המחברים רוצה להודות האגודה האמריקנית לסוכרת לתמיכה עבודה זו (גרנט # #7-13-BS-180), מישיגן סטייט אוניברסיטת טכנולוגיה תמיכה במתקן המחקר למתן הכשרה וגישה אל ה- ויוו מערכת הדמיה ו מישיגן המדינה אוניברסיטת חקירה Histopathology מעבדה לעיבוד והביופסיות העכבר לבדיקה histopathological.

ניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה של אוניברסיטת מישיגן.
 1. הכנה של רטבים ריטלין, מפרידי סיליקון <ol><li>לחתוך את הרוטב ריטלין שקופים כדי להפוך ריבועים כ 1 ס"מ על 1 ס"מ עם מספריים.</li>
	<li>10 לחתוך עיגולים מ מ על גיליון סיליקון בעובי 0.5 מ מ באמצעות 10 מ מ ביופסיה אגרוף. מרכז ביופסיה 5 מ מ אגרוף במרכז העיגול 10 מ מ ולחץ בחוזקה כדי ליצור חור לטופס &#34; סופגניות &#34;-כמו דיסק זה ישמש בתור סד.</li></ol>
 2. חיות ניסוי <ol><li>שימוש בת שבוע 8 (22-26 גרם) עכברים SKH-1 זכר מ תרבית מסחרי. לשמור על עכברים בתנאים סטנדרטיים של 21 ° C ו- 12 שעות אור-כהה מחזור עם גישה חופשית מזון ומים.</li>
	<li>לזירוז סוכרת, להזריק עכברים intraperitonially solutionand streptozotocin (STZ) 13 מ"ג/מ"ל 25% גלוקוז (µl 250 לכל / עכבר) על 5 ימים רצופים.
	<ol><li>להפוך את הפתרון STZ על-ידי µg 65 המדללת של STZ ב µL 5 מ"מ חומצה ציטרית, pH 4.5-</li>
		<li>לכוונן את העוצמה מוזרק עבור כל עכבר למסה הסופית של 65 מ ג STZ לק"ג משקל גוף העכבר. להזריק בקרת עכברים עם 100 מ מחומצה ציטרית-פתרון-pH 4.5 באותם ימים-</li>
	</ol></li> <li>לאשר את היפרגליקמיה הדם ניטור גלוקוז עם סוכר 14 ימים לאחר הזריקה STZ האחרון. בעכברים סוכרתיים ייתכן polyuria אז מצעים שלהם ייתכן שתצטרך להשתנות בתדירות גבוהה יותר כדי למנוע רטיבות ו שלהם משקולות צריך להיות במעקב במשך 3 פעמים בשבוע.</li>
</ol> 3. Biofilms <ol><li>Biofilm הכנה <ol><li>לגדול המושבה biofilms 8 כדי לחסן את הפצעים. יומיים לפני תחילת הניתוח תרבות לילה של ביולומנאסן aeruginosa פ Xen 41 ב ציר סויה tryptic (TSB) מודגרות ב 37 מעלות צלזיוס, רועדת במהירות של 200 סל ד ולחטא פוליקרבונט מסננים קרום עם גודל הנקבוביות מיקרומטר 0.2 בחשיפה לאור אולטרא אור בשכונה בטיחות ביולוגית למשך 15 דקות בכל צד.</li>
		<li>יום אחד לפני הניתוח צנטריפוגה תרבות לילה ב g x 20,000 למשך 2 דקות ולשטוף 3 פעמים עם 1 מ"ל של Dulbelcco &#39; s פוספט buffered תמיסת מלח (DPBS) על ידי pipetting למעלה ולמטה.</li>
		<li>לדלל ההשעיה ב DPBS כדי ספיגת 0.05-600 nm.</li>
		<li>פיפטה 10 µL של התרבות מדולל על כל קרום נח על צלחת אגר (TSA) סויה tryptic. לאחר מתן אפשרות לייבוש, דגירה על הממברנות ב 35 מעלות צלזיוס במשך 72 h לגדול biofilms העברת ללוחות TSA טריים כל ה 24</li>
	</ol></li> <li>עיקול רגיל <ol><li>לפני תחילת הניסוי תעשה סיבוב סטנדרטי לתאם ספירות ביולומינסנציה ובקטריאלי.</li>
		<li>להכין biofilms כמתואר ב- 3.1.</li>
		<li>להפוך דילולים טורי של biofilms החל ½ עד 1/24 על ידי ערבוב biofilm עם DPBS ו- vortexing עד פתרון הומוגני מבחינה ויזואלית מופק. פיפטה 200µL של פתרונות מדולל שחור צלחת 96-ובכן, התמונה עם ה-ויוו מערכת הדמיה-</li>
		<li>התפשטה דילולים צלחת על גבי לוחות TSA, דגירה ב 35 ° C עבור 24h.</li>
		<li>נחשב המושבה יוצרי יחידות (CFU) על צלחות וליצור עיקול רגיל לתאם ספירות ביולומינסנציה ובקטריאלי.</li>
	</ol></li></ol> 4. פצע הניתוח <ol><li>לגרום הרדמה כללית באמצעות איזופלוריין ב 95% oxygen/5% CO 2 (כדי למנוע מוות של בחמצת) בספיקה של 1 ליטר/דקה ולתחזק הרדמה באמצעות 1-3% איזופלוריין. לשמור על החיות על מחצלות חום במהלך הניתוח.</li>
	<li>להבטיח הרפלקסים עמוק פדלים של העכבר מדוכאים על ידי התכווצות כף הרגל עם פינצטה ומקם את העכבר במצב שכיבה.</li>
	<li>לניהול meloxicam (0.2 מ ג/ק ג) באמצעות הזרקה תת עורית (30 μl) לניהול כאב.</li>
	<li>לנגב את העור של האחורי עם 10% povidone-יוד שלוש פעמים, רכיב pad אלכוהול איזופרופיל.</li>
	<li>להשתמש אגרוף ביופסיה 4 מ מ סטרילית חלוקה לרמות אחד בתבנית מעגלית על הפצע על צד אחד של העכבר &#39; קו האמצע s ברמה של הכתפיים. חלוקה לרמות את התבנית עם סמן קבוע.</li>
