RRW קיבל תמיכה עבור זה לעבוד במענק מחקר שיתופי Translational ממומן על ידי דוושת סן דייגו פאדרס C3 סיבה (#PTC2017).

ניסויים בבעלי חיים כל לבצע הפעולות הבאות שפרוטוקול זה תאושר על ידי בהתאמה אכפת לי חיה מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC). כל ההליכים המתוארים כאן אושרו על ידי IACUC UCSD.
1. רכישת חיות הנמען
הערה: שורת התאים 4580 KPC-לוק הוקמה מגידול וביצועו LSL-קראסG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSL-ROSA26 לוק / + העכבר (KPC), אשר הוא מודל הנדסה גנטית של PC על רקע C57BL/6. היתרון של הקו הסלולרי הוא והוא צורונים מבטא לוציפראז-הפעלת פיקוח על הגידול במודלים orthotopic. עם זאת, שורות תאים אחרים עשוי לשמש גם כל עוד הם תואמים הרקע הגנטי של העכברים הנמען.
<ol><li>לקבוע מראש את קבוצות הניסוי ואת המספר של בעלי חיים לכל קבוצה.</li>
	<li>בחר את הגיל (6 - 10 - בן שבועיים עכברים מומלץ) ומשמשת מין החיות בשימוש על פי ההשערה לבין הקו הסלולרי.</li>
</ol>2. התרבות תאים
<ol><li>שימוש Dulbecco המתואמת של הנשר בינוני (DMEM): תערובת מזין F12 מדיה (50: 50) המכיל 10% סרום שור עוברית (FBS) ו 1% סטרפטומיצין פניצילין אנטיביוטיקה (צמיחה מלאה מדיה) כדי לגדל תאים 4580 KPC-לוק.</li>
	<li>אם קפוא, להפשיר את התאים 4 ימים לפני ההשתלה הגידול.</li>
	<li>לגדל את התאים ב 37 ° C עם 5% CO לחות2 ו- 95% בתנאים אספטי.</li>
	<li>Trypsinize התאים עם 0.25% טריפסין למשך 5 דקות ב 37 מעלות צלזיוס לפני שהם מגיעים > 80% confluency ולנטרל את טריפסין על-ידי הוספת פעמיים את עוצמת הקול של צמיחה מלאה מדיה. הערה: תאים אלה אינם קובעים גידולים ביעילות בעכברים אם הם משמשים ב- 100% confluency או אם הם נמצאים passaged עבור יותר מ-12 שעות. לפיכך, מומלץ להקפיא את התאים על המעברים קודמות confluency אופטימלית.</li>
	<li>לספור את התאים באמצעות hemocytometer והמשך הגידול אינדוקציה אם נאותה מספרים קיימים (0.5 - 1 x 106 תאים/עכבר...). אם לא, הרחב את התאים עבור קטע נוסף עד מספרי הטלפון הנייד נאותה מתקבלים.</li>
</ol>3. אינדוקציה של גידולים קמ ר
<ol><li>להכין את החומרים הדרושים: P1000 P100 פיפטות וטיפים, מזרק 1-mL, 25 גרם ומחטים, קרום המרתף מטריקס (BMM), DMEM מדיה הבזליים, 1.5-mL צנטריפוגה צינורות. לשמור כל חומר סטרילי וקר (4 ° C) עד הסוף של ההליך. גם על קוצץ שיער, מטליות אלכוהול מוכנים לשימוש בבעלי חיים.</li>
	<li>Trypsinize (לפי שלב 2.4) לספור את התאים ו resuspend אותם על ריכוז של 2-4 x 107 תאים למ"ל של DMEM קר.</li>
	<li>הוסף אמצעי שווה של 100% BMM כדי להפוך השעיה התא האחרון ב- 50% BMM. עוצמת הקול הסופי צריך סכום 50 µL של התא השעיה על העכבר בכל הנדרש. הכינו 10% עודף כדי להכיל את שטח מת במזרק ועל שגיאות pipetting.</li>
	<li>להציב המתלים כרכים µL 550 מ ל 1.5 צנטריפוגה צינורות aliquot בקרח.</li>
	<li>לרסן את החיות (עכברים C57BL/6 זכר 6 - בן שבועיים) באמצעות restrainer או באופן ידני. הערה: לחלופין, עכברים יכול להיות מרדימים עם 2.5% איזופלוריין גז חמצן בספיקה של 2 ל'/דקה באמצעות מכשיר אידוי של דיוק.</li>
	<li>לגלח את האתר של הזרקה, אשר הוא עדיף על חיילינו מעל רגל, משתמש בטלוויזיה. בעזרת ספוגית אלכוהול, ניקוי האתר של הזרקת פעמיים.</li>
	<li>לצייר µL 250 תאים השעיה-ריכוז סופי של 1-2 x 107 תאים/מ ל מזרק קר 1-mL ולהסיר כל בועות אוויר על-ידי הזזת את הבוכנה למעלה ולמטה. מחט 25 גרם לצרף המזרק, הקפד למלא את החלל בתוך המחט.</li>
	<li>הכנס היטב את המחט מתחת לעור בזווית של 30 מעלות לגוף ליד לאגפים, מוודא שהמחט פירס לא חלל הצפק או את מערכת השרירים של הגפיים.</li>
	<li>לרדד את המחט מקבילה לגוף, ולשטח קמטים על העור. לאט לאט להחדיר 50 µL תא השעיה. . תחזיקי את המחט באתר של הזרקת 10 s כדי לאפשר את BMM לגבש כדי למנוע דליפה כלשהי.</li>
	<li>לסגת לאט את המחט שומרים. על זה מקביל ללא כל תנועה הצידה. בעדינות לנקות את האתר של הזרקת עם ספוגית אלכוהול ולשחרר את העכבר לדיור שלה. הערה: אם העכבר היה מרדימים במהלך ההליך, לפקח על החיה עד זה חוזר רפלקסים שקמה בעצמה אחרי שמפילים שלה.</li>
	<li>נטר את צמיחת הגידול באופן קבוע באמצעות מחוגה עד שהוא מגיע 5 מ מ קוטר.</li>
</ol>4. אינדוקציה של גידולים Orthotopic
<ol><li>להכין את החומרים הדרושים. אוטוקלב כלי כירורגי כמו מספריים, אזמלים, המחט נהגים, והצביע ומלקחיים שקצהו שטוח. שמור בהישג יד התפרים סטרילי (שנספג 6-0 ולא נספגים 4-0), מטליות אלכוהול, קוצץ שיער, קרם depilatory, העין סיכה, גאזה כותנה, 10% povidone יוד פתרון, וילונות כירורגי, כריות חימום, הבופרנורפין ו סוכנים הרדמה.</li>
	<li>המתת חסד עכבר התורם (רצוי של רקע אותו נדרש עבור דגם orthotopic) נושא גידול SQ KPC באמצעות תא מילוי איטי CO2 . לסלק את הגידול SQ בקפידה בתנאים סטריליים בשכונה BSL-2 באמצעות מלקחיים סטרילי ולא microscissors זמן קצר לפני orthotopic-השרשה. במהלך הגידול כריתה לטפל לא כדי לנקב חלל הצפק. ולשטוף את הגידול באופן מיידי עם 2 חילופי PBS סטרילי.</li>
