מודלים אלה ניתן ליישם כדי להעריך היבטים שונים של התגובה ריפוי הפצע, כולל קינטיקה הסלולר ציטוקין וסגירה פצע. מודל ספוג PVA מאפשר התאוששות של מיליוני לויוציטים פצע לניתוחים פנוטיפיים ופונקציונליים, בעוד מודל כריתת עור הזנב מאפשר הדמיה קלה של פצעים ריפוי איטי. ניתן להשתמש במודלים של ספוג PVA ופצע זנב כרית בשילוב עם מצבים חולים, כגון סוכרת או דלקת ריאות, כדי להבין את השפעתם על ריפוי פצעים.
הדגמת ההליכים עם מרדית קריין תהיה ביל הנרי, עוזר מחקר מהמעבדה שלי. לפני תחילת הניסוי, השתמש במספריים כדי לחתוך יריעות של ספוג PVA לחתיכות של שמונה על שמונה על ארבעה מילימטר. יש להתייבש מחדש את חתיכות הספוג ב-PBS סטרילי במזווה למשך 10 דקות לפני שהם מעקרים את הספוגים ב-PBS.
כאשר הספוגים התקררו, אחסן את הספוגים שקועים ב- PBS בארבע מעלות צלזיוס. ביום ההליך, מניחים שישה ספוגים לכל חיה ניסיונית לתוך צלחת תרבות סטרילית במכסה המנוע של זרימה למינארית סטרילית, ומאשרים חוסר תגובה לצביטת בוהן בעכבר הרדמה, בן שמונה עד 12 שבועות, זכר, C57-Black/6. יש עוזר להשתמש קוצץ כדי להסיר את השיער לאורך הגב גזה סטרילית להחיל פתרון povidone-יוד לאזור מגולח פעמיים, ואחריו יישום אחד 70%אתנול.
לאחר מכן על העוזר להעביר את העכבר על וילונות כירורגיים סטריליים המונחים מעל כרית מחוממת. לובש כפפות סטריליות, להשתמש במקלפים כדי למשוך את העור הגבי מן הרקמה הבסיסית, ולהשתמש מספריים כירורגיים סטריליים לעשות חתך של שני סנטימטרים לאורך קו האמצע הגבי כשני סנטימטרים לפני הבסיס של הזנב. מחזיק את החתך פתוח עם מדפים סטריליים, להשתמש מספריים כירורגיים סטריליים, מעוקל, קהה קצה כדי ליצור כיס תת עורי לאורך הגב באחת העמדות כפי שצוין בדמות.
לאחר המספריים הוכנסו, לפתוח ולסגור את הטיפים פעמיים כדי ליצור כיס גדול מספיק כדי להחזיק ספוג מוכנס. כאשר הכיס נוצר, השתמש במספריים כירורגיים סטריליים כדי לסחוט בעדינות ספוג PVA אחד בצלחת התרבות כדי להסיר PBS עודף. לאחר מכן, הרם את הספוג בפינה אחת, ומוביל עם הפינה המוחזקת על ידי המספריים, מניחים את הספוג בכיס התת עורי.
כאשר כל ששת הספוגים הונחו כפי שהוכח, השתמש במטסים סטריליים כדי לצבוט את העור הגבי חתוך יחד, ולסגור את החתך עם שני קליפים פצע נירוסטה. לבידוד נוזלי ספוג PVA, יום עד 14 ימים לאחר ההשתלה, להסיר את סיכות הניתוח, ולפתוח את החתך עם מדפים שיניים. השתמש במספריים כדי להאריך את החתך לאורך קו האמצע הגבי, ולהשתמש במטסים כדי לחלץ ספוג אחד מכיסו התת עורי.
מניחים את הספוג לתוך החבית של מזרק חמישה מיליליטר מקונן בצינור תרבות 16 מיליליטר על קרח, ולהשתמש במספריים כדי לנתק כל רקמת חיבור שנותרה חסידה לפני השטח של הספוג, לפי הצורך. כאשר כל הספוגים הוצאו והועברו כפי שהוכח, צנטריפוגה צינור התרבות כדי לאסוף את נוזל הפצע. כדי לבודד את התאים מספוגי PVA, לאחר איסוף הספוגים כפי שהודגם זה בלבד, מקם אותם לתוך צינור חרוט 15 מיליליטר המכיל חמישה מיליליטר של מדיום איסוף HBSS.
