl ולהחליף את אברי בטן לעמדות הפיזיולוגיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שכבות לסגור שתי בטן (צפק וcutis תוספת facia) עם תפרי ריצה נפרדים עם 6-0 Mersilk. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את הדוארnds של התפרים ולחטא את אזור הפעולה עם ספוגית גזה טבולה בתמיסת חיטוי. הערה: בעת ביצוע הניתוח בפעם הראשונה, לבצע את כל ההליכים תחת מיקרוסקופ ניתוחי בהגדלה של 16X-20X. זה מאפשר הכרה טובה יותר של צינור המרה וברור שמבדיל אותו מוריד השער והעורק כבד (איורים 5, 6). מעבדות מסוימות ממליצה לנתיחה בצינור המרה בין שני חיבורי האותיות. השאר את צינור המרה שלמה בגלל דליפות פוטנציאליות באחד הקשרים יגרמו לדלקת הצפק חמורה חריפה, מיימת, וendotoxemia המערכתי כאשר צינור המרה הוא גזור. </li></ol> 3. לאחר ניתוח טיפול ומעקב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר העכבר כדי לשחזר בכלוב התחמם על ידי מנורת אינפרא אדום עד העכבר הוא ער ופעיל באופן מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, להזיז את העכבר לכלוב נורמלי וגישה כרצונך מודעת מים ומזון לספק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">חרה הניתוח, לעקוב אחר בעלי החיים במרווחים זמן קבועים ולבצע טיפול לאחר ניתוח מעקב עם שיכוך כאבים מתאימים (לדוגמא, פתרון עצירות) בעקבות ההמלצה המקומית של הטיפול בבעלי החיים הפנימי ולהשתמש בועדות. הערה: בצע טיפול במשככי כאבים במשך 3 ימים. כל התנהגות חריגה עשויה להצביע על סיבוכים נדירים כגון דלקת הצפק, אלח דם או דימום פנימי וצריכה להיות מטופלים כנקודת קצה אנושי כדי לסיים את הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים נשמרים עם גישה חופשית למזון ומים כרצונך עד סוף הניסוי. אין צורך ברישום דם מאז fibrogenesis המתמשך הוא הצביע על ידי צהבת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר בעלי חיים מוקרבים, דם נאסף למדידת פרמטרים קליניים כימיה (AST, ALT, בילירובין וכו &#39;) והכבד מאוחזר לניתוח histochemical וביוכימיים. </li></ol>

<ol>
	<li>Liedtke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+liver+fibrosis+research:+update+on+animal+models,+legal+issues+and+translational+aspects.">Experimental liver fibrosis research: update on animal models, legal issues and translational aspects.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 6 (1), 19 (2013).</li><li>Aller, M. A., Arias, J. L., Garc&#237;a-Dom&#237;nguez, J., Arias, J. I., Dur&#225;n, M., Arias, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+obstructive+cholestasis:+the+wound-like+inflammatory+liver+response.">Experimental obstructive cholestasis: the wound-like inflammatory liver response.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 1 (1), 6 (2008).</li><li>Tacke, F., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+hepatic+stellate+cells:+pathogenic+role+in+liver+fibrosis+and+novel+isolation+techniques.">Update on hepatic stellate cells: pathogenic role in liver fibrosis and novel isolation techniques.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 6 (1), 67-80 (2012).</li><li>Weiler-Normann, C., Herkel, J., Lohse, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+liver+fibrosis.">Mouse models of liver fibrosis.</a> Z. Gastroenterol. 45 (1), 43-50 (2007).</li><li>Cameron, G. R., Oakley, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligation+of+the+common+bile+duct.">Ligation of the common bile duct.</a> J. Pathol. 35 (5), 769-798 (1932).</li><li>Cameron, G. R., Hasan, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbances+of+structure+and+function+in+the+liver+as+the+result+of+biliary+obstruction.">Disturbances of structure and function in the liver as the result of biliary obstruction.</a> J. Pathol. 75 (2), 333-349 (1958).</li><li>Accatino, L., Contreras, A., Ferna&#324;dez, S., Quintana, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+complete+biliary+obstruction+on+bile+flow+and+bile+acid+excretion:+postcholestatic+choleresis+in+the+rat.">The effect of complete biliary obstruction on bile flow and bile acid excretion: postcholestatic choleresis in the rat.</a> J Lab Clin Med. 93 (5), 706-717 (1979).</li><li>Accatino, L., Contreras, A., Berdichevsky, E., Quintana, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+complete+biliary+obstruction+on+bile+secretion.+Studies+on+the+mechanisms+of+postcholestatic+choleresis+in+the+rat.">The effect of complete biliary obstruction on bile secretion. Studies on the mechanisms of postcholestatic choleresis in the rat.</a> J Lab Clin Med. 97 (4), 525-534 (1981).</li><li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+bile+duct+obstruction:+a+new+experimental+model+for+cirrhosis+in+the+rat.">Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.</a> Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).</li><li>Tuchweber, B., Desmouli&#232;re, A., Bochaton-Piallat, M. L., Rubbia-Brandt, L., Gabbiani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+and+phenotypic+modulation+of+portal+fibroblasts+in+the+early+stages+of+cholestatic+fibrosis+in+the+rat.">Proliferation and phenotypic modulation of portal fibroblasts in the early stages of cholestatic fibrosis in the rat.</a> Lab Invest. 74 (1), 265-278 (1996).</li><li>Desmouli&#232;re, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+deposition,+lysyl+oxidase+expression,+and+myofibroblastic+differentiation+during+the+initial+stages+of+cholestatic+fibrosis+in+the+rat.">Extracellular matrix deposition, lysyl oxidase expression, and myofibroblastic differentiation during the initial stages of cholestatic fibrosis in the rat.</a> Lab Invest. 76 (6), 765-778 (1997).</li><li>Arias, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral+expression+of+a+transforming+growth+factor-&#946;1+antisense+mRNA+is+effective+in+preventing+liver+fibrosis+in+bile-duct+ligated+rats.">Adenoviral expression of a transforming growth factor-&#946;1 antisense mRNA is effective in preventing liver fibrosis in bile-duct ligated rats.</a> BMC Gastroenterol. 3 (29), (2003).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant-negative+soluble+PDGF-&#946;+receptor+inhibits+hepatic+stellate+cell+activation+and+attenuates+liver+fibrosis.">Dominant-negative soluble PDGF-&#946; receptor inhibits hepatic stellate cell activation and attenuates liver fibrosis.</a> Lab. Invest. 84 (6), 766-777 (2004).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., Huss, S., Van de Leur, E., Haas, U., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral+CCN3/NOV+gene+transfer+fails+to+mitigate+liver+fibrosis+in+an+experimental+bile+duct+ligation+model+because+of+hepatocyte+apoptosis.">Adenoviral CCN3/NOV gene transfer fails to mitigate liver fibrosis in an experimental bile duct ligation model because of hepatocyte apoptosis.</a> Liver Int. 32 (9), 1342-1353 (2012).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-fibrotic+effects+of+CCN1/CYR61+in+primary+portal+myofibroblasts+are+mediated+through+induction+of+reactive+oxygen+species+resulting+in+cellular+senescence,+apoptosis+and+attenuated+TGF-&#946;+signaling.">The anti-fibrotic effects of CCN1/CYR61 in primary portal myofibroblasts are mediated through induction of reactive oxygen species resulting in cellular senescence, apoptosis and attenuated TGF-&#946; signaling.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1843 (5), 902-914 (2014).</li><li>Huss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+an+open+source+Delphi-based+software+for+morphometric+quantification+of+liver+fibrosis.">Development and evaluation of an open source Delphi-based software for morphometric quantification of liver fibrosis.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 3 (1), 10 (2010).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., Drews, F., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+lipocalin-2+expression+in+acute+and+chronic+experimental+liver+injury+moderated+by+pro-inflammatory+cytokines+interleukin-1&#946;+through+nuclear+factor-&#954;B+activation.">Induction of lipocalin-2 expression in acute and chronic experimental liver injury moderated by pro-inflammatory cytokines interleukin-1&#946; through nuclear factor-&#954;B activation.</a> Liver Int. 31 (5), 656-665 (2011).</li><li>Karlmark, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fractalkine+receptor+CX3CR1+protects+against+liver+fibrosis+by+controlling+differentiation+and+survival+of+infiltrating+hepatic+monocytes.">The fractalkine receptor CX3CR1 protects against liver fibrosis by controlling differentiation and survival of infiltrating hepatic monocytes.</a> Hepatology. 52 (5), 1769-1782 (2010).</li><li>Tarcin, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collagen+peak+in+bile+duct-ligated+rats.">Time course of collagen peak in bile duct-ligated rats.</a> BMC Gastroenterol. 11, 45 (2011).</li><li>Takase, S., Leo, M. A., Nouchi, T., Lieber, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desmin+distinguishes+cultured+fat-storing+cells+from+myofibroblasts,+smooth+muscle+cells+and+fibroblasts+in+the+rat.">Desmin distinguishes cultured fat-storing cells from myofibroblasts, smooth muscle cells and fibroblasts in the rat.</a> J. Hepatol. 6 (3), 267-276 (1988).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+lipocalin-2+(LCN2)+in+acute+liver+injury+suggest+a+novel+function+in+liver+homeostasis.">Protective effects of lipocalin-2 (LCN2) in acute liver injury suggest a novel function in liver homeostasis.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1832 (5), 660-673 (2013).</li><li>Labbus, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+profiling+in+Lipocalin+2+deficient+mice+under+normal+and+inflammatory+conditions.">Proteomic profiling in Lipocalin 2 deficient mice under normal and inflammatory conditions.</a> J Proteomics. 78, 188-196 (2013).</li><li>Kirkland, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+surgical+model+of+biliary+inflammation+and+obstructive+jaundice+in+mice.">Reversible surgical model of biliary inflammation and obstructive jaundice in mice.</a> J. Surg. Res. 164 (2), 221-227 (2010).</li><li>Heinrich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+bile+duct+ligation+in+mice:+a+novel+model+of+acute+cholestasis.">Partial bile duct ligation in mice: a novel model of acute cholestasis.</a> Surgery. 149 (3), 445-451 (2011).</li><li>Scholten, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+labeling+does+not+detect+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+cholangiocytes+in+liver+fibrosis+in+mice.">Genetic labeling does not detect epithelial-to-mesenchymal transition of cholangiocytes in liver fibrosis in mice.</a> Gastroenterology. 139 (3), 987-998 (2010).</li><li>Aller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+half+century+(1961-2011)+of+applying+microsurgery+to+experimental+liver+research.">A half century (1961-2011) of applying microsurgery to experimental liver research.</a> World J Hepatol. 4 (7), 199-208 (2012).</li><li>Russell, W. M. S., Burch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Principles of Humane Experimental Technique. , (1959).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

