Yazarlar E. Ferrantelli ve G. Liappas R. Sánchez Díaz ve P5/6 nefrektomi iletişim kuralları ayarlanıyor verdikleri destek için teşekkür ederiz. Martin hakkında yardım almak için ureic azot değerlendirmeler ve E. Hevia ve F. Núñez fareler bakımı konusunda yardım almak için. Bu eser "" gayri resmi "de Economía y Competitividad" gelen hibe SAF2016-80648R tarafından desteklenen / Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS) üzerinden Fondo Europeo de Desarrollo bölge (MINECO/FEDER) Manuel López-Cabrera ve PI 15/00598-FEDER fonları için Abelardo Aguilera.

Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve moleküler biyoloji merkezi Severo Ochoa (Madrid, İspanya) kullanım Komitesi tarafından onaylanmış olması.
Not: 12-14 hafta yaşlı ve çalışma başlangıcında yaklaşık 20 gr ağırlığında C57BL/6J dişi fareler kullanıldı. Bütün hayvanlar standart koşullar altında yer alan ve gıda ve su ad libitumverildi. Sağlık koşulları her gün kontrol edildi. Eldiven, örtüsü, kateter, dikiş ve iğneler, gibi gerekli malzeme steril olmalıdır.
1. kateter yerleştirme
Not: böbrekler kaldırılmaz yükselmeye, böylece yalıtım modunda PDF pozlama çalışmanın erişimine izin verme etkisini dikkate almaz böylece onlar tamamen işlevsel kalır. Ameliyat sadece kateterin distal aşırı periton boşluğuna tanıtılması ve bu erişim sağlayan hayvan, arkası erişim bağlantı noktası yerleştirerek oluşur. Kateteri yerleştirmek için bu yordamı aşağıdaki gibidir:
<ol><li>Fareyi bir indüksiyon odasında yerleştirin ve % 4 isoflurane ve oksijen 0,4 L/dak debi ile düzeltilmesi refleks kaybı kadar kullanarak anestezi sağlayın.<ol>
<li>Anestezi cihazı bağlı bir nosecone tüp sayesinde % 100 oksijen 0,3 L/min bir akışı ile % 2 isoflurane hayvanla korumak. Uygun anesthetization kas tonu ve stimülasyon yanıtı değerlendirirken onaylayın.</li>
		<li>Oranı ve bütün işlemi sırasında solunum derinliği kontrol edin. Veteriner merhem gözünü kuruluk anestezi iken altında engellemek için kullanın. Ameliyat sırasında steril koşullar bakım sağlamak için kabine akışı işlemleri yapılırsa tercih edilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sağ kanadı ve hayvanlar arkası ameliyatı gerçekleştirmek için ve daha sonra temiz bir alanda erişim noktasında sıvı enjekte etmek için tıraş. Hayvan cerrahi tablo, sıcaklık düşmeyecek olacaktır emin olmak için termal sistemi ile onun sol kanatta dinlenme bir lateral pozisyonda yerleştirin.</li>
	<li>Alanının % 1 KLORHEKSİDİN GLUKONAT çözüm ile dezenfekte. Küçük bir kesim (0.5 cm) içinde belgili tanımlık deri vücudun sağ kanatta künt makas ile kesme yapmak ve böylece arkadaki hayvan bütün alan de daha sonra tanıtmak edebilmek için ayrılmış dikkatle bitişik kas katmanı, bir makas yardımıyla ayrı erişim kolaylığı ile bağlantı noktası. İzlemek belgili tanımlık prosedür için gerekli malzemeleri görmek için Şekil 1 referans lütfen.</li>
	<li>Kas katmanı yoluyla çapındadır yaklaşık 1 mm küçük bir kesi yapmak ve kateter ve ilk plastik halka ucu yerleştirin. Periton hasarları en az düzeydedir.</li>
	<li>Kateter çevresinde sıkıca periton Duvar ile 5.0 veya 6.0 absorbe olmayan dikiş dikiş. Bir plastik halka sonra periton boşluğuna, diğeri de kas ve deri arasında yer alır. Kateter böylece sıvı subkutan uzaya sızıntı önlemek için sabittir.</li>
	<li>Erişim bağlantı noktası bu cilt için bir düzeltme konumuna kaşıntı ve hayvanlar çizilmeye ve onların deri biraz güvence olmadan fare kuyruğu doğru subkutan boşluk ekleyin.</li>
	<li>5.0 veya 6.0 absorbe olmayan dikiş ile cilt yara kapatın. İnhalasyon anestezi kaldırmak ve hayvan bilinç kurtarmak izin verir. Sternal recumbency korumak için yeterli kendine geldi kadar fareyi sahipsiz bırakmayın. Ne zaman tamamen iyileşti, fare diğer hayvanlar şirkete iade edilebilir. Not: Deneyler ameliyat sonrası kurtarma 4-7 gün sonra başlayabilirsiniz.</li>