	<li>באמצעות ואזמלי מנתחים סטרילי, מינצ הגידול נכרת לחתיכות3 1 מ מ למקם אותם על צלחת פטרי המכילות קר סטרילי DMEM מדיה הבזליים, לאחסן בקירור עד ההשרשה.</li>
	<li>לנהל את העכבר הנמען 0.05 - 1 מ"ג/ק"ג. הבופרנורפין כאבים גואנגצ'אנג, 30 דקות לפני הניתוח.</li>
	<li>עזים ומתנגד עכברים הנמען עם 2-3% איזופלוריין חמצן (2 ל'/דקה) באמצעות מכשיר אידוי של דיוק (או סוכנים אחרים הרדמה). תמשיך עכברים 37 ° C חימום pad עבור מכלול של ההליך. חומר סיכה חלות על העיניים כדי למנוע לייבוש. מבחן עומק הרדמה על ידי חוסר המזעזעות רפלקס בתחילה, ואשר המטוס כירורגית בהרדמה היעדרה של רפלקס פדלים קמצוץ הבוהן עדין. לשמור את ההרדמה במהלך כל תהליך כירורגי.</li>
	<li>הנח את העכבר על גבו, בעדינות להפוך את זה על הצד השמאלי שלו, כך נחשף בצד שמאל של הבטן. להסיר את שיער בטן של העכבר באמצעות קרם depilatory ולנקות עם גזה כדי להבטיח שאין שיער חינם מזין את החתך פוסט של הבטן. להכין את הבטן השמאלית ניתוח באמצעות 3 מחזורים של 10% povidone יוד ואחריו מגבונים אלכוהוליים לחטא את העור.</li>
	<li>באמצעות אזמל סטרילי, לבצע חתך רוחבי או עקיפה 1.5 ס מ של העור, 1 ס"מ משמאל האמצע, מתחת בית החזה, המדיאלי מעט את הטחול. לאחר מכן, להרחיב את החתך דרך מערכת השרירים בבטן, שיקוף החתך שטחית שמעליה.</li>
	<li>לאתר הטחול משתמש שטוח משופעת מלקחיים, בעדינות להחצין את זה של חלל הבטן. . משכי הטחול באמצעות של המוליך כותנה סטרילי, למצוא בזנב הלבלב מצורף בתחתית של הטחול.</li>
	<li>בעזרת מלקחיים שקצהו שטוח, תמשוך בזנב הלבלב רוחבית.</li>
	<li>לאסוף פיסת גידול טחון דק אחד מן העכבר התורם עם קצה מחט סטרילית פיין (6-0) הפתולוגיים ומקם אותה בעזרת המלקחיים סטרילי.</li>
	<li>בעוד בעדינות היציבה בגוף/הזנב הלבלב רוחבית, הכנס את המחט של התפר המכיל מקטע הגידול לזנב של הלבלב. עוברים את התפר באיטיות דרך הרקמות, מחזיק את הגידול בקשר עם זנב הלבלב. להחיל אחד או שני תפרים נוספים בהתאם התמצאות החלקיק ביחס הרקמה.</li>
	<li>הסר את המחט לחלוטין מן הרקמה ולשמור את הלבלב/טחול המוחצנים של 60 נוספים s תוך פיקוח עבור סימנים של דימום או דליפה. לאחר מכן, להפנים אותם בעדינות לתוך חלל הבטן בעזרת מלקחיים בוטה.</li>
	<li>לסגור מערכת השרירים בבטן באמצעות גם בתפר שנספג 6-0 תפר רציף או מופרע וסגור צמוד העור באמצעות 3-0 עד 6-0 קטעה תפרים נספגים. להפסיק את ההרדמה בשלב זה.</li>
	<li>לאפשר את העכבר כדי לשחזר בכלוב בבית שלה עם גישה חופשית מזון ומים. מניחים את הכלוב על כרית החימום כדי להקל על שחזור. לפקח על סימנים חיוניים כגון נשימה, זלוף וכו ', במהלך תהליך ההחלמה.</li>
	<li>לאשר את סימני בטעותו רפלקס ברגע משחזרת את העכבר, ויכול אז החזרה לכלוב לדיור קבוע.</li>
	<li>לנהל הבופרנורפין 0.05 - 0.1 מ"ג/ק"ג 8-12 שעות לאחר הניתוח, ו- h כל 8-12 לאחר ההליך כנדרש סימנים של כאב.</li>
	<li>לפקח על הגידול באמצעות ביולומינסנציה של ויוו מערכת הדמיה (ראה את הטבלה של חומרים).<ol>
<li>בעקבות הגידול על ידי הדמיה מתחיל ביום 4 לאחר orthotopic-השרשה, ולבצע הדמיה פעמיים בשבוע.</li>
		<li>ביום הדמיה, לנהל (הזרקת בקרום הבטן) 30 מ"ג/ק"ג של D-luciferin כדי anesthetized העכבר הנמען (2-3% איזופלוריין חמצן (2 ל'/דקה)) 10 דקות לפני הדמיה.</li>
		<li>תמונת לפעילות לוציפראז באמצעות הגדרת הפריה חוץ גופית ללא מסננים כלשהם פליטה למשך תקופה מינימלית של חשיפה של 5 ב imager הפריה חוץ גופית עם הבמה מחוממת חינם אוטומטי-זריחה, תוך שמירה על ההרדמה על העכברים.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. חמתו של גידולים קמ ר
<ol><li>להכין את החומרים הדרושים: כיכר electroporator גל, מפסק רגל בטיחות, אלקטרודות (מערך המחט לעומת פינצטה-מפעילה), מתאמים. לשמור על התפרים סטרילי (המוזרק 4-0), מטליות אלכוהול, קוצץ שיער, קרם depilatory, חומר סיכה העין, גאזה כותנה, הבופרנורפין ו הרדמה גם בקרבת מקום.</li>
	<li>לחטא את פינצטה או מחט מערך אלקטרודות באמצעות גז עיקור. Autoclaving אינו מומלץ. השתמש מעקר חרוז זכוכית כדי לעקר את האלקטרודות בין בעלי חיים.</li>
	<li>לנהל הבופרנורפין 0.05 - 0.1 מ"ג/ק"ג כדי העכברים נושאות 30 דקות לפני ההליך.</li>
	<li>בצע את שלבים 4.4-4.5 לזירוז בהצלחה הרדמה בעכברים, ברגע השתל הגידול SQ מגיע בקוטר 5 מ מ.</li>
	<li>הנח את העכבר anesthetized על הצד כדי לגשת הגידול SQ לאגף. להסיר את השיער בעזרת קוצץ ועור נקי בעזרת ספוגית אלכוהול.</li>
	<li>לשימוש גידולים מ ר, שני מחטים מערך אלקטרודות. לרומם את העור ישירות תחת אתר גידול באמצעות מלקחיים והכנס האלקטרודות דרך העור מקבילה לגוף מוודא שהם לא לחדור חלל הצפק. פעם אחת דרך העור, מיקום האלקטרודות באופן כזה שהם סוגר את הגידול.</li>
	<li>לתכנת את electroporator כדי לספק 100 µs פולסים בתדר של 1 הרץ על 1,500 V ס עבור סכום כולל של 150 פולסים. לספק את פולסים באמצעות דוושת רגל. להפריד כל ערכה של פולסים 10 על-ידי 10 s, על מנת לאפשר פיזור חום, לאשר את המיקום הנכון של האלקטרודות. הערה: ללא שימוש סוכני משתק, עכברים יחוו התכווצות שרירים עם חמתו שיכולים לגרום תזוזה של האלקטרודות. אלא אם כן מאובטח באופן ידני.</li>
