עבודה זו נתמכת על ידי קרן הזנק במכללה לרפואה וטרינרית (WSU) WW. המחברים מודים סיירה אולסן (WSU) על קריאה ביקורתית של כתב היד הזה.

כל בעלי החיים, הליכים המשמשים במחקר זה מטופל בהתאם להנחיות אכפת לי חיה אוניברסיטת מדינת וושינגטון (WSU) והוועדה שימוש ובציות שאושרו על-ידי WSU בעלי חיים פרוטוקולים #4702, #4735.
1. עכברים
<ol><li>
שימוש רגיל C57BL/6J למבוגרים זכר עכברים או זנים אחרים של ריבית. לשמור על חיות תחת סביבת טמפרטורה, לחות-מבוקרת, עם ad libitum גישה של מים ומזון.
	<ol>
<li>השתמש מגדלים זכר ועד בן 8 שבועות בן 10 חודשים. השתמש רק מוכח מגדלים בניסויים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
השתמש למבוגרים נקבה עכברים עם רקמת מחיקה סלקטיבית של באיברי הרבייה α של קולטן אסטרוגן (מקודד על ידי ג'ין Esr1 ) לתאי האפיתל10 (Wnt7aCre / +; Esr1f/f, הנקרא "קו" או נוק) ולשלוט הארנבונים מאותה (Esr1f/f, שנקרא "CTRL") במחקר זה.
	<ol>
<li>השתמש נקבות בת שבוע 8. הגילאים של נקבות מגוונות בהתאם הניסוי של ריבית.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לקבוע את שלבי ייחום בבוקר בשעה 08:00 h. השתמש רק נקבות בשלב ייחום של המחזור. עבור שיטות מפורט של מריחת הנרתיק וניתוח cytological, להפנות הנהלים שפורסמו בעבר11.</li>
</ol>2. ההזדווגות והערכה תקעים Copulatory
<ol><li>ביום של ייחום (h 16:00), בית הנקבה לכלוב של הזכר.</li>
	<li>למחרת בבוקר (08:00 h), להפריד את הנקבה מהעכבר זכר.</li>
	<li>להשתמש עיבוד של שיטת שפורסמו בעבר12 כדי לגשת נוכחות או היעדרות של פקק הנרתיק או copulatory כאינדיקציה של ההזדווגות.</li>
	<li>החזק את העכבר הנשי מבסיס של הזנב להרים בקצרה את הגפיים האחוריות.</li>
	<li>למצוא את התקע copulatory על ידי הנוכחות של coagulum הזרע תפר חוט רקמה אופווייט בפתח הנרתיק בעזרת קיסם. אם התקע copulatory, הקיסם לא תהיה אפשרות להכנסה לתוך תעלת הנרתיק.</li>
</ol>3. הכנה לפני איסוף הרקמה
<ol><li>להכין 10 מ"ל של התקשורת L-15 של ליבוביץ, בתוספת 1% סרום שור עוברית (נקרא L15 מדיה + 1% FBS) צינור 15 מ"ל. דגירה התקשורת ב 37 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות waterbath.</li>
	<li>על מנת לשמר את הכדאיות של רקמות, זרע ליישומים במורד הזרם, aliquot 2 מ"ל של טרום ומחוממת L15 מדיה + 1% FBS ב microcentrifuge 2 מ"ל צינור לאיסוף רקמות.</li>
	<li>לחמם את השלב של stereomicroscope ל- 37 מעלות צלזיוס. מוגדר הבלוק החום 37 ° C ומניחים על צינור microcentrifuge mL 1.5 ריק בבלוק.</li>
	<li>אם היישומים במורד הזרם מחייבים הדמיה של תנועתיות הזרע, לחמם שהשקופית זכוכית 37 מעלות צלזיוס.</li>
</ol>4. רקמות אוסף
<ol><li>להביא אזור הרקמה אוסף המדיה L15 מראש ומחוממת + 1% FBS aliquot.</li>
	<li>המתת חסד הנקבה (~ 08: 30h) באמצעות פחמן דו-חמצני חנק ואחריו נקע בצוואר הרחם. הערה: זה כ 8 שעות לאחר ההזדווגות, בהנחה ההזדווגות מתקיים בחצות.</li>
	<li>מקם את החיה במצב פרקדן לחשוף את אזור הבטן.</li>
	<li>תרסיס אלכוהול 70% על הבטן ליד הגפיים האחוריות.</li>
	<li>להשתמש את המספריים ויבתר לעשות חתך קטן (~ 1 ס מ) על העור של הבטן התחתונה.</li>
	<li>להשתמש ביד הדומיננטית למשוך את הזנב (ואת הגפיים האחוריות במידת הצורך) בעוד היד האחרת מושך את העור בכיוון ההפוך (לכיוון הראש) כדי לחשוף את שריר הבטן. שיטה זו משמשת כדי למזער את כמות השיער זיהום אל האברים מהבטן.</li>
	<li>חותכים את שריר הבטן בצורת V-בבסיס הבטן, סמוך הנרתיק, כדי לחשוף את האיברים מהבטן.</li>
	<li>העבר והמעיים שומן בבטן בצד כדי לחשוף את מערכת הרבייה.</li>
	<li>חתוך את שלפוחית השתן ואת רקמות אחרות מעל אזור הנרתיק.</li>
	<li>שיחתכו הערווה symphysis כדי לקבל גישה רקמת הנרתיק.</li>
	<li>הרם את רקמת הנרתיק בפתח הנרתיק, באמצעות מספריים כדי להפריד בין תעלת הנרתיק לבין הרקמה רקטלי.</li>
	<li>בזהירות לקצץ את השומן מצע המעי העליון משני צדי הרחם באמצעות מספריים האביב. התראה: הרחם שביר מאוד עם הזרע בתוך. להיזהר לא ניקוב הרחם, אחרת הזרע יאבדו.</li>
	<li>הרם את מערכת הרבייה נמוכה וחותכים כרית השומן השחלות את שני הצדדים.</li>
	<li>להעביר את באיברי הרבייה כל לתוך הצינור של ליבוביץ ומחוממת מראש L-15 מדיה + 1% FBS.</li>
</ol>5. מדידה של זרע ניזול (צמיגות) מאוסף תוכן הרחם
<ol><li>על הבמה stereomicroscope מחוממת, העברת הרקמות לתוך תבשיל תרביות רקמה סטרילי 35 מ מ מלא 3.5 מ ל להתחמם מראש L-15 מדיה + 1% FBS לנקות רקמות דם, מזהמים אחרים. התראה: בעת הכביסה, לתפוס את הרקמות על ידי השומן, לא את הרחם. בשלב זה, הזרע הוא צפוי להיות שלמים בתוך הרחם.</li>
	<li>כתם רקמות עודף מדיה באמצעות מעבדה מגבונים.</li>
	<li>החזק את הרקמה בקצה הנרתיק בעת הצבת את הקצוות השחלות בצינור microcentrifuge מחומם מראש. בעוד אתה מחזיק שבסוף וגינלי, לחתוך את הקרניים הרחם בבסיס של הרחם, המאפשר את הקרניים הרחם ליפול לתוך הצינור microcentrifuge.</li>
	<li>תן הזרע זרימה החוצה הקרניים הרחם לתוך הצינור. להשתמש מלקחיים חסר שיניים לסחוט בעדינות את הקרניים הרחם מהקצה השחלות כדי שבסוף וגינלי, לסלק את שאריות הזרע.</li>
	<li>למחוק את הרקמות בתיק חומרים מסוכנים, לשרוף.</li>
	<li>בקצרה ספין למטה הזרע minicentrifuge (~ 1-2 s).</li>
	<li>להניח את הצינור, מקביל לשלב מחוממת - זרע לא ישפך החוצה.</li>
	<li>יש לי את שעון העצר מוכן ולהגדיר לספור ''.</li>
	<li>צינור קפילר 25 µL מכניס דגימת הזרע בזווית של 180 מעלות (מקבילה לקיר tube). זה כדי למזער את מידת ההשתנות בין כל חוקר כשאני מחזיק את צינור קפילרי בזוויות שונות.</li>
	<li>הקש את הטיימר ברגע הופך צינור קפילרי מגע עם הזרע.</li>
	<li>רשום את הזמן (s) שלוקח לזרע להגיע לקו 25 µL.</li>
	<li>עם סיום המדידה, מיד לשים את הצינור המכיל זרע בחזרה בבלוק חום יבש לצורך ניתוח פונקציונאלי נוסף, כגון הדמיה וידאו של תנועתיות הזרע.</li>
	<li>לחטא את צינור קפילרי המכיל זרע במועט הצינור ב- 10% מלבין פתרון עבור 20 דקות וזורקים את צינור קפילרי בתוך המיכל שרפ.</li>
</ol>6. וידאו הדמיה של תנועתיות הזרע