פגיעה בכבד cholestatic היא אחד הגורמים העיקריים סיבתי לפיתוח הפיברוזיס ושחמת כבד בחולים עם מחלת כבד כרונית. בהתבסס על העובדה כי מחלות אלה מייצרות עלויות טיפול רפואי שאין לשער, זה מובן שחוקרים רבים מנסים להבין את המנגנונים פתוגניים של סיסטיק הכבד המתמשך. לכן, מודלים ניסיוניים כבר נוצרו המחקים היבטים שונים של המנגנונים המורכבים שיובילו לדלקת בכבד, סיסטיק ושחמת כבד 1. בד&quot;ל כירורגי הוא אחד הדגמים הניסיוניים הנפוצים ביותר המשמש ללגרום לפציעה cholestatic חסימתית בעכברים וחולדות 4,23,24. ברוב הפרוטוקולים, בעלי חיים מורדמים וlaparotomy בטן מבוצע. בהמשך לכך, בצינור המרה הוא חשף מחלל הבטן וligated פעמיים באמצעות חוט כירורגי. כתוצאה מכך, העכברים וחולדות שקיבלו ד הניתוח הזהevelop תגובת fibrotic חזקה שבהתחלה מקורן שדות periportal 25. במהלך השנים כמה טכניקות ניתוחיות שונות ושינויים שתוארו. נהלים מיוחדים אפילו לאפשר חיבור מחדש או reanastomosis לאחר בד&quot;ל 23. טכניקות אחרות מבוססות על בד&quot;ל חלקי וכתוצאה מכך פחות משמעותי היווצרות נמק וכתוצאה מכך התפשטות hepatocyte 24. בד&quot;ל חלקי בשילוב עם ההסרה הבאה של כיס המרה (כריתת כיס המרה) שמונע היווצרות של דלקת כיס מרה גם מייצג מודל ניסיון מצוין לcholestasis החריף. הוצע להיות דוגמנית כי הוא קרוב יותר למצב האנושי 24. ואכן, במהלך ההקמה של מודל זה, הוא כבר הוכיח שהוא reproducibly גורם cholestasis רק עם פגיעה ברקמות היסטולוגית מינימליות ולא ימשיך cholestasis הכרוני 25. לכן, הוצע כי מודל זה הוא אידיאלי ללימוד latהשפעות דואר של cholestasis ההפוך 24. אפילו בשיטות מתוחכמות יותר המבוססות על המייקר ולאפשר דרך מהירה ושחזור לגרום פגיעה בכבד cholestatic רק בחלקים נבחרים של הכבד 26. למרות שינויים אלה מתוחכמים מפרוטוקול בד&quot;ל המקורי הוכחו מועילים מאוד בחקירת שאלות מחקר ספציפיות, מעבדות רבות בעולם בעצם מכוונים להעסקת מודל בד&quot;ל כמודל לשחזור ואמין ביותר להפיברוזיס cholestatic. עם זאת, סיבוכים רבים יכולים להתרחש באופן משמעותי שיכולים לשנות את שחזור ואמינה של התוצאות שהושגו על ידי מודל זה, אם אי-דיוקים טכניים לא נמנעו. לדוגמא, דימום סיבוכים הקשורים לפציעתם של כלי הדם המלווים את צינור המרה (ראה איורים 3-4) עלולים להתרחש במהלך או במהירות לאחר ניתוח. מנת יתר של הרדמה עם cardiodepression או r הבאיםכישלון espiratory גם סיבוכים מיותרים של ההליך. זיהומים חמורים, הנעים בין דלקת הצפק לאלח דם, עלולים להתרחש במהלך תקופת הניסוי כולו, אם התפרים אינם מבוצעים באופן מדויק והדלפות מרה לתוך חלל הצפק. פציעות למעי במהלך הניתוח יכולות גם להוביל לדלקת הצפק. לכן, ברור שהפרוטוקולים סטנדרטיים העומדים בהנחיות טיפול קפדניים מאוד נדרשים. תניה זו גם דרשה לאחרונה במדינות האיחוד האירופי, אשר יישם כללי רווחת בעלי החיים חדשים בשנת 2013 1. הדרישות המתאימות הקשורים לתקנה זו אינן חדשות וכבר הציעו בשנת 1959, כאשר ראסל וורץ הציעו אתי מסגרת לביצוע ניסויים מדעיים עם בעלי חיים שמבוססים בעיקר על החלפה, עידון ועיקרון ההפחתה (3R) 27. כאשר בעקבות outlinפרוטוקול ed יש רק כמה סיבוכים שיכולים לנבוע מאי דיוקים טכניים. שלושה נושאים ספציפיים עלולים להתרחש בתדירות נמוכה למדי. כמו בכל ההליכים כירורגיים, מנת יתר של חומר הרדמה הוא מקור פוטנציאלי של סכנה לבעלי החיים ובמיוחד בשילוב עם היפותרמיה. אם במהלך ניתוח סיבוכי לב וכלי דם להתרחש, האספקה ​​של חומרי הרדמה יש להפסיק מייד והמפעיל צריך לנסות לספק כמה שיותר חמצן אפשרי לעכבר. ניתן לעשות זאת באמצעות מזרק פלסטיק קטן שמתמלא באוויר ונשאב לתוך פיו של בעל החיים לקויים. לחלופין, השימוש בPeleusball קטן לאוורור של בעלי החיים המושפעים הוא לעתים קרובות מועיל לתהליך ההתחדשות. בעיות בריפוי פצע לאחר ניתוח בד&quot;ל, עכברים עלולים לנשוך תפרים שלהם כואבים או אלה של בעלי חיים אחרים. במקרה זה, עכברים המתאימים צריכים להיות בנפרדבכלוב. בעלי חיים עם פצעים פתוחים צריכים להיות מורדמים, האזור סביב הפצע מעוקר בעדינות עם סטנדרטי חיטוי, והפצע צריך להיות תפור שוב. במהלך 3 הימים הבאים, הפצע של בעלי חיים אלה יש לבדוק באופן קבוע (2-3 פעמים ביום). התמתחויות של הבטן או היווצרות של מיימת מעידות לזיהומים חיידקיים. אלה עלולים להופיע עקב עבודה שאינה סטרילי במהלך הניתוח. כל הסוג של זיהומים צריך להיות מטופלים ללא יוצא מן הכלל כנקודת סיום הומני ויש להקריב בעלי החיים המושפעים. אנחנו סיפקנו קל לעקוב אחרי פרוטוקול המאפשר את הביצועים של בד&quot;ל בעכברים, כי הוא פשוט ליישום ומעורר תמותת בעלי חיים רק נמוכה בשילוב עם שחזור גבוה. כל הפרוטוקולים כירורגית ניתן נתפס במהירות על ידי מדענים מיומנים. במהלך הניסויים מלאים, בעלי החיים נשמרים על צלחת התחממות על 37 מעלות צלזיוס ומחוברת באופן קבועלמערכת הרדמה מזעור כאב ומצוקה. לניתוח, הבטן נפתחה עם laparotomy קו האמצע וצינור המרה כפול ligated בלי לנתח אותו. תוצאות הנציג שנדונו כאן מראות כי השינויים פנוטיפי בכל קשור למורפולוגיה כבד (דלקת, פיברוזיס, שחמת הכבד) הם מאוד לשחזור ולאפשר ללמוד היבטים שונים של fibrogenesis (למשל., ייזום, דלקת, התקדמות, בשלב סופי מחלה) בנקודתי זמן מוגדרות. אנו מקווים שהסיכום של הפרוטוקול שלנו יסייע לקצר את העקומה למידה שיש צורך להקים בהצלחה מודל סיסטיק זה במעבדות אחרות ועל מנת להבטיח תוצאות אמינות ושחזור במקומות שונים. וכך אנחנו חושבים שהפרוטוקול שהוצג תומך בעיקרון 3R שהיה אמור על ידי ראסל וורץ בשנת 1959 ומייצג את יסוד כללי הרווחה החדשים של בעלי חיים שמיושמים כיום במדינות רבות wiדקה המסגרת האירופית.

