Name: surgical techniques for catheter placement and 5/6 nephrectomy in murine models of peritoneal dialysis
Uploaded: 2018-07-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis at JoVE.com

저자 E. Ferrantelli, G. Liappas R. 산체스-디아스와 P5/6 신 프로토콜을 설정 하는 그들의 지원에 대 한 감사. 쥐 배려와 지원에 대 한 ureic 질소 평가, 및 E. Hevia F. 누 녜 스 지원에 대 한 마틴. 이 작품에서 "정부의 드 Economía y Competitividad" SAF2016-80648R 교부 금에 의해 지원 되었다 / Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS)에서 마누엘 로페스-카브 레 라와 PI 15/00598 Fondo Europeo 드 개발 지역 (MINECO/페더)-페더 기금, 하 Abelardo 아길레라입니다.

여기에 설명 된 모든 메서드는 기관 동물 관리 및 사용 분자 생물학 센터 세 베로 오 초아 (마드리드, 스페인)의 위원회에 의해 승인 되었습니다.
참고: C57BL/6J 여성 쥐 세 12 ~ 14 주 하 고 연구의 시작에서 대략 20 g를 무게 사용 되었다. 모든 동물 표준 조건 하에서 지 내게 되었다 고 음식과 물 광고 libitum부여 했다. 건강 상태는 매일 체크 했다. 장갑, 드 레이프, 카 테 터, 봉합 바늘, 등 필요한 재료 살 균 해야 합니다.
1. 카 테 터를 삽입
참고: 경우에 신장은 제거 되지 않습니다, 그들은 남아 완전히 기능, 요 독 증, 따라서 고립에서 PDF 노출의 연구 허용의 효과 고려 하지 않습니다. 수술 복 막 구멍으로 카 테 터의 원심 극단만을 소개 하 고 그것에 대 한 액세스를 제공 하는 동물의 뒷면에 액세스 포트를 배치에 구성 되어 있습니다. 카 테 터를 배치 하는 절차는 다음과 같습니다.
<ol><li>유도 챔버에 마우스를 놓고 마 취를 사용 하 여 4 %isoflurane 및 산소 0.4 L/min의 유량과 righting 반사의 손실까지 제공 합니다.<ol>
<li>마 취 장치에 연결 된 nosecone 튜브를 통해 2% isoflurane 0.3 L/min의 흐름으로 100% 산소에서를 가진 동물을 유지 한다. 근육 톤과 자극에 응답을 평가 하 여 적절 한 anesthetization를 확인 합니다.</li>
		<li>속도 과정에서 호흡의 깊이 확인 합니다. 눈에 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 수 의사 연 고를 사용 합니다. 절차는 수술 동안 멸 균 상태 유지 되도록 캐비닛 흐름 경우 것이 좋습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>수술을 수행 후 깨끗 한 지역에서 액세스 포트에 액체를 주입 하 고 맞은 측면 및 동물의 뒤를 면도. 동물의 온도 떨어지지 않을 것입니다 되도록 열 시스템과 수술 테이블에는 왼쪽된 측면에 가로 위치에 놓습니다.</li>
	<li>1% 액체 gluconate 솔루션 영역을 치료. 본문의 오른쪽 측면에 피부에 무딘가 위로 작은 잘라 (0.5 c m)를 확인 하 고 분리 그것은 신중 하 게 인접 한 근육 층에서가 위의 도움으로 동물의 뒷면의 전체 지역 소개 수 나중에 잘 분리 되도록 쉽게 액세스 포트입니다. 절차를 수행 하는 데 필요한 자료를 보고 그림 1 을 참조 하십시오.</li>
	<li>근육 층을 통해 직경 약 1 m m의 작은 절 개를 만들고 삽입 카 테 터와 첫 번째 플라스틱 링의 끝. 복 막 피해 최소화 됩니다.</li>
	<li>5.0 또는 6.0 비 흡수 성 봉합 사로 봉합 단단히 테, 주변 복 벽. 1 플라스틱 반지 다음 복 막 구멍, 그리고 근육과 피부 사이 다른 안에 위치 해 있습니다. 테 그로 인하여 피하 공간으로 새 어에서 액체를 방지 하기 위해 고정 됩니다.</li>
	<li>가려움 수 고 동물 수 긁어 그들의 피부를 비트는 피부에 수정 위치를 확보 하지 않고 마우스의 꼬리 쪽으로 피하 공간에 액세스 포트를 삽입 합니다.</li>