	<li>הסר את האלקטרודות לאחר מינון מלא, אשר לא יעלה על הרשומה ס' 200 המתח בפועל תימסר, אשר מוצג על electroporator. לאפשר העכברים להתאושש בעקבות חמתו לפי השלבים 4.14-4.16.</li>
</ol>6. חמתו של גידולים Orthotopic
הערה: חמתו של גידולים orthotopic כרוך ניתוח הישרדות נוסף על העכבר אותו וכך מצריכים אישור מיוחד IACUC המקומית לפני תחילת.
<ol><li>להכין חומרים הדרושים: אוטוקלב כלים כירורגיים כמו מספריים, כמו מה, אזמל, המחט נהגים, הצביע מלקחיים, והודיע במול מלקחיים. זכור בקרבת מקום גם כן: תפרים סטרילי (שנספג 6-0 ולא נספגים 4-0), מטליות אלכוהול, קוצץ שיער, קרם depilatory, חומר סיכה העין, גאזה כותנה, 10% povidone יוד הפתרון, וילונות כירורגי, כריות חימום, גל מרובע electroporator, מפסק רגל בטיחות, אלקטרודות שלהם מתאמים, הבופרנורפין ו הרדמה.</li>
	<li>להעריך את העכברים עבור orthotopic הגידול על ידי הדמיה ויוו (ראה שלב 4.17) על ידי הזרקת 30 מ"ג/ק"ג של D-Luciferin intraperitoneally. הערה: הגידולים orthotopic הינם אידיאליים עבור חמתו הטיפול 8-10 ימים שלאחר ההשתלה כאשר הגידולים הם בבירור, עדיין סגורים על הלבלב כפי שניתן לראות בתמונות הפריה חוץ גופית לוציפראז (ראה את התוצאות נציג).</li>
	<li>בצע שלבים 4.4-4.9, כדי לאתר את הגידול מושתל. אם הגידול לא קל לאתר, להשתמש מלקחיים לרודולף בוטה כדי להזיז את הקיבה והטחול בעדינות כדי לזהות את הגידול.</li>
	<li>להחצין את הגידול עם מלקחיים לרודולף בוטה וללכוד את הגידול בחוזקה אלקטרודות הפלטינה של פינצטה-מפעילה. לספק את פולסים אלקטרופורציה כפי מתוכנת בשלב 5.7 באמצעות electroporator את גל מרובע בסדרות של 10 פולסים נשלט על-ידי המתג רגל.</li>
	<li>שמור את הגידול מוחצן s 60 לפחות פוסט חמתו לעקוב אחר סימנים של דימום. הוסף את הגידול בחזרה לתוך חלל הבטן סגירת החתך שתואר קודם (צעדים 4.13-4.16), לפקח על העכבר עד זה יחלים.</li>
	<li>נטר את ההשפעות של חמתו על הגידול באמצעות ויוו לוציפראז הדמיה לפי שלב 4.17.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Rahib, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projecting+cancer+incidence+and+deaths+to+2030:+the+unexpected+burden+of+thyroid,+liver,+and+pancreas+cancers+in+the+United+States.">Projecting cancer incidence and deaths to 2030: the unexpected burden of thyroid, liver, and pancreas cancers in the United States.</a> Cancer Res. 74 (11), 2913-2921 (2014).</li><li>Howlader, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> SEER Cancer Statistic Review, 1975-2013. , (1975).</li><li>Clark, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+immune+reaction+to+pancreatic+cancer+from+inception+to+invasion.">Dynamics of the immune reaction to pancreatic cancer from inception to invasion.</a> Cancer Res. 67 (19), 9518-9527 (2007).</li><li>Lee, E. W., Loh, C. T., Kee, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+guided+percutaneous+irreversible+electroporation:+ultrasound+and+immunohistological+correlation.">Imaging guided percutaneous irreversible electroporation: ultrasound and immunohistological correlation.</a> Technol Cancer Res Treat. 6 (4), 287-294 (2007).</li><li>Charpentier, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+electroporation+for+the+ablation+of+liver+tumors:+are+we+there+yet?.">Irreversible electroporation for the ablation of liver tumors: are we there yet?.</a> Arch Surg. 147 (11), 1053-1061 (2012).</li><li>Narayanan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+Electroporation.">Irreversible Electroporation.</a> Seminars in Interventional Radiology. 32 (4), 349-355 (2015).</li><li>Martin, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+200+locally+advanced+(stage+III)+pancreatic+adenocarcinoma+patients+with+irreversible+electroporation:+safety+and+efficacy.">Treatment of 200 locally advanced (stage III) pancreatic adenocarcinoma patients with irreversible electroporation: safety and efficacy.</a> Ann Surg. 262 (3), 486-494 (2015).</li><li>Belfiore, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percutaneous+CT-guided+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+as+a+novel+neoadjuvant+protocol+in+locally+advanced+pancreatic+cancer:+Our+preliminary+experience.">Percutaneous CT-guided irreversible electroporation followed by chemotherapy as a novel neoadjuvant protocol in locally advanced pancreatic cancer: Our preliminary experience.