הפיברוזיס מוגדר כייצור מוגזם וההצטברות של תאי מטריקס (ECM) שמקורה ברשת מסועפת של יחסי גומלין של תאי stellate כבד לייצור מטריקס ועוד מגוון רחב של תאי דם בכבד-התושב ותאים שחדרו 1,2. למרות סיסטיק כבד יכול להיגרם על ידי מספר רב של גירויים שונים המנגנונים המולקולריים שבבסיס סיסטיק הם בדרך כלל דומים מאוד. בעקבות נזק כבד, תכנית מתוזמרת מאוד של שינויים מולקולריים ותאיים היא יזמה. בתכנית זו אינטראקציה הדוקה בין אותות, מונוציטים / מקרופאגים דלקתיים ותאי stellate כבד מתרחשת כי בסופו של דבר התוצאות בהפעלת stellate תא וtransdifferentiation לmyofibroblasts, בתצהיר ECM ושינויים אנטומיים ותפקודיים רצופים של שלמות רקמת כבד 3. הפעלת תאי stellate הכבד היא מונעת בעיקר על ידי אותות דלקתיים ואינטראקציות עם כבדמקרופאגים מגורים (כלומר תאי Kupffer). דפוסים מולקולריים הקשורים פתוגן מוכרים על ידי קולטנים זיהוי תבניות מיוחדים כגון קולטנים כמו אגרה שכאשר מופעל אות באמצעות רשת מורכבת של מסלולים שונים המפעילים את הביטוי וההפרשה של מספר רב של ציטוקינים דלקתיים וכמוקינים המניעים את התהליך הדלקתי 3. התגובה הדלקתית והעלבון הכבד נוצר הוא זמנית בלבד, כאשר גורם ייצור המחלה מוסר. לעומת זאת, אם הפגיעה נמשכת, דלקת כרונית מתפתחת בתוך הכבד והביטוי וההצטברות של המוני ECM בחזית וכתוצאה מכך התחלופה הדרגתית של parenchyma כבד הנורמלי על ידי יצירת רקמת צלקת. מאז fibrogenesis כבד בבני האדם היא בעיה קלינית ברחבי העולם, כמה מודלים של מכרסמים ניסיוניים של אי ספיקת כבד אקוטית וכרונית הוקמו בעשורים האחרונים. בmuמערכת rine למשל, דגמים נפוצים הם הממשל של מגוון רחב של hepatotoxins שונה, קשירה של צינור המרה המשותף, אינדוקציה של פגיעה בכבד בתיווך חיסונית, והמבוא הממוקד של פגמים גנטיים או להיפך ביטוי היתר של transgenes המשפיעים קריטי מסלולי איתות מעורבים בפתוגנזה של הפיברוזיס 4. קשירה של צינור המרה המשותף במכרסמים בוצעה כהליך ניסיוני במחקר במשך שנים רבות 5-8. פרוטוקול מאוד לשחזור ראשון לקשירת מרה ממושכת צינור (בד&quot;ל) במכרסמים כבר הציג החברה לפני יותר משלושה עשורים 9. בפרוטוקול זה הן cannulation / חסימה וקשירה מושרה תשואה גבוהה של חמת בחולדות עם שינויים מורפולוגיים שהיו דומים לאלו שנצפו שבחמת מרה אדם 9. הפרוטוקול המתאים הוא פשוט, ההליך הכירורגי הוא יחסית במהירות ישים, ושיעורי ההישרדות של בעלי החיים גבוהים עם מעל 95%. בפרוטוקול cannulation / חסימת עכברוש הקלאסי, חתך קצר של 2 סנטימטר נעשה ממש מתחת לתהליך xiphoid. לאחר מכן, צינורית מוחדרת לתוך החלק הפרוקסימלי של צינור המרה וקבועה בעמדתה עם תפרי משי. בשלב הבא, החלק הדיסטלי של הצינורית חסום עם 3 קשרים, לשים עד לסוף התחתון של חתך קו האמצע ונקבר מתחת לעור ברביע הימני תחתון 9. בסוף, הבטן סגורה ובעלי חיים מותר להתאושש. בפרוטוקול קשירה, חולדות נתונים לקשירה כפולה של צינור המרה המשותף עם או בלי דיסקציה של צינור המרה בין חיבורי האותיות 9. מודל ניסיוני זו מקובל גם ושימוש ברחבי העולם במאות מעבדות לגרום cholestasis הכבד וסיסטיק. זה גורם התפשטות תאי אפיתל intrahepatic מרה, differentiatio myofibroblasticn של fibroblasts פורטל סביב מתרבים תאי האפיתל של דרך מרה, וכתוצאה מכך ביטוי לשחזור מאוד, מאסיבי ותצהיר של ECM 10,11. לכן, היישום של מודל זה בחולדות ועכברים הוא להיות פופולרי בקרב מדענים שמטרתם להבין את הפתוגנזה של דלקת ופיברוזיס בכבד. במעבדה שלנו, יש לנו בשימוש נרחב בפרוטוקול זה בעבר בחולדות בכמה מחקרי ניסויים במטרה לחקור היבטים מולקולריים ותאיים מיוחדים של fibrogenesis הכבד ולבחון מושגי antifibrotic רומן ותרופות 12-15. לאחרונה, אנו מותאמים מתודולוגיה זו למערכת העכברית ומצאנו כי ניתוח קשירת צינור המרה הוא גם מתכוון אטרקטיבי להקמת סיסטיק תלוי זמן עם וריאציה נמוכה ותמותה בעכברים 16-18. בשל גודלו הקטן יותר של בעלי החיים, לעומת זאת, כמה שינויים חשובים בכל קשור להרדמה, interv כירורגיתention ותצפית שלאחר הטיפול הם הכרחיים כדי להשיג תוצאות אמינות ושחזור במודל זה. ההסתגלות המלאה מסוכמת בפרוטוקול הבא ובתיעוד וידאו המצורף.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Forene Abbott</td><td>B 506</td><td></td></tr><tr><td>Shaver Favorita II</td><td>Aeskulap</td><td>GT104</td><td></td></tr><tr><td>Cutter head</td><td>Aeskulap</td><td>GT730</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen eye and nose ointment</td><td>Bayer Vital GmbH</td><td>6029009.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Warming plate and controller</td><td>Labotect</td><td>HP 062</td><td></td></tr><tr><td>Fluovac anesthesia system</td><td>Harvard Apparatus</td><td>34-1030</td><td></td></tr><tr><td>ISOFLO (Isoflurane Vapor) vaporiser</td><td>Eickemeyer</td><td>4802885</td><td></td></tr><tr><td>Scotch Tape</td><td>commercially available</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tissue paper</td><td>commercially available</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Durapore silk tape</td><td>3M</td><td>1538-1</td><td></td></tr><tr><td>Cotton Gauze swabs</td><td>Fuhrmann GmbH</td><td>32014</td><td></td></tr><tr><td>Poly-Alcohol Haut&amp;hellip;farblos Antisepticum</td><td>Antiseptica GmbH</td><td>72PAH200</td><td></td></tr><tr><td>Raucodrape OR adhesive drapes</td><td>Lohmann &amp;amp; Rauscher GmbH</td><td>33013</td><td></td></tr><tr><td>Scissor</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>Graefe forceps straight</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Mersilk suture</td><td>Ethicon</td><td>K889H</td><td>Silk, non-absorbable/Abdominal closure</td></tr><tr><td>Needle holder Mathieu</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>Colibri retractor</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>17000-03</td><td></td></tr><tr><td>Cotton swabs</td><td>Noba Verbandmittel</td><td>974202</td><td></td></tr><tr><td>Cotton swabs</td><td>Heinz Herenz Medizinalbedarf GmbH</td><td>1032238</td><td></td></tr><tr><td>25mL beaker</td><td>Schott Duran</td><td>50-1150</td><td></td></tr><tr><td>Isotonic (0.9%) NaCl solution</td><td>DeltaSelect GmbH</td><td>PZN 00765145</td><td></td></tr><tr><td>Micro-serrations forceps Moria MC31</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>11370-31</td><td>Bile duct separation</td></tr><tr><td>5-0 Mersilene suture</td><td>Ethicon</td><td>EH6731H</td><td>Polyester, non-absorbable/Bile duct ligation</td></tr><tr><td>5mL syringe</td><td>BD Discardit II</td><td>300296</td><td></td></tr><tr><td>1mL syringe</td><td>BD Plastipak</td><td>300013</td><td></td></tr><tr><td>Sterican needle 26 G x 1</td><td>B. Braun</td><td>4657683</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Essex Pharma</td><td>997.00.00</td><td>Analgeticum, 0.1 mg/kg</td></tr><tr><td>Infrared lamp</td><td>Petra Electric</td><td>IR 11</td><td></td></tr></tbody></table>