	<li>להשתמש מלקחיים משוננות כדי להרים את העור באמצע המספריים חלוקה לרמות ואיריס כדי ליצור פצע מלא-עובי המשתרע דרך רקמת השומן התת עורית כולל את carnosus panniculus בלו מעגלית פיסת הרקמה.</li>
	<li>להחיל דבק דבק רפואי עור עמיד למים על העור של העכברים ומקם את הסד סיליקון הפעלת לחץ מתון. לכסות את הפצע עם ההלבשה ריטלין שקוף. לאחר הניתוח, בנפרד בכלוב החיות.</li>
</ol> 5. ניהול לאחר הניתוח <ol><li>לניהול meloxicam (0.2 מ"ג/ק"ג) פעם ביום באמצעות הזרקה תת עורית לשיכוך כאבים לאחר הניתוח למשך 2 הימים.</li>
	<li>צג חיות מדי יום עבור גילויי כאבים וירידה במשקל. בעלי חיים סוכרתיים צריך זריקות אינסולין כאשר הם איבדו 15% או יותר של משקל הגוף-</li>
</ol> 6. הכנה Inoculum Biofilm ולדלקת <ol><li>לחסן עכברים 48 שעות לאחר הניתוח כפי שתואר בשלבים הבאים-</li>
	<li>לגרד 72 h biofilms של הממברנות בעזרת מרית סטרילי, למקם אותו צינור microcentrifuge ו לדלל 1:2 ב- DPBS. מיקס על ידי בקצרה pipetting למעלה ולמטה.</li>
	Inoculum <li>צלחת כפולה על גבי צלחות TSA לחישוב CFU הכולל. כדי להבטיח כי סעיפים מדויק, לשבור את biofilm inoculum עוד יותר על ידי סדרה של שני שלבים vortexing של 1 דקות, intercalated על ידי צעד sonication 2 דקות ב 40 קילו-הרץ בניקוי אולטראסוני.</li>
	<li>להסיר את כיסוי ההלבשה הפצע, סיליקון תקבע ולקחת מיקרוסקופ של הפצע עם מיקרוסקופ עם המצלמה המצורפת בעזרת סרגל לעיון.</li>
	<li>לחתוך את קצות 200 µL פיפטה טיפים, פיפטה 10 µL של inoculum biofilm על גבי כל אחד מהפצעים.</li>
	<li>העכבר תמונה באמצעות ה-ויוו מערכת באמצעות הגדרות אוטומטית הדמיה: חשיפה זמן 5-300 s, עם binning בינוני, 1 f/להפסיק, פתח מסנן שדה ראייה C (12.9 ס"מ x 12.9 ס"מ).</li>
	<li>המכסה פצע טרי ברוטב.</li>
</ol> 7. הפצע מדידה והדמיה <ol><li>להעריך את הסימנים הקליניים של חיות יומי 9.</li>
	<li>לספק מזון, מים, לשנות את הכלובים כנדרש.</li>
	<li>בדיקת התקינות של תחבושות מדי יום. כאשר הרוטב קיים, ניתן למדוד רק ביולומינסנציה עקב חסימה של הפצע. יום 8, רטבים יוסרו and not הוחלף המאפשר מדידה של סגירת הפצע.</li>
	<li>שוקל חיות בכל יום אחר.</li>
	<li>עבור כל הימים, מקום עכברים בנפרד בחדר בידוד החדרים מצויידים מסנן HEPA, התמונה באמצעות ה-ויוו מערכת הדמיה כל יום או כל יום אחר עד הפריה חוץ גופית ערכים ליפול מתחת לרמת הרקע.</li>
	<li>לאחר יום 8, זירוז הרדמה כללית ולקחת micrographs של הפצע עם מיקרוסקופ עם המצלמה המצורפת בעזרת סרגל לעיון בכל יום עד הפצעים הגלידו.</li>
</ol> 8. ניתוח היסטולוגית <ol><li>Euthanize העכברים עם זרם של 2 ל'/דקה של CO 2 המתת חסד קאמרית לאחר הפריה חוץ גופית יורד מתחת רקע רמות הפצעים הגלידו לחלוטין. לאשר את מותו על ידי נקע בצוואר הרחם כשיטה נוספת המתת חסד-</li>
	<li>להשתמש במספריים איריס ליצור כריתה רחבה, מלאה מסביב ותחת אזור הפצע (בערך 1 ס מ קוטר) ולשמר את הרקמה ב 4% paraformaldehyde לבדיקה היסטולוגית.</li>
	<li>ניתוח אחרים: זיהוי ציטוקינים <ol><li>לאסוף דם רטרו-orbitally מחיות בהרדמה באמצעות שפופרת זכוכית נימי ולהעביר אותו צינורות שטופלו EDTA.</li>
		<li>פלזמה לגילוי ציטוקין צנטריפוגה דם ב-2000 סל ד כעשרים דקות ב 4 ° C ומקפיאים.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>James, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biofilms+in+chronic+wounds.">Biofilms in chronic wounds.</a> Wound Repair Regen. 16 (1), 37-44 (2008).</li><li>Gordois, A., Scuffham, P., Shearer, A., Oglesby, A., Tobian, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+health+care+costs+of+diabetic+peripheral+neuropathy+in+the+US.">The health care costs of diabetic peripheral neuropathy in the US.</a> Diabetes Care. 26 (6), 1790-1795 (2003).</li><li>Reiber, G. E., McDonell, M. B., Schleyer, A. M., Fihn, S. D., Reda, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+system+for+quality+improvement+in+ambulatory+care:+assessing+the+quality+of+diabetes+care.">A comprehensive system for quality improvement in ambulatory care: assessing the quality of diabetes care.</a> Patient Educ Couns. 26 (1-3), 337-341 (1995).