	<li>Analjezi ibuprofen (20 mg/mL) 3 mL çözülerek ameliyat günü için 250 mL içme suyu sağlar.</li>
	<li>Ameliyat sonrası dönemde, cilt, Kıllı saç veya yaralar hiç kızarmış alanı kontrol sağlık durumunu günlük, hayvan kontrol edin.</li>
	<li>Hayvan (anesthetizing olmadan) kuyruğundan tutup tek elle erişim bağlantı noktası ve diğer iğneyle kapma sıvı enjekte. Alanının % 1 KLORHEKSİDİN GLUKONAT çözüm önce enjeksiyon ile dezenfekte. Pierce yerine silikon septum erişim noktasının (Şekil 1A) bölüm için eğimli özel iğneler (Huber iğneler), kullanmak ilginçtir. 40 gün boyunca günde iki enjeksiyonları periton değişiklikler (Şekil 3) gözlemlemek için yeterlidir.</li>
	<li>Deneme tamamlanırken, karbon dioksit boğulma veya servikal çıkması fareyle ötenazi.</li>
</ol>2. performans 5/6 nefrektomi ve kateter yerleştirme
Not: daha iyi durum PD hastalarında benzemek için yalnızca bir kalıntı renal işlevi sağlayan bir 5/6 yapılmış gerçekleştirileceği mümkündür. Bu durumda, serum numuneleri kan yüz damar yolu ile 250 μL ayıklanıyor tarafından düzeyleri ponksiyon, tedavi ve hayvanlar ödün orta ameliyatlar başlamadan önce en az bir gün üre analiz etmek için alınmalıdır. Ameliyat sırasında steril koşullar bakım sağlamak için kabine akışı işlemleri yapılırsa tercih edilir.
<ol><li>Fareler isoflurane adım 1.1 olduğu gibi kullanarak anestezi.</li>
	<li>0.1 mg/kg buprenorfin, subkutan boyun hayvan ve ibuprofen (20 mg/ml) 3 ml eriterek tarafından içme suyu 250 ml enjekte bir gün önce ve ameliyat günü için analjezi sağlar.</li>
	<li>Laterallerin ve hayvanlar arkası ameliyatlar gerçekleştirmek için ve daha sonra temiz bir alanda erişim noktasında sıvı enjekte etmek için tıraş.</li>
	<li>Sol böbrek doğrudan erişimi için kaburga, yakın sol tarafındaki deride bir kesi yaklaşık 0.5 cm gerçekleştirin.</li>
	<li>Küçük bir insizyon attım kapsül ve böbrek üstü bezi izale periton, dışarı sol böbrek almaya kas açın. Kapsül kaldırmak için daha iyi böbrek peritoneal kavite dışında tutmak gereklidir.</li>
	<li>Yakmak ve bir cauterizer böbrekle aşırı kesti (malzeme ihtiyaç için Şekil 1 bakınız).</li>
	<li>Böbrek periton boşluğuna reintroduce ve kas ve deri yaraları ile çözünmez 5.0 veya 6.0 dikiş dikerim.</li>
	<li>Bir gün sonra tamamen sağ böbrek çıkarın ve böbrek kaldırmak için aynı kesi kullanarak kateter takın. Yine, fare ile isoflurane anestezi ve subkutan 0.1 mg/kg buprenorfin cerrahi işlem hemen önce enjekte. Ayrıca 3 ml ibuprofen (20 mg/ml) içme suyu önceki gün 250 ml ve ameliyat günü geçiyoruz.</li>
	<li>Bir kesik yaklaşık 0.5 cm cilt içinde yapmak ve makas yardımı ile cilt hayvan arka kas erişim bağlantı noktası yerleştirileceği yer açmak için ayrı.</li>
	<li>Kas bir kesim gerçekleştirmek (0.3-0.4 konuda cm) dışarı periton boşluğuna doğru böbrek almaya.</li>
	<li>Kapsül ve böbrek üstü bezi böbrek daha iyi erişimi için kaldırın. Böbrek damar, arter ve üreter absorbe olmayan 5.0 veya 6.0 dikiş ile ligate ve böbrek tamamen kaldırın.</li>
	<li>Periton kas böylece kas iki plastik halkalar arasında kalmalıdır kateter sonu (adım 1.5) daha önce de açıklandığı gibi tanıtan, yaranın dikiş.</li>
	<li>Erişim bağlantı noktası subkutan uzaya tanıtmak ve 1,6 ve 1.7 adımlarda açıklandığı gibi deri dikiş. Not: Fareler periton kas yaralar tamamen iyileşti ve sıvı enjekte ederken hiçbir sızıntı subkutan uzaya olacak emin olmak için bu ameliyatlar için en az 10 gün dinlenmek. Adım 1,10 olduğu gibi sıvı enjekte.</li>
	<li>Deneme tamamlanırken, karbon dioksit boğulma veya servikal çıkması hayvanlara ötenazi.</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

