אנו להכיר מימון מאת DFG (1116/17-1), את לייפציג בבית הספר למדעי הטבע "BuildMoNa" (GSC 185). עבודה זו תמכה באמצעות הפרויקט פראונהופר Attract 601 683. T. H מאשר מימון הקרן החברתית האירופאית (ESF-100077106).

1-הכנת n HTs הערה: כאן, n מציין את מספר שונה גדילי DNA יחיד מעורב היווצרות הצינורות סליל בגודל מסוים. עבור n = 8, שמונה גדילי DNA שונה יחיד להמציא טבעת יחידה.
<ol><li>רכישה DNA רצף (HPLC טוהר כיתה או גבוה יותר) מן סינתזה הדנ א מתאים שירות או לבצע סינתזה באיכות גבוהה, טיהור (למופת רצפים נתון טבלה 1).</li>
	<li>Resuspend lyophilized oligonucleotides מים מטוהרים, בצע resuspension נוספת השלבים במדריך המתאים מהחברה. התאימו את כמות המים בריכוז הסופי של מיקרומטר 200.</li>
	<li>לקבוע ריכוז של ה-DNA בודד קווצות כדי לוודא שהערכים שניתנו על ידי המפיץ (למשל, באמצעות ספקטרוסקופית UV-Vis ב-260 ננומטר) מאז סטויכיומטריה המדויק הוא קריטי עבור תהליך ההרכבה. לחשב את הריכוז של oligonucleotides, לוקח בחשבון את המשקל הסגולי טוחנת, המקדם הכחדה עבור כל oligonucleotide דנ א חד גדילי. 
	הערה: הכחדה מקדם ערכי מטבעו להשתנות עבור רצפים שונים לבין מתוארים בתיעוד של DNA שנרכש באופן מסחרי. הם גם ניתן לחשב על פי המודל הקרוב ביותר-שכן תוך שימוש במספר כלים מקוונים זמינה בחופשיות. כדי לקיים מגוון ספקטרומטר ליניארי, שקול דילול המדגם המשמש לקביעת ריכוז.</li>
	<li>משתמש של micropipette, לערבב ה-DNA גדילי, כל באותו ריכוז-אין מיכל מתאים thermocycler (למשל, צינור PCR 200 µL) ליצור את הרצוי n HTs (מאגר הסופי תנאים: 1xTE (10 מ מ EDTA טריס ו- 1 מ מ, pH 8), MgCl 12.5 מ מ 2). 
	הערה: דגימות DNA הסופית n HT מורכב n - 1 קווצות, U 1 &#8722; U n &#8722; 1 וגדיל אחד של n T. הריכוז לכל גדיל יכול להשתנות sub-micromolar על יותר מ- 10 מיקרומטר, בהתאם לצרכים של המשתמש (למשל, &#60; 1 מיקרומטר לכל גדיל של דילול עוקבות להתבונן חוטים יחיד או ריכוז גבוה לבדיקת איכות רשת צפופה מכניקה).</li>
	<li>Hybridize של n. השודדים ב thermocycler (דנטורציה 10 דקות ב 90 מעלות צלזיוס, עם ירידה מהירה הבאים עד 65 מעלות צלזיוס; איטי בטמפרטורה ירידה מ- 65 ° C עד 55 ° C, עם בסיס משלימים זיווג 20 צעדים בטמפרטורה של -0.5 K למשך 30 דקות בכל אחד מהם; ו ירידה מהירה מ- 55 ° צלזיוס עד 20 ° C); ראה איור 2A. 
	הערה: השלבים ירידה איטית מ- 65 ° C יכול מאורכים כדי להאריך את אורך צינור הממוצע; עם זאת, הירידה מהירה הבאים עד 20 ° C חיוני למנוע הצבירה של צינורות polymerized.</li>
	<li>אחסן hybridized n HTs עד 3 שבועות ב 4 ° C ללא השפלה לזיהוי. 
	הערה: עבור קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ, שכותרתו השודדים n הן hybridized על ידי (חלקית) החלפת U1 עם ששונה U1-Cy3 (טבלה 1). משכי זמן ארוכים יותר תצפית, התוספת של סוכנים אנטי-הלבנת הוקמה מומלץ.</li>
	<li>בקפידה לדלל את הדגימה לריכוז הסופי הרצוי (למשל, 4 מיקרומטר עבור רשתות או 20 ננומטר על תצפיות יחיד-פילמנט) באמצעות המאגר לדוגמה, במידת הצורך. כדי למזער שגיאות אפשריות מקורות, להרכיב דגימות-הריכוז הסופי הרצוי.</li>
</ol> 2. להטיה Rheology גאומטריה <ol><li>בחר הולם (צלחת צלחת או חרוט-plate) עבור rheometer ההטיה דינמי. אחסון קטן (קרי, מתחת 200 µL), להשתמש הגיאומטריה פלייט-חרוט.</li>
	<li>לטעון את דגימות rheometer דינמי הטיה.</li>
	<li>Passivate הממשק מים אוויר של המדגם, סביבה באמצעות השלבים הבאים כדי למנוע אידוי תופעות אפשריות.
	<ol><li>המקיפים את הדגימה עם 2.5 מ של האמבטיה מאגר מדגם.</li>
		<li>הוספה של חומרים פעילי שטח מתחת הריכוז מיצלה.</li>
		<li>השתמש מזרק המילטון להקיף את הדגימה עם ליפופרוטאין להימנע ממגע ישיר של המדגם באוויר.</li>
	</ol></li> <li>חותם תא הדגימה עם כובע מצויד ספוגים רטובים, במידת האפשר, עם אמבט מים נוספים (לא בקשר עם המדגם) בכדי לדכא את אידוי.</li>
	<li>להתחיל את המדידה באמצעות תוכנה ספציפית rheometer בטמפרטורת החדר; לחלופין, לבצע את המדידה בטמפרטורות שונות, כגון 37 ° C (אם יש צורך בתנאים פיזיולוגיים). 
	הערה: קירור המדגם לעתים קרובות היא מלווה את עיבוי של אדי מים מן האוויר שמסביב, ואילו חימום מוביל אידוי משופרת. שני אפקטים ללא שליטה יכול לשנות את הריכוז של המדגם, אז כל המדידות בסדרה יש לבצעו בטמפרטורה קבועה.</li>
