מחברים תודה Ferrantelli אי ג'י Liappas על תמיכתם הגדרת פרוטוקול כריתת כליה 5/6, ר Sánchez-דיאז ו- P. מרטין על הסיוע עם הערכות חנקן ureic, ו Hevia א. פ Núñez על הסיוע בזהירות עכברים. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים SAF2016-80648R "Ministerio דה Economía y Competitividad" / אזורית Fondo Europeo דה Desarrollo (MINECO/פדר) כדי מנואל לופז-קבררה ו- PI 15/00598 מ- Fondo דה Investigaciones Sanitarias (FIS)-פדר קרנות, ל אבלרדו אגילרה.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה אוצ'ואה Severo מרכז לביולוגיה מולקולרית (מדריד, ספרד).
הערה: C57BL/6J עכברים הנשית בגילאי 12-14 שבועות ומשקלו כ 20 גרם בתחילת המחקר שימשו. כל החיות שוכנו בתנאים סטנדרטיים וניתנה מזון ומים ad libitum. מצבים בריאותיים נבדק מדי יום. החומר הנדרש, כגון כפפות, מאסו, קטטר, תפירה, מחטים, צריך להיות סטרילי.
1. הצנתר
הערה: אם הכליות לא יוסרו, והם נשארים פונקציונליים לחלוטין, כך שהוא אינו מחשיב את ההשפעה של אורמיה, וכך מאפשר חקר חשיפה PDF בבידוד. הניתוח מורכב על היכרות עם רק דיסטלי לקיצוניות של הקטטר לתוך חלל הצפק ועל הצבת יציאת גישה בצד האחורי של החיה, מתן גישה אליו. ההליך להצבת הצנתר הוא כדלקמן:
<ol><li>הצב את העכבר תא אינדוקציה ומספקים הרדמה באמצעות 4% איזופלוריין ו חמצן עם קצב זרימה של 0.4 L/דקה עד לאבדן בטעותו רפלקס.<ol>
<li>לשמור על החיה עם 2% איזופלוריין 100% חמצן עם זרם של 0.3 L/דקה באמצעות צינור nosecone מחובר למכשירים הרדמה. לאשר ההרדמה המתאים על-ידי הערכת הטונוס, בתגובה לגירוי.</li>
		<li>בדוק את קצב ואת עומק הנשימה במהלך כל תהליך. השתמש משחה הוטרינר על העיניים למניעת יובש תחת הרדמה. עדיף אם ההליכים נעשים תוך כדי זרימה בארון כדי להבטיח שמירה על תנאים סטריליים במהלך ניתוחים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לגלח את אגף ימין ואת החלק האחורי של בעלי החיים על מנת לבצע את הניתוח, מאוחר יותר להחדיר את הנוזלים בנמל גישה באזור נקי. למקם את החיה במיקום רוחבי נח על האגף השמאלי שלה בטבלה כירורגית, עם מערכת תרמית כדי להבטיח כי הטמפרטורה שלו לא תיפול.</li>
	<li>לחטא את האזור עם 1% chlorhexidine gluconate פתרון. חותך חתך קטן (0.5 ס מ) במספריים קהים בעור באגף ימין של הגוף, להפריד אותו בזהירות בעזרת המספריים משכבת שרירים סמוכים, כך כל האזור האחורי של החיה מופרד טוב מאוחר יותר להיות מסוגל להציג הנמל של access בקלות. נא להפנות איור 1 כדי לראות את החומרים הדרושים כדי בצע את ההליך.</li>
	<li>עושים חתך קטן כ- 1 מ מ קוטר דרך השכבה שריר והכנס את קצה הקטטר, את טבעת הפלסטיק הראשון. הנזק הצפק שנגרם היא מזערית.</li>
	<li>תפר הקיר הצפק בחוזקה סביב הקטטר, בתפר נספגים 5.0 או 6.0. טבעת פלסטיק אחת מכן ממוקם בתוך חלל הצפק, והשני בין השריר העור. הצנתר הוא קבוע ובכך למנוע את הנוזל דולף לחלל תת עורית.</li>
	<li>הוספת יציאת גישה לחלל התת עורית לכיוון הזנב של העכבר, ללא כדי לאבטח אותו למיקום תיקון על העור, כמו זה יכול לגרד ועל בעלי החיים עלול לשרוט ונשך העור שלהם.</li>
	<li>לסגור את הפצע של העור בתפר נספגים 5.0 או 6.0. להסיר את ההרדמה שאיפת ולאפשר את החיה לשחזר את התודעה. אין להשאיר את העכבר ללא השגחה עד זה שהכרתו מספיק כדי לשמור על recumbency בחזה ובצלעות. כאשר החלימו לחלוטין, עכבר שאפשר יהיה להחזיר את החברה של בעלי חיים אחרים. הערה: הניסויים יכולים להתחיל לאחר 4-7 ימי ההחלמה שלאחר הניתוח.</li>