İlk yayımlanan veri PD değişiklikler "sistemi Kapat" tekniği kullanarak Analizi 200929 gerçekleştirildi. Yakın bu sistem tüm cihaz gövdesi içinde yer alır ve sıvı bir erişim bağlantı noktası üzerinden iğneyle enjekte edilir demektir. En önemli teknik bir kateter ile sıvı infüzyonu uzun vadeli hayvan modellerinde tıkanıklığı geçtiği bir sorundur. Olası seçenekler omentectomy gerçekleştirmek veya heparin periton yapışıklıklar azaltmak için PDF'ye eklemek üzer...

Böbrek ve böbrek hastalığı
Böbrekler temel organları homeostazı, kan filtrasyon ve hormon üretimi vardır. Böbrek yetmezliği ve sistemik semptomlar nedeniyle böbrek fonksiyon bozuklukları1muhafaza kandaki atık ürünlerin birikimi nedeniyle grubu olarak tanımlanan yükselmeye sonraki başlangıcı neden çeşitli koşullar vardır. Böbrek yetmezliği olduğunda homeostatik yeteneği de etkilenir beri Ayrıca, birim aşırı yük nedeniyle hipertansiyon, kalp yetmezliği1' e yol açabilir gibi da tehlikeli ile oluşabilir. Böbreklerde fonksiyonel kapasitesini daha az % 10-% 15'ten, ne zaman hasta tedavi aşağıdaki seçeneklerden birini geçmeleri gerekir: hemodiyaliz, periton diyalizi (PD) veya böbrek nakli.
PD hastalar tedavi böylece sık hastane ihtiyacını kaçınarak rahatlık evlerinin veya neredeyse her yerde, ziyaret ve kalır devam sağlar ilginç bir seçenektir. PD tekniği küçük zehirli moleküller ve aşırı su vücut2 ile korumak bir ozmotik sıvı (Periton Diyaliz sıvısı, PDF) tarafından oluşturulan periton boşluğuna ortadan kaldırır. Bu korumak solutes ve periton kılcal ve PDF, Ultrafiltrasyon (UF) bilinen bir işlem arasında su alışverişi için gerekli ozmotik degrade oluşturur.
Peritoneal yaralanma periton diyalizi tarafından indüklenen
Periton boşluğuna mesothelial hücreler de kaç kan damarları, fibroblastlar, makrofajlar ve diğer hücre popülasyonlarının evler bir matris üzerinde dinlenme monolayer oluşan bir membran (PM) kaplıdır. Ne yazık ki, peritoneal membran her zaman apoptozis ve mesothelial hücreler kaybı, mesothelial (MMT) ve (bitiş-MT) endotel hücreleri, inflamatuar hücre alımı mezenkimal geçiş gibi PD tedavisi sırasında bazı değişikliklere uğrar ve fibrocytes, vasküler değişiklikler, anjiogenez, lymphangiogenesis ve/veya fibrozis3,4,5,6,7,8,9. Bu değişiklikleri için hangi hasta (hemodiyaliz ya da böbrek nakli) hayatta kalmak için alternatif tedavi alması gereken gerektiren tedavisinin devamı önleyen bir UF kapasitesi hatası10, geliştirme sorumlu . Bu nedenle, bu hastalar için bu gecikme veya periton bu değişiklikleri gelişimi denetlemek için esastır.
Bu iltihap11yalnız yükselmeye neden olabilir, ancak PDF bioincompatibility en önemli yerel faktördür spekülasyonlar. Çoğu PDF'ler glikoz inflamasyon nedenleri ozmotik aracı kullanın. PDF depolama kez ve sterilizasyon, nedeniyle glikoz yıkımı süreci uğrar ve bu reaksiyon yeni ürünleri üreten daha fazla inflamasyon,12,13MMT ve Apoptozis görünür. Ayrıca, ayrıca korumak yöntemi nedeniyle mekanik hasar olasılığı mevcuttur. Tüm bu faktörler sürekli olarak hareket, kronik inflamasyon zarı bozulma ve UF başarısızlık için kesin, sürücüler, önde gelen bir kalıcı ve tekrarlayan inflamatuar durumu oluşturabilir. Bu hasar nasıl azaltılmış veya kaçınılması hala çalışma meselesi.
Lezyonlar gelişimi analiz: hayvan modelleri için insan örneklerinden
