עבודה זו נתמך בחלקה של החברה יפן לקבלת מענק הסיוע קידום המדע (JSPS) למחקר מדעי (26861689 ו- 17 K 11813). המחברים רוצה להודות מר נתנאל גרין לצורך הגהה.

פרוטוקול זה תוכנן כדי ליצור רקמה אנושית חניכיים מקבילות, הפצע חניכיים דגמים ומודלים דלקת חניכיים. העור האנושי keratinocytes עוריות (HaCaT) נמסרו באדיבותו של פרופסור נורברט אי Fusenig של Deutsches Krebsforschungszentrum (היידלברג, גרמניה)7. האדם חניכיים fibroblasts (HGFs) הם בודדו אותנו מהמתרחש רקמות חניכיים על פי פרוטוקולים שפורסמו בעבר8. הסכמה מדעת הושג מראש, ואת המחקר אושרה בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי ועדת האתיקה, ניפון שיניים אוניברסיטת בית הספר של החיים וברפואת שיניים טוקיו (מספר אישור: NDU-T2012-35). פרוטוקול שלבים 1-3 צריכה להתבצע בשכונה התרבות תאים.
1. הכנת רקמות אנושיות 3D במקבילות של חניכיים (GTE) (איור 1 א')
<ol><li>מיקס קולגן סוג ג'ל-A עם 10% מרוכזים MEM-אלפא ו- 10% שיקום מאגר (2.2 גרם של NaHCO3 ו- g 4.47 HEPES ב 100 מ ל 0.05 N NaOH) בצינור סטרילי 15 מ"ל על-ידי pipetting. לשמור על הפתרון קולגן מעורבים על הקרח, עד נעשה שימוש.</li>
	<li>מקום 24-ובכן תרבות מוסיף (נקבוביות בגודל 3.0 מיקרומטר) לתוך צלחת 24-. טוב.</li>
	<li>
הסר HGFs פני התרבות באמצעות פתרון טריפסין-EDTA 0.25%. להשעות את התאים 10 מ"ל של תרבות בינוני A (MEM-אלפא + 20% FBS + 1% GlutaMAX). לספור את התאים על ידי מונה תא Bürker-טורק.
	<ol>
<li>לחלץ את הכמות הרצויה של תאים (1-5 x105 תאים/mL) ולאחר מכן צנטריפוגה במשך 4 דקות ב 190 x g.</li>
		<li>להשעות התאים הפתרון קולגן מעורבת. לשמור את התערובת על הקרח עד השלב הבא.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להוסיף 0.5 מ"ל של תערובת תא-קולגן (0.5-2.5 10x5 תאים/טוב) תותב תרבות מבלי לייצר בועות. דגירה את התערובת למשך 10-30 דקות באווירה humidified עם 5% CO2 -37 ° C עד מצב של קרישת חסר את התערובת לתוך ג'ל. הערה: להוסיף את התערובת קולגן לתוך המרכז של התותב תרבות, כדי למנוע היווצרות קולגן ג'ל שוויוני.</li>
	<li>להוסיף 1 מ"ל של המדיום תרבות לתוך הבאר ו 0.5 mL לתוך תותב. דגירה לצלחת תרבות עבור 24 שעות או למשך הלילה באווירה humidified עם 5% CO2 ב 37 º C.</li>
	<li>להסיר HaCaT תאים מפני השטח תרבות באמצעות פתרון טריפסין-EDTA 0.25%. להשעות את התאים 10 מ"ל של מדיום B (DMEM + 10% FBS + 1% GlutaMAX) ולספור את התאים. תמצית הנידרשת של תאים (1 – 5 x5 10 תאים/מ ל) עם פיפטה, צנטריפוגה במשך 4 דקות ב 190 x g... להשעות את התאים בינוני ב'.</li>
	<li>הסר את המדיום הכיסויים תרבות, אשר מכילים את התערובת דבורה שחר-קולגן, על ידי השאיפה. להוסיף 0.5 mL HaCaT תא השעיה (0.5-2.5 10x5 תאים/טוב) על התערובת דבורה שחר-קולגן. דגירה התרבויות עבור 24 שעות או לילה. הערה: בנקודת זמן זו, המדיום בתרבות טוב צריך להיות A בינוני, ואילו המדיום בעלון תרבות צריכה להיות בינוני B.</li>
	<li>להחליף את המדיום תרבות עם אופנוע בינוני (תרבות משותפת בינוני) (MEM-אלפא + 15% נוקאאוט סרום החלפת + 1% GlutaMAX) + 5% FBS. להוסיף 1 מ"ל של המדיום תרבות לתוך התרבות טוב ו 0.5 mL לתוך תותב תרבות. דגירה התרבויות במשך 24-48 שעות.</li>
	<li>להחליף את המדיום תרבות עם אופנוע בינוני + 1% FBS. להוסיף 1 מ"ל לתוך התרבות טוב ו 0.5 mL לתוך תותב תרבות. דגירה התרבויות עבור 24 שעות או לילה.</li>
	<li>להחליף את המדיום תרבות בתרבות היטב עם 0.7-1 מ ל אופנוע בינוני. הסר את המדיום לחלוטין תותב תרבות (פני תרבות צריך להיחשף אוויר). תקופת דגירה התרבויות של 1-2 שבועות. לשנות את המדיום בתרבות טוב פעמיים בשבוע. הערה: אל תתנו את עליית רמת בינוני מעל פני השטח תרבות (השכבה העליונה מורכבת keratinocytes). תמיד לשמור על פני תרבות יבש.</li>
</ol>2. הכנת GTE פצועים (איור 1B)
<ol><li>להכין כבטלן הרקמה 1 – 3 מ מ קוטר. לעקר את זה עם החיטוי ב 121 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.</li>
	<li>לדחוף את ניקוב רקמות בניצב לתוך GTE בקשר עמוק 300 מיקרומטר, חור בתוך הרקמה כדי לדמות פצע.</li>
	<li>בשלב זה, השתמש את הפצועים GTE עבור חוקרים התחדשות וריפוי רקמת הפצע. לחלופין, לתקן GTE באמצעות 10% פורמלין נייטרלי בופר לביצוע ניתוח היסטולוגית.</li>
</ol>3. הכנת GTE דלקתיים (iGTE) (איור 1B)
<ol><li>לטפח THP-1 תאים על פי הדוח הקודם9.</li>
	<li>מיקס קולגן סוג ג'ל-A עם 10% מרוכזים RPMI 1640, 10% שיקום מאגר (2.2 גרם של NaHCO3 ו- g 4.47 HEPES ב 100 מ ל 0.05 N NaOH) ו- 10 ננוגרם למ"ל ובחום. לשמור הפתרון קולגן מעורבים על הקרח עד השימוש.</li>
	<li>ספירה 1 – 2 x 10 תאים6 THP-1, צנטריפוגה במשך 4 דקות ב 190 x ג להשעות תאי 1 מ"ל של הפתרון קולגן מעורב. לשמור את התערובת על הקרח עד השלב הבא.</li>
	<li>להוסיף 10-30 µL THP-1-קולגן התערובת לתוך האזור הפצוע של GTE. להחליף את המדיום תרבות 0.7-1 מ ל אופנוע בינוני המכיל 10 ננוגרם למ"ל של ובחום.</li>
	<li>דגירה התערובת באווירה humidified עם 5% CO2 ב 37 מעלות צלזיוס במשך 72 h.</li>
	<li>להשתמש במודל על חקירת דלקת חניכיים או מחלת חניכיים (לדוגמה, להוסיף תרופות אנטי דלקתיות פוטנציאליים iGTE כדי לראות את השפעותיה על שחרור ציטוקינים10). לחלופין, השמט 72 h PMA-טיפול, להוסיף 2 µg/mL של LPS לתוך התרבות, דגירה הרקמה באווירה humidified עם 5% CO2 ב 37 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות11,12.</li>