<ol><li>הפעל את המיקרוסקופ ואת תוכנת הדמיה וידאו.</li>
	<li>פיפטה 20 µL של הזרע שנותרו על גבי השקופית זכוכית ומחוממת מראש, בעוד השקופית זכוכית מושם על הבמה מחוממת.</li>
	<li>מכסים עם coverslip זכוכית.</li>
	<li>הנח את הצד coverslip ' שקופית ' למטה על המיקרוסקופ.</li>
	<li>השתמש 20 X עדשה המטרה כדי למצוא תחומי עניין.</li>
	<li>לשנות ל- 100 X עדשה המטרה עבור הדמיה וידאו.</li>
	<li>להקליט הוידאו ב- 12 מסגרות לשנייה (fps) ב-30 s.</li>
	<li>באופן אקראי להקליט קטעי וידאו בתחומים שונים לפחות 3 לכל חיה.</li>
	<li>ביצוע ההדמיה במהירות למזער חשיפה קלה השקופית כדי לשמר את תנועתיות הזרע ואת הכדאיות. הערה: הליך זה הדמיה צריך להיעשות תוך 2-3 דקות.</li>
	<li>לבצע ניתוח הנתונים באמצעות תוכנת ImageJ כמו שתואר לעיל8.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Suarez, S. S., Pacey, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+transport+in+the+female+reproductive+tract.">Sperm transport in the female reproductive tract.</a> Hum Reprod Update. 12 (1), 23-37 (2006).</li><li>Bedford, J. M., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+sperm+motility+after+mating+in+the+rat+and+hamster.">Initiation of sperm motility after mating in the rat and hamster.</a> J Androl. 13 (5), 444-449 (1992).</li><li>Lilja, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology+of+semenogelin.">Cell biology of semenogelin.</a> Andrologia. 22 Suppl 1, 132-141 (1990).</li><li>Lilja, H., Abrahamsson, P. A., Lundwall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semenogelin,+the+predominant+protein+in+human+semen.+Primary+structure+and+identification+of+closely+related+proteins+in+the+male+accessory+sex+glands+and+on+the+spermatozoa.">Semenogelin, the predominant protein in human semen. Primary structure and identification of closely related proteins in the male accessory sex glands and on the spermatozoa.</a> J Biol Chem. 264 (3), 1894-1900 (1989).</li><li>Veveris-Lowe, T. L., Kruger, S. J., Walsh, T., Gardiner, R. A., Clements, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seminal+fluid+characterization+for+male+fertility+and+prostate+cancer:+kallikrein-related+serine+proteases+and+whole+proteome+approaches.">Seminal fluid characterization for male fertility and prostate cancer: kallikrein-related serine proteases and whole proteome approaches.</a> Semin Thromb Hemost. (33), 87-99 (2007).</li><li>Emami, N., Deperthes, D., Malm, J., Diamandis, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+role+of+human+KLK14+in+seminal+clot+liquefaction.">Major role of human KLK14 in seminal clot liquefaction.</a> J Biol Chem. 283 (28), 19561-19569 (2008).</li><li>Gerhard, I., Roth, B., Eggert-Kruse, W., Runnebaum, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+kallikrein+on+sperm+motility,+capillary+tube+test,+and+pregnancy+rate+in+an+AIH+program.">Effects of kallikrein on sperm motility, capillary tube test, and pregnancy rate in an AIH program.</a> Arch Androl. 24 (2), 129-145 (1990).</li><li>Li, S., Garcia, M., Gewiss, R. L., Winuthayanon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crucial+role+of+estrogen+for+the+mammalian+female+in+regulating+semen+coagulation+and+liquefaction+in+vivo.">Crucial role of estrogen for the mammalian female in regulating semen coagulation and liquefaction in vivo.</a> PLoS Genet. 13 (4), e1006743 (2017).</li><li>Elia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+semen+hyperviscosity:+prevalence,+pathogenesis+and+therapeutic+aspects.">Human semen hyperviscosity: prevalence, pathogenesis and therapeutic aspects.</a> Asian J Androl. 11 (5), 609-615 (2009).</li><li>Winuthayanon, W., Hewitt, S. C., Orvis, G. D., Behringer, R. R., Korach, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+epithelial+estrogen+receptor+alpha+is+dispensable+for+proliferation+but+essential+for+complete+biological+and+biochemical+responses.">Uterine epithelial estrogen receptor alpha is dispensable for proliferation but essential for complete biological and biochemical responses.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (45), 19272-19277 (2010).</li><li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+vaginal+lavage,+crystal+violet+staining,+and+vaginal+cytological+evaluation+for+mouse+estrous+cycle+staging+identification.">Performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification.</a> J Vis Exp. (67), e4389 (2012).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lab+Animal+Research.+Fundamentals+of+Breeding+and+Weaning.">Lab Animal Research. Fundamentals of Breeding and Weaning.</a> JoVE. , (2017).</li><li>Prassas, I., Eissa, A., Poda, G., Diamandis, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unleashing+the+therapeutic+potential+of+human+kallikrein-related+serine+proteases.">Unleashing the therapeutic potential of human kallikrein-related serine proteases.</a> Nat Rev Drug Discov. 14 (3), 183-202 (2015).</li><li>Muytjens, C. M., Vasiliou, S. K., Oikonomopoulou, K., Prassas, I., Diamandis, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Putative+functions+of+tissue+kallikrein-related+peptidases+in+vaginal+fluid.">Putative functions of tissue kallikrein-related peptidases in vaginal fluid.</a> Nat Rev Urol. 13 (10), 596-607 (2016).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