Çalışma insan biyopsi ile doku örneği almak üzere zorluk nedeniyle kısıtlayıcı bir faktör olduğunu. Bu örnekler yalnızca kateter arıza veya nakli, PD tedavisi yıl sonra genellikle nedeniyle gerçekleştirilen ameliyatlar elde edilebilir. Bu yaklaşım patolojik değişiklikler PDF'ye maruz bir peritoneal membran uğradığı analizi için yararlıdır, ancak süreç geliştirme çalışması için yeterli değildir. Başka bir olasılık Diyaliz Atık süzülmüş hücreleri analiz etmek, ama bu yine de tam bir senaryo sağlamak başarısız. Her iki teknik birleştirme sadece hayvan modelleri ile mümkün olur. Periton yapısı memeliler arasında benzer ve bu nedenle farklı hayvan türleri ile modelleri vardır. Birkaç çalışma koyun (Rodela vd dayalı vardır 14 ve Barrell vd. 15) ve tavşan16,17 modelleri; Ancak, onlar eve kolaydır ve korumak hem de daha ekonomik olarak daha küçük hayvanlar tercih edilir. Kullanma fare18,19,20,21,22,23,24 gözlemlemek için gerekli daha kısa bir tedavi süresi sunuyor Morfo fonksiyonel değişiklikler. Örnek BMP-7 (kemik morphogenic protein-7)25 anti-fibrotik ilaçların etkisi gibi farklı konular ve26,27 hedefleme RAS (renin-anjiyotensin sistem) keşfetmek için çok kullanışlı bir model temsil etmiştir , 28.
Ancak, fare modeli birçok yararları ile ideal bir model olarak diğerleri üzerinde ortaya çıkmıştır. Genetik olarak kullanma imkanı periton hasar moleküler ve hücresel temeli çalışmaya fareler değişikliğin en ilginç avantajdır. Aslında, fareler kez olduğu gibi birçok farklı suşları çeşitli tanınmış genetik kökenli çok sayıda hastalıklar, analiz için istihdam edilmektedir. Diğer avantajı düşük alan deneyler (nedeniyle hayvanların daha küçük boyutu), kullanım kolaylığı, reaktifler kullanılabilirliğini ve fareler farklı suşları kullanılabilir bilgi artan miktarda konut, düşük maliyet için gerekli içerir Onlar en yaygın olarak kullanılan araştırma hayvanlarda beri.
Yerleştirilmiş bir aygıt istihdam bir fare tabanlı model PD29,30için en yeni kurulan model olmuştur ve PD hastaların maruz PDF'lere nedeniyle uğradığı periton bozulma taklit etmek için gösterilmiştir. Bu model patolojik süreçler31,32,33karıştığı anlamak için işbirliği vardır. Ayrıca, bu bağışıklık modülatörler ve anti-inflamatuar ilaçlar ve diğer anti-fibrotik kullanarak bozulma ve anti-anjiogenik acentaları, COX-2 (siklooksijenaz-2) inhibitörleri gibi ameliorating için çeşitli olası tedaviler doğrulamak için kullanılmıştır 34, PPAR-γ (peroxisome proliferatör-aktive reseptör-γ) agonistler35, tamoksifen36, Paricalcitol (Bu bağışıklık reaksiyon gelen bir vitamin D reseptör aktivatör)37, Rapamycin38 ve Nebivololün 39.
Yerleştirilmiş bir kateter ile fare modeli geliştirmek
Bu model, mümkün olduğu kadar küçük hayvanlarda PD genişletilmiş tedaviler gerçekleştirmek için izin veren insan PD hastalarında tekniği kullanılan benzemeye hedeftir. Şimdiye kadar farelerde üç teknikleri içine Periton Diyaliz sıvı korumak için test edilmiştir. İlki, kör ön delik karın duvarı, tartışmalı periton hasar gibi tabi olabilir birden fazla riskleri nedeniyle kanama ve körü körüne gerçekleştirilen, visseral delik olduğu gibi. "Sıvı enjekte için cihazın gövde dışında yerleştirildiği sözde açık kalıcı sistemi", ikinci tekniğidir. Bu yordam en insanlarda gerçekleştirilen benzer. Ancak, enfeksiyon olasılığını artırabilir gibi uzun süreli deneyler, gelişimine izin vermez ve genellikle sonuçları ile girişime neden olabilir PDF aşılamak için anestezi kullanımını gerektirir. "Kapalı sistem" üçüncü tekniğidir. Bu yaklaşım ile sıvı korumak için kullanılan tüm cihaz hayvanın vücudunun içinde yer alır. Sıvı subkutan yerleştirilir bir erişim bağlantı noktası üzerinden iğneyle enjekte edilir. Bu yordamı peritonal enfeksiyon ve kanama gibi anestezi ihtiyacını riskini azaltır.
PD yükselmeye etkisini incelemek için son fare modeli de olmuştur kateter ile PDF infüzyon modelini temel40 stablished. Bu model bir nefrektomi böylece renal fonksiyon azaltarak farelerde, gerçekleştirmek için bir roman tekniği getiriyor. Bugünkü yazıda, Ferrantelli ve ark. tarafından 201540 istihdam protokolü bir değişiklik geliştirmiştir. Bu yeni iletişim kuralı kateter implantasyon sırasında yapılmış, ameliyat sırasında verdirdiler yara uzunluğunu azaltır ve böbrekler için erişimi kolaylaştırır sağlar.