	<li>לאפשר את הדגימה כדי equilibrate עבור 2 h בטמפרטורת החדר. ההתפתחות זמן יתועד עם מטאטא זמן (נתונים אחת הצבע לדקה; זן וγ = 5 %); בתדר f = 1 הרץ).</li>
	<li>למדוד תכונות מכאניות עם הפרוטוקולים המבחן הרצוי. להתחיל עם סדרה של תדירות מטאטא (f-מטאטא) כי הם השאירו את הדגימה ללא פגע ולאפשר מדידות יותר. 
	הערה: בנוסף, קצר f-מטאטא תיעשנה בחוץ לפני ואחרי מדידות זמן רב יותר (כגון ארוך f-מטאטא ברזולוציה גבוהה יותר) כדי לוודא כי המדגם נותר ללא שינוי לאורך כל פרוטוקול מלא מדידה.
	<ol><li>בצע קצר f-סריקה (למשל, וγ = 5%; f = 0.01 הרץ עד 30 הרץ; נקודות נתונים 5 לכל עשור).</li>
		<li>לבצע ארוך f-סריקה (למשל, וγ = 5%; f = 0.001 הרץ עד 30 הרץ; 21 נקודות נתונים לכל עשור); המשטר בתדר נמוך יכול להיות מושמט אם לא הכרחי לצמצם את זמן מדידה.</li>
		<li>לבצע קצר f-לטאטא.</li>
		<li>לבצע סריקה וγ (למשל, f = 1 הרץ; וγ = 0.0125% עד 100%; נקודות נתונים 20 לכל עשור). 
		הערה: השתמש קצר של f - לטאטא קודם, כפי שהוא בדרך כלל בקנה אחד עם הקודם f - מטאטא כי רשתות בדרך כלל להיקרע במהלך γ-סריקה או ניתוק של הלוחות. לחלופין, השתמש γ-שיפוע (למשל, = 0.025 s -1, t = 60 s); עם זאת, רמפות דורשות בדרך כלל לשנות את מצב המנוע, אז עוקבות קצר f-הרייטינג סולפה.</li>
	</ol></li> <li>סל ו/או חלקה הנתונים הגולמיים עם קרנל גאוסיאנית.</li></ol>
 3. בסיוע פלורסצנטיות ניתוח של ה-DNA חישול µL <ol><li>aliquots 8 להכין 12 עבור כל דגימה באמצעות 1-4 מיקרומטר DNA לכל סטרנד, 12.5 מ"מ MgCl 2 1 x מאגר TE ו 1 x חומצת גרעין ג'ל כתם של דימתיל סולפוקסיד 10,000 x מניות. הפוך פקד שלילי עם שום דנ א, אך כוללות חומצות גרעין ג'ל הכתם.</li>
	<li>להעביר את aliquots צלחת PCR בזמן אמת, לאטום עם סרט דביק (למשל, צלחת 96-ובכן התגובה). 
	הערה: בטמפרטורות גבוהות בשימוש התרמי חישול פרוטוקולים יתפוגג דגימות. לפיכך, ודא כי הבארות חתומות באופן הדוק עם סרט דביק כדי למנוע עלייה אידוי וריכוז מים, במיוחד במהלך ניסויים ארוכי טווח.</li>
	<li>Centrifuge את הצלחת ב g x 100 עבור 1 דקות בטמפרטורת החדר, כדי להסיר את בועות הגז; אם להרחיב בועות הגז, לא יכול להיות מנותח הבארות.</li>
	<li>לטעון את הצלחת אטום לתוך מערכת ה-PCR כמותי בזמן אמת-</li>
	<li>להפעיל תוכנית מחזק. Denature ה-DNA ב 90 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות ירידה הטמפרטורה במהירות כדי 72 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הקטנת הטמפרטורה באיטיות ב- 0.5 מעלות כל 30 דקות. אחרי האות נבלם, להאיץ את הרמפה טמפרטורה. 
	הערה: 72 ° C הוא מספיק מעל הטמפרטורה הכלאה אמיתי; כך, האות נרשם על טווח טמפרטורות רחב המתאים לקביעת טווח הטמפרטורה הדרושים.</li>
	<li>לוודא המכסה של הצנטרפוגה מחממת עד לפחות 100 ° C כדי למנוע עיבוי מדגם המתאיידים בסרט דבק.</li>
	<li>במהלך ההרכבה, לרגש את הדגימות עם לייזר ארגון-יון-488 ננומטר ולגלות את זריחה ב- 550 ננומטר בעת שימוש כתם ג'ל חומצת גרעין (או spectrally דומה). על צבעים אחרים, בחרו שילוב המתאימים עירור/פליטה. למדוד את האות פלורסצנטיות לעיתים קרובות ככל האפשר כדי להגדיל הכולל איכות אות באמצעות המצלמה המובנית. 
	הערה: כאן, מדידות נלקחו כל 9 ס</li>
	<li>אם נמס מראש, חישול תוכניות מיושמים, להשתמש בתוכנה שסופקו כדי לנתח את הנתונים. אם לא, להחסיר את הערך הממוצע הקודם מ הערך הממוצע עבור כל שלב טמפרטורה להשגת השינוי היחסי של האות פלורסנט.</li>
</ol> 4. AFM הדמיה <ol><li>קליב נציץ (למשל, נציץ &#34; V1 &#34;) על ידי הצמדת זמינים מסחרית דבק לשדוד אותו; להסיר את השכבה העליונה של נציץ.</li>
	<li>שימוש של micropipette, להפקיד הקבועים מראש n HT במ ג 2 + המכיל מאגר מתקפלים על מישה טרי cleaved ולתת לו להסתפק 10 דקות</li>
	<li>לסובב את הדגימות במרווחי זמן קצר 3-s-g x 2,000 על צנטריפוגה שולחן קטן כדי להסיר את הנוזל הנותר. מספר n. השודדים עדיין צריכה להיות מחוברת אל פני השטח נציץ.</li>
	<li>להשתמש טיפ זיז עם מנדנד גבוהה (למשל, 54 Nm -1) ולקבוע את תדר תהודה עם התוכנה AFM פנימי.</li>
	<li>שיא הפרופיל גובה עם AFM באוויר ב הקשה מצב בקצבי סריקה נמוך (למשל, 1 קו/s) כדי למנוע פגיעה או ועקרו מבתיהם את n HTs.</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