	<li>5.0 또는 6.0 비 흡수 봉합 사를 피부 상처를 닫습니다. 흡입 마 취를 제거 하 고 동물의 식을 복구할 수 있도록. 두지 마십시오 마우스 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지. 완전히 복구 하는 경우 마우스는 다른 동물의 회사를 반환할 수 있습니다. 참고: 실험은 수술 후 회복의 4 ~ 7 일 후 시작할 수 있습니다.</li>
	<li>수술 날에 대 한 식 수의 250 ml에서이 부 프로펜 (20 mg/mL)의 3 mL에 용 해 하 여 진통을 제공 합니다.</li>
	<li>수술 후 기간 동안 아무 reddened 영역 피부, 억 센 머리카락이 나 상처에는 확인 매일, 동물의 건강 상태를 확인 합니다.</li>
	<li>동물 (그것은 마비) 없이 꼬리를 한 손으로 액세스 포트와 다른 바늘을 잡아 하 여 액체를 주사. 주입 하기 전에 1% 액체 gluconate 솔루션 영역을 치료. 액세스 포트 (그림 1A)의 실리콘 심장 피어스 대신 부 위해 경사지는 특별 한 바늘 (후버 바늘)을 사용 하는 것이 흥미롭습니다. 40 일 동안 하루 두 주사 복 변경 (그림 3) 관찰에 충분 하다.</li>
	<li>실험 마무리 때 이산화탄소 질 식 또는 자 궁 경관 탈 구 마우스를 안락사.</li>
</ol>2. 5/6 신을 수행 하 고 카 테 터를 삽입
참고: 더 나은 PD 환자에서 상황을 닮은 그것은 잔여 신장 기능만을 허용 하는 5/6 신을 수행할 수 있습니다. 이 경우에, 혈 청 샘플 분석 요소 레벨 250 μ의 얼굴 정 맥을 통해 혈액을 추출 하 여 펑크, 치료 및 동물을 희생 하는 경우에 수술을 시작 하기 전에 적어도 하루에 취해야 한다. 절차는 수술 동안 멸 균 상태 유지 되도록 캐비닛 흐름 경우 것이 좋습니다.
<ol><li>단계 1.1에서 isoflurane를 사용 하 여 쥐를 anesthetize.</li>
	<li>0.1 mg/kg Buprenorphine, 전날과는 수술 당일에 대 한 식 수의 250 ml에서이 부 프로펜 (20 mg/ml)의 3 ml에 용 해 하 여 동물의 목에 피하 주사의 진통 제공.</li>
	<li>수술을 수행 후 깨끗 한 지역에서 액세스 포트에 액체를 주입 하 고는 패스와 동물의 뒤를 면도.</li>
	<li>왼쪽, 왼쪽된 신장에 대 한 직접 액세스를 갈비뼈 가까이 피부에 약 0.5 c m의 절 개를 수행 합니다.</li>
	<li>복 막, 캡슐 및 아드레날린 선 제거에서 왼쪽된 신장 려 근육에 작은 절 개를 엽니다. 캡슐을 제거 하는 더 나은 신장 복 막 구멍 밖에 서 잡아 필요 합니다.</li>
	<li>점화 하 고는 cauterizer와 함께 신장의 극치를 잘라 (필요한 자료에 대 한 그림 1 참조).</li>
	<li>신장 복 막 구멍으로 다시 하 고 불용 성 5.0 또는 6.0 봉합으로는 근육과 피부에 상처를 봉합.</li>
	<li>후, 하루는 완전히 오른쪽 신장 제거 하 고 신장 제거로 같은 절 개를 사용 하 여 카 테 터를 삽입. 또, isoflurane와 마우스를 anesthetize 하 고 수술 직전 Buprenorphine의 0.1 mg/kg을 피하 주사. 또한 식 수 하루 전에 250 ml과는 수술 당일에이 부 프로펜 (20 mg/ml)의 3 ml을 분해.</li>
	<li>약 0.5 cm의 피부에서 절 개 하 게 그리고가 위의 도움으로 액세스 포트 위치할 공간을 열고 근육에서 동물 뒤 피부를 분리.</li>
	<li>근육에 상처를 수행 (0.3-0.4에 대 한 cm)를 복 막 구멍 오른쪽 신장 데리고.</li>
	<li>캡슐과 아드레날린 선 신장에 더 나은 접근을 제거 합니다. 신장 정 맥, 동맥, 및 5.0 또는 6.0 봉합 비 흡수와 ureter ligate 고 신장을 완전히 제거 합니다.</li>
	<li>(1.5 단계) 전에 설명 근육 두 개의 플라스틱 링 사이 유지 해야 하는 카 테 터의 끝을 소개 하는 복 막 근육에 상처 봉합</li>
	<li>1.6와 1.7 단계에 설명 된 대로 피부를 봉합와 피하 공간으로 액세스 포트를 소개 합니다. 참고: 마우스 복 근육에 상처는 완전히 치유 하 고 액체를 주입 하는 동안 피하 공간으로 누설 될 것입니다 이러한 수술에서 적어도 10 일 동안 휴식 해야 한다. 1.10 단계에서 액체를 주사.</li>
	<li>실험 마무리 때 이산화탄소 질 식 또는 자 궁 경부 전위에 의해 동물 안락사.</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