	<li>לספק שיכוך כאבים על ידי המסת 3 מ"ל של איבופרופן (20 מ"ג/מ"ל) ב- 250 מ של מי שתייה ליום של הניתוח.</li>
	<li>במהלך התקופה לאחר ניתוח, לבדוק את מצב הבריאות של חיה מדי יום, בודק שאין אין אזורים האדים על העור, השיער השתפל או פצעים.</li>
	<li>להזריק את הנוזלים על ידי מחזיק את החיה (ללא מאלחש זה) בזנבו תופס יציאת גישה ביד אחת, ואת המחט עם האחר. לחטא את האזור עם 1% chlorhexidine gluconate פתרון לפני ההזרקה. זה מעניין להשתמש מחטים מיוחדות (הובר מחטים), כי הם משופע כדי חלק במקום פירס מחצה סיליקון של היציאה גישה (איור 1 א'). שתי זריקות ביום במשך 40 ימים מספיקים כדי לצפות שינויים הצפק (איור 3).</li>
	<li>לאחר סיום הניסוי, המתת חסד העכבר על ידי פחמן דו-חמצני חנק או נקע בצוואר הרחם.</li>
</ol>2. ביצוע כריתת כליה 5/6, הצנתר
הערה: להידמות יותר טוב את המצב בחולים PD זה אפשרי לבצע כריתת כליה 5/6, ומאפשר רק של תפקוד כלייתי שיורי. במקרה זה, הדוגמאות סרום יש לנקוט כדי לנתח אוריאה רמות על-ידי חילוץ 250 μL של דם דרך הווריד פנים לנקב, לפחות יום אחד לפני תחילת הניתוחים, באמצע הטיפול וכאשר להקריב את החיות. עדיף אם ההליכים נעשים תוך כדי זרימה בארון כדי להבטיח שמירה על תנאים סטריליים במהלך ניתוחים.
<ol><li>עזים ומתנגד העכברים באמצעות איזופלוריין כמו שלב 1.1.</li>
	<li>לספק שיכוך כאבים 0.1 מ"ג/ק"ג של הבופרנורפין, מזריקים subcutaneously בצוואר של בעל החיים, על ידי המסת 3 מ"ל של איבופרופן (20 מ"ג/מ"ל) ב- 250 מ של שתיית מים במשך יום לפני וביום של הניתוח.</li>
	<li>לגלח את laterals ואת החלק האחורי של בעלי החיים על מנת לבצע את הניתוחים, מאוחר יותר להחדיר את הנוזלים בנמל גישה באזור נקי.</li>
	<li>לבצע חתך של 0.5 ס מ של העור, בצד שמאל, קרוב הצלעות יש גישה ישירה אל הכליה השמאלית.</li>
	<li>פתח חתך קטן בשריר לקחת הכליה השמאלית הצפק, הסרת את הקפסולה, בלוטת יותרת הכליה. כדי להסיר את הקפסולה יש צורך כדאי להחזיק את הכליה מחוץ חלל הצפק.</li>
	<li>לצרוב, חתך הניגודים בין הכליה עם cauterizer (לקבלת החומרים הדרושים, ראה איור 1 ).</li>
	<li>להציג מחדש את הכליה לתוך חלל הצפק, תפר את הפצעים השריר ואת העור בתפר 5.0 או 6.0 קשי תמס.</li>
	<li>ביום לאחר לחלוטין הסרת הכליה הימנית והכנס את הצנתר באמצעות אותו החתך כדי להסיר את הכליה. שוב, עזים ומתנגד את העכבר עם איזופלוריין, subcutaneously מזריקים 0.1 מ"ג/ק"ג של הבופרנורפין לפני הליך כירורגי. גם להמיס 3 מ"ל של איבופרופן (20 מ"ג/מ"ל) ב- 250 מ של מים לשתיה יום לפני וביום של הניתוח.</li>
	<li>אעשה חתך בעור של 0.5 ס מ ו, בעזרת המספריים, להפריד את העור מאחורי החיה השריר כדי לפתוח את החלל שבו ימוקמו יציאת גישה.</li>
	<li>לבצע חתך בשריר (על 0.3-0.4 ס מ) כדי לקחת את הכליה הימנית מתוך חלל הצפק.</li>
	<li>הסר את הקפסולה ואת בלוטת יותרת הכליה יש גישה טובה יותר הכליה. מאתרים ומפסיקים וריד הכליה עורק, שופכן עם תפרים נספגים 5.0 או 6.0 ולהסיר את הכליה לחלוטין.</li>
	<li>תפר את הפצע-השריר הצפק, היכרות עם הסוף של הקטטר כך השריר חייב להישאר בין שתי טבעות פלסטיק, כמו שהסברנו בעבר (שלב 1.5).</li>
	<li>להציג את יציאת גישה לחלל תת עורית, תפר את העור כמוסבר בשלבים 1.6 ו- 1.7. הערה: עכברים צריכה לנוח לפחות 10 ימים מניתוחים אלה כדי להבטיח הפצעים על השריר הצפק נרפא לחלוטין תהיה זליגת לחלל התת עורית תוך הזרקת הנוזל. להזריק את הנוזל כמו שלב 1.10.</li>
	<li>לאחר סיום הניסוי, המתת חסד החיות על ידי פחמן דו-חמצני חנק או נקע בצוואר הרחם.</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