</ol>4. קיבוע ואת כל Immunostaining הר GTE ו iGTE תרבויות
<ol><li>
קיבוע של התרבויות.
	<ol>
<li>הסר את המדיום תרבות הצלחת 24-. טוב. לשטוף את רקמות 2 פעמים עם פוספט buffered סליין (הציבורי).</li>
		<li>להוסיף 1 מ"ל של 10% פורמלין נייטרלי בופר את הכנס, 1 מ"ל התרבות היטב. השאירו את הצלחת 24-ובכן מקרר ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.</li>
		<li>הסר את 10% פורמלין נייטרלי בופר ביום המחרת.</li>
		<li>עבור כל הר immunostaining, לשטוף את רקמות 3 - 4 פעמים עם PBS לאחר קיבוע.</li>
		<li>עבור hematoxylin אאוזין (H & E) צביעת ואת immunostaining רגיל, להמשיך עם התייבשות, פרפין הטבעה ואת חלוקתה. הערה: עבור כל הר immunostaining, שלב זה יכול להיות מושמט.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
כל הר immunostaining הערה: פרוטוקול זה שונה מזו בהפניה 13.<ol>
<li>לשטוף את הרקמות 3 x ב- PBS 0.5-1%, טריטון, 10-30 דקות בכל פעם.</li>
		<li>דגירה הרקמות פעמיים במשך 30 דקות במאגר חסימה (PBS 1% טריטון + 10% BSA), בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>לשטוף את רקמות 2 × במאגר חסימה, 5 – 10 דקות בכל פעם.</li>
		<li>להוסיף 50 µL של נוגדן ראשוני פתרון-נדרש הדילול/הריכוז התוספות. השתמש סרט דק פלסטיק תיאחז לעטוף את הכיסויים כדי למנוע ייבוש הרקמה.</li>
		<li>תקופת דגירה הרקמה של 1-2 ימים ב- 4 מעלות צלזיוס.</li>
		<li>לשטוף את הרקמות 3 פעמים, במשך 30 דקות ב- PBS 1% טריטון + 10% BSA. לשטוף שוב שלוש פעמים, במשך 5 דקות ב- PBS 1% טריטון.</li>
		<li>להוסיף 50 µL של נוגדנים משניים במאגר חסימה (PBS 1% טריטון + 10% BSA) ו µL 5 בפתרון Hoechst 33342 (הכתם תא חי NucBlue) כל הכנס. השתמש סרט דק פלסטיק תיאחז לעטוף את הכיסויים כדי למנוע ייבוש הרקמה.</li>
		<li>תקופת דגירה של 1-2 ימים ב- 4 מעלות צלזיוס. לעטוף את הצלחת 24-ובכן במגבת נייר רטוב, אז את זה לתוך ערכת פלסטיק כדי לשמש במהלך הדגירה.</li>
		<li>לשטוף את הרקמות 3 פעמים, במשך 10 דקות ב- PBS 1% טריטון</li>
		<li>השימוש מחט חדה לחתוך את הקרום של התותב תרבות, כדי להשיג את הרקמה. מקם את הקרום לשקופית. הערה: הרקמה צריך להיות על הקרום.</li>
		<li>להוסיף 2-3 טיפות של קרינה פלואורסצנטית הר בינוני. מכסים את הרקמה עם כיסוי זכוכית, חנות ב 4 ° C בחושך עד הניתוח.</li>
		<li>הצג את רקמות עם לייזר קונפוקלי סורק מיקרוסקופ (LSM).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Cekici, A., Kantarci, A., Hasturk, H., Van Dyke, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+and+immune+pathways+in+the+pathogenesis+of+periodontal+disease.">Inflammatory and immune pathways in the pathogenesis of periodontal disease.</a> Periodontology 2000. 64 (1), 57-80 (2014).</li><li>Hasturk, H., Kantarci, A., Van Dyke, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+Inflammatory+Diseases+and+Systemic+Inflammation:+Role+of+the+Macrophage.">Oral Inflammatory Diseases and Systemic Inflammation: Role of the Macrophage.</a> Frontiers in Immunology. 3, 118 (2012).</li><li>Koh, T. J., DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+wound+healing:+The+role+of+the+macrophage.">Inflammation and wound healing: The role of the macrophage.</a> Expert reviews in molecular medicine. 13, e23 (2011).</li><li>Mescher, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+and+fibroblasts+during+inflammation+and+tissue+repair+in+models+of+organ+regeneration.">Macrophages and fibroblasts during inflammation and tissue repair in models of organ regeneration.</a> Regeneration. 4 (2), 39-53 (2017).</li><li>Struillou, X., Boutigny, H., Soueidan, A., Layrolle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Animal+Models+in+Periodontology:+A+Review.">Experimental Animal Models in Periodontology: A Review.</a> The Open Dentistry Journal. 4, 37-47 (2010).</li><li>Han, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+Periodontal+Bacteria+and+Human+Oral+Epithelial+Cells:+Fusobacterium+nucleatum+Adheres+to+and+Invades+Epithelial+Cells.">Interactions between Periodontal Bacteria and Human Oral Epithelial Cells: Fusobacterium nucleatum Adheres to and Invades Epithelial Cells.</a> Infection and Immunity. 68 (6), 3140-3146 (2000).</li><li>Boukamp, P., Petrussevska, R. T., Breitkreutz, D., Hornung, J., Markham, A., Fusenig, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+keratinization+in+a+spontaneously+immortalized+aneuploid+human+keratinocyte+cell+line.">Normal keratinization in a spontaneously immortalized aneuploid human keratinocyte cell line.</a> J Cell Biol. 106 (3), 761-771 (1988).