איסוף זרע מן העכבר uteri יכול לספק יתרונות על פני הזרע ניתוח במבחנה כפי לשעבר יכול להמחיש את האינטראקציות פיזיולוגי בין הזרע לבין הפרשות באיברי הרבייה הנקביים. טכניקות שהוצגו במחקר זה מאפשר לחוקרים לקבוע את איכות תאי הזרע וכן הכדאיות הזרע, תנועתיות בתנאים פיזיולוגיים אידיאלי. יתר על כן, ישנם ניתוחים במורד הזרם שונים שניתן לבצע באמצעות הזרע שנאסף על uteri, לדוגמה, ניתן לספור את הזרע כדי לקבוע את המספר הממשי זרע הזנת את הרחם ואת הזרע יכול גם לדימות עבור מבחני תנועתיות. נקודת זמן אידיאלי כדי לאסוף את הזרע על יכולת ההפריה צריך להיות בתוך 1-2 שעות לאחר ההזדווגות1.
בנוסף ליישומים במורד הזרם כאמור, החוקרים ניתן גם להעריך את ההשפעות של מעכבי/תרכובות של ריבית על הזרע תחבורה תהליכים, כגון זרע ניזול (או צמיגות זרע), הזרע מספר במערכת העיכול, זרע תנועתיות, או זרע הגירה לאזורים שונים של מערכת הרבייה הנשית. תרכובות יכול להיות מיושם במערכת הרבייה הנקבה לפני ההזדווגות8. . אז, ההשפעה של מעכבי/התרכובות הללו יכול להידרש זרע מדגם שלאחר ההזדווגות. שיטות אלה יכול להיות שימושי לבדוק את המעשיות של תרופות למניעת הריון לעכב את הזרע תחבורה.
נקודות קריטי של שיקול למדידות ניזול/צמיגות ואוסף זרע הן הרגישות של הזרע ואת זווית צינור קפילרי. זרע רגישים שינוי הטמפרטורה. אם ניתוח במורד הזרם של תנועתיות ותפקוד זרע הוא חיוני עבור תוצאות הניסוי, הרקמה זרע צריך להישמר ב 37 מעלות צלזיוס בכל עת, עם החשיפה מינימלית לאור. אם קיימים מספר דגימות לאסוף מן הנקבות מרובים, המתת חסד החיות אחת בכל פעם כדי למזער את המתנה. עבור המידה ניזול, מזוויות שונות צינור קפילרי ליצור חוסר עקביות בזמן ניזול. לכן, החוקרים חייבים להחזיק את צינור קפילרי מקבילה לקיר צינור (בזווית של 180 מעלות) כדי למזער את מידת ההשתנות שנוצרו על-ידי כל חוקר. צריך זרע מדגם ייאספו לא יאוחר מ- h: 09:00, זאת בשל התחדשות נוזל ברחם. החוקר להשיג מספיק חומר נוזל עבור המידה ניזול.
זה נקבע כי ניזול זרע בעיקר מתווך על ידי הפעילות האנזימטית מתרחשת של PSA המופרשים בלוטת הערמונית13. עם זאת, ישנם מחקרים מוגבלת כדי לקבוע את התפקידים של באיברי הרבייה הנקביים במהלך ויוו ניזול תהליך8. לכן, אוסף של הזרע של מערכת הרבייה הנשית מספק יתרון מכריע ללמוד ניזול את תהליכי ויוו, לאחר הזרע נחשף הפרשות מן באיברי הרבייה הנקביים14. לסיכום, פוסט-פלטה זרע ניזול/צמיגות המדידה מאפשרת החוקרים לפענח את יחסי הגומלין בין הזרע לבין מערכת הרבייה הנשית.