כדי להשיג רשתות בנוי כראוי, בהרכבת הנאנו DNA היא צעד חיוני. שגיאות במהלך תהליך סינתזה השפעה שלילית על איכות צינור; לכן, מומלץ כי hplc, קורס או תהליך מחמירים יותר לשמש כדי לטהר את oligonucleotides. מאז היווצרות דיסקרטית במקום צינוריות DNA צבור, וכן הפצה האורך שלהם, תלוי סטויכיומטריה equimolar של oligonucleotides בוחר?...

בשל התנהגויות מורכבות מופעל על-ידי תכונות מכניות הייחודי שלהם, פולימרים semiflexible הם אבני הבניין הבסיסיות של מרכיבי החיים. בניגוד פולימרים גמיש, פולימרים semiflexible לאמץ תצורה פרושות עקב שלהם נוקשות עמוד שדרה שאינו נעלם תוך שנותרו על תנודות תרמית חזקה1. לפיכך, מודלים סטוכסטיים גרידא ניתן להחילם על התנהגויות שלהם, כמו עם הקצוות של פולימרים גמיש לחלוטין או נוקשה. 3,4 2,מודל שרשרת תולעת כביכול פותחה כדי לכמת את נוקשות זו באמצעות lp, אשר הוא קבוע הדעיכה של המתאם משיק-משיק לאורך הלהט4. אם lp הוא להשוות אורך מתאר (lc) של חוט הלהט, הפולימר נחשב semiflexible1. מקביל והקטבים של אוהל, הסדרי שלהם רשתות או חבילות מייצבת את כל מערכת קולקטיבית על השברים בנפח נמוך, המוביל אל viscoelastic יוצא דופן מאפיינים5,6,7, 8,9. מבנים אלה מספקים בכללותו גבוהה elasticities mesh בגדלים10, שמירה על תקינות מכנית תוך עדיין הקלת המפזרת ותהליכים הובלה פעילה. מאפיין זה מתאים במיוחד עבור מערכות ביולוגיות כגון את שלד התא או את מטריצה חוץ-תאית, אך הוא גם משמש מזון-11,1,-הנדסה-12.
הולך מרכיבי החיים מעבר את משמעותם, חשוב לבחון באופן מקיף המאפיינים הפיזיים של מבנים אלה כדי יש את הכלים לפתח חומרים ביונים או hydrogels רומן. במונחים של פולימרים semiflexible, זה מרמז על הקביעה שיטתית של המאפיינים קולקטיבית של רשתות הנובע יחיד-פילמנט מאפיינים כגון lp והפיתוח של מסגרת תיאורטית תיאורי. במחקרים חלוצית, אקטין הסלולר ביופולימרים הוקמה מערכת מודל עבור פולימרים semiflexible והוא עדיין נחשב את תקן זהב5,13,14,15 , 16 , 17. עם זאת, מחקרים ממצה מוגבלות במערכת זו מאחר שהם קשורים למאפייני הטבועה של חלבון זה. גישות תיאורטיות שונות שכיוונתם בניין תיאור של ההתנהגויות מכני לא טריוויאלי ברמת יחיד-פילמנט, הובילו בעיקר שונים קנה מידה תחזיות עבור התלות של מישור אלסטיים לינאריים הטיה המודולוס, G 0 (קרי, "הגמישות" של הרשת), ריכוז (c), lp6,7,13,14, 15,18,19,20,21,22,23. בזמן הריכוז שינוי קנה מידה נגיש ניסויים עם מבוססי אקטין או מערכות אחרות דגם ובזמן תחזיות תיאורטיות היה בקפדנות לאמת13,16,24, 25, שינוי קנה מידה ביחס lp נותר נגיש השפעול. עם זאת, זו מגבלה משמעותית מאז lp הוא גם משתנה בלתי-תלוי מה הכמות המכונן של פולימרים semiflexible.
מגבלה זו המרכזי, טבעי המוטלים על-ידי קבוע lp של אקטין או פולימרים אחרים נגזר ביולוגית כגון קולגן לאחרונה נפתרה על ידי העסקת צינורות DNA מבוסס-אריח, אשר tunable תכונותיהם מכני 9 , 26 , 27 , 28. שייתכנו שינויים הארכיטקטורות של הצינורות (למשל, מספר שונה של DNA בוחרים קווצות בתוך הזירה היחידה) תשואה של ערכים שונים עבור lp, אשר ניתן להעריך באמצעות מיקרוסקופ פלורסצנטיות, על-ידי ניתוח שפופרת אחת המשתנות או הערכת התצורות מעוקל של מספר צינורות מודבקת, כפי שתואר לעיל9,28. ניתוחים אלה חשף כי ערכיp lשל אוכלוסיות שונות צינור משתנות מעל סדר גודל אחד או יותר, טכניקות הערכה שונים להניב תוצאות עקביות9,28.
באופן מפתיע, גודל כולל הרמה אלסטי ליניארי הטיה מודולוס G0 הריכוז, lp דווחה להיות עקביים עם כל גישות תיאורטיות קודמות 9, בפרט הפגנת הרבה יותר תלות החזוי על lpחזק. ממצאים אלה מדגישים את הערך של מערכת מודל חדש ללמוד את התכונות המרכזיות של פולימרים semiflexible. העסקת n-סליל ה-DNA צינורות מרחיב באופן דרמטי את היקף החקירות האלה. לא רק יכולים lp להיות בחופשיות מגוונים מבלי לשנות את החומר הבסיסי, אבל הטבע לתכנות הטבועה של ה-DNA ניתן לאפשר בחינה שיטתית של רכיבים נוספים, כגון crosslinks או תהליכי מיתוג קינטי. בנוסף, הצינורות האלה הם מסיסים במים ויציב, בניגוד לרוב חלבונים, pH הולם ותנאי יוניים למשך מספר שבועות, ללא השפלה לזיהוי9.
להרכיב את הצינורות האלה, קבוצה בדידה של ה-DNA oligonucleotides משמש, שכל אחד מהם מכיל שתי קבוצות המחשבים חולקים רצפי הבסיס משלימים שני הגדילים הסמוכים (עקב רצפים ספציפיים, גדיל אחד לא יכול ליצור מבנים כמו סיכות לשיער). רצפים משלימים hybridize בצורה מחזורית, ויוצרים טבעות סגור, חצי חופפות של n מחוברים מקטעי כפול-הסליל (איור 1A ו- B). טופס אלה טבעות בקוטר דיסקרטית (איור 1C), ואת התצורה שלהם חופפות חצי חושף קצוות דביקים צירית משלימים בקצוות דביקים של טבעת אחרת. תוספת זו בררני של התאמת oligonucleotides מפעיל את הערמה של הטבעות, שמוביל הפילמור יעיל של צינורות סליל ה-DNA filamentous בגודל n (nHT). אורכי מתאר שלהם בדרך כלל למדוד מספר מיקרונים אורך, פריסתם אורך דומה לזו של אקטין חוטים9,26,27,28. הוכח עבור צינורות DNA דומה כי הם אכן מציגים הפילמור קינטיקה דומים לאלה של אקטין חוטים ו- microtubules<su></su>p class = "xref" > 29. בהתאם מספר n של גדילי DNA בודדים ממציא את המבנה הבסיסי טבעת, הארכיטקטורה nHT, וכן את היקף ואת קוטר, יכולים להיות מכאנית ופיקודית מגוונים. שימוש גדילי DNA יותר מגביר את היקף הטבעות/הצינורות, משתנה המתאימה הקפיצות תכונות מכאניות לערכים גבוהים יותר lp (איור 1C), המקביל קשיחות גבוהה יותר. בסולם mesoscopic, אלה ערכים גדולים יותר שלp lמתרגמים פחות כפופות הייצורים החיים בשל הקשיחות גבוה יותר (איור 1D ו- E).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="667">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:169px;">AFM cantilever ACTA</td>