bile duct ligation in mice: induction of inflammatory liver injury and fibrosis by obstructive cholestasis

ברוב בעלי החוליות, הכבד מייצר מרה כי יש צורך חלב שומנים נספגים ולאפשר העיכול של שומנים במעי הדק וכן להפריש מוצרים מטבולים אחרים בילירובין ו. בכבד, החסימה הניסיונית של מערכת המרה extrahepatic יוזם מפל מורכב של אירועים פתולוגיים שמוביל לcholestasis ודלקת וכתוצאה מכך תגובת fibrotic חזקה שמקורם בשדות periportal. לכן, קשירה כירורגית של צינור המרה המשותפת הפכה את המודל הנפוץ ביותר כדי לגרום לפציעת cholestatic חסימתית במכרסמים וללמוד את האירועים המולקולריים ותאיים שבבסיס מנגנוני pathophysiological אלה הנגרמים על ידי זרימת מרה בלתי הולמת. בשנים האחרונות, טכניקות ניתוחיות שונות תוארו שגם תאפשר חיבור מחדש או reanastomosis לאחר קשירת צינור המרה (בד&quot;ל), למשל, בד&quot;ל חלקי, או בשיטות אחרות למייקרו שאלות מחקר ספציפיות. עם זאת, המודל נפוץ ביותר בשימוש הוא החסימה של צינור המרה המשותף שגורם תגובת fibrotic חזקה לאחר 21 עד 28 ימים המלאה. שיעור התמותה יכול להיות גבוה עקב סיבוכים מדבקים או אי-דיוקים טכניים. כאן אנו מספקים ניתוח מפורט למודל בד&quot;ל בעכברים שמביאים לתגובה fibrotic מאוד לשחזור בהתאם לשלטון 3R לרווחת בעלי החיים הניחה על ידי ראסל וורץ בשנת 1959.