</li><li>Driver, V. R., Fabbi, M., Lavery, L. A., Gibbons, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+costs+of+diabetic+foot:+The+economic+case+for+the+limb+salvage+team.">The costs of diabetic foot: The economic case for the limb salvage team.</a> J Vasc Surg. 52 (Suppl 3), 17S-22S (2010).</li><li>Contag, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photonic+detection+of+bacterial+pathogens+in+living+hosts.">Photonic detection of bacterial pathogens in living hosts.</a> Mol Microbiol. 18 (4), 593-603 (1995).</li><li>Rocchetta, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+noninvasive,+real-time+imaging+technology+using+bioluminescent+Escherichia+coli+in+the+neutropenic+mouse+thigh+model+of+infection.">Validation of a noninvasive, real-time imaging technology using bioluminescent Escherichia coli in the neutropenic mouse thigh model of infection.</a> Antimicrob Agents Chemother. 45 (1), 129-137 (2001).</li><li>Kadurugamuwa, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+direct+method+for+monitoring+antibiotics+in+a+mouse+model+of+bacterial+biofilm+infection.">Rapid direct method for monitoring antibiotics in a mouse model of bacterial biofilm infection.</a> Antimicrob Agents Chemother. 47 (0066-4804), 3130-3137 (2003).</li><li>Anderl, J. N., Franklin, M. J., Stewart, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+antibiotic+penetration+limitation+in+Klebsiella+pneumoniae+biofilm+resistance+to+ampicillin+and+ciprofloxacin.">Role of antibiotic penetration limitation in Klebsiella pneumoniae biofilm resistance to ampicillin and ciprofloxacin.</a> Antimicrob Agents Chemother. 44 (7), 1818-1824 (2000).</li><li>Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+approach+for+establishing+humane+endpoints.">A systematic approach for establishing humane endpoints.</a> ILAR J. 41 (2), 80-86 (2000).</li><li>Dunn, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+wound+healing.">Murine model of wound healing.</a> J Vis Exp. (75), e50265 (2013).</li><li>Zhao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+wound+healing+in+diabetic+(db/db)+mice+with+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+challenge+-+a+model+for+the+study+of+chronic+wounds.">Delayed wound healing in diabetic (db/db) mice with Pseudomonas aeruginosa biofilm challenge - a model for the study of chronic wounds.</a> Wound Repair Regen. 18 (5), 467-477 (2010).</li><li>Holley, A. K., Xu, Y., Noel, T., Bakthavatchalu, V., Batinic-Haberle, I., St. Clair, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manganese+superoxide+dismutase-mediated+inside-out+signaling+in+HaCaT+human+keratinocytes+and+SKH-1+mouse+skin.">Manganese superoxide dismutase-mediated inside-out signaling in HaCaT human keratinocytes and SKH-1 mouse skin.</a> Antioxid Redox Signal. 20 (15), 2347-2360 (2014).</li><li>Abbas, S., Alam, S., Pal, A., Kumar, M., Singh, D., Ansari, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UVB+exposure+enhanced+benzanthrone-induced+inflammatory+responses+in+SKH-1+mouse+skin+by+activating+the+expression+of+COX-2+and+iNOS+through+MAP+kinases/NF-&#312;B/AP-1+signalling+pathways.">UVB exposure enhanced benzanthrone-induced inflammatory responses in SKH-1 mouse skin by activating the expression of COX-2 and iNOS through MAP kinases/NF-&#312;B/AP-1 signalling pathways.</a> Food Chem Toxicol. 96, 183-190 (2016).</li><li>Watters, C., Everett, J. A., Haley, C., Clinton, A., Rumbaugh, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+treatment+modulates+the+host+immune+system+to+enhance+Pseudomonas+aeruginosa+wound+biofilms.">Insulin treatment modulates the host immune system to enhance Pseudomonas aeruginosa wound biofilms.</a> Infect Immun. 82 (1), 92-100 (2014).</li></ol>