</a> Int J Surg. 21 Suppl 1, S34-S39 (2015).</li><li>Belfiore, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+chemotherapy+alone+versus+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+on+survival+in+patients+with+locally+advanced+pancreatic+cancer.">Concurrent chemotherapy alone versus irreversible electroporation followed by chemotherapy on survival in patients with locally advanced pancreatic cancer.</a> Med Oncol. 34 (3), 38 (2017).</li><li>Chu, K. F., Dupuy, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+ablation+of+tumours:+biological+mechanisms+and+advances+in+therapy.">Thermal ablation of tumours: biological mechanisms and advances in therapy.</a> Nat Rev Cancer. 14 (3), 199-208 (2014).</li><li>Wissniowski, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+tumor-specific+T+lymphocytes+by+radio-frequency+ablation+of+the+VX2+hepatoma+in+rabbits.">Activation of tumor-specific T lymphocytes by radio-frequency ablation of the VX2 hepatoma in rabbits.</a> Cancer Res. 63 (19), 6496-6500 (2003).</li><li>Eros de Bethlenfalva-Hora, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+ablation+suppresses+distant+tumour+growth+in+a+novel+rat+model+of+multifocal+hepatocellular+carcinoma.">Radiofrequency ablation suppresses distant tumour growth in a novel rat model of multifocal hepatocellular carcinoma.</a> Clin Sci (Lond). 126 (3), 243-252 (2014).</li><li>Zerbini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+thermal+ablation+for+hepatocellular+carcinoma+stimulates+autologous+NK-cell+response.">Radiofrequency thermal ablation for hepatocellular carcinoma stimulates autologous NK-cell response.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1931-1942 (2010).</li><li>Ali, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dendritic+cells+by+local+ablation+of+hepatocellular+carcinoma.">Activation of dendritic cells by local ablation of hepatocellular carcinoma.</a> J Hepatol. 43 (5), 817-822 (2005).</li><li>Fietta, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+inflammatory+response+and+downmodulation+of+peripheral+CD25+Foxp3++T-regulatory+cells+in+patients+undergoing+radiofrequency+thermal+ablation+for+lung+cancer.">Systemic inflammatory response and downmodulation of peripheral CD25+Foxp3+ T-regulatory cells in patients undergoing radiofrequency thermal ablation for lung cancer.</a> Hum Immunol. 70 (7), 477-486 (2009).</li><li>Jiang, C., Davalos, R. V., Bischof, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+basic+to+clinical+studies+of+irreversible+electroporation+therapy.">A review of basic to clinical studies of irreversible electroporation therapy.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 62 (1), 4-20 (2015).</li><li>Neal, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+local+and+systemic+anti-tumor+efficacy+for+irreversible+electroporation+in+immunocompetent+versus+immunodeficient+mice.">Improved local and systemic anti-tumor efficacy for irreversible electroporation in immunocompetent versus immunodeficient mice.</a> PLoS One. 8 (5), e64559 (2013).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Safran, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+reporter+strain+for+noninvasive+bioluminescent+imaging+of+cells+that+have+undergone+Cre-mediated+recombination.">Mouse reporter strain for noninvasive bioluminescent imaging of cells that have undergone Cre-mediated recombination.</a> Mol Imaging. 2 (4), 297-302 (2003).</li><li>Martin, R. C., McFarland, K., Ellis, S., Velanovich, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+electroporation+in+locally+advanced+pancreatic+cancer:+potential+improved+overall+survival.">Irreversible electroporation in locally advanced pancreatic cancer: potential improved overall survival.</a> Ann Surg Oncol. 20 Suppl 3, S443-S449 (2013).</li><li>Neal, R. E., Garcia, P. A., Robertson, J. L., Davalos, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Characterization+and+Numerical+Modeling+of+Tissue+Electrical+Conductivity+during+Pulsed+Electric+Fields+for+Irreversible+Electroporation+Treatment+Planning.">Experimental Characterization and Numerical Modeling of Tissue Electrical Conductivity during Pulsed Electric Fields for Irreversible Electroporation Treatment Planning.</a> IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 59 (4), 1076-1085 (2012).</li></ol>