			<td style="width:196px;">AppNano</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">AFM - NanoWizard 3</td>
			<td style="width:196px;">JPK Instruments</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">CCD camera</td>
			<td style="width:196px;">Andor</td>
			<td style="width:123px;">iXon DV887</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">DMSO</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">D2650</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:169px;">DNA oligonucleotides</td>
			<td style="width:196px;">Biomers.net</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:180px;">For sequences see Table 1</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:169px;">DNA Cy3-labeled oligonucleotides</td>
			<td style="width:196px;">Biomers.net</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:180px;">For sequence see Table 1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">EDTA</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">E-9884</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:169px;">Epi-fluorescence micro-scope</td>
			<td style="width:196px;">Leica</td>
			<td style="width:123px;">DM-IRB</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:169px;">MgCl2</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">M-8266</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:169px;">Mica &#34;V1&#34;, 12 mm round</td>
			<td style="width:196px;">Plano GmbH</td>
			<td style="width:123px;">50-12</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:169px;">MicroAmp&#174; Fast Optical 96-Well Reaction Plate</td>
			<td style="width:196px;">Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td style="width:123px;">4346907</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:169px;">MicroAmp&#174; Optical Adhesive Film</td>
			<td style="width:196px;">Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td style="width:123px;">4306311</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:169px;">NanoDrop 1000 Spectrophotometer</td>
			<td style="width:196px;">Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">100x objective</td>
			<td style="width:196px;">Leica5</td>
			<td style="width:123px;">506168</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:169px;">Purified water</td>
			<td style="width:196px;">Merk Millipore - Milli-Q &#38; Elix</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Sapphire PCR tubes</td>
			<td style="width:196px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:123px;">683271</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:169px;">TProfessional Standard PCR Thermocycler</td>
			<td style="width:196px;">Core Life Sciences Inc.</td>
			<td style="width:123px;">070- Standard</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="42" style="height:42px;width:169px;">7900HT Fast Real-Time PCR System</td>
			<td style="width:196px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:123px;">4351405</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Rheometer</td>
			<td style="width:196px;">TA Instruments</td>
			<td style="width:123px;">ARES</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:169px;">SYBR&#174; Green I nucleic acid gel stain</td>
			<td style="width:196px;">Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td style="width:123px;">S7567</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:169px;">Tris</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">T4661</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:169px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:196px;">Sigma-Aldrich Co.</td>
			<td style="width:123px;">X-100</td>
			<td style="width:180px;">Suppresses evaporation of sample at air-water interface</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dna nanotubes as a versatile tool to study semiflexible polymers