הנתונים שפורסמו הראשון ניתוח PD שינויים באמצעות טכניקה "לסגור את מערכת" בוצעה בשנת 200929 . מערכת זו קרובה כלומר המכשיר כולו ממוקם בתוך הגוף נוזלי מוזרק עם מחט דרך יציאת גישה. הבעיה הטכנית החשוב ביותר במודלים חייתיים לטווח ארוך של עירוי נוזלים דרך קטטר היא המופע של חסימה. אופציות א...

תפקוד כליות, מחלת כליות
הכליות הן איברים חיוניים מעורבים הומאוסטזיס, סינון הדם וייצור הורמונים. ישנם תנאים שונים להוביל לכשל כלייתי, תחילתה עוקבות של אורמיה, אשר הוגדרה כקבוצת מהתופעות מערכתית בשל הצטברות פסולת בדם נשמרות עקב הפרעות תפקוד כליה1 יתר על כן, מאז יכולת homeostatic מושפעת גם כאשר קיים כשל כליות, יתר לחץ דם עקב עומס נפח עלולה להתרחש, וזה גם מסוכן כמו זה יכול להוביל ספיקת לב1. כאשר יכולת תפקודית של הכליות הוא פחות מ 10% - 15%, המטופל חייב לעבור לאחת האפשרויות הטיפוליות הבאות: המודיאליזה, דיאליזה פריטוניאלית (PD) או השתלת כליות.
המשטרה היא אופציה מעניינת זה מאפשר לחולים להמשיך טיפול מן הנוחות של הבית שלהם או כמעט בכל מקום, ובכך נמנע הצורך החולים תכופים מבקר ונשאר. הטכניקה המשטרה מבטלת מולקולות רעילים קטנות, המים העודפים שנוצרו על-ידי הגוף2 דרך החדרה נוזלים osmotic (נוזל דיאליזה פריטוניאלית, PDF) לתוך חלל הצפק. החדרה זו יוצרת מעבר הצבע osmotic הכרחי עבור ההחלפה של מומסים בגבול ומים בין נימי הצפק PDF, תהליך המכונה אולטראפילטרציה (UF).
הצפק פגיעה הנגרמת על ידי דיאליזה פריטוניאלית
חלל הצפק מכוסה על ידי קרום (PM) המורכבת של טפט התאים mesothelial נח על מטריצה, המאכלס גם מספר כלי הדם, fibroblasts, מקרופאגים אוכלוסיות תאים אחרים. למרבה הצער, קרום הצפק סובל תמיד כמה שינויים במהלך הטיפול PD, כגון אפופטוזיס ועל אובדן התאים mesothelial, המעבר mesenchymal של mesothelial (MMT) ותאי אנדותל (end-MT), גיוס של תאים דלקתיים ו fibrocytes, שינויים בכלי הדם, אנגיוגנזה, lymphangiogenesis ו/או פיברוזיס3,4,5,6,7,8,9. שינויים אלה אחראים התפתחות UF קיבולת כשל10, שמונע את המשך הטיפול, הדורש כי החולה חייב לקבל טיפול חלופי כדי לשרוד (המודיאליזה או השתלת כליות) . לכן, עבור חולים אלו, זה חיוני כדי לעכב או לשלוט על התפתחות שינויים אלה הצפק.
זה כבר העריכו כי אורמיה לבד עלול לגרום לדלקת11, אבל המקומיים הגורם החשוב ביותר היא PDF bioincompatibility. רוב מסמכי Pdf להשתמש גלוקוז כסוכן osmotic, הגורמת לדלקת. הודות PDF אחסון פעמים של עיקור, גלוקוז סובל תהליך של השפלה, מוצרים חדשים מבית כזאתי מופיעים, יצירת דלקת,12,MMT, אפופטוזיס13יותר. יתר על כן, יש גם האפשרות של פגיעה מכנית עקב השיטה החדרה. כל הגורמים הללו, מתנהג באופן רציף, עשויה ליצור מצב דלקתי מתמיד, חוזרים ונשנים, שמוביל דלקת כרונית, אשר מסיע ממברנה התדרדרות וכשל, באופן סופי, UF. כמה נזק זה יכול להיות מופחת או נמנע הוא עדיין עניין של מחקר.
ניתוח על ההתפתחות של נגעים: מדגימות האנושי מודלים בבעלי חיים