המחברים מצהירים כי יש להם אינטרסים כלכליים אין מתחרים.

כאן נתאר מודל עכבר חדש לחקר biofilms סכרת הפצעים כרונית בעלת יתרונות רבים כדי ליצור מודל גמיש, לתרגום הדירים.
החידוש הראשון הוא השימוש של עכברים חסרי־השיער שמסתובבים באזור. דגמים אחרים העכבר פותחו כדי ללמוד סוכרת פצע כרוני ריפוי10,11, אבל כולנו צרי...

Biofilms הן קהילות מורכבים של מיקרואורגניזמים מוטבע בתוך מטריצה של חומרים פולימריים הודגשו כגורם תורם לפתרון המסכן לפצעים כרוניים1. המחקר של אוכלוסיות חיידקים אלה מאורגן, מתמיד חשוב במיוחד לחולי הסוכרת לאן מובילה במחזור עניים על איבריו ואת מנגנוני חישה היקפיים שינו נגעים מבלי שיבחינו2. בארצות הברית, ההערכה היא כי 15% של חולי סוכרת יפתחו כיב אחד לפחות במהלך חייהם. זה מתורגם הוצאה כלכלית של-28 מיליארד דולר טיפול3,4, שלא להזכיר את הנטל הרגשי והחברתי immensurable. הבנת הגורמים המאפשרים קהילות מיקרוביאלי להמשיך להעמיד את מיטת הפצע ואת ההשפעה ש-biofilms אלה יש באירועים הריפוי הכרחי כדי לנהוג לטיפול טוב יותר בחולים המושפעת להניע הפיתוח של גישות טיפול חדשות. לכן, הקמת לתרגום הדירים ויוו מודלים עבור חקר אינטראקציות וקרקע הוא בעל חשיבות עליונה.
מודלים מאתר פותחו בהצלחה לחקור את ההשפעה של biofilms הפצעים כרונית. מודלים אלה, עם זאת, לעיתים קרובות לנצל מינים שיער והערכת biofilm אישור מאת צלחת ספירות עבור תאים חיידקיים קיימא של רקמת נכרת מחיות שהקריבה עצמה, שהופך אותם זמן רב ויקר.
אלטרנטיבה biophotonic הדוגמאות נקודת הקצה של חיות הערכת זיהום הועלתה לראשונה על ידי Contag et al. (1995) 5 , מי שפיתח שיטה ללכידת הפריה חוץ גופית של ביולומנאסן צורונים סלמונלה typhimurium כדי למדוד את יעילות טיפול אנטיביוטי. מחקרים אחרים ניצול של חיידקים פולטי ביולומינסנציה בעקבות. לדוגמה, Rochetta et al. (2001) 6 לאמת מודל זיהום ללמוד Escherichia coli זיהומים הירך בעכברים על ידי מדידת הפריה חוץ גופית באמצעות של והחרפת תשלום מצמידים מכשיר, Kadurugamuwa מאוחר יותר, ואח. (2003) 7 ניצלו הפוטון פולטות מאפייני זן שעברו הנדסה לאחור של Staphylococcus aureus כדי לחקור את היעילות של אנטיביוטיקה מספר במודל הפצע קטטר בעכברים.
השיטה מאופיין כאן מציג פרוטוקול פשוטה לגרום סוכרת בעכברים שיער, לייצר ואת לחסן פצעים עם הקבועים מראש biofilms ביולומנאסן של פ aeruginosa, התנהגות biophotonic ניטור הזיהום באמצעות יישום ויוו מערכת הדמיה. הוא מציע ישיר, מהירה, בחיי עיר, תהליך פולשני כמותיים להערכת biofilms לפצעים כרוניים, בנוסף, מאפשרת לניתוח נוספים כגון הדמיה מיקרוסקופיים של ריפוי פצעים, איסוף דם לסירוגין במשך ציטוקין מדידות, אוסף רקמה מסוף עבור כפפות.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Opsite</td>
			<td>Smith &#38; Nephew</td>
			<td>Model 66000041</td>
			<td>Smith &#38; Nephew Flexfix Opsite Transparent Adhesive Film Roll 4&#34; x 11yards</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SKH-1 mice Crl:SKH1-Hrhr</td>
			<td>Charles River Breeding Laboratories</td>
			<td>SKH1</td>
			<td>Hairless mice, 8 weeks old</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptozotocin (STZ)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S0130-1G</td>
			<td>Streptozocin powder, 1g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AccuChek glucometer</td>
			<td>Accu-Chek Roche</td>
			<td>Art No. 05046025001</td>
			<td>ACCU-CHEK CompactPlus Diabetes Monitoring Care Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pseudomonas aeruginosa Xen 41</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>119229</td>
			<td>Bioluminescent Pseudomonas aeruginosa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate membrane filters</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P9199</td>
			<td>Millipore polycarbonate membrane filters with 0.2 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbelcco phosphate buffer saline (DPBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic soy agar</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>22091</td>
			<td>Culture agar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>49755</td>
			<td>Eloxiject (Meloxicam) 5mg/mL, solution for injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% povidone-iodine (Betadine)</td>
			<td>Purdue Products LP</td>
			<td>301879-OA</td>
			<td>Swabstick, Betadine Solution. Antiseptic. Individ. Wrapped, 200/case</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAJ61899AK</td>
			<td>Alfa Aesar Paraformaldehyde, 4% in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillary glass tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-362-566</td>
			<td>Heparinized Micro-Hematocrit Capillary Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone to make splints</td>
			<td>Invitrogen Life Technologies Corp</td>
			<td>P-18178</td>
			<td>Press-to-Seal Silicone Sheet, 13cm x 18cm, 0.5mm thick, set of 5 sheets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic soy broth</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>22092</td>
			<td>Culture broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>In vivo imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum Isolation chamber</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>123997</td>
			<td>XIC-3 animal isolation chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPA filter</td>
			<td>Teleflex</td>
			<td>28022</td>
			<td>Gibeck ISO-Gard HEPA Light number 28022</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy punches</td>
			<td>VWR International Inc</td>
			<td>21909-142</td>
			<td>Disposable Biopsy Punch, 5mm, Sterile, pack of 50.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy punches</td>
			<td>VWR International Inc</td>
			<td>21909-140</td>
			<td>Disposable Biopsy Punch, 4mm, Sterile, pack of 50.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>1916-01</td>
			<td>Dextrose, Anhydrous, Powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C2404-100G</td>
			<td>Citric Acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mastisol</td>
			<td>Eloquest Healthcare</td>
			<td>HRI 0496-0523-48</td>
			<td>Mastisol Medical Liquid Adhesive 2/3 mL vial, box of 48</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 96-well black plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-200-567</td>
			<td>96-well clear bottom black polysterene microplates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 gauge 5/8 inch needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td>Regular bevel needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bransonic M Ultrasonic Cleaning Bath</td>
			<td>Branson Ultrasonics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Ultrasonic Cleaner</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