<table><tbody><tr><td>Minute Mouse Port 4French with retention beads and cross holes</td><td>Access technologies</td><td>MMP-4S-061108A</td><td></td></tr><tr><td>Posi-Grip Huber point needles 25 ga. X 1/2&amp;acute;&amp;acute;&amp;nbsp;</td><td>Access technologies</td><td>PG25-500</td><td></td></tr><tr><td>High Temperature Cautery Kit</td><td>Bovie</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Forane</td><td>abbVie</td><td>880393.4 HO</td><td></td></tr><tr><td>non absorbable suture 6/0</td><td>Laboratorio Agar&amp;oacute;</td><td>6121</td><td></td></tr><tr><td>Scissors&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>clamp</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine 0,3 mg/ml</td><td></td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr><tr><td>cotton swabs</td><td></td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr><tr><td>Dalsy (Ibuprofen) 20mg/mL oral suspension</td><td>AbbVie&amp;nbsp;S.R.L.&amp;nbsp;</td><td></td><td>pharmaceutical product</td></tr></tbody></table>

surgical techniques for catheter placement and 5/6 nephrectomy in murine models of peritoneal dialysis

Periton diyalizi (PD) yönetim ve işlevsel olarak yetersiz böbrekler mümkün değildir su ve toksik metabolitleri boşaltmak için Periton boşluğunda hyperosmotic sıvı posterior kurtarma hakkında tutarlı bir renal replasman tedavisi olduğunu ortadan kaldırmak. Ne yazık ki, bu yordamı Karın zarını bozulur. Doku hasarı yaralanma iyileşmek için iltihabı başlangıcı tetikler. Yaralanma devam ederse ve inflamasyon kronik hale gelir, birçok hastalığın ortak bir olay olduğu için fibrozis, neden olabilir. PD, kronik inflamasyon ve fibrozis, bu olanlar için ilgili diğer belirli işlemleri ile birlikte başarısızlık ve teknik sonraki kesilmesi anlamına gelir Ultrafiltrasyon kapasite bozulmasına yol açar. İnsan örnekleri ile çalışma biyopsi almak için teknik ve etik sınırlamalar bu bozulma sunar ama hakkında bilgi sağlar. Hayvan modelleri bu eksikliklerini aşmak beri bu bozulma çalışma için gerekli olan.
Kronik fare infüzyon manken 2008 yılında hangi geniş mekanizmaları dahil eğitim olasılığını açmadan genetiği değiştirilmiş farelerin faydalanacağını geliştirilmiştir. Bu model fareler, subkutan hayvan arkasına yerleştirilen bir erişim bağlantı noktasına bağlı bir kateter oluşan için tasarlanmış özelleştirilmiş bir aygıt kullanır. Bu yordamı Karın zarını sürekli ponksiyon sırasında uzun süreli deneyler, enfeksiyonlar ve iltihap nedeniyle enjeksiyonları azaltılması önler. Bu model sayesinde, kronik PD sıvı poz tarafından indüklenen periton hasar ile karakterize ve modülasyonlu. Bu teknik büyük miktarlarda sıvı infüzyonu sağlar ve diğer hastalıklar, uyuşturucu veya diğer maddelerin aşılama uzun bir süre içinde gerekli olan çalışma için kullanılabilir.
Bu makale, farelerde kateterin cerrahi yerleşim için yöntem gösterir. Ayrıca, böbrek yetmezliği PD hastalarında mevcut durumunu taklit etmek 5/6 nefrektomi için yordamı açıklar.

Şekil 1 Protokolü bölümünde açıklanan yordamları izlemek için gerekli tüm malzemeleri gösterir. Bu örneğin, gönderilmiş fareler veya değil nefrektomi (grup başına 8 hayvanlar) (Şekil 2) 40 gün (günlük, iki enjeksiyon her ikisi arasında en az 2 saat bekleyen) sırasında klinik pratikte yaygın olarak kullanılan iki farklı PDF'ler karışımı sinin: EXTRANEAL (PDF icodextrin tabanlı) ve Dianeal (glikoz t...