"시스템 닫기" 기술을 사용 하 여 PD 변경 분석 첫 번째 게시 된 데이터는 200929 에 수행 되었다. 이 닫기 시스템 전체 장치는 몸 안에 있는 액체 액세스 포트를 통해 바늘으로 주입 됩니다 의미 합니다. 카 테 터를 통해 유체 주입의 장기 동물 모델에서 가장 중요 한 기술 문제는 방해의 발생 이다. 가능한 옵션은 omentectomy 수행 또는 헤 파 린을 복 막 유착을 줄이기 위해 Pdf에 추가. ?...

신장 기능 및 신장 질환
신장은 항상성, 혈액 여과 및된 호르몬 생산에 필수적인 장기. 신부전, 요 독 증, 신장 기능 장애1으로 유지 하는 혈액에서 폐기물의 축적으로 인해 전신 증상의 그룹으로 정의 된의 후속 발병이 끌 다양 한 조건이 있다. 또한, homeostatic 기능에도 영향을 경우에 신부전, 이후 고혈압 볼륨 과부하 때문에 발생할 수 있습니다, 되는 또한 위험한 심장 마비1발생할 수 있습니다. 때 신장 기능 기능 10%-15%, 환자 다음 치료 옵션 중 하나를 겪어야 한다: 혈액 투 석, 복 막 투 석 (PD) 또는 신장 이식.
PD 환자 치료 또는 실질적으로 어디서 나 그들의 홈의 안락에서 따라서 자주 병원에 대 한 필요성을 피하고 방문 및 체류를 계속 수 있도록 재미 있는 옵션입니다. 경찰 기술 복 막 구멍으로 작은 독성 분자와 삼 투 액 (복 막 투 석 액, PDF)의 주입을 통해 몸2 에 의해 생성 된 과잉의 물을 제거 합니다. 이 점 복 모 세관 및 PDF, 외 (UF)로 알려진 프로세스 사이의 물과 용액의 교환에 필요한 삼 투 그라데이션을 생성 합니다.
복 막 투 석에 의해 유도 된 복 막 부상
복 막 구멍 막 (오후) 또한 몇 혈관, 섬유 아 세포, 대 식 세포와 다른 세포 인구 주택 행렬에 mesothelial 세포의 단층으로 구성 된 적용 됩니다. 불행 하 게도, 복 막 막 항상 겪고 있다 몇 가지 변경을 apoptosis와 mesothelial 세포의 손실, mesothelial (MMT) 및 내 피 (끝-몬태나) 세포, 염증 세포의 채용의 엽 과도 같은 PD 치료 동안 및 fibrocytes, 혈관 변경, 신생, lymphangiogenesis 및 섬유 증3,,45,6,7,8,9. 이러한 변경 UF 용량 오류10, 치료, 환자 (혈액 투 석 또는 신장 이식)을 대체 치료를 받아야 합니다 요구의 계속 하는 걸로 개발에 대 한 책임은 . 따라서, 이러한 환자에 대 한 지연 또는 변경이 복 막의 개발을 제어 필수적 이다.
그것은 혼자 요 독 증 염증11을 발생할 수 있습니다 하지만 가장 중요 한 지역 계수는 PDF bioincompatibility 추측 하고있다. 대부분 Pdf 염증을 일으키는 삼투성 대리인으로 포도 당을 사용 합니다. PDF 저장 시간 및 살 균, 포도 당 저하의 과정을 겪고 있다 고이 반응에서 새로운 제품 표시, 생성 더 많은 염증, MMT와 apoptosis12,13. 또한, 주입 방법 때문에 기계적 손상의 가능성도 있다. 행동을 지속적으로, 이러한 모든 요소는 지속적이 고 재발 성 염증 성 상태 만성 염증, 막 악화 하 고, 결정적으로, UF 실패 드라이브를 선도 생성할 수 있습니다. 이 피해를 감소 하 또는 피할 수 어떻게 아직도 연구의 문제 이다.
변의 개발 분석: 인간의 샘플 동물 모델에서
인간의 생체 검사 작업은 조직 샘플을 얻기에 있는 어려움 때문에 제한 요소 이다. 이 샘플만 카 테 터 고장 또는 이식, PD 치료의 년 후에 일반적으로 수행 하는 수술에서 얻어질 수 있다. 이 방법은 복 막, PDF에 노출에 의해 고통을 병 적인 변화의 분석에 유용 하지만 프로세스의 개발을 연구 하는 데 충분 하지 않습니다. 또 다른 가능성은 세포 투 석 유출에서 뽑아 분석 하 하지만이 여전히 완벽 한 시나리오를 제공 하기 위해 실패 합니다. 두 기술을 병합 동물 모델에 가능 하다. 복 막 구조는 포유류, 사이 유사 하 고 따라서 다른 동물성 종 가진 모델 있다. 양 (Rodela 외 에 따라 하는 몇 가지 연구 14 와 총구 외. 15) 토끼16,17 모델; 그러나, 작은 동물 들은 그들이 집에 쉽게 유지, 그리고는 또한 경제적으로 바람직입니다. 쥐18,19,20,,2122,,2324 를 사용 하 여 관찰 하는 데 필요한 짧은 치료 시간을 제공 나비의 기능 변경입니다. 그것은 예를 들어 BMP-7 (뼈 morphogenic 단백질-7)25 항 거리 약물의 효과 같은 다른 문제와 RAS (renin-안 시스템)26,27 를 대상으로 탐구 하는 매우 유용한 모델 대표 , 28.
그러나, murine 모델은 다른 사람 이상의 많은 혜택으로 이상적인 모델으로 떠오르고 있다. 가장 흥미로운 장점은 유전자 사용의 가능성 수정 복 막 손상의 분자와 세포질 기초 공부 하 쥐입니다. 사실, 수많은 질병의 분석에 대 한 마우스 채용 종종 다양 한 잘 알려진 유전 배경와 여러 가지 변종이 있다. 다른 장점의 실험 (동물의 더 작은 크기) 때문에, 취급의 용이성, 시 약의 가용성 및 증가 양의 쥐의 다른 긴장에 사용할 수 있는 정보 주택, 감소 된 비용에 필요한 감소 공간 이후 그들은 가장 일반적으로 사용 된 동물 연구에서 왔다.