תכונות מכאניות מורכבות, מבוסס פולימר חומר רך, כגון תאים או רשתות ביופולימרים, יכול להיות מובן במסגרת אף הקלאסית של פולימרים גמיש ולא של מוטות נוקשה. חוטים המשמש כבסיס להישאר פרושות עקב שלהם נעלם ללא עמוד שדרה נוקשות, אשר הוא לכמת דרך האורך ההתמדה (lp), אבל הם גם הפניה תרמית חזקה. נוקשות כיפוף סופיים שלהם מוביל מכניקה קולקטיבית ייחודי, לא טריוויאלי של רשתות בתפזורת, המאפשר הקמת פיגומים יציב על השברים בנפח נמוך תוך מתן רשת גדול מידות. העיקרון הבסיסי הזה נפוצה בטבע (למשל, תאים או רקמות), שמירה על איכות גבוהה בתוכן מולקולרית, ובכך להקל דיפוזיה או הובלה פעילה. בשל השלכות הביולוגי שלהם יישומים טכנולוגיים פוטנציאליים hydrogels מסתיימים, שהיו פולימרים semiflexible המחקר ניכר. עם זאת, חקירות מובנים נותר מאתגר מאז הם הסתמכו על פולימרים טבעיים, כגון חוטים אקטין, אשר אינם tunable בחופשיות. למרות מגבלות אלה, בגלל חוסר של פולימרים סינתטיים מכנית tunable, semiflexible, חוטים אקטין הוקמו מערכת מודל נפוץ. מגבלה משמעותית היא כי כמות מרכזי lp לא יכול להיות בחופשיות מכוון כדי לחקור את ההשפעה שלו על מבנים בצובר מאקרוסקופית. מגבלה זו נפתרה על ידי העסקת מבנית לתכנות צינוריות דנ א, המאפשר שינוי מבוקרת של הקשיחות נימה. הם נוצרו באמצעות עיצובים מבוסס-אריח, שבו קבוצה בדידה של גדילים משלימים חלקית hybridize במבנה הטבעת עם היקף דיסקרטית. טבעות אלו כוללים קצוות דביקים, המאפשר הפילמור יעיל לתוך חוטים מספר מיקרונים אורך, ולהציג קינטיקה הפילמור דומים כמו biopolymers טבעי. בשל המכניקה שלהם לתכנות, הצינורות האלה הם מגוונים, הרומן כלים לחקור את ההשפעה של lp בהמולקולה יחיד, כמו גם היקף בצובר. בניגוד אקטין חוטים, הם נשארים יציבים בשבועות, ללא ניוון הבולטים, הטיפול וסופן וזהובה.

ההרכבה של צינוריות הדנ א באמצעות רמפה טמפרטורה (איור 2) היא שיטה אמינה. כדי ליצור פולימרים semiflexible מלאכותיים אלה. פולימרים אלה בעלי מאפיינים דומים לכלים המקבילים המתרחשים באופן טבעי, כגון חוטים אקטין, אך מספק מסגרת ניסיונית הרבה יותר רחב שכן תכונות מכניות ש...

Watch this Scientific Journal Video about DNA Nanotubes as a Versatile Tool to Study Semiflexible Polymers at JoVE.com

DNA Nanotubes as a Versatile Tool to Study Semiflexible Polymers

פולימרים semiflexible להציג תכונות מכניות ייחודי המוחלות בהרחבה על ידי מערכות החיים. עם זאת, מחקרים שיטתיים על biopolymers מוגבלות מאז מאפיינים כגון הפולימר קשיחות אינם נגישים. כתב יד זה מתאר איך מגבלה זו הוא מצויין לתכנות צינוריות דנ א, הפעלת ניסיוני מחקרים על ההשפעה של פילמנט קשיחות.

ה-DNA צינוריות כמו כלי רב-תכליתי ללמוד פולימרים Semiflexible

Mechanical properties of complex, polymer-based soft matter, such as cells or biopolymer networks, can be understood in neither the classical frame of ...

dna-nanotubes-as-a-versatile-tool-to-study-semiflexible-polymers

Research

JoVE Journal

Bioengineering

6.8K Views.  Fraunhofer Institute for Cell Therapy and Immunology. פולימרים semiflexible להציג תכונות מכניות ייחודי המוחלות בהרחבה על ידי מערכות החיים. עם זאת, מחקרים שיטתיים על biopolymers מוגבלות מאז מאפיינים כגון הפולימר קשיחות אינם נגישים. כתב יד זה מתאר איך מגבלה זו הוא מצויין לתכנות צינוריות דנ א, הפעלת ניסיוני מחקרים על ההשפעה של פי...

Video: DNA Nanotubes as a Versatile Tool to Study Semiflexible Polymers

Shape Memory Polymers for Active Cell Culture

Shape memory polymers (SMPs) are a class of "smart" materials that have the ability to change from a fixed, temporary shape to a pre-determined permanent shape upon the application of a stimulus such as heat1-5. In a typical shape memory cycle, the SMP is first deformed at an elevated temperature that is higher than its transition temperature, Ttrans [either the melting temperature (Tm) or the glass transition temperature (Tg)]. The deformation is elastic in nature and mainly leads to a reduction in conformational entropy of the constituent network chains (following the rubber elasticity theory). The deformed SMP is then cooled to a temperature below its Ttrans while maintaining the external strain or stress constant. During cooling, the material transitions to a more rigid state (semi-crystalline or glassy), which kinetically traps or "freezes" the material in this low-entropy state leading to macroscopic shape fixing. Shape recovery is triggered by continuously heating the material through Ttrans under a stress-free (unconstrained) condition. By allowing the network chains (with regained mobility) to relax to their thermodynamically favored, maximal-entropy state, the material changes from the temporary shape to the permanent shape.
Cells are capable of surveying the mechanical properties of their surrounding environment6. The mechanisms through which mechanical interactions between cells and their physical environment control cell behavior are areas of active research. Substrates of defined topography have emerged as powerful tools in the investigation of these mechanisms. Mesoscale, microscale, and nanoscale patterns of substrate topography have been shown to direct cell alignment, cell adhesion, and cell traction forces7-14. These findings have underscored the potential for substrate topography to control and assay the mechanical interactions between cells and their physical environment during cell culture, but the substrates used to date have generally been passive and could not be programmed to change significantly during culture. This physical stasis has limited the potential of topographic substrates to control cells in culture.
Here, active cell culture (ACC) SMP substrates are introduced that employ surface shape memory to provide programmed control of substrate topography and deformation. These substrates demonstrate the ability to transition from a temporary grooved topography to a second, nearly flat memorized topography. This change in topography can be used to control cell behavior under standard cell culture conditions.