come to the light side: in vivo monitoring of pseudomonas aeruginosa biofilm infections in chronic wounds in a diabetic hairless murine model

הנוכחות של חיידקים כמו biofilms מובנית בלפצעים כרוניים, במיוחד בחולים סוכרתיים, נחשב למנוע ריפוי הפצע והרזולוציה. מודלים פצעים כרוניים העכבר שימשו כדי להבין את האינטראקציות הבסיסית בין המיקרואורגניזמים לבין המארח. המודלים שפותחו כדי תאריך מסתמכים על השימוש בבעלי חיים עם שיער ואוסף מסוף רקמת הפצע על הנחישות של חיידקים קיימא. בעוד תובנה משמעותית צבר עם מודלים אלה, הליך ניסיוני זה דורש מספר רב של בעלי חיים, הדגימה הוא זמן רב. פיתחנו מודל מאתר רומן המשלב מספר חידושים אופטימלית כדי להעריך את התקדמות biofilm לפצעים כרוניים:) הוא מנצל עכברים שיער, ומבטלת את הצורך עבור הסרת שיער; ב) מחיל את biofilms הקבועים מראש על הפצעים ומאפשר את הערכה מיידית של התמדה ותוצאה של קהילות אלה במחשב מארח; ג) מפקח על התקדמות biofilm מאת לכימות ייצור אור על ידי זן ביולומנאסן מהונדס גנטית של Pseudomonas aeruginosa, המאפשר ניטור בזמן אמת של הזיהום ובכך להפחית את מספר בעלי חיים נדרש לכל מחקר. במודל זה, פצע מלא-עומק יחיד המיוצר על גב STZ-induced בעכברים שיער סוכרתיים, מחוסן עם biofilms של המתח ביולומנאסן aeruginosa פ Xen 41. פלט אור מהפצע נרשם מדי יום אין ויוו מערכת הדמיה, המאפשר ויזואליזציה biofilm מהירה ב- vivo וב -באתרו ולוקליזציה של חיידקים biofilm שבתוך הפצעים. שיטה חדשנית זו הוא גמיש כמו זה יכול לשמש כדי ללמוד מיקרואורגניזמים אחרים, כולל מינים מהונדסים biofilms מינים רב, וייתכן ערך מיוחד בבדיקות אסטרטגיות אנטי-biofilm כולל רטבים ריטלין מיקרוביאלית.

פיתוח המודל החדש, הבחנו יתרונות רבים תוך ניצול SKH שיער-1 על C57BL/6J עכברים, שבו השתמשנו בעבר. חיות נתון STZ זריקות בדרך כלל חווים ירידה הדרגתית במשקל עם תחילת סוכרת; עם זאת, בפצע ריפוי ניסויים בעבר שנערך על ידי מעבדות שלנו לשחזר את מודל שהוצגו על ידי דן ואח. (2012) 9...

Watch this Scientific Journal Video about Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model at JoVE.com

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

לצידו. אור: בויוו ניטור של דלקות Biofilm Pseudomonas aeruginosa לפצעים כרוניים במודל מאתר של שיער סוכרתית

כאן נתאר מודל מאתר סוכרתית הרומן ניצול עכברים שיער ניטור בזמן אמת, לא פולשנית, זיהומים בפצע biofilm של ביולומנאסן Pseudomonas aeruginosa. בשיטה זו ניתן להתאים כדי להעריך את זיהום של אחרים חיידקים ומיקרואורגניזמים מהונדסים, כולל biofilms מינים רב, ולבדוק את היעילות של אסטרטגיות antibiofilm.

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

come-to-light-side-vivo-monitoring-pseudomonas-aeruginosa-biofilm

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

13.1K Views.  Michigan State University. כאן נתאר מודל מאתר סוכרתית הרומן ניצול עכברים שיער ניטור בזמן אמת, לא פולשנית, זיהומים בפצע biofilm של ביולומנאסן Pseudomonas aeruginosa. בשיטה זו ניתן להתאים כדי להעריך את זיהום של אחרים חיידקים ומיקרואורגניזמים מהונדסים, כולל biofilms מינים רב, ולבדוק את היעילות של אסטרטגי...