이식된 장치를 채용 하는 마우스 기반 모델 PD29,30, 가장 최근에 설립 된 모델 되었습니다 그리고 복 막 악화 Pdf에 노출 때문에 PD 환자에 의해 고통을 모방을 보여줘 왔다. 이 모델은 병 적인 프로세스 연루31,,3233이해 협력. 또한, 그것은 장황이 면역 변조기 및 항 염증 제 약물 및 다른 반대로 거리를 사용 하 여 저하 고 콕스-2 (cyclooxygenase 2) 억제제 등의 안티-신생 에이전트에 대 한 다양 한 잠재적인 치료를 확인 하기 위해 사용 되었습니다. 34, PPAR-γ (peroxisome proliferator 활성화 수용 체-γ) 촉진제35, Tamoxifen36, Paricalcitol (는 비타민 D 수용 체 활성 제는 면역 반응을 조절 한다)37, Rapamycin38 Nebivolol 39.
이식된 카 테 터와 마우스 모델 개발
이 모델의 목표는 닮은, 가능한 만큼, 작은 동물에 PD의 확장된 처리를 수행할 수 있도록 인간의 PD 환자에서 사용 하는 기술입니다. 지금까지, 복 막으로 투 석 액의 주입에 대 한 세 가지 기술 생쥐에서 테스트 되었습니다. 첫 번째, 눈 앞의 찔린 복 벽 복 막 손상과 같은 발생할 수 있습니다 여러 위험으로 인해 논란은 출혈 하 고, 맹목적으로, 내장 펑크입니다. 두 번째 기술은 소위 "오픈 영구 시스템 이다", 액체 주입 장치 몸 밖에 서 배치 됩니다. 이 절차는 인간에서 수행 하는 가장 비슷합니다. 그러나, 그것은 감염의 기회를 증가 시킬 수 있습니다으로 장기 실험의 개발을 허용 하지 않습니다 고 일반적으로 결과 방해할 수 있는 PDF를 않도록 마 취의 사용을 요구 한다. 세 번째 기술은 "닫힌된 시스템" 이다. 이 방법을 전체 장치 액체 주입에 사용 되는 동물의 몸 안에 있습니다. 유체는 피하 배치 됩니다 액세스 포트를 통해 바늘으로 주사 된다. 이 절차는 복 막 감염 및 출혈 뿐 아니라 마 취에 대 한 필요성의 위험을 줄여줍니다.
PD에 요 독 증의 효과 연구, 최근 murine 모델 또한 되었습니다40 카 테 터와 PDF 주입 모델에 따라 부설. 이 모델 신장 기능 감소, 쥐에는 신을 수행 하는 새로운 기술에 제공 합니다. 현재 문서에서 201540 에 Ferrantelli 그 외 여러분 에 의해 고용 하는 프로토콜의 수정 개발 되었습니다. 이 새로운 프로토콜에는 신, 동안 카 테 테 르 주입 수술 동안 쏜 상처의 길이 감소 하 고 신장에 대 한 액세스를 용이 하 게 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Minute Mouse Port 4French with retention beads and cross holes</td><td>Access technologies</td><td>MMP-4S-061108A</td><td></td></tr><tr><td>Posi-Grip Huber point needles 25 ga. X 1/2&amp;acute;&amp;acute;&amp;nbsp;</td><td>Access technologies</td><td>PG25-500</td><td></td></tr><tr><td>High Temperature Cautery Kit</td><td>Bovie</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Forane</td><td>abbVie</td><td>880393.4 HO</td><td></td></tr><tr><td>non absorbable suture 6/0</td><td>Laboratorio Agar&amp;oacute;</td><td>6121</td><td></td></tr><tr><td>Scissors&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>clamp</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine 0,3 mg/ml</td><td></td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr><tr><td>cotton swabs</td><td></td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr><tr><td>Dalsy (Ibuprofen) 20mg/mL oral suspension</td><td>AbbVie&amp;nbsp;S.R.L.&amp;nbsp;</td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr></tbody></table>