</li><li>Xiao, L., Miwa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen-rich+water+achieves+cytoprotection+from+oxidative+stress+injury+in+human+gingival+fibroblasts+in+culture+or+3D-tissue+equivalents,+and+wound-healing+promotion,+together+with+ROS-scavenging+and+relief+from+glutathione+diminishment.">Hydrogen-rich water achieves cytoprotection from oxidative stress injury in human gingival fibroblasts in culture or 3D-tissue equivalents, and wound-healing promotion, together with ROS-scavenging and relief from glutathione diminishment.</a> Hum Cell. 30 (2), 72-87 (2017).</li><li>Tsuchiya, S., Yamabe, M., Yamaguchi, Y., Kobayashi, Y., Konno, T., Tada, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+a+human+acute+monocytic+leukemia+cell+line+(THP-1).">Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1).</a> Int J Cancer. 26 (2), 171-176 (1980).</li><li>Ara, T., Kurata, K., Hirai, K., Uchihashi, T., Uematsu, T., Imamura, Y., Furusawa, K., Kurihara, S., Wang, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+gingival+fibroblasts+are+critical+in+sustaining+inflammation+in+periodontal+disease.">Human gingival fibroblasts are critical in sustaining inflammation in periodontal disease.</a> J Periodontal Res. 44 (1), 21-27 (2009).</li><li>Park, E. K., Jung, H. S., Yang, H. I., Yoo, M. C., Kim, C., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+THP-1+differentiation+is+required+for+the+detection+of+responses+to+weak+stimuli.">Optimized THP-1 differentiation is required for the detection of responses to weak stimuli.</a> Inflamm Res. 56 (1), 45-50 (2007).</li><li>Sharif, O., Bolshakov, V. N., Raines, S., Newham, P., Perkins, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+profiling+of+the+LPS+induced+NF-kappaB+response+in+macrophages.">Transcriptional profiling of the LPS induced NF-kappaB response in macrophages.</a> BMC Immunol. 8, 1 (2007).</li><li>Shetty, S., Gokul, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keratinization+and+its+disorders.">Keratinization and its disorders.</a> Oman Med J. 27 (5), 348-357 (2012).</li><li>Klinge, B., Matsson, L., Attstr&#246;m, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathology+of+initial+gingivitis+in+humans.+A+pilot+study.">Histopathology of initial gingivitis in humans. A pilot study.</a> J Clin Periodontol. 10 (4), 364-369 (1983).</li><li>Nagarakanti, S., Ramya, S., Babu, P., Arun, K. V., Sudarsan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+E-cadherin+and+cytokeratin+19+and+net+proliferative+rate+of+gingival+keratinocytes+in+oral+epithelium+in+periodontal+health+and+disease.">Differential expression of E-cadherin and cytokeratin 19 and net proliferative rate of gingival keratinocytes in oral epithelium in periodontal health and disease.</a> J Periodontol. 78 (11), 2197-2202 (2007).</li><li>Goodpaster, T., Legesse-Miller, A., Hameed, M. R., Aisner, S. C., Randolph-Habecker, J., Coller, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunohistochemical+method+for+identifying+fibroblasts+in+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissue.">An immunohistochemical method for identifying fibroblasts in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue.</a> J Histochem Cytochem. 56 (4), 347-358 (2008).</li><li>Langeland, K., Rodrigues, H., Dowden, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periodontal+disease,+bacteria,+and+pulpal+histopathology.">Periodontal disease, bacteria, and pulpal histopathology.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 37 (2), 257-270 (1974).</li><li>Holness, C. L., Simmons, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning+of+CD68,+a+human+macrophage+marker+related+to+lysosomal+glycoproteins.">Molecular cloning of CD68, a human macrophage marker related to lysosomal glycoproteins.</a> Blood. 81 (6), 1607-1613 (1993).</li><li>Mor-Vaknin, N., Punturieri, A., Sitwala, K., Markovitz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vimentin+is+secreted+by+activated+macrophages.">Vimentin is secreted by activated macrophages.</a> Nat Cell Biol. 5 (1), 59-63 (2003).</li><li>Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+squalane-dissolved+on+adipogenesis-accompanied+oxidative+stress+and+macrophage+in+a+preadipocyte-monocyte+co-culture+system.">The effect of squalane-dissolved on adipogenesis-accompanied oxidative stress and macrophage in a preadipocyte-monocyte co-culture system.</a> Biomaterials. 31 (23), 5976-5985 (2010).</li><li>Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+hydroxylated+fullerene+localizes+at+the+cytoskeleton+and+inhibits+oxidative+stress+in+adipocytes+and+a+subcutaneous+adipose-tissue+equivalent.">Highly hydroxylated fullerene localizes at the cytoskeleton and inhibits oxidative stress in adipocytes and a subcutaneous adipose-tissue equivalent.</a> Free Radic Biol Med. 51 (7), 1376-1389 (2011).</li></ol>