מערכת הרבייה הנשית מורכבת ספינלי העליון והתחתון. מערכת הרבייה העליון כולל החצוצרות, הרחם endocervix. מערכת הרבייה נמוכה יותר כולל את ectocervix הנרתיק. בבני אדם, הזרע ejaculated הופקד אצל הקיר הקדמי של הנרתיק, הסמוך ectocervix1. בעכברים, עם זאת, הזרע הוא נסחף לתוך הרחם תוך דקות לאחר ההזדווגות2.
הזרע מכיל ג'ל הזרע הוא פני השטח למוצק בתוך שניות של שפיכה, גורם את הזרע כדי להיות לכודים,3. מרותק למיטה. ניזול משחרר את הזרע קיבוע על-ידי שינוי זרע מדמוי ג'ל מימית עקביות. תהליך זה הוא חיוני תנועתיות הזרע ורביה יונקים. הידע של זרע ניזול מבוססת בעיקר על במבחנה מחקרים שבו זרע הופך מעובה בקערה תרבות. בבני אדם, הפעילות האנזימטית מתרחשת של הערמונית אנטיגן ספציפי או ה-PSA (הידוע גם kallikrein הקשורות peptidase 3 או KLK3) הוא התורם העיקרי עבור ניזול באמצעות הידרוליזה של semenogelins (יוצרי ג'ל חלבונים המצויים הזרע)4 ,5,6. השפלה של semenogelins משחררת את הזרע של coagulum הזרע, הגדלת ניידות זרע. פריד זרע לשחות לעבר החצוצרה כדי להפרות את הביצית. ניזול (או זרע צמיגות) בדיקות הם אחד הקרנתם הראשונית סטנדרטי עבור בדיקת זרע במרפאות פוריות כדי להעריך את פוריות הגבר7.
מאמר שפורסם לאחרונה מראה כי ניתוח של נוזל הזרע שנאסף את העכבר הנשי באיברי הרבייה שלאחר ההזדווגות יכולה לשמש להמחשת חוסר ניזול שיכולים לגרום לאחר מכן ליקויי פוריות8. ניזול פגומים כגון לרטרו זרע תורם 11.8-32.3% מהמקרים עקרה גברים9, רומז ניזול נורמלי הוא הכרחי עבור רבייה יונקים. עם זאת, מחקרים וטיפול של פגמים ניזול התמקדו אך ורק זכר7. האפשרות כי באיברי הרבייה הנקביים ממלאת תפקיד הזרע ניזול לא נחקרו. לכן, שיטות איסוף זרע ומדידת זמן ניזול יספק לחוקרים כלי אבחון הרומן כדי לקבוע אם ניזול יכול להיות אחד הגורמים לאי פוריות באורגניזם מודל עניין.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="571">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Toothpick</td>
			<td style="width:71px;">Diamond</td>
			<td style="width:119px;">750-Flat</td>
			<td style="width:167px;">Autoclaved sterile, use blunted toothpick. Do not use point-ended</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Dissecting scissors</td>
			<td style="width:71px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">08-940</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Spring scissors</td>
			<td style="width:71px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS-5600</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Fine forceps</td>
			<td style="width:71px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS-5045</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">25-&#956;L glass capillary tube</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">53432-761</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Leibovitz&#8217;s L-15 media</td>
			<td style="width:71px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">11415064</td>
			<td style="width:167px;">Supplement with 1% FBS</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:71px;">Gemini Bio-Products</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">1.5-mL microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:71px;">Axygen</td>
			<td style="width:119px;">MCT-150-C</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">2-mL microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:71px;">Axygen</td>
			<td style="width:119px;">MCT-200-A</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:215px;">Digital dry block heater</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">13259-052</td>
			<td style="width:167px;">For warming the microcentrifuge tube prior to semen collection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Minicentrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">LSE 6765</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">35-mm culture dish</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">10861-656</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">15-mL polypropylene centrifuge tube</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">10025-686</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Waterbath</td>
			<td style="width:71px;">Precision</td>
			<td style="width:119px;">TSGP05</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Heated stage stereomicroscope</td>
			<td style="width:71px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">MZ10F</td>
			<td style="width:167px;">To keep the tissue warm prior to semen collection</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Brightfield microscope</td>
			<td style="width:71px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">DMi8</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Camera</td>
			<td style="width:71px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">DMC2900</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Glass slides</td>
			<td style="width:71px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-552-3</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Coverslip</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">48393-059</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:215px;">Bleach</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Dilute in dH2O to 10% concentration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