surgical techniques for catheter placement and 5/6 nephrectomy in murine models of peritoneal dialysis

복 막 투 석 (PD)는 신장 대체 요법 관리 및 기능적으로 부족 한 신장 수는 물과 독성 대사 산물을 배출 하는 복 막 구멍에 있는 hyperosmotic 액체의 후부 복구에 일관성이 제거 합니다. 불행 하 게도,이 절차는 복 악화. 조직 손상 부상을 치료 하는 염증의 발병을 트리거합니다. 부상 지속 염증 된다 만성 경우에, 그것은 발생할 수 있습니다 섬유 증는 많은 질병에 일반적인 발생 이다. PD, 만성 염증, 섬유 증, 이러한 것 들에 관련 된 다른 특정 프로세스와 기술의 후속 정지 실패를 의미 한 용량 저하 이어질. 인간의 샘플 작업 biopsies을 얻을 기술 및 윤리적인 한계를 선물만이 악화에 대 한 정보를 제공 합니다. 동물 모델이이 악화 때문에 그들은 이러한 결점을 극복 연구에 필수적입니다.
만성 마우스 주입 모델 관련 된 메커니즘의 가능성을 열고 유전자 변형된 생쥐의 넓은 범위에서 혜택을 2008 년에 개발 되었다. 이 모델은 액세스 포트를 피하는 동물의 뒷면에 부착 된 카 테 터로 구성 된 쥐를 위한 사용자 지정된 장치를 사용 합니다. 이 절차 동안 장기 실험, 감염 및 염증 주사 복 막의 연속 펑크를 방지 합니다. 이 모델 덕분에 만성 PD 유체 노출에 의해 유도 된 복 막 손상이 특징 되어과 변조. 이 기술은 대량의 액체의 주입을 허용 하 고 있는 시간의 연장된 기간 동안 약 또는 다른 물질의 접종은 필요 다른 질병의 연구에 사용 될 수 있습니다.
이 문서는 쥐에 카 테 터의 외과 배치에 대 한 메서드를 보여 줍니다. 또한, PD 환자에 신장 불충분의 상태를 모방 하는 5/6 신에 대 한 절차를 설명 합니다.