Video: Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological properties compared to free living microorganisms. Biofilms in nature are often difficult to investigate and reside under poorly defined conditions1. Using a transparent substratum it is possible to device a system where simple biofilms can be examined in a non-destructive way in real-time: here we demonstrate the assembly and operation of a flow cell model system, for in vitro 3D studies of microbial biofilms generating high reproducibility under well-defined conditions2,3.
The system consists of a flow cell that serves as growth chamber for the biofilm. The flow cell is supplied with nutrients and oxygen from a medium flask via a peristaltic pump and spent medium is collected in a waste container. This construction of the flow system allows a continuous supply of nutrients and administration of e.g. antibiotics with minimal disturbance of the cells grown in the flow chamber. Moreover, the flow conditions within the flow cell allow studies of biofilm exposed to shear stress. A bubble trapping device confines air bubbles from the tubing which otherwise could disrupt the biofilm structure in the flow cell.
The flow cell system is compatible with Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM) and can thereby provide highly detailed 3D information about developing microbial biofilms. Cells in the biofilm can be labeled with fluorescent probes or proteins compatible with CLSM analysis. This enables online visualization and allows investigation of niches in the developing biofilm. Microbial interrelationship, investigation of antimicrobial agents or the expression of specific genes, are of the many experimental setups that can be investigated in the flow cell system.

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Protocol describing the application of a flow cell system for growing and analyzing microbial biofilms for Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM).

Pseudomonas aeruginosa ו biofilm Saccharomyces cerevisiae בתוך תאים Flow

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological ...

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with leukemia, severe burn wounds, or organ transplants1. In patients at high-risk for developing PA bloodstream infections, the gastrointestinal (GI) tract is the main reservoir for colonization2, but the mechanisms by which PA transitions from an asymptomatic colonizing microbe to an invasive, and often deadly, pathogen are unclear. Previously, we performed in vivo transcription profiling experiments by recovering PA mRNA from bacterial cells residing in the cecums of colonized mice 3 in order to identify changes in bacterial gene expression during alterations to the host&#x2019;s immune status.
As with any transcription profiling experiment, the rate-limiting step is in the isolation of sufficient amounts of high quality mRNA. Given the abundance of enzymes, debris, food residues, and particulate matter in the GI tract, the challenge of RNA isolation is daunting. Here, we present a method for reliable and reproducible isolation of bacterial RNA recovered from the murine GI tract. This method utilizes a well-established murine model of PA GI colonization and neutropenia-induced dissemination4. Once GI colonization with PA is confirmed, mice are euthanized and cecal contents are recovered and flash frozen. RNA is then extracted using a combination of mechanical disruption, boiling, phenol/chloroform extractions, DNase treatment, and affinity chromatography. Quantity and purity are confirmed by spectrophotometry (Nanodrop Technologies) and bioanalyzer (Agilent Technologies) (Fig 1). This method of GI microbial RNA isolation can easily be adapted to other bacteria and fungi as well.

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

A reliable method for the RNA isolation of Pseudomonas aeruginosa recovered from murine cecums is described. The RNA recovered is of sufficient quantity and quality for subsequent qPCR, transcription profiling, and RNA Seq experiments. This technique can be adapted for RNA isolation of other intestinal microbes.

RNA בידוד Pseudomonas aeruginosa מיישבים את מערכת העיכול Murine

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological deficiencies. GVHD is caused by mature alloreactive T cells present in the bone marrow graft that are infused into the recipient and cause damage to host organs. However, in mice, T cells must be added to the bone marrow inoculum to cause GVHD. Although extensive work has been done to characterize T cell responses post transplant, bioluminescent imaging technology is a non-invasive method to monitor T cell trafficking patterns in vivo. 
Following lethal irradiation, recipient mice are transplanted with bone marrow cells and splenocytes from donor mice. T cell subsets from L2G85.B6 (transgenic mice that constitutively express luciferase) are included in the transplant. By only transplanting certain T cell subsets, one is able to track specific T cell subsets in vivo, and based on their location, develop hypotheses regarding the role of specific T cell subsets in promoting GVHD at various time points. At predetermined intervals post transplant, recipient mice are imaged using a Xenogen IVIS CCD camera. Light intensity can be quantified using Living Image software to generate a pseudo-color image based on photon intensity (red = high intensity, violet = low intensity). 
Between 4-7 days post transplant, recipient mice begin to show clinical signs of GVHD. Cooke et al.1 developed a scoring system to quantitate disease progression based on the recipient mice fur texture, skin integrity, activity, weight loss, and posture. Mice are scored daily, and euthanized when they become moribund. Recipient mice generally become moribund 20-30 days post transplant. 
Murine models are valuable tools for studying the immunology of GVHD. Selectively transplanting particular T cell subsets allows for careful identification of the roles each subset plays. Non-invasively tracking T cell responses in vivo adds another layer of value to murine GVHD models.

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murine bone marrow transplantation is a widely used technique to study immunological mechanisms governing graft-versus-host disease in humans. The ability to monitor T cell trafficking patterns in vivo allows for detailed analysis of the development and perpetuation of T cell responses during graft-versus-host disease.