המחברים מצהירים ללא ניגוד אינטרסים.

פרוטוקול זה מבוסס על שיטות ליצירת רקמת חניכיים מקבילות ושווי רקמת שומן תת עורית מתוארת על ידי הקודם דוחות8,21,22. למרות זאת הוא שיטה פשוטה וקלה, כמה צעדים דורשים תשומת לב מיוחדת. לדוגמה, התערובת קולגן יש לשמור בקירור עד השימוש כדי למנוע היווצ...

מחלות חניכיים הן הגורם המוביל לאובדן שיניים בקרב מבוגרים. דלקת חניכיים חניכיים מחלות חניכיים הנפוץ ביותר בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. שניהם מציגים בתיווך biofilm אקוטי או כרוני שינויים דלקתיים חניכיים. דלקת חניכיים מאופיין על ידי דלקת חריפה, ואילו חניכיים בדרך כלל מציג כמו דלקת כרונית. ברובד היסטולוגית, רכיבים חיידקי להפעיל את ההפעלה של תאים חיסוניים, כגון מקרופאגים, לימפוציטים, תאי פלזמה ותאים תורן1,2. אלו תאים חיסוניים, במיוחד מקרופאגים, אינטראקציה עם תאים מקומיים (כולל תאים אפיתל חניכיים, fibroblasts, תאי אנדותל, תאי העצם) וכתוצאה מכך נגעים דלקתיים רקמת חניכיים3,4. גרסאות ניסיוניות של מחלות חניכיים הוקמו בסוגים שונים של בעלי חיים, כגון חולדות, אוגרים, ארנבות, חמוסים, הולכי על ארבע, פרימטים. עם זאת, physiopathology של מודלים בעלי חיים שונה של בני האדם, ולכן קשה לנתח מנגנונים תאית ומולקולרית ולהעריך תרופות חדשות של מחלות חניכיים5. טיפוח ושיתוף של חיידקים חניכיים, תאים אפיתל אוראלי אנוש טפט שימש לחקור את המנגנון של דלקות חניכיים6. ובכל זאת, טפט תרביות של תאים דרך הפה חסר תלת מימדי (3D) הסלולר הארכיטקטורה של רקמות שלם; לכן, הם לא יכול לחקות את המצב במבחנה .
כאן, 3D רקמה אנושית דלקתיות במקבילות של חניכיים (iGTE) הוקם כדי לייצג מחלות חניכיים במבחנה. זה דגם התלת-ממד של מחלות חניכיים נמצא במיקום ביניים בין תרביות תאים חד שכבתי חייתיים. שלושה סוגים של תאים אנושיים, כולל HaCaT keratinocytes, חניכיים fibroblasts THP-1 מקרופאגים, הן מעובדות במשותף על ג'ל קולגן, מגורה על ידי מאתחלי דלקתיות לבנות iGTE. IGTE מקרוב מדמה את התנאים ויוו של תאית התמיינות תאים תאים אינטראקציה, הפעלת מקרופאג בחניכיים. מודל זה יש לא מעט אפליקציות אפשריות סמים הקרנת ובדיקות גישות חדשות תרופתי במחלות חניכיים, כמו גם עבור ניתוח מנגנונים תאית ומולקולרית ריפוי הפצע, דלקת ו התחדשות רקמות.