그림 1 프로토콜 섹션에서 설명 하는 절차를 수행 하는 데 필요한 모든 자료를 보여준다. 이 예제에서는 마우스 제출 또는 신 (8 동물 그룹 당) (그림 2) 일반적으로 임상 연습에 사용 하는 두 다른 Pdf의 혼합물에 40 일 (두 주사 하루, 둘 사이의 최소 2 시간 대기) 동안 노출 됐다. Extraneal (icodextrin 기반 PDF) 및 Dianeal (포도 당 기반 PDF)...

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Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis

카 테 테 르 배치 및 5/6 신 복 막 투 석의 Murine 모델에 대 한 수술 기법

이 문서는 복 카 테 테 르는 동물 뒤에 있던 한 액세스 포트에 연결 된 쥐에 외과 위치에 대 한 메서드를 보여 줍니다. 또한, 5/6 신 PD 환자의 신부전 상태를 위한 절차를 설명 합니다.

Peritoneal dialysis (PD) is a renal replacement therapy consistent on the administration and posterior recovery of a hyperosmotic fluid in the peritoneal ...

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Research

JoVE Journal

Engineering

15.1K 조회수.  Spanish National Research Council. 이 문서는 복 카 테 테 르는 동물 뒤에 있던 한 액세스 포트에 연결 된 쥐에 외과 위치에 대 한 메서드를 보여 줍니다. 또한, 5/6 신 PD 환자의 신부전 상태를 위한 절차를 설명 합니다.

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Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and podocytes with their slit diaphragms. The delicate structure of the glomerular filter, especially the slit diaphragm, relies on the interplay of diverse cell surface proteins. Studying these cell surface proteins has so far been limited to in vitro studies or histologic analysis. Here, we present a murine in vivo biotinylation labeling method, which enables the study of glomerular cell surface proteins under physiologic and pathophysiologic conditions. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of a protein of interest. Semi-quantitation of glomerular cell surface abundance is readily available with this novel method, and all proteins accessible to biotin perfusion and immunoprecipitation can be studied. In addition, isolation of glomeruli with or without biotinylation enables further analysis of glomerular RNA and protein as well as primary glomerular cell culture (i.e., primary podocyte cell culture).

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Here we present a protocol for murine in vivo labeling of glomerular cell surface proteins with biotin. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of the protein of interest.

절연 Glomeruli와 비보에 사 세포 표면 단백질의 라벨

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and ...

연구

생화학

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully recapitulate early- and late-stage metastatic disease progression. Typical tumor implantation models utilize ectopic or orthotopic primary tumor implantation, but few include systemic spontaneous metastatic disease that mimics the clinical setting. This protocol describes the key steps to develop RCC disease progression stages similar to patients. First, it uses a highly metastatic mouse tumor cell line in a syngeneic model to show orthotopic tumor cell implantation. Methods include superficial and internal implantation into the sub-capsular space with cells combined with matrigel to prevent leakage and early spread. Next it describes the procedures for excision of tumor-bearing kidney (nephrectomy), with critical pre- and post- surgical mouse care. Finally, it outlines the steps necessary to monitor and assess micro-and macro-metastatic disease progression, including bioluminescent imaging as well provides a detailed visual necropsy guide to score systemic disease distribution. The goal of this protocol description is to facilitate the widespread use of clinically relevant metastatic RCC models to improve the predictive value of future therapeutic testing.&#160;

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Models of spontaneous metastatic renal cell carcinoma (RCC) disease progression can be used for evaluating treatments in a clinically relevant setting. This protocol demonstrates different procedures for orthotopic kidney tumor cell implantation, proper nephrectomy, and finally outlines a necropsy guide for visual and bioluminescent scoring of metastatic burden and localization.