המחברים יש אין גילויים הכספיים הרלוונטיים.

במחקר זה, הראו מודל immunocompetent עכבר למחשב זה יכול לשמש כדי לחקור את ההשפעות של חמתו על הגידול. כיום, חמתו משמש כמו טכניקה-thermal אבלציה רק בחולים שנבחרו מאוד מקומי מתקדם PC אין התקדמות המחלה מרוחק לאחר חודשים של טיפול לפני הניתוח. השימוש ולכן הוגבלה כי רוב החולים עם מחשב מקומי מתקדם לפתח מחלה גרור...

אדנוקרצינומה ductal הלבלב (PC) צפוי להיות הגורם המוביל השני של מקרי מוות מסרטן בארה ב סביב 20201. הרוב המכריע של חולים שאובחנו עם המחשב ימותו בסופו של דבר בשל מחלה גרורתית מרוחקת2. Microenvironment PC הוא לשמצה לדיכוי המערכת החיסונית ואת chemoresistant. משתית desmoplastic שלה מכיל את המחסור בתאי T אפקטור (אנטי הגידול) חשיבותו של לויקוציטים לדיכוי המערכת החיסונית, כולל סרטניים הקשורים מקרופאגים (תאמי), משתיק קול נגזר מיאלואידית תאים (MDSCs) ו- T רגולטורי תאים (Tregs)3 . אלה מושתתות את הצורך לפתח אסטרטגיות עם מודאלים מרובים לנטרל השפעות אלו של microenvironment.
חמתו פותחה כשיטה הלא-thermal סרטן אבלציה. בניגוד בטכניקות אבלציה תרמי, חמתו אינו גורם לנמק coagulative מהירה אבל במקום תוצאות אפופטוטיים להיפגע הדרגתית לתא המוות4. חשוב עבור גידולים בלבלב, חמתו, אינה חשופה להשפעות "מפזר החום", ניתן לבצע ליד כלי הדם5. כיום משמש קלינית, למטופלים שנבחרו עם מקומי מתקדם או גבולית resectable סרטן הלבלב, ויש 510(k) לאישור ה-FDA6 טכנולוגיה זו. בסדרת הגדול ביותר שפורסם חמתו עבור PC7, חציון ההישרדות של חולים שעברו חמתו היה בערך כפול ההישרדות של חולים שטופלו מודרני כימותרפיה לבד ללא כריתה8,9.
מספר מחקרים הראו שאבלציה תרמית זה גורם לתגובה החיסונית מערכתית בסוגים אחרים הגידול (שבתוך צ'ו. et al. 10)-Radiofrequency אבלציה (RFA) בגידול בעלי חיים מודלים הפניות לתא T מוגברת מחלחל11,12, כולל גידול תאים הרוצח מופעל הטבעיים (NK) hepatocellular סרטן המטופלים13, בת 14. ירידה Tregs לדיכוי המערכת החיסונית חולי סרטן ריאות15. מספר קטן יותר של מחקרים בחנו מערכת החיסון, microenvironmental, ותגובות פציעה חמתו16. חמתו הוכח לעורר תגובה חיסונית מערכתית במודלים של העכבר immunocompetent שבו הצמיחה של תאי הכליה (contralateral) משני allografts הייתה מצומצמת או למניעה על ידי חמתו של גידול ראשוני שבועיים לפני17. הם גם ציין כי עכברים immunocompetent נדרש פחות מתח עבור רגרסיה מלאה מאשר עכברים immunocompromised. זה היה שיערו כי חמתו עלולה לגרום במצגת אנטיגן משופרת לעומת לנמק coagulative של אבלציה תרמית, אבל זה לא נחקרה באופן ספציפי.
פיתחנו מודל syngeneic העכבר של המחשב האישי משורת תא 4580 KPC-לוק (מתנה ג'יי ג'יי Yeh ב אוניברסיטת צפון קרוליינה), אשר נבעה גידול שהתפתח במהלך LSL-קראס זכרG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSL-ROSA26 לוק / + העכבר, לחקור את ההשפעות המקומי ומערכתית של חמתו18,19. זו שורת התאים לבטא לוציפראז הוא immunogenic גם tumorigenic בעכברים C57BL/6 immunocompetent כאשר מוזרק קמ ר או orthotopically ומייצרת באופן אמין גרורות בכבד כאשר הוא מוזרק הטחול. אנחנו נעזרו גנרטור הדופק ניתן לתיכנות גל מרובע כדי לספק 100-µs פולסים של חשמל ביחס מתח/מרחק של 1,500 V/ס מ באמצעות בדיקה מערך שני-מחט (מופרדות על ידי 5 מ מ) או פלטינה פינצטה-trodes קמ ר או orthotopic גידולים, בהתאמה, ב עכברים לדגמן את ההשפעות של חמתו של חיים קטן.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="873">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">ECM 830 square wave electroporator</td>
			<td style="width:147px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:344px;">BTX # 45-0002 ( 58018-004 )</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2 needle array electrode</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Safety foot switch</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Platinum Tweezer-trode</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>&#160;45-0486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM-F12 media</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10437028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Matrigel</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>792632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lacrilube</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>19090646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Buprenorphine</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>NC1292810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">D-luciferrin</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>122799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">IVIS&#160; Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mouse strain C57BL/6J</td>
			<td>The Jackson Laboratory&#160;</td>
			<td>000664/Black 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cell line (KPC-Luc 4580)</td>
			<td colspan="2">J.J. Yeh Lab at University of North Carolina</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BD Precisionglide syringe needles</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>Z192406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Alcohol Swab(70% isopropyl alcohol )</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Digital calipers</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14-648-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disposable Scalpels, Sterile</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cotton Tipped Applicators</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89198</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Suture Needle, 45 cm, Size 6-0</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-3308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Suture Needle, 45 cm, Size 4-0</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-3314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone-iodine 10%</td>
			<td>BD</td>
			<td>29900-404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable Warming Pad&#160;</td>
			<td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td>
			<td>TP-3E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse Hair Clipper</td>
			<td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td>
			<td>CL8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Drape</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>59-7421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-buffered Saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic pancreatic cancer mouse model to study the effects of irreversible electroporation