<table><tbody><tr><td>Collagen type I-A</td><td>Nitta Gelatin Inc</td><td></td><td>For making dermis of GTE</td></tr><tr><td>MEM-alpha</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11900073</td><td>Cell culture medium</td></tr><tr><td>Cell Culture Insert (for 24-well plate), pore size 3.0 &amp;mu;m</td><td>Corning, Inc.</td><td>353096</td><td>For tissue culture</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td>Cell culture reagent</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31600034</td><td>Cell culture medium</td></tr><tr><td>KnockOut Serum Replacement</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10828028</td><td>Cell culture reagent</td></tr><tr><td>Tissue puncher</td><td>Shibata system service co., LTD</td><td>SP-703</td><td>For punching holes in GTE</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31800022</td><td>Cell culture medium</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3294</td><td>For immunostaining</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 (NucBlue Live Cell stain)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R37605</td><td>For labeling nuclei</td></tr><tr><td>Fluorescence mount medium</td><td>Dako</td><td></td><td>For mounting samples after immunostaining</td></tr><tr><td>Anti-Cytokeratin 8+18 antibody [5D3]</td><td>abcam</td><td>ab17139</td><td>For identifying epithelium</td></tr><tr><td>Scaning electron microscope</td><td>Hitachi, Ltd.</td><td>HITACHI S-4000</td><td>For observing samples&#039; surface topography and composition</td></tr><tr><td>Confocal laser scanning microscopy</td><td>LSM 700; Carl Zeiss Microscopy Co., Ltd.</td><td>LSM 700</td><td>For observing samples&#039; immunofluorescence staining</td></tr><tr><td>Anti-Cytokeratin 19 antibody</td><td>abcam</td><td>ab52625</td><td>For identifying epithelium</td></tr><tr><td>Anti-vimentin antibody</td><td>abcam</td><td>ab92547</td><td>For identifying fibroblasts and activated macrophages</td></tr><tr><td>Anti-TE-7 antibody</td><td>Millipore</td><td>CBL271</td><td>For identifying fibroblasts in the dermis</td></tr><tr><td>Anti-CD68 antibody</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SAB2700244</td><td>For identifying macrophages</td></tr><tr><td>Human CD14 Antibody</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>MAB3832-SP</td><td>For identifying macrophages</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594-conjugated secondary goat anti-rabbit antibody</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A11012</td><td>For immunofluorescence staining</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488-conjugated secondary goat anti-mouse antibody</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A11001</td><td>For immunofluorescence staining</td></tr><tr><td>EVOS FL Cell Imaging System</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>For observing the sample&#039;s immunofluorescence staining</td></tr><tr><td>THP-1 cells</td><td>Riken BRC cell bank</td><td>RCB1189</td><td>For making iGTE</td></tr><tr><td>PMA(Phorbol 12-myristate 13-acetate)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8139</td><td>For differentiatting THP-1 cells</td></tr></tbody></table>

three-dimensional inflammatory human tissue equivalents of gingiva

מחלות חניכיים (כגון דלקת חניכיים חניכיים) הם הגורמים המובילים ואובדן שיניים אצל מבוגרים. דלקת חניכיים היא physiopathology היסוד של מחלות חניכיים. הנוכחי ניסיוניות של מחלות חניכיים הוקמו בסוגים שונים של בעלי חיים. עם זאת, physiopathology של מודלים בעלי חיים שונה של בני האדם, ולכן קשה לנתח מנגנונים תאית ומולקולרית ולהעריך תרופות חדשות למחלות חניכיים. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לשחזור רקמה דלקתית אנושית במקבילות של חניכיים (iGTE) במבחנה. ראשית, אנו בונים רקמה אנושית במקבילות של חניכיים (GTE) על ידי ניצול שני סוגים של תאים אנושיים, כולל האדם חניכיים fibroblasts (דבורה שחר) העור האנושי keratinocytes עוריות (HaCaT), בתנאים תלת מימדי. אנו יוצרים מודל הפצע באמצעות כבטלן רקמות לחורר ב GTE. ומונוציטים THP-1 הבא, אנושי מעורבב עם ג'ל קולגן מוזרקים לתוך החור GTE. על ידי adimistration של 10 ננוגרם למ"ל phorbol פעילים-12 13-אצטט (PMA) עבור 72 h, הבדיל THP-1 תאים לתוך מקרופאגים אל טופס מוקדים דלקתיים ב GTE (iGTE) (IGTE גם יכול להיות stumilated עם µg/mL 2 של lipopolysaccharides (LPS) במשך 48 שעות ליזום דלקת ). IGTE הוא במבחנה המודל הראשון של דלקת חניכיים באמצעות תאים אנושיים עם ארכיטקטורה תלת מימדי. IGTE משקפת שינויים פתולוגיים משמעותיים (immunocytes activition, תאיים אינטראקציות בין fibryoblasts, תאי אפיתל, ומונוציטים ו מקרופאגים) במחלות חניכיים. GTE GTE פצועים, iGTE יכול לשמש כלי רב-תכליתי ללמוד ריפוי הפצע, התחדשות רקמות, דלקת, תא-תא אינטראקציה, וכן תרופות פוטנציאליות מסך למחלות חניכיים.

HaCaT התאים מוצג מורפולוגיה תקין טיפוסי בהסתכלות מיקרוסקופית שלב-ניגודיות (איור 2 א). סורק אלקטרון מיקרוסקופיות (SEM) תמונות הראה כי HaCaT תא משטחים כוסו על ידי רבים microvilli. חיבורי המערכת בין תאים HaCaT היו מתווכת על-ידי תהליכים קרום (איור 2B). תאים HaCaT ?...