Watch this Scientific Journal Video about Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis at JoVE.com

Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis

Kateter yerleştirme ve 5/6 nefrektomi periton diyalizi fare modelleri için cerrahi teknik

Bu makalede farelerde hayvan arka tarafında konumlandırılmış bir erişim bağlantı noktasına bağlı bir mayi kateter, cerrahi yerleşim için yöntem gösterilmektedir. Ayrıca, PD hastalar üremik durumunu benzemeye 5/6 nefrektomi için yordamı açıklar.

Peritoneal dialysis (PD) is a renal replacement therapy consistent on the administration and posterior recovery of a hyperosmotic fluid in the peritoneal ...

surgical-techniques-for-catheter-placement-56-nephrectomy-murine

Research

JoVE Journal

Engineering

15.1K Görüntüleme.  Spanish National Research Council. Bu makalede farelerde hayvan arka tarafında konumlandırılmış bir erişim bağlantı noktasına bağlı bir mayi kateter, cerrahi yerleşim için yöntem gösterilmektedir. Ayrıca, PD hastalar üremik durumunu benzemeye 5/6 nefrektomi için yordamı açıklar.

Video: Surgical Techniques for Catheter Placement and 5/6 Nephrectomy in Murine Models of Peritoneal Dialysis

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and podocytes with their slit diaphragms. The delicate structure of the glomerular filter, especially the slit diaphragm, relies on the interplay of diverse cell surface proteins. Studying these cell surface proteins has so far been limited to in vitro studies or histologic analysis. Here, we present a murine in vivo biotinylation labeling method, which enables the study of glomerular cell surface proteins under physiologic and pathophysiologic conditions. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of a protein of interest. Semi-quantitation of glomerular cell surface abundance is readily available with this novel method, and all proteins accessible to biotin perfusion and immunoprecipitation can be studied. In addition, isolation of glomeruli with or without biotinylation enables further analysis of glomerular RNA and protein as well as primary glomerular cell culture (i.e., primary podocyte cell culture).

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Here we present a protocol for murine in vivo labeling of glomerular cell surface proteins with biotin. This protocol contains information on how to perfuse mouse kidneys, isolate glomeruli, and perform endogenous immunoprecipitation of the protein of interest.

Yalıtım Glomeruli ve Glomerular hücre yüzey proteinleri Vivo etiketleme

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and ...

Biyokimya

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully recapitulate early- and late-stage metastatic disease progression. Typical tumor implantation models utilize ectopic or orthotopic primary tumor implantation, but few include systemic spontaneous metastatic disease that mimics the clinical setting. This protocol describes the key steps to develop RCC disease progression stages similar to patients. First, it uses a highly metastatic mouse tumor cell line in a syngeneic model to show orthotopic tumor cell implantation. Methods include superficial and internal implantation into the sub-capsular space with cells combined with matrigel to prevent leakage and early spread. Next it describes the procedures for excision of tumor-bearing kidney (nephrectomy), with critical pre- and post- surgical mouse care. Finally, it outlines the steps necessary to monitor and assess micro-and macro-metastatic disease progression, including bioluminescent imaging as well provides a detailed visual necropsy guide to score systemic disease distribution. The goal of this protocol description is to facilitate the widespread use of clinically relevant metastatic RCC models to improve the predictive value of future therapeutic testing.&#160;

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Models of spontaneous metastatic renal cell carcinoma (RCC) disease progression can be used for evaluating treatments in a clinically relevant setting. This protocol demonstrates different procedures for orthotopic kidney tumor cell implantation, proper nephrectomy, and finally outlines a necropsy guide for visual and bioluminescent scoring of metastatic burden and localization.

Farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (MRCC) modelleme ardından nefrektomi

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Tıp

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

Murin Böbrek nakli Tekniği

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Microdissection of Primary Renal Tissue Segments and Incorporation with Novel Scaffold-free Construct Technology

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only one-fourth of these patients achieving transplantation, there is a dire need for alternatives for those with failing organs. In order to decrease the harmful consequences of dialysis along with the overall healthcare costs it incurs, active investigation is ongoing in search of alternative solutions to organ transplantation. Implantable tissue-engineered renal cellular constructs are one such feasible approach to replacing lost renal functionality. Here, described for the first time, is the microdissection of murine kidneys for isolation of living corticomedullary renal segments. These segments are capable of rapid incorporation within scaffold-free endothelial-fibroblast constructs which may enable rapid connection with host vasculature once implanted. Adult mouse kidneys were procured from living donors, followed by stereoscope microdissection to obtain renal segments 200 - 300 &#181;m in diameter. Multiple renal constructs were fabricated using primary renal segments harvested from only one kidney. This method demonstrates a procedure which could salvage functional renal tissue from organs that would otherwise be discarded.