סרטן הלבלב (PC), מחלה אשר הורג כ 40,000 חולים כל שנה בארצות הברית, הוא התחמק בהצלחה מספר גישות טיפוליות כולל את האסטרטגיות immunotherapeutic מבטיח. אלקטרופורציה בלתי הפיך (חמתו) היא טכניקה-thermal אבלציה שגורם מוות של תאים סרטניים ללא הרס של מבנים סמוכים סילוק, ובכך מאפשר את ההליך שיבוצע בגידולים קרוב מאוד אל כלי הדם. בניגוד בטכניקות אבלציה תרמי, חמתו גורמת מוות של תאים אפופטוטיים להיפגע הדרגתית, יחד עם נמק אבלציה מיידית המושרה, נמצא כעת בשימוש קליני למטופלים שנבחרו עם מחשב מקומי מתקדם. פולשני, ללא-יעד הליך מסוים כמו חמתו יכול לגרום מספר עצום של תגובות ב microenvironment הגידול. מעט מחקרים עסקו השפעת חמתו על הגידול בסוגי סרטן אחרים, אבל אף אחד לא התמקדו PC. פיתחנו מודל syngeneic עכבר של מחשב תת עורית (SQ), orthotopic גידולים יכולים להיות מטופלים בהצלחה עם חמתו באווירה מבוקרת מאוד, להקל על הליך פוסט האורך מחקרים שונים. מודל זה בעל חיים משמש מערכת איתנה כדי לבחון את השפעות חמתו, דרכים לשפר את היעילות הקלינית של חמתו.

עקבנו אחר ההליך המתואר לעיל, ועורר גידולים SQ בשבוע 5-6 זקן פראי סוג C57BL/6 עכברים מחוסן עם עונה 1 פרק 106 תאים עם 50% BMM. כאשר גודל הגידול 5-6 מ מ קוטר, כמה מן העכברים היו מורדמים, גידולים שלהם היו טוחנות, מושתל orthotopically בעכברים C57BL/6 הנמען. חמתו היה שבוצעו 10 ימים שלאחר ההשתלה, כפי ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation at JoVE.com

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

דגם העכבר סרטן הלבלב Syngeneic ללמוד את השפעות בלתי הפיכות אלקטרופורציה

אלקטרופורציה בלתי הפיך (חמתו) היא טכניקה-thermal אבלציה המשמשת לטיפול של סרטן לבלב מקומי מתקדם. להיות טכניקה חדשה יחסית, ההשפעות של חמתו על הגידול הם הבינו כהלכה. פיתחנו מודל העכבר syngeneic המאפשרת לימוד השפעת חמתו על סרטן הלבלב.

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

a-syngeneic-pancreatic-cancer-mouse-model-to-study-effects

Research

JoVE Journal

Cancer Research

11.4K Views.  University California San Diego. אלקטרופורציה בלתי הפיך (חמתו) היא טכניקה-thermal אבלציה המשמשת לטיפול של סרטן לבלב מקומי מתקדם. להיות טכניקה חדשה יחסית, ההשפעות של חמתו על הגידול הם הבינו כהלכה. פיתחנו מודל העכבר syngeneic המאפשרת לימוד השפעת חמתו על סרטן הלבלב.

Video: A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will survive longer than five years. In order to understand and mimic the microenvironment of pancreatic tumors, we utilized a murine orthotopic model of pancreatic cancer that allows non-invasive imaging of tumor progression in real time. Pancreatic cancer cells expressing green fluorescent protein (PANC-1 GFP) were suspended in basement membrane matrix, high concentration, (e.g., Matrigel HC) with serum-free media and then injected into the tail of the pancreas via laparotomy. The cell suspension in the high concentration basement membrane matrix becomes a gel-like substance once it reaches room temperature; therefore, it gels when it comes in contact with the pancreas, creating a seal at the injection site and preventing any cell leakage. Tumor growth and metastasis to other organs are monitored in live animals by using fluorescence. It is critical to use the appropriate filters for excitation and emission of GFP. The steps for the orthotopic implantation are detailed in this article so researchers can easily replicate the procedure in nude mice. The main steps of this protocol are preparation of the cell suspension, surgical implantation, and whole body fluorescent in vivo imaging. This orthotopic model is designed to investigate the efficacy of novel therapeutics on primary and metastatic tumors.

A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.

דגם פלורסנט Orthotopic עכבר של סרטן הלבלב

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and activation of lipolysis and proteolysis systems. Cancer patients with cachexia benefit less from anti-neoplastic therapies and show increased mortality1. Several animal models have been established in order to investigate the molecular causes responsible for body and muscle wasting as a result of tumor growth. Here, we describe methodologies pertaining to a well-characterized model of cancer cachexia: mice bearing the C26 carcinoma2-4. Although this model is heavily used in cachexia research, different approaches make reproducibility a potential issue. The growth of the C26 tumor causes a marked and progressive loss of body and skeletal muscle mass, accompanied by reduced muscle cross-sectional area and muscle strength3-5. Adipose tissue is also lost. Wasting is coincident with elevated circulating levels of pro-inflammatory cytokines, particularly Interleukin-6 (IL-6)3, which is directly, although not entirely, responsible for C26 cachexia. It is well-accepted that a primary mechanism by which the C26 tumor induces muscle tissue depletion is the activation of skeletal muscle proteolytic systems. Thus, expression of muscle-specific ubiquitin ligases, such as atrogin-1/MAFbx and MuRF-1, represent an accepted method for the evaluation of the ongoing muscle catabolism2. Here, we present how to execute this model in a reproducible manner and how to excise several tissues and organs (the liver, spleen, and heart), as well as fat and skeletal muscles (the gastrocnemius, tibialis anterior, and quadriceps). We also provide useful protocols that describe how to perform muscle freezing, sectioning, and fiber size quantification.

Mice bearing the Colon-26 (C26) carcinoma represent a classical model of cancer cachexia. Progressive muscle wasting occurs in association with tumor growth, over-expression of muscle-specific ubiquitin ligases, and reductions in muscle cross-sectional area. Fat loss is also observed. Cachexia is studied in a time-dependent manner with increasing severity of wasting.