마우스의 자발적인 전이성 신장 세포 암 (mRCC)를 모델링에 따라 신장 절제술

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

의학

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

쥐 신장 이식 기술

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Microdissection of Primary Renal Tissue Segments and Incorporation with Novel Scaffold-free Construct Technology

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only one-fourth of these patients achieving transplantation, there is a dire need for alternatives for those with failing organs. In order to decrease the harmful consequences of dialysis along with the overall healthcare costs it incurs, active investigation is ongoing in search of alternative solutions to organ transplantation. Implantable tissue-engineered renal cellular constructs are one such feasible approach to replacing lost renal functionality. Here, described for the first time, is the microdissection of murine kidneys for isolation of living corticomedullary renal segments. These segments are capable of rapid incorporation within scaffold-free endothelial-fibroblast constructs which may enable rapid connection with host vasculature once implanted. Adult mouse kidneys were procured from living donors, followed by stereoscope microdissection to obtain renal segments 200 - 300 &#181;m in diameter. Multiple renal constructs were fabricated using primary renal segments harvested from only one kidney. This method demonstrates a procedure which could salvage functional renal tissue from organs that would otherwise be discarded.

Tissue-engineered renal constructs provide a solution for the organ shortage and deleterious effects of dialysis. Here, we describe a protocol to micro dissect murine kidneys for isolation of cortico-medullary segments. These segments are implanted into scaffold-free cellular constructs, forming renal organoids.

서 주 신장 조직 세그먼트와 소설 비 계 없는 건설 기술 관

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only ...

생체공학

A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this operation. Therefore, this article introduces the technique and points out the surgical caveats associated with this operation. In addition, important modifications in comparison to the conventional procedure are demonstrated. Firstly, a patch of the abdominal aorta is cut and prepared so that the proximal bifurcations of the renal artery, including the ureteral artery are transected together with the donor kidney en bloc. This reduces the risk of a ureter necrosis and avoids the development of a urinary tract occlusion. Secondly, a new method of the vascular anastomosis is demonstrated that allows the operator to flexibly increase or decrease the size of the anastomosis after renal transplant reperfusion has already been initiated. This avoids the development of vessel strictures and intraabdominal bleeding. Thirdly, a technique that enables the anastomosis of the delicate donor ureter and the recipient bladder that does not cause a trauma is shown. Adopting this protocol can shorten the operation time and reduces the damage to the recipient's bladder, thereby significantly increasing the operation success rate for the recipient mice.

This protocol presents a new surgical technique of mouse kidney transplantation focusing on a modified arterial anastomosis strategy. A vascular suture technique including a simple and safer ureter-bladder anastomosis method is also presented. These modifications shorten the operation time and improve the success rate of the mouse kidney transplantation procedure.

마우스의 신장 이식을위한 수정 된 수술 기술

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

면역학 및 감염병학

A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive peritoneal membrane failure in humans, which remains an area of intense investigation due to its profound clinical implications in managing patients with end-stage kidney disease (ESKD). Despite the clinical importance of PD and its related complications, current experimental murine models suffer from key technical challenges that compromise the models&#39; performance. These include PD catheter migration and kinking and usually warrant earlier catheter removal. These limitations also drive the need for a greater number of animals to complete a study. Addressing these drawbacks, this study introduces technical improvements and surgical nuances to prevent commonly observed PD catheter complications in a murine model. Moreover, this modified model is validated by inducing peritoneal inflammation and fibrosis using lipopolysaccharide injections. In essence, this paper describes an improved method to create an experimental model of PD.

This article describes modifications of a procedure to implant a peritoneal dialysis catheter in a murine model to avoid major technical issues observed with the conventional techniques.

마우스의 복막 투석 카테터 배치를 위한 역행 이식 접근법

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive ...

A Murine Model of Hemodialysis Access-Related Hand Dysfunction

Chronic kidney disease is a major public health problem, and the prevalence of end-stage renal disease (ESRD) requiring chronic renal replacement therapies such as hemodialysis continues to increase. Autogenous arteriovenous fistula (AVF) placement remains a primary vascular access option for ESRD patients. Unfortunately, approximately half of the hemodialysis patients experience dialysis access-related hand dysfunction (ARHD), ranging from subtle paresthesia to digital gangrene. Notably, the underlying biologic drivers responsible for ARHD are poorly understood, and no adequate animal model exists to elucidate the mechanisms and/or develop novel therapeutics for the prevention/treatment of ARHD. Herein, we describe a new mouse model in which an AVF is created between the left common iliac artery and vein, thereby facilitating the assessment of limb pathophysiology. The microsurgery includes vessel isolation, longitudinal venotomy, creation of arteriovenous anastomosis, and venous reconstruction. Sham surgeries include all the critical steps except for AVF creation. Iliac AVF placement results in clinically relevant alterations in central hemodynamics, peripheral ischemia, and impairments in hindlimb neuromotor performance. This novel preclinical AVF model provides a useful platform that recapitulates common neuromotor perturbations reported by hemodialysis patients, allowing researchers to investigate the mechanisms of ARHD pathophysiology and test potential therapeutics.