A method for developing cell culture substrates with the ability to change topography during culture is described. The method makes use of smart materials known as shape memory polymers that have the ability to memorize a permanent shape. This concept is adaptable to a wide range of materials and applications.

זיכרון צורה פולימרים לתרבות התא הפעיל

Shape memory polymers (SMPs) are a class of "smart" materials that have the ability to change from a fixed, temporary shape to a pre-determined permanent ...

The Three-Dimensional Human Skin Reconstruct Model: a Tool to Study Normal  Skin and Melanoma Progression

Most in vitro studies in experimental skin biology have been done in 2-dimensional (2D) monocultures, while accumulating evidence suggests that cells behave differently when they are grown within a 3D extra-cellular matrix and also interact with other cells (1-5). Mouse models have been broadly utilized to study tissue morphogenesis in vivo. However mouse and human skin have significant differences in cellular architecture and physiology, which makes it difficult to extrapolate mouse studies to humans. Since melanocytes in mouse skin are mostly localized in hair follicles, they have distinct biological properties from those of humans, which locate primarily at the basal layer of the epidermis. The recent development of 3D human skin reconstruct models has enabled the field to investigate cell-matrix and cell-cell interactions between different cell types. The reconstructs consist of a "dermis" with fibroblasts embedded in a collagen I matrix, an "epidermis", which is comprised of stratified, differentiated keratinocytes and a functional basement membrane, which separates epidermis from dermis. Collagen provides scaffolding, nutrient delivery, and potential for cell-to-cell interaction. The 3D skin models incorporating melanocytic cells recapitulate natural features of melanocyte homeostasis and melanoma progression in human skin. As in vivo, melanocytes in reconstructed skin are localized at the basement membrane interspersed with basal layer keratinocytes. Melanoma cells exhibit the same characteristics reflecting the original tumor stage (RGP, VGP and metastatic melanoma cells) in vivo. Recently, dermal stem cells have been identified in the human dermis (6). These multi-potent stem cells can migrate to the epidermis and differentiate to melanocytes.

In this report, we describe the three-dimensional skin reconstruct model which mimics human skin in architecture and composition. Melanocyte physiology, melanoma progression and the fate of dermal stem cells have been investigated using the skin reconstruct model. The model is also useful as a preclinical tool for drug assessment.

עור תלת ממדי האדם לשחזר דגם: ככלי מחקר עור רגיל התקדמות מלנומה

Most in vitro studies in experimental skin biology have been done in 2-dimensional (2D) monocultures, while accumulating evidence suggests that cells ...

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic valve leaflets are composed of interstitial cells suspended within an extracellular matrix (ECM) and are lined with an endothelial cell monolayer. The valve withstands a harsh, dynamic environment and is constantly exposed to shear, flexion, tension, and compression. Research has shown calcific lesions in diseased valves occur in areas of high mechanical stress as a result of endothelial disruption or interstitial matrix damage1-3. Hence, it is not surprising that epidemiological studies have shown high blood pressure to be a leading risk factor in the onset of aortic valve disease4. 
The only treatment option currently available for valve disease is surgical replacement of the diseased valve with a bioprosthetic or mechanical valve5. Improved understanding of valve biology in response to physical stresses would help elucidate the mechanisms of valve pathogenesis. In turn, this could help in the development of non-invasive therapies such as pharmaceutical intervention or prevention. Several bioreactors have been previously developed to study the mechanobiology of native or engineered heart valves6-9. Pulsatile bioreactors have also been developed to study a range of tissues including cartilage10, bone11 and bladder12. The aim of this work was to develop a cyclic pressure system that could be used to elucidate the biological response of aortic valve leaflets to increased pressure loads. 
The system consisted of an acrylic chamber in which to place samples and produce cyclic pressure, viton diaphragm solenoid valves to control the timing of the pressure cycle, and a computer to control electrical devices. The pressure was monitored using a pressure transducer, and the signal was conditioned using a load cell conditioner. A LabVIEW program regulated the pressure using an analog device to pump compressed air into the system at the appropriate rate. The system mimicked the dynamic transvalvular pressure levels associated with the aortic valve; a saw tooth wave produced a gradual increase in pressure, typical of the transvalvular pressure gradient that is present across the valve during diastole, followed by a sharp pressure drop depicting valve opening in systole. The LabVIEW program allowed users to control the magnitude and frequency of cyclic pressure. The system was able to subject tissue samples to physiological and pathological pressure conditions. This device can be used to increase our understanding of how heart valves respond to changes in the local mechanical environment.

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

A cyclic pressure bioreactor capable of subjecting heart valve tissue to physiological and pathological pressure conditions has been designed. A LabVIEW program allows users to control pressure magnitude, amplitude and frequency. This device can be used to study the mechanobiology of heart valve tissue or isolated cells.

עיצוב של bioreactor לחץ על מחזורי Ex Vivo מחקר של מסתמי הלב אבי העורקים

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery

Nucleic acid-based vaccination is a topic of growing interest, especially plasmid DNA (pDNA) encoding immunologically important antigens. After the engineered pDNA is administered to the vaccines, it is transcribed and translated into immunogen proteins that can elicit responses from the immune system. Many ways of delivering DNA vaccines have been investigated; however each delivery route has its own advantages and pitfalls. Skin tattooing is a novel technique that is safe, cost-effective, and convenient. In addition, the punctures inflicted by the needle could also serve as a potent adjuvant. Here, we a) demonstrate the intradermal delivery of plasmid DNA encoding enhanced green fluorescent protein (pCX-EGFP) in a mouse model using a tattooing device and b) confirm the effective expression of EGFP in the skin cells using confocal microscopy.