collection of post-mating semen from the female reproductive tract and measurement of semen liquefaction in mice

בעכברים, פלטה הזרע החודר לתוך הרחם. לאחר השפיכה, הזרע משתנה עקביות דמוי ג'ל כדי דומעות, תהליך הנקרא ניזול. במחקר זה, נראה כיצד לאסוף את הזרע פוסט-ejaculated באיברי הרבייה הנקביים במודל של עכברים. עכברים הנשי הראשון, מבוגרים על הבמה ייחום שוכנו לכלוב של הזכר בן לילה. למחרת בבוקר, הזדווגות אושר על ידי הנוכחות של הכנס copulatory בפתח הנרתיק. עכברים נקבה עם תקעים copulatory היו מורדמים, נאסף כל באיברי הרבייה בכללותה (הנרתיק, הרחם, oviducts, השחלות), המבטיח מערכת סגורה כדי להכיל את הזרע. מערכת הרבייה הונח צינור microcentrifuge 1.5 mL, הנרתיק חתכו אותה כדי לשחרר את הזרע לתוך הצינור. כדי להבטיח נפח הזרע המרבי עבור ניתוח, מלקחיים חסר שיניים שימשו כדי לסחוט את הקרניים הרחם השחלות מקצה לקצה הנרתיק גירוש הזרע שנותרו. מערכת הרבייה לגמרי ואז אבדו. הצינור המכיל זרע היה טוו בקצרה למטה. פיפטה נימי 25 μL הונח לתוך הצינור בזווית של 180 מעלות (במקביל לקיר tube). כמות הזמן נהגו למלא את צינור קפילרי לקו μL 25 הוקלט. זרע מן המגדל זכר מוכחת בדרך כלל לוקח כ 60-180 s כדי למלא צינור קפילר 25 μL. טכניקה זו של אוסף זרע יכול לשמש גם ביישומים אחרים במורד הזרם כגון הדמיה וניתוח תנועתיות הזרע.

זרע נאסף מן CTRL וקו h נקבות כ 8 לאחר ההזדווגות עם זכרים CTRL פורייה. ניזול (או זרע צמיגות) הוא לכמת על ידי לוקחים את הזמן כדי למלא 25 קפילר μL זרע. הזרע שנאסף CTRL uteri לקח 2.06 דקות ±0.12 (mean±S.E.M, n = 5) כדי למלא את צינור קפילרי (איור 1). עם זאת, הזרע שנאסף KO uteri לקח יותר מ 60 דקות (60.0 ±0.0, mean±S.E.M, n = 5) של זמן הניסוי. נתונים אלה מציעים הזרע באופן משמעותי מעובה יותר או פחות צמיגה ב- CTRL לעומת קו uteri.
כדי להמחיש את אחד היישומים במורד הזרם של איסוף זרע של מערכת הרבייה הנשית, תנועתיות הזרע הוערכה באמצעות הדמיה וידאו. הזרע שנאסף uteri CTRL הראה בחופשיות שחייה זרע בתוך השדה מיקרוסקופיים, ייצג את התמונה איור2 א. הזרע שנאסף על uteri KO הראו כי הרוב המכריע של הזרע היו מקובצים יחד עם ניידות מינימלית (איור 2B). ממצאים אלה מצביעים על כי הזרע שנאסף באיברי הרבייה הנקביים 8 שעות לאחר ההזדווגות יכול לשמש לניתוח זרע נוסף.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56670/56670fig1.jpg"> איור 1 : ניזול זמן (זרע צמיגות) מן הזרע שנאסף העכבר uteri. ייצוג גרפי של הזמן ניזול (דקות) של הזרע שנאסף CTRL ו KO uteri כ 8 שעות לאחר ההזדווגות. נתונים מייצגים mean±S.E.M., n = 5 נקבות/גנוטיפ. p < אינטראקצית 0.001, סטודנט t -test. הותאם התוצאות שפורסמו בעבר8 עם הרשאה. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56670/56670fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56670/56670fig2.jpg"> איור 2 : להחליפן בתמונות של זרע בתוך הזרע שנאסף העכבר uteri. תמונות נציג של ההדמיה וידאו שצולמו 1000 X הגדלה של זרע בהזרע שנאסף uteri KO CTRL (א) ו- (B) . הותאם התוצאות שפורסמו בעבר8 עם הרשאה. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56670/56670fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Collection of Post-mating Semen from the Female Reproductive Tract and Measurement of Semen Liquefaction in Mice at JoVE.com