Watch this Scientific Journal Video about Three-dimensional Inflammatory Human Tissue Equivalents of Gingiva at JoVE.com

Three-dimensional Inflammatory Human Tissue Equivalents of Gingiva

המטרה של הפרוטוקול היא לבנות מודל של דלקת חניכיים אנושי בתוך חוץ גופית. מודל זה רקמות מטפחת שיתוף שלושה סוגים של תאים אנושיים, HaCaT keratinocytes, fibroblasts חניכיים ו מקרופאגים THP-1, בתנאים תלת מימדי. מודל זה ניתן להחיל כדי לחקור מחלות חניכיים, כגון דלקת חניכיים, חניכיים.

תלת מימדי רקמה אנושית דלקתיות במקבילות של חניכיים

Periodontal diseases (such as gingivitis and periodontitis) are the leading causes of tooth loss in adults. Inflammation in gingiva is the fundamental ...

three-dimensional-inflammatory-human-tissue-equivalents-of-gingiva

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

9.7K Views.  The Nippon Dental University. המטרה של הפרוטוקול היא לבנות מודל של דלקת חניכיים אנושי בתוך חוץ גופית. מודל זה רקמות מטפחת שיתוף שלושה סוגים של תאים אנושיים, HaCaT keratinocytes, fibroblasts חניכיים ו מקרופאגים THP-1, בתנאים תלת מימדי. מודל זה ניתן להחיל כדי לחקור מחלות חניכיים, כגון דלקת חניכיים, חניכיים.

Video: Three-dimensional Inflammatory Human Tissue Equivalents of Gingiva

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Cancer is one of the leading causes of death worldwide. Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture systems, which inadequately reflect physiological conditions in vivo. Biological 3D matrices provide cells an environment in which cells can self-organize, allowing the study of tissue organization and cell differentiation. Such scaffolds can be seeded with a mixture of different cell types to study direct 3D cell-cell-interactions. To mimic the 3D complexity of cancer tumors, our group has developed a 3D in vitro tumor test system.	
	Our 3D tissue test system models the in vivo situation of malignant peripheral nerve sheath tumors (MPNSTs), which we established with our decellularized porcine jejunal segment derived biological vascularized scaffold (BioVaSc). In our model, we reseeded a modified BioVaSc matrix with primary fibroblasts, microvascular endothelial cells (mvECs) and the S462 tumor cell line. For static culture, the vascular structure of the BioVaSc is removed and the remaining scaffold is cut open on one side (Small Intestinal Submucosa SIS-Muc). The resulting matrix is then fixed between two metal rings (cell crowns).	
	Another option is to culture the cell-seeded SIS-Muc in a flow bioreactor system that exposes the cells to shear stress. Here, the bioreactor is connected to a peristaltic pump in a self-constructed incubator. A computer regulates the arterial oxygen and nutrient supply via parameters such as blood pressure, temperature, and flow rate. This setup allows for a dynamic culture with either pressure-regulated pulsatile or constant flow.	
	In this study, we could successfully establish both a static and dynamic 3D culture system for MPNSTs. The ability to model cancer tumors in a more natural 3D environment will enable the discovery, testing, and validation of future pharmaceuticals in a human-like model.

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Methods to create human 3D tumor tissues as test systems are described. These technologies are based on a decellularized Biological Vascularized Scaffold (BioVaSc), primary human cells and a tumor cell line, which can be cultured under static as well as under dynamic conditions in a flow bioreactor.

הנדסת רקמות של 3D אדם<em&gt; במבחנה</emמערכת מבחן גידול&gt;

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Bioengineering

Isolation, Processing and Analysis of Murine Gingival Cells

We have developed a technique to precisely isolate and process murine gingival tissue for flow cytometry and molecular studies. The gingiva is a unique and important tissue to study immune mechanisms because it is involved in host immune response against oral biofilm that might cause periodontal diseases. Furthermore, the close proximity of the gingiva to alveolar bone tissue enables also studying bone remodeling under inflammatory conditions. Our method yields large amount of immune cells that allows analysis of even rare cell populations such as Langerhans cells and T regulatory cells as we demonstrated previously 1. Employing mice to study local immune responses involved in alveolar bone loss during periodontal diseases is advantageous because of the availability of various immunological and experimental tools. Nevertheless, due to their small size and the relatively inconvenient access to the murine gingiva, many studies avoided examination of this critical tissue. The method described in this work could facilitate gingival analysis, which hopefully will increase our understating on the oral immune system and its role during periodontal diseases.

This study describes an efficient technique to isolate and process gingival tissues from the mouse oral cavity in order to produce a single-cell culture. The resulting cells can be further used for flow cytometry analysis and molecular studies.

בידוד, עיבוד וניתוח של תאי חניכיים Murine

We have developed a technique to precisely isolate and process murine gingival tissue for flow cytometry and molecular studies. The gingiva is a unique ...

Immunology and Infection

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models reflect the human wound situation better than animal models. Although two-dimensional models are widely used to investigate processes such as cellular migration and proliferation, models that are more complex are required to gain a deeper knowledge about wound healing. Besides a suitable model system, the generation of precise and reproducible wounds is crucial to ensure comparable results between different test runs. In this study, the generation of a three-dimensional full thickness skin equivalent to study wound healing is shown. The dermal part of the models is comprised of human dermal fibroblast embedded in a rat-tail collagen type I hydrogel. Following the inoculation with human epidermal keratinocytes and consequent culture at the air-liquid interface, a multilayered epidermis is formed on top of the models. To study the wound healing process, we additionally developed an automated wounding device, which generates standardized wounds in a sterile atmosphere.