Skin tattooing is a potent and safe way to delivery DNA vaccine intradermally. Here, a DNA plasmid encoding EGFP is delivered by tattooing to the skin of a laboratory mouse, and the expression of EGFP in the skin cells is then inspected by confocal microscopy.

עור קעקוע כגישה חדשה לאספקת חיסון ה-DNA

Nucleic acid-based vaccination is a topic of growing interest, especially plasmid DNA (pDNA) encoding immunologically important antigens. After the ...

A Versatile Automated Platform for Micro-scale Cell Stimulation Experiments

Study of cells in culture (in vitro analysis) has provided important insight into complex biological systems. Conventional methods and equipment for in vitro analysis are well suited to study of large numbers of cells (&ge;105) in milliliter-scale volumes (&ge;0.1 ml). However, there are many instances in which it is necessary or desirable to scale down culture size to reduce consumption of the cells of interest and/or reagents required for their culture, stimulation, or processing. Unfortunately, conventional approaches do not support precise and reproducible manipulation of micro-scale cultures, and the microfluidics-based automated systems currently available are too complex and specialized for routine use by most laboratories. To address this problem, we have developed a simple and versatile technology platform for automated culture, stimulation, and recovery of small populations of cells (100 - 2,000 cells) in micro-scale volumes (1 - 20 &mu;l). The platform consists of a set of fibronectin-coated microcapillaries ("cell perfusion chambers"), within which micro-scale cultures are established, maintained, and stimulated; a digital microfluidics (DMF) device outfitted with "transfer" microcapillaries ("central hub"), which routes cells and reagents to and from the perfusion chambers; a high-precision syringe pump, which powers transport of materials between the perfusion chambers and the central hub; and an electronic interface that provides control over transport of materials, which is coordinated and automated via pre-determined scripts. As an example, we used the platform to facilitate study of transcriptional responses elicited in immune cells upon challenge with bacteria. Use of the platform enabled us to reduce consumption of cells and reagents, minimize experiment-to-experiment variability, and re-direct hands-on labor. Given the advantages that it confers, as well as its accessibility and versatility, our platform should find use in a wide variety of laboratories and applications, and prove especially useful in facilitating analysis of cells and stimuli that are available in only limited quantities.

We have developed an automated cell culture and interrogation platform for micro-scale cell stimulation experiments. The platform offers simple, versatile, and precise control in cultivating and stimulating small populations of cells, and recovering lysates for molecular analyses. The platform is well suited to studies that use precious cells and/or reagents.

פלטפורמה אוטומטית צדדי לניסויים בגירוי תא מיקרו בקנה מידה

Study of cells in culture (in vitro analysis) has provided important insight into complex biological systems. Conventional methods and equipment for in ...

A Microfluidic Chip for the Versatile Chemical Analysis of Single Cells

We present a microfluidic device that enables the quantitative determination of intracellular biomolecules in multiple single cells in parallel. For this purpose, the cells are passively trapped in the middle of a microchamber. Upon activation of the control layer, the cell is isolated from the surrounding volume in a small chamber. The surrounding volume can then be exchanged without affecting the isolated cell. However, upon short opening and closing of the chamber, the solution in the chamber can be replaced within a few hundred milliseconds. Due to the reversibility of the chambers, the cells can be exposed to different solutions sequentially in a highly controllable fashion, e.g. for incubation, washing, and finally, cell lysis. The tightly sealed microchambers enable the retention of the lysate, minimize and control the dilution after cell lysis. Since lysis and analysis occur at the same location, high sensitivity is retained because no further dilution or loss of the analytes occurs during transport. The microchamber design therefore enables the reliable and reproducible analysis of very small copy numbers of intracellular molecules (attomoles, zeptomoles) released from individual cells. Furthermore, many microchambers can be arranged in an array format, allowing the analysis of many cells at once, given that suitable optical instruments are used for monitoring. We have already used the platform for proof-of-concept studies to analyze intracellular proteins, enzymes, cofactors and second messengers in either relative or absolute quantifiable manner.

In this article we present a microfluidic chip for single cell analysis. It allows the quantification of intracellular proteins, enzymes, cofactors, and second messengers by means of fluorescent assays or immunoassays.&#160;

שבב microfluidic לניתוח הכימי תכליתי של תאים בודדים

We present a microfluidic device that enables the quantitative determination of intracellular biomolecules in multiple single cells in parallel. For this ...

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

Optical imaging offers a wide range of diagnostic modalities and has attracted a lot of interest as a tool for biomedical imaging. Despite the enormous number of imaging techniques currently available and the progress in instrumentation, there is still a need for highly sensitive probes that are suitable for in vivo imaging. One typical problem of available preclinical fluorescent probes is their rapid clearance in vivo, which reduces their imaging sensitivity. To circumvent rapid clearance, increase number of dye molecules at the target site, and thereby reduce background autofluorescence, encapsulation of the near-infrared fluorescent dye, DY-676-COOH in liposomes and verification of its potential for in vivo imaging of inflammation was done. DY-676 is known for its ability to self-quench at high concentrations. We first determined the concentration suitable for self-quenching, and then encapsulated this quenching concentration into the aqueous interior of PEGylated liposomes. To substantiate the quenching and activation potential of the liposomes we use a harsh freezing method which leads to damage of liposomal membranes without affecting the encapsulated dye. The liposomes characterized by a high level of fluorescence quenching were termed Lip-Q. We show by experiments with different cell lines that uptake of Lip-Q is predominantly by phagocytosis which in turn enabled the characterization of its potential as a tool for in vivo imaging of inflammation in mice models. Furthermore, we use a zymosan-induced edema model in mice to substantiate the potential of Lip-Q in optical imaging of inflammation in vivo. Considering possible uptake due to inflammation-induced enhanced permeability and retention (EPR) effect, an always-on liposome formulation with low, non-quenched concentration of DY-676-COOH (termed Lip-dQ) and the free DY-676-COOH were compared with Lip-Q in animal trials.