Tissue-engineered renal constructs provide a solution for the organ shortage and deleterious effects of dialysis. Here, we describe a protocol to micro dissect murine kidneys for isolation of cortico-medullary segments. These segments are implanted into scaffold-free cellular constructs, forming renal organoids.

Mikrodiseksiyon birincil böbrek doku parçaları ve roman iskele-Alerjik yapı teknolojisi ile birleşme

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only ...

Biyomühendislik

A Modified Surgical Technique for Kidney Transplantation in Mice

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this operation. Therefore, this article introduces the technique and points out the surgical caveats associated with this operation. In addition, important modifications in comparison to the conventional procedure are demonstrated. Firstly, a patch of the abdominal aorta is cut and prepared so that the proximal bifurcations of the renal artery, including the ureteral artery are transected together with the donor kidney en bloc. This reduces the risk of a ureter necrosis and avoids the development of a urinary tract occlusion. Secondly, a new method of the vascular anastomosis is demonstrated that allows the operator to flexibly increase or decrease the size of the anastomosis after renal transplant reperfusion has already been initiated. This avoids the development of vessel strictures and intraabdominal bleeding. Thirdly, a technique that enables the anastomosis of the delicate donor ureter and the recipient bladder that does not cause a trauma is shown. Adopting this protocol can shorten the operation time and reduces the damage to the recipient's bladder, thereby significantly increasing the operation success rate for the recipient mice.

This protocol presents a new surgical technique of mouse kidney transplantation focusing on a modified arterial anastomosis strategy. A vascular suture technique including a simple and safer ureter-bladder anastomosis method is also presented. These modifications shorten the operation time and improve the success rate of the mouse kidney transplantation procedure.

Farelerde Böbrek Nakli için Modifiye Bir Cerrahi Teknik

Kidney transplantation in mice is a complicated and challenging surgery procedure. There are very few publications demonstrating the key steps of this ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive peritoneal membrane failure in humans, which remains an area of intense investigation due to its profound clinical implications in managing patients with end-stage kidney disease (ESKD). Despite the clinical importance of PD and its related complications, current experimental murine models suffer from key technical challenges that compromise the models&#39; performance. These include PD catheter migration and kinking and usually warrant earlier catheter removal. These limitations also drive the need for a greater number of animals to complete a study. Addressing these drawbacks, this study introduces technical improvements and surgical nuances to prevent commonly observed PD catheter complications in a murine model. Moreover, this modified model is validated by inducing peritoneal inflammation and fibrosis using lipopolysaccharide injections. In essence, this paper describes an improved method to create an experimental model of PD.

This article describes modifications of a procedure to implant a peritoneal dialysis catheter in a murine model to avoid major technical issues observed with the conventional techniques.

Farelerde Periton Diyalizi Kateter Yerleştirilmesinde Retrograd İmplantasyon Yaklaşımı

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive ...

A Murine Model of Hemodialysis Access-Related Hand Dysfunction

Chronic kidney disease is a major public health problem, and the prevalence of end-stage renal disease (ESRD) requiring chronic renal replacement therapies such as hemodialysis continues to increase. Autogenous arteriovenous fistula (AVF) placement remains a primary vascular access option for ESRD patients. Unfortunately, approximately half of the hemodialysis patients experience dialysis access-related hand dysfunction (ARHD), ranging from subtle paresthesia to digital gangrene. Notably, the underlying biologic drivers responsible for ARHD are poorly understood, and no adequate animal model exists to elucidate the mechanisms and/or develop novel therapeutics for the prevention/treatment of ARHD. Herein, we describe a new mouse model in which an AVF is created between the left common iliac artery and vein, thereby facilitating the assessment of limb pathophysiology. The microsurgery includes vessel isolation, longitudinal venotomy, creation of arteriovenous anastomosis, and venous reconstruction. Sham surgeries include all the critical steps except for AVF creation. Iliac AVF placement results in clinically relevant alterations in central hemodynamics, peripheral ischemia, and impairments in hindlimb neuromotor performance. This novel preclinical AVF model provides a useful platform that recapitulates common neuromotor perturbations reported by hemodialysis patients, allowing researchers to investigate the mechanisms of ARHD pathophysiology and test potential therapeutics.

This protocol details the surgical steps of murine common iliac arteriovenous fistula creation. We developed this model to study hemodialysis access-related limb pathophysiology.

Hemodiyaliz Erişimi ile İlişkili El Disfonksiyonunun Bir Murine Modeli

Chronic kidney disease is a major public health problem, and the prevalence of end-stage renal disease (ESRD) requiring chronic renal replacement ...