עבודה עם ביופסיות האנושית היא גורם מגביל עקב הקושי בהשגת דגימות רקמה. דגימות אלה ניתן להשיג רק ניתוחים שבוצעו עקב תקלה קטטר או השתלת, בדרך כלל לאחר שנים של טיפול המשטרה. גישה זו שימושית לצורך הניתוח של שינויים פתולוגיים סבל על ידי קרום הצפק נחשף ל- PDF, אך אינה מספיקה כדי ללמוד על התפתחות התהליך. אפשרות אחרת היא לנתח תאים מרוקנת מכל למטעי דיאליזה, אבל זה עדיין לא ניתן לספק תרחיש מלא. מיזוג בשתי הטכניקות אפשרי רק עם מודלים בעלי חיים. המבנה הצפק הוא דומה בקרב יונקים, לכן ישנם דגמים עם מיני בעלי חיים שונים. ישנם כמה מחקרים בהתבסס על כבשים (Rodela. et al. 14 ו- Barrell. et al. 15) ומודלים ארנב16,17 ; עם זאת, חיות קטנות יותר עדיפים כמו הם להקל על הבית, לשמור על, הם גם חסכוני יותר. השימוש של חולדות18,19,20,21,22,23,24 מציע זמן טיפול קצר יותר היה צריך לצפות שינויים מורפו-פונקציונלי. הוא ייצג את מודל שימושי מאוד לחקור נושאים שונים כגון ההשפעה של תרופות anti-fibrotic לדוגמה BMP-7 (עצם morphogenic חלבון-7)25 וראס (מערכת הרנין-אנגיוטנסין-אלדוסטרון) מיקוד26,27 , 28.
עם זאת, המודל מאתר התפתחה מודל אידיאלי עם יתרונות רבים על פני אחרים. היתרון הכי מעניין הוא ששינה האפשרות של שימוש גנטית עכברים ללמוד את הבסיס המולקולרי וסלולריות לנזק הצפק. למעשה, עכברים מועסקים לעיתים קרובות לניתוח של מחלות רבות, שכן ישנם זנים שונים עם רקע גנטי ידועים שונים. יתרונות נוספים כוללים את שטח מופחתת הנדרש עבור דיור, מופחתת עלות הניסויים (בגלל גודל קטן יותר החיה), קלות הטיפול, הזמינות של ריאגנטים, הכמות הגוברת של מידע זמין על זנים שונים של עכברים מאז הם היו חיות הנפוצות ביותר במחקר.
מודל המבוסס על עכברים העסקת התקן מושתל כבר המודל ביותר לאחרונה הוקמה משטרת29,30, הוכח לחקות הצפק בליה הנגרמת החולים במחלה עקב חשיפה מסמכי Pdf. מודל זה שיתפה פעולה כדי להבין את שהתהליכים הפתולוגיים ערבו31,32,33. יתר על כן, זה כבר משמש לאימות טיפולים פוטנציאליים שונים עבור ameliorating זה הידרדרות באמצעות המערכת החיסונית מאפננים, תרופות אנטי דלקתיות, אחרים anti-fibrotic וסוכנים אנטי-אנגיוגנזה, כגון מעכבי COX-2 (cyclooxygenase-2) 34, אגוניסטים PPAR-γ (פראוקסיזום מופעל proliferator קולטן-γ)35, טמוקסיפן36, Paricalcitol (ויטמין D קולטן activator זה שמחליש את התגובה החיסונית)37, Rapamycin38 ו Nebivolol 39.
פיתוח המודל עכבר עם קטטר מושתל
המטרה של מודל זה הוא דומה, ככל האפשר, הטכניקה בשימוש בחולים אנושיים PD, ומאפשר לבצע טיפולים מורחב של משטרת חיות קטנות. עד כה, שלוש טכניקות החדרה של נוזל דיאליזה לתוך הצפק נבדקו בעכברים. הראשון, עיוור לנקב של החזית קיר הבטן, שנוי במחלוקת בשל הסיכונים מרובות זה שכ"ט, כגון נזק הצפק, דימום, והוא, כמו דקירה שבוצעו בצורה עיוורת, מהבטן. השיטה השנייה היא מה שנקרא "פתוח קבוע מערכת", שבה ההתקן הזרקת הנוזל ממוקמת מחוץ לגוף. ההליך זה הכי דומה לזו שבוצעה ב בני אדם. עם זאת, הוא אינו מאפשר ההתפתחות של ניסויים ארוכי טווח, מכיוון שהוא עלול להגביר את הסיכויים לזיהום, בדרך כלל דורשת השימוש בהרדמה כדי להחדיר PDF, אשר עלולים להפריע התוצאות. השיטה השלישית היא "מערכת סגורה". עם גישה זו, המכשיר כולו משמש החדרה נוזלים הינו ממוקם בתוך גוף החיה. נוזל מוזרק עם מחט דרך יציאת גישה, אשר ממוקם subcutaneously. הליך זה מפחית את הסיכון של דלקת הצפק, דימום כמו גם את הצורך בהרדמה.
כדי לחקור את ההשפעה של אורמיה ב- PD, מודל מאתר האחרונות היה גם שרד40 בהתבסס על המודל אינפוזיה PDF עם קטטר. מודל זה מביא טכניקה חדשנית לביצוע של כריתת כליה בעכברים, ובכך להקטין את תפקוד הכליות. במאמר הנוכחי, שינוי של פרוטוקול מועסק על ידי. Ferrantelli et al. ב 201540 פותחה. פרוטוקול חדש זה מאפשר השרשה קטטר תוך כריתת כליה, מפחית את אורך הפצע אשר נגרם במהלך הניתוח מקלה על גישה לכליות.