בניסויים טיפוסיים בד&quot;ל בוצע בעכברי C57BL / 6 wild-type 40 גברים שקלול על 18-20 גרם. ניסוי זה נעשה על מנת לחקור fibrogenesis כבד בשלב הייזום (3 ו -7 ימים), במהלך התקדמות (10, 14, ו -20 ימים), ובמהלך ארוך הטווח (30 ו -60 ימים) 16. במודל זה, סיסטיק persinusoidal פיתח כבר ביום 10 אחרי הניתוח, בעוד סיסטיק periportal שאופן קבוע עלה עד סוף הניסוי פותח במלואו לאחר 20 ימים. בניסוי שהוזכר, כל החיות שקיבלו דמה פעולה פשוטה שרדו, ורק שתיים מתוך 40 העכברים (5%) שקיבלו בד&quot;ל פיתחו מצב כללי ירוד ולפיכך הקריבו בטרם עת לפני נקודת הסיום המתוכננת של הניסוי. הפעילות של בעלי חיים דמה המופעל הייתה ללא יוצא מן הכלל כבר יום אחד נורמלי לאחר laparotomy, בעוד שרוב בעלי החיים נתון לבד&quot;ל הראה פעילות מופחתת בשלושת הימים הראשונים. Jעור aundiced היה ברור כבר בכל בעלי החיים בד&quot;ל יום או יומיים לאחר ההגדרה של בד&quot;ל 16. הערכים של שני aminotransferase אלאנין (ALT) וטרנסאמינזות aspartate (AST) שמייצגים סמני סרום מבוססים היטב של פגיעה בכבד במהירות מוגברת והגיעו לשיאו במהלך היום 7 ויום 20 לאחר בד&quot;ל (טבלה 1). לאחר מכן, ALT ו- AST התמתנו עד יום 30 ונשארו יציב עד 60 ימים לאחר הניתוח. בקנה אחד עם פגיעת cholestatic, ריכוזים בסרום של בילירובין הכולל היו גבוהים בעקביות והגיעו לרמה לאחר 7 ימים 16. כמובן זמן דומה של פעילות ALT וסרום AST דווחו גם לחולדות שעברו BDL. במחקר שנערך לאחרונה זה היה הוכחה כי רמות AST בסרום וALT המוגבר עד 5 או פי 10 מרגילים בשבוע הראשון לאחר ניתוח בד&quot;ל וירד לאחר שבועיים 19. בדרך כלל, את הכבדים של בעלי חיים דמה המופעל עדיין נראים סמוטh בסוף הניסוי, ואילו את הכבדים של בעלי חיים שקיבלו בד&quot;ל להראות שינויים אדריכליים שבעיקר מאופיינים בהיווצרות של גושי בצקת וfibrotic על פני השטח של מקביל כבדים וhydrops של כיס המרה כי הוא מלא בכמויות גדולות של מרה (איור 7). השינויים מורפולוגיים האופייניים של הכבד הנגרמים על ידי ניתוח בד&quot;ל גם להדגמה בניתוח סטנדרטי היסטולוגית (איור 8). באותו הסט של ניסויים, פיתוח של פיברוזיס בכבד היה חצי כמותית מוערכת בהתבסס על היסטולוגיה הכבד הוערכה על ידי פתולוג סנוור באמצעות שיטת ניקוד שבסיסטיק periportal היה מבוים 0-4 וסיסטיק perisinusoidal 0-2, נותן מקסימום ערך שהיה שווה ערך לשחמת 6. כצפוי, הציון הממוצע בסיסטיק הקבוצה של בעלי חיים דמה המופעל היה 0.00 ± 0.00. בניגוד לכך, בקבוצה של בעלי חיים לאכובע קיבל בד&quot;ל, הציון עלה בהתמדה עד יום 60 לשווי של 4.83 ± 0.17. מקסימום 3 לסיסטיק periportal הושג ביום 20. בכל בעלי החיים ניתחו, סיסטיק perisinusoidal נעדר במהלך 10 הימים הראשונים של הניסוי והיה ראשית מורגש לאחר שבועיים. לאחר מכן, הוא גדל בהתמדה עד סוף הניסוי לערכים של 1.8 ± 0.17 (טבלה 1). גם במספר ניסויים בבעלי חיים עצמאיים אחרים שבוצעו, זה היה ציין כי ההיווצרות של סיסטיק הייתה עלייה מאוד לשחזור מראה תלוי זמן של ביטוי קולגן intrahepatic ותצהיר כתוצאה מfibrogenesis המתמשך (איור 9). בדומה לכך, התהליך של fibrogenesis המתמשך בולט בביטוי גבוה של אקטין שריר α-חלק (α-SMA) שמייצג את סמן של תאי fibroblastic, מופעל בכבד תאי stellate וmyofibroblasts פורטל כלומר,<html> וhydroxyproline הכבד, חומצת אמינו נמצאה בשפע בקולגן מטריצות 18 (איור 9). בנוסף, הביטוי של vimentin שמציין הגדלת כמויות של myofibroblasts או fibroblasts הוא גדל לאחר ההגדרה של ניתוח בד&quot;ל 20. Concomitance של דלקת בכבד נפגע משתקף עוד יותר על ידי ביטוי מוגבר של Lipocalin 2 (LCN2), כי הוא מאוד מושרה במהלך פגיעה בכבד אקוטית וכרונית ומתפתחים תופעות hepato-מגן במהלך פגיעה בכבד חריפה 21,22. תאים דלקתיים הלחדור את הכבדים של בעלי חיים שקיבלו בד&quot;ל יכולים להיות מזוהים על ידי צביעה ספציפית עם נוגדן שהוא ספציפי לCD45 (איור 10). סמן משטח זה סלולארי שידוע גם בשם PTPRC (phosphatase חלבון טירוזין, סוג קולטן) בא לידי ביטוי במיוחד בכל תאי hematopoietic המובחנים מלבד אריתרוציטים ותאי פלזמה. <table fo:keep-togeth</html style=";text-align:right;direction:rtl">er.within-page = &quot;תמיד&quot; = = cellspacing גבול cellpadding &quot;0&quot;, &quot;0&quot; = &quot;0&quot;&gt; <tbody><tr><td rowspan="2"> זמן מה לאחר קשירת צינור המרה (ימים) </td><td> בילירובין סה&quot;כ </td><td rowspan="2"> AST (U / L) </td><td rowspan="2"> ALT (U / L) </td><td rowspan="2"> סיסטיק הפורטל </td><td rowspan="2"> סיסטיק Perisinusoidal </td><td rowspan="2"> ציון כולל </td></tr><tr><td> (מ&quot;ג / ד&quot;ל) </td></tr><tr><td> 0 (n = 3) </td><td> 0.17 ± 0.06 </td><td> 192.67 ± 30.50 </td><td> 50.33 ± 6.03 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td></tr><tr><td> 3 (n = 5) </td><td> 6.85 ± 2.21 </td><td> 1,159.25 ± 319.27 </td><td> 566.50 335.25 ± </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td></tr><tr><td> 7 (n = 5) </td> &lt;td&gt; 14.38 ± 2.14 ± </td><td> 976.60 477.16 ± </td><td> 448.20 259.47 ± </td><td> 0.60 ± 0.25 </td><td> 0.0 ± 0.0 </td><td> 0.60 ± 0.25 </td></tr><tr><td> 10 (n = 5) </td><td> 15.92 ± 2.60 </td><td> 1,916.60 ± 868.25 </td><td> 560.40 ± 80.88 </td><td> 1.40 ± 0.25 </td><td> 0.25 ± 0.25 </td><td> 1.67 ± 0.25 </td></tr><tr><td> 14 (n = 5) </td><td> 17.90 ± 3.84 </td><td> 1,088.60 ± 276.32 </td><td> 505.00 ± 96.15 ± </td><td> 2.4 ± 0.25 </td><td> 1.0 ± 0.0 </td><td> 3.40 ± 0.24 </td></tr><tr><td> 20 (n = 4) </td><td> 18.00 ± 2.12 </td><td> 1,072.67 ± 364.27 </td><td> 404.00 195.48 ± </td><td> 3.0 ± 0.0 </td><td> 1.0 ± 0.0 </td><td> 4.0 ± 0.0 </td></tr><tr><td> 30 (n = 5) </td><td> 16.04 ± 4.79 </td><td> 446.40 169.75 ± </td><td> 260.20 126.97 ± </td><td> 2.8 ±; 0.2 </td><td> 1.4 ± 0.25 </td><td> 4.20 ± 0.20 </td></tr><tr><td> 60 (n = 6) </td><td> 16.02 ± 1.19 </td><td> 484.67 117.79 ± </td><td> 257.17 ± 50.97 </td><td> 3.0 ± 0.0 </td><td> 1.8 ± 0.17 </td><td> 4.83 ± 0.17 </td></tr></tbody></table> קיצורים הם: ALT, aminotransferase אלאנין; AST, aminotransferase aspartate. טבלת 1: פיברוזיס הבקיע בניסוי נציג נתונים של טבלה זו הועתקו ממחקר שבו הפיברוזיס היה מושרה על ידי קשירת צינור מרה בC57BL / 6 עכברים 16.. במחקר זה, שיעור התמותה לאחר ניתוח בד&quot;ל היה 5% (2 מתוך 40 בעלי החיים בטרם עת הקריבו בגלל תנאים ירודים בבעלי החיים מפותחים). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig1highres.jpg" /> איור 1: התקנה ניסיונית לביצוע מרהצינור קשירה. החיה נשמר על צלחת התחממות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס והאזור התפעולי מכוסה כולל עם, וילונות מודבקים עצמם נוזל-חדיר. במהלך הניתוח המלא, בעלי החיים מחוברים באופן קבוע למערכת הרדמה. כל כלי מדידה ופתרונות (משככי כאבים, ההרדמה, תמיסת חיטוי, 0.9% NaCl) מסודרת בצורה ברורה. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig2highres.jpg" /> איור 2:. הכנת אזור ניתוח פתיחה מוקדמת של חלל הצפק, עור הבטן צריך להיות מגולח עם מכונת גילוח חשמלי פרווה ולחטא עם ספוגית גזה חיטוי. אזור הניתוח ולאחר מכן מכוסה, וילונות מודבקים עצמם נוזל-חדיר. הבטן נפתחה עם laparotomy קו האמצע (~ 2 סנטימטר אורך). החלל מוגדל על ידי החדרת תפר מחזיק בחזה ובאזור הפעולה מופץ על ידיהחדרת מפשק Colibri מאפשר ניסויים ללא הפרעה במהלך הניתוח. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig3highres.jpg" /> איור 3: חשיפה של צינור המרה. (א) לביצוע קשירת צינור מרה, בצד הגחוני של הכבד הרים כך שהוא יכול להיצמד לסרעפת וhilus הכבד הופך גלוי לעין. (ב) כדי לחשוף את צינור המרה טוב יותר, הבטן מועברת caudally עם מקלון צמר גפן humidified. צינור המרה מסומן בחץ. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig4highres.jpg" /> איור 4: ligating צינור המרה. (א) בשלב ראשון, את צינור המרה מופרד בזהירות מאיגוף וריד שער ועורק כבד באמצעות מלקחיים מיקרו-מַסוֹרִיוּת. (ב) בהמשך לכך, תפר ממוקם סביבצינור המרה ומאובטח עם קשר כירורגית. (ג) מכאן ואילך, תפר שני ממוקם בסמיכות לתפר הראשון וקשור סביב צינור המרה. (ד) התפר מתקצר, החלל שטף עם 0.9% פתרון NaCl , וכל האיברים הוחלפו לעמדה הפיזיולוגית שלהם. <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig5highres.jpg" /> איור 5:.. ייצוג מדויק של קשירה כדי לתעד את המיקום של התפרים ואת ההגדרה של שני קשרים המונעים זרימת מרה, אותו ההליך המתואר באיור 4 תועד תחת משקפת () מאסר של צינור המרה עם תפר ראשון. קשירה (B) של התפר הראשון. (ג) מאסר של צינור המרה עם התפר השני. (ד) קשירה של התפר השני. (E) פעמיים ligated ד מרהuct לאחר קיצור של תפרים עודפים. (E &#39;) פנל מתאר סקיצה של (E). עמדותיה של הזכות (RL), שמאלה (LL) ואונות חציון (מיליליטר) של הכבד, כמו גם את צינור מרה, קיבה, ותריסריון הם אותיות. בסקיצת צינור המרה הוא ligated כפול על ידי שני תפרים. <img alt="איור 6" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig6highres.jpg" width="400" /> איור 6:. אנטומיה של צינור מרה, וריד שער ועורק כבד בעכברים למיקום האנטומי טוב יותר של צינור המרה המשותף, וריד שער ועורק כבד מתוארים כערכה. סימנו גם את עמדותיה של הזכות (RL), חציון שמאלה (ll) (מיליליטר) וcaudate אונות (CL) של הכבד. <img alt="איור 7" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig7highres.jpg" /> איור 7: appeara נציגפליטות של כבדים 2 שבועות לאחר ניתוח הדמה וBDL. C57BL / 6 עכברים היו נתונים לדמה פעולה או ניתוח BDL. אחרי השבועיים חלל הבטן נפתח. בעוד את הכבדים של בעלי חיים דמה המופעל לא הראו שום סימן של סיסטיק, הכבדים של בעלי חיים שקיבלו קשירה של צינור המרה היה מבנה פני השטח לא סדיר עם היווצרות של בצקת וגושי fibrotic על פני השטח של כבדים מקבילים. <img alt="איור 8" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig8highres.jpg" /> איור 8:. סעיפים כבד Hematoxylin ו eosin כתם הוכנו מC57BL / 6 בעלי חיים מסוג בר שהיו דמה המופעל () או קיבלו בד&quot;ל במשך שלושה שבועות (ב &#39;). הקטעים היו מוכתמים בנהלים סטנדרטיים hematoxylin ו eosin הבא. נא לשים לב לשינויים האופייניים בכבד בד&quot;ל הכוללים סימנים של דלקת (תאים שחדרו), parenchymal (hepatocyte) נמק, והתפשטות של צינורות מרה. סרגל קנה המידה בכל פנל דמות מייצג 50 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52438/52438fig8large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 9" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig9highres.jpg" /> איור 9: readouts היסטולוגית וביוכימיים לfibrogenesis כבד. סעיפים כבד () הוכנו מבעלי החיים שקיבלו מבצע זיוף או בד&quot;ל עבור 2 שבועות ומוכתמים עם סיריוס אדום (פנל עליון, סיבי הקולגן באדום) או ניתחו לביטוי של α-חלק אקטין שרירים (α-SMA) (פנל תחתון , תאים α-SMA חיוביים בחום) על ידי אימונוהיסטוכימיה. סרגל קנה המידה בכל פנל דמות מייצג 100 מיקרומטר. (B) תמציות חלבון מכבדים היו נתונים לכתם מערבי ונותחו לexpression שלי קולגן סוג, α-SMA, וvimentin שמבוססים היטב סמנים של fibrogenesis הכבד. הביטוי של Lipocalin-2 (LCN2) מציין את התגובה הדלקתית הקשור לfibrogenesis המתמשך. בניתוח זה, טעינת חלבון שווה הודגמה על ידי חיטוט הכתמים עם נוגדן ספציפי לβ-אקטין. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52438/52438fig9large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 10" src="/files/ftp_upload/52438/52438fig10highres.jpg" /> איור 10:. מכתים חיסונית של חדירת תאים דלקתיים סעיפים כבד סידוריים הוכנו מכבד של בעלי חיים שקיבלו קשירת צינור מרה במשך 3 שבועות. החלקים הוכתמו hematoxylin ו eosin (א) או עם נוגדן שהוא ספציפי לCD45 (ב &#39;). לתשומת לבך,המספר הגבוה של תאים חיוביים CD45 המקיפים את צינורות המרה. מחלחל המסיבי אלה שמצביעים על דלקת אינו גלוי בסעיפים כבד מקורם בבעלי חי דמה המופעל (לא מוצג). סרגל קנה המידה בכל פנל דמות מייצג 500 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52438/52438fig10large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis at JoVE.com