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype called "uremic cardiomyopathy". We describe here an experimental CKD mouse model, named 5/6th partial nephrectomy (PNx) with pole ligation, which developed uremic cardiomyopathy at four weeks post-surgery. This PNx model was performed by a two-step surgery. In step-one surgery, both poles of the left kidney were ligated. In step-two surgery, which was performed 7 days after the step-one surgery, the right kidney was removed. For the sham surgery, the same surgery procedures were performed but without pole ligation of the left kidney or removal of the right kidney. The surgical procedures are easier and less time-consuming, compared to other methods. However, the remnant functional renal mass is not as easily controlled as the renal artery ligation. Four weeks after surgery, in comparison with the sham-operated mice, the PNx mice developed impaired renal function, anemia, cardiac hypertrophy, cardiac fibrosis, and decreased heart systolic and diastolic function.

A Mouse 5/6th Nephrectomy Model That Induces Experimental Uremic Cardiomyopathy

This manuscript provides a detailed two-step surgical procedure to perform mouse 5/6th partial nephrectomy (PNx) with pole ligation. Four weeks after surgery, in comparison with sham-operated mice, the PNx mice developed impaired renal function, anemia, cardiac hypertrophy, cardiac fibrosis, and decreased heart systolic and diastolic function.

Deneysel üremik kardiyomiyopati indükler bir fare 5/6inci nefrektomi modeli

Chronic kidney disease (CKD) is a great risk factor for cardiovascular disease events and mortality, and progressively develops to the clinical phenotype ...

Biyoloji

<meta charset="utf8"></head><body>Böbrek Yetmezliği ve Malperfüzyon için Sıçanlarda Standardize 5/6 Nefrektomi

5/6 Nephrectomy Using Sharp Bipolectomy Via Midline Laparotomy in Rats

Chronic kidney disease (CKD) affects over 10% of the global population, amounting to more than 800 million individuals worldwide. The advances in the treatment of CKD have had a significant impact on patient outcomes. While in the past, CKD was often considered a death sentence, with many patients succumbing to the complications of end-stage renal disease, it is now increasingly being managed as a chronic condition with the availability of dialysis and kidney transplantation, as well as new pharmaceutical developments such as SGLT2 inhibitors or nonsteroidal mineralocorticoid receptor antagonists. 
Yet, there continues to be a growing demand for further exploration into the pathophysiological processes and potential therapeutic interventions. Reliable biological models play a crucial role in facilitating this research. Given the multifaceted nature of renal disease, which encompasses not only cell biology but also vascular microanatomy and endocrine signaling, an appropriate model must possess a level of biological complexity that only an animal model can offer, rendering rodents an obvious choice.
This manuscript, therefore, provides an intricate, systematic protocol for surgically reducing renal parenchyma through midline laparotomy and combined total and partial nephrectomy in rats for survival as well as non-survival applications. It emphasizes the critical role of precise surgical techniques in ensuring consistent and reliable outcomes. Prime examples of potential applications for this model include biomolecular and pharmaceutical studies as well as the development of innovative intraoperative imaging modalities, such as hyperspectral imaging, to objectively visualize and differentiate renal malperfusion.

<meta charset="utf8"></head><body>Sıçanlarda Orta Hat Laparotomi ile Keskin Bipolektomi Kullanılarak 5/6 Nefrektomi

This manuscript introduces a standardized protocol for a 5/6 nephrectomy by sharp bipolectomy via midline laparotomy in a rat model, aiming to induce a state of renal insufficiency via renal parenchyma reduction with a great degree of methodical precision and low risk of technical error.

Sıçanlarda Orta Hat Laparotomi ile Keskin Bipolektomi Kullanılarak 5/6 Nefrektomi

Chronic kidney disease (CKD) affects over 10% of the global population, amounting to more than 800 million individuals worldwide. The advances in the ...

Kateter yerleştirme ve 5/6 nefrektomi periton diyalizi fare modelleri için cerrahi teknik

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Yalıtım Glomeruli ve Glomerular hücre yüzey proteinleri Vivo etiketleme

Farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (MRCC) modelleme ardından nefrektomi

Murin Böbrek nakli Tekniği

Mikrodiseksiyon birincil böbrek doku parçaları ve roman iskele-Alerjik yapı teknolojisi ile birleşme

Farelerde Böbrek Nakli için Modifiye Bir Cerrahi Teknik

Farelerde Periton Diyalizi Kateter Yerleştirilmesinde Retrograd İmplantasyon Yaklaşımı

Hemodiyaliz Erişimi ile İlişkili El Disfonksiyonunun Bir Murine Modeli

Deneysel üremik kardiyomiyopati indükler bir fare 5/6^inci nefrektomi modeli

Sıçanlarda Orta Hat Laparotomi ile Keskin Bipolektomi Kullanılarak 5/6 Nefrektomi

Sıçanlarda Orta Hat Laparotomi ile Keskin Bipolektomi Kullanılarak 5/6 Nefrektomi