Collection of Post-mating Semen from the Female Reproductive Tract and Measurement of Semen Liquefaction in Mice

אוסף של שלאחר ההזדווגות זרע באיברי הרבייה הנקביים, מדידה של זרע ניזול בעכברים

ניזול זרע נדרש הזרע להשתחרר הג'ל הזרע. מחקר זה מספק את נהלי איסוף זרע מן באיברי הרבייה הנקביים שלאחר ההזדווגות, ומדידת זמן ניזול זרע.

In mice, ejaculated semen is deposited in the uterus. After ejaculation, the semen changes consistency from gel-like to watery, a process called ...

collection-post-mating-semen-from-female-reproductive-tract

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

16.3K Views.  Washington State University. ניזול זרע נדרש הזרע להשתחרר הג'ל הזרע. מחקר זה מספק את נהלי איסוף זרע מן באיברי הרבייה הנקביים שלאחר ההזדווגות, ומדידת זמן ניזול זרע.

Video: Collection of Post-mating Semen from the Female Reproductive Tract and Measurement of Semen Liquefaction in Mice

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

14 day-old mouse ovarian tissue and preantral follicles isolated from same-aged mice were incubated in a simulated microgravity culture system. We quantitatively assessed follicle survival, measured follicle and oocyte diameters, and examined ultrastructure of the oocytes produced from the system. We observed decreased follicle survival, downregulation of expressions of proliferating cell nuclear antigen and growth differentiation factor 9, as indicators for the development of granulosa cells and oocytes, respectively, and oocyte ultrastructural abnormalities under the simulated microgravity condition. The simulated microgravity experimental setup needs to be optimized to provide a model for investigation of the mechanisms involved in the oocyte/follicle in vitro development.

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

A highly promising technique to generate tissue constructs without using matrix is to culture cells in a simulated microgravity condition. Using a rotary culture system, we examined ovarian follicle growth and oocyte maturation in terms of follicle survival, morphology, growth, and oocyte function under the simulated microgravity condition.

במבחנה צמיחה של העכבר זקיקים Preantral תחת Microgravity מדומה

14 day-old mouse ovarian tissue and preantral follicles isolated from same-aged mice were incubated in a simulated microgravity culture system. We ...

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the proteins involved in these pathways are evolutionarily conserved between mammals and other eukaryotes, such as the fruit fly Drosophila melanogaster, suggesting that similar organizing principles exist during the development of these organisms. Importantly, Drosophila has been used extensively to identify cellular and molecular mechanisms regulating processes that are required in mammals including neurogenesis, differentiation, axonal guidance, and synaptogenesis. Flies have also been used successfully to model a variety of human neurodevelopmental diseases. Here we describe a protocol for the step-by-step microdissection, fixation, and immunofluorescent localization of proteins within the adult Drosophila brain. This protocol focuses on two example neuronal populations, mushroom body neurons and retinal photoreceptors, and includes optional steps to trace individual mushroom body neurons using Mosaic Analysis with a Repressible Cell Marker (MARCM) technique. Example data from both wild-type and mutant brains are shown along with a brief description of a scoring criteria for axonal guidance defects. While this protocol highlights two well-established antibodies for investigating the morphology of mushroom body and photoreceptor neurons, other Drosophila brain regions and the localization of proteins within other brain regions can also be investigated using this protocol.

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

This protocol describes the dissection and immunostaining of adult Drosophila melanogaster brain tissues. Specifically, this protocol highlights the use of Drosophila mushroom body and photoreceptor neurons as example neuronal subsets that can be accurately used to uncover general principles underlying many aspects of neuronal development.

ניתוח Immunofluorescent מכתים של פטריות הגוף והנפש ומה קולט אור נוירונים במוח למבוגרים דרוזופילה melanogaster

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is being used to investigate the health-protective effects of young ovaries in young females. The current procedures employ an orthotopic transplantation method, where allogenic ovaries are transplanted back to their original position in the ovarian bursa. This is in contrast to the more commonly used heterotopic transplantation of ovaries/ovarian tissue subcutaneously or under the kidney capsule. All three locations provide efficient revascularization of the transplanted tissues. However, orthotopic transplantation provides the ovary with the most natural signaling environment and is the only procedure that provides the opportunity for the animal to reproduce naturally post-operatively. One must take care to remove all endogenous ovarian tissue during the ovariectomy procedure. If any endogenous tissue remains or if only one ovary is removed, the transplanted tissue will remain dormant until the existing tissue becomes senescent. While revascularization of the transplanted ovaries occurs very quickly, the transplant recipient can take a considerable amount of time to adapt to a new hypothalamic/pituitary/gonadal/adrenal (HPG/A) axis signaling regime associated with the transplanted tissue. This normally takes about 100 days in the mouse. Therefore, transplantation experiments should be designed to accommodate this adaptation period. Typical results with ovarian transplantation will include changes in the health of the recipient that reflect the age of the transplanted ovary, rather than the chronological age of the recipient.