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

מרה Duct קשירת בעכברים: אינדוקציה של דלקת כבד פגיעה ופיברוזיס ידי חסימתית cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

bile-duct-ligation-mice-induction-inflammatory-liver-injury-fibrosis

Research

JoVE Journal

Medicine

52.0K Views.  RWTH Aachen University. Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Video: Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Creation of Reversible Cholestatic Rat Model

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Cholestasis can cause various physiological changes and affect the nutritional status and surgical outcomes. Study of the pathophysiological changes occurring in the liver and other organs is of importance. Various studies have been done in cholestatic rat models.
We used a reversible cholestatic rat model in our recent study looking at the role of methylprednisolone in the ischemia reperfusion injury. Various techniques for creation of a reversible cholestatic model have been described. Creation of a reversible cholestatic rat model can be challenging in view of the smaller size and unique hepatopancreatobiliary anatomy in rats. This video article demonstrates the creation of a reversible cholestatic model.
This model can be used in various studies, such as looking at the changes in nutritional, physiological, pathological, histological and immunological changes in the gastrointestinal tract. This model can also be used to see the effects of cholestasis and various therapeutic interventions on major hepatic surgeries.

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Creation of a reversible cholestatic rat model can be challenging in view of the smaller size and unique hepatopancreatobiliary anatomy in rats. This video article demonstrates the creation of a reversible cholestatic model.

יצירתו של מודל הפיך עכברוש Cholestatic

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Cholestasis can cause various physiological changes and ...

Determining Bile Duct Density in the Mouse Liver

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques are used, including serum chemistry, histological analysis, and immunostaining for specific markers. Although these techniques can provide important information about the biliary system, they often do not present a full picture of bile duct (BD) developmental defects across the whole liver. This is in part due to the robust ability of the mouse liver to drain the bile even in animals with significant impairment in biliary development. Here we present a simple method to calculate the average number of BDs associated with each portal vein (PV) in sections covering all lobes of mutant/transgenic mice. In this method, livers are mounted and sectioned in a stereotypic manner to facilitate comparison among various genotypes and experimental conditions. BDs are identified via light microscopy of cytokeratin-stained cholangiocytes, and then counted and divided by the total number of PVs present in liver section. As an example, we show how this method can clearly distinguish between wild-type mice and a mouse model of Alagille syndrome. The method presented here cannot substitute for techniques that visualize the three-dimensional structure of the biliary tree. However, it offers an easy and direct way to quantitatively assess BD development and the degree of ductular reaction formation in mice.

We present a rather simple and sensitive method for accurate quantification of bile duct density in the mouse liver. This method can aid in determining the effects of genetic and environmental modifiers and the effectiveness of potential therapies in mouse models of biliary diseases.

קביעת צפיפות צינור המרה בכבד העכבר

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques ...

Developmental Biology

The Influence of Liver Resection on Intrahepatic Tumor Growth

The high incidence of tumor recurrence after resection of metastatic liver lesions remains an unsolved problem. Small tumor cell deposits, which are not detectable by routine clinical imaging, may be stimulated by hepatic regeneration factors after liver resection. It is not entirely clear, however, which factors are crucial for tumor recurrence.
The presented mouse model may be useful to explore the mechanisms that play a role in the development of recurrent malignant lesions after liver resection. The model combines the easy-to-perform and reproducible techniques of defined amounts of liver tissue removal and tumor induction (by injection) in mice. The animals were treated with either a single laparotomy, a 30% liver resection, or a 70% liver resection. All animals subsequently received a tumor cell injection into the remaining liver tissue. After two weeks of observation, the livers and tumors were evaluated for size and weight and examined by immunohistochemistry.
After a 70% liver resection, the tumor volume and weight were significantly increased compared to a laparotomy alone (p &#60;0.05). In addition, immunohistochemistry (Ki67) showed an increased tumor proliferation rate in the resection group (p &#60;0.05).
These findings demonstrate the influence of hepatic regeneration mechanisms on intrahepatic tumor growth. Combined with methods like histological workup or RNA analysis, the described mouse model could serve as foundation for a close examination of different factors involved in tumor growth and metastatic disease recurrence within the liver. A considerable number of variables like the length of postoperative observation, the cell line used for injection or the timing of injection and liver resection offer multiple angles when exploring a specific question in the context of post-hepatectomy metastases. The limitations of this procedure are the authorization to perform the procedure on animals, access to an appropriate animal testing facility and acquisition of certain equipment.