<table><tbody><tr><td>Minute Mouse Port 4French with retention beads and cross holes</td><td>Access technologies</td><td>MMP-4S-061108A</td><td></td></tr><tr><td>Posi-Grip Huber point needles 25 ga. X 1/2&amp;acute;&amp;acute;&amp;nbsp;</td><td>Access technologies</td><td>PG25-500</td><td></td></tr><tr><td>High Temperature Cautery Kit</td><td>Bovie</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Forane</td><td>abbVie</td><td>880393.4 HO</td><td></td></tr><tr><td>non absorbable suture 6/0</td><td>Laboratorio Agar&amp;oacute;</td><td>6121</td><td></td></tr><tr><td>Scissors&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>clamp</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine 0,3 mg/ml</td><td></td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr><tr><td>cotton swabs</td><td></td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr><tr><td>Dalsy (Ibuprofen) 20mg/mL oral suspension</td><td>AbbVie&amp;nbsp;S.R.L.&amp;nbsp;</td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr></tbody></table>

surgical techniques for catheter placement and 5/6 nephrectomy in murine models of peritoneal dialysis

דיאליזה פריטוניאלית (PD) הוא טיפול החלפת הכליות עקבית על ניהול ושחזור האחורי של נוזל hyperosmotic בתוך חלל הצפק לנקז מטבוליטים רעילים ומים הכליות לא מספיק פונקציונלית אינם מסוגלים לחסל. למרבה הצער, הליך זה מתדרדר של הצפק. נזק לרקמות מפעיל את התפרצות של דלקת לרפא את הפגיעה. אם הפגיעה נמשכת והופך להיות דלקת כרונית, היא עלולה להוביל פיברוזיס, וזו תופעה שכיחה במחלות רבות. PD, דלקת כרונית, פיברוזיס, יחד עם אחרים תהליכים ספציפיים הקשורים אלה, להוביל להידרדרות קיבולת אולטראפילטרציה, מה שאומר את כשל ואת הפסקת עוקבות של הטכניקה. עבודה עם דגימות אנושי מספק מידע על הידרדרות זו אבל מתנות מגבלות טכניות ומוסרי כדי להשיג ביופסיות. מודלים בעלי חיים חיוניים ללמוד הידרדרות זו מאז הם להתגבר על חסרונות אלה.
מודל אינפוזיה העכבר כרונית פותחה בשנת 2008, אשר נהנה מתוך מגוון רחב של עכברים מהונדסים, פותח את האפשרות של הלומדים את המנגנונים המעורבים. מודל זה מעסיקה התקן מותאם אישית עבור עכברים, המורכב קטטר המחובר ליציאת גישה הממוקמים subcutaneously מאחורי החיה. נוהל זה מונע פנצ'רים רציפה של הצפק במהלך ניסויים ארוכי טווח, להפחתת זיהומים ודלקות בשל זריקות. בזכות מודל זה, הצפק נזק הנגרם על ידי חשיפה כרונית של נוזלים PD יש כבר מאופיין, מאופנן. טכניקה זו מאפשרת לעירוי של כמויות גדולות של נוזלים, יכול לשמש לחקר מחלות אחרות אשר נחוצה חיסון של סמים או חומרים אחרים על פני פרקי זמן ארוכים.
מאמר זה מציג את שיטת המיקום כירורגי של הקטטר בעכברים. יתר על כן, זה מסביר את השגרה כריתת כליה 5/6 לחקות את המצב של מחסור של הכליות נוכח החולים במחלה.