אינדוקציה של מחלת שתל נגד מארח ו<em&gt; In Vivo</em&gt; ניטור תא T תוך שימוש במודל Murine MHC התאמה

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

There is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from cystic fibrosis (CF) patients. Existing methods rely on single or a few isolates grown aerobically and planktonically. Predetermined cut-offs are used to define whether the bacteria are sensitive or resistant to any given antibiotic1. However, during chronic lung infections in CF, P. aeruginosa populations exist in biofilms and there is evidence that the environment is largely microaerophilic2. The stark difference in conditions between bacteria in the lung and those during diagnostic testing has called into question the reliability and even relevance of these tests3.
 Artificial sputum medium (ASM) is a culture medium containing the components of CF patient sputum, including amino acids, mucin and free DNA. P. aeruginosa growth in ASM mimics growth during CF infections, with the formation of self-aggregating biofilm structures and population divergence4,5,6. The aim of this study was to develop a microtitre-plate assay to study antimicrobial susceptibility of P. aeruginosa based on growth in ASM, which is applicable to both microaerophilic and aerobic conditions.
 An ASM assay was developed in a microtitre plate format. P. aeruginosa biofilms were allowed to develop for 3 days prior to incubation with antimicrobial agents at different concentrations for 24 hours. After biofilm disruption, cell viability was measured by staining with resazurin. This assay was used to ascertain the sessile cell minimum inhibitory concentration (SMIC) of tobramycin for 15 different P. aeruginosa isolates under aerobic and microaerophilic conditions and SMIC values were compared to those obtained with standard broth growth. Whilst there was some evidence for increased MIC values for isolates grown in ASM when compared to their planktonic counterparts, the biggest differences were found with bacteria tested in microaerophilic conditions, which showed a much increased resistance up to a &gt;128 fold, towards tobramycin in the ASM system when compared to assays carried out in aerobic conditions.
 The lack of association between current susceptibility testing methods and clinical outcome has questioned the validity of current methods3. Several in vitro models have been used previously to study P. aeruginosa biofilms7, 8. However, these methods rely on surface attached biofilms, whereas the ASM biofilms resemble those observed in the CF lung9 . In addition, reduced oxygen concentration in the mucus has been shown to alter the behavior of P. aeruginosa2 and affect antibiotic susceptibility10. Therefore using ASM under microaerophilic conditions may provide a more realistic environment in which to study antimicrobial susceptibility.

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Current diagnostic antimicrobial susceptibility testing relies on the planktonic growth of isolates in nutrient rich, aerobic conditions. Here, we employ an alternative artificial sputum medium to study antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa biofilms under both aerobic and microaerophilic conditions more representative of the cystic fibrosis lung.

שימוש בינוני כיח מלאכותית לבדיקת יעילות אנטיביוטי נגד<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; בתנאי רלוונטיים יותר ריאות סיסטיק פיברוזיס

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model itself. Early phases of inflammation and infection have been widely studied by using the Pseudomonas aeruginosa agar-beads mouse model, while only few reports have focused on the long-term chronic infection in vivo. The main challenge for long term chronic infection remains the low bacterial burden by P. aeruginosa and the low percentage of infected mice weeks after challenge, indicating that bacterial cells are progressively cleared by the host.
This paper presents a method for obtaining efficient long-term chronic infection in mice. This method is based on the embedding of the P. aeruginosa clinical strains in the agar-beads in vitro, followed by intratracheal instillation in C57Bl/6NCrl mice. Bilateral lung infection is associated with several measurable read-outs including weight loss, mortality, chronic infection, and inflammatory response. The P. aeruginosa RP73 clinical strain was preferred over the PAO1 reference laboratory strain since it resulted in a comparatively lower mortality, more severe lesions, and higher chronic infection. P. aeruginosa colonization may persist in the lung for over three months. Murine lung pathology resembles that of CF patients with advanced chronic pulmonary disease.
This murine model most closely mimics the course of the human disease and can be used both for studies on the pathogenesis and for the evaluation of novel therapies.

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

We describe the agar-beads method to establish persistent long-term chronic Pseudomonas aeruginosa airway infection in the mouse model.

כרוני לטווח ארוך<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; זיהום דרכי הנשימה בעכברים

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. Here we have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa or PA). Using this model, we were able to show lung inflammation at the early phase of injury. In addition, alveolar epithelial barrier leakiness was observed by analyzing bronchoalveolar lavage (BAL); and alveolar cell death was observed by Tunel assay using tissue prepared from injured lungs. At a later phase following injury, we observed cell proliferation required for the repair process. The injury was resolved 7 days from the initiation of P. aeruginosa injection. This model mimics the sequential course of lung inflammation, injury and repair during pneumonia. This clinically relevant animal model is suitable for studying pathology, mechanism of repair, following acute lung injury, and also can be used to test potential therapeutic agents for this disease.

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

We have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa. This model mimics lung injury during pneumonia and is clinically relevant.

Pseudomonas aeruginosa מושרה ריאות פגיעה דגם

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of the host depends on the involvement of an adapted immune response against the pathogen1. Immune response is complex and results from interaction of the pathogens and several immune or non-immune cellular types2. In vitro studies cannot characterise these interactions and focus on cell-pathogen interactions. Moreover, in the airway3, particularly in patients with suppurative chronic lung disease or in mechanically ventilated patients, polymicrobial communities are present and complicate host-pathogen interaction. Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans are both problem pathogens4, frequently isolated from tracheobronchial samples, and associated to severe infections, especially in intensive care unit5. Microbial interactions have been reported between these pathogens in vitro but the clinical impact of these interactions remains unclear6. To study the interactions between C. albicans and P. aeruginosa, a murine model of C. albicans airways colonization, followed by a P. aeruginosa-mediated acute lung infection was performed.