A high incidence of tumor recurrence after resection of liver metastases remains an unsolved problem. The illustrated mouse model may be useful to investigate the reasons for such recurrences. It combines a liver resection model with intrahepatic tumor cell injection for the first time.

השפעת הכריתה כבדה על צמיחת גידול intrahepatic

The high incidence of tumor recurrence after resection of metastatic liver lesions remains an unsolved problem. Small tumor cell deposits, which are not ...

A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections may be one possible cause. The typical animal model used for studying BA is established by inoculating a neonatal mouse with a rhesus rotavirus. Silver nanoparticles have been shown to exert antibacterial and antiviral effects; their function in the BA mouse model is evaluated in this study. Currently, in BA animal experiments, the methods used to improve the symptoms of BA mice are generally symptomatic treatments given via food or other drugs. The aim of this study is to demonstrate a new method for ameliorating BA syndrome in mice by the intraperitoneal injection of silver nanoparticles and to provide detailed methods for preparing the silver nanoparticle gel formulation. This method is simple and widely applicable and can be used to research the mechanism of BA, as well as in clinical treatments. Based on the BA mouse model, when the mice exhibit jaundice, the prepared silver nanoparticle gel is injected intraperitoneally to the surface of the lower liver. The survival status is observed, and biochemical indicators and liver histopathology are examined. This method allows a more intuitive understanding of both the establishment of the BA model and novel BA treatments.

This article describes in detail a method based on silver nanoparticles for ameliorating biliary atresia syndrome in an experimental biliary atresia mouse model. A solid understanding of the reagent preparation process and the neonatal mouse injection technique will help familiarize researchers with the method used in neonatal mouse model studies.

שיטת ננו-חלקיק כסף Ameliorating בהכנת בכיס המרה תסמונת בעכברים

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...

Immunology and Infection

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer that often results in severe short bowel syndrome-like adverse effects including bile acid diarrhea, dehydration, electrolyte disturbances, and nutrient malabsorption. Here we introduce a murine ileal resection model, termed ileectomy, to evaluate tissue communication and the maintenance of systemic homeostasis. After ileal resection, circulating blood is permanently devoid of the ileum-specific endocrine hormone fibroblast growth factor 15 (FGF15), which releases its endocrinal inhibition of bile acid synthesis in the liver. In combination with the increased production and abolished reabsorption of bile acids after removing the ileum, mice that underwent surgery suffer from bile salt overaccumulation in the intestine and associated diarrhea, morbidity, and mortality. Novel usage of the surgery model introduced in this study may provide mechanistic and functional insights into ileal control of systemic metabolic regulation in physiology and disease.

Small intestine-dependent bile acid reabsorption and feedback inhibition of hepatic bile acid synthesis is important for systemic homeostasis and health. In this study, we describe a mouse model for ileal resection to evaluate ileectomy-induced bile malabsorption, overaccumulation, and toxicity in mouse intestine.

Ileectomy-induced מרה Overaccumulation במעי העכבר

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

A Mouse Model of Chronic Liver Fibrosis for the Study of Biliary Atresia

Biliary atresia (BA) is a fatal disease involving obstructive jaundice, and it is the most common indication for liver transplantation in children. Due to the complex etiology and unknown pathogenesis, there are still no effective drug treatments. At present, the classic BA mouse model induced by rhesus rotavirus (RRV) is the most commonly used model for studying the pathogenesis of BA. This model is characterized by growth retardation, jaundice of the skin and mucosa, clay stools, and dark yellow urine. The histopathology shows severe liver inflammation and obstruction of the intrahepatic and extrahepatic bile ducts, which are similar to the symptoms of human BA. However, the livers of end-stage mice in this model lack fibrosis and cannot fully simulate the characteristics of liver fibrosis in clinical BA. The presented study developed a novel BA mouse model of chronic liver fibrosis by injecting 5-10 &#181;g of anti-Ly6G antibody four times, with gaps of 2 days after each injection. The results showed that some of the mice successfully formed chronic BA with typical fibrosis after the time lapse, meaning these mice represent a suitable animal model for the virus-induced liver fibrosis mechanistic study of BA and a platform for developing future BA treatments.

We established a mouse model of chronic liver fibrosis, which provides a suitable animal model for the virus-induced liver fibrosis mechanistic study of biliary atresia (BA) and a platform for future BA treatments.

מודל עכברי של פיברוזיס כרוני בכבד לחקר אטרזיה של המרה

Biliary atresia (BA) is a fatal disease involving obstructive jaundice, and it is the most common indication for liver transplantation in children. Due to ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic fatty liver disease, metabolic liver disease, and liver cancer) requires experimental manipulation of animal models and in vitro cell cultures. Both techniques have limitations, such as the requirement of large numbers of animals for in vivo manipulation. However, in vitro cell cultures do not reproduce the structure and function of the multicellular hepatic environment. The use of precision-cut liver slices is a technique in which uniform slices of viable mouse liver are maintained in laboratory tissue culture for experimental manipulation. This technique occupies an experimental niche that exists between animal studies and in vitro cell culture methods. The presented protocol describes a straightforward and reliable method to isolate and culture precision-cut liver slices from mice. As an application of this technique, ex vivo liver slices are treated with bile acids to simulate cholestatic liver injury and ultimately assess the mechanisms of hepatic fibrogenesis.

This protocol provides a simple and reliable method for the production of viable precision-cut liver slices from mice. The ex vivo tissue samples can be maintained under laboratory tissue culture conditions for multiple days, providing a flexible model to examine liver pathobiology.

מורנה דיוק-גזור פרוסות הכבד כמודל Vivo Ex של ביולוגיה של הכבד

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

מודל עכבר לדלקת לבלב כרונית באמצעות עירוי TNBS צינור המרה

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.

מאתר כולין לקויה, בתוספת Ethionine (CDE) דיאטה מודל של פגיעה כרונית בכבד

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

Biology

Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile duct proliferation. However, long-term experiments can lead to increased morbidity and mortality. In select mouse strains with underlying liver disease, meaningful comparisons can be made even with ligation of a single lobe of the liver, which can reduce animal losses and expenses. Here, we describe partial bile duct ligation (pBDL) in the mouse, in which only the left hepatic bile duct is ligated, causing biliary obstruction in the left lobe but not the remaining lobes. With careful microsurgical technique, pBDL experiments can be cost-effective, since the unligated lobe serves as an internal control to the ligated lobes, when subjected to the same conditions in the same animal. Unlike cBDL, a separate sham-operated control group is not necessary. pBDL is highly useful to directly compare localized versus systemic effects of cholestasis and other retained bile components. pBDL can also be repurposed as a novel method to investigate mechanisms related to medications and cell migration.

Here, we present partial bile duct ligation as a surgical model of liver injury and regeneration in rodents.

צינור המרה חלקית מצדו העכבר: מודל מבוקרת של מקומי חסימתית לחסימת מרה תוך כבדית

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...