איור 1 מציג את כל החומרים הדרושים בצע את ההליכים המתוארים בסעיף פרוטוקול. עבור דוגמה זו, עכברים נאספו או לא כריתת כליה (8 חיות לכל קבוצה) (איור 2) נחשפו במהלך 40 ימים (שתי זריקות ביום, מחכים לפחות שעתיים בין שניהם) תערובת של שני מסמכי Pdf שונים, נפ?...

Watch this Scientific Journal Video about Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis at JoVE.com

Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis

טכניקות ניתוחיות קטטר השמה, כריתת כליה 5/6 דגמים מאתר של דיאליזה פריטוניאלית

מאמר זה מציג את שיטת המיקום כירורגי בעכברים של קטטר בקרום הבטן מחובר ליציאת גישה זה ממוקם מאחורי החיה. יתר על כן, זה מסביר את השגרה כריתת כליה 5/6 להידמות המדינה uremic של החולים במחלה.

Peritoneal dialysis (PD) is a renal replacement therapy consistent on the administration and posterior recovery of a hyperosmotic fluid in the peritoneal ...

surgical-techniques-for-catheter-placement-56-nephrectomy-murine

Research

JoVE Journal

Engineering

15.1K Views.  Spanish National Research Council. מאמר זה מציג את שיטת המיקום כירורגי בעכברים של קטטר בקרום הבטן מחובר ליציאת גישה זה ממוקם מאחורי החיה. יתר על כן, זה מסביר את השגרה כריתת כליה 5/6 להידמות המדינה uremic של החולים במחלה.

Video: Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and podocytes with their slit diaphragms. The delicate structure of the glomerular filter, especially the slit diaphragm, relies on the interplay of diverse cell surface proteins. Studying these cell surface proteins has so far been limited to in vitro studies or histologic analysis. Here, we present a murine in vivo biotinylation labeling method, which enables the study of glomerular cell surface proteins under physiologic and pathophysiologic conditions. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of a protein of interest. Semi-quantitation of glomerular cell surface abundance is readily available with this novel method, and all proteins accessible to biotin perfusion and immunoprecipitation can be studied. In addition, isolation of glomeruli with or without biotinylation enables further analysis of glomerular RNA and protein as well as primary glomerular cell culture (i.e., primary podocyte cell culture).

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Here we present a protocol for murine in vivo labeling of glomerular cell surface proteins with biotin. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of the protein of interest.

בידוד של Glomeruli, In Vivo תיוג של חלבונים פני שטח התא Glomerular

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and ...

Biochemistry

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully recapitulate early- and late-stage metastatic disease progression. Typical tumor implantation models utilize ectopic or orthotopic primary tumor implantation, but few include systemic spontaneous metastatic disease that mimics the clinical setting. This protocol describes the key steps to develop RCC disease progression stages similar to patients. First, it uses a highly metastatic mouse tumor cell line in a syngeneic model to show orthotopic tumor cell implantation. Methods include superficial and internal implantation into the sub-capsular space with cells combined with matrigel to prevent leakage and early spread. Next it describes the procedures for excision of tumor-bearing kidney (nephrectomy), with critical pre- and post- surgical mouse care. Finally, it outlines the steps necessary to monitor and assess micro-and macro-metastatic disease progression, including bioluminescent imaging as well provides a detailed visual necropsy guide to score systemic disease distribution. The goal of this protocol description is to facilitate the widespread use of clinically relevant metastatic RCC models to improve the predictive value of future therapeutic testing.&#160;

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Models of spontaneous metastatic renal cell carcinoma (RCC) disease progression can be used for evaluating treatments in a clinically relevant setting. This protocol demonstrates different procedures for orthotopic kidney tumor cell implantation, proper nephrectomy, and finally outlines a necropsy guide for visual and bioluminescent scoring of metastatic burden and localization.

Nephrectomy דוגמנות קרצינומה ספונטני גרורתי של תאי כליות (mRCC) בעכברים בעקבות

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Medicine

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

טכניקת השתלת כליה בעכברים

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Microdissection of Primary Renal Tissue Segments and Incorporation with Novel Scaffold-free Construct Technology

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only one-fourth of these patients achieving transplantation, there is a dire need for alternatives for those with failing organs. In order to decrease the harmful consequences of dialysis along with the overall healthcare costs it incurs, active investigation is ongoing in search of alternative solutions to organ transplantation. Implantable tissue-engineered renal cellular constructs are one such feasible approach to replacing lost renal functionality. Here, described for the first time, is the microdissection of murine kidneys for isolation of living corticomedullary renal segments. These segments are capable of rapid incorporation within scaffold-free endothelial-fibroblast constructs which may enable rapid connection with host vasculature once implanted. Adult mouse kidneys were procured from living donors, followed by stereoscope microdissection to obtain renal segments 200 - 300 &#181;m in diameter. Multiple renal constructs were fabricated using primary renal segments harvested from only one kidney. This method demonstrates a procedure which could salvage functional renal tissue from organs that would otherwise be discarded.