The goal of this protocol is to build up a three-dimensional full thickness skin equivalent, which resembles natural skin. With a specifically constructed automated wounding device, precise and reproducible wounds can be generated under maintenance of sterility.

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Production, Characterization and Potential Uses of a 3D Tissue-engineered Human Esophageal Mucosal Model

The incidence of both esophageal adenocarcinoma and its precursor, Barrett&#8217;s Metaplasia, are rising rapidly in the western world. Furthermore esophageal adenocarcinoma generally has a poor prognosis, with little improvement in survival rates in recent years. These are difficult conditions to study and there has been a lack of suitable experimental platforms to investigate disorders of the esophageal mucosa.
A model of the human esophageal mucosa has been developed in the MacNeil laboratory which, unlike conventional 2D cell culture systems, recapitulates the cell-cell and cell-matrix interactions present in vivo and produces a mature, stratified epithelium similar to that of the normal human esophagus. Briefly, the model utilizes non-transformed normal primary human esophageal fibroblasts and epithelial cells grown within a porcine-derived acellular esophageal scaffold. Immunohistochemical characterization of this model by CK4, CK14, Ki67 and involucrin staining demonstrates appropriate recapitulation of the histology of the normal human esophageal mucosa.
This model provides a robust, biologically relevant experimental model of the human esophageal mucosa. It can easily be manipulated to investigate a number of research questions including the effectiveness of pharmacological agents and the impact of exposure to environmental factors such as alcohol, toxins, high temperature or gastro-esophageal refluxate components. The model also facilitates extended culture periods not achievable with conventional 2D cell culture, enabling, inter alia, the study of the impact of repeated exposure of a mature epithelium to the agent of interest for up to 20 days. Furthermore, a variety of cell lines, such as those derived from esophageal tumors or Barrett&#8217;s Metaplasia, can be incorporated into the model to investigate processes such as tumor invasion and drug responsiveness in a more biologically relevant environment.

This manuscript describes the production, characterization and potential uses of a tissue engineered 3D esophageal construct prepared from normal primary human esophageal fibroblast and squamous epithelial cells seeded within a de-cellularized porcine scaffold. The results demonstrate the formation of a mature stratified epithelium similar to the normal human esophagus.

ייצור, אפיון ופוטנציאל שימושים של הוושט רירי דגם אדם מהונדס-רקמות 3D

The incidence of both esophageal adenocarcinoma and its precursor, Barrett&#8217;s Metaplasia, are rising rapidly in the western world. Furthermore ...

Engineering Three-dimensional Epithelial Tissues Embedded within Extracellular Matrix

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, which is regulated by a variety of soluble and physical signals in the microenvironment. Described here is a method created to study the process of branching morphogenesis by forming engineered three-dimensional (3D) epithelial tissues of defined shape and size that are completely embedded within an extracellular matrix (ECM). This method enables the formation of arrays of identical tissues and enables the control of a variety of environmental factors, including tissue geometry, spacing, and ECM composition. This method can also be combined with widely used techniques such as traction force microscopy (TFM) to gain more information about the interactions between cells and their surrounding ECM. The protocol can be used to investigate a variety of cell and tissue processes beyond branching morphogenesis, including cancer invasion.

This manuscript describes a soft lithography-based technique to engineer uniform arrays of three-dimensional (3D) epithelial tissues of defined geometry surrounded by extracellular matrix. This method is amenable to a wide variety of cell types and experimental contexts and allows for high-throughput screening of identical replicates.

הנדסה תלת מימדי רקמות אפיתל Embedded בתוך מטריקס

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident immune cell populations in the oral mucosa and gingiva. We have established a technique for the isolation and study of immune cells from murine gingival tissues, an area of constant microbial exposure and a vulnerable site to a common inflammatory disease, periodontitis. Our protocol allows for a detailed phenotypic characterization of the immune cell populations resident in the gingiva, even at steady state. Our procedure also yields sufficient cells with high viability for use in functional studies, such as the assessment of cytokine secretion ex vivo. This combination of phenotypic and functional characterization of the gingival immune cell network should aid towards investigating the mechanisms involved in oral immunity and periodontal homeostasis, but will also advance our understanding of the mechanisms involved in local immunopathology.

We have established a technique for the isolation, phenotypic characterization and functional analysis of immune cells from murine gingiva.

בידוד, אפיון בחינה פונקציונלית של הרשת הסלולרית חניכיימיים החיסון

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications

Fibroblasts are phenotypically highly dynamic cells, which quickly transdifferentiate into myofibroblasts in response to biochemical and biomechanical stimuli. The current understanding of fibrotic processes, including cardiac fibrosis, remains poor, which hampers the development of new anti-fibrotic therapies. Controllable and reliable human model systems are crucial for a better understanding of fibrosis pathology. This is a highly reproducible and scalable protocol to generate engineered connective tissues (ECT) in a 48-well casting plate to facilitate studies of fibroblasts and the pathophysiology of fibrotic tissue in a 3-dimensional (3D) environment. ECT are generated around the poles with tunable stiffness, allowing for studies under a defined biomechanical load. Under the defined loading conditions, phenotypic adaptations controlled by cell-matrix interactions can be studied. Parallel testing is feasible in the 48-well format with the opportunity for the time-course analysis of multiple parameters, such as tissue compaction and contraction against the load. From these parameters, biomechanical properties such as tissue stiffness and elasticity can be studied.