כאשר כל הספוגים נאספו, decant ההשעיה ספוג לתוך שקית בלנדר 80 מיליליטר, ולתלות את התיק מן הצוהר של בלנדר ההנעה, כך משוטים יכה את הספוגים בינוני. הגדר את בלנדר ההנעה לרוץ על גבוה במשך 60 שניות, ולחץ להתחיל. כאשר הבלנדר נעצר, לסחוט את הספוגים בשקית כדי לשחרר לחלוטין את המדיום, ולהשתמש פיפטה להעביר את המדיום מתיק בלנדר בחזרה לתוך הצינור 15 מיליליטר.
כוונן את ההגדרות של בלנדר ההנעה לרוץ במשך 30 שניות על גבוה, ולהוסיף חמישה מיליליטר של בינוני לשקית בלנדר. חזור על תהליך הקיבה פעמיים נוספות לפני צנטריפוגה הצינור של המדיום שנאסף. גלולה אדומה של תאים ותאי דם אדומים צריכה להיות גלויה בתחתית הצינור חרוט.
מערבבים 900 מיקרוליטרים של מים מזוקקים עם התאים במשך שלוש עד חמש שניות לפני נטרול התזה עם 100 מיקרוליטרים של 10x PBS וארבעה מיליליטר של 1x PBS. לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה, ולתלות מחדש את גלולת התא הלבן במדיום המתאים לניתוח במורד הזרם. כדי ליצור פצע עור זנב, לאחר אישור חוסר תגובה קמצוץ בוהן בהדמה, שמונה עד 12 שבועות, זכר, C57-שחור / 6 עכבר, להשתמש גזה סטרילית להחיל פתרון povidone-יוד פעמיים לאתר הניתוח, ואחריו יישום אחד של 70%אתנול.
באמצעות סמן קבוע ותבנית מראש, עקוב אחר קטע של 10 על 3 מילימטר על פני הגב של הזנב, 10 מילימטרים מבסיס הזנב, והצב את העכבר על וילונות כירורגיים סטריליים. לובש כפפות כירורגיות סטריליות, להשתמש בלהב אזמל סטרילי לעשות חתך בעובי מלא לאורך הקצוות הימניים, התחתונים והשמאליים של אזור הפצע. באמצעות מדפים סטריליים, לקלף את העור excised מן הזנב, ולהשתמש מספריים כירורגיים סטריליים לחתוך את הקצה העליון של אזור הפצע.
השתמש גזה סטרילית כדי להפעיל לחץ על הפצע כדי לעצור את הדימום, ולהחיל סרט מחסום ספריי על מיטת הפצע. לאחר מכן, לצלם את הפצעים ממרחק קבוע במרווחי זמן קבועים, ולנתח את הצילומים על ידי ניתוח פלנימטרי כדי לקבוע את מדידות אזור הפצע. ניתוח השתלת ספוג PVA מייצר תגובה דלקתית מערכתית, כפי שהוכח על ידי אינדוקציה של IL-6 בפלזמה יום אחד לאחר הפציעה.
מספר התאים שניתן לשחזר מפצעי ספוג PVA עולה עם הזמן, עם נויטרופילים, מונוציטים, מקרופאגים הכוללים את האוכלוסיות העיקריות מסתננות הסלולר בתוך הספוגים. נויטרופילים מזוהים כתאים Ly6G חיוביים, סיגלק-F-שלילי. תאים סיגלקיים-F-חיוביים הם בעיקר אאוזינופילים.
גלינג על Ly6G שלילי, Siglec-F-תאים שליליים מאפשר זיהוי של מונוציטים חיוביים F4/80 מקרופאגים. תאים חיוביים F4/80 ניתן להבדיל עוד יותר על ידי ביטוי Ly6C שלהם להבחין מונוציטים דלקתיים גבוהים Ly6C ו Ly6C מונוציטים נמוכים נגזר מקרופאגים. מודל עור הזנב כריתה מספק חלופה לשיטת הביופסיה של פונץ' העור הגבי לחקר סגירת פצעים בעור מוצק חסר פרווה צפופה.
סגירת פצעים יכולה להיות מכומתת על ידי מדידת האזור של מיטת הפצע לאורך זמן. פצע עור הזנב ניתן לראות גם חתך על ידי ניתוח היסטולוגי באמצעות כתמי טריכרום של H ו- E ו- Masson. בתמונות אלה, השוליים האחוריים של העור החותך מסומנים על ידי ראשי החץ על פני הגב של הזנב.
כדי להבין ריפוי פצע במצב יציב, תרכובות טיפוליות או התערבויות יכול להיבדק גם באמצעות הזריקה שלהם ישירות לתוך ספוג PVA או באמצעות משלוח למיטה פצע הזנב.