Tissue-engineered renal constructs provide a solution for the organ shortage and deleterious effects of dialysis. Here, we describe a protocol to micro dissect murine kidneys for isolation of cortico-medullary segments. These segments are implanted into scaffold-free cellular constructs, forming renal organoids.

Microdissection של מקטעי רקמת הכליה העיקרי, התאגדות עם טכנולוגיית הרומן לבנות בפיגומים-חופשית

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only ...

Bioengineering

A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this operation. Therefore, this article introduces the technique and points out the surgical caveats associated with this operation. In addition, important modifications in comparison to the conventional procedure are demonstrated. Firstly, a patch of the abdominal aorta is cut and prepared so that the proximal bifurcations of the renal artery, including the ureteral artery are transected together with the donor kidney en bloc. This reduces the risk of a ureter necrosis and avoids the development of a urinary tract occlusion. Secondly, a new method of the vascular anastomosis is demonstrated that allows the operator to flexibly increase or decrease the size of the anastomosis after renal transplant reperfusion has already been initiated. This avoids the development of vessel strictures and intraabdominal bleeding. Thirdly, a technique that enables the anastomosis of the delicate donor ureter and the recipient bladder that does not cause a trauma is shown. Adopting this protocol can shorten the operation time and reduces the damage to the recipient's bladder, thereby significantly increasing the operation success rate for the recipient mice.

This protocol presents a new surgical technique of mouse kidney transplantation focusing on a modified arterial anastomosis strategy. A vascular suture technique including a simple and safer ureter-bladder anastomosis method is also presented. These modifications shorten the operation time and improve the success rate of the mouse kidney transplantation procedure.

טכניקה כירורגית מותאמת להשתלת כליה בעכברים

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

Immunology and Infection

A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive peritoneal membrane failure in humans, which remains an area of intense investigation due to its profound clinical implications in managing patients with end-stage kidney disease (ESKD). Despite the clinical importance of PD and its related complications, current experimental murine models suffer from key technical challenges that compromise the models&#39; performance. These include PD catheter migration and kinking and usually warrant earlier catheter removal. These limitations also drive the need for a greater number of animals to complete a study. Addressing these drawbacks, this study introduces technical improvements and surgical nuances to prevent commonly observed PD catheter complications in a murine model. Moreover, this modified model is validated by inducing peritoneal inflammation and fibrosis using lipopolysaccharide injections. In essence, this paper describes an improved method to create an experimental model of PD.

This article describes modifications of a procedure to implant a peritoneal dialysis catheter in a murine model to avoid major technical issues observed with the conventional techniques.

גישת השתלה מדרדרית למיקום צנתר דיאליזה פריטוניאלית בעכברים

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive ...

A Murine Model of Hemodialysis Access-Related Hand Dysfunction

Chronic kidney disease is a major public health problem, and the prevalence of end-stage renal disease (ESRD) requiring chronic renal replacement therapies such as hemodialysis continues to increase. Autogenous arteriovenous fistula (AVF) placement remains a primary vascular access option for ESRD patients. Unfortunately, approximately half of the hemodialysis patients experience dialysis access-related hand dysfunction (ARHD), ranging from subtle paresthesia to digital gangrene. Notably, the underlying biologic drivers responsible for ARHD are poorly understood, and no adequate animal model exists to elucidate the mechanisms and/or develop novel therapeutics for the prevention/treatment of ARHD. Herein, we describe a new mouse model in which an AVF is created between the left common iliac artery and vein, thereby facilitating the assessment of limb pathophysiology. The microsurgery includes vessel isolation, longitudinal venotomy, creation of arteriovenous anastomosis, and venous reconstruction. Sham surgeries include all the critical steps except for AVF creation. Iliac AVF placement results in clinically relevant alterations in central hemodynamics, peripheral ischemia, and impairments in hindlimb neuromotor performance. This novel preclinical AVF model provides a useful platform that recapitulates common neuromotor perturbations reported by hemodialysis patients, allowing researchers to investigate the mechanisms of ARHD pathophysiology and test potential therapeutics.

This protocol details the surgical steps of murine common iliac arteriovenous fistula creation. We developed this model to study hemodialysis access-related limb pathophysiology.

מודל מורין של המודיאליזה גישה לתפקוד לקוי של היד

Chronic kidney disease is a major public health problem, and the prevalence of end-stage renal disease (ESRD) requiring chronic renal replacement ...