Studying Microbial Communities In Vivo: A Model of Host-mediated Interaction Between Candida Albicans and Pseudomonas Aeruginosa in the Airways

While in vitro study of host-pathogen interactions allow the characterization of specific immune responses, in vivo models are required to observe the effects of complex responses. Using Candida albicans exposure followed by Pseudomonas aeruginosa-mediated lung infection, we established a murine model of microbial interactions involved in ventilator-associated pneumonia pathogenicity.

לומד קהילות חיידקים<em&gt; In vivo</em&gt;: דגם של אינטראקציה בתיווך בין מארח<em&gt; קנדידה אלביקנס</em&gt; ו<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; באיירווייס

Studying host-pathogen interaction enables us to understand the underlying mechanisms of the pathogenicity during microbial infection. The prognosis of ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is imperative to design experiments using human cells and tissues. An advantage of organ culture is maintenance of three-dimensional (3D) structural organization and extracellular matrix. The goal of the method described here is successful establishment of ex vivo human gestational tissue organ cultures and their healthy culture maintenance for 72-96 hr. The protocol details the immediate processing of research-consented, placental and decidual specimens fresh from the operating suite. These are abundant specimens that would otherwise be discarded. Detailed instructions on the sterile collection of these samples, including morphologic details on how to select appropriate tissues to establish 3D organ cultures, is provided. Placental villous and decidual tissues are microdissected into 2-3 mm3 pieces and placed separately on matrix-lined transwell filters and cultured for several days. Villous and decidual organ cultures are well suited for the study of human host-pathogen interaction. As compared to other model organisms, these human cultures are particularly advantageous to examine mechanism of infection for pathogens that demonstrate variable patterns of host specificity. As an example, we demonstrate infection of placental and decidual organ cultures with the clinically relevant, facultative intracellular bacterial pathogen Listeria monocytogenes.

A simple method to establish primary human placental (villous) and decidual organ cultures is described. Villous and decidual organ cultures are invaluable tools for studying pathogenesis at the human maternal-fetal interface. Infection with the facultative intracellular bacterium Listeria monocytogenes is demonstrated.

שלית Decidual אדם תרבויות איברים ללמוד זיהומים בבית הממשק האם והעובר

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the development and persistence of many health related infections. One of the most well described and studied biofilms in human disease occurs in chronic pulmonary infection of cystic fibrosis patients. When studying biofilms in the context of the host, many factors can impact biofilm formation and development. In order to identify how host factors may affect biofilm formation and development, we used a static chambered coverglass method to grow biofilms in the presence of host-derived factors in the form of sputum supernatants. Bacteria are seeded into chambers and exposed to sputum filtrates. Following 48 hr of growth, biofilms are stained with a commercial biofilm viability kit prior to confocal microscopy and analysis. Following image acquisition, biofilm properties can be assessed using different software platforms. This method allows us to visualize key properties of biofilm growth in presence of different substances including antibiotics.

This protocol describes the visualization of biofilm development following exposure to host-factors using a slide chamber model. This model allows for direct visualization of biofilm development as well as analysis of biofilm parameters using computer software programs.

לדמיין את ההשפעות של כיח על פיתוח biofilm באמצעות מודל תאיים coverglass

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of chronic wound infections in diabetic and hospitalized patients. There is an urgent need for chronic infection models to aid in the investigation of wound pathogenesis and the development of new therapies against this pathogen. Here, we describe a protocol that uses delayed inoculation 24 hours after full-thickness excisional wounding. The infection of the provisional wound matrix present at this time forestalls either rapid clearance or dissemination of infection and instead establishes chronic infection lasting 7&#8211;10 days without the need for implantation of foreign materials or immune suppression. This protocol mimics a typical temporal course of post-operative infection in humans. The use of a luminescent P. aeruginosa strain (PAO1:lux) allows for quantitative daily assessment of bacterial burden for P. aeruginosa wound infections. This novel model may be a useful tool in the investigation of bacterial pathogenesis and the development of new therapies for chronic P. aeruginosa wound infections.

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

We describe a delayed inoculation protocol for generating chronic wound infections in immunocompetent mice.

מדבקת החיסון נגד הידבקות כרונית בנגיף הדלקת בפצע

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...

לצידו. אור: בויוו ניטור של דלקות Biofilm Pseudomonas aeruginosa לפצעים כרוניים במודל מאתר של שיער סוכרתית

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

Pseudomonas aeruginosa ו biofilm Saccharomyces cerevisiae בתוך תאים Flow

RNA בידוד Pseudomonas aeruginosa מיישבים את מערכת העיכול Murine

אינדוקציה של מחלת שתל נגד מארח ו

שימוש בינוני כיח מלאכותית לבדיקת יעילות אנטיביוטי נגד

כרוני לטווח ארוך

Pseudomonas aeruginosa מושרה ריאות פגיעה דגם

לומד קהילות חיידקים

שלית Decidual אדם תרבויות איברים ללמוד זיהומים בבית הממשק האם והעובר

לדמיין את ההשפעות של כיח על פיתוח biofilm באמצעות מודל תאיים coverglass

מדבקת החיסון נגד הידבקות כרונית בנגיף הדלקת בפצע