Presented here is a protocol to generate engineered connective tissues for a parallel culture of 48 tissues in a multi-well plate with double poles, suitable for mechanistic studies, disease modeling, and screening applications. The protocol is compatible with fibroblasts from different organs and species and is exemplified here with human primary cardiac fibroblasts.

פיברובלסט נגזר רקמת חיבור מהונדסת אנושית עבור יישומי הקרנה

Fibroblasts are phenotypically highly dynamic cells, which quickly transdifferentiate into myofibroblasts in response to biochemical and biomechanical ...

A Novel Approach to Monitoring Graft Neovascularization in the Human Gingiva

Laser speckle contrast imaging (LSCI) is a novel method for measuring superficial blood perfusion over large areas. Since it is non-invasive and avoids direct contact with the measured area, it is suitable for monitoring blood flow changes during wound healing in human patients. Vestibuloplasty is periodontal surgery to the oral vestibule, aiming to restore vestibular depth with simultaneous enlargement of the keratinized gingiva. In this special clinical case, a split thickness flap was elevated at the first upper premolar and a xenogenic collagen matrix was adapted to the resulting recipient bed. LSCI was used to monitor the re- and neovascularization of the graft and the surrounding mucosa for one year. A protocol is introduced for the correct adjustment of microcirculation measurement in the oral mucosa, highlighting difficulties and possible failures.
The clinical case study presented demonstrated that &#8212; following the appropriate protocol &#8212; LSCI is a suitable and reliable method for following up microcirculation in a healing wound in the human oral mucosa and gives useful information on graft integration.

This study introduces a protocol for measuring microcirculation in human oral mucosa by laser speckle contrast imaging. The monitoring of wound healing after vestibuloplasty combined with a xenogenic collagen graft is presented on a clinical case.

הגישה של הרומן ניטור שתל כורוידאלית ב Gingiva אנושי

Laser speckle contrast imaging (LSCI) is a novel method for measuring superficial blood perfusion over large areas. Since it is non-invasive and avoids ...

Medicine

Organotypic Tissue Model Systems for Investigating Host-Pathogen Interactions In Vitro

Recapitulating the host-pathogen interface at the epithelial or mucosal barrier in vitro remains a challenging prospect for infection biologists. While in-house grown 2D epithelial monolayers lack true representation of the in vivo situation, commercially available tissue models are often overlooked due to their cost and practicality. However, with careful planning, such models provide reproducible platforms for a vast array of different applications. Here, we report the use of epithelial models that can be utilized for a wide variety of experimental purposes to investigate host-pathogen interactions in various ecological niches, such as the oral cavity, skin, and vaginal mucosa. From simple planktonic cells to complex biofilm co-culture, epithelial models are used to assess microbial adherence and invasion, and to evaluate the host response at a transcriptional and/or protein level, with scope for more detailed profiling using different omics approaches. Furthermore, these biological systems can be used as more accurate test beds for evaluating conventional and novel antimicrobial activity in a complex host-pathogen microenvironment in vitro. The protocols described herein document how models are handled upon arrival and prepared in the laboratory for co-culture stimulation with biofilm communities. The methods detail how experimental outputs are achieved from the model systems, including the processing of tissue, the co-culture setup, and data generation. These experiments include host gene expression through single- and multiplex qPCR analyses and inflammatory protein detection using ELISAs. In conclusion, epithelial models provide useful in vitro systems for preclinical investigatory studies into simple or complex host-pathogen interactions.

The present protocol outlines the application of organotypic tissue models for investigating host-pathogen interactions in vitro. Specifically, the model system described uses a multi-layered oral epithelium exposed to microorganisms associated with biofilms (dental plaque) within the context of oral health versus disease.

מערכות מודל רקמות אורגנוטיפיות לחקירת אינטראקציות מארח-פתוגן במבחנה

Recapitulating the host-pathogen interface at the epithelial or mucosal barrier in vitro remains a challenging prospect for infection biologists. While ...

יצירת מודל עכבר לדלקת במוך השן באמצעות פיו חדשני 

Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research

Pulpitis, a common cause of natural tooth loss, leads to necrosis and loss of bioactivity in the inflamed dental pulp. Unraveling the mechanisms underlying pulpitis and its efficient treatment is an ongoing focus of endodontic research. Therefore, understanding the inflammatory process within the dental pulp is vital for improving pulp preservation. Compared to other in vitro experiments, a murine pulpitis model offers a more authentic and genetically diverse context to observe the pathological progression of pulpitis. However, using mice, despite their cost-effectiveness and accessibility, poses difficulties due to their small size, poor coordination, and low tolerance, complicating intraoral and dental procedures. This protocol introduces a novel design and application of a mouth-gag to expose mouse pulp, facilitating more efficient intraoral procedures. The mouth-gag, comprised of a dental arch readily available to most dentists and can significantly expedite surgical preparation, even for first-time procedures. Micro-CT, hematoxylin-eosin (HE) staining, and immunofluorescence staining were used to identify changes in morphology and cell expression. The aim of this article is to help researchers establish a more reproducible and less demanding procedure for creating a pulp inflammation model using this novel mouth-gag.

מחבר זרקור: שיפור מחקר מוך השן עם מודלים עכבריים משופרים

This article presents a streamlined protocol for establishing a pulpitis model in mice using an innovative mouth-gag, followed by subsequent histological analysis.

תלת מימדי רקמה אנושית דלקתיות במקבילות של חניכיים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

הנדסת רקמות של 3D אדם