This protocol details the surgical steps of murine common iliac arteriovenous fistula creation. We developed this model to study hemodialysis access-related limb pathophysiology.

혈액 투석 접근 관련 손 기능 장애의 쥐 모델

Chronic kidney disease is a major public health problem, and the prevalence of end-stage renal disease (ESRD) requiring chronic renal replacement ...

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype called "uremic cardiomyopathy". We describe here an experimental CKD mouse model, named 5/6th partial nephrectomy (PNx) with pole ligation, which developed uremic cardiomyopathy at four weeks post-surgery. This PNx model was performed by a two-step surgery. In step-one surgery, both poles of the left kidney were ligated. In step-two surgery, which was performed 7 days after the step-one surgery, the right kidney was removed. For the sham surgery, the same surgery procedures were performed but without pole ligation of the left kidney or removal of the right kidney. The surgical procedures are easier and less time-consuming, compared to other methods. However, the remnant functional renal mass is not as easily controlled as the renal artery ligation. Four weeks after surgery, in comparison with the sham-operated mice, the PNx mice developed impaired renal function, anemia, cardiac hypertrophy, cardiac fibrosis, and decreased heart systolic and diastolic function.

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

This manuscript provides a detailed two-step surgical procedure to perform mouse 5/6th partial nephrectomy (PNx) with pole ligation. Four weeks after surgery, in comparison with sham-operated mice, the PNx mice developed impaired renal function, anemia, cardiac hypertrophy, cardiac fibrosis, and decreased heart systolic and diastolic function.

마우스 5/6일 신 모델 실험 신부전 심근을 유도

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype ...

생물학

<meta charset="utf8"></head><body>신부전 및 관류불량에 대한 쥐의 표준화된 5/6 신절제술

5/6 Nephrectomy Using Sharp Bipolectomy Via Midline Laparotomy in Rats

Chronic kidney disease (CKD) affects over 10% of the global population, amounting to more than 800 million individuals worldwide. The advances in the treatment of CKD have had a significant impact on patient outcomes. While in the past, CKD was often considered a death sentence, with many patients succumbing to the complications of end-stage renal disease, it is now increasingly being managed as a chronic condition with the availability of dialysis and kidney transplantation, as well as new pharmaceutical developments such as SGLT2 inhibitors or nonsteroidal mineralocorticoid receptor antagonists. 
Yet, there continues to be a growing demand for further exploration into the pathophysiological processes and potential therapeutic interventions. Reliable biological models play a crucial role in facilitating this research. Given the multifaceted nature of renal disease, which encompasses not only cell biology but also vascular microanatomy and endocrine signaling, an appropriate model must possess a level of biological complexity that only an animal model can offer, rendering rodents an obvious choice.
This manuscript, therefore, provides an intricate, systematic protocol for surgically reducing renal parenchyma through midline laparotomy and combined total and partial nephrectomy in rats for survival as well as non-survival applications. It emphasizes the critical role of precise surgical techniques in ensuring consistent and reliable outcomes. Prime examples of potential applications for this model include biomolecular and pharmaceutical studies as well as the development of innovative intraoperative imaging modalities, such as hyperspectral imaging, to objectively visualize and differentiate renal malperfusion.

<meta charset="utf8"></head><body>5/6 쥐에서 정중선 개복술을 통한 날카로운 양족 절제술을 사용한 신장 절제술

This manuscript introduces a standardized protocol for a 5/6 nephrectomy by sharp bipolectomy via midline laparotomy in a rat model, aiming to induce a state of renal insufficiency via renal parenchyma reduction with a great degree of methodical precision and low risk of technical error.

5/6 쥐에서 정중선 개복술을 통한 날카로운 양족 절제술을 사용한 신장 절제술

Chronic kidney disease (CKD) affects over 10% of the global population, amounting to more than 800 million individuals worldwide. The advances in the ...

카 테 테 르 배치 및 5/6 신 복 막 투 석의 Murine 모델에 대 한 수술 기법

요약

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쥐 신장 이식 기술

서 주 신장 조직 세그먼트와 소설 비 계 없는 건설 기술 관

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5/6 쥐에서 정중선 개복술을 통한 날카로운 양족 절제술을 사용한 신장 절제술

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