Described here are orthotopic ovarian transplantation protocols for modifying ovarian influence on the physiology of the recipient mouse. This surgical procedure is used to expose female mice to various types of ovarian influence and may include heterochronic transplantations and transplantation of ovaries that have undergone various ex vivo treatments.

נהלים השתלת השחלות Orthotopic לחקור את ההשפעה ואת בריאות-תוחלת החיים של השחלות הזדקנות ביולוגית בעכברים הנשי

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

Combinational Treatment of Trichostatin A and Vitamin C Improves the Efficiency of Cloning Mice by Somatic Cell Nuclear Transfer

Somatic cell nuclear transfer (SCNT) provides a unique opportunity to directly produce a cloned animal from a donor cell, and it requires the use of skillful techniques. Additionally, the efficiencies of cloning have remained low since the successful production of cloned animals, especially mice. There have been many attempts to improve the cloning efficiency, and trichostatin A (TSA), a histone deacetylase inhibitor, has been widely used to enhance the efficiency of cloning. Here, we report a dramatically improved cloning method in mice. This somatic cell nuclear transfer method involves usage of Hemagglutinating virus of Japan Envelope (HVJ-E), which enables easy manipulation. Moreover, the treatment using two small molecules, TSA and vitamin C (VC), with deionized bovine serum albumin (dBSA), is highly effective for embryonic development. This approach requires neither additional injection nor genetic manipulation, and thus presents a simple, suitable method for practical use. This method could become a technically feasible approach for researchers to produce genetically modified animals from cultured cells. Furthermore, it might be a useful way for the rescue of endangered animals via cloning.

We describe a dramatically improved method for mouse cloning using trichostatin A, vitamin C, and deionized bovine serum albumin. We show a simplified, reproducible protocol that supports efficient development of cloned embryos. Hence, this method could become a standardized procedure for mouse cloning.

טיפול קומבינטוריים Trichostatin A וויטמין C משפר את היעילות של שיבוט עכברים באמצעות העברה גרעיני תאים סומטיים

Somatic cell nuclear transfer (SCNT) provides a unique opportunity to directly produce a cloned animal from a donor cell, and it requires the use of ...

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

The differentiation of human endometrial stromal cells (HESC) from fibroblast-like appearance into secretory decidua is a transformation required for embryo implantation into the uterine lining of the maternal womb. Improper decidualization has been established as a root cause for implantation failure and subsequent early embryo miscarriage. Therefore, understanding the molecular mechanisms underlying decidualization is advantageous to improving the rate of successful births. In vivo based studies of artificial decidualization are often limiting due to ethical dilemmas associated with human research, as well as translational complications within animal models. As a result, in vitro assays through primary cell culture are often utilized to explore the modulation of decidualization via hormones. This study provides a detailed protocol for the isolation of HESC and subsequent artificial decidualization via the supplementation of hormones to the culturing medium. Further, this study provides a well-designed method to knockdown any gene of interest by utilizing lipid-based siRNA transfections. This protocol permits the optimization of culture purity as well as product yield, thereby maximizing the ability to utilize this model as a reliable method to understand the molecular mechanisms underlying decidualization, and the subsequent quantification of secreted agents by decidualized endometrial stromal cells.

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

This study presents a validated and optimized procedure for the isolation and culture of human endometrial stromal cells to conduct in vitro decidualization assay. Further, this study provides a detailed method to efficiently knockdown a specific gene using siRNAs in human endometrial stromal cells.

לבידוד של תאי סטרומה רירית הרחם אדם במבחנה Decidualization

The differentiation of human endometrial stromal cells (HESC) from fibroblast-like appearance into secretory decidua is a transformation required for ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by Sertoli cell junctions at the blood-testis barrier (BTB), which is the tightest tissue barrier in the mammalian body and segregates the seminiferous epithelium into two compartments, a basal and an adluminal. The BTB creates a unique microenvironment for germ cells in meiosis I/II and for the development of postmeiotic spermatids into spermatozoa via spermiogenesis. Here, we describe a reliable assay to monitor BTB integrity of mouse testis in vivo. An intact BTB blocks the diffusion of FITC-conjugated inulin from the basal to the apical compartment of the seminiferous tubules. This technique is suitable for studying gene candidates, viruses, or environmental toxicants that may affect BTB function or integrity, with an easy procedure and a minimal requirement of surgical skills compared to alternative methods.

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

Here, we present a protocol to assess the blood-testis barrier integrity by injecting inulin-FITC into testes. This is an efficient in vivo method to study blood-testis barrier integrity that can be compromised by genetic and environmental elements.

שיטת In Vivo ללמוד העכבר דם Testis מכשול שלמות

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

In Vitro Assays to Evaluate the Migration, Invasion, and Proliferation of Immortalized Human First-trimester Trophoblast Cell Lines

Cell movement is a critical property of trophoblasts during placental development and early pregnancy. The significance of proper trophoblast migration and invasion is demonstrated by pregnancy disorders such as pre-eclampsia and intrauterine growth restriction, which are associated with inadequate trophoblast invasion of the maternal vasculature. Unfortunately, our understanding of the mechanisms by which the placenta develops from migrating trophoblasts is limited. In vitro analysis of cell migration via the scratch assay is a useful tool in identifying factors that regulate trophoblast migratory capacity. However, this assay alone does not define the cellular changes that can result in altered cell migration. This protocol describes three different in vitro assays that are used collectively to evaluate trophoblast cell movement: the scratch assay, the invasion assay, and the proliferation assay. The protocols described here may also be modified for use in other cell lines to quantify cell movement in response to stimuli. These methods allow investigators to identify individual factors that contribute to the cell movement and provide a thorough examination of potential mechanisms underlying apparent changes in cell migration.