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype called "uremic cardiomyopathy". We describe here an experimental CKD mouse model, named 5/6th partial nephrectomy (PNx) with pole ligation, which developed uremic cardiomyopathy at four weeks post-surgery. This PNx model was performed by a two-step surgery. In step-one surgery, both poles of the left kidney were ligated. In step-two surgery, which was performed 7 days after the step-one surgery, the right kidney was removed. For the sham surgery, the same surgery procedures were performed but without pole ligation of the left kidney or removal of the right kidney. The surgical procedures are easier and less time-consuming, compared to other methods. However, the remnant functional renal mass is not as easily controlled as the renal artery ligation. Four weeks after surgery, in comparison with the sham-operated mice, the PNx mice developed impaired renal function, anemia, cardiac hypertrophy, cardiac fibrosis, and decreased heart systolic and diastolic function.

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

This manuscript provides a detailed two-step surgical procedure to perform mouse 5/6th partial nephrectomy (PNx) with pole ligation. Four weeks after surgery, in comparison with sham-operated mice, the PNx mice developed impaired renal function, anemia, cardiac hypertrophy, cardiac fibrosis, and decreased heart systolic and diastolic function.

כריתת כליה דגםth העכבר 5/6 שגורם קרדיומיופתיה Uremic ניסיוני

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype ...

Biology

<meta charset="utf8"></head><body>כריתת כליה מתוקננת 5/6 בחולדות לאי ספיקת כליות ותת-פרפוזיה

5/6 Nephrectomy Using Sharp Bipolectomy Via Midline Laparotomy in Rats

Chronic kidney disease (CKD) affects over 10% of the global population, amounting to more than 800 million individuals worldwide. The advances in the treatment of CKD have had a significant impact on patient outcomes. While in the past, CKD was often considered a death sentence, with many patients succumbing to the complications of end-stage renal disease, it is now increasingly being managed as a chronic condition with the availability of dialysis and kidney transplantation, as well as new pharmaceutical developments such as SGLT2 inhibitors or nonsteroidal mineralocorticoid receptor antagonists. 
Yet, there continues to be a growing demand for further exploration into the pathophysiological processes and potential therapeutic interventions. Reliable biological models play a crucial role in facilitating this research. Given the multifaceted nature of renal disease, which encompasses not only cell biology but also vascular microanatomy and endocrine signaling, an appropriate model must possess a level of biological complexity that only an animal model can offer, rendering rodents an obvious choice.
This manuscript, therefore, provides an intricate, systematic protocol for surgically reducing renal parenchyma through midline laparotomy and combined total and partial nephrectomy in rats for survival as well as non-survival applications. It emphasizes the critical role of precise surgical techniques in ensuring consistent and reliable outcomes. Prime examples of potential applications for this model include biomolecular and pharmaceutical studies as well as the development of innovative intraoperative imaging modalities, such as hyperspectral imaging, to objectively visualize and differentiate renal malperfusion.

<meta charset="utf8"></head><body>כריתת כליה 5/6 באמצעות כריתה דו-קוטבית חדה באמצעות לפרוטומיה בקו האמצע בחולדות

This manuscript introduces a standardized protocol for a 5/6 nephrectomy by sharp bipolectomy via midline laparotomy in a rat model, aiming to induce a state of renal insufficiency via renal parenchyma reduction with a great degree of methodical precision and low risk of technical error.

כריתת כליה 5/6 באמצעות כריתה דו-קוטבית חדה באמצעות לפרוטומיה בקו האמצע בחולדות

Chronic kidney disease (CKD) affects over 10% of the global population, amounting to more than 800 million individuals worldwide. The advances in the ...

טכניקות ניתוחיות קטטר השמה, כריתת כליה 5/6 דגמים מאתר של דיאליזה פריטוניאלית

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

בידוד של Glomeruli, In Vivo תיוג של חלבונים פני שטח התא Glomerular

Nephrectomy דוגמנות קרצינומה ספונטני גרורתי של תאי כליות (mRCC) בעכברים בעקבות

טכניקת השתלת כליה בעכברים

Microdissection של מקטעי רקמת הכליה העיקרי, התאגדות עם טכנולוגיית הרומן לבנות בפיגומים-חופשית

טכניקה כירורגית מותאמת להשתלת כליה בעכברים

גישת השתלה מדרדרית למיקום צנתר דיאליזה פריטוניאלית בעכברים

מודל מורין של המודיאליזה גישה לתפקוד לקוי של היד

כריתת כליה דגם^th העכבר 5/6 שגורם קרדיומיופתיה Uremic ניסיוני

כריתת כליה 5/6 באמצעות כריתה דו-קוטבית חדה באמצעות לפרוטומיה בקו האמצע בחולדות

כריתת כליה 5/6 באמצעות כריתה דו-קוטבית חדה באמצעות לפרוטומיה בקו האמצע בחולדות