קולון-26 קרצינומה גידול נושאות עכבר כמודל לחקר סרטן תשישות

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of diagnosis. Metastatic RCC (mRCC) is incurable, with a median survival time of only 18 months. Immune-based interventions (e.g., interferon (IFN) and interleukin (IL)-2) induce durable responses in a fraction of mRCC patients, and multikinase inhibitors (e.g., sunitinib or sorafenib) or anti-VEGF receptor monoclonal antibodies (mAb) are largely palliative, as complete remissions are rare. Such shortcomings in current therapies for mRCC patients provide the rationale for the development of novel treatment protocols. A key component in the preclinical testing of new therapies for mRCC is a suitable animal model. Beneficial features that recapitulate the human condition include a primary renal tumor, renal tumor metastases, and an intact immune system to investigate any therapy-driven immune effector responses and the formation of tumor-induced immunosuppressive factors. This report describes an orthotopic mRCC mouse model that has all of these features. We describe an intrarenal implantation technique using the mouse renal adenocarcinoma cell line Renca, followed by the assessment of tumor growth in the kidney (primary site) and lungs (metastatic site).

Implementation of an orthotopic model of renal cell carcinoma in immunocompetent mice affords the investigator a clinically-relevant system defined by the presence of a primary renal tumor and lung metastases in the same animal. This system can be used to preclinically test a variety of treatments in vivo.

קרצינומה תא syngeneic עכבר הדגם של גרורתי כליות עבור הערכה כמותית אורך ורוחב של טיפולים פרה-קליניים

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Method to Define the Effects of Environmental Enrichment on Colon Microbiome Biodiversity in a Mouse Colon Tumor Model

Several recent studies have illustrated the beneficial effects of living in an enriched environment on improving human disease. In mice, environmental enrichment (EE) reduces tumorigenesis by activating the mouse immune system, or affects tumor bearing animal survival by stimulating the wound repair response, including improved microbiome diversity, in the tumor microenvironment. Provided here is a detailed procedure to assess the effects of environmental enrichment on the biodiversity of the microbiome in a mouse colon tumor model. Precautions regarding animal breeding and considerations for animal genotype and mouse colony integration are described, all of which ultimately affect microbial biodiversity. Heeding these precautions may allow more uniform microbiome transmission, and consequently will alleviate non-treatment dependent effects that can confound study findings. Further, in this procedure, microbiota changes are characterized using 16S rDNA sequencing of DNA isolated from stool collected from the distal colon following long-term environmental enrichment. Gut microbiota imbalance is associated with the pathogenesis of inflammatory bowel disease and colon cancer, but also of obesity and diabetes among others. Importantly, this protocol for EE and microbiome analysis can be utilized to study the role of microbiome pathogenesis across a variety of diseases where robust mouse models exist that can recapitulate human disease.

Environmental Enrichment (EE) is an animal housing environment that is used to reveal mechanisms that underlie the connections between lifestyle, stress, and disease. This protocol describes a procedure that uses a mouse model of colon tumorigenesis and EE to specifically define alterations in microbiota biodiversity that may impact animal mortality.

שיטה כדי להגדיר את ההשפעות של העשרה סביבתית על המגוון הביולוגי Microbiome המעי הגס במודל של עכברים המעי הגס גידול

Several recent studies have illustrated the beneficial effects of living in an enriched environment on improving human disease. In mice, environmental ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and transgenic genetically engineered mouse models. Unlike subcutaneous tumors, orthotopic tumors contain more clinically accurate vasculature, tumor microenvironment, and responses to multiple therapies. In contrast to genetically engineered mouse models, orthotopic models can be performed with lower cost and in less time, involve the use of highly complex and heterogeneous mouse or human cancer cell lines, rather that single genetic alterations, and these cell lines can be genetically modified, such as to express imaging agents. Here, we present a protocol to surgically injecting a luciferase- and mCherry-expressing murine prostate cancer cell line into the anterior prostate lobe of mice. These mice developed orthotopic tumors that were non-invasively monitored in vivo and further analyzed for tumor volume, weight, mouse survival, and immune infiltration. Further, orthotopic tumor-bearing mice were surgically castrated, leading to immediate tumor regression and subsequent recurrence, representing castration-resistant prostate cancer. Although technical skill is required to carry out this procedure, this syngeneic orthotopic model of both androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer is of great use to all investigators in the field.

The goal of this protocol is to demonstrate the intra-prostatic injection of prostate cancer cells, with subsequent castration. Orthotopic pre-clinical models of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer are critical to study the disease in the context of a clinically relevant tumor microenvironment and an immunocompetent host.

דגם Syngeneic Orthotopic זוהרים, פלורסנט מאתר של סירוס עמידים ו אנדרוגן תלויי סרטן הערמונית

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly its immune-components, is vital to the prognosis and prediction of treatment outcomes, especially those of immunotherapy. TME immune-components are composed of different subsets of tumor-infiltrating immune cells assessable by multi-color FACS. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is among the deadliest malignances lacking good treatment options, thus an urgent and unmet medical need. One important reason for its non-responsiveness to various therapies (chemo-, targeted, I/O) has been its abundant TME, consisting of fibroblasts and leukocytes that protect tumor cells from these therapies. Orthotopically implanted PDAC is believed to more accurately recapture the TME of human pancreatic cancers than conventional subcutaneous (SC) models.
Homograft tumors (KPC) are transplants of mouse spontaneous PDAC originating from genetically engineered KPC-mice (KrasG12D/+/P53-/-/Pdx1-Cre) (KPC-GEMM). The primary tumor tissue is cut into small fragments (~2 mm3) and transplanted subcutaneously (SC) to the syngeneic recipients (C57BL/6, 7&#8211;9 weeks old). The homografts were then surgically orthotopically transplanted onto the pancreas of new C57BL/6 mice, along with SC-implantation, which reached tumor volumes of 300&#8211;1,000 mm3 by 17 days. Only tumors of 400&#8211;600 mm3 were harvested per approved autopsy procedure and cleaned to remove the adjacent non-tumor tissues. They were dissociated per protocol using a tissue dissociator into single-cell suspensions, followed by staining with designated panels of fluorescently-labeled antibodies for various markers of different immune cells (lymphoid, myeloid and NK, DCs). The stained samples were analyzed using multi-color FACS to determine numbers of immune cells of different lineages, as well as their relative percentage within tumors. The immune profiles of orthotopic tumors were then compared to those of SC tumors. The preliminary data demonstrated significantly elevated infiltrating TILs/TAMs in tumors over the pancreas, and higher B-cell infiltration into orthotopic rather than SC tumors.