Here, we present a highly accessible protocol for evaluating the cell movement in human trophoblast cells using three in vitro assays: the scratch assay, the transwell invasion assay, and the cell proliferation assay.

במבחני חוץ גופית כדי להעריך את ההעברה הפלישה, התפשטות של שורות תאים מונצחים Trophoblast בטרימסטר הראשון אנושי

Cell movement is a critical property of trophoblasts during placental development and early pregnancy. The significance of proper trophoblast migration ...

Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

Successful fertilization is fundamental to sexual reproduction, yet little is known about the mechanisms that guide sperm to oocytes within the female reproductive tract. While in vitro studies suggest that sperm of internally fertilizing animals can respond to various cues from their surroundings, the inability to visualize their behavior inside the female reproductive tract creates a challenge for understanding sperm migration and mobility in its native environment. Here, we describe a method using C. elegans that overcomes this limitation and takes advantage of their transparent epidermis. C. elegans males stained with a mitochondrial&#160; dye are mated with adult hermaphrodites, which act as modified females, and deposit fluorescently labeled sperm into the hermaphrodite uterus. The migration and motility of the labeled sperm can then be directly tracked using an epi-fluorescence microscope in a live hermaphrodite. In wild-type animals, approximately 90% of the labeled sperm crawl through the uterus and reach the fertilization site, or spermatheca. Images of the uterus can be taken 1 h after mating to assess the distribution of the sperm within the uterus and the percentage of sperm that have reached the spermatheca. Alternatively, time-lapse images can be taken immediately after mating to assess sperm speed, directional velocity and reversal frequency. This method can be combined with other genetic and molecular tools available for the C.elegans to identify novel genetic and molecular mechanisms that are important in regulating sperm guidance and motility within the female reproductive tract.

Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

Sperm must successfully navigate through the oviduct to fertilize an oocyte. Here, we describe an assay for measuring sperm migration within the C. elegans hermaphrodite uterus. This assay can provide quantitative data on sperm distribution within the uterus after mating, as well as on speed, directional velocity, and reversal frequency.

מדידת הדרכה זרע ותנועתיות בתוך האלגיה של מערכת הרבייה של האנדרוגינוס

Successful fertilization is fundamental to sexual reproduction, yet little is known about the mechanisms that guide sperm to oocytes within the female ...

In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that during the reproductive life span only about 1% of the oocytes in an ovary mature and ovulate, several techniques have been developed to increase the exploitation of the ovarian reserve to the growing population of non-ovulatory follicles. Such technologies have allowed interventions of fertility preservation, selection programs in livestock, and conservation of endangered species. However, the vast potential of the ovarian reserve is still largely unexploited. In cows, for instance, some attempts have been made to support in vitro culture of oocytes at specific developmental stages, but efficient and reliable protocols have not yet been developed. Here we describe a culture system that reproduce the physiological conditions of the corresponding follicular stage, defined to develop in vitro growing oocytes collected from bovine early antral follicles to the fully-grown stage, corresponding to the medium antral follicle in vivo. A combination of hormones and a phosphodiesterase 3 inhibitor was used to prevent untimely meiotic resumption and to guide oocyte&#39;s differentiation.

We describe the procedures for isolation of growing oocytes from ovarian follicles at early stages of development, as well as the setup of an in vitro culture system which can support the growth and differentiation up to the fully-grown stage. &#160;

במבחנה תרבות אסטרטגיה עבור Oocytes מ זקיק אנטרל מוקדם בבקר

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that ...

Transuterine Fetal Tracheal Occlusion Model in Mice

Fetal tracheal occlusion (TO), an established treatment modality, promotes fetal lung growth and survival in severe congenital diaphragmatic hernia (CDH). Following TO, retention of the secreted epithelial fluid increases luminal pressure and induces lung growth. Various animal models have been defined to understand the pathophysiology of CDH and TO. All have their own advantages and disadvantages such as the difficulty of the technique, the size of the animal, cost, high mortality rates, and the availability of genetic tools. Herein, a novel transuterine model of murine fetal TO is described. Pregnant mice were anesthetized, and the uterus exposed via a midline laparotomy. The trachea of selected fetuses were ligated with a single transuterine suture placed behind the trachea, one carotid artery, and one jugular vein. The dam was closed and allowed to recover. Fetuses were collected just before parturition. Lung to body weight ratio in TO fetuses was higher than that in control fetuses. This model provides researchers with a new tool to study the impact of both TO and increased luminal pressure on lung development.

Various animal models of congenital diaphragmatic hernia and fetal tracheal occlusion present advantages and disadvantages regarding ethical issues, cost, surgical difficulty, size, survival rates, and availability of genetic tools. This model provides a new tool to study the impact of both tracheal occlusion and increased luminal pressure on lung development.

מודל חסימת קנה הנשימה העוברי הטרנס-רחמי בעכברים

Fetal tracheal occlusion (TO), an established treatment modality, promotes fetal lung growth and survival in severe congenital diaphragmatic hernia (CDH). ...