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

The use of fluorophores for in vivo imaging can be greatly limited by opsonization, rapid clearance, low detection sensitivity and cytotoxic effects on the host. Encapsulation of fluorophores in liposomes by film hydration and extrusion leads to fluorescence quenching and protection which enables in vivo imaging with high detection sensitivity.

הקרינה-מרווה של Fluorophore הקרוב אינפרא אדום-כמוס liposomal ככלי ל<em&gt; In vivo</em&gt; דימות אופטי

Optical imaging offers a wide range of diagnostic modalities and has attracted a lot of interest as a tool for biomedical imaging. Despite the enormous ...

The Synthesis of RGD-functionalized Hydrogels as a Tool for Therapeutic Applications

The use of polymers as biomaterials has provided significant advantages in therapeutic applications. In particular, the possibility to modify and functionalize polymer chains with compounds that are able to improve biocompatibility, mechanical properties, or cell viability allows the design of novel materials to meet new challenges in the biomedical field. With the polymer functionalization strategies, click chemistry is a powerful tool to improve cell-compatibility and drug delivery properties of polymeric devices. Similarly, the fundamental need of biomedicine to use sterile tools to avoid potential adverse-side effects, such as toxicity or contamination of the biological environment, gives rise to increasing interest in the microwave-assisted strategy.
The combination of click chemistry and the microwave-assisted method is suitable to produce biocompatible hydrogels with desired functionalities and improved performances in biomedical applications. This work aims to synthesize RGD-functionalized hydrogels. RGD (arginylglycylaspartic acid) is a tripeptide that can mimic cell adhesion proteins and bind to cell-surface receptors, creating a hospitable microenvironment for cells within the 3D polymeric network of the hydrogels. RGD functionalization occurs through Huisgen 1,3-dipolar cycloaddition. Some PAA carboxyl groups are modified with an alkyne moiety, whereas RGD is functionalized with azido acid as the terminal residue of the peptide sequence. Finally, both products are used in a copper catalyzed click reaction to permanently link the peptide to PAA. This modified polymer is used with carbomer, agarose and polyethylene glycol (PEG) to synthesize a hydrogel matrix. The 3D structure is formed due to an esterification reaction involving carboxyl groups from PAA and carbomer and hydroxyl groups from agarose and PEG through microwave-assisted polycondensation. The efficiency of the gelation mechanism ensures a high degree of RGD functionalization. In addition, the procedure to load therapeutic compounds or biological tools within this functionalized network is very simple and reproducible.

We present a protocol for the synthesis of RGD-functionalized hydrogels as devices for cell and drug delivery. The procedure involves copper catalyzed alkyne-azide cycloaddition (CuAAC) between alkyne-modified polyacrylic acid (PAA) and a RGD-azide derivative. The hydrogels are formed using microwave-assisted polycondensation and their physicochemical properties are investigated.

הסינתזה של RGD פונקציונלית הידרוג ככלי יישומים טיפוליים

The use of polymers as biomaterials has provided significant advantages in therapeutic applications. In particular, the possibility to modify and ...

Engineering Molecular Recognition with Bio-mimetic Polymers on Single Walled Carbon Nanotubes

Semiconducting single-wall carbon nanotubes (SWNTs) are a class of optically active nanomaterial that fluoresce in the near infrared, coinciding with the optical window where biological samples are most transparent. Here, we outline techniques to adsorb amphiphilic polymers and polynucleic acids onto the surface of SWNTs to engineer their corona phases and create novel molecular sensors for small molecules and proteins. These functionalized SWNT sensors are both biocompatible and stable. Polymers are adsorbed onto the nanotube surface either by direct sonication of SWNTs and polymer or by suspending SWNTs using a surfactant followed by dialysis with polymer. The fluorescence emission, stability, and response of these sensors to target analytes are confirmed using absorbance and near-infrared fluorescence spectroscopy. Furthermore, we demonstrate surface immobilization of the sensors onto glass slides to enable single-molecule fluorescence microscopy to characterize polymer adsorption and analyte binding kinetics.

We present a protocol for engineering the corona phase of near infrared fluorescent single walled carbon nanotubes (SWNTs) using amphiphilic polymers and DNA to develop sensors for molecular targets without known recognition elements.

הכרה מולקולרית הנדסה עם פולימרים ביו-מימטיים על פחמן Walled יחיד

Semiconducting single-wall carbon nanotubes (SWNTs) are a class of optically active nanomaterial that fluoresce in the near infrared, coinciding with the ...

A Versatile Method of Patterning Proteins and Cells

Substrate and cell patterning techniques are widely used in cell biology to study cell-to-cell and cell-to-substrate interactions. Conventional patterning techniques work well only with simple shapes, small areas and selected bio-materials. This article describes a method to distribute cell suspensions as well as substrate solutions into complex, long, closed (dead-end) polydimethylsiloxane (PDMS) microchannels using negative pressure. This method enables researchers to pattern multiple substrates including fibronectin, collagen, antibodies (Sal-1), poly-D-lysine (PDL), and laminin. Patterning of substrates allows one to indirectly pattern a variety of cells. We have tested C2C12 myoblasts, the PC12 neuronal cell line, embryonic rat cortical neurons, and amphibian retinal neurons. In addition, we demonstrate that this technique can directly pattern fibroblasts in microfluidic channels via brief application of a low vacuum on cell suspensions. The low vacuum does not significantly decrease cell viability as shown by cell viability assays. Modifications are discussed for application of the method to different cell and substrate types. This technique allows researchers to pattern cells and proteins in specific patterns without the need for exotic materials or equipment and can be done in any laboratory with a vacuum.

This report describes a simple, easy to perform technique, using low pressure vacuum, to fill microfluidic channels with cells and substrates for biological research.

שיטה צדדית של חלבוני דפוסי תאים

Substrate and cell patterning techniques are widely used in cell biology to study cell-to-cell and cell-to-substrate interactions. Conventional patterning ...