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

The experimental procedure on the immunophenotyping of murine orthotopic PDAC homografts aims at profiling the tumor immuno-microenvironment. Tumors are orthotopically implanted via surgery. Tumors of 200&#8211;600 mm3 in size were harvested and dissociated to prepare single-cell suspensions, followed by multi-immune marker FACS analysis using different fluorescently-labeled antibodies.

Immunophenotyping של Orthotopic מאותו מין (Syngeneic) של KPC העיקרי מאתר אדנוקרצינומה Ductal הלבלב על ידי Cytometry זרימה

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, including genetically engineered models as well as transplantation models. However, genetically engineered mouse models are time-consuming and expensive, whereas some orthotopic transplantation models are difficult to reproduce. Here, a non-invasive intratracheal delivery method of lung tumor cells as an alternative orthotopic transplantation model is described. The use of mouse lung adenocarcinoma cells and syngeneic graft recipients allows studying tumorigenesis under the presence of a fully active immune system. Furthermore, genetic manipulations of tumor cells before transplantation makes this model an attractive time-saving approach to study the impact of genetic factors on tumor growth and tumor cell gene expression profiles under physiological conditions. Using this model, we show that lung adenocarcinoma cells express increased levels of the T-cell suppressor programmed death-ligand 1 (PD-L1) when grown in their natural environment as compared to cultivation in vitro.

Here we describe a minimally invasive syngeneic orthotopic transplantation model of mouse lung adenocarcinoma cells as a time- and cost-reducing model to study non-small cell lung cancer.

Orthotopic השתלת ריאות Syngeneic תאים אדנוקרצינומה ללמוד ביטוי PD-L1

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen receptors (CARs) for acute lymphoblastic leukemia (ALL) andnon-Hodgkin lymphoma (NHL). The focus of the field is now on emulating these successes in other hematological malignancies where less impressive complete response rates are observed. Further engineering of CAR T cells or co-administration of other treatment modalities may successfully overcome obstacles to successful therapy in other cancer settings.
We therefore present a model in which others can conduct pre-clinical testing of CD19 CAR T cells. Results in this well tested B-cell lymphoma model are likely to be informative CAR T-cell therapy in general.
This protocol allows the reproducible production of mouse CAR T cells through calcium phosphate transfection of Plat-E producer cells with MP71 retroviral constructs and pCL-Eco packaging plasmid followed by collection of secreted retroviral particles and transduction using recombinant human fibronectin fragment and centrifugation. Validation of retroviral transduction, and confirmation of the ability of CAR T cells to kill target lymphoma cells ex vivo, through the use of flow cytometry, luminometry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), is also described.
Protocols for testing CAR T cells in vivo in lymphoreplete and lymphodepleted syngeneic mice, bearing established, systemic lymphoma are described. Anti-cancer activity is monitored by in vivo bioluminescence and disease progression. We show typical results of eradication of established B-cell lymphoma when utilizing 1st or 2nd generation CARs in combination with lymphodepleting pre-conditioning and a minority of mice achieving long term remissions when utilizing CAR T cells expressing IL-12 in lymphoreplete mice.
These protocols can be used to evaluate CD19 CAR T cells with different additional modification, combinations of CAR T cells and other therapeutic agents or adapted for the use of CAR T cells against different target antigens.

Here, we present a protocol for the production and pre-clinical testing of murine CD19 CAR T cells by retroviral transduction and utilization as a therapy against established syngeneic A20 B-cell lymphoma in BALB/c mice with or without lymphodepleting pre-conditioning.

עכבר Syngeneic B-Cell לימפומה מודל להערכת קליניים בתאי T המכונית CD19

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

אולטרה סאונד-הדרכה אורתודפית של הלבלב מורלין אדנוקרצינומה

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer (PC). To address this deficiency, we describe a mouse model involving orthotopic implantation of PC followed by distal pancreatectomy and splenectomy. The model has been demonstrated to be safe and suitably flexible for the study of various therapeutic approaches in adjuvant and neo adjuvant settings.
In this model, a pancreatic tumor is first generated by implanting a mixture of human pancreatic cancer cells (luciferase-tagged AsPC-1) and human cancer associated pancreatic stellate cells into the distal pancreas of Balb/c athymic nude mice. After three weeks, the cancer is resected by re-laparotomy, distal pancreatectomy and splenectomy. In this model, bioluminescence imaging can be used to follow the progress of cancer development and effects of resection/treatments. Following resection, adjuvant therapy can be given. Alternatively, neoadjuvant treatment can be given prior to resection.
Representative data from 45 mice are presented. All mice underwent successful distal pancreatectomy/splenectomy with no issues of hemostasis. A macroscopic proximal pancreatic margin greater than 5 mm was achieved in 43 (96%) mice. The technical success rate of pancreatic resection was 100%, with 0% early mortality and morbidity. None of the animals died during the week after resection.
In summary, we describe a robust and reproducible technique for a surgical resection model of pancreatic cancer in mice which mimics the clinical scenario. The model may be useful for the testing of both adjuvant and neoadjuvant treatments.

In the clinical context, patients with localized pancreatic cancer will undergo pancreatectomy followed by adjuvant treatment. This protocol reported here aims to establish a safe and effective method of modelling this clinical scenario in nude mice, through orthotopic implantation of pancreatic cancer followed by distal pancreatectomy and splenectomy.

מודל עכבר כריתה אורתוטופי של סרטן הלבלב

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...